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CN114907479B - 抗cd112r抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了抗CD112R抗体及其用途，具体提供了一种抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其包含的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3如文中所述。本发明还提够了包含所述抗CD112R抗体或其抗原结合片段的组合物、编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子，用于表达所述抗体或其抗原结合片段的载体和宿主细胞，以及所述抗体或其抗原结合片段的制药用途。

Description

抗CD112R抗体及其用途
技术领域
本发明提供了与CD112R特异性结合的抗体或其抗原结合片段和包含其的组合物。还提供了编码本发明抗体或其抗原结合片段的核酸分子，用于表达本发明抗体或其抗原结合片段的载体和宿主细胞，以及本发明抗体或其抗原结合片段的治疗和诊断方法和用途。
背景技术
免疫系统是由许多细胞类型组成的高度复杂的系统，包括但不限于T细胞，B细胞，自然杀伤细胞，抗原呈递细胞，树突状细胞，单核细胞和巨噬细胞。这些细胞拥有复杂而微妙的系统来控制其相互作用和响应。细胞利用激活和抑制机制以及反馈回路来保持反应的控制，并且不允许不受控制的免疫反应(例如，自身免疫疾病)的负面后果。
CD112R(PVRIG)，也称为含有脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域的蛋白、Q6DKI7或C7orf15，是一种长度为326个氨基酸的跨膜结构域蛋白，具有信号肽(跨越氨基酸1至40)、细胞外结构域(跨越氨基酸41至171)、跨膜结构域(跨越氨基酸172至190)和细胞质结构域(跨越氨基酸191至326)。CD112R与脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白2(PVLR2，也称为nectin-2、CD112或疱疹病毒侵入介体B(HVEB)、人质膜糖蛋白)，即CD112R的结合配偶体结合。
抗CD112R免疫疗法的施用提供了增加，增强和维持免疫应答的机会。CD112R是主要由T细胞和NK细胞表达的抑制性受体，并与活化受体CD226竞争结合CD112。CD112与CD112R的相互作用比与CD226的相互作用具有更高的亲和力，从而有效调节CD226介导的细胞活化。阻断与CD112相互作用的抗CD112R抗体直接限制了抑制性信号传导CD112R的下游，同时通过增加CD226与CD112的相互作用来促进更大的免疫细胞活化。
用抗CD112R抗体进行的治疗提供了下调抑制信号的机会，该抑制信号可能在表达CD112R的免疫细胞与肿瘤微环境内的肿瘤细胞和/或髓样细胞上的CD112结合时发生，并可能增强，增加并维持抗肿瘤免疫反应。
目前抗CD112R的单抗药物仅有临床前的SRF813(Surface Oncology)，仍需要更多的新型抗CD112R抗体。
发明内容
本发明提供了抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其具有针对人CD112R的高亲和力和高特异性等优势。本发明提供的抗CD112R抗体或其抗原结合片段可作为独立的疗法或与其它疗法/或其他抗癌药剂联合，用于诸如癌症的治疗。
在一个方面，本发明提供了一种抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区：
所述重链可变区包含：
(Ⅰ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅱ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅲ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅳ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅴ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅵ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅶ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅷ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅸ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅹ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅺ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅻ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(XIII)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(XIV)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(XV)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
所述轻链可变区包含：
(Ⅰ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅱ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅲ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅳ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅴ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅵ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅶ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅷ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅸ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅹ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅺ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅻ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIII)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIV)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或与SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(Ⅰ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅱ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ IDNO:9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅲ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅳ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQID NO:18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅴ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQID NO:24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅵ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQID NO:30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅶ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQID NO:36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅷ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅸ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQID NO:30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅹ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅺ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQID NO:57所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅻ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQID NO:63所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIII)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQID NO:75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQID NO:81所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅥ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅦ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅧ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅨ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅩ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XXⅠ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅡ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅢ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅣ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述抗体为鼠源抗体或嵌合抗体。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区：
(Ⅰ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:85所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅱ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:87所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅲ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:89所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅳ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:91所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅴ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:93所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅵ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:95所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅶ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:97所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅷ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:99所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或(Ⅸ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅹ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅺ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:105所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅻ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:107所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:107所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XIII)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQID NO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XIV)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:111所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XV)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:113所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:113所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XⅥ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:99所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XⅦ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XⅧ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XⅨ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XX)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XXI)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:142所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本发明所述抗体为人源化抗体。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(Ⅰ)重链可变区，其包含如SEQ ID NO:115、116、117、118、119、120、121、124、125、128、129或130中任一项所示的氨基酸序列；和
轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:122、123、126、127、131或132中任一项所示的氨基酸序列；或
(Ⅱ)重链可变区，其包含与SEQ ID NO:115、116、117、118、119、120、121、124、125、128、129或130中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和
轻链可变区，其包含与SEQ ID NO:122、123、126、127、131或132中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅲ)氨基酸序列如SEQ ID NO:118所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
(Ⅳ)氨基酸序列如SEQ ID NO:124或125所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQID NO:126所示的轻链可变区；或
(Ⅴ)氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区；或
(Ⅵ)氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:122、123、127、131或132所示的轻链可变区；或
(Ⅶ)氨基酸序列如SEQ ID NO:118所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
(VIII)氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ IDNO:127所示的轻链可变区；或
(IX)氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:131所示的轻链可变区。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(Ⅰ)重链，其包含如SEQ ID NO:134、135、137、138、140或141中任一项所示的氨基酸序列，和
轻链，其包含如SEQ ID NO:133、136或139中任一项所示的氨基酸序列；或
(Ⅱ)重链，其包含与SEQ ID NO:134、135、137、138、140或141中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，和
轻链，其包含与SEQ ID NO:133、136或139中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅲ)氨基酸序列如SEQ ID NO:134或135所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:133所示的轻链；或
(Ⅳ)氨基酸序列如SEQ ID NO:137或138所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:136所示的轻链；或
(Ⅴ)氨基酸序列如SEQ ID NO:140或141所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:139所示的轻链。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或全人抗体，或其抗原结合片段。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段为Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv或sdAb。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或其抗原结合片段是任何IgG亚型，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，优选为IgG1亚型或IgG4亚型。
在另一个方面，本发明提供了一种分离的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其具有以下特性中的一种或多种：
(1)所结合的人CD112R蛋白的表位与本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段结合相同、完全重叠或部分重叠；
(2)与本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段竞争结合人CD112R蛋白的表位。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其具有以下特性中的一种或多种：
(1)以高亲和力与人/食蟹猴CD112R蛋白结合；
(2)抑制或阻断人CD112R蛋白与人CD112或表达人CD112细胞结合。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体是单克隆抗体。
本发明还提供了一种多特异性抗体，包含本文所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区和重链可变区。
本发明还提供了一种单链抗体，包含本文所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区和重链可变区。
本发明还提供了一种免疫缀合物，其包含与治疗剂或诊断剂缀合的本文所述抗体或其抗原结合片段。
在又一个方面，本发明提供了多核苷酸分子，其编码本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段。
在又一个方面，本发明提供了表达载体，其包含本文所述的多核苷酸分子，优选地，所述载体为真核表达载体。
在又一个方面，本发明提供了宿主细胞，其包含本文所述的多核苷酸分子或本文所述的表达载体，优选地，所述宿主细胞是真核细胞，更优选哺乳动物细胞。
在又一个方面，本发明提供了制备本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合于所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下在本文所述的宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
在又一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞，和药学上可接受的载体或赋形剂。
在又一个方面，本发明提供了药物组合，其包含如本文所述的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
在一些实施方式中，本发明所述的药物组合，其中，所述另外的治疗剂选自抗PD-1抗体、PD-L1抗体和抗TIGIT抗体中的一种或多种；优选地，所述另外的治疗剂为抗TIGIT抗体，或抗TIGIT抗体与PD-1抗体的组合。
在又一个方面，本发明提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、本文所述的药物组合物或本文所述的药物组合在制备用于治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症的药物中的用途，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。
在又一个方面，本发明提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、本文所述的药物组合物或本文所述的药物组合，其用于治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。
在又一个方面，本发明提供了一种治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗或预防有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、本文所述的药物组合物或本文所述的药物组合，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。
在一些实施方式中，本发明所述抗体或其抗原结合片段与另外的治疗剂组合施用，所述另外的治疗剂选自抗PD-1抗体、PD-L1抗体和抗TIGIT抗体中的一种或多种；优选地，所述另外的治疗剂为抗TIGIT抗体，或抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体的组合。
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞或本文所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
在又一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、本文所述的药物组合物或本文所述的药物组合，优选其进一步包括给药装置。
在又一个方面，本发明提供了一种使用本文所述的抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体或其抗原结合片段的检测组合物检测CD112R在样品中的存在的方法。
附图说明
图1：杂交瘤抗体与抗TIGIT抗体在双报告基因系统中联用的活性检测。
图2：杂交瘤抗体与抗TIGIT抗体及抗PD-1抗体在三报告基因系统中联用的活性。
图3：FACS法检测抗CD112R嵌合抗体与CHO-hCD112表达细胞的结合。
图4：ELISA法检测抗CD112R嵌合抗体与食蟹猴CD112R结合。
图5：FACS法检测抗CD112R嵌合抗体阻断CD112R蛋白与人CHO-CD112细胞结合。
图6：抗CD112R嵌合抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性。
图7：ELISA法检测抗CD112R人源化抗体与食蟹猴和小鼠CD112R结合。
图8：抗CD112R人源化抗体与抗TIGIT抗体在双报告基因系统中联用的活性。
图9：抗CD112R人源化抗体与抗TIGIT抗体及抗PD-1抗体在三报告基因系统中联用的活性。
图10：抗CD112R人源化抗体、抗TIGIT抗体及其联用的肿瘤生长抑制作用。
具体实施方式
定义
除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。
为了可以更容易地理解本发明，某些科技术语具体定义如下。除非本文其它部分另有明确定义，否则本文所用的科技术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。本文(包括权利要求书)所用单数形式包括其相应的复数形式，除非文中另有明确规定。
术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5％的下限和比指定数字数值大5％的上限的范围内的数字数值，包括但不限于±5％、±2％、±1％和±0.1％，因为这些变化适于进行所公开的方法。
术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项的组合。
如本文所用，术语“或”应被理解为与如上定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应被解释为包容性的，即，包括数量或元素列表中的至少一个，但也包括多于一个，以及任选地，额外的未列出的项目。只有明确指出相反的术语下，例如“只有一个”或“的确一个”或者在权利要求中使用“由...组成”时，将指的是仅列出的一个数字或列表的一个元素。
除非明确指出相反的情况，否则如本文所用，词“一”和“一个”应理解为“至少一个”。
术语“CD112R”，“与PVR相关的免疫球蛋白结构域”，“CD112受体”，“与脊髓灰质炎病毒受体相关的免疫球蛋白结构域”，“Nectin-2受体”，“C7orfl5”，“跨膜蛋白PVRIG”均可以互换使用，并且包括人CD112R的变体、亚型、物种同源物或其他物种的CD112R和具有CD112R的至少一个共同表位的类似物，除非另有说明。该术语包括未处理的全长CD112R以及由于在细胞中处理而产生的任何形式的CD112R。该术语涵盖“全长”未加工的CD112R以及由细胞内加工产生的任何形式的CD112R或其任何片段，例如剪接变体或等位基因变体。
在一个实施方式中，CD112R是指来自人或食蟹猴CD112R全长或其片段(诸如其缺乏信号肽的成熟片段)。
术语“人CD112R”是指人序列CD112R，诸如具有NCBI登录号NM_024070人CD112R的完整氨基酸序列。人CD112R序列可由于具有例如保守突变或非保守区域中的突变而不同于具有NCBI登录号NM_024070的人CD112R，并且CD112R与具有NCBI登录号NM_024070的人CD112R具有大致上相同的生物功能。
术语“百分比(％)氨基酸序列同一性”或简称“同一性”定义为在将氨基酸序列进行比对(并在必要时导入空位)以获取最大百分比序列同一性，且不将任何保守取代视为序列同一性的部分之后，候选氨基酸序列中的氨基酸残基与参比氨基酸序列中的相同氨基酸残基的百分比。可使用本领域各种方法进行序列比对以便测定百分比氨基酸序列同一性，例如，使用公众可得到的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定测量比对的适宜参数，包括对所比较的序列全长获得最大比对所需的任何算法。
术语“免疫应答”是指由例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝产生可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，该作用导致从人体选择性损害、破坏或清除侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或者在自体免疫或病理性炎症的情况下的正常人细胞或组织。
术语“信号转导途径”或“信号转导活性”是指通常由蛋白质间相互作用诸如生长因子对受体的结合启动的生化因果关系，所述关系导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。一般地，传递包括引起信号转导的系列反应中的一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特定磷酸化。倒数第二过程通常包括细胞核事件，从而导致基因表达的变化。
术语“活性”或“生物活性”，或术语“生物性质”或“生物特征”此处可互换使用，包括但不限于表位/抗原亲和力和特异性、在体内或体外中和或拮抗CD112R活性的能力、IC50、抗体的体内稳定性和抗体的免疫原性质。本领域公知的抗体的其它可鉴定的生物学性质或特征包括，例如，交叉反应性(即通常与靶定肽的非人同源物，或与其它蛋白质或组织的交叉反应性)，和保持哺乳动物细胞中蛋白质高表达水平的能力。使用本领域公知的技术观察、测定或评估前面提及的性质或特征，所述技术包括但不局限于ELISA、FACS或BIACORE等离子体共振分析、不受限制的体外或体内中和测定、受体结合、细胞因子或生长因子的产生和/或分泌、信号转导和不同来源(包括人类、灵长类或任何其它来源)的组织切片的免疫组织化学。
术语“抗体”是指具有所需生物活性的任何形式的抗体。因此，其以最广义使用，具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、全人抗体、嵌合抗体和骆驼源化单结构域抗体。
术语“分离的抗体”是指结合化合物的纯化状态，且在这种情况下意指该分子基本不含其它生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、糖或其它物质例如细胞碎片和生长培养基。术语“分离(的)”并非意指完全不存在这类物质或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以明显干扰本文所述结合化合物的实验或治疗应用的量存在。
术语“单克隆抗体”是指获自基本均质抗体群的抗体，即组成该群的各个抗体除可少量存在的可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原表位。相比之下，常规(多克隆)抗体制备物通常包括大量针对不同表位(或对不同表位有特异性)的抗体。修饰语“单克隆”表明获自基本均质抗体群的抗体的特征，且不得解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
术语“全长抗体”，是指在天然存在时包含至少四条肽链的免疫球蛋白分子：两条重(H)链和两条轻(L)链通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
术语抗体(“亲代抗体”)的“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物，通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段，其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗体结合片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗原的结合活性在摩尔浓度基础上表示时，结合片段或衍生物通常保持其抗原结合活性的至少10％。优选结合片段或衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。术语“结合化合物”是指抗体及其结合片段两者。
术语“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。Fv多肽一般还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。
术语“结构域抗体”是只含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在某些情况下，两个或更多个VH区与肽接头共价连接形成二价结构域抗体。二价结构域抗体的2个VH区可靶向相同或不同的抗原。
术语“二价抗体”包含2个抗原结合部位。在某些情况下，2个结合部位具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体可以是双特异性的。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链(VH-VL或VL-VH)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用短得不允许在同一链的两个结构域之间配对的接头，迫使该结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合部位。
术语“鼠源抗体”或“杂交瘤抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的抗人CD112R的单克隆抗体。制备时用CD112R抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。
术语“嵌合抗体”是具有第一抗体的可变结构域和第二抗体的恒定结构域的抗体，其中第一抗体和第二抗体来自不同物种。通常，可变结构域获自啮齿动物等的抗体(“亲代抗体”)，而恒定结构域序列获自人抗体，使得与亲代啮齿动物抗体相比，所得嵌合抗体在人受试者中诱导不良免疫应答的可能性较低。
术语“人源化抗体”是指含有来自人和非人(例如小鼠、大鼠)抗体的序列的抗体形式。一般而言，人源化抗体包含基本所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本所有的超变环相当于非人免疫球蛋白的超变环，而所有或基本所有的构架(FR)区是人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体任选可包含至少一部分的人免疫球蛋白恒定区(Fc)。
术语“全人抗体”是指只包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如在小鼠中、在小鼠细胞中或在来源于小鼠细胞的杂交瘤中产生，则全人抗体可含有鼠糖链。同样，“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。或者，如果在大鼠中、在大鼠细胞中或在来源于大鼠细胞的杂交瘤中产生，则全人抗体可含有大鼠糖链。同样，“大鼠抗体”是指仅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
“同种型”抗体是指由重链恒定区基因提供的抗体种类(例如，IgM、IgE、IgG诸如IgGl、IgG2或IgG4)。同种型还包括这些种类之一的修饰形式，其中修饰已被产生来改变Fc功能，例如以增强或减弱效应子功能或对Fc受体的结合。
本文术语“Fc区”用于定义包含至少一部分恒定区的免疫球蛋白重链的C端区域。该术语包括天然序列Fc区和变异Fc区。在一些实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或Pro230延伸至重链的羧基末端。但是，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可能存在或不存在(此段中的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Rabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991)。
术语“表位”指能够与抗体特异性结合的蛋白质决定簇。表位通常由各种化学活性表面分子诸如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。构象性表位和非构象性表位的区别在于在变性溶剂存在下，与前者而非与后者的结合丧失。
本文中所描述的术语“交叉反应”指的是对人类、猴、和/或鼠源(小鼠或大鼠)相同靶分子的抗原片段的结合。因此，“交叉反应”应被理解为与在不同物种中表达的相同分子X的种属间反应。识别人CD112R、猴、和/或鼠CD112R(小鼠或大鼠)的单克隆抗体的交叉反应特异性可通过FACS分析确定。
“亲和力”或“结合亲和力”指反映结合对子的成员之间相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶物Y的亲和力可以通常由平衡解离常数(KD)代表，平衡解离常数是解离速率常数和结合速率常数(分别是kdis和kon)的比值。亲和力可以由本领域已知的常见方法测量。用于测量亲和力的一个具体方法是本文中的ForteBio动力学结合测定法。
术语“不结合”蛋白或细胞是指，不与蛋白或细胞结合，或者不以高亲和力与其结合，即结合蛋白或细胞的KD为1.0×10-6M或更高，更优选1.0×10-5M或更高，更优选1.0×10-4M或更高、1.0×10-3M或更高，更优选1.0×10-2M或更高。
术语“高亲和性”对于IgG抗体而言，是指对于抗原的KD为1.0×10-6M或更低，优选5.0×10-8M或更低，更优选1.0×10-8M或更低、5.0×10-9M或更低，更优选1.0×10-9M或更低。对于其他抗体亚型，“高亲和性”结合可能会变化。例如，IgM亚型的“高亲和性”结合是指KD为10-6M或更低，优选10-7M或更低，更优选10-8M或更低。
术语“抗体依赖的细胞毒性”、“抗体依赖的细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指细胞介导的免疫防御，其中免疫系统效应细胞主动地将细胞膜表面抗原与抗体，例如Claudin18.2抗体，结合的靶细胞例如癌细胞裂解。
术语“补体依赖的细胞毒性”或“CDC”是指IgG和IgM抗体的效应功能，当与表面抗原结合时引发典型的补体途径，包括形成膜攻击复合体以及靶细胞裂解。本发明的抗体，与Claudin 18.2结合时，引发对癌细胞的CDC。
术语“核酸”、“多核苷酸”、“核酸分子”以及“多核苷酸分子”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其呈单链或双链形式的聚合物。除非明确地限制，否则术语包括具有与参照核酸相似的结合性质并且以与天然存在的核苷酸相似的方式被代谢的含有已知的天然核苷酸的类似物的核酸(参见，属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036，其公开了尿苷被假尿苷替代的mRNA分子，合成所述mRNA分子的方法以及用于在体内递送治疗性蛋白的方法)。除非另有所指，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。
“构建体”是指任何重组多核苷酸分子(诸如质粒、粘粒、病毒、自主复制多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA多核苷酸分子)，衍生自任何来源，能够与基因组整合或自主复制，构成如下多核苷酸分子，其中已经以功能操作的方式连接(即，可操作地连接)一或多个多核苷酸分子。重组构建体通常会包含可操作地连接至转录起始调节序列的本发明的多核苷酸，这些序列会导引多核苷酸在宿主细胞中的转录。可使用异源及非异源(即，内源)启动子两者导引本发明的核酸的表达。
“载体”是指任何重组多核苷酸构建体，该构建体可用于转化的目的(即将异源DNA引入到宿主细胞中)。一种类型的载体为“质粒”，是指环状双链DNA环，可将额外DNA区段连接至该环中。另一类型的载体为病毒载体，其中可将额外DNA区段连接至病毒基因组中。某些载体能够在被引入到的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。在引入到宿主细胞中后，其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)整合至宿主细胞的基因组中，且因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够导引被操作性连接的基因的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。
本文所用术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一或多个表型选择标记及复制起点，以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。
用于细胞或受体的“活化”、“刺激”和“处理”可具有相同含义，例如细胞或受体用配体活化、刺激或处理，除非上下文另外或明确规定。“配体”包括天然和合成配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和来源于抗体的结合化合物。“配体”还包括小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“活化”可指通过内部机制以及外部或环境因素调节的细胞活化。“应答/反应”，例如细胞、组织、器官或生物体的应答，包括生化或生理行为(例如生物区室内的浓度、密度、粘附或迁移、基因表达速率或分化状态)的改变，其中改变与活化、刺激或处理有关，或者与例如遗传编程等内部机制有关。
如本文中所用，术语任何疾病或病症的“治疗”或“医治”在一个实施方式中是指改善疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病的进展或其临床症状的至少一个)。在另一个实施方式中，“治疗”或“医治”是指缓解或改善至少一个身体参数，包括可能不能被患者辨别出的那些物理参数。在另一个实施方式中，“治疗”或“医治”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定)、生理上(例如，身体参数的稳定)或在这两方面调节疾病或病症。除非在本文中明确描述，否则用于评估疾病的治疗和/或预防的方法在本领域中通常是已知的。
“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。如本文中所用，术语“cyno”或“食蟹猴”是指食蟹猴。
“联合”一种或多种其它治疗剂的施用包括同时(共同)施用和任意次序的连续施用。
“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的CD112R抗体或其抗原结合片段当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时，有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的抗体或其抗原结合片段的量，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时，治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时，治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量，不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10％，通常至少20％，优选至少约30％，更优选至少40％，最优选至少50％。
“药学上可接受的载体”是指药物制剂或组合物中除活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂，赋形剂，稳定剂或防腐剂。
术语“癌症”在本文中用于指表现出异常高水平的增殖和生长的一组细胞。癌症可能是良性的(也称为良性肿瘤)，恶性前或恶性。癌细胞可以是实体癌细胞或白血病癌细胞。本文使用的术语“肿瘤”是指包含癌症的一个或多个细胞。术语“肿瘤生长”在本文中用于指代包含癌症的一种或多种细胞的增殖或生长，其导致癌症的大小或程度的相应增加。
抗CD112R抗体
在一个方面，本发明提供了特异性结合CD112R的抗体或其抗原结合片段。术语“抗CD112R抗体”、“抗CD112R”、“CD112R抗体”或“结合CD112R的抗体”是指能够以足够的亲合力结合CD112R蛋白或其片段以致所述抗体可以用作靶向CD112R的诊断剂和/或治疗剂。
在一些实施方案中，本发明提供了结合CD112R蛋白的抗体。在一些实施方案中，本发明提供了阻断CD112R与CD112蛋白结合的抗体。在一些实施方案中，本发明提供了增强CD226，T细胞和/或NK细胞的活化的抗体。
在一些实施方案中，本发明抗体结合人或食蟹猴CD112R蛋白。在一些实施方案中，本发明抗体结合人CD112R，并阻断人CD112R与人CD112蛋白的相互作用。
在一些实施方案中，本发明抗CD112R抗体包含：
(Ⅰ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅱ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ IDNO:9所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅲ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅳ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQID NO:18所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅴ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQID NO:24所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅵ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQID NO:30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅶ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35和SEQID NO:36所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅷ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅸ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29和SEQID NO:30所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅹ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅺ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQID NO:57所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅻ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62和SEQID NO:63所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIII)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XIV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQID NO:75所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XV)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQID NO:81所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅥ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅦ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅧ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅨ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XⅩ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(XXⅠ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅡ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅢ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或(XXⅣ)重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；
(XV)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或与SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145所示氨基酸序列分别具有1、2或3个氨基酸差异的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和/或轻链可变区：
所述重链可变区包含：
(Ⅰ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅱ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅲ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；或
(Ⅳ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；
所述轻链可变区包含：
(Ⅰ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:45所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅱ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(Ⅲ)氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)如SEQ ID NO:118所示重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO:127所示轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(2)如SEQ ID NO:124或125所示重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ IDNO:126所示轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(3)如SEQ ID NO:128所示重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO:126、127、131或132所示轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
(4)如SEQ ID NO:129所示重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO:122、123、127、131或132所示轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区：
(Ⅰ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:85所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅱ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:87所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅲ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:89所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅳ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:91所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅴ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:93所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅵ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:95所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅶ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:97所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅷ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:99所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或(Ⅸ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅹ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅺ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:105所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:105所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(Ⅻ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:107所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:107所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XIII)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQID NO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XIV)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:111所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XV)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:113所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:113所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:114所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
(XⅥ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:99所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
(XⅦ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
(XⅧ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:103所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
(XⅨ)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
(XX)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:109所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或
(XXI)所述重链可变区包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列，或包含与SEQ IDNO:142所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段包含的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为：
HCDR1：SYHMS(SEQ ID NO:13)；
HCDR2：AIX1X2X3X4X5X6TYYX7DTVKG(SEQ ID NO:146)，其中，X1为N或S，X2为S或R，X3为N或D，X4为D或G或V，X5为I或D，X6为N或S，X7为L或P；
HCDR3：HEDYX8GFAMDX9(SEQ ID NO:147)，其中，X8为Y或F，X9为Y或S；
LCDR1：KASQSVX10NDVA(SEQ ID NO:148)，其中，X10为T或S；
LCDR2：YVSX11X12X13T(SEQ ID NO:149)，其中，X11为N或H，X12为H或R，X13为Y或F；
LCDR3：X14QAYRSPWT(SEQ ID NO:150)，X14为Q或H。
上述取代中，N、T和S等均为极性不带电荷的脂肪族氨基酸，S、R、N和D等为极性的脂肪族氨基酸，D、G、V和I等均为脂肪族氨基酸，L和P等均为非极性氨基酸，Y和F等均为芳香族氨基酸，Y和S等均为极性不带电荷的氨基酸，N、Q和H等均为极性氨基酸，H和R等均为极性带电荷的氨基酸。因此，可用这些氨基酸相互替换，所得CDR在用于构建抗CD112R抗体时仍保留本文所述的结合活性。
在一些实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段包含的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14、41、50或68的氨基酸序列所示；HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15或42的氨基酸序列所示；LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:43或52的氨基酸序列所示；LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:44、53或71的氨基酸序列所示；和LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:54或72的氨基酸序列所示。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链可变区，其包含如SEQ ID NO:115、116、117、118、119、120、121、124、125、128、129或130中任一项所示的氨基酸序列；和
轻链可变区，其包含如SEQ ID NO:122、123、126、127、131或132中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链可变区，其包含与SEQ ID NO:115、116、117、118、119、120、121、124、125、128、129或130中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列；和
轻链可变区，其包含与SEQ ID NO:122、123、126、127、131或132中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(Ⅰ)氨基酸序列如SEQ ID NO:118所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
(Ⅱ)氨基酸序列如SEQ ID NO:124或125所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQID NO:126所示的轻链可变区；或
(Ⅲ)氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区；或
(Ⅳ)氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:122、123、127、131或132所示的轻链可变区。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(I)氨基酸序列如SEQ ID NO:118所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
(II)氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
(III)氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ IDNO:131所示的轻链可变区。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链，其包含如SEQ ID NO:134、135、137、138、140或141中任一项所示的氨基酸序列，和
轻链，其包含如SEQ ID NO:133、136或139中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
重链，其包含与SEQ ID NO:134、135、137、138、140或141中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列，和
轻链，其包含与SEQ ID NO:133、136或139中任一项所示的氨基酸序列具有至少95％，96％，97％，98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(Ⅰ)氨基酸序列如SEQ ID NO:134或135所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:133所示的轻链；或
(Ⅱ)氨基酸序列如SEQ ID NO:137或138所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:136所示的轻链；或
(Ⅲ)氨基酸序列如SEQ ID NO:140或141所示的重链，和氨基酸序列如SEQ ID NO:139所示的轻链。
在一些实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或全人抗体，或其抗原结合片段。
可采用用于产生抗体的任何合适方法来产生本发明的抗体。任何合适形式的CD112R都可用作产生抗体的免疫原(抗原)。通过举例而非限制，任何CD112R变体或其片段都可用作免疫原。在一些实施方式中，产生鼠源的单克隆抗人CD112R抗体的杂交瘤细胞可通过本领域公知的方法产生。
来源于啮齿动物(如小鼠)的抗体在体内用作治疗药物时可能引起不需要的抗体免疫原性，重复使用导致人体产生针对治疗性抗体的免疫应答，这类免疫应答至少导致丧失治疗功效，而严重的则导致潜在致死过敏反应。降低啮齿动物抗体的免疫原性的一种方法包括嵌合抗体的产生，其中将小鼠可变区与人恒定区融合(Liu等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:3439-43)。然而，嵌合抗体中的完整啮齿动物可变区的保留仍可能在患者中引起有害的免疫原性。将啮齿动物可变结构域的互补决定区(CDR)环移植到人构架上(即人源化)已被用于进一步将啮齿动物序列减至最低(Jones等(1986)Nature321:522；Verhoeyen等(1988)Science 239:1534)。
本发明抗人CD112R鼠源抗体的轻链和重链可变区及CDR的氨基酸序列如表1所示。
表1：抗CD112R鼠源抗体的CDR和可变区氨基酸序列(KABAT方案)
1D11VH：
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYPFINYNIHWLRQSRGKSLEWIGYVYPYNGVPGYNQKFKSKATLTADNSFSTAYMEFRSLTSEDSAVYFCARERGRDYFDSWGQGTSLTVSS(SEQ ID NO:85)
HCDR1：NYNIH(SEQ ID NO:1)
HCDR2：YVYPYNGVPGYNQKFKS(SEQ ID NO:2)
HCDR3：ERGRDYFDS(SEQ ID NO:3)
1D11VL：(与3D2 VL一致)
DIQLTQSPASLSVSVGETVTITCRVSANIYSNLVWYHQRQGKSPQLLVYGGTNLADGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSEDFGSYHCQHFWSTPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:86)
LCDR1：RVSANIYSNLV(SEQ ID NO:4)
LCDR2：GGTNLAD(SEQ ID NO:5)
LCDR3：QHFWSTPYT(SEQ ID NO:6)
2G10VH：
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSHYMYWLKQRPGQGLEWIGEINPSNGDTKFNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTREKDAFSALDYWGQGTSVTDSS(SEQ ID NO:87)
HCDR1：SHYMY(SEQ ID NO:7)
HCDR2：EINPSNGDTKFNEKFKS(SEQ ID NO:8)
HCDR3：EKDAFSALDY(SEQ ID NO:9)
2G10VL：
DIQMIQSPSSMFASLGDRVSLSCRASQGIRGHLDWYQQKPGGTIKLLIYSTSILNFGVPSRFSGSGSGSDYSLTISSLESEDFADYYCLQRNAYPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:88)
LCDR1：RASQGIRGHLD(SEQ ID NO:10)
LCDR2：STSILNF(SEQ ID NO:11)
LCDR3：LQRNAYPLT(SEQ ID NO:12)
3D2VH：
DVQLVESGGGLVKLGGSLKLSCVASGFTFSSYHMSWIRQTPEKRLELVAAINSNDI NTYYLDTVKGRFTISRDIAKNTLHLQMSSLKSEDTALYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:89)
HCDR1：SYHMS(SEQ ID NO:13)
HCDR2：AINSNDINTYYLDTVKG(SEQ ID NO:14)
HCDR3：HEDYYGFAMDY(SEQ ID NO:15)
3D2VL(与1D11 VL一致)：
DIQLTQSPASLSVSVGETVTITCRVSANIYSNLVWYHQRQGKSPQLLVYGGTNLADGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSEDFGSYHCQHFWSTPYTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:90)
LCDR1：RVSANIYSNLV(SEQ ID NO:4)
LCDR2：GGTNLAD(SEQ ID NO:5)
LCDR3：QHFWSTPYT(SEQ ID NO:6)
4E2VH1：
EVQLQQSGAELVRSGTSVTLSCTASGFNIRDYFIHWVKQRPEQGLEWIGWIIPASGDTDCAPIFQGKATLTADTFSNTAYLHLNSLTSEDTAVYYCNTWVWSPYAVDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:91)
HCDR1：DYFIH(SEQ ID NO:16)
HCDR2：WIIPASGDTDCAPIFQG(SEQ ID NO:17)
HCDR3：WVWSPYAVDY(SEQ ID NO:18)
4E2VH2：
EVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIHPKYDRTSYNQNFKGKATLTVDKSSRTAYMELRSLTSEDTAVYFCVRINDFDEGFAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:142)
HCDR1：DYNMD(SEQ ID NO:143)
HCDR2：DIHPKYDRTSYNQNFKG(SEQ ID NO:144)
HCDR3：INDFDEGFAMDY(SEQ ID NO:145)
4E2VL：
QIVLTQSPAIMSVSPGEKVTMTCSATSSINYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISNMEAEDAATYYCQQWTSNPLTFGAGTKLELK(SEQ IDNO:92)
LCDR1：SATSSINYMH(SEQ ID NO:19)
LCDR2：DTSKLAS(SEQ ID NO:20)
LCDR3：QQWTSNPLT(SEQ ID NO:21)
4E5VH：
EVMLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYIMSWVRQTPDMRLEWVATISSGGSSTYYVDRVKGGFPFSRDSVKYILYVHTSSLRSADTAIYYCAKHEDWDPLYYYSMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:93)
HCDR1：NYIMS(SEQ ID NO:22)
HCDR2：TISSGGSSTYYVDRVKG(SEQ ID NO:23)
HCDR3：HEDWDPLYYYSMDY(SEQ ID NO:24)
4E5VL：
QIVLTQSPTVMSASPGDKVTMTCSASSSVSYMYWFQQKPGSSPRLLIYDTSHLAFGVPSRFSGSRSGTSYSLTISRMEAEDTATYYCQQWTTYPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:94)
LCDR1：SASSSVSYMY(SEQ ID NO:25)
LCDR2：DTSHLAF(SEQ ID NO:26)
LCDR3：QQWTTYPLT(SEQ ID NO:27)
5B1VH(与6A6 VH一致)：
EVQLQQSGAELVRSGTSVTLSCTASGFNIRDYFIHWVKQRPEQGLEWIGWIIPASGDTDCAPIFQGKATLTADTFSNTAYLHLNSLTSEDTAVYYCNTWVWSPYAVDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:95)
HCDR1：DYFIH(SEQ ID NO:28)
HCDR2：WIIPASGDTDCAPIFQG(SEQ ID NO:29)
HCDR3：WVWSPYAVDY(SEQ ID NO:30)
5B1VL：
DIVMTQFPSSLSVPVGEKVTMNCKSSQSLLNSGNQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPYRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDHSYPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:96)
LCDR1：KSSQSLLNSGNQKNFLA(SEQ ID NO:31)
LCDR2：GASTRES(SEQ ID NO:32)
LCDR3：QNDHSYPWT(SEQ ID NO:33)
5B2VH：
EVQLQQSGPELVKPGASVRISCKASGYTFTDYNMHWVKQSHGKSLEWIGYIYPY NGGTGHNQNFKSKATLTVDKSSSTAYMEFRSLTSDDSAVYYCAREDFRHEKMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:97)
HCDR1：DYNMH(SEQ ID NO:34)
HCDR2：YIYPYNGGTGHNQNFKS(SEQ ID NO:35)
HCDR3：EDFRHEKMDY(SEQ ID NO:36)
5B2VL：
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRTSDNIYVYLSWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLTENVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGTPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:98)
LCDR1：RTSDNIYVYLS(SEQ ID NO:37)
LCDR2：NAKTLTE(SEQ ID NO:38)
LCDR3：QHHYGTPYT(SEQ ID NO:39)
5C10VH：
DVKLVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYHMSWVRQTPEKRLELVAAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDDAENTLYLQMSSLKSEDTALYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:99)
HCDR1：SYHMS(SEQ ID NO:40)
HCDR2：AISRDGDSTYYPDTVKG(SEQ ID NO:41)
HCDR3：HEDYFGFAMDS(SEQ ID NO:42)
5C10VL：
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVTNDVAWYQQKPGQSPKLLMYYVSNHYTGVPDRFIGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQAYRSPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:100)
LCDR1：KASQSVTNDVA(SEQ ID NO:43)
LCDR2：YVSNHYT(SEQ ID NO:44)
LCDR3：QQAYRSPWT(SEQ ID NO:45)
6A6VH(与5B1 VH一致)：
EVQLQQSGAELVRSGTSVTLSCTASGFNIRDYFIHWVKQRPEQGLEWIGWIIPASGDTDCAPIFQGKATLTADTFSNTAYLHLNSLTSEDTAVYYCNTWVWSPYAVDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:101)
HCDR1：DYFIH(SEQ ID NO:28)
HCDR2：WIIPASGDTDCAPIFQG(SEQ ID NO:29)
HCDR3：WVWSPYAVDY(SEQ ID NO:30)
6A6VL：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQTSISCRSSQSIVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTRLEIK(SEQ ID NO:102)
LCDR1：RSSQSIVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:46)
LCDR2：KVSNRFS(SEQ ID NO:47)
LCDR3：FQGSHVPWT(SEQ ID NO:48)
6A10VH：
DVKLVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYHMSWVRQTPEKRLELVAAINSNVISTYYLDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:103)
HCDR1：SYHMS(SEQ ID NO:49)
HCDR2：AINSNVISTYYLDTVKG(SEQ ID NO:50)
HCDR3：HEDYYGFAMDY(SEQ ID NO:51)
6A10VL：
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQEKPGQSPKLLMYYVSHRFTGVPDRFTGSGYGTDFTFTINTVQAEDLAVYFCHQAYRSPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:104)
LCDR1：KASQSVSNDVA(SEQ ID NO:52)
LCDR2：YVSHRFT(SEQ ID NO:53)
LCDR3：HQAYRSPWT(SEQ ID NO:54)
6C6VH：
EVQLQQSGPELVRPGASVRISCKASGYTFTDYNMNWVKQSHGKSLEWIGYIYPYNGGAGYNQNFKNKATLTVDTYSRAAYMELRSLTSEDSAVYYCARERGMQRDYFDYWGQGTILTVSS(SEQ ID NO:105)
HCDR1：DYNMN(SEQ ID NO:55)
HCDR2：YIYPYNGGAGYNQNFKN(SEQ ID NO:56)
HCDR3：ERGMQRDYFDY(SEQ ID NO:57)
6C6VL：
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRTSENIYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYAATNLADGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQSGDFGSYFCQHFWGTPYTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO:106)
LCDR1：RTSENIYSNLA(SEQ ID NO:58)
LCDR2：AATNLAD(SEQ ID NO:59)
LCDR3：QHFWGTPYT(SEQ ID NO:60)
6D2VH：
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNIHWVKQSHGKRPDWIGYNYPYNGGAGYNQNFRSRATLTVDKFSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCAGEEVRRGPFYFWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:107)
HCDR1：DYNIH(SEQ ID NO:61)
HCDR2：YNYPYNGGAGYNQNFRS(SEQ ID NO:62)
HCDR3：GEEVRRGPFYF(SEQ ID NO:63)
6D2VL：
DIQMTQSPDSLSASVGETVTITCRTSENIYSFLVWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINSLQPEDFGTYYCQHYYGTPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:108)
LCDR1：RTSENIYSFLV(SEQ ID NO:64)
LCDR2：NAKTLAE(SEQ ID NO:65)
LCDR3：QHYYGTPYT(SEQ ID NO:66)
7C2VH：
DVKLVESGGGLVKLGGSLKLSCAASGFTFSSYHMSWIRQTPEKRLELVAAINSNGINTYYLDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTALYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:109)
HCDR1：SYHMS(SEQ ID NO:67)
HCDR2：AINSNGINTYYLDTVKG(SEQ ID NO:68)
HCDR3：HEDYYGFAMDY(SEQ ID NO:69)
7C2VL：
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLMYYVSNRFTGVPDRFTGSGYGTDFTFTINTVQAEDLAVYFCQQAYRSPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:110)
LCDR1：KASQSVSNDVA(SEQ ID NO:70)
LCDR2：YVSNRFT(SEQ ID NO:71)
LCDR3：QQAYRSPWT(SEQ ID NO:72)
8D3VH：
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLKWVGWISTETAQPTYADDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLRNEDTATYFCATGNYGWYFSVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO:111)
HCDR1：DYSMH(SEQ ID NO:73)
HCDR2：WISTETAQPTYADDFRG(SEQ ID NO:74)
HCDR3：TGNYGWYFSV(SEQ ID NO:75)
8D3VL：
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRATSGVSSSYLFWYQQKSGASPKIWIYSTSNLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYSGYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:112)
LCDR1：RATSGVSSSYLF(SEQ ID NO:76)
LCDR2：STSNLAS(SEQ ID NO:77)
LCDR3：QQYSGYPYT(SEQ ID NO:78)
8H8VH：
EVKLVESGGGLVKPGGSLKVSCAASGFTFSDYPMSWVRQTPDKRLEWVACIDTDENTYYPDSVKGRFTISRDNGRNIVNLQMSSLRSEDAAMYYCARGWDDYAAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:113)
HCDR1：DYPMS(SEQ ID NO:79)
HCDR2：CIDTDENTYYPDSVKG(SEQ ID NO:80)
HCDR3：GWDDYAAWFAY(SEQ ID NO:81)
8H8VL：
ENVLTQFPAIMSVFLGERVTMSCRASSSVNYMYWYQQKSDASPKLWIYHTSNLAPGVPARFSGSGSGNSYSLTISSMEGEDAATYYCQQFTSSPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:114)
LCDR1：RASSSVNYMY(SEQ ID NO:82)
LCDR2：HTSNLAP(SEQ ID NO:83)
LCDR3：QQFTSSPWT(SEQ ID NO:84)
在一些实施方式中，本发明的嵌合或人源化抗体可基于所述制备的鼠单克隆杂交瘤抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得，并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
在一些实施方式中，本发明所述的嵌合CD112R抗体，可使用本领域已知的方法将杂交瘤来源的免疫球蛋白重链和轻链可变区与人IgG恒定区有效连接(参见例如属于Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)，获得嵌合型重链和嵌合型轻链来制备。在一些实施方式中，本发明的嵌合抗体包含的恒定区可选自任何人IgG亚型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，优选IgG4。
在一些实施方式中，本发明的嵌合CD112R抗体可由嵌合型轻链与嵌合型重链表达质粒“混合和匹配”转染表达细胞获得，此类“混合和匹配”的抗体的CD112R结合可使用上述结合测定和其它常规结合测定(例如，ELISA)来进行测试。
本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883；Al-Lazikani等人,“Standard conformations for thecanonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))、基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))，AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999NucleicAcids Research,27,209-212)，以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinitypropagation clustering)的North CDR定义。
除非另有说明，否则本发明抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
应该注意，基于不同的指派系统获得的同一抗体的可变区的CDR的边界可能有所差异。即不同指派系统下定义的同一抗体可变区的CDR序列有所不同。因此，在涉及用本发明定义的具体CDR序列限定抗体时，所述抗体的范围还涵盖了这样的抗体，其可变区序列包含所述的具体CDR序列，但是由于应用了不同的方案(例如不同的指派系统或组合)而导致其所声称的CDR边界与本发明所定义的具体CDR边界不同。
具有不同特异性(即，针对不同抗原的不同结合位点)的抗体具有不同的CDR。然而，尽管CDR在抗体与抗体之间是不同的，但是CDR内只有有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。使用Kabat,Chothia、AbM、Contact和North方法中的至少两种，可以确定最小重叠区域，从而提供用于抗原结合的“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的一个子部分。正如本领域技术人员明了，通过抗体的结构和蛋白折叠，可以确定CDR序列其余部分的残基。因此，本发明也考虑本文所给出的任何CDR的变体。例如，在一个CDR的变体中，最小结合单位的氨基酸残基可以保持不变，而根据Kabat或Chothia定义的其余CDR残基可以被保守氨基酸残基替代。
本发明将各种嵌合型重链和轻链表达质粒混合配对转染表达细胞，获得72种抗人CD112R嵌合抗体，其编号及配对方式见表2。
表2：嵌合抗体的编号及其重链和轻链可变区的来源
2G10-VH 4E2-VH1 4E2-VH2 4E5-VH 5B2-VH 6A10-VH 7C2-VH 5C10-VH 3D2-VH
2G10-VL Chi-1 Chi-9 Chi-17 Chi-25 Chi-33 Chi-41 Chi-49 Chi-57 Chi-65
4E2-VL Chi-2 Chi-10 Chi-18 Chi-26 Chi-34 Chi-42 Chi-50 Chi-58 Chi-66
4E5-VL Chi-3 Chi-11 Chi-19 Chi-27 Chi-35 Chi-43 Chi-51 Chi-59 Chi-67
5B2-VL Chi-4 Chi-12 Chi-20 Chi-28 Chi-36 Chi-44 Chi-52 Chi-60 Chi-68
6A10-VL Chi-5 Chi-13 Chi-21 Chi-29 Chi-37 Chi-45 Chi-53 Chi-61 Chi-69
7C2-VL Chi-6 Chi-14 Chi-22 Chi-30 Chi-38 Chi-46 Chi-54 Chi-62 Chi-70
5C10-VL Chi-7 Chi-15 Chi-23 Chi-31 Chi-39 Chi-47 Chi-55 Chi-63 Chi-71
1D11-VL Chi-8 Chi-16 Chi-24 Chi-32 Chi-40 Chi-48 Chi-56 Chi-64 Chi-72
本发明所述的人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠源CDR区插入人种系框架区。参见Winter等人的美国专利No.5,225,539及Queen等人的美国专利No.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370。
本发明抗人CD112R人源化抗体的轻链和重链可变区及CDR的氨基酸序列如下：
3D2VH-1：SEQ ID NO:115
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVAAINSNDINTYYLDTVKGRFTISRDIAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
3D2VH-2:SEQ ID NO:116
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAINSNDINTYYLDTVKGRFTISRDIAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
3D2VH-3:SEQ ID NO:117
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWIRQAPGKGLELVSAINSNDINTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
5C10 VH-1：SEQ ID NO:118
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTLVTVSS
5C10 VH-2：SEQ ID NO:119
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDDAENSLYLQMNSLRAEDTAVYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTLVTVSS
5C10 VH-3：SEQ ID NO:120
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVAAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTLVTVSS
5C10 VH-4：SEQ ID NO:121
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVAAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDDAENSLYLQMNSLRAEDTAVYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTLVTVSS
5C10 VL-1：SEQ ID NO:122
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVTNDVAWYQQKPGQPPKLLIYYVSNHYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQAYRSPWTFGQGTKLEIK
5C10 VL-2:SEQ ID NO:123
AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVTNDVAWYQQKPGKAPKLLIYYVSNHYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQAYRSPWTFGQGTKLEIK
6A10 VH-1:SEQ ID NO:124
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAINSNVISTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
6A10 VH-2:SEQ ID NO:125
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAINSNVISTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
6A10 VL-1:SEQ ID NO:126
EIVMTQSPPTLSLSPGERVTLSCKASQSVSNDVAWYQEKPGQAPRLLIYYVSHRFTGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCHQAYRSPWTFGQGTKLEIK
6A10 VL-2:SEQ ID NO:127
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVSNDVAWYQQKPGQPPKLLIYYVSHRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCHQAYRSPWTFGQGTKLEIK
7C2 VH-1:SEQ ID NO:128
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAINSNGINTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
7C2 VH-2：SEQ ID NO:129
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWIRQAPGKGLELVAAINSNGINTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
7C2 VH-3:SEQ ID NO:130
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWIRQAPGKGLELVAAINSNDINTYYLDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHEDYYGFAMDYWGQGTLVTVSS
7C2 VL-1:SEQ ID NO:131
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKAPKLLIYYVSNRFTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQAYRSPWTFGQGTKLEIK
7C2 VL-2：SEQ ID NO:132
EIVMTQSPPTLSLSPGERVTLSCKASQSVSNDVAWYQQKPGQAPRLLIYYVSNRFTGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYFCQQAYRSPWTFGQGTKLEIK
本发明人源化抗CD112R抗体的编号及其重链和轻链可变区的来源见表3。
表3：人源化抗CD112R抗体的编号及其重链和轻链可变区的来源
抗体Hu16、Hu52和Hu59的轻链和重链氨基酸序列如下所示，其余人源化抗体LC和HC的可变区外的序列与Hu16、Hu52和Hu59的相应序列相同，其中进行生物学测试的人源化抗体均为IgG4重链。
Hu16-LC：SEQ ID NO:133(LCDR1-LCDR3分别为SEQ ID NO:52、53和54)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVSNDVAWYQQKPGQPPKLLIYYVSHRFTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCHQAYRSPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Hu16-HC-IgG4：SEQ ID NO:134(HCDR1-HCDR3分别为SEQ ID NO:40、41和42)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLELVSAISRDGDSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCSRHEDYFGFAMDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Hu16-HC-IgG1：SEQ ID NO:135(HCDR1-HCDR3分别为SEQ ID NO:40、41和42)
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在一些实施方式中，氨基酸变化包括氨基酸缺失、插入或置换。在一些实施方式中，本发明的抗CD112R抗体或其抗原结合片段包括具有已通过氨基酸缺失、插入或置换突变的，但仍与上述抗体(特别地在上述序列中描绘的CDR区中)有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的那些抗体。在一些实施方式中，本发明的抗体与具体序列中描绘的CDR区相比较时，在CDR区中已通过氨基酸缺失、插入或置换的氨基酸突变不超过1、2、3、4或5个。在一些实施方式中，本发明的抗体与具体序列中框架区相比较时，在框架区中已通过氨基酸缺失、插入或置换的氨基酸突变不超过1、2、3、4或5个。
在一些实施方式中，编码本发明抗体的多核苷酸分子包括已通过核苷酸缺失、插入或置换突变的，但仍然与上文中所述的序列中描绘的CDR对应编码区具有至少约60、70、80、90、95或100％同一性的多核苷酸分子。
在一些实施方案中，CD112R抗体是IgG抗体，例如IgG1，IgG2，IgG3或IgG4抗体或其修饰形式，如以下部分所述。
在一些实施方式中，可在本文中所提供抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸修饰，以此产生Fc区变体。Fc区变体可包含在一或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如置换)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在一些实施方式中，可能需要产生经半胱氨酸工程改造的抗体，例如“硫代MAb”，其中抗体的一或多个残基经半胱氨酸残基置换。
在一些实施方式中，本文中所提供的抗体可进一步经修饰为含有本领域中已知且轻易获得的其他非蛋白质部分。适合抗体衍生作用的部分包括，但不限于，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括，但不限于，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二烷、聚-1，3，6-三烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。
抗体表达
在又一个方面，本发明提供了一种多核苷酸分子，其编码本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段。所述多核苷酸分子可以包含编码抗体的轻链可变区和/或重链可变区的氨基酸序列的多核苷酸分子，或包含编码抗体的轻链和/或重链的氨基酸序列的多核苷酸分子。
在又一个方面，本发明提供了一种表达载体，其包含如本文所述的多核苷酸分子，优选地，所述载体为真核表达载体。在一些实施方式中，如本文所述的多核苷酸分子包含在一个或多个表达载体中。
在又一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如本文所述的多核苷酸分子或如本文所述的表达载体，优选地，所述宿主细胞是真核细胞，更优选哺乳动物细胞。
在又一个方面，本发明提供了一种用于制备如本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合于所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下在本文所述的宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
本发明提供用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞，包括可获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0、SP2/0细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞、A549细胞、293T细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过测定哪种细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。
在一个实施方式中，本发明提供制备抗CD112R抗体的方法，其中所述方法包括，将表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足够的一段时间，以允许抗体在宿主细胞中表达，或者更优选抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中,来产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
很可能由不同细胞系表达或在转基因动物中表达的抗体彼此具有不同的糖基化。然而，由本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体是本发明的组成部分，而不论抗体的糖基化如何。同样，在某些实施方式中，非岩藻糖基化抗体是有利的，因为它们通常在体外和体内具有比其岩藻糖基化对应物更强力的功效，并且不可能是免疫原性的，因为它们的糖结构是天然人血清IgG的正常组分。
药物组合物和药物制剂
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体或本文所述的宿主细胞，和药学上可接受的载体或赋形剂。应理解，本发明提供的抗CD112R抗体或其药物组合物可以整合制剂中合适的运载体、赋形剂和其他试剂以联合给药，从而提供改善的转移、递送、耐受等。
术语“药物组合物”指这样的制剂，其允许包含在其中的活性成分的生物学活性有效的形式存在，并且不包含对施用所述制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外的成分。
可以通过将具有所需纯度的本发明的抗CD112R抗体与一种或多种任选的药用辅料(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.编辑(1980))混合来制备包含本文所述的抗CD112R抗体的药物制剂，优选地以水溶液或冻干制剂的形式。
本发明的药物组合物或制剂还可以包含一种或多种其它活性成分，所述活性成分是被治疗的特定适应症所需的，优选具有不会不利地影响彼此的互补活性的那些活性成分。在一些实施方式中，其它的活性成分为化疗剂、免疫检查点抑制剂、生长抑制剂、抗生素或已知的各种抗肿瘤或抗癌剂，所述活性成分以对于目的用途有效的量合适地组合存在。在一些实施方式中，本发明的药物组合物还包含编码抗CD112R抗体的多核苷酸分子的组合物。
在又一个方面，本发明提供了一种药物组合，其包含本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、或本文所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
在一个实施方式中，本发明所述的药物组合，其中，所述另外的治疗剂选自抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗TIGIT抗体中的一种或多种；优选地，所述另外的治疗剂为抗TIGIT抗体，或抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体的组合。
在一个实施方式中，本发明所述抗PD-1抗体选自nivolumab、pembrolizumab、toripalimab、Sintilimab、Camrelizumab、Tislelizumab和Cemiplimab中的一种或几种；优选为toripalimab。
在一个实施方式中，本发明所述抗PD-L1抗体选自atezolizumab、avelumab和durvalumab。
在一个实施方式中，本发明抗TIGIT抗体的实施例阐述于PCT/CN2020/101883中。在本发明所述的抗TIGIT抗体包括PCT/CN2020/101883中描述的任意一个抗TIGIT抗体,优选为人源化抗体hu20。
在又一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、或本文所述的药物组合物。
医药用途及治疗方法
本文提供的任何抗CD 112R抗体均可用于治疗方法。还应当理解，在讨论“抗体”时，也包括包含抗体的组合物。本发明的抗CD 112R抗体可以治疗有效量或预防有效量用于本发明任一实施方案所述的治疗或预防方法中。
在又一个方面，本发明提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、或本文所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症的药物中的用途，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。在一些实施方案中，该药物用于在患有肿瘤的受试者中增强，增加和/或维持抗肿瘤免疫应答。在一些实施方案中，该药物用于增强与CD112的CD226相互作用。
在又一个方面，本发明提供了本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、或本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。在一些实施方案中，本发明提供了用于在患有肿瘤的受试者中增强，增加和/或维持抗肿瘤免疫应答的抗CD11R抗体。在一些实施方案中，本发明提供了提供了用于增强CD226与CD112的相互作用的抗CD112R抗体。
在又一个方面，本发明提供了一种治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用本文所述的抗体或其抗原结合片段、本文所述的多核苷酸分子、本文所述的表达载体、本文所述的宿主细胞、或本文所述的药物组合物或药物组合，优选所述疾病或病症为癌症，更优选所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗需要阻断CD112R的疾病和/或病症的方法，该方法包括给予有需要的受试者施用本文所述的抗CD112R抗体。在一些实施方案中，提供了用于在患有肿瘤的受试者中增强，增加和/或维持抗肿瘤免疫应答的方法，该方法包括给予有需要的受试者施用本文所述的抗CD112R抗体。
在一些实施方式中，本文所述的癌症或肿瘤可以选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。
在一些实施方式中，本发明给药方式包括但不限于口服、静脉内、皮下、肌内、动脉内、关节内(例如在关节炎关节中)、通过吸入、气雾剂递送或肿瘤内给予等。
本发明还提供了向受试者联合施用治疗有效量的一种或多种疗法(例如治疗方式和/或其它治疗剂)。在一些实施方式中，所述疗法包括手术治疗和/或放射疗法。可以单独或与疗法中的其它治疗剂组合使用本发明的抗体。在一些实施方式中，本发明抗体与至少一种另外的治疗剂共施用。例如，抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗TIGIT抗体中的一种或多种。在一些实施方式中，本发明抗体与抗TIGIT抗体组合施用。在一些实施方式中，本发明抗体与抗PD-1抗体和抗TIGIT抗体组合施用。
用于诊断和检测的方法
在又一个方面，本发明提供了一种使用本文所述的抗体或其抗原结合片段检测CD112R在样品中的存在的方法。术语“检测”用于本文中时，包括定量或定性检测。在一些实施方式中，所述样品是生物样品。在某些实施方式中，生物样品是血、血清或生物来源的其他液体样品。在某些实施方式中，生物样品包含细胞或组织。所述方法包括使本文所述的抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体或其抗原结合片段的检测组合物与样品接触的步骤，以及检测是否存在所述抗体或其抗原结合片段与CD112R结合产生的结合物或结合信号的步骤。用于检测用途时，本文所述的抗体或其抗原结合片段可被标记，以指示是否形成了所述结合物。
本发明包括所述特定实施方式的所有组合。本发明的进一步实施方式及可应用性的完整范畴将自下文所提供的详细描述变得显而易见。然而，应理解，尽管详细描述及特定实施例指示本发明的优选实施方式，但仅以说明的方式提供这些描述及实施例，因为本发明的精神及范畴内的各种改变及修改将自此详细描述对熟悉此项技术者变得显而易见。出于所有目的，包括引文在内的本文所引用的所有公开物、专利及专利申请将以引用的方式全部并入本文。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明采用下述缩略词：
his-tag代表组氨酸标签；
Fc tag代表可结晶片段标签；
ECD代表胞外结构域；
PEI代表聚乙烯亚胺；
BSA代表牛血清白蛋白；
PBS代表磷酸缓冲盐溶液；
FBS代表胎牛血清；
CFSE代表羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯；
APC代表异位藻蓝蛋白；
NA-PE代表藻红蛋白标记的中性亲和素；
PE代表藻红蛋白；
TMB代表3,3',5,5'-四甲基联苯胺；
HEPES:羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液；
DTT：二硫苏糖醇。
实施例
通过以下实施例对本发明进行说明，但并不旨在对本发明作出任何限制。本文已经详细描述了本发明，其中也公开了其具体实施方式。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1、用于抗CD112R抗体活性检测的重组蛋白的制备
通过常规PCR技术扩增编码CD112R胞外结构域的cDNA序列，利用常规的克隆技术，将扩增片段克隆到自主构建的真核表达质粒系统(MX2-mFc，包含鼠源IgG2a Fc域)中，其含嘌呤霉素筛选体系，从而产生重组融合蛋白表达质粒hCD112R ECD mFC。利用表达细胞293E表达并纯化获取hCD112R mFC重组蛋白。
其中人CD112R胞外结构域(hCD112R ECD)氨基酸序列为NCBI登录号NM_024070第Met1-Ala160位氨基酸，用于本发明抗体的活性检测。
实施例2、小鼠杂交瘤细胞的制备
2.1、免疫动物
将hCD112R-Fc(购自R&D Systems，货号9365-PV)重组蛋白作为抗原免疫5只BALB/c小鼠(购自Simonsen Laboritories of Gilroy，雌性BALB/c，8周)。在初次免疫后(50ug/只)，每隔1周或2周进行一次加强免疫(25ug/只)，共进行6次免疫。
2.2、细胞融合
在最后一针加强免疫后第四天，取小鼠腹股沟淋巴结,腘窝淋巴结和脾脏，在生理盐水中碾磨后取富含淋巴细胞的悬浮液，按常规电转方法将其与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合。将融合产物在含1:50HAT(次黄嘌呤、氨甲蝶呤和胸腺嘧啶核苷)的DMEM完全培养基中培养5天以筛选成功融合的细胞(杂交瘤细胞)。然后换成含1:50HT(次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷)的DMEM完全培养基直至筛选结束。
DMEM完全培养基配比是：15％FBS(胎牛血清)+1:50L-谷氨酰胺+100U/mL青链霉素+1:100OPI(草酰乙酸、丙酮酸和胰岛素)，培养箱条件是8％CO2，37℃。
实施例3、小鼠杂交瘤细胞的筛选和所得抗CD112R鼠源抗体的性能检测
在9600株不同多克隆杂交瘤细胞中，通过结合ELISA，筛选出181株杂交瘤细胞，其分泌的抗体可与hCD112R特异地结合。在这181株结合阳性的杂交瘤细胞中，有40株杂交瘤细胞表达的抗体可在FACS中阻断hCD112R与表达在细胞表面的hCD112结合。随后的ELISA阻断实验中，在上述的40个多克隆细胞株中确定了22株能够阻断hCD112R与hCD112结合。从这22株杂交瘤细胞FACS和ELISA阻断双阳性多克隆中选取15株进行了亚克隆。
通过亚克隆筛选得到15株阻断型单克隆细胞株。将其分泌的抗体进行了纯化和分析。从单克隆杂交瘤细胞提取mRNA，对抗体可变区进行了测序。通过体外药效实验，以及与PD-1单抗和TIGIT单抗联用，确定8个可促进T细胞激活的备选单克隆杂交瘤株最终进入重组表达，序号分别是2G10.1、3D2.1、4E2、4E5.1、5B2.1、5C10.1、6A10.1和7C2.1.，其在后续嵌合抗体构建中分别简称为2G10、3D2、4E2、4E5、5B2、5C10、6A10和7C2。
实验方法如下所示。
3.1、ELISA方法检测杂交瘤抗体阻断hCD112R与hCD112结合
96孔MaxiSorp板(赛默飞世尔Nunc)包被2ug/mL hCD112(鼠Fc标签，君盟制备)后以1％BSA封闭。将终浓度为0.5ug/ml的hCD112R与杂交瘤培养液上清在微孔板上共孵育30分钟。再将混合物转移至MaxiSorp板上孵育30分钟。用辣根过氧化物酶标记的羊抗人二抗检测。
结果表明，本发明杂交瘤抗体能有效阻断hCD112R与hCD112结合。
3.2、Biacore检测抗CD112R杂交瘤抗体与hCD112R mFc的亲和力研究
使用Biacore T200检测抗CD112R杂交瘤抗体与重组hCD112R mFc蛋白的结合亲和力。在CM5芯片表面偶联羊抗人Fc抗体片断(Jackson ImmunoResearch)，使用芯片分别捕获抗CD112R杂交瘤抗体，之后将不同浓度的重组hCD112R mFc蛋白注入CM5芯片。如表4所示，15个抗CD112R杂交瘤抗体与重组hCD112R mF的亲和力均较高。
表4：抗CD112R杂交瘤抗体与重组hCD112R mFc的亲和力
编号 亲和力KD(M) 编号 亲和力KD(M)
1D11.1 2.36E-11 6A6.1 1.74E-11
2G10.1 3.02E-11 6A10.1 1.03E-11
3D2.1 3.36E-11 6C6.1 2.05E-11
4E2 2.37E-11 6D2.1 1.34E-11
4E5.1 9.26E-12 7C2.1 1.01E-11
5B1.1 1.63E-11 8D3.1 1.58E-11
5B2.1 2.32E-11 8H8.1 5.88E-11
5C10.1 8.55E-12
3.3、FACS检测杂交瘤抗体阻断hCD112R与细胞表面hCD112结合
将自主构建的过表达人CD112的细胞CHO CD112与染色缓冲液(PBS+1％FBS)配置的hCD112R mFc蛋白溶液(0.5μg/ml)，以及不同浓度的抗CD112R杂交瘤抗体或对照抗体(起始浓度为100μg/ml，3倍稀释，10个浓度梯度)在4℃条件下共孵育30min。然后用染色缓冲液洗去未结合的抗体，再将细胞与用染色缓冲液配置的含1％(v/v)的羊抗鼠IgG Fc荧光二抗(Jackson ImmunoResearch)在4℃条件下避光孵育30分钟。最后用流式细胞仪收集细胞，检测细胞表面结合的荧光抗体。用FlowJo分析原始数据得到MFI值，并用GraphPad Prism软件进行四参数拟合曲线得出IC50值。
结果如表5所示，本发明杂交瘤抗体能有效阻断hCD112R与hCD112结合。
表5：抗CD112R杂交瘤抗体阻断hCD112R与hCD112结合
3.4杂交瘤抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性检测
将自主构建的靶细胞CHO CD112(稳定表达人CD112和CD3scFv)在96孔白色平底板中按每个孔5×104个细胞数铺板过夜；第二天吸尽细胞孔中的培养基后，用实验缓冲液(RPMI 1640(1X)(购自Gibco，Cat#22400-071)+2％FBS)将不同浓度的抗CD112R杂交瘤抗体或者对照抗体(起始浓度为30μg/ml，3倍稀释，总共8个浓度梯度)加入靶细胞中并在37℃孵育30分钟。然后将自主构建的效应细胞Jurkat CD112R(稳定表达人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入细胞板中，并在37℃培养箱中共孵育6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega)，并用多功能酶标仪检测化学发光信号。通过GraphPad prism软件拟合四参数回归曲线，计算EC50值。阳性对照为Ref(科罗拉多大学抗CD112R抗体，根据US20170240613序列表达纯化得到)。
结果显示，本发明杂交瘤抗体均能够有效阻断CD112R/CD112报告基因系统中CD112R和CD112的相互作用，促进T细胞的激活。
其中，杂交瘤抗体2G10.1、5C10.1、3D2.1、4E2的EC50分别为72.91ng/ml、40.36ng/ml、49.28ng/ml和61.26ng/ml，显著优于对照抗体Ref(920.4ng/ml)；7C2.1、6A10.1的EC50分别为37.94ng/ml和50.73ng/ml，显著优于对照抗体Ref(870.9ng/ml)；4E5.1的EC50为55.19ng/ml显著优于对照抗体Ref(866.3ng/ml)。
3.5杂交瘤抗体与抗TIGIT抗体在双报告基因系统中联用的活性检测
将靶细胞CHO CD112细胞(稳定表达hCD112和CD3scFv)在96孔白色平底板中(Corning,cat#3917)按每个孔5×104个细胞数铺板过夜后，加入固定浓度(0.3μg/ml)的抗CD112R杂交瘤抗体以及不同浓度(从0.5ng/ml到30μg/ml，3倍稀释)的抗TIGIT抗体，并在37℃孵育30分钟。然后将效应细胞Jurkat PD-1TIGTI CD112R(稳定表达人PD-1、人TIGIT、人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入靶细胞中，并在37℃培养箱中共孵育4-6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega,cat#E6120)并用多功能酶标仪检测化学发光信号。
抗TIGIT抗体(JS006)：来源于PCT申请号PCT/CN2020/101883中抗TIGIT人源化抗体hu20。
杂交瘤抗体：2G10.1,3D2.1,4E2,4E5.1,5B2.1,5C10.1，6A10.1和7C2.1。
如图1的剂量依赖曲线所示，在双报告基因系统中，本发明杂交瘤抗体与抗TIGIT抗体联用后，荧光素酶报告基因NFAT信号显著高于抗TIGIT抗体单药组，说明抗CD112R抗体与抗TIGIT抗体联用有显著的协同效应。
3.6杂交瘤抗体与抗TIGIT抗体及抗PD-1抗体在三报告基因系统中联用的活性检测
将靶细胞CHO PD-L1 CD112细胞(稳定表达hPD-L1、hCD112和CD3scFv)在96孔白色平底板中(Corning,cat#3917)按每个孔5×104个细胞数铺板过夜后，加入不同浓度(从0.5ng/ml到10μg/ml，3倍稀释)的抗PD-1抗体以及固定浓度(0.3μg/ml)的抗TIGIT抗体和固定浓度(0.3μg/ml)的抗CD112R杂交瘤抗体并在37℃孵育30分钟。然后将效应细胞JurkatPD-1TIGTI CD112R(稳定表达人PD-1、人TIGIT、人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入靶细胞中，并在37℃培养箱中共孵育4-6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega,cat#E6120)并用多功能酶标仪检测化学发光信号。
抗TIGIT抗体(JS006)：来源于PCT申请号PCT/CN2020/101883中抗TIGIT人源化抗体hu20。
抗PD-1抗体(JS001)：来源于君实生物的特瑞普利单抗。
杂交瘤抗体：2G10.1，3D2.1，4E2，4E5.1，5B2.1，5C10.1，6A10.1和7C2.1。
如图2(a-h)所示，检测结果显示，抗CD112R杂交瘤单克隆抗体与抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体联用组，荧光素酶报告基因NFAT信号显著高于抗PD-1抗体单药组和抗PD-1抗体与0.3μg/ml的抗CD112R杂交瘤单克隆抗体联用组，说明抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体及抗CD112R抗体联用有显著的协同效应。
实施例4、抗CD112R鼠源抗体的可变区序列的测定(根据Kabat或IMGT表示)
用基于简并引物PCR的方法，测定抗CD112R鼠源抗体的可变区对应的DNA编码序列。培养候选杂交瘤细胞，1000rpm离心收集细胞，并以Trizol提取总RNA。以此为模板合成第一链cDNA，之后以第一链cDNA作为后续模板，PCR扩增对应的可变区DNA编码序列。扩增反应中所使用的引物序列与抗体的可变区第一框架区和恒定区互补(Larrick，J.W.等,1990,Scand.J.Immunol.,32,121-128和Coloma,J.J.等,(1991)BioTechniques,11,152-156)。在50μl反应体系中，分别加入cDNA 1μl，10×PCR缓冲液5μl，上游及下游引物各1μl(25pmol)，dNTP 1μl，25mmol PL MgCl2 1μl，H2O 39μl，95℃预变性10min，加Taq酶1μl，进入温度循环，进行PCR扩增。反应条件为94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸15s，共32个循环，然后72℃保温10min。回收并纯化PCR产物。对扩增产物测序，得到抗人CD112R鼠源抗体的重链可变区和轻链可变区氨基酸序。
用NCBI Ig-Blast(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/igblast/)在种系和重排Ig可变区序列数据库中搜索共有序列。基于Kabat(Wu,T.T及Kabat,E.A.1970J.Exp.Med.,132:211-250)及IMGT系统(Lefranc M.-P.等人，1999Nucleic AcidsResearch,27,209-212)，藉由序列批注及藉由基于因特网的序列分析(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/vquest与http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)鉴定互补决定区(CDR)氨基酸序列。
经选择的抗CD112R鼠源抗体的轻链和重链可变区及CDR的氨基酸序列如表1所示。其中，PCR测序分析发现，杂交瘤细胞4E2中包含两条重链，分别包含重链可变区4E2-VH1和4E2-VH2。
实施例5、抗CD112R嵌合抗体的构建
考虑杂交瘤细胞表达抗体的表达量、活性、类型等，选择抗人CD112R鼠源抗体2G10，4E2HC1，4E2HC2，4E5HC，5B2，6A10，7C2，5C10，3D2的轻链和重链可变区构建抗CD112R嵌合抗体。
从人血细胞(来自北京血液研究所)中克隆重链恒定区Fc和轻链恒定区κ的编码序列，引入pCDNA3.1质粒中。前述抗人CD112R鼠源抗体的重链和轻链可变区编码序列由Genscript公司合成。各种抗人CD112R鼠源抗体的重链可变区编码序列和轻链可变区编码序列经Bspq I酶切后，采用如表2所示的各种组合，引入已经引入恒定区编码序列的pCDNA3.1质粒中，并经测序确定正确克隆。将各种嵌合型重链和轻链表达质粒混合配对转染表达细胞，获得72种抗人CD112R嵌合抗体，其编号和配对方式具体见表2。后续的实验材料均由此系列质粒转染细胞后提取获得。
实施例6、嵌合抗体的筛选
6.1抗CD112R嵌合抗体与人CHO-CD112R表达细胞的结合
将过表达人CD112R的CHO-CD112R细胞(君实自主构建，构建过表达CD112R的稳转细胞株的CD112R的氨基酸序列为NCBI登录号Q6DKI7的第Met1-Arg326位氨基酸)分别与不同浓度的抗CD112R嵌合抗体(起始浓度为50μg/ml，5倍稀释，共12个浓度梯度)在4℃孵育30min，然后洗涤并与荧光标记的二抗在4℃条件下避光孵育30分钟。最后用流式细胞仪(BDCantoⅡ)收集细胞，检测细胞表面结合的荧光抗体。用FlowJo分析原始数据得到MFI值，并用通过GraphPad拟合抗体剂量依赖性的结合曲线(图3，a和b)并计算EC50(表3)，阳性对照和阴性对照分别是Ref(科罗拉多大学抗CD112R抗体，根据US20170240613序列表达纯化得到)和抗KLH hu-IgG4抗体。
如图3和表6所示，本发明大部分抗CD112R嵌合抗体均能够以高亲和力与CHO-CD112R细胞表面高表达的人CD112R结合，结合活性显著优于对照抗体Ref。
表6：抗CD112R嵌合抗体的细胞水平亲和力(EC50)
嵌合抗体 EC50(ng/ml) 相对活性(％)*
chi-61 107.1 3993
chi-54 121.6 3516
chi-55 140 3054
chi-71 204.6 2090
chi-62 214.3 1995
chi-70 260 1645
chi-69 262.2 1631
chi-63 531.5 805
chi-47 279.9 600
chi-18 293.6 572
chi-36 351.5 478
chi-46 432.6 388
chi-53 626.9 268
chi-45 726.1 231
ref 4276 100
chi-72 12256 35
chi-10 NA NA
chi-52 NA NA
anti-KLH hIgG4 NA NA
注：“*”表示对照抗体Ref与抗CD112R嵌合抗体的EC50比值；
“NA”表示未测出。
6.2抗CD112R嵌合抗体与食蟹猴CD112R结合
用固定浓度的重组食蟹猴CD112R抗原(Acrobiosystems，Cat#PVG-C5259)包板，使用梯度稀释的抗CD112R嵌合抗体(1μg/ml起始，2.5倍梯度稀释，共12个浓度)与其结合，将辣根过氧化物酶(HRP)偶联的鼠抗人IgG4 Fc(Southern Biotech，9200-05)稀释5000倍作为检测抗体进行检测，然后用0.1mg/ml TMB显色，最后用2M盐酸终止反应，在420nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合EC50。
阳性对照是Ref(科罗拉多大学抗CD112R抗体，根据US20170240613序列表达纯化得到)。
如图4(a和b)和表7所示，以下14个嵌合抗体中除了chi 18与食蟹猴CD112R不结合外，其他13个抗CD112R嵌合抗体均与食蟹猴CD112R结合。
表7：抗CD112R嵌合抗体与食蟹猴CD112R的结合(EC50 ng/ml)
嵌合抗体 EC50(ng/ml) 相对活性(％)*
chi 18 NA NA
chi 36 3.906 89.6
chi 45 2.975 117.6
chi 46 3.263 107.2
chi 47 3.092 113.2
chi 53 3.296 106.2
chi 54 3.267 107.1
chi 55 4.187 100
chi 61 4.995 83.8
chi 62 3.714 112.8
chi 63 4.358 96.1
chi 69 4.739 88.4
chi 70 3.835 109.2
chi 71 4.418 94.8
注：“*”表示对照抗体Ref与抗CD112R嵌合抗体的EC50比值。
6.3抗CD112R嵌合抗体阻断CD112R蛋白与人CHO-CD112表达细胞结合
将过表达人CD112的细胞CHO CD112与染色缓冲液(PBS+1％FBS)配置的hCD112RmFc蛋白溶液(5μg/ml)，以及不同浓度的抗CD112R嵌合抗体或对照抗体(起始浓度为100μg/ml，3倍稀释，10个浓度梯度)在4℃条件下共孵育30min。然后用染色缓冲液洗去未结合的抗体，再将细胞与用染色缓冲液配置的含1％(v/v)的羊抗鼠IgG Fc荧光二抗(JacksonImmunoResearch)在4℃条件下避光孵育30分钟。最后用流式细胞仪(BD CantoⅡ)收集细胞，检测细胞表面结合的荧光抗体。用FlowJo分析原始数据得到MFI值，并用GraphPadPrism软件进行四参数拟合曲线得出IC50值。阳性对照和阴性对照分别是Ref(科罗拉多大学抗CD112R抗体，根据US20170240613序列表达纯化得到)和抗KLH hu-IgG4抗体。
如图5(a和b)和表8所示，以下13个嵌合抗体均能够有效阻断CD112R蛋白与CHO-CD112细胞的结合。
表8：抗CD112R嵌合抗体阻断CD112R蛋白与CHO-CD112细胞结合的能力(IC50)
嵌合抗体 IC50(ng/ml) 相对活性(％)*
chi 70 0.7077 149.6
chi 71 0.7328 144.5
chi 46 0.7996 132.4
chi 63 0.8012 132.2
chi 47 0.8756 120.9
chi 54 0.9023 117.4
chi 36 0.9205 115.0
chi 45 0.9527 111.2
chi 69 0.9591 110.4
chi 62 0.9635 109.9
chi 61 0.9646 109.8
chi 53 0.9791 108.2
chi 55 1.017 104.1
Ref 1.059 100.0
注：“*”表示对照抗体Ref与抗CD112R嵌合抗体的EC50比值。
6.4抗CD112R嵌合抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性检测
将靶细胞CHO CD112(君实生物自主构建，稳定表达人CD112和CD3scFv)细胞在96孔白色平底板中按每个孔5×104细胞数铺板过夜；第二天吸尽细胞孔中的培养基后，用实验缓冲液(RPMI 1640(1X)(购自Gibco，Cat#22400-071)+2％FBS)将不同浓度的抗CD112R嵌合抗体或者对照抗体(起始浓度为3μg/ml，3倍稀释，总共10个浓度梯度)加入靶细胞中并在37℃孵育30分钟。然后将自主构建的效应细胞Jurkat CD112R(稳定表达人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入细胞板中，并在37℃培养箱中共孵育6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega)，并用多功能酶标仪(TECANM1000 pro)检测化学发光信号。通过GraphPad prism软件拟合四参数回归曲线，计算EC50值。阳性对照和阴性对照分别是Ref科罗拉多大学抗CD112R抗体(根据US20170240613序列表达纯化得到)和抗KLH hu-IgG4抗体。
如图6(a-e)和表9所示，以下13个嵌合抗体均能够有效阻断CD112R/CD112报告基因系统中CD112R和CD112的相互作用，促进T细胞的激活。其中chi 46、chi 54、chi45、chi62、chi 53、chi 55和chi 47这7个嵌合抗体的活性与Ref相比，相对活性在20倍以上。
选择以上7个嵌合抗体的重链和轻链分别开展人源化设计和改造。
表9：抗CD112R嵌合抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性检测数据
嵌合抗体 EC50(ng/ml) 相对活性(％)*
chi 46 7.01 4609.68
chi 54 7.46 4205.23
chi 45 11.94 2705.19
chi 62 12.88 2349.38
chi 53 12.9 2430.23
chi 55 13.12 2306.4
chi 47 14.04 2232.91
chi 70 13.86 1867.97
chi 63 17.41 1487.08
chi 69 18.66 1387.46
chi 61 19 1592.63
chi 71 19.45 1470.95
chi 36 30.57 1056.59
注：“*”表示对照抗体Ref与抗CD112R嵌合抗体的EC50比值。
实施例7、抗体可变区的人源化改造
对于抗体可变区的人源化改造，首先在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)网站中的人类免疫球蛋白基因数据库搜寻与鼠抗体的cDNA序列同源的人类种系IgG基因，再藉由Kabat编号系统或IMGT编号系统定义可变区CDR的氨基酸序列及其精确边界。原则上将与鼠源抗体具有高同源性的人类IGHV选为人源化模板，藉由CDR嫁接实施抗体可变区的人源化。
根据上述获得的鼠源抗体的序列，进行人源化改造。简言之，人源化改造过程涉及以下步骤：A、把鼠源抗体的基因序列与人胚胎系抗体基因序列进行比对，找出同源性高的序列；B、分析考察HLA-DR亲和性，选出亲和力低的人胚胎系框架序列；C、利用计算机模拟技术，应用分子对接分析可变区及其周边的框架氨基酸序列，考察其空间立体结合方式。通过计算静电力，范德华力，亲疏水性和熵值，分析鼠源抗体基因序列中可与人CD112R作用以及维护空间构架的关键氨基酸个体，将其嫁接回已经选择的人胚胎系基因框架，并在此基础上标配出必须保留的框架区氨基酸位点，合成人源化抗体。在此基础上得到了多种人源化抗体可变区，将设计的人源化抗CD112R抗体可变区进行各种组合，获得60种人源化抗CD112R抗体，其编号和氨基酸序列具体见表3。
实施例8、人源化抗CD112R抗体的筛选
8.1抗CD112R人源化抗体与人CD112R蛋白的结合
用固定浓度的hCD112R-ECD-mFC蛋白(1.5μg/mL)包板，使用梯度稀释的人源化抗CD112R抗体(1μg/ml起始，2.5倍梯度稀释，共12个浓度)与其结合，将HRP偶联的羊抗人抗体IgG(Fc特异性)(Sigma，A0170)稀释5000倍作为检测抗体进行检测，然后用0.1mg/ml TMB显色，最后用2M盐酸终止反应，在420nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合EC50。阳性对照为COM701(Compugen的抗CD112R抗体，根据US20180280506A1序列表达纯化得到)和抗KLH hu-IgG4抗体。
如表10所示，60个抗CD112R人源化抗体均能够以高亲和力结合重组人CD112R蛋白。
表10：抗CD112R人源化抗体与人CD112R蛋白的结合(EC50)
注：“*”表示对照抗体COM701与抗CD112R人源化抗体的EC50比值；本文中抗CD112R人源化抗体的编号中Hu和hu含义相同可以互换使用，例如Hu-01、Hu01、hu-01、hu01、hu-1、hu1均表示同一个人源化抗体。
8.2抗CD112人源化抗体阻断CD112R蛋白与CHO-CD112表达细胞结合
将过表达人CD112的细胞CHO CD112与染色缓冲液(PBS+1％FBS)配置的hCD112RmFc蛋白溶液(5μg/ml)，以及不同浓度的抗CD112R人源化抗体或对照抗体(起始浓度为100μg/ml，3倍稀释，10个浓度梯度)在4℃条件下共孵育30min。然后用染色缓冲液洗去未结合的抗体，再将细胞与用染色缓冲液配置的含1％(v/v)的羊抗鼠IgG Fc荧光二抗(JacksonImmunoResearch)在4℃条件下避光孵育30分钟。最后用流式细胞仪(BD CantoⅡ)收集细胞，检测细胞表面结合的荧光抗体。用FlowJo分析原始数据得到MFI值，并用GraphPadPrism软件进行四参数拟合曲线得出IC50值。阳性对照和阴性对照分别是COM701(Compugen的抗CD112R抗体，根据US20180280506A1序列表达纯化得到)和抗KLH hu-IgG4抗体。
如表11所示，以下60个嵌合抗体均能够有效阻断CD112R蛋白与CHO-CD112表达细胞的结合。
表11：抗CD112R人源化抗体阻断CD112R蛋白与CHO-CD112细胞结合的能力(IC50)
注：“*”表示对照抗体COM701与抗CD112R人源化抗体的IC50比值。
8.3抗CD112人源化抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性检测
将靶细胞CHO CD112(稳定表达hCD112和CD3scFv)细胞在96孔白色平底板中按每个孔5×104个细胞数铺板过夜；第二天吸尽细胞孔中的培养基后，用实验缓冲液(RPMI1640(1X)+2％FBS)将不同浓度的抗CD112R人源化抗体或者对照抗体(起始浓度为3μg/ml，3倍稀释，总共10个浓度梯度)加入靶细胞中并在37℃孵育30分钟。然后将效应细胞JurkatCD112R(稳定表达人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入细胞板中，并在37℃培养箱中共孵育6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega)并用多功能酶标仪(TECAN M1000 pro)检测化学发光信号。通过GraphPad prism软件拟合四参数回归曲线，计算EC50值。阳性对照和为COM701(Compugen的抗CD112R抗体，根据US20180280506A1序列表达纯化得到)。
如表12所示，以下60个人源化抗体中除了hu-57外，其他59个抗CD112R人源化抗体均能够有效阻断CD112R/CD112报告基因系统中CD112R和CD112的相互作用，促进T细胞的激活。其中hu-52、hu-51、hu-53、hu-59、hu-54和hu-55这6个人源化抗体的活性与Ref(CGEN)相比，相对活性在3倍以上。而hu-16、hu-39、hu-45、hu-58、hu-56和hu-60这6个人源化抗体的活性与Ref(CGEN)相比，相对活性在2.5～3倍之间。
表12：抗CD112R人源化抗体在CD112R/CD112报告基因检测系统中的活性检测数据
注：“*”表示对照抗体COM701与抗CD112R人源化抗体的EC50比值。8.4抗CD112R人源化抗体与食蟹猴和小鼠CD112R的结合活性
用固定浓度的重组食蟹猴CD112R抗原(购自Acrobiosystems，Cat#PVG-C5259)和小鼠CD112R抗原(购自Acrobiosystems，Cat#PVG-M5257)分别包板，使用梯度稀释的抗CD112R人源化抗体(1μg/ml起始，2.5倍梯度稀释，共12个浓度)与其结合，将HRP偶联的鼠抗人IgG4 Fc(Southern Biotech，9200-05)稀释5000倍作为检测抗体进行检测，然后用0.1mg/ml TMB显色，最后用2M盐酸终止反应，在420nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合EC50。
如图7(a和b)所示，hu16、hu52和hu59能以高亲和力与食蟹猴CD112R结合，EC50分别为2.92ng/ml、3.087ng/ml和2.622ng/ml，但均与小鼠CD112R没有结合活性。
8.5抗CD112R人源化抗体与抗TIGIT抗体在双报告基因系统中联用的活性检测
将靶细胞CHO CD112细胞(稳定表达hCD112和CD3scFv)在96孔白色平底板中(Corning,cat#3917)按每个孔5×104个细胞数铺板过夜后，加入不同浓度(从0.15ng/ml到3μg/ml，3倍稀释)的抗CD112R人源化抗体以及固定浓度(0.3μg/ml)的抗TIGIT抗体，并在37℃孵育30分钟。然后将效应细胞Jurkat PD-1TIGTI CD112R(稳定表达人PD-1、人TIGIT、人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入靶细胞中，并在37℃培养箱中共孵育4-6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega,cat#E6120)并用多功能酶标仪(TECAN M1000 pro)检测化学发光信号。
抗TIGIT抗体(JS006)：来源于PCT申请号PCT/CN2020/101883中抗TIGIT人源化抗体hu20。
阳性对照为COM701(Compugen的抗CD112R抗体，根据US20180280506A1序列表达纯化得到)。
如图8的剂量依赖曲线所示，在双报告基因系统中，抗CD112R抗体hu16、hu52和hu59与抗TIGIT抗体联用后，荧光素酶报告基因NFAT信号显著高于抗CD112R抗体单药组，说明抗CD112R抗体与抗TIGIT抗体联用有显著的协同效应，而且三个人源化抗CD112R抗体与抗TIGIT抗体联用组的药效显著优于COM701联用组。
8.6抗CD112R人源化抗体与抗TIGIT抗体及抗PD-1抗体在三报告基因系统中联用的活性检测
将靶细胞CHO PD-L1 CD112细胞(稳定表达hPD-L1、hCD112和CD3scFv)在96孔白色平底板中(Corning,cat#3917)按每个孔5×104个细胞数铺板过夜后，加入不同浓度(从0.5ng/ml到10μg/ml，3倍稀释)的抗PD-1抗体以及固定浓度(0.3μg/ml)的抗TIGIT抗体和固定浓度(0.3μg/ml)的抗CD112R抗体并在37℃孵育30分钟。然后将效应细胞Jurkat PD-1TIGTI CD112R(稳定表达人PD-1、人TIGIT、人CD112R和luc2P/NFAT-RE)按照每孔1×105个细胞数加入靶细胞中，并在37℃培养箱中共孵育4-6小时；最后在细胞抗体混合体系中加入ONE-Glo荧光素酶检测试剂(Promega,cat#E6120)并用多功能酶标仪(TECAN M1000 pro)检测化学发光信号。
抗TIGIT抗体(JS006)：来源于PCT申请号PCT/CN2020/101883中抗TIGIT人源化抗体hu20；
抗PD-1抗体(JS001)：来源于君实生物的特瑞普利单抗；
阳性对照为COM701(Compugen的抗CD112R抗体，根据US20180280506A1序列表达纯化得到)。
如图9的剂量依赖曲线所示，在三报告基因系统中，抗CD112R抗体hu16、hu52和hu59与抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体联用组，荧光素酶报告基因NFAT信号显著高于抗PD-1抗体单药组和抗PD-1抗体与0.3μg/ml的抗TIGIT抗体联用组，说明抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体及抗CD112R抗体联用有显著的协同效应。
实施例9、抗CD112R抗体、抗TIGIT抗体及其联用在人黑色素瘤A375混合PBMC皮下移植瘤模型上的药效学评价
实验动物：48只NCG小鼠，雌性，6-8周龄，体重约18-22g。购自江苏集萃药康生物科技有限公司。
抗TIGIT抗体(JS006)：来源于PCT申请号PCT/CN2020/101883中抗TIGIT人源化抗体hu20。
抗CD112R抗体为本文所述的人源化抗体hu52。
A375细胞培养在含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养液中。收集对数生长期的A375细胞，HBSS(Hank's平衡盐溶液)重悬至适合浓度用于NCG小鼠皮下肿瘤接种。共培养实验中用的A375细胞用Mitomycin C(丝裂霉素C)处理2h，然后PBS洗三次。取冻存的PBMC，复苏计数，将得到的PBMC加入经Mitomycin C处理的A375细胞中，PBMC与A375共培养5天，培养液为含IL-2和10％FBS的RPMI 1640培养液。PBMC与A375共培养5天后，收取PBMC与新鲜消化下来的A375细胞，PBMC 4×105个，A375细胞4×106个，0.2ml/只(含50％Matrigel(基质胶))，接种于NCG小鼠右侧皮下。接种当天为第0天，根据小鼠体重随机进行分组给药，详细的给药方法、给药剂量和给药途径见表13。
表13.给药方案
注：N：使用动物数量；i.p.：腹腔注射；Q3D：每三天给药一次。给药体积：根据荷瘤鼠体重调整给药体积(0.1mL/10g)。
实验开始后，每周测量2次肿瘤体积和小鼠体重，实验结果见表14和图10。
表14.各组小鼠肿瘤平均体积(Mean±SEM)
注：p<0.05即认为具有显著性差异；T/C(％)为相对肿瘤增殖率，即在某一时间点，给药组相对于对照组的肿瘤体积的百分比值，T和C分别为给药组和对照组在某一特定时间点的肿瘤体积(TV)；肿瘤生长抑制率TGI(％)＝(1-T/C)×100％。
实验结束时(给药第25天后)，与对照组相比，抗CD112R抗体hu52在30mg/kg的剂量水平，显著抑制了肿瘤生长，肿瘤生长抑制率为37.68％(p<0.05)；30mg/kg的抗CD112R抗体hu52联合30mg/kg的JS006表现显著的协同抗肿瘤作用，肿瘤生长抑制率为58.30％(p<0.01)。
序列表
<110> 上海君实生物医药科技股份有限公司
苏州君盟生物医药科技有限公司
<120> 抗CD112R抗体及其用途
<130> 220885 1CNCN
<150> CN 202110178859.1
<151> 2021-02-09
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35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu
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Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro
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Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<220>
<223> VH
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Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Cys Ile Asp Thr Asp Glu Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Arg Asn Ile Val Asn Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Trp Asp Asp Tyr Ala Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asp Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Gly Glu
65 70 75 80
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85 90 95
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<223> VH
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65 70 75 80
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<223> VL
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<223> VH
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<223> VH
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<223> VH
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<223> VH
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<223> VL
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<220>
<223> VL
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<220>
<223> LC
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
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275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
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435 440 445
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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35 40 45
Ser Ala Ile Ser Arg Asp Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
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275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
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Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
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385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 136
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LC
<400> 136
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Val Ser His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys His Gln Ala Tyr Arg Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 137
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC
<400> 137
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ser Asn Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Asp Tyr Tyr Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 138
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC
<400> 138
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Ser Asn Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Asp Tyr Tyr Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 139
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LC
<400> 139
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Val Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Tyr Arg Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 140
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC
<400> 140
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
His Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asn Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Asp Tyr Tyr Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 141
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC
<400> 141
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
His Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asn Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Glu Asp Tyr Tyr Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 142
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH
<400> 142
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile His Pro Lys Tyr Asp Arg Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Ile Asn Asp Phe Asp Glu Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 143
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HCDR1
<400> 143
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 144
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HCDR2
<400> 144
Asp Ile His Pro Lys Tyr Asp Arg Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 145
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HCDR3
<400> 145
Ile Asn Asp Phe Asp Glu Gly Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 146
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HCDR2
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是N或S
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是S或R
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是N或D
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (6)..(6)
<223> Xaa是D或G或V
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (7)..(7)
<223> Xaa是I或D
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是N或S
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (12)..(12)
<223> Xaa是L或P
<400> 146
Ala Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Tyr Tyr Xaa Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 147
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HCDR3
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是Y或F
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是Y或S
<400> 147
His Glu Asp Tyr Xaa Gly Phe Ala Met Asp Xaa
1 5 10
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LCDR1
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (7)..(7)
<223> Xaa是T或S
<400> 148
Lys Ala Ser Gln Ser Val Xaa Asn Asp Val Ala
1 5 10
<210> 149
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LCDR2
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是N或H
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是H或R
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (6)..(6)
<223> Xaa是Y或F
<400> 149
Tyr Val Ser Xaa Xaa Xaa Thr
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LCDR3
<220>
<221> MUTAGEN
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是Q或H
<400> 150
Xaa Gln Ala Tyr Arg Ser Pro Trp Thr
1 5

Claims (24)

1.一种抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体或其抗原结合片段包含：
重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:70、SEQID NO:71和SEQ ID NO:72所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或
重链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和轻链可变区，其包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:52、SEQID NO:53和SEQ ID NO:54所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.如权利要求1所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中：
所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列；或
所述重链可变区包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:110所示的氨基酸序列；或
所述重链可变区包含如SEQ ID NO:109所示的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列；
所述重链可变区包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列；和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:115所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区；或
氨基酸序列如SEQ ID NO:116所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区；或
氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区；或
氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:126、127、131或132所示的轻链可变区。
4.如权利要求3所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:128所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:127所示的轻链可变区；或
氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:131所示的轻链可变区。
5.如权利要求1所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：
氨基酸序列如SEQ ID NO:137或138所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:136所示的轻链；或
氨基酸序列如SEQ ID NO:140或141所示的重链和氨基酸序列如SEQ ID NO:139所示的轻链。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv或sdAb。
7.如权利要求1-5中任一项所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是IgG4亚型。
8.多核苷酸分子，其编码如权利要求1-7中任一项所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段。
9.表达载体，其包含如权利要求8所述的多核苷酸分子。
10.如权利要求9所述的表达载体，其中所述载体为真核表达载体。
11.宿主细胞，其包含如权利要求8所述的多核苷酸分子或如权利要求9或10所述的表达载体。
12.如权利要求11所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
13.如权利要求11所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
14.制备如权利要求1-7中任一项所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合于所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下在权利要求11-13中任一项所述的宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
15.一种单链抗体，包含如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区和重链可变区。
16.一种免疫缀合物，其包含与治疗剂或诊断剂缀合的如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
17.药物组合物，其包含如权利要求1-7中任一项所述的抗CD112R抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的多核苷酸分子、权利要求9或10所述的表达载体或权利要求11-13中任一项所述的宿主细胞，和药学上可接受的载体或赋形剂。
18.药物组合，其包含如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或如权利要求17所述的药物组合物，以及一种或多种另外的治疗剂。
19.如权利要求18所述的药物组合，其中所述治疗剂选自抗PD-1抗体、PD-L1抗体和抗TIGIT抗体中的一种或多种。
20.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述治疗剂为抗TIGIT抗体，或抗TIGIT抗体与PD-1抗体的组合。
21.如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的多核苷酸分子、权利要求9或10所述的表达载体、权利要求11-13中任一项所述的宿主细胞、权利要求17所述的药物组合物或权利要求18所述的药物组合在制备用于治疗和/或预防CD112R介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症为癌症。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述癌症选自黑素瘤、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌和直肠癌。
23.试剂盒，其包括如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的多核苷酸分子、权利要求9或10所述的表达载体、权利要求11-13中任一项所述的宿主细胞、权利要求17所述的药物组合物或权利要求18所述的药物组合。
24.使用如权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体或其抗原结合片段的检测组合物检测CD112R在样品中的存在的方法，包括使所述抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体或其抗原结合片段的检测组合物与所述样品接触的步骤；其中，所述方法用于非治疗和非诊断目的。
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