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CN109311885A - 炔基核苷类似物作为人类鼻病毒的抑制剂 - Google Patents

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CN109311885A CN201780031987.5A CN201780031987A CN109311885A CN 109311885 A CN109311885 A CN 109311885A CN 201780031987 A CN201780031987 A CN 201780031987A CN 109311885 A CN109311885 A CN 109311885A
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Abstract

本发明提供式(I)化合物或其盐；

Description

炔基核苷类似物作为人类鼻病毒的抑制剂
技术领域
本发明涉及抑制人鼻病毒(HRV)复制的化合物，并且可用于治疗感染HRV的对象。
技术背景
人鼻病毒(HRV)是小核糖核酸病毒(Picornavius)家族的肠病毒(Enterovirus)属中的RNA病毒，并且基于序列分析被分为三组，HRV-A，HRV-B和HRV-C。这些病毒引起各种上和下呼吸道感染(RTIs)。通常，上RTI在健康对象中并不特别严重，表现为普通感冒，但它们可导致更严重的病症，例如急性中耳炎和鼻窦炎。由HRV引起的下RTI可能更严重，特别是在易感人群中；例如，它们可导致患有COPD，哮喘或囊性纤维化的对象严重恶化，并且在婴儿、老年人和免疫功能低下的对象中引起严重的、有时是致命的肺炎。
尽管需要抗病毒治疗剂来治疗由HRV引起的疾病，但在美国没有批准的HRV抗病毒药物，Mello等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy，58(3)，1546-55(2014)。已针对HRV测试了具有不同作用模式的各种抗病毒剂，例如衣壳结合抑制剂(普来可那立(pleconaril)，吡罗达韦(pirodavir))，3C蛋白酶抑制剂(rupintrivir)和核苷类似物(MK-0608，一种3D聚合酶抑制剂)和PI4K-IIIβ抑制剂(PIK93)，但均未通过临床试验。Id。
具有抗病毒活性的核苷化合物是本领域熟知的；例如，AZT用于治疗HIV感染。它充当逆转录酶的抑制剂，抑制HIV所需的酶以合成DNA，从而抑制HIV复制。已经显示各种核苷类似物对丙型肝炎病毒(HCV)具有活性-参见，例如，Smith等，J.Med.Chem.52(1)，219-23(2009)；WO2012/040124；WO2011/100131；和US2012/0070415。然而，没有开发出治疗人类鼻病毒感染的方法。
治疗HRV的困难之一是大量不同的毒株：已知超过160种HRV毒株，并且如果用于治疗HRV的治疗剂对大多数常见毒株无效，则有必要在治疗前确定患者具有哪种毒株。这在目前的大多数情况下是不实际的，因此对各种HRV毒株具有广谱活性的抗病毒药物将是特别有价值的。
因此，仍然需要可用于治疗HRV感染的抗病毒剂，特别是易受HRV感染更严重影响的人群中。本发明提供了这些抗病毒化合物和含有这些化合物的药物组合物，以及使用该化合物和组合物治疗患有HRV感染或有HRV感染风险的对象的方法。
发明内容
本发明提供抑制人鼻病毒(HRV)复制的化合物。该化合物减少或防止HRV向未感染细胞的扩散，因此可用于减少HRV感染的持续时间或严重程度。通过降低HRV感染的程度、严重程度或持续时间，这些化合物可防止易感人群中的其他病症恶化，易感人群例如婴儿和老年人或免疫功能低下的对象，以及患有哮喘、COPD或囊性纤维化的对象。该化合物还可用于抑制HRV在分离的细胞或细胞培养物中的复制。
一方面，本发明提供了式(I)的化合物：
如本文进一步所述，以及包含这些化合物的药物组合和组合物和使用所述化合物、组合和组合物治疗某些病毒感染的方法。
如本文提供的数据所证明的，式(I)化合物是HRV复制的抑制剂，并且可用于治疗由HRV引起的病症。此外，如本文数据所证明的，式(I)化合物具有针对广泛范围的HRV血清型的活性，并且在常用的毒理学模型试验中几乎不显示活性。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含混合有至少一种药学上可接受的载体或赋形剂的式(I)化合物，可任选地混合有两种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂。
另一方面，本发明提供治疗由人鼻病毒引起的病症的方法，其包括向需要这种治疗的对象施用有效量的如本文所述的式(I)的化合物或其任何亚属或亚种，或包含所述化合物的药物组合物。对象可以是哺乳动物，并且优选是人。通常，对象已被诊断为患有HRV感染。可通过本文描述的化合物和方法治疗的病症包括由鼻病毒感染引发的普通感冒和并发症或恶化。
本发明包括本文所述的式(I)的化合物和式(I)的亚属，和其所有同位素富集形式(包括氘取代)以及这些化合物的药学上可接受盐。本发明化合物还包含式(I)化合物(或其子式)的多晶型物和式(I)化合物的盐和溶剂化物。
发明详述
除非明确地或通过上下文另有说明，否则以下定义适用。
如本文所用，术语“卤素”(或卤素)是指氟、溴、氯或碘，特别是氟或氯。卤素取代的基团和部分，例如被卤素取代的烷基(卤代烷基)可以是单卤代、多卤代或全卤代的。
除非另行提供，否则本文所用术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，特别是氮或氧。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1至6个碳原子或1至4个碳原子的完全饱和的支链或无支链的烃部分。通常，若非另外指明，烷基具有1-6个碳原子。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基等。取代的烷基是含有一个或多个取代基代替氢的烷基，例如1、2或3个取代基，最多达未取代烷基上的存在的氢的数目。如果没有另外说明，烷基合适的取代基选自：卤素、CN、氧代(＝O)、羟基、C1-4烷氧基，取代的或非取代的C3-6环烷基，苯基，氨基，(C1-4烷基)氨基，二(C1-4烷基)氨基，C1-4烷硫基，C1-4烷基磺酰基、-C(＝O)-C1-4烷基，COOH，-COO(C1-4烷基)，-O(C＝O)-C1-4烷基，-NHC(＝O)C1-4烷基和-NHC(＝O)OC1-4烷基。
如本文所用，术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。通常，烷氧基具有1-6个碳，更通常1-4个碳原子。
“取代的烷氧基”是在烷氧基的烷基部分上含有一个或多个，例如一个、两个或三个取代基的烷氧基。除非另有说明，否则合适的取代基选自上面针对烷基所列的取代基，除了羟基和氨基通常不存在于被取代的“烷基-O'基团的氧所直接连接的碳上。
以下列举的实施方式代表本发明的一些方面。将认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的进一步实施方式。
1.式(I)的化合物：
其中：
R1是H、Me、Et、iPr或环丙基；
R2是H、磷酸、二磷酸、三磷酸、-P(＝X)(OR4)2、-P(＝X)(OR4)(NR5R6)或-P(＝X)(NR5R6)2,且R3是H或-C(O)R；
或R3和R2一起形成-P(＝X)(OR4)-或-P(＝X)(NR5R6)-；
X在每次出现时独立地为O或S；
R4选自H、可任选地被1个或2个选自列表A的基团取代的苯基和可任选地被1个或2个选自卤素、-OR、-OC(O)R、-OC(O)-OR、--NR2、-C(O)R、COOR和-C(O)NR2的基团取代的C1-C4烷基；
每个R5独立地是H、-C(O)R、COOR或可任选地被OH、氨基或COOR取代的C1-C4烷基；
每个R6独立地选自H、可任选地被1个或2个选自列表A的基团取代的苯基、和可任选地被1个或2个选自列表B的基团取代的C1-C4烷基；
每个R独立地是H或可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基、C1-C3烷氧基、-C(O)R7、-OC(O)R7、–C(O)-OR7或–OC(O)-OR7的基团取代的C1-C4烷基；
R7选自H、可任选地被1-3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C4烷基、或可任选地被1个或2个选自列表A的基团取代的苯基；
列表A是卤素、羟基、-NO2、CN、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)-OR8、-N(R8)2、-C(O)R8、COOR8、–C(O)N(R8)2和可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C3烷基；
列表B是卤素、羟基、氧代、CN、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)-OR8、-N(R8)2、-C(O)R8、COOR8和–C(O)N(R8)2；和
R8在每次出现时独立地选自H和可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C4烷基，
且连接在同一氮原子上的两个R8可任选地环化形成3-7元杂环，其可任选地含有另外的N、O或S作为环成员，并且可以被选自氧代、卤素、-OH、氨基、烷基，C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基中的1个或2个基团取代；
或其药学上可接受的盐。
2.实施方式1所述化合物，其中R1是甲基。
3.实施方式1或2所述化合物，其中R2是H。
4.实施方式1或2所述化合物，其中R2是磷酸、二磷酸或三磷酸或其药学上可接受的盐。
5.实施方式1或2所述化合物，其中R2是-P(＝X)(OR4)2其药学上可接受的盐。
6.实施方式5所述的化合物，其中每个R4选自-CH2-O-C(O)-R或和-CH2-O-C(O)-OR,其中每个R独立地是C1-C4烷基或其药学上可接受的盐。
7.实施方式1或2的化合物，其中R3和R2共同形成-P(＝O)(OR4)-或–P(＝O)-(NR5R6)-或其药学上可接受的盐。
8.前述实施方式中任一项所述化合物，其中R3是H。
9.实施方式1所述化合物，其是：
其中R2是氢、磷酸、二磷酸或三磷酸；
或其药学上可接受的盐。
10.实施方式1或2所述化合物，其为式：
或其药学上可接受的盐。11.实施方式1所述化合物，其为式：
或其药学上可接受的盐。
12.权利要求1所述的化合物，其为选自:
或其药学上可接受的盐。
13.一种药物组合物，其包含前述任一实施方式所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
14.一种组合，其包含治疗有效量的如实施方式1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种治疗活性联合试剂。
15.一种治疗HRV感染的方法，包括给予对其有需要的对象治疗有效量的实施方式1-12任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
16.根据实施方式1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。
17.根据实施方式1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗人类鼻病毒感染。
18.实施方式1至12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人类鼻病毒感染的药物中的用途。
式(I)化合物包括该通式核苷的某些衍生物和前药:
前药是容易在体内转化为核苷活性形式的化合物，例如游离核苷、或其磷酸盐或三磷酸酯。合适的前药部分和将它们掺入核苷类似物的方法是本领域已知的，并且本文提供了说明性示例。式(I)化合物的前药的示例包括以下：
不受理论束缚地，据信式(I)化合物在转化为C-5三磷酸后在体内提供其生物活性，例如：
如本文所用，术语“光学异构体”或“立体异构体”是指对于给定的本发明化合物可存在的各种立体异构构型中的任一种，并且包括几何异构体。应该理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心。术语“手性”是指在其镜像伴侣上具有不可重叠性质的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像伴侣上的分子。本发明包括该化合物的对映异构体、非对映异构体和外消旋体。“对映异构体”是一对彼此不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋”混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但其不是彼此的镜像。本发明化合物的绝对立体化学根据化合物名称中的Cahn-lngold-Prelog'R-S'体系指定；在绘制结构时显示单一异构体，通常使用公认的绘图惯例以显示绝对立体化学。除非另有说明，否则作为特定对映体绘制的化合物代表该对映体，并描述了对映体纯度至少为90％，优选至少为95％的化合物。当化合物为纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以由R或S指定。绝对构型未知的拆分化合物可以根据它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)命名为(+)或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-。
根据起始原料和合成过程的选择，这些化合物能以可能的异构体之一的形式或作为其混合物存在，例如作为纯的光学异构体，或作为异构体混合物，例如外消旋体和非对映异构体混合物，取决于不对称碳原子的数目。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术来拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型，除非另有说明。如果化合物含有二取代的环烷基，除非另有说明，环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有的互变异构形式也意在包括在内。
在许多情况下，本发明化合物能由于存在氨基和/或羧基或类似基团而形成酸和/或碱盐。如本文所用，术语“盐”或“盐类”是指本发明化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质并且通常不是生物学上或其他方面不合需要的盐。
药学可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。其他合适盐的列表可见例如“Remington's Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1985)和Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)的“Handbook of Pharmaceutical Salts：PropertieS,Selection，and Use”。
可由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
药学上可接受的碱加成盐可以与无机碱或有机碱形成并且可以具有无机或有机平衡离子。
用于这种碱盐的无机平衡离子包括例如铵盐和来自元素周期表第I至XII列的金属。在某些实施方式中，平衡离子选自钠、钾、铵、具有1至4个C1-C4烷基的烷基铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别合适的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等。合适的有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、胆碱、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由碱性或酸性部分合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应来制备，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计算量的合适的酸反应。这样的反应通常在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常，在可行的情况下，使用非水介质如醚、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇或乙腈是理想的。
本文给出的任何式旨在表示化合物的未标记形式(即，化合物中所有原子以天然同位素丰度存在，且非同位素富集)以及同位素富集或标记形式。同位素富集或标记的化合物具有本文给出的通式描述的结构，不同之处在于该化合物的至少一个原子被原子质量或质量数不同于天然存在的原子质量或原子量分布的原子替代。可以掺入本发明的富集或标记化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中放射性同位素如3H和14C，或其中非放射性同位素如2H和13C的存在显著高于这些同位素的天然丰度的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)包括药物或底物组织分布测定，或用于患者的放射性治疗。具体地，18F或标记的化合物可能对于PET或SPECT研究是特别理想的。式(I)的同位素标记化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于所附实施例和制备中所述的方法使用适当的同位素标记试剂代替先前使用的未标记试剂来制备。
此外，用较重同位素特别是氘(即2H或D)取代可以提供由更大的代谢稳定性产生的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求或改善的治疗指数。可以理解的是，该语境中的氘被认为是式(I)化合物的取代基。这种较重同位素特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明化合物中的取代基被表示为氘，则这种化合物对于指定的各氘原子具有至少3500的氘同位素富集因子(在每个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)，至少4000(60％的氘掺入)，至少4500(67.5％氘掺入)，至少5000(75％氘掺入)，至少5500(82.5％氘掺入)，至少6000(90％氘掺入)，至少6333.3(95％氘掺入)，至少6466.7(97％的氘掺入)，至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。
根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以被同位素取代的那些，例如D2O、d6-丙酮，d6-DMSO以及具有非富集态溶剂的溶剂合物。
本发明的化合物，即含有能够充当氢键供体和/或受体的基团的式(I)化合物可以能够与合适的共晶形成物形成共晶。这些共晶可以由式(I)的化合物通过已知的共晶形成过程制备。此类过程包括研磨、加热、共升华、共熔融或在结晶条件下于溶液中使式(I)化合物与共晶形成物接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成物包括在WO 2004/078163中描述的那些。因此，本发明进一步提供了包含式(I)化合物的共晶。
如本文所用，术语“药学可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员已知(参见例如Remington's Pharmaceutical ScienceS,第18版，Mack PrintingCompany，1990，第1289-1329页)。除了与活性成分不相容的任何常规载体之外，还考虑其在治疗或药物组合物中的用途。
术语“治疗有效量”的本发明化合物是指在对象中引起所需生物学或医学反应的本发明化合物的量，例如，减少或抑制酶或蛋白质活性，或将改善症状，缓解病症，减缓或延迟疾病进展或预防疾病等。在一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指本发明化合物的量,当给予对象该量时，有效地至少部分地减轻、抑制、预防和/或改善由HRV引起的病症、障碍或疾病，或降低或抑制HRV蛋白的活性或减少或抑制复制HRV。
在另一个非限制性实施方式中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞、组织或非细胞生物材料或培养基时，能有效地至少部分地减少或抑制HRV复制的量。
本文所用术语“对象”是指动物。通常动物是哺乳动物。对象还指例如灵长类动物(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方式中，对象是灵长类动物。在具体的实施方式中，对象是人。
如本文所用，术语“抑制”是指减少或抑制给定的病症、症状或紊乱或疾病，或者显著降低生物活动或过程的基线活性。
如本文所用，术语“治疗”、“处治”或“处理”任何疾病或紊乱在一个实施方式中指改善所述疾病或紊乱(即减缓或阻滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括那些患者可能无法识别的身体参数。在另一个实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指在身体上(例如稳定可辨别的症状)、生理上(例如稳定身体参数)或两方面调节疾病或紊乱。在另一种实施方式中，“治疗”、“处治”或“处理”是指预防或延迟疾病或紊乱的发展或进展。
如本文所用，如果对象会从治疗中于生物学、医学或生活质量上受益，则该对象对该治疗“有需要”。
如本文所使用的，在本发明语境(特别是在权利要求语境)中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”以及类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或与语境明显矛盾。
本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指出或另外明显与语境相矛盾。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不是对本发明另行要求保护的范围进行限制。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集的量存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型，除非名称或描述指定一个构型。在某些实施方式中，每个不对称原子具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％或至少99％对映体过量的(R)-或(S)-构型；即，对于光学活性化合物，通常优选使用一种对映体来基本上排除另一对映体，因此，描绘、命名或描述为单一对映体的化合物主要由该对映体组成，伴有10％或更少，优选5％或更少的相反的对映体。如果可能，具有不饱和双键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本发明化合物可以是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。如本文所用，“基本纯”或“基本不含其他异构体”是指相对于优选异构体，产物含有的其他异构体的量按重量计少于10％，典型地少于5％，并且优选少于2％。
异构体混合物可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶，分离成纯的或基本纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。在本领域中已经很好地建立用于这种分离的方法。
如果需要，可通过已知方法将最终产物或中间体的外消旋体拆分成光学对映体，例如通过分离用光学活性酸或碱获得的其非对映异构体盐，并释放光学活性的酸性或碱性化合物。具体地，碱性部分可由此被用来将本发明的化合物拆分成它们的光学对映体，例如通过用光学活性酸例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O，O'-对甲苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸所形成盐的分级结晶。外消旋产物也可以通过手性色谱法拆分，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱(HPLC)。
此外，本发明的化合物，包括它们的盐，也可以以其水合物的形式获得，或者包括用于其结晶的其他溶剂。本发明化合物可以固有地或经设计与药学上可接受的溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明意在包括溶剂合和非溶剂合两种形式。术语“溶剂合物”是指本发明化合物(包括其药学上可接受的盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是药物领域中常用的那些，已知其对接受者无害，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。
本发明的化合物，包括它们的盐、水合物和溶剂合物，可以固有地或经设计形成多晶型物。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体。在一些实施方式中，药物组合物包含两种药学上可接受的载体，或多于两种的药学上可接受的载体药物组合物可被配制成用于特定的给药途径，例如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。在优选的实施方式中，设计药物组合物用于口服递送或吸入。此外，本发明的药物组合物可以以固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或以液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)制成。药物组合物可以进行常规的药物操作，例如灭菌和/或可以包含常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及佐剂例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
在一些实施方式中，配制本发明化合物用于口服递送。通常，这些药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分和一种或多种选自以下这些的赋形剂：
a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和/或
e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
根据本领域已知的方法，片剂可任选地是薄膜包衣或肠溶包衣。
用于口服给药的合适组合物包括为片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。旨在用于口服使用的组合物根据本领域就制备药物组合物已知的任何方法来制备，并且此类组合物可以含有选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种试剂以提供药学上优雅和适口的制品。片剂可含有活性成分，混以适于制造片剂的无毒药学可接受赋形剂。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂未经包衣或通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供较长时期的持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分混以惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶囊，其中活性成分混以水或油性基质，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。
在其他实施方式中，式(I)化合物的药物组合物适于肠胃外给药，例如通过注射或输注。某些这些组合物包括水性等渗溶液或悬浮液。所述组合物可以是灭菌的和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们也可能含有其他有治疗价值的物质。所述组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或含有约1-50％的活性成分。
用于透皮施用的合适组合物包含有效量的本发明化合物与合适的载体。适合透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，其包含背衬构件，含有化合物以及可选有载体的储库，可选地速率控制屏障来在长时间段以受控并预定的速率作宿主皮肤的化合物递送，以及将装置固定到皮肤的手段。
用于局部施用(例如皮肤和眼睛)的合适组合物包括水溶液、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾制剂，例如用于通过气雾剂等递送。这种局部递送系统将特别适用于眼部应用。这些可能含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文所用，局部应用还可涉及吸入或鼻内应用。本发明的化合物可有效治疗经常位于上呼吸道中的感染，因此很适合通过吸入或鼻内方法递送。本发明的化合物和组合物可以方便地以干粉末形式从干粉吸入器或以气溶胶喷雾形式使用或不使用合适的推进剂从加压容器、泵、喷雾、雾化器或喷雾器递送。它们可以作为混合物(例如与乳糖的干混合物)单独给药或作为混合组分颗粒(如与磷脂)给药。本领域已知制备和通过吸入递送化合物的方法。
本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水或含水量低的成分和低水分或低湿度条件来制备。可以制备和储存无水药物组合物使其保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料来包装无水组合物，使得它们可以包含在合适的配方药盒中。合适的包装的实例包括但不限于气密密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条形包装。
本发明进一步提供了药物组合物和剂型，其包含降低作为活性成分的本发明化合物的分解速率的一种或多种试剂。在本文中称为“稳定剂”的这些试剂包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
游离形式或盐形式的式I化合物表现出有价值的药理学性质(例如，它们如下一部分中提供的测试数据所示抑制HRV的复制)，且它们因此适用于本文所述的治疗，并且还用作研究化学品，例如作为分析鼻病毒感染影响的工具化合物。因此，含有它们的化合物和组合物可用于在需要这种治疗的患者中治疗由HRV引起的感染，包括普通感冒，以及用于预防或抑制哮喘、COPD、囊性纤维化和鼻病毒感染常加剧的其他病症的并发症。
本文所述的化合物和组合物和方法特别适用于可能经历HRV感染的严重并发症的患者。例如，患有哮喘、COPD或囊性纤维化的对象在感染HRV时可能有严重并发症的风险。鼻病毒感染是哮喘加重的常见诱因，常常与其他呼吸系统疾病有关，如中耳炎、鼻窦炎、肺炎、COPD和囊性纤维化的恶化。Q.J.Med.94:1-3(2001)。因此，虽然感冒可能对健康的其他人造成不便，并且可能不一定需要药物干预，但患有哮喘、COPD或囊性纤维化等病症的对象，或免疫功能低下或免疫抑制的对象，或特别容易受到肺炎等继发呼吸道感染的对象，特别适合用本文所述的化合物和方法治疗；这种治疗降低了恶化事件的可能性和/或严重性。
因此，作为另一实施方式，本发明提供了式(I)或如本文所述的式(I)范围内任何实施方式的化合物在治疗中的用途。在一个具体实施方式中，该疗法用于由HRV毒株引起的疾病。在另一个实施方式中，本发明化合物用于以下疗法：在患有哮喘、COPD或囊性纤维化等疾病的对象、免疫功能低下或免疫抑制的对象、以及特别容易受到肺炎等严重继发呼吸道感染的对象中治疗鼻病毒感染，或降低这些敏感对象发生HRV感染的风险。
在另一个实施方式中，本发明提供治疗通过抑制HRV复制而治疗的疾病的方法，包括施用治疗有效量的如本文所述的式(I)化合物或式(I)范围内的任何实施方式。在进一步的实施方式中，所述疾病选自上述病症。该方法通常包括将有效量的本文所述的化合物或包含所述化合物的药物组合物给予对此类治疗有需要的对象。该化合物可以通过任何合适的方法例如本文所述的那些方法来施用，并且可以以治疗医师选择的间隔重复施用。在一些实施方式中，本发明的化合物或药物组合物口服施用。在其他实施方式中，本发明的化合物或药物组合物经鼻给药或通过吸入给药。
本发明的另一实施方式提供式(I)化合物或如本文所述这些化合物的任意实施方式在制备药物中的用途。在一个具体实施方式中，该药物用于治疗由HRV引起或加剧的疾病或病症。在具体的实施方式中，所述疾病是鼻病毒感染，特别是在患有诸如哮喘、COPD或囊性纤维化的病症的对象，免疫受损或免疫抑制的对象，或特别易患继发呼吸道感染如肺炎的对象中。
对于约50-70kg的对象，本发明的药物组合物或组合的单位剂量可以为约1-5000mg活性成分(一种或多种)或约1-2000mg或约1-500mg或约1-250mg或约0.5-100mg，或约1-50mg活性成分。较低剂量如1-250mg或1-50mg可用于局部给药方法，包括鼻内或吸入给药，以及用于注射或输注，而较高剂量，例如25-2500mg，或50-5000mg，可用于口服给药。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量还取决于对象的物种、体重、年龄和个体状况以及所治疗的病症或疾病或其严重程度。普通技术的医师、临床医生或兽医可以容易地确定治疗或抑制病症或疾病进展所必需的各活性成分的有效量。
上述剂量特性可以有利地使用哺乳动物例如小鼠、大鼠、狗、猴或其分离的器官、组织和制品进行体外和体内测试来证明。本发明化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式体外施用，并且可以肠内、肠胃外、有利地静脉内体内施用，例如作为悬浮液或水溶液。体外剂量范围可以在约10-3摩尔浓度和10-9摩尔浓度之间。
本发明的化合物可以与一种或多种联合试剂同时施用或在其之前或之后施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的给药途径分开给药，或作为联合试剂在同一药物组合物中一起给药。
在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)化合物和至少一种其他治疗联合试剂的产品，作为用于同时、分开或顺序用于治疗的组合制品。在一个实施方式中，治疗是处理因HRV引起或加重的疾病或病症。作为组合制品提供的产品包括在相同的药物组合物中一起包含式(I)化合物和其它治疗性联合试剂的组合物，或者式(I)化合物和其他治疗性联合试剂(一种或多种)以单独的形式，例如以套件的形式。
在一个实施方式中，本发明提供了包含式(I)化合物和另一治疗联合试剂(一种或多种)的药物组合物。可选地，药物组合物可以包含如上所述的药学可接受的载体。
本文所述的化合物和组合物可以与一种或多种充当免疫调节剂的治疗剂(例如共刺激分子的激活剂，或免疫抑制分子的抑制剂，或疫苗)组合使用或给药。程序性死亡分子1(PD-1)蛋白是扩展的T细胞调节因子CD28/CTLA4家族的抑制成员(Okazaki等人(2002)CurrOpin Immunol 14：391779-82；Bennett等人(2003)J.Immunol.170：711-8)。PD-1在活化的B细胞、T细胞和单核细胞上表达。PD-1是负调节TCR信号的免疫抑制蛋白(Ishida，Y等人(1992)EMBO J.11：3887-3895；Blank，C等人(Epub 2006年12月29日)Immunol.Immunother.56(5)：739-745)，并在慢性感染中上调。PD-1和PD-L1之间的相互作用可以充当免疫检查点，其可以导致例如减少浸润淋巴细胞，减少T细胞受体介导的增殖和/或癌细胞或受感染细胞的免疫逃避(Dong等人(2003)J.Mol.Med.81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.CancerRes.10：5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用可以逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效应是叠加的(Iwai等人(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 99：12293-7；Brown等人(2003))J.Immunol.170：1257-66)。免疫调节可以通过结合免疫抑制蛋白(例如PD-1)或结合调节抑制蛋白的蛋白(例如PD-L1，PD-L2)来实现。
在一个实施方式中，本发明的组合疗法包括免疫调节剂，其是免疫检查点分子的抑制分子的抑制剂或拮抗剂。在另一个实施方式中，免疫调节剂结合天然抑制免疫抑制性检查点分子的蛋白质。当与抗菌化合物组合使用时，这些免疫调节剂可以增强抗微生物反应，并因此相对于单独使用抗菌化合物的治疗增强功效。
术语“免疫检查点”是指CD4和CD8T细胞的细胞表面上的一组分子。这些分子可以有效地用作“制动器”以下调或抑制适应性免疫应答。免疫检查点分子包括但不限于程序性死亡1(PD-1)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40和LAG3，它们直接抑制免疫细胞。可作为用于本发明方法的免疫检查点抑制剂的免疫治疗剂包括但不限于PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR、CD160、2B4和/或TGFRβ的抑制剂。抑制性分子的抑制可以通过DNA、RNA或蛋白质水平的抑制来进行。在一些实施方式中，抑制性核酸(例如，dsRNA、siRNA或shRNA)可用于抑制抑制性分子的表达。在其他实施方式中，抑制信号的抑制剂是多肽，例如与抑制性分子结合的可溶性配体、或抗体或其抗原结合片段。
“与......组合”并不意味着治疗或治疗剂必须同时施用和/或被配制成一起递送，尽管这些递送方法在本文所描述的范围内。免疫调节剂可与一种或多种本发明化合物和可任选的任一种或多种额外疗法或治疗剂一同施用，或在其之前或之后施用。组合中的治疗剂可以任何顺序给药。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表施用。还应理解，该组合中使用的治疗剂可以在单一组合物中一起施用或在不同组合物中分开施用。通常，预期组合使用的各个治疗剂的使用水平不超过它们单独使用的水平。在一些实施方式中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。
在某些实施方式中，本文所述的抗菌化合物与一种或多种为PD-1、PD-L1和/或PD-L2的抑制剂的免疫调节剂组合施用。各个这样的抑制剂可以是抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。此类免疫调节剂的示例是本领域已知的。
在一些实施方式中，免疫调节剂是选自MDX-1106、Merck 3475或CT-011的抗PD-1抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是免疫粘附素(例如，免疫粘附素)，其包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分。
在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-1抑制剂，例如AMP-224。
在一些实施方式中，免疫调节剂是PD-L1抑制剂，例如抗-PD-Ll抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的抗PD-L1结合拮抗剂。MDX-1105，也称为BMS-936559，是WO2007/005874中描述的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70是WO2010/077634中描述的抗PD-L1。
在一些实施方式中，免疫调节剂是纳武单抗(CAS登记号：946414-94-4)。纳武单抗的其他名称包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。纳武单抗是一种全人IgG4单克隆抗体，可特异性阻断PD-1。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD-1的其他人单克隆抗体公开于US8,008,449，EP2161336和WO2006/121168中。
在一些实施方式中，免疫调节剂是抗PD-1抗体帕姆单抗。帕姆单抗(也称为兰利珠单抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA；Merck)是结合PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。帕姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体公开于Hamid，O.等人(2013)NewEngland Journal of Medicine 369(2)：134-44，US 8,354,509，WO2009/114335和WO2013/079174。
在一些实施方式中，免疫调节剂是匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011；CureTech)，一种结合PD1的人源化IgG1k单克隆抗体。匹利珠单抗和其他人源化抗-PD-1单克隆抗体公开于WO2009/101611。
可用作本文公开的方法中使用的免疫调节剂的其它抗PD1抗体包括AMP 514(Amplimmune)和US8,609,089、US2010028330和/或US20120114649中公开的抗PD1抗体。在某些实施方式中，抗-PD-L1抗体是MSB0010718C。MSB0010718C(也称为A09-246-2；MerckSerono)是与PD-L1结合的单克隆抗体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是MDPL3280A(Genentech/Roche)，其是结合PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和其他针对PD-L1的人单克隆抗体公开于美国专利7,943,743和美国公开20120039906中。可用于本发明方法的免疫调节剂的其它抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO2010/077634)、MDX-1105(也称为BMS-936559)和在WO2007/005874中公开的抗PD-L1结合剂。
在一些实施方式中，免疫调节剂是AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，在WO2010/027827和WO2011/066342中公开)，是阻断PD1和B7-H1之间相互作用的PD-L2Fc融合可溶性受体。
在一些实施方式中，免疫调节剂是抗-LAG-3抗体例如BMS-986016。BMS-986016(也称为BMS986016)是与LAG-3结合的单克隆抗体。BMS-986016和其他人源化抗LAG-3抗体公开于US2011/0150892，WO2010/019570和WO2014/008218中。
在某些实施方式中，本文公开的组合疗法包括共刺激分子或抑制分子的调节剂，例如共抑制配体或受体。
在一个实施方式中，共刺激调节剂，例如共刺激分子的激动剂选自对于如下的激动剂(例如激动性抗体或其抗原结合片段或可溶性融合体)：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体。
在另一个实施方式中，本文公开的组合疗法包括免疫调节剂，其是共刺激分子，例如包含CD28、CD27、ICOS和/或GITR的共刺激结构域的具有正信号的激动剂。
示例性GITR激动剂包括：例如GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如，二价抗GITR抗体)，例如以下描述的GITR融合蛋白：美国专利号：6,111,090，欧洲专利号：090505B1，美国专利号：8,586,023，PCT公开号：WO 2010/003118和2011/090754,或描述于以下的抗-GITR抗体：例如美国专利号:7,025,962,欧洲专利号：1947183B1,美国专利号：7,812,135,美国专利号：8,388,967,美国专利号：8,591,886,欧洲专利号：EP1866339,PCT公开号：WO 2011/028683，PCT公开号：WO 2013/039954,PCT公开号：WO2005/007190,PCT公开号：WO2007/133822,PCT公开号：WO2005/055808,PCT公开号：WO99/40196,PCT公开号：WO2001/03720,PCT公开号：WO99/20758,PCT公开号：WO2006/083289,PCT公开号：WO2005/115451，美国专利号：7,618,632和PCT公开号：WO 2011/051726。
在一个实施方式中，使用的免疫调节剂是可溶性配体(例如，CTLA-4-Ig)，或结合PD-L1、PD-L2或CTLA4的抗体或抗体片段。例如，抗PD-1抗体分子可以与抗-CTLA-4抗体例如伊匹单抗组合施用。示例性的抗-CTLA4抗体包括曲美母单抗(Tremelimumab)(可从Pfizer获得的IgG2单克隆抗体，以前称为ticilimumab，CP-675,206)；和伊匹单抗(CTLA-4抗体，也称为MDX-010，CAS编号477202-00-9)。
在一个实施方式中，在用本文所述的本发明化合物治疗后施用抗PD-1抗体分子。
在另一个实施方式中，抗-PD-1或PD-L1抗体分子与抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段组合施用。在另一个实施方式中，抗-PD-1或PD-L1抗体分子与抗-TIM-3抗体或其抗原结合片段组合施用。在另一个实施方式中，抗-PD-1或PD-L1抗体分子与抗-LAG-3抗体和抗-TIM-3抗体或其抗原结合片段组合施用。本文所述的抗体组合可以分开给药，例如作为单独的抗体，或被连接的，例如作为双特异性或三特异性抗体分子。在一个实施方式中，施用包含抗PD-1或PD-L1抗体分子和抗TIM-3或抗LAG-3抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体。在某些实施方式中，本文所述的抗体组合用于治疗癌症，例如本文所述的癌症(例如，实体瘤)。可以在本领域已知的动物模型中测试上述组合的功效。例如，用于测试抗PD-1和抗LAG-3的协同效应的动物模型描述于例如Woo等人,(2012)Cancer Res.72(4):917-27。
可用于组合疗法的示例性免疫调节剂包括但不限于例如阿托单抗(afutuzumab)(可从获得)；培非司亭来那度胺(CC-5013，)；沙利度胺阿替米德(CC4047)；和细胞因子，例如IL-21或IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白细胞介素1，白细胞介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
可与本发明的抗菌化合物组合使用的此类免疫调节剂的示例性剂量包括剂量约1至10mg/kg的抗PD-1抗体分子，例如3mg/kg，和约3mg/kg剂量的抗-CTLA-4抗体，例如伊匹单抗。
本发明的抗菌化合物与免疫调节剂组合使用的方法的实施方式的示例包括：
i.一种治疗对象中细菌感染的方法，包括给对象施用如本文所述的式(I)化合物和免疫调节剂。
ii.实施方式i的方法，其中免疫调节剂是共刺激分子的激活剂或免疫检查点分子的抑制剂。
iii.实施方式i和ii中任一项的方法，其中共刺激分子的激活剂是以下一种或多种的激动剂：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3和CD83配体。
iv.以上实施方式i-iii中任一项的方法，其中免疫检查点分子的抑制剂选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和TGFRβ。
v.实施方式i-iii中任一项的方法，其中免疫检查点分子的抑制剂选自PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4或其任何组合的抑制剂。
vi.实施方式i-v中任一项的方法，其中免疫检查点分子的抑制剂是与免疫检查点分子结合的可溶性配体或抗体或其抗原结合片段。
vii.实施方式i-vi中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段来自IgG1或IgG4(例如，人IgG1或IgG4)。
viii.实施方式i-vii中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段被改变，例如被突变，以增加或减少以下一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数，效应细胞功能或补体功能。
ix.实施方式i-viii中任一项的方法，其中抗体分子是双特异性或多特异性抗体分子，其对PD-1或PD-L1具有第一结合特异性，对TIM-3、LAG-3或PD-L2具有第二结合特异性。
x.实施方式i-ix中任一项的方法，其中免疫调节剂是选自纳武单抗、帕姆单抗或匹利珠单抗的抗PD-1抗体。
xi.实施方式i-x中任一项的方法，其中免疫调节剂是选自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的抗PD-L1抗体。
xii.实施方式i-x中任一项的方法，其中免疫调节剂是抗LAG-3抗体分子。
xiii.实施方式xii的方法，其中抗LAG-3抗体分子是BMS-986016。
xiv.实施方式i-x中任一项的方法，其中免疫调节剂是抗PD-1抗体分子,其通过注射(例如，皮下或静脉内)以约1至30mg/kg，例如约5至25mg/kg、约10至20mg/kg、约1至5mg/kg或约3mg/kg的剂量施用，例如每周一次至每2、3、4周一次。
xv.实施方式xiv的方法，其中抗PD-1抗体分子以每隔一周约10至20mg/kg的剂量施用。
xvi.实施方式xv的方法，其中抗PD-1抗体分子，例如纳武单抗，以约1mg/kg至3mg/kg(例如，约1mg/kg，2mg/kg或3mg/kg)的剂量每两周一次静脉内施用。
xvii.实施方式xv的方法，其中抗PD-1抗体分子，例如纳武单抗，每隔3周以约2mg/kg的剂量静脉内施用。
在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和其他治疗性联合试剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，可以将本发明的化合物和其他治疗剂一起放入联合疗法中：(i)在向医师发布组合产品之前(例如在药盒包含本发明化合物和其他治疗剂的情况下)；(ii)在施用前不久由医师自己(或在医师指导下)；(iii)由患者本身，例如在顺序施用本发明化合物和其他治疗剂的过程中。
因此，本发明提供了式(I)化合物用于治疗由HRV引起或加重的疾病或病症的用途，其中所述药物被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供另一治疗性联合试剂用于治疗疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)的化合物一起施用。用于与本发明化合物组合使用的合适的联合试剂包括3A抑制剂、3C蛋白酶抑制剂和影响HRV的衣壳结合剂，包括恩维肟、普来可那立和芦平曲韦。
本发明还提供了式(I)化合物供用于治疗由HRV引起或加重的疾病或病症的方法中，其中所述式(I)化合物被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗联合试剂供用于治疗由HRV引起或加重的疾病或病症的方法中，其中该另一治疗联合试剂被制备用于与式(I)化合物一起施用。本发明还提供了式(I)化合物供用于治疗由HRV引起或加重的疾病或病症的方法，其中所述式(I)化合物与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗联合试剂供用于治疗由HRV引起或加重的疾病或病症的方法，其中该另一治疗联合试剂与式(I)化合物一起施用。
本发明提供了式(I)化合物在治疗由HRV引起或加重的疾病或病症中的用途，其中患者先前(例如，在24小时内)已用另一种治疗剂治疗。本发明提供了另一治疗剂在治疗由HRV引起或加重的疾病或病症中的用途，其中患者先前(例如，在24小时内)已用式(I)化合物治疗。
在一个实施方式中，其他治疗剂选自3A抑制剂、3C蛋白酶抑制剂和影响HRV的衣壳结合剂，包括恩维肟、普来可那立和芦平曲韦。
实施例
以下实施例旨在说明本发明，而不应被解释为对本发明的范围进行限制。温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发都在减压下进行，通常在约15mmHg和100mmHg(20-133mbar)之间。最终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法例如微量分析和光谱学特征例如MS、IR、NMR来确认。所使用的缩写是本领域中常规的缩写。
用于合成本发明化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购获得或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法(参见，例如Houben-Weyl第4版1952，Methods of Organic SynthesiS,Thieme，第21卷)制得。此外，基于以下实施例，本发明的这些化合物可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。
实施例1.
实施例1通过以下反应顺序制备。
(3R,4R,5R)-4-((2,4-二氯苄基)氧基)-5-(((2,4-二氯苄基)氧基)甲基)-2-甲氧 基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3-醇的合成。
在-78℃下，在30分钟内将0.5M丙-1-炔基溴化镁(144mL，0.072mol)加入到(4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-2-甲氧基二氢呋喃-3(2H)-酮(CAS636581-82-3,11.5g，0.023mol)的THF(150mL)的溶液中。缓慢使反应混合物达到室温并搅拌4小时。反应完成后，将其冷却至0℃并用饱和NH4Cl水溶液淬灭。用EtOAc萃取反应混合物，用水洗涤有机层，然后用盐水溶液洗涤。将有机层用Na2SO4干燥,过滤并真空浓缩.残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到(3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-2-甲氧基-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(6.12g，0.012mmol，收率48％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.83(s,3H),3.40(s,1H),3.49(s,3H),3.70(dd,J＝4.8,2.0Hz,2H),3.86(d,J＝4.4Hz,1H),4.21(q,J＝4.8Hz,1H),4.61(ABq,J＝13.2Hz,2H),4.70(d,J＝13.2Hz,1H),4.88(s,1H),4.89(d,J＝12.0Hz,1H),7.18-7.24(m,2H),7.35(dd,J＝6.8,2.0Hz,2H),7.40(dd,J＝8.0,2.8Hz,2H)。
(3R,4R,5R)-4-((2,4-二氯苄基)氧基)-5-(((2,4-二氯苄基)氧基)甲基)-3-(丙- 1-炔-1-基)四氢呋喃-2,3-二醇的合成。
在0℃下，将三氟乙酸(164.25mL)的水(11.6mL)溶液加入到(3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-2-甲氧基-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(50.0g，0.096mol)中。将反应混合物加热至55℃并保持4小时。减压浓缩混合物，然后与甲苯共蒸馏两次。得到的粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到(3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-2,3-二醇(40.10g,0.079mol，收率82％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.86,1.92(s x 2,3H),3.44,3.90(brs x 2,1H),3.58-3.65(m,1H),3.69-3.74(m,1H),4.10-4.15(m,2H),4.59(ABq,J＝13.2Hz,2H),4.75(d,J＝12.4Hz,1H),4.95(d,J＝12.8Hz,1H),5.10,5.31(s x 2,1H),7.22-7.25(m,2H),7.33-7.40(m,4H)。
(1R,3R,4R,5R)-4-((2,4-二氯苄基)氧基)-3-(((2,4-二氯苄基)氧基)甲基)-5- (丙-1-炔-1-基)-2,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷的合成。
在室温下向(3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-2,3-二醇(1.0g，1.9mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液加入Et3N(0.9mL，0.0059mol)，然后加入DMAP(催化量)。将反应混合物冷却至0℃，然后一批加入p-TsCl(0.615g，2.9mol)。将得到的反应混合物在室温下搅拌3小时。反应完成后，将反应混合物用CH2Cl2稀释，有机层用水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(1R,3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-5-(丙-1-炔基)-2,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷(1.2g)。该粗化合物直接用于下一步。
(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((2,4-二氯-苄基)氧 基)-5-(((2,4-二氯苄基)氧基)甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3-醇的合成。
在0℃下，向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.374g，2.4mol)的CH3CN(10mL)溶液中加入NaH(60％悬浮液，0.176g，4.0mol)，且将混合物在室温下搅拌1小时。将(1R,3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-5-(丙-1-炔基)-2,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷(1.20g，2.4mol)的CH3CN(10mL)溶液加入到反应混合物中。将所得反应混合物加热至50℃并保持16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩并倒入冰冷的水中。用EtOAc萃取混合物，用水和盐水洗涤有机层。将有机层用Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到(2S,3R,4R,5R)-2-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(0.72g，1.12mmol，两步收率57％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.35(s,3H),3.78(dd,J＝11.2,3.6Hz,1H),3.92(dd,J＝11.2,2.4Hz,1H),4.20(dt,J＝8.4,3.6Hz,1H),4.37(d,J＝8.4Hz,1H),4.60(ABq,J＝12.8Hz,2H),4.75(d,J＝13.2Hz,1H),4.94(d,J＝12.8Hz,1H),6.36(s,1H),6.56(s,1H),6.65(d,J＝4.0Hz,1H),7.42-7.48(m,3H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(dd,J＝12.8,1.6Hz,2H),7.87(d,J＝3.2Hz,1H),8.68(s,1H)；LC-MS:m/z640.05(M+H)+。
(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-((2,4-二氯-苄基) 氧基)-5-(((2,4-二氯苄基)氧基)甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3-醇的合成。
向搅拌的(2S,3R,4R,5R)-2-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(18.0g，0.028mol)的溶液在钢弹中的液态NH3(200mL)，将所得反应混合物在60℃下搅拌48小时。反应完成后，减压除去液态NH3。得到的粗产物用中性氧化铝柱色谱纯化，用5％梯度的MeOH的CH2Cl2溶液洗脱，得到(2S,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(12.1g，0.019mol，收率69％)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.40(s,3H),3.75(dd,J＝11.2,4.0Hz,1H),3.87(dd,J＝13.2,2.4Hz,1H),4.11-4.13(m,1H),4.35(d,J＝8.4Hz,1H),4.57(ABq,J＝12.8Hz,2H),4.77(d,J＝13.2Hz,1H),4.96(d,J＝13.2Hz,1H),6.25(s,1H),6.36(s,1H),6.50(d,J＝4.0Hz,1H),6.96(s,2H),7.27(d,J＝3.6Hz,1H),7.39-7.47(m,3H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(dd,J＝5.6,2.0Hz,2H),8.06(s,1H)；LC-MS:m/z 621.13(M+H)+。
(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)-3-(丙- 1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇的合成。
在-78℃向搅拌的(2S,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-((2,4-二氯苄氧基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3-醇(12.0g，19mmol)的CH2Cl2(1200mL)溶液中加入1.0M BCl3在CH2Cl2(193mL,19mmol)的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌2小时，然后在-20℃下搅拌6小时。反应完成后，在-30℃下用MeOH(200mL)的CH2Cl2(300mL)溶液淬灭反应，并将混合物搅拌30分钟。反应混合物用甲醇NH3在-20℃下中和，过滤所得沉淀，并将滤液真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到(3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3,4-二醇(4.0g，13.1mmol，收率60％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.40(s,3H),3.60-3.62(m,1H),3.75-3.82(m,2H),4.23(t,J＝7.6Hz,1H),5.07(br,1H),5.44(d,J＝7.2Hz,1H),5.90(s,1H),6.19(s,1H),6.55(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(s,2H),7.39(d,J＝4.0Hz,1H),8.05(s,1H)；LC-MS:m/z 305.28(M+H)+。
(3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-6a- (丙-1-炔-1-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲醇的合成。
在室温下向搅拌的(3R,4R,5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-3,4-二醇(0.95g，3.1mmol)的丙酮溶液中加入对-TsOH.H2O(0.71g，3.7mmol)，然后加入2,2-二甲氧基丙烷(7.6mL，62.5mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc稀释，并将有机层用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到((3aR,4R,6aR)-6-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-6a-(丙-1-炔基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲醇(0.79g，3.0mmol，收率73％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.45(s,3H),1.56(s,3H),1.58(s,3H),3.64-3.69(m,2H),4.05(dd,J＝8.8,4.4Hz,1H),4.84(d,J＝4.4Hz,1H),5.21(t,J＝6.0Hz,1H),6.40(s,1H),6.59(d,J＝3.2Hz,1H),7.01(s,2H),7.33(d,J＝3.2Hz,1H),8.06(s,1H)；LC-MS:m/z 345.29(M+H)+。
N-(7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-3a-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃 并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺的合成
在室温下向搅拌的((3aR,4R,6aR)-6-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基-6a-(丙-1-炔基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲醇(0.20g，0.58mmol)的吡啶(2.0mL)溶液加入TMSCl(0.23mL，1.8mmol)并将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物冷却至10℃后，加入苯甲酰氯(0.08mL，0.69mmol)并将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc稀释，并将有机层用饱和KHSO4水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.将该粗产物用氨的水溶液处理且混合物在室温下搅拌4小时。反应混合物用EtOAc稀释，并将有机层用水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到N-(7-((3aR,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-3a-(丙-1-炔基)四氢呋喃并[3，4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(0.11g，0.25mmol，收率42％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.46(s,3H),1.57(s,3H),1.59(s,3H),3.68-3.73(m,2H),4.13(dd,J＝9.6,5.2Hz,1H),4.89(d,J＝4.0Hz,1H),5.21(t,J＝6.0Hz,1H),6.59(s,1H),6.70(d,J＝3.6Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),7.69(d,J＝4.0Hz,1H),8.08(d,J＝7.6Hz,2H),8.63(s,1H),11.13(s,1H)；LC-MS:m/z 449.52(M+H)+。
N-(7-((2R,3R,4R,5S)-3,4-二羟基-5-(((2-硝基苯基)硒基)甲基)-3-(丙-1-炔- 1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺的合成
在室温下向搅拌的N-(7-((3aR,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基-3a-(丙-1-炔基)四氢呋喃并[3,4-d][1，3]二氧杂环戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(1.60g，3.5mmol)的THF(25mL)溶液加入1-硝基-2-硒氰基苯(1.62g，7.1mol)，然后加入n-Bu3P(2.80mL，14mol)，且将混合物在室温下搅拌6小时。反应完成后，将反应混合物用EtOAc稀释，并将有机层用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.将所得产物溶于三氟乙酸(18mL)和水(2mL)中，并将混合物在室温下搅拌4小时。反应完成后，减压蒸发溶剂，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到N-(7-((3R,4R,5S)-3,4-二羟基-5-((2-硝基苯基硒基)甲基)-3-(丙-1-炔基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(2.0g，3.38mmol，收率95％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.45(s,3H),3.44-3.55(m,2H),4.13-4.17(m,1H),4.26-4.29(m,1H),5.81(d,J＝6.8Hz,1H),6.10(s,1H),6.37(s,1H),6.70(d,J＝3.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.2Hz,1H),7.53-7.59(m,2H),7.60-7.66(m,3H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),8.08(d,J＝7.6Hz,2H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),8.61(s,1H),11.3(s,1H)；LC-MS:m/z 594.45(M+H)+。
N-(7-((3R,4S)-3,4-二羟基-5-亚甲基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H- 吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺的合成。
向N-(7-((2R,3R,4R,5S)-3,4-二羟基-5-(((2-硝基苯基)硒基)甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(1.31g,2.21mmol)的THF(15mL)的溶液加入30％H2O2(1.4mL,13.9mmol)水溶液.将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。向反应混合物中加入Et3N(1.9mL，13.9mmol)和吡啶(5mL)。将反应混合物在50℃下搅拌35小时。浓缩大量溶剂后，将残余物用EtOAc稀释。将混合物用水和盐水洗涤、Na2SO4干燥、过滤并真空浓缩.通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到N-(7-((3R,4S)-3,4-二羟基-5-亚甲基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(340mg，0.871mmol，收率39％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.75(s,3H),4.25(s,1H),4.42(s,1H),4.92(d,J＝7.6Hz,1H),5.91(d,J＝7.2Hz,1H),6.31(s,1H),6.59(s,1H),6.74(d,J＝4.0Hz,1H),7.54-7.57(m,3H),7.65(t,J＝7.2Hz,1H),8.08(d,J＝7.2Hz,2H),8.65(s,1H),11.16(s,1H)；LC-MS:m/z 391.1(M+H)+。
N-(7-((3R,4S,5R)-5-氟-3,4-二羟基-5-碘甲基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2- 基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺的合成。
在0℃向N-(7-((3R,4S)-3,4-二羟基-5-亚甲基-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(359mg，0.92mmol)的CH3CN(4mL)悬浮液中加入三乙胺三氢氟酸盐(0.15mL，0.92mmol)，然后缓慢加入N-碘代琥珀酰亚胺(259mg,1.15mmol)的CH3CN(4mL)溶液。将反应混合物在0℃下搅拌45分钟并在室温下搅拌40分钟。在0℃下加入另外的三乙胺三氢氟酸盐(0.05mL，0.31mmol)和N-碘代琥珀酰亚胺(100mg，0.39mmol)的CH3CN(1mL)溶液，并将混合物在0℃下搅拌20分钟且在室温下保持30分钟。将反应混合物倒入NaHCO3和Na2S2O3水溶液中。过滤收集所得沉淀物，用EtOAc和水洗涤，干燥，得到所需产物。滤液用EtOAc萃取。将有机提取物用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩.将残余物用EtOAc-环己烷研磨，过滤收集固体，得到额外的产物。浓缩滤液，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到额外的产物。合并所得产物，得到N-(7-((3R,4S,5R)-5-氟-3,4-二羟基-5-(碘甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(434mg，0.809mmol，收率88％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.43(s,3H),3.63(dd,J＝11.6,4.0Hz,1H),3.79(dd,J＝26.8,11.6Hz,1H),4.72(dd,J＝18.4,9.2Hz,1H),6.01(d,J＝8.8Hz,1H),6.25(s,1H),6.61(s,1H),6.73(d,J＝4.0Hz,1H),7.55(t,J＝7.2Hz,1H),7.62-7.67(m,2H),8.07(d,J＝7.2Hz,2H),8.65(s,1H),11.16(s,1H)；LC-MS:m/z 537.1(M+H)+。
(2R,3S,4R)-5-(4-(N-苯甲酰基苯甲酰氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2- 氟-2-(碘甲基)-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯的合成。
在0℃下向N-(7-((3R,4S,5R)-5-氟-3,4-二羟基-5-(碘甲基)-3-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(434mg，0.809mmol)的吡啶(4mL)溶液加入苯甲酰氯(0.94mL，8.09mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌5分钟并在室温下搅拌10小时。用EtOAc稀释后，将混合物用KHSO4水溶液(x2)、NaHCO3饱和水溶液(x2)、水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到(2R,3S,4R)-5-(4-(N-苯甲酰基苯甲酰氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-2-(碘甲基)-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯(725mg，0.854mmol，收率100％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.38(s,3H),3.89-3.94(m,2H),6.62(d,J＝4.0Hz,1H),6.77(d,J＝16.0Hz,1H),7.22(s,1H),7.46-7.64(m,9H),7.70-7.75(m,2H),7.82-7.86(m,4H),7.92-7.95(m,2H),8.00-8.04(t,J＝7.6Hz,4H),8.69(s,1H)；LC-MS:m/z 849.5(M+H)+。
(2S,3S,4R,5R)-5-(4-苯甲酰氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((苯甲酰氧 基)甲基)-2-氟-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯的合成。
向(2R,3S,4R,5R)-5-(4-(N-苯甲酰基苯甲酰氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-2-(碘甲基)-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基苯甲酸酯(725mg，0.854mmol)的DMSO(8mL)溶液将加入苯甲酸钠(1.23g，8.54mmol)和15-冠-5(1.7mL，8.54mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌22小时。加入额外的苯甲酸钠(0.6g，4.16mmol)和15-冠-5(0.7mL，3.53mmol)。在100℃下搅拌22小时后，加入额外的苯甲酸钠(0.6g，4.16mmol)和15-冠-5(0.7mL，3.53mmol)。在100℃下搅拌7小时后，将混合物用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液用NaHCO3饱和水溶液(x2)和水洗涤，且用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到(2S,3S,4R)-5-(4-苯甲酰氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-2-氟-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯(541mg，0.498mmol，产率58％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.46(s,3H),4.90(t,J＝11.6Hz,1H),5.02(dd,J＝18.0,12.0Hz,1H),5.75(s,1H),6.79(d,J＝3.2Hz,1H),6.97(d,J＝15.2Hz,1H),7.32-7.37(m,3H),7.52-7.78(m,10H),7.89(d,J＝7.6Hz,2H),8.00(d,J＝8.0Hz,2H),8.05(d,J＝7.2Hz,2H),8.10(d,J＝7.2Hz,2H),8.68(s,1H),11.25(s,1H)；LC-MS:m/z 739.4(M+H)+。
(2S,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-2-(羟甲基)-4- (丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇的合成(实施例1)。
(2S,3S,4R,5R)-5-(4-苯甲酰氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-2-氟-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯(541mg,0.732mmol)溶于33％的甲胺乙醇溶液。将所得混合物在室温下搅拌16小时后，将大部分溶剂真空浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到(2S,3S,4R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-2-(羟甲基)-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇(183mg，0.568mmol，收率78％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ1.39(s,3H),3.56-3.62(m,2H),4.51(dd,J＝19.3,6.8Hz,1H),5.62(t,J＝5.6Hz,1H),5.69(d,J＝7.9Hz,1H),6.10(s,1H),6.52(s,1H),6.60(d,J＝3.6Hz,1H),7.02(s,2H),7.26(d,J＝3.8Hz,1H),8.09(s,1H)；19F NMR(DMSO-d6,376MHz)δ-119.96；LC-MS:m/z 323.3(M+H)+。
实施例2.
((2S,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-3,4-二羟基- 4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-2-基)甲基双(((1-异丙氧基羰基)氧基)甲基)磷酸酯(实施例 2)。
在闪烁瓶中，将起始膦酸(200mg，0.61mmol，((羟基磷酰基)双(氧))双(亚甲基)二异丙基二碳酸酯)和实施例1的核苷(64mg，0.20mmol，(2S,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氟-2-(羟甲基)-4-(丙-1-炔-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇)悬浮在吡啶(2mL)中。加入1-甲基咪唑(247mg，3.0mmol)，将混合物超声处理30秒。然后通过旋转蒸发20分钟将混合物蒸发至残余物。然后将残余物重悬于CH3CN(2mL)中并超声处理30秒。在反应物中放入搅拌子并开始搅拌。然后加入为固体的BOP-Cl(280mg，1.1mmol，双(2-氧代恶唑烷-3-基)次膦酰氯)并将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过LC/MS监测反应。当认为反应完成时，加入水(1mL)以淬灭。将反应搅拌10分钟，然后冷冻并冻干至干。通过制备型HPLC纯化残余物，得到所需产物(60mg，0.076mmol，收率38％)。1H NMR(CD3OD,400MHz)δ1.28(d,J＝12Hz,12H),1.47(s,3H),4.34-4.42(m,2H),4.66(d,J＝16Hz,1H),4.86-4.93(m,2H),5.62-5.69(m,4H),6.63(s,1H),6.95(d,J＝4Hz,1H),7.47(d,J＝4Hz,1H),8.31(s,1H)；31PNMR(CD3OD,162MHz)δ-5.22；LC-MS:m/z 635.2(M+H)+。
实施例3.
在室温下，向P(＝O)(OMe)3(0.3mL)中的实施例1的化合物(9mg，0.028mmol)中加入POCl3(0.031mL，0.335mmol)并将混合物搅拌2分钟。加入Proton(1,8-双(二甲基氨基)萘：20.95mg，0.098mmol)并将反应物在室温下搅拌30分钟(第一批)或2小时(第二批)，然后通过加入在1ml DMF中的焦磷酸(250mg，0.456mmol)和Bu3N(0.106mL，0.447mmol)的混合物淬灭。搅拌反应15分钟。在三磷酸转化完成后，将粗反应混合物加入到0.2N三乙基碳酸氢铵(TEAB)缓冲液(20ml)中并搅拌10分钟，然后冻干成半固体并如下所述进行纯化。以相同的规模重复该反应，并将两批合并用于纯化。
纯化:通过PREP离子交换色谱法，使用三磷酸纯化梯度(PREP离子交换色谱，流速8ml/分钟)纯化合并的粗三磷酸：从100％水开始，梯度为0％至80％TEA碳酸氢盐缓冲液(0.5N)/水30分钟，然后80％TEA碳酸氢盐缓冲液(0.5N)/水5分钟，然后100％水5分钟。将所需的三磷酸在27分钟洗脱为宽峰(3次注射)。将所需的产物级分冻干，然后溶解在水中，通过C18柱(PREP C18反相色谱，流速20ml/分钟)进行第二次纯化，使用从100％TEA碳酸氢盐缓冲液(0.2N)开始的梯度，然后乙腈/TEA碳酸氢盐缓冲液(0.2N)的梯度在20分钟内从0％至30％。所需产物在约11分钟洗脱。由于从第二次C18纯化获得的产物含有似乎是二磷酸和过磷酸化的杂质，通过第三次PREP离子交换色谱法再次纯化，然后如上所述通过C18柱进行第四次纯化，得到001(实施例3：8.7mg，9.85μmol，15.79％收率)。
1H NMR(400Mhz,氧化氘)1H NMR(400MHz,氧化氘)δ8.14(s,1H),7.42(d,J＝3.8Hz,1H),6.68(d,J＝3.8Hz,1H),6.60(s,1H),4.75(d,J＝1.4Hz,1H),4.30(ddd,J＝11.4,6.2,2.7Hz,1H),4.24-4.14(m,1H),3.13(q,J＝7.3Hz,18H),1.29(s,3H),1.21(t,J＝7.3Hz,29H)。31P:-9.42,-9.55,-12.07,-12.19,-22.78,-22.90,-23.02
基于1H NMR,盐中核苷三磷酸与Et3N的比率为1/3.0。该式的重量为865.801。
生物学试验和数据
根据本发明的化合物的活性可通过本领域已知的方法评估；以下方法用于生成下表中的数据。
HRV细胞病变效应(CPE)测。将化合物在DMSO中从5mM开始以半对数步骤连续稀释。在每次稀释，将0.5μL转移至测定板。将H1-HeLa细胞以5000个细胞/孔加入到测定用化合物板于补充有0.1％BSA(Gibco，15260)，1×青霉素/链霉素溶液(CellGro/Mediatech，ManassaS,VA；30-002-CI)和1×非必需氨基酸(CellGro；25-025-CI)的45μL DMEM中，一式三份384孔板，并在33℃下培养6小时。对照孔包括单独的DMSO(100％抑制)和DMSO加病毒(0％抑制)。在33℃温育6小时后，以72小时内有效杀死99％的细胞的MOI加入5μL人鼻病毒原种。然后将平板在33℃温育72小时。根据制造商的方案和POLARstar Omega发光计(BMGLabtech)，使用CellTiter-发光细胞活力测定法(Promega，G7573)测定细胞活力。
HRV复制子测定。该测定基于先前描述的C组复制子(Mello等，AntimicrobialAgents and Chemotherapy，2014)且修改为P1区用编码纳米荧光素酶(PromegaCorporation，Madiso，WI)的cDNA替换。将化合物在DMSO中从5mM开始以半对数步骤连续稀释。在每次稀释，将0.5μL转移至测定板。用胰蛋白酶处理H1-HeLa细胞，用冰冷的Gibco洗涤两次，31985)，以1.5x 107个细胞/ml重悬于OptiMem中，并储存在冰上。总共6x 106个细胞用25ng体外转录的RNA电穿孔(270V，950μF，∞抗性)，并使其在冰上静置10分钟。然后将电穿孔的细胞用补充有0.1％BSA(Gibco，15260)，1×青霉素/链霉素溶液(CellGro/Mediatech，ManassaS,VA；30-002-CI)的DMEM稀释至终浓度4x 105个细胞/ml。然后将50μl细胞加入到化合物中，然后在33℃下孵育72小时。然后根据制造商的方案和POLARstar Omega发光计(BMG Labtech)使用检测试剂盒分析(Promega，N1150)在48小时后测量荧光素酶信号。
MT4和PC3细胞毒性测定。将化合物在DMSO中从10mM开始以半对数步骤连续稀释。将0.5μL连续稀释的化合物转移至测定板(Greiner产品号781080)。将细胞加入到测定用化合物板中50μL补充有10％FBS(NCS批号OS-161071)，1×青霉素/链霉素溶液(CellGro/Mediatech，ManassaS,VA；30-002-CI)的RPMI 1640培养基中，并在37℃下孵育3或5天。对照孔仅包含DMSO(100％抑制)。根据制造商的方案和POLARstar Omega发光计(BMG Labtech)，使用CellTiter-发光细胞活力测定法(Promega，G7573)测定细胞活力。
人类DNA聚合酶γ测定。
人类DNA聚合酶γ单核苷酸掺入测定法改编自Clark等人。(Discovery of beta-D-20-deoxy-20-a-fluoro-40-a-cyano-5-aza-7,9-dideaza adenosine as a potentnucleoside inhibitor of respiratory syncytial virus with excellentselectivity over mitochondrial RNA and DNA polymerases.BMCL,25:2484-2487.)。简而言之，将200nM重组人DNA聚合酶γ(大亚基；POLG)和400nM重组人DNA聚合酶辅助亚基(POLG2)在冰上预温育2分钟。通过在室温(RT)下在测定缓冲液(50mM Tris/HCl，pH8,10mMMgCl2,50mM NaCl，1mM DTT)中加入150nM退火的DNA引物/DNA模板双链体形成与RNA的延伸复合物1.5分钟，然后与100μM核苷三磷酸底物或抑制剂快速混合。从大肠杆菌中纯化重组POLG(aa 30-1239)和POLG2(aa 26-485)蛋白，并分别储存在5mM Tris pH7.5,250mM NaCl，10％甘油，0.005％NP40和50mM Tris pH7.5,150mM NaCl，1mM TCEP，0.005％NP40,10％甘油中。添加到任何反应中的POLRMT的体积总是小于或等于总体积的十分之一。引物-模板由5'-FAM标记的18-聚DNA寡核苷酸引物(5'-TTTTGTCTTTGTACTAGGAGGC-3')与适当的34-聚DNA模板退火组成，允许单独添加A、C、G或U脱氧-或核糖核苷酸(Clark等，2012)。使反应在室温下进行1分钟并通过加入EDTA(50mM)淬灭。通过变性PAGE从底物中分离产物。在加载至含有1×TBE(89mM Tris碱，89mM硼酸，2mM EDTA)和7M尿素的变性20％聚丙烯酰胺凝胶前，将等体积的上样缓冲液(95％甲酰胺，18mM EDTA，和0.025％SDS,二甲苯蓝，溴酚蓝；Ambion，USA)加入到淬灭的反应混合物中并加热至65℃保持5分钟。电泳在1X TBE缓冲液中在600V下进行。在荧光检测模式下用Typhoon成像仪显现凝胶，并用Image QuantTM TL软件(GE Healthcare，Piscataway，NJ)定量。DNA寡核苷酸从Sigma Aldrich，USA订购。
人线粒体RNA聚合酶测定。人线粒体RNA聚合酶(POLRMT)单核苷酸掺入测定法改编自Arnold等。(Sensitivity of mitochondrial transcription and resistance of RNApolymerase II dependent nuclear transcription to antiviralribonucleosides.PloS Pathogen 8(11):e1003030.)。简而言之，通过将500nM POLRMT与250nM退火的DNA模板/RNA引物双链体在测定缓冲液(25mM Tris-HCl，pH8,50mM KCl，10mMMgCl 2,1mM二硫苏糖醇，0.2U/μLRNA酶抑制剂)中在室温(RT)下孵育1.5分钟来形成延伸复合物,然后与500μM核苷三磷酸底物或抑制剂快速混合。将纯化的全长POLRMT(Enzymax,美国)储存在10mM Tris-HCl(pH 8.0)，1mM DTT，100mM NaCl和20％甘油中。添加到任何反应中的POLRMT的体积总是小于或等于总体积的十分之一。引物-模板由5'-FAM标记的8-聚RNA寡核苷酸引物(5'-UUUUGCCGCGCC-3')与适当的18-聚DNA模板退火组成，允许单独添加A，C，G或U脱氧-或核糖核苷酸(Clark等，2012)。使反应在室温下进行5分钟并通过加入EDTA(50mM)淬灭。通过变性PAGE从底物中分离产物。在加载至含有1×TBE(89mM Tris碱，89mM硼酸，2mM EDTA)和7M尿素的变性23％聚丙烯酰胺凝胶前，将等体积的上样缓冲液(95％甲酰胺，18mM EDTA，和0.025％SDS，二甲苯蓝，溴酚蓝；Ambion，USA)加入到淬灭的反应混合物中并加热至65℃保持5分钟。电泳在1X TBE缓冲液中在600V下进行。在荧光检测模式下用Typhoon成像仪显现凝胶，并用Image QuantTM TL软件(GE Healthcare，Piscataway，NJ)定量。DNA和RNA寡核苷酸从Sigma Aldrich，USA订购。
用于HTS的DENV聚合酶从头(de Novo)起始和延伸测定：
1)基于荧光的碱性磷酸酶偶联聚合酶从头测定(从头FAPA)：简而言之，在20μL终体积中依次如下进行测定：将溶解在90％DMSO中和10％水的0.25uL化合物冲压到384孔高底中度结合黑色板中，对照孔仅接受DMSO/水混合物。将在酶测定缓冲液中的5μL 200nMDENV4RdRp蛋白质储备溶液分配至测定板，并在25℃下在湿度受控的培养箱中预孵育15分钟。为了启动酶反应，将5μL的200nM DENV4IVT RNA底物和40μM GTP、ATP、UTP和10μM Atto-CTP底物加入所有孔中，此时板在25℃的湿度控制培养箱中温育2小时。在酶测定缓冲液中类似地制备RNA和NTP底物混合物。最终反应条件包含100nM酶、100nM RNA、20μM NTP和5μMATTO-CTP。中性对照(高活性对照)由100nM酶、100nM RNA、20μM NTP和5μM ATTO-CTP组成。活性对照(低活性基线对照)由1X测定缓冲液、100nM RNA、20μM NTP和5μM ATTO-CTP组成。为了终止反应，将含有20nM CIP(小牛肠磷酸酶)的10μL终止溶液分配到所有孔中，并将板在25℃下温育1小时。用缓冲液(2.4M DEA pH 10,0.057mM MgCl2和0.85mMNaN3)和额外20mM MgCl2和160mM NaCl制备用于稀释CIP的终止溶液，并在4℃下储存。使用M6读数器进行荧光信号读出，使用420nm的激发波长和560nm的发射波长，以及255闪烁的增益：50(a gain of 255Flashes:50)。
HepG2和K562中的细胞毒性(CC50测定)
将白色TC级Greiner 384孔测定板用在90％DMSO/10％水中的0.5ul化合物冲压。用胰蛋白酶处理HepG2细胞并收集到50ml falcon管中。将K562悬浮细胞收集在50mlfalcon管中。将含有细胞的两个管在台式离心机中以1200rpm旋转5分钟。弃去上清液，将细胞沉淀重悬于新鲜培养基(HepG2：DMEM：F12混合物+10％FBS+1％青霉素/链霉素，K562：IMDM+10％FBS+1％青霉素-链霉素)中。使用血细胞计数器计数细胞，并将细胞稀释成工作悬浮液，HepG2为50,000细胞/ml，K562为20,000细胞/ml。将50ul细胞悬浮液加入到384-测定板的每个孔中。将测定板在37℃，5％CO2,90％湿度培养箱中温育72小时。然后用25ulPromega Cell-Titer Glo试剂处理测定板，并在室温下温育10分钟。使用发光设置和3300的增益在PolarStar-Omega上读取板。
使用上述测定法，本发明化合物显示出抗病毒功效，如下表所示。如下4'-叠氮基-胞苷用作对照：
实施例2化合物的活性和细胞毒性。
对HRV毒株和其他病毒的活性 μM
HRV16 0.6
HRV14 0.7
HRV29 0.7
HRV10 0.8
HRV86 0.4
HRV39 0.6
HRV15(c-型) 0.7
基孔肯雅病毒 1.0
登革病毒(PBMCs) 2.05
细胞毒性测定结果 μM
MT4(N＝2) >100
K562(N＝3) >100
HepG2(N＝7+) >100
PC3 >200
实施例1的衍生物活性
上述数据表明，式(I)的核苷提供针对多种HRV血清型以及其他病毒的有效活性，同时显示出用常用的细胞毒性模型(MT4，PC-3)测量的对哺乳动物细胞毒性的低可能性低，用人线粒体聚合酶掺入测定(DNA聚合酶γ和RNA聚合酶)测量的对线粒体毒性的低可能性，以及基于Cox/SDH比率测定的低细胞培养线粒体毒性。

Claims (18)

1.式(I)的化合物：
其中：
R1是H、Me、Et、iPr或环丙基；
R2是H、磷酸、二磷酸、三磷酸、-P(＝X)(OR4)2、-P(＝X)(OR4)(NR5R6)或–P(＝X)(NR5R6)2,且R3是H或-C(O)R；
或R3和R2一起形成-P(＝X)(OR4)-或-P(＝X)(NR5R6)-；
X在每次出现时独立地为O或S；
R4选自H、可任选地被1个或2个选自列表A的基团取代的苯基和可任选地被1个或2个选自卤素、-OR、-OC(O)R、-OC(O)-OR、--NR2、-C(O)R、COOR和-C(O)NR2的基团取代的C1-C4烷基；
每个R5独立地是H，-C(O)R,COOR或可任选地被OH、氨基或COOR取代的C1-C4烷基；
每个R6独立地选自H、可任选地被1个或2个选自列表A的基团取代的苯基、和可任选地被1个或2个选自列表B的基团取代的C1-C4烷基；
每个R独立地是H或可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基、C1-C3烷氧基、-C(O)R7、-OC(O)R7、–C(O)-OR7或–OC(O)-OR7的基团取代的C1-C4烷基；
R7选自H、可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C4烷基、或可任选地被一个或两个选自列表A的基团取代的苯基；
列表A是卤素、羟基、-NO2、CN、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)-OR8、-N(R8)2、-C(O)R8、COOR8、–C(O)N(R8)2和可任选地被1至3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C3烷基；
列表B是卤素、羟基、氧代、CN、-OR8、-OC(O)R8、-OC(O)-OR8、-N(R8)2、-C(O)R8、COOR8和-C(O)N(R8)2；和
R8在每次出现时独立地选自H和可任选地被1和3个选自卤素、羟基、CN、氨基和C1-C3烷氧基的基团取代的C1-C4烷基，
且连接在同一氮原子上的两个R8可任选地环化形成3-7元杂环，其可任选地含有另外的N、O或S作为环成员，并且可以被选自氧代、卤素、-OH、氨基、C1-C3烷基，C1-C3烷氧基和C1-C3卤代烷基中的1个或2个基团取代；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1所述的化合物，其中R1是甲基。
3.权利要求1或2所述化合物，其中R2是H。
4.权利要求1或2所述化合物，其中R2是磷酸、二磷酸或三磷酸或其药学上可接受的盐。
5.权利要求1或2所述化合物，其中R2是-P(＝X)(OR4)2或其药学上可接受的盐。
6.权利要求5所述的化合物，其中每个R4选自-CH2-O-C(O)-R或和-CH2-O-C(O)-OR,其中每个R独立地是C1-C4烷基或其药学上可接受的盐。
7.权利要求1或2所述的化合物，其中R3和R2共同形成-P(＝O)(OR4)-或-P(＝O)-(NR5R6)-或其药学上可接受的盐。
8.前述任一项权利要求所述的化合物，其中R3是H。
9.权利要求1所述化合物，其是：
其中R2是氢、磷酸、二磷酸或三磷酸；
或其药学上可接受的盐。
10.权利要求1或2所述的化合物，其为式：
或其药学上可接受的盐。
11.权利要求1所述的化合物，其为式:
或其药学上可接受的盐。
12.权利要求1所述的化合物，其选自
或其药学上可接受的盐。
13.一种药物组合物，其包含如前述权利要求中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
14.一种组合，其包含治疗有效量的如前述权利要求1-12中任一项的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种治疗活性联合试剂。
15.一种治疗HRV感染或基孔肯雅感染的方法，包括给予对其有需要的对象治疗有效量的权利要求1-12任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
16.如权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。
17.如权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗人类鼻病毒感染。
18.权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人类鼻病毒感染的药物中的用途。
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