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CN105748465A - 用于治疗癌症的多激酶抑制剂 - Google Patents

用于治疗癌症的多激酶抑制剂 Download PDF

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CN105748465A CN201610165747.1A CN201610165747A CN105748465A CN 105748465 A CN105748465 A CN 105748465A CN 201610165747 A CN201610165747 A CN 201610165747A CN 105748465 A CN105748465 A CN 105748465A
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布鲁斯·德科斯塔
杜红
江逸民
李祥逸
野本见
野本见一
约翰(元)·王
张慧明
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Abstract

本发明提供用于治疗癌症的多激酶抑制剂。本发明提供治疗特定癌症的化合物、医药组合物和方法。所述组合物一般可包含式(I)化合物，其中R1?R3如本文中所定义，或其医药学上可接受的盐或酯；和医药学上可接受的载剂。

Description

用于治疗癌症的多激酶抑制剂
本申请是申请日为2008年7月25日、申请号为200880023760.7、发明名称为“用于治疗癌症的多激酶抑制剂”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本申请涉及用于治疗癌症的多激酶抑制剂。
相关申请案
本申请案主张2008年2月15日申请的美国临时申请案第61/029,196号；2007年7月25日申请的美国临时申请案第60/951,906号；和2007年7月25日申请的美国临时申请案第60/951,901号的优先权。所述各申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。
背景技术
玉米赤霉烯酮类大环内酯F152(LL-Z1640-2)最初是从摇瓶发酵分离出来，其粗提取物会抑制纤毛原生动物梨形四膜虫(Tetrahymena pyriformis)(参看McGahren等人.J.Org.Chem.1978,43,2339)。
尽管使用所述天然产物进行的最初生物学研究未能获得任何特别有益的活性，但保证了制备其它衍生物和/或另外利用其生物活性的可能性。举例来说，F152和其某些异构体抑制磷酸化酶Map/Erk激酶(MEK)，且可能适于治疗某些MEK相关癌症和特征为形成新生血管的其它疾病(例如参看GB 323 845)。F152的衍生物还显示具有作为酪氨酸激酶抑制剂的活性，其适于例如治疗癌症和发炎性病症(例如参看EP 606 044；WO 00/38674；JP 8-40893；WO 96/13259；5,728,726；5,674,892；5,795,910)。然而，F152和其衍生物通常通过发酵技术和对天然产物的改性获得，且因此受可制备且评估生物活性的衍生物数目和类型限制。此外，尽管已证实F152和其某些衍生物具有有效活体内活性，但这些化合物可能在生物学上不稳定(例如，其可能在小鼠和人类血浆中容易发生烯酮异构作用)，从而限制这些化合物开发成治疗人类或其它动物的治疗剂。
最近，已显示F152类似物为NF-κB活化和MEK1的抑制剂(例如参看美国申请案第10/507,067号和美国申请公开案第US 2004/0224936号)。还报导所述化合物会抑制AP-1活化和一些蛋白激酶(例如MEKK、PDGFr、VEGFr)。基于这些作用机制，提出所述化合物会抑制多种促炎性和/或免疫性细胞因子的产生，诸如TNFα、IL-1、IL-6、IL-8、IL-2等，且还在NF-κB路径调节下抑制多种促炎性分子的产生，诸如由COX-2、ICAM-1和MMP-1和3等产生的前列腺素。而且，还报导所述化合物能够在AP-1路径调节下通过抑制MEK1来抑制细胞增殖。此外，还报导所述化合物能够抑制血管新生，此可能是基于对VEGFr激酶的抑制活性和对PDGFr激酶的弱抑制活性。
发明内容
本发明至少部分基于以下发现：式(I)或(II)化合物具有独特多激酶抑制特征，此可能适于对抗基于化合物的独特多激酶抑制特征所选的特定癌症。一般来说，化学治疗药物通常缺乏特异性且具有与此有关的不良副作用。因此，本发明的目标是提供用于靶向癌症疗法的癌症特异性药剂和治疗和/或预防癌症的靶向方法，其可避免通常与化学治疗剂有关的不良副作用。
因此，在一些方面中，本发明提供治疗有需要个体中的SrcTK/MEK相关癌症的方法。所述方法一般包括向个体投与包含有效治疗SrcTK/MEK相关癌症量的SrcTK/MEK抑制剂的组合物。在一些方面中，本发明还涉及SrcTK/MEK抑制剂用于制造用以治疗SrcTK/MEK相关癌症的药物的用途。
在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约75％。Src酪氨酸激酶家族的成员可以是Src家族的任何成员，包括cSrc、Fyn、Lyn、Lck、Yes、Fgr、Hck和Blk。在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约50％。在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约50％。
在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂是式(I)化合物：
其中：
R1是H
R2是选自由H和三氟甲基羰基组成的群组的部分；或R1和R2与核心结构一起形成式(a)杂环二基部分：
R3是选自由-ORa和-NRbRc组成的群组的部分；
Ra是任选地经咪唑基取代的C1-4烷基；
Rb是选自由C1-4烷基和C1-4烷氧基组成的群组的部分，其中Rb经0、1或2个各自独立地选自由以下组成的群组的基团取代：-OCH3、-C(O)OH、-C(O)NR'R"、-NH(C1-3烷基)、其中n为2-4的-NH(CH2CH2O)nCH3、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基、N-甲基哌啶基、N-吗啉基、咪唑基、吡咯烷基、-OPO3H2和羟基；其中所述-NH(C1-3烷基)经0、1或2个羟基部分取代，且其中R'和R"各自独立地选自-H或-CH3；且
Rc是H，或Rb和Rc与其所连接的氮一起形成选自由式(b)和式(c)组成的群组的杂环基部分：
或其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，SrcTK/MEK相关癌症为慢性骨髓白血病或结肠直肠癌。在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂还抑制Bcr-Abl的活性，且SrcTK/MEK相关癌症是白血病。在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂还抑制TrkB的活性。在一些实施例中，SrcTK/MEK抑制剂还抑制TrkB的活性至少达本文另外描述的程度，例如在约0.1μM浓度下抑制至少约75％。
在一些方面中，本发明针对治疗有需要个体中的TrkB/MEK相关癌症的方法。所述方法一般包括向个体投与包含有效治疗TrkB/MEK相关癌症量的TrkB/MEK抑制剂的组合物。在一些方面中，本发明还涉及TrkB/MEK抑制剂用于制造用以治疗TrkB/MEK相关癌症的药物的用途。
在一些实施例中，TrkB/MEK抑制剂在约0.1μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约75％。在一些实施例中，TrkB/MEK抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约50％。
在一些实施例中，TrkB/MEK抑制剂是式(I)化合物：
其中：
R1是H
R2是选自由H和三氟甲基羰基组成的群组的部分；或R1和R2与核心结构一起形成式(a)杂环二基部分：
R3是选自由-ORa和-NRbRc组成的群组的部分；
Ra是任选地经咪唑基取代的C1-4烷基；
Rb是选自由C1-4烷基和C1-4烷氧基组成的群组的部分，其中Rb经0、1或2个各自独立地选自由以下组成的群组的基团取代：-OCH3、-C(O)OH、-C(O)NR'R"、-NH(C1-3烷基)、其中n为2-4的-NH(CH2CH2O)nCH3、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基、N-甲基哌啶基、N-吗啉基、咪唑基、吡咯烷基、-OPO3H2和羟基；其中所述-NH(C1-3烷基)经0、1或2个羟基部分取代，且其中R'和R"各自独立地选自-H或-CH3；且
Rc是H，或Rb和Rc与其所连接的氮一起形成选自由式(b)和式(c)组成的群组的杂环基部分：
或其医药学上可接受的盐或酯。
在一实施例中，化合物(I)是式(II)化合物：
其中
R3是-NHRb，且Rb是经0、1或2个羟基部分取代的C1-C3烷基；或其医药学上可接受的盐或酯。
本文提到式(I)或(II)化合物(或包含所述化合物的组合物)包括所述化合物的医药学上可接受的盐和酯(或包含所述化合物的医药学上可接受的盐和酯的组合物)。
在一些实施例中，TrkB/MEK相关癌症是胰腺癌、神经癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。在一些实施例中，TrkB/MEK抑制剂还抑制Src酪氨酸激酶家族至少一个成员的活性。在一些实施例中，TrkB/MEK抑制剂还抑制Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性达至少本文另外描述的程度，例如在约0.1μM的浓度下抑制至少约75％。
在一些方面中，本发明提供治疗有需要个体中的至少一种选自由以下组成的群组的癌症的方法：慢性骨髓白血病、胰腺癌、神经癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌和黑素瘤。所述方法一般包括向个体投与包含有效治疗癌症量的式(I)、(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯的组合物。式(I)或(II)化合物可为本文所述的任何式(I)或(II)化合物。
在一些方面中，本发明还涉及式(I)或(II)化合物在制造用以治疗慢性骨髓白血病、胰腺癌、神经癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌或黑素瘤的药物中的用途。在一些方面中，本发明提供抑制有需要个体中的转移过程的方法。所述方法一般包括向个体投与包含有效抑制转移过程量的式(I)或(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯的组合物。式(I)或(II)化合物可为本文所述的任何式(I)或(II)化合物。
在其它方面中，本发明提供治疗有需要个体中的B-RAF突变型癌症的方法。所述方法一般包括向个体投与包含有效治疗B-RAF突变型癌症量的至少一种式(I)或(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯的组合物。式(I)或(II)化合物可为本文所述的任何式(I)或(II)化合物。在一些实施例中，B-RAF突变型癌症是B-RAF V600E突变型癌症。在一些实施例中，B-RAF突变型癌症是卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌或黑素瘤。
在其它方面中，本发明提供治疗有需要个体中的FLT3突变型癌症的方法。举例来说，所述方法可包含向个体投与有效治疗FLT3突变型癌症量的式(I)或(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯(或包含其的组合物)。在所述方法的某些实施例中，FLT3突变型癌症具有残基D835突变和/或残基I836突变，例如D835Y突变。在一些实施例中，FLT3突变型癌症是急性骨髓白血病(AML)。
在其它方面中，本发明提供治疗有需要个体中的中枢神经系统肿瘤的方法。所述方法一般包括向个体投与包含有效治疗肿瘤量的式(I)或(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯的组合物，使得至少20％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。式(I)或(II)化合物可为本文所述的任何式(I)或(II)化合物。在一些实施例中，以脑中式(I)或(II)化合物的量与血浆中式(I)或(II)化合物的量的比率计，至少约65％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。在一些实施例中，中枢神经系统肿瘤是脑肿瘤、神经胶质瘤或神经母细胞瘤。
在一些实施例中，式(I)中的表示双键。在一些实施例中，表示三键。在一些实施例中，R3是-NRbRc，Rc是H
且Rb是未经取代的C1-4烷基。在一些实施例中，Rc是H且Rb是甲基或乙基。举例来说，式(I)化合物包括以下化合物：
和其医药学上可接受的盐和酯。
在一些实施例中，本发明的任一方法均包括静脉内投与本文所述组合物。在一些实施例中，本发明的任一方法均包括投与每公斤体重约0.10毫克至每公斤体重约25毫克之间的剂量的本文所述组合物。
在一些方面中，本发明针对以下化合物：
和其医药学上可接受的盐和酯。
在一些实施例中，关于式(II)化合物，R3是未经取代的C1-3烷基氨基。在一些实施例中，R3是选自由甲基氨基和乙基氨基组成的群组的基团。在一些实施例中，R3是选自由2-羟基乙基氨基和2,3-二羟基丙基氨基组成的群组的基团。举例来说，式(II)化合物包括(但不限于)以下化合物：
和其医药学上可接受的盐和酯。
在一些实施例中，本发明的任一方法包括投与第二化学治疗药物。
附图说明
图1描绘RAS-MAPK信号传导路径的图示。
图2A描绘例示性式(I)或(II)化合物在生物化学检定和基于细胞的MEK1检定中的结果。
图2B描绘化合物的例示性激酶抑制结果。
图3描绘例示性式(I)或(II)化合物在细胞生长抑制检定中在多种癌细胞系中(抑制B-RAF突变型癌细胞生长)的结果。
图4包括描绘例示性式(I)或(II)化合物在Colo-205人类结肠癌异种移植物中的活体内抗肿瘤活性结果的曲线图。
图5包括描绘例示性式(I)或(II)化合物在BxPC-3人类胰腺癌异种移植物中的活体内抗肿瘤活性结果的曲线图。
图6包括描绘例示性式(I)或(II)化合物在LOX人类黑素瘤异种移植物中的活体内抗肿瘤活性结果的曲线图。
图7描绘化合物对B细胞驱使的血液科恶性癌细胞生长的作用。
图8描绘化合物对CPT-11(SN-38)在PANC-1胰腺癌细胞中的抗癌活性的作用。
图9描绘化合物的血脑屏障(BBB)实验。
图10描绘化合物对Flt-3受体在MV-4-11AML细胞中的磷酸化的作用。
图11是描绘化合物对MV-4-11细胞增殖的抑制的曲线图。
具体实施方式
如WO 05/023792和WO 03/076424中所论述，已报导F152的某些类似物对MEK1具有抑制活性，已证实稳定性增加且为NF-κB活化、AP-1活化和蛋白激酶(例如MEKK、MEK1、PDGFr、VEGFr)的有效抑制剂。本发明至少部分基于以下发现：某些F152大环内酯类似物也具有独特多激酶抑制特征。也就是说，式(I)或(II)化合物是本文进一步详述的多种特异性激酶的有效抑制剂。先前已展示某些多激酶有效对抗癌症。最近已发现，例如作为Bcr-Abl激酶抑制剂的甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)(STI571，格列卫(GLEEVEC))已成功用于治疗慢性骨髓白血病。此成果至少部分归因于甲磺酸伊马替尼的多激酶活性。因此，不希望受任何特定理论约束，相信具有这些独特激酶抑制特征的化合物(例如式(I)或(II)的F152大环内酯类似物)比选择性MEK1抑制剂的治疗范围广。举例来说，相信具有此独特多激酶抑制特征的化合物可用于治疗和/或预防特定癌症。
定义
为了更清楚且简明地描述所主张的标的，以下定义欲指导本文所用特定术语的含义。
应注意，除非另外说明，否则如本文所用的单数形式“一(“a”和“an”)”和“所述”包括“至少一个/种”和“一个/种或多个/种”。因此，例如提及“药理学上可接受的载剂”包括两种或两种以上载剂的混合物以及单一载剂，等。
如本文所用的术语“SrcTK/MEK抑制剂”指的是同时抑制MEK1和Src酪氨酸激酶家族至少一个成员的单一化合物。Src酪氨酸激酶家族的例示性成员包括cSrc、Fyn、Lyn、Lck、Yes、Fgr、Hck和Blk。在一些实施例中，术语“SrcTK/MEK抑制剂”指的是同时抑制MEK1和Src酪氨酸激酶家族1至5个成员，例如Src酪氨酸激酶家族的1、2、3、4或5个成员的单一化合物。
如本文所用的术语“TrkB/MEK抑制剂”指的是同时抑制MEK1和TrkB的单一化合物。
当在本文中使用时，特定蛋白激酶由例如Src、TrkB的特定名称和本文具体提及的其它激酶指称，而且可能具有所属领域中已知的多种同义名。举例来说，Src蛋白激酶还可以称为ASV、c-Src、p60-Src、pp60c-src、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、SRC1、AW259666、神经元原癌基因酪氨酸蛋白激酶、fc54g04、wu:fc54g0和/或SDR。另外，TrkB还可称为BDNF/NT-3生长因子受体前驱物、GP145-TrkB、2型神经营养性酪氨酸激酶受体、Trk-B、TrkB酪氨酸激酶、AI848316、C030027L06Rik、GP145-TrkB/GP95-TrkB和/或Tkrb。Yes也可称为c-Yes、HsT441、p61-Yes、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes、Yes、AI323763、p61-Yes、酪氨酸蛋白激酶Yes、MGC94936和/或p60c-yes。Lck也可称为LSK、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶、p56-LCK、原癌基因酪氨酸蛋白激酶LCK、T细胞特异性蛋白酪氨酸激酶、Hck-3和/或Lsk-t。Fyn也可称为MGC45350、p59-Fyn、原癌基因Syn、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Fyn、SLK、SYN、AI448320、AW552119、MGC115870、MGC132140、MGC52878、Src激酶p59、c-fyn和/或zgc:86720。Lyn也可称为FLJ26625、JTK8、酪氨酸蛋白激酶Lyn、AA407514、Hck-2、Lyncein和/或TBC1结构域家族成员1。所属领域的技术人员完全能够使用例如可查找蛋白数据库确定名称是否为本文所述蛋白激酶的同义名。
当在本文中使用时，特定蛋白激酶不仅包括天然存在的激酶，例如Src、TrkB和本文具体提及的其它激酶，而且还包括经修饰激酶。因此，在一些实施例中，式(I)或(II)化合物抑制与天然存在相对物共享至少90％序列一致性的激酶。在其它实施例中，式(I)或(II)化合物抑制与天然存在相对物共享至少95％序列一致性的激酶。在其它实施例中，式(I)或(II)化合物抑制与天然存在相对物共享至少97％序列一致性的激酶。在其它实施例中，式(I)或(II)化合物抑制与天然存在相对物共享至少99％序列一致性的激酶。与天然存在相对物共享序列一致性的激酶可以是天然存在或合成的激酶。术语“序列一致性”一般指的是两个聚核苷酸或多肽序列在特定比较区上在逐残基比较基础上的一致程度。通过在所述比较区上比较两个经最佳对准的序列，测定两个序列中出现一致核酸碱基(在核酸的情况中，例如A、T、C、G、U或I)的位置数以获得匹配位置数，将匹配位置数除以比较区中位置的总数(即窗尺寸)，且结果乘以100获得序列一致性百分比，从而计算出术语“序列一致性百分比”。在一些实施例中，窗尺寸为至少20个核苷酸位置，例如至少25-50个核苷酸。在其它实施例中，窗尺寸大于50个核苷酸。在一些实施例中，窗尺寸为整个天然存在的蛋白激酶。在其它实施例中，窗尺寸为至少与天然存在蛋白激酶上的ATP结合位点对应的序列。
如本文所用的术语“SrcTK/MEK相关癌症”指的是与MEK1和Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性或功能相关或以其它方式受其影响的癌症。在一方面中，在SrcTK/MEK相关癌症中，MEK1的活性或功能提高，且Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性或功能提高。本文中更详细论述例示性SrcTK/MEK相关癌症，且其可包括慢性骨髓白血病(CML)和结肠直肠癌。
如本文所用的术语“TrkB/MEK相关癌症”指的是与MEK1和TrkB的活性或功能相关或以其它方式受其影响的癌症。在一方面中，在TrkB/MEK相关癌症中，MEK1的活性或功能提高，且TrkB的活性或功能提高。本文中还更详细论述例示性TrkB/MEK相关癌症，且其可包括胰腺癌、神经癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。
在一些实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于蛋白激酶活性失调的癌症。在其它实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于蛋白激酶路径中的上游事件或下游事件失调的癌症。在其它实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于调节蛋白激酶活性的基因突变的癌症。在一些实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于一个或多个信号分子的活化增强或组成性活化的癌症。在一些实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于蛋白激酶使蛋白质磷酸化的能力提高或组成性能力的癌症。在其它实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于三磷酸腺苷(ATP)与酶结合位点的结合改变使得酶活性提高的癌症。在一些实施例中，与一种或多种蛋白激酶的“活性或功能相关或以其它方式受其影响”的癌症是可归因于配位体与蛋白激酶结合和/或蛋白激酶二聚的癌症。
如本文更详细描述，命名为“SrcTK/MEK相关”、“TrkB/MEK相关”、“与B-RAF突变相关”和/或“与FLT3突变相关”的癌症是因为与某些蛋白激酶或特定蛋白突变明显相关而选择的癌症。一旦判定癌症(例如胰腺癌)与MEK1、Src、TrkB或本文所述的任何其它激酶或蛋白质突变相关(例如文献或实验中)，那么所属领域的技术人员将会理解所述特定癌症的治疗即为本发明癌症(例如TrkB/MEK相关癌症)的治疗。
式(I)或(II)化合物会抑制如本文所述的多种蛋白激酶。如本文所用的术语“抑制”在关于蛋白激酶使用时，指的是式(I)或(II)化合物至少部分降低蛋白激酶活性的能力。不希望受任何特定理论约束，相信蛋白激酶抑制剂可直接与ATP竞争特定激酶的结合袋，或以其它方式与激酶相互作用使得结合袋不再可用于ATP。可通过所属领域中已知的多种检定确定化合物抑制蛋白激酶的量。举例来说，可在可接受缓冲剂(例如MOPS、EDTA、Brij-35、甘油、NaCl、BSA、HEPES、曲通X-100(Triton X-100)或TRIS)中稀释化合物，且在特定量的[γ-33P-ATP]和底物肽存在下暴露于激酶。在培育和中止后，取等分试样以测定所并入33P的量。举例来说，将使用闪烁计数器量测电离辐射，以测定并入底物中的γ-33P的量，此量与激酶活性有关。此值将与合适对照值比较，例如无抑制剂存在的相同过程。应了解可通过任何合适方法评估或测量化合物抑制激酶活性的能力。举例来说，结合磷酸肽或磷酸蛋白底物的抗体可用于侦测所述磷酸化产物，所述产物为激酶活性的指征。可通过任何合适方法(诸如经标记第二抗体)检测抗体与底物的结合。在一些实施例中，可评估或测量化合物抑制受体酪氨酸激酶亚基转磷酸化的能力或抑制受体酪氨酸激酶自体磷酸化的能力。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约30％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约45％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约50％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约55％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约40％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约50％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制至少约75％、80％、85％或90％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的抑制剂浓度下将指定蛋白激酶的活性抑制约95％。在一些实施例中，在ATP存在下进行测定抑制量的检定。在一些实施例中，在10μM ATP存在下进行测定抑制量的检定。在一些实施例中，在[γ-33P-ATP]存在下进行测定抑制量的检定。在一些实施例中，在提供约500cpm/pmol比活性的量的[γ-33P-ATP]存在下进行测定抑制量的检定。在一些实施例中，在痕量[γ-33P-ATP]存在下进行测定抑制量的检定。
如本文所用的术语“转移过程的抑制”指的是式(I)或(II)化合物不仅抑制单一肿瘤的生长，而且还抑制肿瘤自原发位置向远处器官传播的能力。不希望受任何特定理论约束，相信转移是癌症治疗失败的常见原因。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞与其相邻细胞分离的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞通过胞外基质的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞分泌分解基质的酶的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞通过血管内皮衬里的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞通过淋巴系统的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞在循环系统中存活的能力。在一实施例中，转移过程的抑制包括抑制肿瘤细胞外渗到气管的周围组织中的能力。应理解，当关于转移过程使用时，术语“抑制”可指完全阻止个体的转移过程或减缓个体的转移过程。不希望受任何特定理论约束，相信式(I)或(II)化合物抑制转移过程的能力至少部分归因于化合物抑制Src酪氨酸激酶的能力。
如本文所用的“治疗(“Treatment”或“treating”)”定义为向患者，或向来自患者的分离组织或细胞系施用或投与治疗剂(例如，本发明的特定多激酶抑制剂)。患者一般患有疾病或病症，具有疾病或病症的症状，或具有疾病或病症的诱因。治疗目的一般是治愈、痊愈、减轻、解除、补救、改善或改良所述疾病、病症、症状或诱因。如本文所用的“被治疗”指的是疾病或病症被治愈、痊愈、减轻、解除、补救、改善或改良。举例来说，本发明的治疗方法投与本文所述的抑制剂，从而减缓或停止特定癌症或特定类别的癌症(例如SrcTK/MEK相关癌症)的进展。本发明的治疗方法还包括投与抑制剂，从而治愈特定癌症。
术语“有效剂量(“effective dose”或“effective dosage”)”定义为足以达成所要效果的量。术语“所要效果”一般指的是当向个体投与式(I)或(II)化合物或组合物时所属领域的技术人员预测的任何结果。在一些实施例中，所要效果是疾病或病症完全好转。在其它实施例中，所要效果是部分治疗疾病或病症。在其它实施例中，所要效果是完全或部分治疗疾病或病症的症状。举例来说，在一些实施例中，所要效果是使实体肿瘤收缩。在另一例示性实施例中，所要效果是消除实体肿瘤。术语“治疗有效剂量”定义为足以治愈或至少部分抑止已患病个体中所述疾病和其并发症的量。
如本文所用的术语“个体”指的是动物，诸如哺乳动物，包括(但不限于)人类、灵长类、牛、绵羊、山羊、马、猪、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠或其它牛类、羊类、马类、犬类、猫类、啮齿类或鼠类动物。在一些实施例中，个体是人类。
结合本发明的不同实施例引用数值和范围，例如组合物中所存在的式(I)或(II)化合物的量。应理解，除非另外明确说明，否则本发明欲涵盖处于所列值和范围之间的所有值和范围。本文结合参数、范围和量使用的术语“约”意谓参数或量在规定参数或量的±1％之内。
如本文所用的术语“稳定”一般指的是化合物具有足以允许进行制造的稳定性，且保持化合物完整达足够用来检测的时间。在一些实施例中，稳定的式(I)或(II)化合物是保持其完整性达足够适用于本文详述目的的时间的化合物。举例来说，尽管前药最终在身体中代谢，但认为其为“稳定”的。
如本文所用的“烷基”包括具有一个或多个碳原子的饱和烃，包括直链烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等)、环状烷基(或“环烷基”或“脂环”或“碳环”基团)(例如环丙基、环戊基、环己基等)，分支链烷基(异丙基、叔丁基、仲丁基、异丁基等)，和经烷基取代的烷基(例如，经烷基取代的环烷基和经环烷基取代的烷基)。在某些实施例中，直链或分支链烷基在主链中可具有8个或8个以下碳原子，例如C1-C8直链或C3-C8分支链。在某些实施例中，直链或分支链烷基在主链中可具有6个或6个以下碳原子，例如C1-C6直链或C3-C6分支链。在其它实施例中，烷基包括约1至4个碳。在其它实施例中，烷基包括约1至3个碳。在其它实施例中，烷基包括约1或2个碳。术语“低级烷基”指的是链中具有1至6个碳的烷基，和环结构中具有3至6个碳的环烷基。如“C1-C6烷基”中的术语“C1-C6”意谓含有1至6个碳原子的烷基。术语“烯基”和“炔基”指的是类似于烷基，但分别含有至少一个碳-碳双键或三键的不饱和脂肪族基团。
如本文所用的术语“烷氧基”意谓连接有氧原子的烷基。在一些实施例中，烷氧基包括具有1至约8个碳原子的基团。在其它实施例中，烷氧基包括具有1至约6个碳原子的基团。在其它实施例中，烷氧基包括具有少于约4个碳原子的基团。烷氧基的实例包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。烷氧基可为直链烷氧基或分支链烷氧基。
术语“杂环基团”包括与碳环基团类似的闭环结构，其中环中的一个或多个碳原子为除碳之外的元素，例如氮、硫或氧。杂环基可为饱和杂环基或不饱和杂环基。此外，杂环基(诸如吡咯基、吡啶基、异喹啉基、喹啉基、嘌呤基和呋喃基)可具有芳香族特征，在此情况下，其可称为“杂芳基”或“杂芳香族”基团。例示性杂环基包括(但不限于)咪唑基，例如
吗啉基，例如
哌啶基，例如
吡咯烷基，例如
哌嗪基，例如
如本文所用的术语“胺”或“氨基”指的是未经取代或经取代的式-NRaRb部分，其中Ra和Rb各独立是氢、烷基、芳基或杂环基，或Ra和Rb与其所连接的氮一起形成在环中具有3至8个原子的环状部分。因此，除非另外说明，否则术语氨基包括环状氨基，诸如哌啶基或吡咯烷基。
相关来说，“芳基烷基”例如为经芳基取代的烷基(例如苯基甲基(即苯甲基))。“烷基芳基”部分是经烷基取代的芳基(例如对甲基苯基(即对甲苯基))。因此，术语咪唑基-烷基指的是经咪唑基部分取代的烷基。
在指定情况下，式(I)或(II)化合物的化学部分(包括上文所述的基团)可“未经取代或经取代”。在一些实施例中，术语“经取代”意谓部分上安置有不为氢的取代基(即，在多数情况下，置换氢)，此允许分子执行其预定功能。应理解，“取代”或“经…取代”包括以下隐含条件，即所述取代符合经取代原子和取代基的允许价数，且取代产生稳定化合物，例如，其不会通过诸如重排、环化、消去等方式自发经历转变。如本文所用的术语“取代基”欲包括有机化合物的所有允许取代基。在广泛方面中，允许取代基包括有机化合物的非环状和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳香族和非芳香族取代基。如本文所述，式(I)或(II)化合物可具有一次或多次取代。
如本文的说明书和附图中所用，可选双键/三键由两个实线连同第三虚线表示，且指的是两个碳原子之间的共价键联，所述键联可为双键或三键。举例来说，结构：
可表示丁烯或丁炔。
在本文中使用混合化学名称时，例如“烷基芳基”、“芳氧基”等，其可理解为与化学结构的核心具有特定连接。最右边所列的部分(例如“烷基芳基”中的芳基)是与核心直接连接的部分。也就是说，例如在结构V-CH2CH2CH3中，当代号“V”是烷基芳基时，所述结构理解为烷基-芳基-CH2CH2CH3。
如本文所用的术语“化合物”欲意谓由分子构成的物质，所述分子又由原子组成。化合物可为任何天然或非天然材料，例如肽或多肽序列、有机或无机分子或组合物、核酸分子、碳水化合物、脂质或其组合。化合物一般指的是固相、液相或气相的化学实体，且不管是处于粗混合物中抑或经纯化和经分离。化合物涵盖化合物本身，且适当时涵盖：化合物的无定形和结晶形式，包括多晶型，所述形式为混合物形式或分离形式；化合物的游离酸和游离碱形式；化合物的异构体，包括几何异构体、光学异构体和互变异构体，所述光学异构体包括对映异构体和非对映异构体、手性异构体和非手性异构体，所述光学异构体包括经分离光学异构体或光学异构体混合物(包括外消旋和非外消旋混合物)；所述几何异构体包括反向和顺向形式，其中异构体可为经分离形式或与一个或多个其它异构体的掺杂物形式；化合物的同位素，包括含氘和含氚化合物，且包括含有放射性同位素的化合物，所述放射性同位素包括治疗上有效的同位素和诊断上有效的同位素；化合物的多聚形式，包括二聚、三聚等形式；化合物的盐，包括酸加成盐和碱加成盐，包括有机平衡离子和无机平衡离子，且包括两性离子形式，其中若化合物与两个或两个以上平衡离子缔合，则所述两个或两个以上平衡离子可相同或不同；和化合物的溶剂合物，包括半溶剂合物、单溶剂合物、二溶剂合物等，包括有机溶剂合物和无机溶剂合物，所述无机溶剂合物包括水合物；其中若化合物与两个或两个以上溶剂分子缔合，则所述两个或两个以上溶剂分子可相同或不同。
在一些实施例中，术语“化合物”明确指的是小分子。如本文所用，如本文所用的术语“小分子”指的是本身不为基因转录或翻译产物(例如蛋白质、RNA或DNA)，且优选具有低分子量的化合物，例如分子量小于约2,000道尔顿(dalton，Da)的有机分子。在一些实施例中，小分子的分子量小于约1,500Da。在其它实施例中，小分子的分子量小于约1,000Da。在其它实施例中，小分子的分子量小于约750Da。在其它实施例中，小分子的分子量小于约500Da。
如本文所用的“医药学上可接受的前药”一词指的是一般具有显著降低的药理学活性的化合物衍生物，其含有容易在活体内移除以产生呈药理学活性物质形式的母分子的额外部分。前药的实例是酯，其在活体内裂解产生所关注化合物。已知多种化合物的前药，和使母化合物衍生形成前药的材料和方法，且所述前药、材料和方法适于本发明。
如本文所用的术语“酯”指的是具有式R'-COOR的基团，其中R'或R中的一个是例如烷基、卤代烷基或芳香族基团，且R'和R中的另一个是活性部分。“医药学上可接受的酯”指的是用作前药的酯，例如在活体内从核心结构上至少部分移除(例如通过水解或其它裂解)的酯。
如本文所用的术语“保护基”(例如关于式(I)或(II)化合物的合成)指的是特定官能部分(例如O、S或N)被暂时封阻使得可在多官能化合物中在另一反应性部位选择性进行反应。在优选实施例中，保护基以良好产率选择性反应，获得对所计划反应稳定的经保护底物；保护基须以良好产率由容易获得的不攻击其它官能基的优选无毒试剂选择性移除；保护基形成可容易分离的衍生物(更优选不产生新立体中心)；且保护基具有最小额外官能性以避免产生其它反应部位。
如本文所用的术语“胺”或“氨基”指的是未经取代或经取代的式-NRaRb部分，其中Ra和Rb各独立是例如氢、烷基、芳基或杂环基，或Ra和Rb与其所连接的氮一起形成在环中具有3至8个原子的环状部分。
式(I)和(II)化合物
本发明包括式(I)化合物：
其中：
R1是H
R2是选自由H和三氟甲基羰基组成的群组的部分；或R1和R2与核心结构一起形成式(a)杂环二基部分：
R3是选自由-ORa和-NRbRc组成的群组的部分；
Ra是任选地经咪唑基取代的C1-4烷基；
Rb是选自由C1-4烷基和C1-4烷氧基组成的群组的部分，其中Rb经0、1或2个各自由以下成的群组中独立选出的基团取代：-OCH3、-C(O)OH、-C(O)NR'R"、-NH(C1-3烷基)、其中n为2-4的-NH(CH2CH2O)nCH3、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基、N-甲基哌啶基、N-吗啉基、咪唑基、吡咯烷基、-OPO3H2和羟基；其中所述-NH(C1-3烷基)经0、1或2个羟基部分取代，且其中R'和R"各自独立地选自-H或-CH3；且
Rc是H，或Rb和Rc与其所连接的氮一起形成选自由式(b)和式(c)组成的群组的杂环基部分：
或其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，表示双键。在一些实施例中，表示三键。在一些实施例中，R2是H。在一些实施例中，R3是-NRbRc，其中Rb是未经取代的C1-4烷基。在一些实施例中，Rb是甲基。在一些实施例中，Rb是乙基。在一些实施例中，R3是-NRbRc，其中Rb是经1或2个-OH基团取代的C1-4烷基。在一些实施例中，Rb是2-羟基乙基。在一些实施例中，Rb是2,3-二羟基丙基。在一些实施例中，R3是-ORa，其中Ra是经咪唑基取代的C2-3烷基。
例示性咪唑基包括(但不限于)，
在一些实施例中，咪唑基是例示性吗啉基包括(但不限于)，
在一些实施例中，吗啉基是例示性哌啶基包括(但不限于)在一些实施例中，哌啶基是例示性N-甲基哌啶基包括(但不限于) 在一些实施例中，N-甲基哌啶基是例示性吡咯烷基包括(但不限于)在一些实施例中，吡咯烷基是例示性哌嗪基包括(但不限于)在一些实施例中，哌嗪基是例示性N-甲基哌嗪基包括(但不限于)和在一些实施例中，N-甲基哌嗪基是
在其它实施例中，式(I)或(II)化合物包括以下所列的化合物：
和其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，化合物是至少一种选自由以下组成的群组的化合物：
和其医药学上可接受的盐或酯。
在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是化合物029、化合物069、化合物091或化合物106。在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是美国申请公开案第2004/0224936号中列出的特定化合物。
在一些方面中，本发明针对新颖式(I)化合物。本文所述的所有新颖式(I)化合物包括于本发明中作为化合物。在一些实施例中，本发明针对以下所列的一种或多种化合物：
和其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，式(I)化合物包括式(II)化合物：
其中
R3是-NHRb，且Rb是经0、1或2个羟基部分取代的C1-C3烷基；或其医药学上可接受的盐或酯。
在一些实施例中，R3是未经取代的C1-3烷基-氨基。在一些实施例中，R3是甲基氨基。在一些实施例中，R3是乙基氨基。在一些实施例中，R3是经一个羟基部分取代的C1-3烷基-氨基。在一些实施例中，R3是经两个羟基部分取代的C1-3烷基-氨基。羟基部分可在C1-3烷基链中的任何碳上。此外，C1-3烷基链的单个碳上可存在一个以上羟基部分。在一些实施例中，烷基链的2-碳上存在羟基部分。在一些实施例中，R3是羟基乙基氨基，例如2-羟基乙基氨基。在其它实施例中，R3是二羟基丙基氨基，例如2,3-二羟基丙基氨基。在一些实施例中，C1-3烷基是非环状C1-3烷基链。
在一些实施例中，化合物是至少一种选自由以下组成的群组的化合物：
和其医药学上可接受的盐或酯。
在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是化合物029、化合物069、化合物091或化合物106。在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是美国申请公开案第2004/0224936号中列出的特定化合物。
在一些方面中，本发明针对新颖式(I)化合物。本文所述的所有新颖式(I)化合物包括于本发明中作为化合物。在一些实施例中，本发明针对以下所列的一种或多种化合物：
和其医药学上可接受的盐或酯前药。
在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是化合物029、化合物091或化合物106。在至少一个实施例中，式(I)或(II)化合物不是美国申请公开案第2004/0224936号中列出的特定化合物。
式(I)或(II)化合物可包括一个或多个不对称中心，且因此可以各种异构形式存在，例如立体异构体和/或非对映异构体。因此，式(I)或(II)的化合物和医药组合物可呈个别对映异构体、非对映异构体或几何异构体形式，或可呈立体异构体混合物形式。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物是对映异构纯化合物。在某些其它实施例中，提供立体异构体或非对映异构体的混合物。
除非另外说明，否则式(I)或(II)化合物还可具有一个或多个以Z或E异构体形式存在的双键。本发明另外涵盖实质上不含其它异构体的单独异构体形式，或各种异构体的混合物(例如立体异构体的外消旋混合物)形式的化合物。
式(I)或(II)化合物另外可以式(I)或(II)化合物的结晶形式(例如多晶型物)、溶剂合物或水合物形式中的一个或组合形式存在。可使用用于再结晶的不同溶剂或不同溶剂混合物；通过在不同温度下进行结晶；或通过使用各种冷却模式(在结晶期间极快至极慢冷却)，来鉴别和/或制备各种结晶形式。还可以通过加热或熔融化合物，随后逐渐或快速冷却，来获得不同结晶形式。可通过固体探针NMR光谱、IR光谱、差示扫描量热法、粉末X光衍射图和/或其它技术来测定多晶型物的存在。
合成方法
在例如WO 05/023792第32-38页和WO 03/076424第28-36页，以及其中提供的实例中可发现制备适用于实践本发明的化合物的指南。所述申请案的全部内容以引用的方式并入本文中。所述参考文献以及本文所含的信息和关于大环内酯化学性质的其它知识体系向所属领域的技术人员提供关于适用于合成式(I)或(II)化合物的合成策略、保护基和其它材料和方法的指南。举例来说，上述参考文献提供关于制备与本文所述化合物或相关中间体类似的化合物的背景信息，以及与该等化合物的调配、使用和投与有关的信息。
本文还提供关于各种例示性化合物和其中间体有关的特定指南和实例。因此，可通过本文的实例进一步理解式(I)或(II)化合物和其制备，所述实例说明藉以制备或使用这些化合物的一些方法。然而，应了解，所述实例不限制本发明。认为目前已知或将另外开发的本发明的变体在如本文所述和如下文所主张的本发明范畴内。
根据本发明，可使用任何可获得的技术来制造或制备本发明化合物或包括本发明化合物的组合物。举例来说，可使用多种溶液相合成法，诸如下文详细论述的方法。或者或另外，可使用所属领域中已知的任何多种组合技术、平行合成和/或固相合成法制备本发明化合物。
适用于合成式(I)或(II)化合物的起始物质和试剂可从供应商处购买，或可通过所属领域的一般技术人员已知的方法制备。可使用惯用技术分离和纯化起始物质、中间体和式(I)或(II)化合物，所述技术包括过滤、蒸馏、结晶、色谱等。其可使用惯用方法，包括物理常数和光谱数据来表征。
例证中提供式(I)或(II)化合物的例示性合成。应了解，本文所述的方法可应用于本文揭示的每一化合物和其等效物。此外，试剂和起始物质为所属领域的技术人员所熟知。尽管上文引用的参考文献中所述的方案描绘了某些例示性化合物，但应了解使用替代起始物质将产生式(I)或(II)的其它类似物。
除非明确说明，否则反应混合物冷却至室温或室温以下，接着在需要时用水或氯化铵饱和水溶液中止。通过在水与合适水不混溶溶剂(例如乙酸乙酯、二氯甲烷和乙醚)之间分配来萃取所要产物。相继用水和饱和盐水溶液适当洗涤含有所要产物的萃取物。在认为含有产物的萃取物含有残余氧化剂的情况下，在上文所述的洗涤程序之前，萃取物以亚硫酸钠于碳酸氢钠饱和水溶液中的10％溶液洗涤。在认为含有产物的萃取物含有残余酸的情况下，在上文所述的洗涤程序之前，萃取物以碳酸氢钠饱和水溶液洗涤(所要产物本身具有酸性特征的情况除外)。在认为含有产物的萃取物含有残余碱的情况下，在上文所述的洗涤程序之前，萃取物以10％柠檬酸水溶液洗涤(所要产物本身具有碱性特征的情况除外)。洗涤后，含有所要产物的萃取物经无水硫酸镁干燥，且接着过滤。接着通过在减压下在适当温度下(一般低于45℃)旋转蒸发移除溶剂来分离粗产物。
在三苯膦氧化物是反应的主要副产物的情况下，将反应混合物直接添加至大量经充分搅拌的己烷中。通过过滤移除所得三苯膦氧化物沉淀物，且以一般方式处理滤液。
除非明确说明，否则使用色谱纯化。色谱纯化指的是急骤硅胶管柱色谱，其使用单一溶剂或混合溶剂作为洗提剂。合并含有洗提剂的经适当纯化的所要产物，且在适当温度(一般低于45℃)下减压浓缩至恒定质量。若为固体形式，则最终产物以其固体形式用于生物测试中。若需要或必需冻干，则最终产物一般溶解于50％乙腈水溶液或其它适当溶剂或溶剂混合物中，过滤并转移至小瓶，接着在高度真空下冻干，随后用于生物测试。
医药组合物
在本发明的另一方面中，提供医药组合物，其包含本文所述的任一化合物(或其医药学上可接受的盐或酯)，且任选地包含医药学上可接受的载剂。在某些实施例中，所述组合物任选地还包含一种或多种其它治疗剂。或者，可向有需要的患者投与本发明化合物以及投与一种或多种其它治疗剂。举例来说，与具有本发明化合物的医药组合物结合投与或纳入所述医药组合物中的其它治疗剂可为如本文更详细描述的批准用于治疗癌症的抗癌剂，或其可为经食品和药品管理局(Food and Drug Administration)审批且最终获得批准用于治疗癌症的多种药剂中的任一药剂。还应了解，某些本发明化合物可以用于治疗的游离形式，或适当时以其医药学上可接受的盐或酯形式存在。
如本文所用的术语“医药学上可接受的盐”指的是在正确医学判断范畴内、适于与人类和低等动物的组织接触使用而无不当毒性、刺激、过敏反应等，且与合理利益/风险比相称的盐。所属领域中熟知胺、羧酸和其它类型化合物的医药学上可接受的盐。举例来说，S.M.卑尔格(S.M.Berge)等人在药学杂志(J.Pharmaceutical Sciences),66:1-19(1977)中详细描述医药学上可接受的盐，其以引用的方式并入本文中。如下文一般性描述，盐可在式(I)或(II)化合物的最终分离和纯化期间当场制备，或通过使游离碱或游离酸官能基与合适试剂反应单独制备。举例来说，可使游离碱官能基与合适酸反应。此外，若式(I)或(II)化合物具有酸性部分，则其合适医药学上可接受的盐可包括金属盐，诸如碱金属盐，例如钠盐或钾盐；和碱土金属盐，例如钙盐或镁盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为与无机酸形成的氨基盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸；或与有机酸形成的氨基盐，所述有机酸诸如乙酸、乙二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸，或通过使用所属领域中所用的其它方法(诸如离子交换)形成的氨基盐。其它医药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过氧硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。其它医药学上可接受的盐包括(若适当)使用平衡离子形成的无毒铵、季铵和胺阳离子，平衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根。
另外，如本文所用的术语“医药学上可接受的酯”指的是可活体内水解的酯，且包括在人体内容易地分解留下母化合物或其盐的酯。合适酯基包括例如自医药学上可接受的脂肪族羧酸，尤其链烷酸、链烯酸、环烷酸和链烷二羧酸衍生的酯，其中各烷基或烯基部分宜具有不超过6个碳原子。特定酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基丁二酸酯。
如上文所述，包含式(I)或(II)化合物的医药组合物可另外包含医药学上可接受的载剂，如本文所用的载剂可包括任何和所有适于所要特定剂型的溶剂、稀释剂或其它液体媒剂、分散助剂或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。雷明登氏制药科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第16版，E.W.马丁(E.W.Martin)(马克出版公司(Mack Publishing Co.),宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.),1980)揭示用于调配医药组合物的各种载剂和其已知制备技术。除非任何惯用载剂介质与式(I)或(II)化合物不相容，诸如产生任何不合需要的生物作用，或在其它方面与医药组合物的任何其它组份以有害方式相互作用，否则其用途涵盖于本发明范畴内。一些可用作医药学上可接受载剂的材料实例包括(但不限于)糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，诸如可可脂缓冲剂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油；红花油、芝麻油；橄榄油；玉米油和大豆油；二醇；诸如丙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗生理食盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇，和磷酸盐缓冲溶液，以及其它无毒相容润滑剂，诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，且根据调配人员的判断，组合物中还可以存在着色剂、脱模剂、涂布剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。
包含式(I)或(II)化合物的组合物可调配成任何所要浓度。在一些实施例中，调配组合物，使其包含至少治疗有效量。在一些实施例中，调配组合物，使其包含不会引起一种或多种不当副作用的量。在某些实施例中，调配组合物，使化合物以介于约1mg/mL与约20mg/mL之间；介于约1mg/mL与约15mg/mL之间；介于约1mg/mL与约10mg/mL之间；介于约2mg/mL与约9mg/mL之间；介于约3mg/mL与约8mg/mL之间；介于约4mg/mL与约7mg/mL之间；介于约4mg/mL与约6mg/mL之间的浓度存在。在某些实施例中，调配组合物，使化合物以约5mg/mL的浓度存在。
治疗方法
如上文所述，式(I)或(II)化合物展现独特激酶抑制特征。在一些实施例中，至少部分基于此独特激酶抑制特征，式(I)或(II)化合物适用于治疗和/或预防如本文更详细描述的多种癌症。例示性癌症包括实体肿瘤、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，诸如多发性骨髓瘤、神经癌(例如神经胶质瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤)、白血病(例如慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病和/或急性淋巴母细胞白血病(ALL))、黑素瘤、胰腺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌和/或乳癌。因此，在一些方面中，本发明针对治疗和/或预防个体中的癌症的方法。举例来说，在一些方面中，本发明针对治疗个体中的SrcTK/MEK相关癌症的方法。在其它实施例中，本发明针对治疗个体中的TrkB/MEK相关癌症的方法。
本发明方法一般包括向个体投与有效量的包含所选多激酶抑制剂的组合物，从而治疗癌症。所选多激酶抑制剂因具有靶向癌症或在其它方面与癌症相关的独特多激酶抑制特征而得以选择。举例来说，在一些实施例中，治疗SrcTK/MEK相关癌症的方法包括向有需要的个体投与SrcTK/MEK抑制剂或另一式(I)或(II)化合物。在其它实施例中，治疗TrkB/MEK相关癌症的方法包括向有需要的个体投与TrkB/MEK抑制剂或另一式(I)或(II)化合物。
式(I)或(II)化合物具有独特多激酶抑制特征。举例来说，在一些实施例中，式(I)或(II)化合物对多种蛋白激酶具有抑制活性，所述蛋白激酶包括Src酪氨酸激酶家族、MEK1、MEKK1、TrkB、BCR-ABL、FLT-3和KDR激酶。所述化合物包括例如化合物106和091，其合成和某些生物学特性在本文的实例和附图中表征。此独特激酶抑制特征表明式(I)或(II)化合物比选择性MEK1抑制剂的治疗范围广。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物包括展现MEK1抑制剂活性；Src家族成员(例如Src、Lyn、Fyn、Lck、Yes)的抑制剂活性；通过MEKK1抑制作为NF-κB路径抑制剂的活性；TrkB抑制剂活性；Bcr-Abl抑制剂活性；FLT-3抑制剂活性；和/或KDR抑制剂活性的化合物。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物包括展现MEK1抑制剂活性的化合物。因此，在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约50％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约51％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约52％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％或甚至60％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约85％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约86％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将MEK1的活性抑制至少约87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或甚至95％。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物抑制MEK1。举例来说，在一些实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于10μM的IC50值。在某些其它实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于7.5μM的IC50值。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于5μM的IC50值。在某些其它实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于2.5μM、小于1μM、小于0.75μM、小于0.5μM、小于0.25μM、小于0.1μM、小于75nM或小于50nM的IC50值。本发明欲涵盖介于所列出值之间的所有范围和值。
基于在调节来自大范围人类肿瘤的细胞的生长和存活的重要作用，RAS-MAPK信号传导路径也视为抗癌治疗的重要路径(图1)。MEK1在RAS和RAF蛋白的下游，在癌症中，RAS和RAF蛋白通常突变且活性异常。因此，在B-RAF突变基础上具有高MEK信号传导的肿瘤为使用本发明组合物和方法的诱人目标。
相信Ras/Raf/MEK/ERK信号转导路径在不同类型细胞中调节细胞增殖。通常在经转化细胞系中观测到此路径中的突变，且通常与人类癌症有关。戴维斯(Davies)等人(自然(Nature)417,949-954,2002)例如在67％的恶性黑素瘤和12％的结肠直肠癌中鉴别出B-RAF(Raf的同功异型体)体细胞错义突变。所有突变都在具有单个取代(诸如V600E(V599E))的激酶结构域中，此占这些突变的90％。突变型B-RAF蛋白具有高激酶活性，导致MEK组成性活化，此接着触发ERK磷酸化，且活化下游路径。相信B-RAF突变型癌症(包括黑素瘤)为MEK抑制剂的诱人治疗目标。黑素瘤和结肠直肠癌中的B-RAF突变频率，和所述疾病晚期有效疗法的相对缺乏表明抑制B-RAF活性可为这些癌症类型的重要新颖策略。此外，在某些实施例中，B-RAF突变可用作“患者富集策略”(即，靶向将受益于本发明组合物和方法的带有B-RAF突变的患者)的分子标志。
本发明者发现式(I)或(II)化合物为B-RAF突变型癌细胞生长的有效抑制剂，且因此可选择性靶向B-RAF突变型癌症。如本文所用的术语“B-RAF突变型癌症”指的是与B-RAF特定点突变相关的癌症。因此，在一些实施例中，本发明提供用于治疗B-RAF突变型癌症的组合物和方法。式(I)或(II)化合物包括对B-RAF突变型癌症展现抗增殖活性的化合物；对活体外维持或在使用科学上可接受模型的动物研究中维持的合适细胞系具有抗增殖作用的化合物；和/或展现有利治疗特征(例如安全性、功效和稳定性)的化合物。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物适用于治疗和/或预防具有高MEK信号传导的肿瘤，包括(但不限于)具有B-RAF突变的肿瘤。已关注作为高MEK信号传导目标的多种蛋白质(参看下文表1，自癌症自然综述癌症(Nature Reviews Cancer):4:937-947,2004中的表1修改)。这些蛋白质中的突变可导致MEK-ERK路径的活化。具体来说，卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌和黑素瘤显示高频率B-RAF突变。
表1
因此，在某些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防具有高MEK信号传导的肿瘤，包括(但不限于)具有B-RAF突变的肿瘤的方法。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物适用于治疗和/或预防黑素瘤、结肠直肠癌、卵巢癌和/或甲状腺癌。因此，在某些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防B-RAF突变型癌症的方法。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物适用于治疗和/或预防带有B-RAF突变(例如V600E突变)的癌症。在某些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防带有V600E突变的B-RAF突变型癌症的方法。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物包括展现Src酪氨酸激酶家族的多个成员抑制剂活性的化合物。因此，在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约40％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约45％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％或甚至55％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约85％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约90％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少五个成员的活性抑制至少约91％、92％、93％、94％或甚至95％。Src酪氨酸激酶家族的例示性成员包括(但不限于)cSrc、Fyn、Lyn、Lck和Yes。
在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少四个成员的活性抑制至少约40％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少四个成员的活性抑制至少约45％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少四个成员的活性抑制至少约46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％或甚至55％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少四个成员的活性抑制至少约90％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少四个成员的活性抑制至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％或甚至97％。在一些实施例中，受本发明抑制剂(例如SrcTK/MEK抑制剂)抑制的Src酪氨酸激酶家族的四个成员为cSrc、Fyn、Lyn和Lck。
在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少三个成员的活性抑制至少约55％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少三个成员的活性抑制至少约60％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少三个成员的活性抑制至少约61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％或甚至69％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少三个成员的活性抑制至少约93％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少三个成员的活性抑制至少约94％、95％、96％、97％或甚至98％。在一些实施例中，受本发明抑制剂(例如SrcTK/MEK抑制剂)抑制的Src酪氨酸激酶家族的三个成员选自cSrc、Fyn、Lyn和Lck。举例来说，在一些实施例中，受本发明化合物和/或抑制剂抑制的Src酪氨酸激酶家族的三个成员为Fyn、Lyn和Lck。举例来说，在其它实施例中，受本发明抑制剂抑制的Src酪氨酸激酶家族的三个成员为cSrc、Fyn和Lck。
在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少两个成员的活性抑制至少约65％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少两个成员的活性抑制至少约70％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少两个成员的活性抑制至少约71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％或甚至79％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少两个成员的活性抑制至少约95％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少两个成员的活性抑制至少约96％、97％、98％或甚至99％。在一些实施例中，受本发明化合物和/或抑制剂(例如SrcTK/MEK抑制剂)抑制的Src酪氨酸激酶家族的两个成员为Fyn和Lck。
在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约70％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约75％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％或甚至85％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约97％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM的浓度下将Src酪氨酸激酶家族中至少一个成员的活性抑制至少约98％、99％或甚至100％。在一些实施例中，受本发明化合物和/或抑制剂(例如SrcTK/MEK抑制剂)抑制的Src酪氨酸激酶家族的一个成员选自Fyn和Lck。
所属领域的技术人员将理解任何或所有上述Src酪氨酸激酶特征可与一种单独化合物精确相关。也就是说，约0.1μM浓度下的本发明单一抑制剂可将Src酪氨酸激酶家族的五个成员抑制至少约45％，将Src酪氨酸激酶家族的四个成员抑制至少约50％，将Src酪氨酸激酶家族的三个成员抑制至少约60％，将Src酪氨酸激酶家族的两个成员抑制至少约70％且将Src酪氨酸激酶家族的一个成员抑制至少约75％。还应理解，在前述方案中，抑制至少75％的Src酪氨酸激酶家族的一个成员也可为抑制至少45％的五个成员中的一个。因此，在一例示性情况下，式(I)或(II)化合物在约0.1μM浓度下可具有以下特征：50％抑制cSrc、31％抑制Fyn、42％抑制Lyn、73％抑制Lck和56％抑制Yes。
不希望受任何特定理论约束，还相信Src酪氨酸激酶家族的成员也可适用于抑制转移过程。举例来说，Src与通过细胞运动和浸润建立转移有关。因此，在一些实施例中，本发明方法包括抑制个体中的转移过程的方法。
最近，还显示Lyn(Src酪氨酸激酶家族成员)在甲磺酸伊马替尼抗性机制中起重要作用。不希望受任何特定理论约束，还相信Src酪氨酸激酶家族的某些成员与慢性骨髓白血病和/或结肠直肠癌相关。因此，在一些实施例中，本发明针对治疗慢性骨髓白血病和/或结肠直肠癌的方法。此外，Src酪氨酸激酶家族的某些成员与甲磺酸伊马替尼抗性相关，例如在慢性骨髓白血病中。因此，本发明针对治疗对伊马替尼和其医药学上可接受的盐和酯(例如甲磺酸伊马替尼)具有抗性的癌症的方法。在一些实施例中，本发明针对甲磺酸伊马替尼抗性慢性骨髓白血病。
如本文所用，术语“抗性”指的是个体随时间变得对治疗剂的反应性降低的情况。因此，在一些实施例中，对治疗剂具有抗性指的是与不存在药剂投与的情况相比，个体对所述药剂完全无反应性(例如肿瘤生长速率未受抑制的情况)。在一些实施例中，对治疗剂具有抗性指的是与不存在药剂投与的情况相比，个体对所述药剂部分无反应性(例如肿瘤生长速率受抑制程度极低的情况)。对治疗剂具有抗性的特性是高度可变特性，在不同情况下，不同肿瘤对指定治疗剂会展现不同程度的“抗性”。在其它实施例中，对治疗剂具有抗性指的是与药剂的先前投与相比，个体对所述药剂完全或部分无反应性。在其它实施例中，对治疗剂具有抗性指的是已投与药剂的个体需要其它疗法。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物包括展现TrkB抑制剂活性的化合物。因此，在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约65％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约70％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约75％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约76％、78％、80％、82％、84％、86％或甚至88％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约85％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约90％。在其它实施例中，本发明化合物或抑制剂在约1.0μM浓度下将TrkB的活性抑制至少约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％或甚至98％。
不希望受任何特定理论约束，相信TrkB(神经来源生长因子(NDGF)受体)在诸如神经胶质瘤、视网膜母细胞瘤和神经母细胞瘤的神经癌的增生和存活中可能起重要作用。此外，还相信TrkB活性可能与胰腺癌相关。举例来说，通过TrkB的信号转导可能引起胰腺癌患者严重疼痛。因此，在一些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防神经胶质瘤、视网膜母细胞瘤和神经母细胞瘤的方法。在其它实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防胰腺癌的方法。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物或其活性代谢物展现通过血脑屏障(BBB)的高穿透性。当关于穿过BBB的量使用时，术语“式(I)或(II)化合物”欲包括其活性代谢物。因此，在一些实施例中，本发明方法包括治疗有需要个体中的中枢神经系统肿瘤的方法。如在合适动物中证实，方法一般包括投与如本文所述的组合物(包括式(I)或(II)化合物)，使得至少部分式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。在一些实施例中，如在合适动物中证实，以脑中式(I)或(II)化合物的量比血浆中式(I)或(II)化合物的量的比率计，至少约20％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。在一些实施例中，如在合适动物中证实，以脑中化合物的量比血浆中式(I)或(II)化合物的量的比率计，至少约40％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。在其它实施例中，如在合适动物中证实，至少约50％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。在其它实施例中，如在合适动物中证实，至少约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或甚至100％的式(I)或(II)化合物穿透血脑屏障。因此，可在合适动物(例如啮齿动物，诸如小鼠)中测定式(I)或(II)化合物是否穿透个体(例如人类)的血脑屏障。应注意，百分比是基于脑相对于血浆中指定时期的浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)来计算。因此，百分比表示浓度比。也就是说，若脑中化合物的(AUC0-24h)为20ng/mL而血浆中为80ng/mL，则穿透血脑屏障的化合物的百分比为20％(脑中20ng/ml除以总浓度(20ng/mL+80ng/mL))。在一些实施例中，百分比是基于t＝0(给药时间)至最后可定量浓度点时间段的浓度-时间曲线下面积(即(AUC0-last))来计算。例示性中枢神经系统肿瘤包括(但不限于)脑瘤、神经胶质瘤和神经母细胞瘤。
在一些实施例中，本发明抑制剂会抑制Bcr-Abl和/或FLT-3。Bcr-Abl和FLT-3是白血病治疗的已知目标。因此，在某些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防白血病的方法。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约40％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约45％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约46％、47％、48％、49％、50％、52％或甚至54％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约75％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约80％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将Bcr-Abl的活性抑制至少约81％、82％、83％、84％、85％、86％、88％或甚至90％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约45％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约50％。在一些实施例中，本发明抑制剂在约0.1μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约52％、54％、56％、58％、60％、65％或甚至70％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约85％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约90％。在其它实施例中，本发明抑制剂在约1.0μM浓度下将FLT-3的活性抑制至少约91％、92％、93％、94％、95％或甚至96％。
式(I)或(II)化合物和组合物适用于治疗个体中的FLT3突变型癌症。如本文所用，FLT3突变型癌症是与FLT3中的活化突变相关的癌症，所述活化突变激活所编码蛋白质的激酶功能。
FMS样酪氨酸激酶3基因(FLT3或FLT-3)编码受体酪氨酸激酶的III型血小板源生长因子家族的一员。FLT3表现于许多血液科恶性疾病中，且其信号传导级联已涉及于多个肿瘤发生路径中。举例来说，FLT3突变会导致STAT5和Ras/MAPK路径的活化。(帕瑟尔(Parcells)等人,干细胞(Stem Cells),24(5)；1174-1184(2006))
白血病患者中已报导FLT3的活化突变。举例来说，与成人细胞遗传正常急性骨髓白血病(CN-AML)相关的两种最常见FLT3突变类型为：(1)近膜结构域中的内部串联重复(ITD)(存在于约30％的CN-AML患者中)；和(2)第二酪氨酸激酶结构域(TKD)中的突变(存在于约7％的CN-AML患者中)。常见TKD突变包括影响TKD的活化环(A环)中的氨基酸残基D835和/或I836的核苷酸取代、缺失或插入。D835Y取代构成约50％的所报导TKD突变。还观测到Y842C、K663Q和V592A突变。具有这些ITD或TKD突变的FLT3蛋白通过自体磷酸化展现配位体独立性FLT3二聚和组成性活化。(惠特曼(Whitman)等人,血液学(Blood),111(3):1552-1559(2008)；还参看帕瑟尔(Parcells)等人,干细胞(Stem Cells),24(5)；1174-1184(2006))FLT3的活化突变与较差预后相关。(斯通(Stone),血液学(Blood),104I:915-916(2004))
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物可抑制FLT3突变型癌细胞生长。在某些实施例中，化合物可展现对抗FLT3突变型癌症的抗增殖活性；展现对活体外维持或在动物模型中维持的合适细胞系(例如包含FLT3的活化突变)的抗增殖作用；和/或展现有利治疗特征(例如安全性、功效和稳定性)。
因此，本发明提供治疗有需要个体中的FLT3突变型癌症的方法，其包含向所述个体投与治疗有效量的式(I)或(II)化合物或组合物。在所述方法的某些实施例中，式(I)或(II)化合物或包含所述化合物的组合物用于治疗具有FLT3突变的癌症。在所述方法的某些实施例中，FLT3突变型癌症在近膜结构域中具有内部串联重复(ITD)。在所述方法的某些实施例中，FLT3突变型癌症在第二酪氨酸激酶结构域中，例如在活化环中具有突变。在所述方法的某些实施例中，FLT3突变型癌症具有残基D835突变和/或残基I836的突变，例如D835Y突变。在所述方法的某些实施例中，FLT3突变型癌症具有Y842C、K663Q或V592A突变。此外，在某些实施例中，FLT3突变可用作“患者富集策略”的分子标志以鉴别供治疗的患者。
如上文所述，白血病患者中已报导FLT3的活化突变，且本发明提供治疗个体中的白血病的方法，其包含向个体投与治疗有效量的式(I)或(II)化合物或组合物。在所述方法的一个实施例中，白血病是急性骨髓白血病(AML)。
不希望受任何特定理论的约束，相信式(I)或(II)化合物的独特多激酶抑制特征表明所述化合物适用于靶向血液科恶性疾病以及实体肿瘤。(例如参看瓦穆斯,M(Warmuth,M)等人.血液学年报(Ann Hematol.)78(2):49-64(1999)和哈德,KW(Harder,KW)等人.免疫学(Immunity).15(4):603-15(2001)。)在某些实施例中，式(I)或(II)化合物以B细胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin's lymphoma)中的细胞凋亡为证据展现抗癌活性，此可能通过抑制MEKK1(NF-κB活化的上游分子)实现，导致对细胞凋亡的化学抗性。因此，在某些实施例中，本发明方法包括治疗和/或预防血液科恶性癌细胞生长(诸如多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤)的方法。
在其它实施例中，式(I)或(II)化合物活体外抑制肿瘤细胞系生长。举例来说，在一些实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于10μM的IC50值。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于7.5μM的IC50值。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于5μM的IC50值。在某些其它实施例中，式(I)或(II)化合物展现小于2.5μM、小于1μM、小于0.75μM、小于0.5μM、小于0.25μM、小于0.1μM、小于75nM或小于50nM的IC50值。本发明欲涵盖介于所列出值之间的所有范围和值。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物引起活体内肿瘤衰退。在某些例示性实施例中，式(I)或(II)化合物在合适小鼠肿瘤异种移植模型中引起活体内肿瘤衰退。如本文实例中所证明，某些式(I)或(II)化合物在多种异种移植物中通过静脉内给药具有强活体内功效。在某些实施例中，在合适癌细胞异种移植模型中，式(I)或(II)化合物使肿瘤尺寸减小至化合物开始投与时肿瘤尺寸的70％以下。在某些实施例中，在合适癌细胞异种移植模型中，式(I)或(II)化合物使肿瘤尺寸减小至化合物开始投与时肿瘤尺寸的65％以下。在某些实施例中，在合适癌细胞异种移植模型中，式(I)或(II)化合物使肿瘤尺寸减小至化合物开始投与时肿瘤尺寸的60％以下、55％以下或50％以下。本发明欲涵盖介于所列出值之间的所有值和范围。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物引起活体内肿瘤生长的抑制。举例来说，在一些实施例中，式(I)或(II)化合物在合适癌细胞异种移植模型中引起肿瘤生长的显著抑制。在某些实施例中，在合适癌细胞异种移植模型中，式(I)或(II)化合物在经处理动物中引起与对照动物相比>50％的肿瘤生长抑制(即，“经处理”肿瘤尺寸<50％“对照”肿瘤尺寸；或T/C值<50％)。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物具有<70％的T/C值。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物具有<65％、<60％或<55％的T/C值。本发明欲涵盖介于所列出值之间的所有值和范围。
测试包括F152(天然产物)的例示性化合物在MDA-MB-435和其它癌细胞系中的生长抑制活性。数种化合物显示具有显著癌细胞生长抑制活性(例如以nM IC50值计)。基于各种相关检定中的生物学表征(参看实例和附图)，相信某些式(I)或(II)化合物展现有效细胞生长抑制，尤其针对B-RAF突变型细胞；具有多激酶抑制特征，包括MEK1、MEKK1、Src激酶家族酪氨酸激酶、TrkB、FLT-3和Bcr-Abl；在多种肿瘤异种移植物(包括“主要肿瘤类型”)中具有有效活体内抗肿瘤活性而无显著体重损失；在个体中在Q4D和/或Q7D静脉内给药中具有突出功效；具有功效优于组合疗法中的所属领域中已知的某些MEK1抑制剂的迹象；能够穿透血脑屏障，此使化合物潜在适用于治疗/预防脑瘤；潜在适用于以特定癌症的可能生物标志为基础的靶向疗法。
在一些实施例中，式(I)或(II)化合物为基于天然产物的多激酶抑制剂，其对包括Src家族(Src、Lyn、Fyn、Lck、Yes)的癌症相关激酶、通过MEKK1抑制对NF-κB路径、TrkB、Bcr-Abl、FLT-3和KDR，以及B-RAF突变型癌细胞高度有效。在临床上此独特特征可向式(I)或(II)化合物提供竞争优势，例如对非分裂细胞具有低程度的细胞毒性，且因此提供潜在良好治疗范围。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物在具有另一抗癌剂的组合疗法中展现协同作用。在某些例示性实施例中，式(I)或(II)化合物在具有SN-38(CPT-11的活性代谢物)的组合疗法中展现协同作用。在一些实施例中，式(I)或(II)化合物当与另一抗癌剂(例如SN-38，CPT-11的活性代谢物-例如参看实例9)组合使用时，更有效杀死肿瘤细胞。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物对NF-κB展现抑制活性。因此，其适用于治疗和/或预防与NF-κB活性有关的癌症。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物适用于治疗和/或预防血液科恶性疾病，诸如多发性骨髓瘤和/或B细胞淋巴瘤。在一些实施例中，式(I)或(II)化合物对于经NF-κB活化对惯用化学疗法展示抗性的癌症患者有益。
根据本发明，可在所属领域中已知的任一可用检定中检定本发明化合物，以鉴别具有例如MEK1抑制活性、蛋白激酶抑制活性、NF-κB活化抑制活性和癌细胞生长抑制活性的化合物。举例来说，检定可为细胞或非细胞、活体内或活体外、高或低通量格式检定，等。
剂量和投与模式
应了解，根据本发明的方法，化合物和组合物可使用有效治疗癌症的任何量和任何投与途径投与。因此，如本文所用的表述“有效量”指的是药剂抑制肿瘤细胞生长的足够量，或指的是降低癌症作用的足够量。所需要的确切量将视个体的物种、年龄和一般状况、疾病严重程度、特定抗癌剂、其投与模式等而随个体变化。式(I)或(II)化合物优选调配成容易投与且剂量均匀的单位剂型。如本文所用的表述“单位剂型”指的是适于待治疗患者的治疗剂的物理不连续单元。然而应理解，式(I)或(II)化合物和组合物的总每日用量将由主治医师在正确医学判断范畴内决定。用于任何特定患者或生物体的特定治疗有效剂量水准将视多种因素而定，包括所治疗病症和病症严重程度；所采用特定化合物的活性；所采用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用特定化合物的投与时间、投与途径和排泄速率；治疗持续时间；与所采用特定化合物组合或同时使用的药物；和医药技术中熟知的类似因素(例如参看顾德曼(Goodman)和吉尔曼(Gilman),“治疗剂的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)”,第10版,A.吉尔曼(A.Gilman)、J.哈德曼(J.Hardman)和L.利姆伯德(L.Limbird)编,麦格罗-希尔出版公司(McGraw-HillPress),155-173,2001，其全部内容以引用的方式并入本文中)。
在某些实施例中，全身性投与化合物或组合物。如本文所用，“全身性投与”指的是式(I)或(II)化合物可借以变得全身可用的任何方式。举例来说，全身性投与涵盖经肠(例如经口和经直肠)和非经肠投与方法。在某些实施例中，全身性投与涵盖静脉内投与、腹膜内投与、肌肉内投与、冠状动脉内投与、动脉内投与(例如投与至颈动脉中)、皮内投与、皮下投与、经皮传递、气管内投与、皮下投与、关节内投与、心室内投与、吸入(例如气溶胶)、脑内、经鼻、naval、经口、眼内、肺部投与、导管注入、栓剂和直接注射至组织，或全身性吸收的局部或粘膜投与。粘膜投与包括例如通过吸入、滴鼻剂、滴眼剂等向呼吸道投与；肛门或阴道途径投与，例如通过栓剂；等。在某些例示性实施例中，式(I)或(II)组合物是经静脉内投与。
应了解，本发明化合物可以剂型、调配物或例如含有医药学上可接受的惯用无毒载剂和佐剂的合适传递装置或植入物全身性投与，使得化合物效用最佳化。举例来说，本发明化合物可与适当赋形剂一起调配成医药组合物，其在向个体投与组合物后以受控方式全身性释放活性物质。或者或另外，可使化合物剂型设计最佳化，从而增加化合物的投与后效用。上述策略(即剂型设计和药物输入的速率控制)在单独或组合使用时可导致化合物效用显著增加，且视为本发明的一部分。
此外，在以适当医药学上可接受的载剂以所要剂量调配后，本发明医药组合物可通过经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(以散剂、软膏、乳膏或滴剂形式)、经颊(以经口或经鼻喷雾形式)等方式向人类和其它动物投与。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物可以每天每公斤个体体重约0.001mg至约50mg、约0.01mg至约25mg或约0.1mg至约10mg的剂量水准每天一次或多次投与，从而获得所要治疗作用。还应了解，可向个体投与小于0.001mg/kg或大于50mg/kg(例如50-100mg/kg)的剂量。在某些实施例中，化合物是经口或非经肠投与。在某些实施例中，通过每周间歇给药1至3次进行投与。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物可以约1-500mg/m2；例如约5-400mg/m2；约10-250mg/m2的剂量水准每周一次或多次投与，从而获得所要治疗效果。本发明也涵盖介于所列出范围之间的特定范围和值。
在某些实施例中，式(I)或(II)化合物可每周静脉内投与1至3次。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物可每周静脉内投与1次。在某些实施例中，式(I)或(II)化合物可每周静脉内投与2次。
式(I)或(II)化合物的投与可经特定时间段连续、间歇或快速投与。举例来说，在一个实施例中，调配式(I)或(II)化合物以供静脉内使用且可以缓慢注射形式向患者投与，例如经约30分钟至约3小时。在另一实施例中，调配式(I)或(II)化合物以供静脉内使用且可以快速注射形式向患者投与，也称为IV(静脉内)推注。在另一实施例中，调配式(I)或(II)化合物以供静脉内使用且可以任何数目的不连续注射形式向患者投与，所述注射间隔可能相等或不相等的时间段。
用于经口投与的液体剂型包括(但不限于)医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可含有所属领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体来说，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，和其混合物。除了惰性稀释剂之外，经口组合物还可包括佐剂，诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可使用合适分散剂或湿润剂和悬浮剂，根据已知技术调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂还可为无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受媒剂和溶剂是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油惯常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，可注射制剂中使用脂肪酸，诸如油酸。
可注射调配物可例如通过经阻菌过滤器过滤或通过纳入杀菌剂经灭菌而呈无菌固体组合物形式，所述无菌固体组合物可在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。
通常希望减缓药物自皮下或肌肉内注射的吸收以延长药物作用。此可通过使用液体悬浮液或水溶性差的结晶或无定形材料实现。药物吸收速率因而视其溶解速率而定，溶解速率又可视晶体尺寸和结晶形式而定。或者，通过将药物溶解或悬浮于油性媒剂中来实现非经肠投与的药物形式的延迟吸收。可通过在生物可降解聚合物(诸如聚交酯-聚乙交酯)中形成药物的微胶囊基质来制造可注射储积形式。视药物/聚合物比率和所采用颗粒聚合物的种类而定，可控制药物释放速率。其它生物可降解聚合物的实例包括(聚(原酸酯)和聚(酐)。还通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储积式可注射调配物。
用于直肠或阴道投与的组合物优选是栓剂，其通过混合本发明化合物与合适无刺激性赋形剂或载剂(诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)来制备，所述无刺激性赋形剂或载剂在环境温度下是固体，但在体温下是液体，且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物。
用于经口投与的固体剂型包括胶囊、药片、丸剂、散剂和颗粒剂。在所述固体剂型中，活性化合物与至少一种医药学上可接受的惰性赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或a)填充剂或增充剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c)保湿剂，诸如甘油，d)崩解剂，诸如琼脂--琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解延迟剂，诸如石蜡，f)吸收促进剂，诸如季铵化合物，g)湿润剂，诸如棕榈醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，诸如高岭土和膨润粘土，和i)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物混合。在胶囊、药片和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。
相似类型的固体组合物还可用作软填充和硬填充明胶胶囊的填充剂，所述胶囊使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等。可以包衣和外壳制备药片、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型，诸如肠溶包衣和医药调配技术中熟知的其它包衣。其可任选地含有遮光剂且还可具有仅在肠道的某一部分或优先在肠道的某一部分任选地以延迟方式释放活性成份的组成。可使用的嵌入组合物的实例包括聚合物质和蜡。相似类型的固体组合物还可用作软填充和硬填充明胶胶囊的填充剂，所述胶囊使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)的赋形剂以及高分子量聚乙二醇等。
活性化合物还可为具有一种或多种如上文所述的赋形剂的微囊化形式。可以包衣和外壳制备药片、糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型，诸如肠溶包衣、释放控制包衣和医药调配技术中熟知的其它包衣。在所述固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖和淀粉)混杂。如正常实践中，所述剂型还可包含除惰性稀释剂之外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、药片和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。其可任选地含有遮光剂且还可具有仅在肠道的某一部分或优先在肠道的某一部分任选地以延迟方式释放活性成份的组成。可使用的嵌入组合物的实例包括聚合物质和蜡。
本发明涵盖本发明化合物的医药学上可接受的局部调配物。如本文所用的术语“医药学上可接受的局部调配物”意谓医药学上可接受用于通过向表皮施用调配物来皮内投与式(I)或(II)化合物的任何调配物。在本发明的某些实施例中，局部调配物包含载剂系统。医药学上有效的载剂包括(但不限于)溶剂(例如醇、多元醇、水)、乳膏、洗剂、软膏、油、石膏、脂质体、散剂、乳液、微乳液和缓冲溶液(例如低渗或缓冲生理食盐水)或所属领域中已知用于局部投与医药品的任何其它载剂。所属领域中权威的参考文献提供业内已知载剂的更完全清单，例如雷明登氏制药科学(Remington's Pharmaceutical Sciences),第16版,1980和第17版,1985，都由马克出版公司(Mack Publishing Co.),宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.)出版，其揭示内容以全文引用的方式并入本文中。在某些其它实施例中，本发明的局部调配物可包含赋形剂。所属领域中已知的任何医药学上可接受的赋形剂都可用于制备本发明医药学上可接受的局部调配物。可纳入本发明局部调配物中的赋形剂的实例包括(但不限于)防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、润肤剂、缓冲剂、增溶剂、其它穿透剂、护肤剂、表面活性剂和推进剂，和/或与本发明化合物组合使用的其它治疗剂。合适防腐剂包括(但不限于)醇、季胺、有机酸、对羟基苯甲酸酯和酚。合适抗氧化剂包括(但不限于)抗坏血酸和其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、生育酚和螯合剂，如EDTA和柠檬酸。合适保湿剂包括(但不限于)甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。用于本发明的合适缓冲剂包括(但不限于)柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲剂。合适增溶剂包括(但不限于)氯化季铵、环糊精、苯甲酸苯甲酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。可用于本发明局部调配物中的合适护肤剂包括(但不限于)维生素E油、尿囊素(allatoin)、二甲聚硅氧烷、甘油、矿脂和氧化锌。
在某些实施例中，本发明医药学上的局部调配物包含至少一种式(I)或(II)化合物和穿透增强剂。局部调配物的选择将视数种因素而定，包括待治疗病况、本发明化合物和所存在其它赋形剂的物理化学特征、其在调配物中的稳定性、可用制造设备和成本约束。如本文所用的术语“穿透增强剂”意谓能够传输药理学活性化合物穿过角质层并进入表皮或真皮中的药剂，优选极少或无全身性吸收。已评估多种化合物增强药物穿过皮肤的穿透速率的效用。例如参看经皮穿透增强剂(Percutaneous Penetration Enhancers),麦巴克H.I.(Maibach H.I.)和史密斯H.E.(Smith H.E.)(编),CRC出版公司(CRC Press,Inc.),佛罗里达州伯克莱屯(Boca Raton,Fla.)(1995)，其调查各种皮肤穿透增强剂的使用和测试，和布郁克提米克(Buyuktimkin)等人,经皮和局部药物传递系统中经皮药物穿透增强的化学方式(Chemical Means of Transdermal Drug Permeation Enhancement inTransdermal and Topical Drug Delivery Systems),高诗T.K.(Gosh T.K.)、皮菲斯特W.R.(Pfister W.R.)、亚米S.I.(Yum S.I.)(编),国际药物出版公司(Interpharm PressInc.),伊利诺伊州布法罗市(Buffalo Grove,I11.)(1997)。在某些例示性实施例中，用于本发明的穿透剂包括(但不限于)三酸甘油酯(例如大豆油)、芦荟组合物(例如真芦荟胶(aloe-vera gel))、乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、N-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如十四烷酸异丙酯、月桂酸甲酯、单油酸甘油酯和丙二醇单油酸酯)和N-甲基吡咯烷酮。
在某些实施例中，组合物可呈软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾、吸入剂或贴片形式。在某些例示性实施例中，本发明组合物的调配物为乳膏，其可另外含有饱和或不饱和脂肪酸，诸如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈基-油酸、十六醇或油醇，尤其优选硬脂酸。本发明的乳膏还可含有非离子型表面活性剂，例如聚氧-40-硬脂酸酯。在某些实施例中，在无菌条件下使活性化合物与医药学上可接受的载剂和可能需要的任何所需防腐剂或缓冲剂混杂。眼科调配物、滴耳剂和滴眼剂也涵盖于本发明范畴内。此外，本发明涵盖皮肤贴片的用途，其具有提供化合物至身体的控制传递的额外益处。通过将化合物溶解或分散于适当介质中来制备所述剂型。如上文所述，穿透增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
在某些例示性实施例中，贴片中含有本发明的医药学上可接受的局部调配物，所述贴片靠近待处理皮肤区域施用。如本文所用的“贴片”包含至少一种局部调配物和覆盖层，使得贴片可安置于皮肤区域上。可结合本发明组合物和方法使用所属领域中已知的任何贴片。
在某些例示性实施例中，本发明化合物可用作支架的涂层。可在例如WO 05/023792中找到以此职能使用式(I)或(II)化合物的指南。
共投与
还应了解式(I)或(II)化合物和医药组合物可以组合疗法调配和采用，也就是说化合物和医药组合物可与一或多种其它所要治疗剂或医学程序一起调配或在一或多种其它所要治疗剂或医学程序的同时、之前或之后投与。组合方案中采用的疗法(治疗剂或程序)的特定组合将考虑所要治疗剂和/或程序与待达成的所要治疗效果的相容性。还应了解，所采用疗法可对同一病症达成所要效果(举例来说，本发明化合物可与另一抗癌剂同时投与)，或可达成不同效果(例如控制任何不良效应)。
举例来说，可与本发明式(I)或(II)化合物组合使用的其它疗法或抗癌剂包括手术、放射疗法(仅举例来说，γ-照射、中子束照射疗法、电子束照射疗法、质子疗法、短程放射治疗和全身性放射性同位素等)、内分泌疗法、生物反应改性剂(干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子(TNF)等)、高温和低温疗法、减弱任何不良效应的药剂(例如止吐剂)和其它批准化学治疗药物，包括(但不限于)烷基化药物(氮芥(mechlorethamine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、美法仑(Melphalan)、异环磷酰胺(Ifosfamide))、抗代谢物(甲胺喋呤(Methotrexate))、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他滨(Gemcitabine))、纺缍体抑制剂(长春花碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春瑞滨(Vinorelbine)、紫杉醇(Paclitaxel))、鬼臼霉素(podophyllotoxins)(依托泊苷(Etoposide)、依立替康(Irinotecan)、拓扑替康(Topotecan))、抗生素(阿霉素(Doxorubicin)、博莱霉素(Bleomycin)、丝裂霉素(Mitomycin))、亚硝基脲(nitrosourea)(卡氮芥(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine))、无机离子(顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin))、酶(天冬酰胺酶)和激素(他莫西芬(Tamoxifen)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他米特(Flutamide)和甲地孕酮(Megestrol))等。可与式(I)或(II)化合物或组合物组合使用的其它抗癌剂包括治疗性抗体或抗体片段，诸如人类、人化、嵌合和/或单链抗体或抗体片段(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、dAb)等(例如曲妥珠单抗(Trastuzumab)、贝伐单抗(Bevacizumab)、西妥昔单抗(Cetuximab)、利妥昔单抗(Rituximab))。更新癌症疗法的更全面论述参看默克手册(TheMerck Manual),第17版1999，其全部内容以引用的方式并入本文中。还参看美国国家癌症研究所(National Cancer Institute，CNI)网站(www.nci.nih.gov)和食品和药品管理局(FDA)网站的FDA批准肿瘤学药物清单(www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe–参看附录A)。
在某些实施例中，包含式(I)或(II)化合物的医药组合物进一步包含一种或多种其它治疗活性成份(例如化学治疗剂和/或缓解剂)。出于本发明的目的，术语“缓解”指的是关注疾病症状和/或治疗方案副作用减轻，而非治愈的治疗。举例来说，缓解治疗涵盖止痛药、止吐药和抗恶心药。此外，化学疗法、放射疗法和手术都可以缓解方式使用(即，减轻症状而不治愈；例如使肿瘤缩小和减轻压力、出血、疼痛和其它癌症症状)。
治疗试剂盒
在一些方面中，本发明提供实施本发明方法的试剂盒。一般来说，医药包装或试剂盒包含式(I)或(II)医药组合物的一种或多种成份。举例来说，试剂盒可包括(完全或部分)填充有式(I)或(II)化合物或组合物的一个或多个容器。所述试剂盒适于例如传递固体经口形式，诸如药片或胶囊。在一些实施例中，试剂盒包括多个单位剂量，且还可包括写有达到其预定用途的所需剂量的卡片。必要时，可提供例如数字、字母或其它标记或日程插页形式的记忆辅助物，指出治疗时程中可投与剂量的日期。或者，可包括呈与医药组合物剂量类似或不同形式的安慰剂剂量或钙膳食补充剂，以提供每日摄取剂量的试剂盒。在一些实施例中，试剂盒包括使用试剂盒的其它组份的说明书或用法指南。在一些实施例中，试剂盒包含包括式(I)或(II)化合物的组合物和第二治疗剂，以及共投与两种药剂的说明书。所述容器可任选地结合有由管理医药品的制造、使用或销售的政府机关规定形式的注意事项，所述注意事项反映用于人类投与的制造、使用或销售机关的批准。
等效物
所属领域的技术人员仅使用常规实验即可了解或能够确定本文所述本发明的特定实施例的许多等效物。所述等效物欲均由下文权利要求书所涵盖。
法律参并
本申请案全文引用的所有参考文献、专利和专利申请案的内容均以引用的方式并入本文中。
例证
通过说明借以制备或使用这些化合物的一些方法的实例，可进一步理解本发明化合物和其制备。然而，应了解，这些实例不限制本发明。认为目前已知或将另外开发的本发明的变体在如本文所述和如下文所主张的本发明范畴内。
本文所列方案仅说明可借以合成本发明化合物的一些方法，且应理解可对这些方案作出各种修改。
实例1：合成化合物
一般反应程序：
除非明确说明，否则使用磁力驱动搅拌棒搅拌反应混合物。惰性氛围一般指的是干燥氩气或干燥氮气。通过对反应混合物的合适样本进行薄层色谱法、质子核磁共振(NMR)或高压液相色谱(HPLC)来监测反应。
常见缩写包括m-CPBA：间氯过苯甲酸；DDQ：2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；DEAD偶氮二甲酸二乙酯；DIBAL-H：氢化二异丁基铝；DMAP：N,N-二甲基氨基吡啶；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；HMPA：六甲基磷酰胺；LDA：二异丙基胺化锂；LiHMDS：双(三甲基硅烷基)胺化锂；PCC：氯铬酸吡锭；TBAF：氟化四丁基铵；THF：四氢呋喃；CH2Cl2或DCM：二氯甲烷；MPM:对甲氧基苯甲基；Boc：氨基甲酸叔丁基氧基酯；TfOH：三氟甲烷磺酸；Tf2O：三氟甲烷磺酸酐；TFA：三氟乙酸；和TFAA：三氟乙酸酐。
合成常见起始物质
化合物003：
在40℃下，在搅拌下向三羟基苯甲酸(120g)于350mL丙酮中的溶液中添加500mLTFA(三氟乙酸)。在40℃下1小时后，添加300mL TFAA(三氟乙酸酐)。加热混合物3天。在低真空下，在50℃下蒸馏混合物移除溶剂。接着以4L CH2Cl2稀释粗产物，以水、饱和NaHCO3洗涤，干燥且浓缩获得85g半纯固体001。使固体在EtOH(1g/2mL)中结晶获得20g纯晶体。接着通过硅胶用CH2Cl2至5％MeOH/CH2Cl2纯化母液再获得55g产物001。
在0℃下，在3小时内向001(50g，238mmol)于156mL吡啶中的溶液中添加Tf2O(100mL，595mmol，2.5当量)。接着，使其升温至室温且搅拌2小时。以水稀释反应混合物。过滤混合物，且以水洗涤过滤器上的固体，在真空下干燥获得100g固体002。
在150mL甲苯中混合二(三氟甲磺酸)酯002(45.35g)、BocNH2(17.22g)、Pd2(dba)3(4.38g)和Pt-Bu3(4.38g)。向此混合物中添加三乙胺(26.92mL)且在80℃下在惰性氛围下加热反应物4小时。冷却粗反应混合物且经硅藻土垫过滤。浓缩滤液且经硅胶用己烷/EtOAc，9:1、4:1纯化获得28.3g所要产物(化合物003)。
合成常见中间体
如流程1中所说明合成中间体009和010。
化合物004：
将DMPU(42ml)中的化合物003(18.6g，42.1mmol)冷却至0℃。使用注射泵缓慢添加双(三甲基硅烷)胺化锂于THF中的溶液(1.0M，47ml，47mmol)，保持内部温度低于5℃。所得暗红-棕色溶液在0℃下再搅拌1小时20分钟。通过套管经10分钟添加TBSO-碘乙烷(16.0g，55.9mmol)，同时保持内部温度低于3℃。在0℃下再搅拌反应混合物10分钟，且随后在室温下搅拌整夜。以饱和碳酸氢钠(30ml)中止反应，且在减压下移除溶剂。通过急骤色谱法以5％EtOAc/己烷洗提纯化残余物，获得18.5g(74％)所要纯产物(化合物004)。1H-NMR(400MHz,C6D6)δ:7.20(d,J＝2.0Hz,1H),3.59(t,J＝5.2Hz,2H),3.41(d,J＝5.2Hz,2H),1.29(s,9H),1.18(s,6H),0.82(s,9H),-0.07(s,6H)；MS m/e:(M+23)＝622。
化合物006：
向005(13.0g，33.4mmol)和004(18.6g，31.0mmol)中添加N-甲基吡咯烷酮(30mL)、二环己基甲胺(8ml，37.4mmol)和Pd2(DBA)3(8.51g，9.29mmol)。在100℃下加热混合物2.5小时，且接着在110℃下加热10小时。接着在减压下加热移除溶剂。通过急骤色谱以10-17％EtOAc/己烷梯度溶剂洗提纯化残余物，获得24.7g(90％)化合物006。1H-NMR(400MHz,C6D6)δ:8.10(d,J＝16.0Hz,1H),7.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),7.05(d,J＝2.0Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),6.57-6.49(m,1H),5.62-5.48(m,2H),4.6(d,1H),4.48(m,1H),4.38-4.32(m,1H),4.22(d,1H),4.17-4.13(m,1H),3.68(m,2H),3.58(m,2H),3.49-3.45(m,1H),3.34(s,3H),2.85-2.77(m,1H),2.73-2.67(m,1H),2.63-2.56(m,1H),1.44(s,3H),1.37(s,9H),1.24(s,6H),1.20(s,3H),1.13(d,J＝6.0Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(s,9H),-0.02(s,6H)；MS m/e:(M+23)＝862。
化合物007：
在室温下，经1.5小时的时段，通过注射泵沿壁向THF(1.48L)中的006(12.0g，14.3mmol)中缓慢添加甲苯(0.5M，30mL，6.0mmol)中的双(三甲基硅烷)胺化钾。以氯化铵水溶液(800ml)中止反应。分离各层，且有机层以MTBE(3×400mL)反萃取三次，且以乙酸乙酯(3×400mL)反萃取3次。经合并萃取物以硫酸钠干燥且浓缩。通过急骤色谱以5％接着10％EtOAc/己烷洗提纯化残余物获得5.99g(54％)化合物007和2.32g(19％)回收的起始物质006。007的1H-NMR(400MHz,C6D6)δ:7.29(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝15.6Hz,1H),7.14(d,J＝2.4Hz,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),5.93-5.86(m,1H),5.67(dd,J＝8.8和9.2Hz,1H),5.46(dd,J＝10.4和8.8Hz,1H),5.22(dd,J＝9.6和10.4Hz,1H),4.88-4.82(m,1H),4.42-4.36(m,1H),4.25-4.19(m,2H),3.80-3.76(m,1H),3.72-3.60(m,4H),3.29(s,3H),3.11-3.02(m,1H),2.83-2.74(m,1H),2.64-2.57(m,1H),1.42(s,3H),1.35(s,9H),1.23(s,3H),1.04(d,J＝6.4Hz,3H),0.90(s,9H),0.77(d,J＝7.2Hz,3H),0.01(s,6H)；MS m/e:(M+23)＝804。
化合物008：
向在0℃(冰/水浴)下冷却的THF中的007(5.94g，7.60mmol)中添加DBU(4.9mL，33mmol)，接着沿壁逐份添加甲氧基甲基氯(2.3mL，30.3mmol)。搅拌3小时后，反应混合物以氯化铵水溶液、水和盐水洗涤3次。水层以MTBE反萃取3次。经合并萃取物以硫酸钠干燥，且浓缩获得6.27g(99％)白色泡沫体状粗产物，对其进行清洁且直接用于下一脱甲硅基反应。通过制备型TLC(以30％EtOAc/己烷洗提)纯化少量粗产物，验证所要产物008。1H-NMR(400MHz,C6D6)δ:7.32(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(br s,Hz,1H),7.06(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,2H),6.82(d,J＝18.0Hz,1H),6.49-6.41(m,1H),5.52-5.46(m,2H),5.33(dd,J＝10.4和10Hz,1H),4.98(dd,J＝8.8和8.8Hz,1H),4.82(s,2H),4.74(d,J＝10.8Hz,1H),4.58(d,J＝11.2Hz,1H),4.37(dd,J＝6.4和6.4Hz,1H),4.17(dd,J＝9.6和7.2Hz,1H),3.75-3.63(m,4H),3.26(s,3H),3.23-3.16(m,1H),3.09(s,3H),2.67-2.59(m,2H),1.35(s,9H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.27(s,3H),1.11(s,3H),0.95(d,J＝6.4Hz,3H),0.90(s,9H),0.01(s,3H),0.00(s,3H)；MS m/e:(M+23)＝848。
化合物009：
在1L圆底烧瓶中将化合物008(6.27g)溶解于THF(230ml)中且冷却至0℃。通过注射泵经26分钟向其中添加缓冲TBAF(THF中的1.0M TBAF和0.5M咪唑/HCl，15.2ml)。添加完成后，在室温下搅拌混合物12小时。反应混合物以碳酸氢盐饱和水溶液、水和盐水相继洗涤。水相以MTBE萃取。经合并有机萃取物以硫酸钠干燥且通过色谱纯化获得5.08g(94％)呈无色油状的009。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-6.85(m,6H),6.78(d,J＝16.0Hz,1H),6.43(m,1H),5.52-5.46(m,2H),5.33(dd,J＝10.4和10.0Hz,1H),4.96(t,J＝10.0Hz,1H),4.75(s,2H),5.25(d,J＝11.2Hz,1H),4.57(d,J＝11.2Hz,1H),4.37(dd,J＝6.4和6.4Hz,1H),4.20-4.15(m,1H),3.56-3.40(m,4H),3.25(s,3H),3.22-3.16(m,1H),3.07(s,3H),2.66-2.50(m,2H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),1.29(s,9H),1.27(s,3H),1.11(s,3H),0.94(d,J＝6.8Hz,3H)；MS,m/e(m+23)＝734。分离出113mg(2％)副产物化合物023，且用于合成化合物024。
化合物010：
向圆底烧瓶中添加009(500mg，0.702mmol)和二氯甲烷(14.0mL)，且使混合物冷却至0℃。添加三乙胺(0.29mL，2.10mmol)，接着缓慢添加甲烷磺酰氯(0.082mL，1.00mmol)。2小时后，TLC和MS检验表明反应完全，清洁且观测到所要产物。反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中，且以DCM萃取3次。合并萃取物，且经硫酸钠干燥，浓缩且接着与甲苯共沸。合理清洁无色油状粗产物010，且一般在下一反应步骤中使其未经纯化即直接遭遇亲核物质。产量555mg(100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38-6.90(m,6H),6.83(d,J＝16.4Hz,1H),6.53(m,1H),5.57-5.50(m,2H),5.38(dd,J＝10.0和10.4Hz,1H),5.00(t,J＝8.8Hz,1H),4.88(AB,2H),4.78(d,J＝11.2Hz,1H),4.61(d,J＝11.2Hz,1H),4.42(dd,J＝6.8和6.4Hz,1H),4.24-4.20(m,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.51(t,J＝5.6Hz,2H),3.30(s,3H),3.25-3.21(m,1H),3.12(s,3H),2.70-2.53(m,2H),2.20(s,3H),1.38-1.33(s与d重叠,12H),1.33(s,3H),1.16(s,3H),0.98(d,J＝6.8Hz,3H)；MS,m/e(M+23＝812)。
合成所选化合物
化合物011：
向如上文所述制备的010(554mg，0.702mmol)中添加DMF(5.44mL)和咪唑钠衍生物(1.26g，14.0mmol)。在室温下搅拌混合物整夜。TLC检验表明反应完全。在减压下移除溶剂，且使残余物在二氯甲烷(DCM)与碳酸氢盐水溶液之间分配。以DCM(3×100ml)萃取混合物，且经合并有机萃取物经硫酸钠干燥且浓缩。通过急骤色谱以10-50％EtOAc/己烷梯度和0-7％MeOH/DCM洗提纯化残余物，获得531mg(100％)呈白色泡沫体状的011。
接着使化合物011经受DDQ、戴斯-马丁氧化(Dess-Martin oxidation)相继处理，获得化合物012，且与下文化合物091的合成类似，经TFA/水和TfOH/水处理，获得呈白色粉末状的类似物013。产量：41mg(55％)。1H NMR(400MHz,10％CD3OD/CDCl3)δ:1.07(d,3H,J＝8Hz),1.29(d,3H,J＝8Hz),1.97(m,1H),2.06(m,1H),3.42(m,3H,J＝4Hz),3.85(br s,2H),3.93(m,1H),4.05(t,2H,8Hz),4.39(d,1H J＝3Hz),4.78(m,1H,J＝3Hz),5.82(m,1H,3Hz),5.89(d,1H,J＝3Hz),5.92(d,1H,J＝3Hz),6.02(dd,1H,J＝12Hz),6.13(d,1H,J＝12Hz),6.73(d,1H,J＝16Hz),6.88(d,1H,J＝16Hz),7.38(s,1H)。MS m/e:(m+1)456(5％),(m+23)478(100％)。
化合物014：
根据与化合物013的合成相同的程序，但使用N-甲基哌啶代替咪唑钠，自化合物010合成化合物014。产量18mg(30％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.15(d,2H,J＝6Hz),1.36(d,2H,J＝6Hz),1.45(t,2H,J＝6Hz),1.97(s,1H),2.08(m,1H),2.70(t,2H,J＝6Hz),2.79(s,3H)3.30(m,2H),3.48(m,2H),4.05(m,1H),4.48(d,1H,J＝4Hz),5.95(m,2H),6.12(dd,2H,J＝8Hz),6.32(d,1H,J＝8Hz),6.88(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+1)488(100％)。
化合物015：
根据与化合物013的合成相同的程序，但使用吗啉代替咪唑钠，自化合物010合成化合物015。产物为白色粉末，产量80mg(76％)。1H NMR(400MHz,C6D6)δ:0.78(d,3H,J＝8Hz),0.93(t,3H,J＝8Hz),1.00(d,3H,J＝8Hz),1.94(m,6H),2.13(m,2H),2.61(q,2H,J＝4Hz),3.46(t,4H,J＝4Hz),3.94(m,1H),4.30(d,1H,J＝3Hz),4.66(m,2H),5.41(t,1H,J＝8Hz),5.55(d,1H,J＝12Hz),5.97(m,1H),6.02(d,1H,J＝4Hz),6.22(d,1H,J＝3Hz),6.94(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+1)475(100％),(m+23)497(9％)。
化合物016：
根据与化合物013的合成相同的程序，但使用吡咯烷代替咪唑钠，自化合物010合成化合物016。产量14.6mg(47％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.14(d,3H,J＝3Hz),1.27(s,2H),1.34(d,3H,J＝3Hz),1.85,(m,4H,J＝3Hz),2.08(m,2H),2.72(m,4H),2.79(t,2H,J＝8Hz),3.31(t,2H,J＝8Hz),3.46(m,1H),4.04(m,1H),4.48(d,1H,3Hz),5.95(m,1H)5.97(d,1H,J＝4Hz),6.09(d,1H,J＝12Hz),6.14(d,1H,J＝4Hz),6.30(d,1H,J＝12Hz),6.87(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+1)459(100)。
化合物018和019：
根据与化合物013的合成相同的程序，但使用2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲胺代替咪唑钠，自化合物010制备化合物017。017经受DDQ、PCC和TFA相继处理，获得化合物018。产量32mg。MS m/e:(m+1)579。
接着以与化合物013的合成相同的方式以TfOH处理化合物018，获得化合物019(9.2mg，23％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.16(d,3H,J＝6.73Hz),1.36(d,3H,J＝6Hz),2.09(m,2H),2.65(s,1H),3.07(m,1H),3.23(m,2H),3.30(m,2H),3.40(m,4H),3.54(m,1H),3.9(m,2H),4.04(m,2H),4.48(d,1H,J＝2.4Hz),5.58(m,1H),6.06(d,1H,J＝2.4Hz),6.12(m,2H),6.19(d,1H,J＝2.4Hz),6.32(d,2H,J＝11.5Hz),6.9(d,1H,J＝16Hz)。MS,m/e:(m+23)479(100％)。
化合物022：
根据与017的合成相同的程序，但使用2-TBSO-乙胺代替2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲胺，自化合物010制备化合物020。接着使化合物020经受Boc2O、DDQ和PCC相继处理，获得021，其随后以与019的合成程序相同的方式以TFA和TfOH处理。在逆相HPLC纯化后，获得呈TFA盐形式的化合物022(5.2mg)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.18(d,3H,J＝6.75Hz),1.41(d,3H,J＝6.15Hz),2.1(m,2H),2.65(s,1H),3.15(t,2H,J＝5.25Hz),3.22(t,2H,J＝6.75Hz),3.50(m,2H),3.56(m,2H),3.63(m,2H),3.77(m,2H),3.91(s,1H),4.02(m,1H),4.49(t,1H,J＝2.4Hz),4.93(m,1H),6.01(m,1H),6.13(m,2H),6.23(s,1H),6.32(d,1H,J＝11.5Hz),6.92(d,1H,J＝15.85Hz)。MS,m/e(m+1)445(100)。
化合物024：
在009合成期间，获得副产物形式的化合物023(113mg)。化合物023接着经受与化合物013的合成相同的过程，获得类似化合物024。产量16.8mg(经3个步骤为30％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(d,J＝2.4Hz,1H),6.96(d,J＝15.2Hz,1H),6.34(d,J＝11.2Hz,1H),6.17(d,J＝10.4Hz,1H),6.10(m,1H),5.05-4.94(m,1H),4.50-4.46(m,3H),4.10-4.05(m,3H),3.56-3.49(m,1H),2.16-2.10(m,1H),1.40(d,J＝6.4Hz,3H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)；MS,m/e(M+23)＝454,(M-1)＝430。
化合物025
向化合物010(220mg，0.28mmol)中添加甲醇中的氨溶液(2M，100ml)和浓氨水溶液(22ml)。在室温下搅拌混合物整夜。将反应混合物倒入至碳酸氢盐饱和溶液(500ml)中，且以DCM萃取四次，且以乙酸乙酯萃取1次。浓缩经合并萃取物，且通过色谱纯化残余物获得100mg脲化合物(60％)。
脲化合物接着经受与化合物013的合成相同的过程，但应用PCC氧化代替戴斯-马丁氧化。以91％产率(49mg)获得化合物025。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.14(d,3H,J＝8Hz),1.38(d,3H,J＝6Hz),2.07(m,2H),2.17(m,2H),2.82(s,2H),3.18(s,1H),3.60(m,1H),4.02(m,2H),4.07(m,2H),4.52(m,2H),4.95(m,1H),5.33(s,1H),6.12(m,2H),6.25(d,1H,J＝12Hz),6.89(s,1H),6.93(d,1H,J＝3Hz),7.25(d,1H,J＝3Hz)。MS,m/e(m+23)453(100％)。
化合物029：
自008合成化合物029。化合物008经受DDQ、戴斯-马丁氧化相继处理，获得027。类似于013的合成，027接着以TFA/水和TfOH/水处理，获得呈白色粉末状的类似物029。产量：40.1mg(45％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.16(d,3H,J＝8Hz),1.20(d,1H,J＝4Hz),1.12(s,1H),1.25(t,8H,J＝8Hz),1.39(d,3H,J＝8Hz),2.04(s,8H),3.31(t,2H,J＝4Hz),3.54(m,1H),3.82(t,2H,4Hz),3.91(m,1H),4.04(m,1H),4.48(s,1H),4.86(m,1H),5.30(s,1H),5.94(m 1H),6.03(d,1H,J＝4Hz),6.09(d,1H,J＝4Hz),6.16(q,2H,J＝8Hz).6.83(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+23)428(100％)。
化合物034：
在无水乙腈(1.581mL，0.03027mol)中混合化合物009(310.0mg，0.0004355mol)、氧化银(I)(202mg，0.000871mol)和碘甲烷(542.2μl，0.008710mol)，且在密封试管中用微波加热混合物5分钟时间间隔。TLC(5％MeOH/DCM)显示反应完全。经硅藻土545过滤反应混合物，且通过色谱纯化残余物：12g Redi-Sep填充硅胶柱，使用0-5％丙酮/DCM，导致不完全分离，必需使用5％丙酮/DCM以2mm制备型板X2再纯化。重复此过程，自所要产物移除所有副产物。EtOAc/己烷共溶剂帮助自所要产物030移除所有杂质。产量：160mg(51％)。接着，根据与013的合成相同的程序，获得化合物034。产量：25mg(47％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.17(d,3H,J＝8Hz),1.26(t,1H,J＝8Hz),1.40(d,3H,J＝8Hz),2.05(s,1H),2.14(m,2H),2.62(d,1H,J＝3Hz)3.31(t,2H,J＝3Hz),3.38(s,3H),3.58(t,3H,J＝4Hz),3.86(d,1H,J＝4Hz),4.01(s,1H),4.12(q,1H,J＝4Hz),4.49(m,1H)4.53(br s,1H),4.88(m 1H),5.94(m,1H),6.03(d,1H,J＝4Hz),6.09(d,1H,J＝4Hz),6.17(m 2H),6.84(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+1)420(30％),(m+23)442(100％)。
化合物041：
009(26.9mg，0.0378mmol)和三苯膦(16.8mg，0.0642mmol)溶解于甲苯(0.40mL，3.78mmol)中。同时一次性添加碘甲烷(3.06μl，0.049mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(6.54μl，0.0416mmol)。搅拌反应混合物1.5小时，且通过TCL以15分钟时间间隔监测。搅拌反应物整夜。第二天早晨，TLC(50％EtOAc/己烷)显示产物与起始物质的1:1混合物，此通过MS确认。再添加三苯膦(16.8mg，0.0642mmol)，随后同时添加碘甲烷(3.06μl，0.0491mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(6.54μl，0.0416mmol)。以10分钟时间间隔监测反应，且仍显示大量起始物质。再添加三苯膦(16.8mg，0.0642mmol)，随后同时添加碘甲烷(3.06μl，0.0491mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(6.54μl，0.0416mmol)。通过TLC以10分钟时间间隔监测反应，且显示反应完全。进行水性处理且以MTBE萃取。有机萃取物经硫酸钠干燥且浓缩。残余物装载至4g Redi-sep柱上，且以10％乙醇/己烷洗提。通过TLC、MS和NMR确认，分离出澄清油状的化合物035。产量：31mg(100％)
使用与化合物013的合成所用相同的程序，向035添加氨基-聚醚部分，产生化合物036。通过NMR、MS和TLC验证产物结构。产量：150.2mg(61％)。
在氮气氛围下，向烘干圆底烧瓶中添加036(174.5mg，0.0002036mol)，随后添加四氢呋喃(1.651mL，20.36mmol)和二碳酸二叔丁酯(222.2mg，1.018mmol)和4-二甲基氨基吡啶(4.97mg，0.0407mmol)。搅拌反应物1小时，且通过TLC和MS测得反应完全。反应混合物以水稀释，且以MTBE萃取，经硫酸钠干燥且浓缩。用red-sep柱以0-5％MeOH/DCM洗提纯化残余物(化合物037)。产量：162.3mg(83％)。
对化合物037进行与化合物013的合成所用相同的程序，从而获得最终聚醚产物041。产量：43.2mg(80％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.15(d,3H,J＝7Hz),1.37(d,3H,J＝7Hz),2.05(s,1H),2.07(m,2H),3.05(t,2H,J＝3Hz),3.08(t,2H,J＝3Hz),3.36(s,3H),3.38(m,2H),3.54(m,2H),3.64(m,8H),3.69(m,2H),4.03(s,1H),4.18(q,1H,J＝7.1Hz),4.47(d,1H,J＝3Hz),4.84(m,1H),5.40(s,1H),5.99(m,1H),6.00(d,1H,J＝3Hz),6.12(m,4H),6.79(d,1H,J＝16Hz)。MS m/e:(m+1)551(100％),(m+23)573(10％)。
化合物042
向250ml圆底烧瓶中添加二氯甲烷(4ml)和二氯甲烷中的乙二酰氯溶液(2.0M，2.1ml)。使溶液冷却至-78℃且添加DMSO。搅拌5分钟后，添加二氯甲烷中的009(0.05M，55ml，2.75mmol)。再搅拌30分钟后，添加三乙胺(2.3ml)且使反应混合物经45分钟升温至0℃。将混合物倒入至碳酸氢钠饱和水溶液中。分离各层，且水层使用二氯甲烷反萃取3次。经合并有机萃取物以硫酸钠干燥且浓缩。
在200ml圆底烧瓶中混合上述粗醛产物(1.95g)与叔丁醇(52ml)。经注射器和针向其中添加2-甲基-2-丁烯、亚氯酸钠(2.5g)、磷酸氢钾(1.8g)和水(25ml)。在室温下搅拌反应混合物1小时。添加硫代硫酸钠水溶液(150ml)和乙酸乙酯(150ml)，且搅拌混合物1小时。分离各层，且使水层冷却至0℃，使用1N HCl酸化至约3的pH值，且使用乙酸乙酯反萃取3次。经合并有机萃取物以蒸馏水洗涤3次，以硫酸钠干燥且浓缩，经2个步骤获得1.8g(90％)。如上文流程中所示，自042合成四种类似物。
化合物045：
向10ml圆底烧瓶中添加化合物042(316mg)、二甲铵-OOBt盐(370mg)、HBTU(672mg)、三乙胺(0.43ml)和二氯甲烷(3ml)且在室温下搅拌混合物整夜。反应混合物倒入碳酸氢钠饱和水溶液中，且使用二氯甲烷萃取3次。以硫酸钠干燥经合并萃取物，且通过Biotage色谱纯化获得320mg(98％)043。化合物043接着经受与化合物013的合成相同的程序，获得化合物045。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.88(d,J＝15.2Hz,1H),6.32(d,J＝11.6Hz,1H),6.19(d,J＝2.4Hz,1H),6.12(dd,J＝11.6和10.0Hz,1H),6.02-5.95(m,1H),5.96(d,J＝2.4Hz,1H),4.48(d,J＝2.0Hz,1H),4.06-4.03(m,1H),3.99(s,2H),3.50-3.43(m,1H),3.07(s,3H),2.97(s,3H),2.16-2.02(m,2H),1.36(d,J＝6.4Hz,3H),1.15(d,J＝7.2Hz,3H)；MS m/e:(M+23)＝469。
化合物046：
化合物046的合成与合成045相同，但使用甲基铵-OOBt盐代替二甲基铵-OOBt。MSm/e:(M+23)＝455。
化合物047：
化合物047的合成与045的合成相同，但使用铵-OOBt盐代替二甲基铵-OOBt，且使用氯铬酸吡锭(PCC)代替戴斯-马丁试剂。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.89(d,J＝15.2Hz,1H),6.31(d,J＝11.2Hz,1H),6.16(d,J＝2.4Hz,1H),6.12(dd,J＝11.2和9.6Hz,1H),6.02-5.94(m,1H),5.92(d,J＝2.4Hz,1H),4.48(d,J＝2.0Hz,1H),4.06-4.03(m,1H),3.77(s,2H),3.50-3.43(m,1H),2.16-2.02(m,2H),1.35(d,J＝6.0Hz,3H),1.15(d,J＝7.2Hz,3H)；MS m/e:(M+23)＝441。
化合物048：
化合物042经受与化合物013的合成相同的程序，获得8.5mg(58％)化合物048。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.16(d,3H,J＝6.75Hz),1.36(d,3H,J＝5.86Hz),2.0(s,2H),2.10(m,2H),3.3(m,1H),3.47(m,1H),3.64(s,1H),3.87(s,2H),4.05(m,1H),4.09(d,1H,J＝7Hz),4.12(m,1H),4.48(d,1H,J＝2.40Hz),5.91(d,1H,J＝2.40Hz),5.97(m,1H),6.10(m,1H),6.12(m,1H),6.16(d,1H,J＝3Hz),6.32(d,1H,J＝12Hz),6.89(d,1H,J＝15.5Hz)。MSm/e:(m-1)418(100％)。
化合物054：
化合物009(200mg，0.00028mol)溶解于二氯甲烷(1.44mL，0.0225mol)中。添加二烯丙基二异丙基亚磷酰胺(172mg，0.000702mol)和三氟乙酸吡锭(136mg，0.000702mol)。在20-25℃下搅拌反应混合物。使反应物冷却至约0-5℃，且添加水中的30％H2O2(3:7，H2O2:水，0.14mL)。15分钟后，TLC(MTBE)显示中间体消失。向反应物中添加水(1.98mL，0.1101mol)，且产物以MTBE萃取3次。干燥有机相，且接着在旋转蒸发器(rotavap)上浓缩成粗无色膜。用4g redi-sep柱以0-10％丙酮/DCM洗提纯化产物(化合物049)。产量：242mg(99％)。049的DDQ脱除保护基与化合物013的合成中相同，获得201mg(97％)化合物050。
在氮气氛围下，向圆底烧瓶中添加溶解于四氢呋喃(4mL)中的化合物050(100.5mg，0.134mmol)，随后添加四(三苯膦)钯(0)(31mg，0.027mmol)、硅烷、苯基膦(99.0μL，0.000802mol)和三苯基膦(42mg，0.00016mol)。搅拌混合物60分钟，且以15分钟时间间隔监测反应物，直至TLC(1:1Maigic)显示反应完全。在真空下移除溶剂。残余物溶解于2:3:1溶剂系统中，且装载至1"直径柱中的DEAE树脂上。以2:3:1溶剂系统冲洗树脂，移除所有催化剂和非极性材料。在滤液变澄清后，使用0.04M乙酸铵继续洗涤树脂，且洗提产物(化合物051)。乙酸铵浓度升至0.1M，从而自树脂分离剩余产物。收集含有产物的部分，且浓缩成残余物；烧瓶置于高度真空下，且加热至40℃以移除所有痕量乙酸铵。产量：94.3mg(100％)。
合成化合物054的剩余程序与类似物化合物013类似，但如上文关于化合物051所示，以DEAE树脂完成054的处理和纯化。1H-NMR、31P-NMR和MS验证结构。产物054呈游离形式。产量7.0mg(30％)；1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.15(d,3H,J＝6.75Hz),1.36(d,3H,J＝5.9Hz),2.10(m,2H),3.3(m,2H),3.45(m,1H),4.01(q,2H,J＝6Hz),4.06(m,2H),4.48(d,1H,J＝3Hz),5.93(d,1H,J＝3Hz),5.98(m,1H),),6.12(m,1H),6.18(d,1H,J＝3Hz),6.32(s,1H,J＝12Hz),6.87(s,1H,J＝16Hz)。31P NMR(400MHz,CD3OD)δ:2.60(s,IP)。MS m/e:(m-1)484
化合物065：
如上文所示，以与化合物006的合成类似的方式合成化合物055。在室温下向055(5.3g，7.95mmol)和2,6-二甲基吡啶(2.3ml，19.87mmol)的溶液中逐滴添加TBSOTf(2.19ml，9.54mmol)。反应混合物以碳酸氢钠水溶液中止，且以乙酸乙酯萃取水相。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的5-10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得5.26g所要产物(化合物056)。
在室温下向甲醇(100ml)中的056(5.26g，6.73mmol)中添加K2CO3(1.86g)。搅拌反应混合物2小时，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得2.48g所要产物057。
在0℃下，向二氯甲烷(20ml)中的057(2.48g，3.56mmol)和吡啶(0.86ml)中逐滴添加Tf2O(0.72ml)。使反应混合物升温至室温，且搅拌2小时。以NaHCO3水溶液中止反应。以乙酸乙酯萃取水层，且以MgSO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的5-10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得2.77g所要产物058。
将化合物058(1.74g，2.1mmol)、化合物059(0.62g)和(外消旋)-BINAP(196.1mg)称量至100ml圆底反应烧瓶中且以甲苯共沸干燥。在干燥箱中将Pd(OAc)2(47.1mg)和Cs2CO3(821.1mg)称量至反应烧瓶中。自干燥箱移出烧瓶，且添加经脱气甲苯(20ml)。将反应混合物加热至80℃历时15小时，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的5-10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得1.64g所要产物060。
通过将咪唑HCl(659.0mg)溶解于TBAF(THF中1.0M，12.6ml)中来制备经缓冲TBAF。将060(1.67g)于经缓冲TBAF中的溶液加热至60℃且搅拌60小时。用NH4Cl水溶液中止反应。以乙醚萃取水相。合并有机物，且以Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10-30％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得0.80g所要产物061。
在0℃下，向t-BuOK(1.31ml，THF中1.0M)于THF(9ml)中的溶液中缓慢添加THF(3ml)中的化合物061(710mg，0.87mmol)，且接着以2ml THF冲洗。完成起始物质的添加后，在0℃下添加THF(2ml)中的TBSCl(138.7mg)。在20分钟内中止反应，且以AcOEt萃取水相。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得401.3mg所要产物(化合物062)。
向二氯甲烷和水(10ml，4:1混合物)中的062(401.3mg，0.46mmol)中添加DDQ(128.0mg)，且在室温下搅拌2小时。以Na2SO3和NaHCO3水溶液中止反应。以AcOEt萃取水性材料。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得335.4mg所要产物063。
在室温下，向二氯甲烷(8ml)中的063(335.4mg，0.45mmol)和吡啶(54.4μl)中添加戴斯-马丁高碘烷(259.2mg)。搅拌反应混合物1小时，且以NaHCO3水溶液中止。以AcOEt萃取水性材料。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得232.5mg所要产物064。
在0℃下，向甲苯/水(1ml/0.035ml)中的064(47.1mg，0.063mmol)中添加CF3SO3H(16.8μl)。搅拌反应混合物1.5小时，且升温至室温。再添加TfOH(16.8μl)，且在5分钟内以NaHCO3饱和水溶液中止反应。以AcOEt萃取水相。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以二氯甲烷中的10％甲醇洗提纯化残余物，获得7.4mg所要产物065。1HNMR(CD3OD):6.92,(d,J＝15.6Hz,1H),6.36,(s,1H),6.35(s,1H),6.34(d,J＝11.6Hz,1H),6.32(d,J＝15.2Hz),6.13(dd,J＝11.6,10.0Hz,1H),6.04-5.96(m,1H),4.96-4.86(m,1H),4.48(d,J＝2.0Hz,1H).4.08-4.02(m,1H),3.95-3.87(m,2H),3.86-3.79(m,1H),3.64-3.53(m,2H),3.52-3.43(m,1H),2.18-2.02(m,2H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H),1.16(d,J＝7.2Hz.3H)。
化合物069：
向圆底烧瓶中添加057(2.331g，0.003345mol)、三苯膦(1.14g，0.00435mol)和四氢呋喃(13.6mL，0.167mol)。在氮气氛围下，使混合物冷却至0℃。添加咪唑乙醇部分(0.450g，0.00401mol)，随后添加偶氮二甲酸二乙酯(0.685mL，0.00435mol)。在搅拌下使反应物缓慢升温至室温。TLC测试揭示浓产物点以及一些未反应起始物质。使反应物冷却至0℃，且再添加0.2当量胺、三苯膦和DEAD。移除冰浴，且使反应物升温至室温。30分钟后，TLC显示反应完全，且所有起始物质都被消耗。在高度真空下移除所有溶剂。将残余物溶解于MTBE中，使混合物在冰浴中冷却，且滤出一些磷酸三苯酯。以40g柱使用0-5％MeOH/DCM纯化残余物。合并含有化合物066的产物部分，且浓缩成残余物。产量：3.65g(100％)。
使用具有咪唑盐酸盐的经缓冲TBAF移除TBS保护基，化合物067的总产量为约2.0g(90％)。
使用与化合物007的合成中所用相同的程序，自067制备化合物068。合并所有批次，总产量为467mg(50％)。
中间体化合物068以DDQ脱除保护基，接着以戴斯-马丁试剂氧化，且以TfOH脱除保护基，获得产物(化合物069)(100mg)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)d 1.19(d,J＝7.2Hz,3H),1.43(d,J＝6.0Hz,3H),2.10-2.25(m,2H),3.58-3.65(m,1H),4.00-4.03(m,1H),4.22(t,J＝5.2Hz,2H),4.34(t,J＝5.2Hz,2H),4.50(d,J＝2.4,1H),4.88-4.95(m,1H),5.96-6.03(m,1H),6.14(dd,J＝9.6,11.2Hz,1H),6.22(d,J＝11.6,1H),6.33(d,J＝2.4Hz,1H),6.37(d,J＝2.8Hz),6.86(d,J＝15.6Hz,1H),7.03(s,1H),7.08(s,1H),12.17(s,1H)。
化合物076：
将如上文合成的化合物058(459.7mg，0.55mmol)、化合物070(104.6mg)和(外消旋)-BINAP(51.8mg)称量至25ml圆底反应烧瓶中且以甲苯共沸干燥。在干燥箱中将Pd(OAc)2(12.4mg)和Cs2CO3(216.8mg)称量至反应烧瓶中。自干燥箱移出烧瓶，且添加经脱气甲苯(3ml)。将反应混合物加热至80℃历时60小时，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的5-10％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得247.5mg所要产物(化合物071)。
通过将咪唑HCl(108.3mg)溶解于TBAF(THF中1.0M，2.1ml)中来制备经缓冲TBAF。将071(247.5mg，0.3mmol)于经缓冲TBAF中的溶液加热至60℃且搅拌36小时。用NH4Cl水溶液中止反应。以乙醚萃取水性材料。合并有机物，且以Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过SiO2急骤柱色谱以己烷中的10-20％乙酸乙酯洗提纯化残余物，获得116.6mg所要产物(化合物072)。
在0℃下向t-BuOK(0.24ml，THF中1.0M)于THF(2ml)中的溶液中缓慢添加THF(1ml)中的072(116.6mg，0.16mmol)，且以2ml THF冲洗。完成起始物质的添加后，在0℃下添加THF(2ml)中的TBSCl(25.6mg)。在20分钟内中止反应，且以AcOEt萃取水性材料。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过以己烷中的30％乙酸乙酯显色的pTLC纯化残余物，获得40.0mg所要产物(化合物073)。
向二氯甲烷和水(2ml，4:1混合物)中的化合物073(40.0mg，0.051mmol)中添加DDQ(14.2mg)，且在室温下搅拌整夜。以Na2SO3和NaHCO3水溶液中止反应。以AcOEt萃取水相。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过以己烷中的20％乙酸乙酯显色的pTLC纯化残余物，获得25.0mg所要产物(化合物074)。
在室温下，向二氯甲烷(2ml)中的化合物074(25.0mg，0.038mmol)和吡啶(6.1μl)中添加戴斯-马丁高碘烷(31.0mg)。搅拌反应混合物5小时，且以NaHCO3水溶液中止。以AcOEt萃取水相。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过以己烷中的30％乙酸乙酯显色的pTLC纯化残余物，获得24.0mg所要产物(化合物075)。
在0℃下，向甲苯/水(1ml/0.035ml)中的化合物075(24.0mg，0.037mmol)中添加CF3SO3H(19.4μl)。搅拌反应混合物10分钟，且升温至室温。在1小时内，以NaHCO3饱和水溶液中止反应。以AcOEt萃取水性材料。合并有机物，且经Na2SO4干燥。过滤经干燥溶液，且在真空中浓缩。通过以二氯甲烷中的10％甲醇显色的pTLC纯化残余物，获得2.4mg所要产物(化合物076)。1HNMR(CDCl3):6.86(d,J＝15.2Hz,1H),6.29(d,J＝2.8Hz,1H),6.26-6.12(m,3H),5.99-5.90(m,1H),4.94-4.84(m,1H),4.56-4.46(m,2H),4.06-3.98(m,1H),3.84(d,J＝5.6Hz,1H),3.65-3.54(m,1H),2.50-2.42(m,2H),2.24-2.08(m,2H),1.42(d,J＝6.0Hz,3H),1.26(t,J＝7.2Hz,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),0.82-0.76(m,2H),0.56-0.51(m,2H)。
化合物081：
在0℃下，向化合物077a、Ph3P和2-TMS-乙醇于甲苯中的溶液中添加DEAD。在室温下搅拌混合物1小时，随后以NaHCO3水溶液中止反应。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，获得077b。
在0℃下，向077b(2.1g，7.4mmol)和DBU(7.1mL，48mmol)于10mL CH2Cl2中的溶液中添加MOM-Cl(2.8mL，37mmol)。在室温下搅拌混合物15分钟，随后以NaHCO3洗涤有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，自硅胶塞以74％产率获得化合物078(1.8g，5.5mmol)。
在-5℃下，向二异丙胺于THF中的搅拌溶液中逐滴引入己烷中的2.5M n-BuLi。在0℃下搅拌溶液30分钟，随后使其冷却至-78℃。向冷LDA中缓慢添加THF中的化合物078，使得内部温度保持低于-78℃。在-78℃下搅拌混合物45分钟，且接着缓慢添加THF中的(PhSe)2，使得内部温度保持低于-60℃。搅拌反应混合物40分钟，随后在-78℃下以NH4Cl水溶液中止反应。在室温下向混合物中添加EtOAc。分离后，干燥(Na2SO4)有机层且浓缩。使用甲苯中的5％EtOAc自硅胶柱洗提079。
向EtOH中的079中添加2.5N NaOH。使混合物回流12小时，随后将其酸化，且以EtOAc萃取。干燥(Na2SO4)有机相且浓缩获得固体080。在0℃下，向080、Ph3P和2-TMS-乙醇于甲苯中的溶液中添加DEAD。在室温下搅拌混合物1小时，随后以NaHCO3中止反应。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，获得化合物081。
化合物087：
向化合物081和082于10:1THF-HMPA中的冷(-78℃)溶液中逐滴引入THF中的LiHMDS。在添加期间，保持内部温度低于-70℃。在-78℃下搅拌混合物约30分钟，随后以NH4Cl水溶液中止反应且以EtOAc稀释。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化以82％产率获得083(1.9g，1.6mmol)。
向083于CH2Cl2中的冷(0℃)溶液中分三份添加m-CPBA(1.0g，4.2mmol)。在0℃下搅拌混合物1小时，随后添加Et3N。在室温下搅拌反应混合物1小时后，以Na2S2O3水溶液中止反应且以NaHCO3水溶液稀释。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，获得化合物084。
在以0.33摩尔当量咪唑·HCl缓冲的TBAF溶液中引入084于THF中的溶液。在50℃下搅拌混合物12小时，随后以Et2O稀释，且以NH4Cl水溶液洗涤。干燥(Na2SO4)有机相，且浓缩获得粗085，将其溶解于CH2Cl2中，且逐滴添加至碘化2-氯-1-甲基吡锭和n-Bu3N于CH2Cl2中的回流混合物中。使混合物回流2小时，随后以Et2O稀释且以0.05N HCl、H2O和NaHCO3洗涤。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，获得化合物086。
向086(0.87g，1.3mmol)于7mL THF中的溶液中引入THF中的TBAF(7.0mL，7.0mmol)。在室温下搅拌混合物4小时，随后以Et2O稀释，且以盐水洗涤。干燥(Na2SO4)有机相，浓缩且通过硅胶色谱纯化，以经3个步骤58％的产率获得化合物087(0.43g，0.78mmol)。
化合物091：
在0℃下，向087(0.95g，1.7mmol)和Et3N(0.58ML，4.2mmol)于20ML CH2Cl2中的溶液中添加Tf2O(0.42ML，2.5mmol)。搅拌混合物10分钟，随后添加NaHCO3水溶液。水层以CH2Cl2萃取2次。浓缩有机相且使其通过短硅胶塞(20％EtOAc/己烷)。
在干燥箱中向如此获得的三氟甲磺酸酯中添加Pd(OAc)2(19mg，0.08mmol)、BINAP(64mg，0.10mmol)和Cs2CO3(0.66g，2.0mmol)。在氮气下添加二苯甲酮亚胺(0.32ML，1.9mmol)和30mL甲苯，随后在90℃下加热混合物14小时。接着以EtOAc和盐水稀释混合物。干燥(Na2SO4)有机层且浓缩。
所得粗材料溶解于8mL MeOH和5mL THF中，随后在室温下添加NaOAc(0.56g，6.8mmol)和NH2OH·HCl(0.24g，3.4mmol)。50分钟后，添加EtOAc和盐水。干燥(Na2SO4)有机层，浓缩且以硅胶(30EtOAc/己烷)纯化，产生结晶化合物088(0.88g，1.6mmol)。
在-55℃至-50℃下，向088(0.88g，1.6mmol)于16mL THF中的溶液中缓慢添加LiHMDS(THF中1N，8.0mmol)。在-45℃下搅拌混合物5分钟，随后添加BOC2O(0.38mL，1.8mmol)。在-40℃下搅拌混合物30分钟后，添加MeI(0.60mL，9.6mmol)。10分钟后，使混合物升温至室温历时2小时。使混合物冷却至-35℃，且添加72mL 1N NaOH和48mL EtOH。在45℃下加热12小时后，以100mL水和150mL CH2Cl2稀释混合物。水层以50mL CH2Cl2萃取2次。浓缩有机层且通过硅胶色谱(30％EtOAc/己烷)纯化，获得无色凝胶089(0.58g，1.0mmol)。
在室温下搅拌化合物089(0.40g，0.71mmol)、PCC(0.46g，2.1mmol)、4A分子筛(0.50g)和硅藻土(0.50g)于8ML CH2Cl2中的悬浮液2.5小时，随后添加Et3N(0.29ML，2.1mmol)。5分钟后，添加30mL Et2O，且过滤混合物。浓缩滤液，且使其通过短硅胶塞(75％EtOAc/己烷)，获得无色结晶090(0.35g，0.63mmol)。
在-35℃下，向化合物090(0.35g，0.63mmol)于CH2Cl2中的溶液中缓慢添加TFA(5％水，6ML)。在-20℃下搅拌混合物1小时，随后添加NaHCO3饱和水溶液(PH约8)和CH2Cl2。水层以CH2Cl2萃取2次。干燥(Na2SO4)有机层，浓缩且通过硅胶色谱(75％EtOAc/己烷)纯化，以经8个步骤25％的总产率获得化合物091(124mg，0.33mmol)。NMR:1H-NMRδ(苯-d6)0.80(d,J＝6.8Hz,3H,C4-CH3),1.02(d,J＝6.0Hz,3H,C3-CH3),2.07(d,J＝5.1Hz,3H,NCH3),2.11(m,2H,10-CH2),2.26(d,J＝11.3Hz,1H,C9-OH),3.06(m,1H,NH),3.44(m,1H,4-CH),3.82(d,J＝5.1Hz,1H,C8-OH),3.89(ddt,J1＝11.3Hz,J2＝2.8Hz,J3＝7.0Hz,1H,9-CH),4.22(dd,J1＝2.6Hz,J2＝5.1Hz,1H,8-CH),4.67(dq,J1＝6.0Hz,J2＝10.4Hz,1H,3-CH),5.40(dd,J1＝9.6Hz,J2＝11.3Hz,1H,5-CH),5.48(d,J＝11.3Hz,1H,6-CH),5.85(d,J＝2.3Hz,1H,芳香族CH),6.00(dt,J1＝15.2Hz,J2＝7.5Hz,1H,11-CH),6.13(d,J＝2.3Hz,1H,芳香族CH),6.98(d,J＝15.4Hz,1H,12-CH),13.03(s,1H,酚)。MS:398(M+Na,100％)。
化合物092：
向化合物091(16mg)于CH3CN中的溶液中添加DMAP(20mg)。接着在60℃下搅拌溶液3小时，且接着在室温下搅拌12小时。用硅胶纯化粗混合物，且以60％EtOAc/己烷洗提所要产物092(13mg)。1HNMR(苯-d6):6.79(2H,dd,J1＝16.0Hz,J2＝5.95Hz)；6.09(1H,d,J＝2.3Hz)；5.92(1H,dd,J1＝16.0Hz,J2＝1.4Hz)；5.82(1H,m)；5.81(1H,d,J＝2.3Hz)；4.98(1H,m)；4.42(1H,m)；3.97(1H,m)；3.80(1H,d,J＝5.7Hz)；3.04(1H,m)；2.37(2H,m)；2.04(3H,d,J＝5.7Hz)；2.04(1H,m)；1.67(1H,m)；0.86(3H,d,J＝7.1Hz)；0.56(3H,d,J＝7.1Hz)。应注意，2个烯酮烯烃氢的偶合常数由091中的11Hz变为092中的16Hz。
化合物106：
向093(165.9g，265mmol)于2.65L己烷中的溶液中添加喹啉(2.65mL)和林德拉催化剂(Lindlar catalyst)(28.2g，13.3mmol，0.05当量)。混合物在真空下重复脱气，且再装入氮气(3×)和氢气(3×)。氢化器的氢气摄入设定为0.114mol，且通过MS/1H NMR监测反应。反应进行整夜后，过滤悬浮液，且再装入催化剂和氢气。3天后，经硅藻土过滤反应物。浓缩滤液，且用硅胶纯化获得104g呈油状的094。
在0℃下，以注射泵经2小时向094(67.4g，107mmol)的溶液中缓慢添加MPMCl(21.9mL，161mmol，1.5当量)和NaHMDS于THF中的1M溶液(140mL，140mmol，1.3当量)。在0℃下搅拌混合物1.5小时后，在0℃下以饱和NH4Cl中止反应且升温至室温。混合物以EtOAc萃取3次，且萃取物以水和盐水洗涤，且接着干燥且浓缩。用硅胶纯化粗产物，定量获得095。
将095(119.6g，160mmol)溶解于甲醇中的10％NaOH(3.2L，v/v)与3.5mL水的混合物中。在45℃下加热反应物48小时。冷却后，以9L CH2Cl2稀释，以水洗涤2次，以饱和NH4Cl洗涤1次，且以盐水洗涤1次，且接着干燥且浓缩。用硅胶以10％-25-35％EtOAc/己烷纯化粗产物获得096(78g，96％产率)。
向(COCl)2(25mL，295mmol，2当量)于CH2Cl2(870mL)中的溶液中缓慢添加DMSO(41.85mL，590mmol，4当量)。在-78℃下搅拌30分钟后，经45分钟添加096(75g，147.4mmol)于CH2Cl2(160mL)中的溶液。在-78℃下搅拌混合物45分钟后，在相同温度下添加Et3N(82.2mL，590mmol，4当量)。再搅拌反应物30分钟后，使其温至0℃历时1.5小时。以750mL饱和NH4Cl中止反应，且以EtOAc萃取3次。干燥萃取物且浓缩。以2.5L EtOAc/己烷1:1溶液再悬浮粗产物，以水洗涤3次且以盐水洗涤1次，且接着干燥且浓缩。粗产物097直接用于下一步骤中。
在0℃下，向Ph3PCH3Br(115.8mL，324.3mmol，2.2当量)于THF(870mL)和DMSO(433.6mL)的混合物中的悬浮液中添加n-BuLi(184.3mL 1.6M溶液，294.8mmol，2当量)。搅拌1小时后，在0℃下添加097的溶液(175mL THF中74.7g，147.4mmol)。30分钟后，使其升温至室温。2小时后，以1.1L饱和NHCl4中止反应，且以EtOAc萃取3次。以水和盐水洗涤萃取物，且接着干燥且浓缩。用硅胶以5-10％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得66.5g呈油状的098(89％产率)。
在干燥箱中向098(2.5g，4.95mmol)和三氟甲磺酸酯003(2.7g，6.4mmol，1.3当量)的混合物中添加Pd2(dba)3(1.36g，1.48mmol，0.3当量)。自干燥箱移出混合物后，将其悬浮于8.3mL二恶烷中，且添加N-甲基N-二环己胺(2.1mL，9.9mmol，2当量)。在剧烈搅拌下，在100℃下加热反应物12小时。冷却后，添加6g硅藻土且以EtOAc稀释。经硅藻土塞过滤混合物且以EtOAc冲洗。浓缩滤液。用硅胶以10-20％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得3g纯099(76％产率)。
在0℃下，向099(46.3g，58.16mmol)于DMPU(291mL)中的溶液中添加LiHMDS(116mLTHF中的1M溶液，116.3mmol，2当量)。在相同温度下搅拌混合物40分钟后，添加EtI(27.9mL，349mmol，6当量)。5分钟后，使混合物升温至室温。搅拌混合物3小时后，在0℃下以1L饱和NHCl4中止反应。以MTBE/己烷(1:1)萃取混合物。以盐水洗涤萃取物，且接着干燥且浓缩。用硅胶以15-20％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得40g所要产物100(84％产率)。
向100(48g，58.2mmol)的230mL溶液中添加TBAF(407mL 1M溶液，407mmol，7当量)和咪唑.HCl(21.3g，203.9mmol，3.5当量)的溶液。在60℃下加热反应物72小时。使混合物冷却至室温后，以饱和NH4Cl中止反应且以乙醚萃取3次。以水和盐水洗涤有机层，且接着干燥且浓缩。用硅胶以20-30％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得31.4g(76％产率)101。
通过注射泵经120分钟向101(20.3g，28.6g)于3L THF中的溶液中缓慢添加0.5MKHMDS溶液(60mL，30mmol，1.05当量)。搅拌混合物5分钟后，以1.5L饱和NH4Cl中止反应。以乙醚萃取混合物3次。以盐水洗涤萃取物，且接着干燥且浓缩。用硅胶以10-20％-50％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得14.2g 102(76％产率)。
向102(19g，29.15mmol)于DMF(194mL)中的溶液中添加咪唑(4g，58.3mmol，2当量)和TBSCl(5.27g，35mmol，1.2当量)。搅拌混合物整夜后，以NaHCO3饱和溶液和水中止反应。以AcOEt萃取混合物。以水和盐水洗涤有机层，且接着干燥且浓缩。用硅胶柱纯化粗产物，获得22g(99％产率)103。
在0℃下，向103(22g，28.7mmol)于CH2Cl2(230mL)与H2O(57.4mL)的混合物中的溶液中添加DDQ(9.78g，43mmol，1.5当量)。搅拌混合物2小时后，以1L NaHCO3饱和水溶液和10％Na2S2O3水溶液的1:1混合物中止反应。以乙醚萃取混合物3次。以盐水洗涤萃取物，且接着干燥且浓缩。用硅胶纯化粗产物，获得18.1g 104。
向104(18g，27.9mmol)于279mL CH2Cl2中的溶液中添加干燥分子筛(18g)和PCC(18g)。搅拌混合物90分钟后，以Et3N(19.45mL)中止反应。经硅藻土塞过滤反应混合物，且塞子以己烷中的75％EtOAc(900mL)冲洗。浓缩滤液。用硅胶柱以10-15-20％EtOAc/己烷纯化粗产物，获得14.6g(81％)105。
在2L烧瓶中，将105(8.5g，13.2mmol)溶解于CH2Cl2(82.5mL)中，且使混合物冷却至0℃。缓慢添加5％H2O/TFA(4.1/78.1mL)溶液(约30分钟)，且在0℃下搅拌混合物14.5小时。通过TLC监测反应。在0℃下以CH2Cl2稀释反应混合物。接着以NaHCO3于水(相较于TFA为约1.2当量)中的溶液中止反应。使反应物冷却至室温，且以CH2Cl2萃取3次，经Na2SO4干燥。接着过滤溶液且浓缩。硅胶色谱(50-60-75％EtOAc/己烷)获得106：4.8g，93％产率。NMR:1H-NMRδ(苯-d6)0.65(t,J＝7.2Hz,3H,NCH2 CH 3,0.81(d,J＝7.0Hz,3H,C4-CH3),1.03(d,J＝6.0Hz,3H,C3-CH3),2.12(m,2H,10-CH2),2.35(d,J＝10.9Hz,1H,C9-OH),2.52(dt,J1＝5.3Hz,J2＝7.2Hz,2H,NCH 2CH3),3.22(t,J＝5.1Hz,1H,NH),3.44(m,1H,4-CH),3.89(m,2H,9-CH和C8-OH),4.24(dd,J1＝2.4Hz,J2＝4.8Hz,1H,8-CH),4.67(dq,J1＝6.0Hz,J2＝10.4Hz,1H,3-CH),5.40(dd,J1＝9.7Hz,J2＝11.4Hz,1H,5-CH),5.49(d,J＝11.5Hz,1H,6-CH),5.84(d,J＝2.3Hz,1H,芳香族CH),6.01(m,1H,11-CH),6.17(d,J＝2.5Hz,1H,芳香族CH),6.97(d,J＝15.2Hz,1H,12-CH),13.05(s,1H,酚)。
化合物114：
在0至-5℃下向003(2.914g，6.60mmol)于1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(20.0mL，0.166mol)中的溶液中添加双(三甲基硅烷)胺化锂(8.0mL，THF中1.0M)。在零下温度(cold)下搅拌反应混合物30分钟后，向溶液中添加3-碘-1-丙烯(0.74mL，7.9mmol)。使所得溶液升温至室温，且搅拌4小时。以乙醚稀释反应混合物，添加10.0ml 1.0N HCl，以乙醚萃取。以饱和碳酸氢盐(30mL)和盐水(20mL)洗涤经合并乙醚溶液，且以MgSO4干燥。以10、15％EtOAc/己烷色谱纯化，获得呈白色固体状的化合物107(2.4g，75％)。
在室温下，向化合物107于t-BuOH:THF:水(100.0mL，t-BuOH:THF:水＝10:3:1)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(0.79g，6.7mmol)和四氧化锇(1.70g，0.167mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时后，缓慢进行反应。向反应混合物中再添加四氧化锇(4.71g，0.463mmol)。在室温下搅拌反应混合物整夜。以EtOAc(250mL)稀释反应混合物，且添加硫代硫酸钠(10％，150mL)。以EtOAc(2×250ml)萃取反应混合物的水相，干燥且浓缩。蒸发溶剂，获得化合物108(1.8g，70％)。
向108于丙酮(20mL)中的溶液中添加2,2-二甲氧基丙烷(2.0mL，0.016mol)和PTS(110mg)。在室温下搅拌反应混合物30分钟。接着以EtOAc(50mL)稀释反应混合物，以5％NaOH(40mL)洗涤。以EtOAc(3×50mL)萃取水相。浓缩经合并有机溶剂。色谱纯化(20-30％EtOAc/己烷)获得呈油状的化合物109(1.63g，84％)。
向10ml烧瓶中添加化合物005(0.9624g，0.002464mol)和109(1.45g，0.00261mol)，在高度真空下干燥混合物。向混合物中添加三(二亚苯甲基丙酮)二钯(0)(0.677g，0.000739mol)，且添加N-甲基吡咯烷酮(2.50mL，0.0259mol)和N-环己基-N-甲基-环己胺(1.06mL，0.00493mol)。在80℃下搅拌反应混合物整夜。使反应物冷却至室温，且以TBME稀释。以1N HCl、盐水洗涤有机溶液，且在减压下浓缩。色谱纯化(20％EtOAc/己烷)获得化合物110(1.73g，88％)。
在0℃下，通过注射泵向50mL圆底烧瓶中的1.0M叔丁醇钾(3.2mL，3.2mmol)于THF(10.0mL)中的溶液中添加化合物110(1.72g，2.16mmol)于THF(5.0mL)中的溶液。在添加化合物110后将反应混合物搅拌10分钟，且在0℃下以THF(5.0mL)中的叔丁基二甲基硅烷基氯(490mg，0.0032mol)中止。以水稀释反应混合物，且以EtOAc萃取。色谱纯化(20％EtOAc/己烷)获得化合物111(0.64g，35％)。
在0℃下，向111(0.65g，0.00076mol)于DCM(8.0mL)中的溶液中添加水(2.0mL)和2,3-二氯-5,6-二氰基氢醌(0.245g，0.00106mol)。在室温下搅拌反应混合物3小时。在检验TLC(30％EtOAc/己烷)后，以饱和碳酸氢盐中的硫代硫酸钠中止反应。以TBME萃取反应混合物，干燥且浓缩。色谱纯化(20％-40％EtOAc/己烷)获得化合物112(0.557g，100％)。
在0℃下，向化合物112(111.2mg，0.0001519mol)于DCM(1.0mL)中的溶液中添加吡啶(18μl，0.00023mol)和戴斯-马丁高碘烷(0.077g，0.00018mol)。在0℃下搅拌反应混合物30分钟，TLC仍检测到一些起始物质。接着使反应混合物升温至室温，且搅拌30分钟。接着以30％EtOAc/己烷稀释反应混合物，经硅塞过滤所得溶液，且以30％EtOAc/己烷洗涤。色谱纯化(30％EtOAc/己烷)获得化合物113(103.8mg，94％)。
在0℃下，向113(101.5mg，0.0001390mol)于DCM(1.0mL)中的溶液中添加水(20μL)和三氟甲烷磺酸(61.5μl，0.000695mol)。在0℃下搅拌反应混合物20分钟，且使其升温至室温，且再搅拌30分钟。以饱和碳酸氢钠中止反应混合物，且以DCM萃取。色谱纯化(5％MeOH/DCM)获得化合物114(42.0mg，69.4％)。
1HNMR(CD3OD):6.86(d,J＝15.6Hz,1H),6.30(d,J＝11.6Hz,1H),6.10-6.18(m,2H),5.93-6.00(m,2H),4.47(d,J＝2.0Hz 1H),4.04(t,J＝2.8Hz,1H),3.78(m,1H),3.55(m,2H),3.43(m,1H),3.30(m,3H),3.08(m,1H),2.08(m,2H),1.35(d,J＝5.6Hz,3H),1.14(d,J＝7.2Hz,3H)。观测到质量457.95。
化合物122：
在0℃下，向003(176mg，0.399mmol)于DCM(3.0mL)中的溶液中添加三乙基硅烷(510μl，0.0032mol)和三氟乙酸(75μl，0.97mmol)。在0℃下搅拌反应混合物1小时，在检验TLC(30％EtOAc/己烷)后仍存在许多起始物质。使反应混合物升温至室温，且在环境温度下搅拌整夜。通过检验TLC发现没有太大进展。在0℃下，向反应混合物中再添加TFA(1.0mL)。在室温下搅拌反应混合物30分钟。通过TLC发现不存在起始物质。将反应混合物倒入至饱和碳酸氢盐中，以EtOAc(3×20mL)萃取。干燥经合并有机层且过滤。浓缩混合物且用制备型TLC(30％EtOAc/己烷)纯化获得化合物115(0.107g，79％)。
在室温下，向哌啶-1-甲酸N-叔丁氧羰基酯(448.1mg，0.002101mol)、化合物115(348.0mg，0.001020mol)和乙酸(1300μl，0.023mol)于THF(10.0mL)中的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.57g，0.0027mol)。在室温下搅拌反应混合物5小时。随后在不进行水性处理的情况下浓缩反应混合物。使用制备型TLC(35％EtOAc/己烷)纯化获得化合物116(0.4164g，76％)。
向化合物116(31.0mg，0.0000576mol)于DCM(1.0mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(0.0251g，0.000115mol)。向反应混合物中添加4-二甲基氨基吡啶(0.00703g，0.0000576mol)和三乙胺(8.02μl，0.0000576mol)。接着在环境温度下搅拌反应混合物整夜。制备型TLC纯化(30％EtOAc/己烷)获得化合物117(16.4mg，45％)。
在反应烧瓶中合并化合物117(0.3916g，0.0006132mol)和005(0.2422g，0.0006202mol)，且在高度真空下干燥。在干燥箱中向上述混合物中添加三(二亚苯甲基丙酮)二钯(0)(0.17g，0.00019mol)。向反应烧瓶中添加N-甲基吡咯烷酮(2.0mL，0.021mol)和环己胺、N-环己基-N-甲基-(268μl，0.00125mol)。在80℃下在油浴中搅拌反应混合物20小时。以MTBE稀释混合物，且以1.0M盐酸洗涤。以MTBE萃取水相且浓缩。色谱纯化(20-40％EtOAc/己烷)获得化合物118(0.373g，69％)。
在0℃下，经5分钟向四氢呋喃中的叔丁醇钾(0.716mL，1.00M)于四氢呋喃(7.20mL，0.0888mol)中的溶液中添加THF(7.2mL)中的化合物118(0.37g，0.00042mol)。在搅拌反应混合物10分钟后，未观测到起始物质(TLC，30％EtOAc/己烷)。在0℃下，以THF(1.0mL)中的叔丁基二甲基硅烷基氯(0.108g，0.000716mol)中止反应，且搅拌10分钟。色谱纯化(20％EtOAc/己烷)获得化合物119(0.182g，46％)。
在0℃下，向化合物119(181.6mg，0.0001942mol)于DCM(8.0mL)中的溶液中添加水(2.0mL)和二氯二氰基醌(57.3mg，0.000252mol)。接着使反应混合物升温至环境温度，且搅拌3小时。在检测(TLC，30％EtOAc/己烷)不到起始物质后，以1:110％硫代硫酸钠/饱和碳酸氢盐中止反应。以TBME萃取水相。色谱纯化(20％-40％EtOAc/己烷)获得化合物120(0.1461g，92％)。
在0℃下，向化合物120(146.1mg，0.179mmol)于DCM(1.0mL)中的溶液中添加吡啶和戴斯-马丁高碘烷(0.099g，0.23mmol)。在0℃下搅拌反应混合物30分钟，TLC仍检测到一些起始物质。接着使反应混合物升温至室温，且在环境温度下搅拌直至消耗掉所有起始物质。接着以30％EtOAc/己烷稀释反应混合物，经硅塞过滤所得溶液，且以30％EtOAc/己烷洗涤。色谱纯化(30％EtOAc/己烷)获得化合物121(107.4mg，74％)。
在0℃下，向化合物121(107.4mg，0.0001321mol)于二氯甲烷(1.50mL，0.0234mol)中的溶液中添加水(22.4μl，0.00124mol)和三氟甲烷磺酸(55.0μl，0.000622mol)。在0℃下搅拌反应混合物90分钟。仍有一些起始物质未消耗掉(TLC，10％NH4OH/EtOH)。在室温下再搅拌反应混合物30分钟，且以20ml TBME稀释。向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠，以EtOAc(3×20mL)萃取，以EtOAc(3×20mL)进一步萃取水相。以硫酸钠干燥经合并有机溶剂，且过滤。将粗材料装载至制备型TLC上，且以10％NH4OH/EtOH(Rf 0.1)洗提。收集所要带，且以10％NH4OH/EtOH冲洗获得化合物122(46.8mg，77％)。1HNMR(CD3OD):6.85(d,J＝15.2Hz,1H),6.29(d,J＝12.0Hz,1H),6.08-6.11(m,2H),5.91-5.98(m,2H),4.47(d,J＝2.4Hz,1H),4.04(m,1H),3.46(m,1H),3.02(d,J＝12.0Hz,2H),2.97(d,J＝6.4Hz,2H),2.56(m,2H),2.09(m,2H),1.71(m,4H),1.34(d,J＝6.0Hz,3H),1.22,(m,2H),1,14(d,J＝6.8Hz,3H)。
化合物127：
在0℃下，向化合物123(以与化合物064类似的方式制备)(195.2mg，0.0002617mol)中添加乙酸/水溶液(4.0mL，乙酸:水＝4:1)。反应混合物在0℃下保持30分钟，且接着升温至环境温度。在环境温度下搅拌整夜后，以碳酸氢钠稀释反应混合物，且以EtOAc萃取。制备型TLC(75％EtOAc/己烷)获得化合物124(0.1686g，91％)。
向化合物124(168.6mg，0.0002388mol)于甲苯(3.0mL，0.028mol)和DCM(1.0mL)中的溶液中添加四乙酸铅(0.127g，0.000287mol)。在环境温度下搅拌反应混合物20至30分钟，且经硅藻土过滤。以DCM洗涤硅藻土。制备型TLC(50％EtOAc/己烷)获得化合物125(106.1mg，66％)。
在环境温度下，向化合物125(106.0mg，0.0001573mol)于四氢呋喃(0.50mL，0.0062mol)、叔丁醇(1.50mL，0.0157mol)、2-甲基丁-2-烯(0.50mL，0.0047mol)中的溶液中添加亚氯酸钠(88.9mg，0.000786mol)和磷酸二氢钾(100mg，0.0007mol)于0.6ml水中的溶液。在环境温度下搅拌反应混合物2小时，且浓缩。以水稀释残余物，以稀HCl酸化至pH 2。以EtOAc萃取水相。制备型TLC获得化合物126(66.1mg，61％)。
在0℃下，向化合物126(32.5mg，0.0471mmol)于二氯甲烷(1.0mL，0.016mol)和水(1.7μl，0.094mmol)中的溶液中添加三氟甲烷磺酸(17μl,0.00019mol)。在0℃下搅拌反应混合物60分钟，且在环境温度下搅拌60分钟。以饱和碳酸氢钠中止反应混合物。以DCM(2×20mLl)萃取水相。DCM溶液的TLC中未显示所要产物。接着将水相酸化至pH 3，且以EtOAc(3×10mL)萃取。制备型TLC获得化合物127(10.2mg，50％)。
化合物137：
在-78℃下，向化合物098(1.0g，1.98mmol)于MeOH/CH2Cl2(5ml/5ml)中的溶液中以O3鼓泡。7分钟后，以N2鼓泡10分钟，且添加2移液管的Me2S。使反应混合物升温至室温，且通过蒸发移除溶剂。硅胶色谱纯化获得化合物128(735mg，73％)。
在0℃下，向含有10ml CH2Cl2中的CBr4(969mg，2.90mmol)和PPh3(15.2g5.80mmol)的反应烧瓶中添加化合物128(734mg，1.45mmol)和Et3N(202μl，1.45mmol)于5mlCH2Cl2中的溶液。移除冰浴，且在室温下搅拌反应混合物1小时。以己烷滴定后，通过硅胶色谱纯化获得化合物129(557g，58％)。
在-78℃下，向化合物129(557mg，0.84mmol)于THF(5ml)中的溶液中添加n-BuLi(840μl，己烷中2.5M)。1小时后，以NH4Cl饱和水溶液中止反应。以MTBE萃取水层。硅胶色谱纯化获得化合物130(360mg，85％)。
在室温下，向化合物130(358mg，0.71mmol)于THF(5ml)中的溶液中添加TBAF(1.1ml，THF中1.0M)。在50℃下加热反应混合物4小时。接着以MTBE稀释混合物，以水和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物131(277mg，100％)。
在室温下，向化合物131(263.8mg，0.678mmol)和化合物132(637.4mg，1.356mmol)于苯(1.8ml)和Et2NH(1.2ml)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(39.2mg，0.034mmol)和CuI(12.9mg，0.068mmol)。搅拌反应混合物5小时。接着以MTBE稀释混合物，以饱和NH4Cl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物133(251.5mg，52％)。
在0℃下，以0.1ml/min的速率向t-BuOK(565μl，THF中1.0M)于THF(13.0ml)中的溶液中添加化合物133(200.0mg，0.28mmol)于THF(8.0ml)中的溶液。1小时后，添加TBSCl(169mg，0.56mmol)。5分钟后，以饱和NaHCO3中止反应混合物，以水稀释且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物134(175.4mg，82％)。
在室温下，向化合物134(200.0mg，0.28mmol)于DCM(4.0ml)和水(1.0ml)中的溶液中添加DDQ(96.2mg，0.42mmol)。2小时后，以NaHCO3饱和水溶液中的10％Na2S2O3中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物135(133.1mg，74％)。
在室温下，向化合物135(133.0mg，0.207mmol)于DCM(3.0ml)中的溶液中添加吡啶(42.0μl，0.518mmol)和戴斯-马丁试剂(175.0mg，0.414mmol)。1小时后，以NaHCO3饱和水溶液中的10％Na2S2O3中止反应，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物136(114.8mg，86％)。
在0℃下，向化合物136(113.0mg，0.176mmol)于DCM(2.0ml)中的溶液中添加水(19.0μl，1.056mmol)和TfOH(46.0μl，0.528mmol)。使反应物升温至室温。30分钟后，以饱和NaHCO3中止反应，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物137(46.4mg，68％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.20(d,J＝6.8Hz,3H),1.25(t,J＝6.8,3H),1.38(d,J＝6.0,3H),2.47-2.48(m,2H),2.85(d,J＝11.2Hz),3.70-3.21(m,2H),3.41-3.45(m,1H),3.95(d,J＝5.2,1H),4.00-4.40(m,1H),4.27-4.33(m,1H),4.54-4.56(m,1H),4.93-5.00(m,1H),6.04(d,J＝2.4,1H),6.23-6.32(m,3H),12.10(s,1H)。
化合物144：
在室温下，向化合物130(475mg，0.944mmol)和化合物138(558mg，1.227mmol)于苯(2.2ml)和Et2NH(1.5ml)中的溶液中添加Pd(PPh3)4(55mg，0.0472mmol)和CuI(18mg，0.0944mmol)。搅拌反应混合物3小时。接着以MTBE稀释反应混合物，以饱和NH4Cl、饱和NaHCO3和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物139(485mg，56％)。
在室温下，向化合物139(485mg，0.60mmol)于THF(5.0ml)中的溶液中添加经缓冲TBAF(3.6ml，以咪唑/HCl缓冲的0.5N)。在50℃下加热反应混合物60小时。接着以MTBE稀释反应混合物，且以水和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物140(280.8mg，67％)。
在0℃下，向t-BuOK(720μl，THF中1.0M)于THF(13.5ml)中的溶液中添加化合物140(250mg，0.36mmol)于THF(13.5ml)中的溶液。2小时后，添加TBSCl(217mg，1.44mmol)。5分钟后，以饱和NaHCO3中止反应混合物，以水稀释且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物141(155mg，52％)。
在室温下，向化合物141(153mg，0.204mmol)于DCM(4.0ml)和水(1.0ml)中的溶液中添加DDQ(69.5mg，0.306mmol)。2.5小时后，以饱和NaHCO3中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物142(124.0mg，96％)。
在室温下，向化合物142(124.0mg，0.197mmol)于DCM(5.0ml)中的溶液中添加吡啶(40.0μl，0.492mmol)和戴斯-马丁试剂(167.0mg，0.394mmol)。1小时后，以NaHCO3饱和水溶液中的10％Na2S2O3中止反应，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物143(122.8mg，99％)。
在0℃下，向化合物143(54.5mg，0.087mmol)于DCM(2.0ml)中的溶液中添加水(9.4μl，0.522mmol)和TfOH(23.0μl，0.261mmol)。使反应物升温至室温。30分钟后，以饱和NaHCO3中止反应，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物144(30.0mg，92％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.20(d,J＝6.8Hz,3H),1.38(d,J＝6.0Hz,3H),2.47-2.48(m,2H),2.85(d,J＝5.2Hz,3H),3.40-3.50(m,1H),3.94(d,J＝5.2),4.12-4.19(m,1H),4.28-4.33(m,1H),4.54-4.56(m,1H),4.93-5.00(m,1H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H),6.30(s,1H),6.33(m,2H),12.11(s,1H)。
化合物155：
在0℃下，向005(2.46g，4.87mmol)于MeOH(40ml)中的溶液中添加对甲苯磺酸(1.02g，5.36mmol)。使反应物升温至室温且搅拌18小时。接着以饱和NaHCO3中止反应混合物，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物145(1.42g，64％)。
在0℃下，向化合物145(1.53g，4.37mmol)于DCM中的溶液中添加Et3N(1.83ml，13.11mmol)和TBSOTf(2.10ml，9.18mmol)。使反应物升温至室温且搅拌35分钟。接着以饱和NaHCO3中止反应混合物，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物146(1.18g，41％)。
在室温下，向化合物146(1.09g，1.88mmol)于DCM(10.0ml)中的溶液中添加吡啶(303μl，3.76mmol)和戴斯-马丁试剂(1.20g，2.82mmol)。5小时后，以NaHCO3饱和水溶液中的10％Na2S2O3中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得呈粗产物形式的化合物147。
在0℃下，向化合物147于MeOH(15.0ml)中的溶液中添加NaBH4(142mg，3.76mmol)。10分钟后，以饱和NH4Cl中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物148(714mg，自1006-216B为66％)。
在室温下，向化合物148(710mg，1.23mmol)于THF(10ml)中的溶液中添加TBAF(3.7ml，THF中1.0M)。在50℃下加热反应混合物17小时。接着以MTBE稀释反应混合物，以饱和NaHCO3和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物149(419mg，97％)。
在室温下，向化合物149(400mg，1.14mmol)于丙酮(10ml)中的溶液中添加2,2-二甲氧基丙烷(419μl，3.42mmol)和PTSA(100mg)。20分钟后，以MTBE稀释，以饱和NaHCO3和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物150(450mg，95％)。
在室温下，向化合物150(384mg，0.98mmol)和化合物138(582mg，1.27mmol)于NMP(2.0ml)中的溶液中添加Pd2(DBA)3(90.0mg，0.098mmol)和Cy2NMe(272μl，1.27mmol)。在80℃下加热反应混合物24小时。接着以MTBE稀释反应混合物，经硅藻土过滤，以1.0N HCl水溶液和盐水洗涤。硅胶色谱纯化获得化合物151(441.3mg，65％)。
在0℃下，向t-BuOK(884μl，THF中1.0M)于THF(15.0ml)中的溶液中添加化合物151(410mg，0.59mmol)于THF(5.0ml)中的溶液。30分钟后，添加TBSCl(178mg，1.18mmol)。10分钟后，以饱和NaHCO3中止反应混合物，以水稀释且以EtOAc萃取。硅胶色谱纯化获得化合物152(170.1mg，34％)。
在室温下，向化合物152(170mg，0.226mmol)于DCM(4.0ml)和水(1.0ml)中的溶液中添加DDQ(77.0mg，0.339mmol)。2.5小时后，以饱和NaHCO3中的10％Na2S2O3中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物153(122.6mg，86％)。
在室温下，向化合物153(61.0mg，0.097mmol)于DCM(2.5ml)中的溶液中添加吡啶(19.6μl，0.243mmol)和戴斯-马丁试剂(82.0mg，0.194mmol)。1小时后，以NaHCO3饱和水溶液中的10％Na2S2O3中止反应，且以MTBE萃取。硅胶色谱纯化获得化合物154(46.1mg，76％)。
在0℃下，向化合物154(41.8mg，0.066mmol)于DCM(2.0ml)中的溶液中添加水(7.1μl，0.396mmol)和TfOH(17.6μl，0.198mmol)。使反应物升温至室温。30分钟后，以饱和NaHCO3中止反应，且以DCM萃取。硅胶色谱纯化获得化合物155(11.1mg，45％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.64(d,J＝6.80,3H),0.93(d,J＝6.0,3H),2.06(d,J＝3.6Hz,3H),2.37-2.44(m,1H),2.54-2.64(m,1H),2.79(br,1H),3.05-3.22(m,2H),3.81-3.91(m,1H),4.18-4.33(m,1H),4.60-4.71(m,1H),5.33(t,J＝11.6Hz,1H),5.86(d,J＝2.8Hz,1H),5.91-6.03(m,1H),6.04(d,J＝11.6Hz,1H),6.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.00(d,J＝15.6Hz,1H),12.86(s,1H)。
化合物156：
将化合物106(1重量)溶解于TFA(3体积，15当量)中且在室温下搅拌。通过TLC监测反应进展。搅拌48小时后，以DCM(20体积)稀释反应混合物，以NaHCO3饱和水溶液和盐水洗涤。浓缩有机层且通过急骤色谱纯化获得呈白色固体状的156(48.3％产率)(NMR数据如下)。还观测到化合物106(9.1％回收率)。1HNMR(C6D6):δ＝6.83(d,1H),6.12(s,1H),5.81(dt,1H),5.70(s,1H),5.55(d,1H),5.40(dd,1H),5.12(s,1H),4.61(m,1H),4.19(s,1H),3.86(d,1H),3.26(q,1H),3.15(br s,1H),2.48(q,2H),2.30-2.35(m,1H),2.12(q,1H),0.99(d,3H),0.75(d,3H),0.60(t,3H),-2.00(s,1H)。
化合物157：
将化合物106溶解于1,4-二恶烷(11体积)中，且在N2氛围下缓慢添加nBu3P(1.2当量)。在室温下搅拌反应混合物，且通过TLC和HPLC追踪反应进展。在室温下搅拌23小时后，以TBME(100体积)稀释反应混合物，以水(2×10体积)和盐水(10体积)洗涤。以TBME(50体积)反萃取水层。经Na2SO4干燥经合并的有机层且浓缩。通过急骤色谱纯化残余物，获得呈白色固体状的157(58.5％)。MS(ES+):M+Na+＝412.1,M+H+＝390.1；MS(ES-):M-H+＝388.0；1HNMR(C6D6):δ＝6.78-6.84(m,2H),6.13(d,1H),5.95(d,1H),5.86(m,1H),5.83(d,1H),4.97-5.02(m,1H),4.47(br s,1H),4.02(br s,1H),3.93(br s,1H),3.26(t,1H),2.64(brs,1H),2.52(m,2H),2.39-2.43(m,1H),2.04-2.11(m,1H),1.68(m,1H),0.88(d,3H),0.64(t,3H),0.58(d,3H),-2.38(s,1H)。
化合物158：
在0℃下，将起始物质(159)(100.0mg，0.13mmol)溶解于1.0ml甲醇中。添加对甲苯磺酸(49.4mg，0.28mmol)。在0℃下搅拌反应混合物25分钟，接着在室温下搅拌整夜。以碳酸氢钠饱和水溶液中止反应，且以乙酸乙酯萃取。硅胶柱纯化后，以84％的产率获得160。可通过分离094的外消旋混合物(参看106的制备)且根据制备103的步骤获得手性起始物质(159)。
通过硅胶色谱(使用己烷/乙酸乙酯的12:1混合物作为洗提剂)分离094的两种立体异构体(位置7)。通过NMR光谱进行立体化学的鉴别。发现较小极性的异构体在位置7处具有“R”立体化学，而较大极性的异构体具有“S”立体化学。使用“R”异构体094-(7R)，以自094制备103所用相同的合成途径制备159(参见实例化合物106供参考)。
在0℃下，将化合物160(46.0mg，0.063mmol)溶解于2.0ml二氯甲烷中。分别添加吡啶(51.0μl，0.63mmol)和碳酰氯(167.0μl，0.32mmol)。在0℃下搅拌反应混合物15分钟，以碳酸氢钠饱和溶液中止反应，且以甲基叔丁基醚萃取。用硅胶制备型板纯化后，以定量产量获得161。
将化合物161(47.4mg，0.063mmol)溶解于2.0ml二氯甲烷和0.5ml水的混合物中。添加2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(31.5mg，0.14mmol)。在室温下搅拌2小时后，以碳酸氢钠饱和溶液中的10％硫代硫酸钠中止反应混合物，且以甲基叔丁基醚萃取。用硅胶制备型板纯化后，以69％产率获得162。
将化合物162(27.6mg，0.044mmol)溶解于二氯甲烷中。分别添加吡啶(8.9μl，0.11mmol)和戴斯-马丁试剂(37.0mg，0.088mmol)。在室温下搅拌反应混合物1.5小时。以碳酸氢钠饱和水溶液中的10％硫代硫酸钠中止反应，且以甲基叔丁基醚萃取。硅胶柱纯化后，以100％的产率获得163。
将化合物163(27.7mg，0.044mmol)溶解于1.0ml二氯甲烷中。在0℃下添加三氟甲磺酸(11.6μl，0.13mmol)和水(4.8μl，0.26mmol)。在室温下搅拌1小时后，以碳酸氢钠饱和溶液中止反应混合物，且以二氯甲烷萃取。硅胶柱纯化后，以89％的产率获得158。1H NMR(CDCl3)δ12.10(s,1H),7.08(dd,J＝15.2,2.4Hz,1H),6.11(m,2H),6.03(dd,J＝13.2,2.4Hz,2H),5.53(m,1H),5.14(d,J＝8.4Hz,1H),5.04(m,1H),4.94(m,1H),4.11(s,1H),3.92(m,1H),3.19(dd,J＝21.6,7.2Hz,2H),2.86(m,1H),2.75(m,1H),1.45(d,J＝6.0Hz,3H),1.26(t,J＝7.2,3H),1.14(d,J＝6.8Hz,3H)。
实例2-12生物检定
随机选择一组30种式(I)或(II)化合物，且测试各化合物在MDA-MB-435和HT-29癌细胞系中的生长抑制活性。发现数种化合物具有显著癌细胞生长抑制活性(例如nM IC50值)。选择两种化合物(本文称为化合物091和106)进行进一步研究，以进一步评估和表征此类化合物(亦即F152类似物)的生物学特性。应理解对于生物检定(例如基于细胞的检定)，给出的结果可为一组以上数据的例示。在某些情况下，例如在某些活体外检定中，平均值和标准偏差为所获得数据的代表。在其它情况下，例如在某些活体内检定中，从数个实质上相似的数据组(例如自使用多种剂量的相同检定获得的数据组，等)中选出单个代表性数据组。通常以与人类剂量临床研究中所用检定条件最相似的检定条件为基础选择代表性数据组。熟练技术人员将理解，不同检定条件(例如不同剂量或给药时程)可能会产生不同结果。
实例2
进行生物化学MEK1检定，研究式(I)或(II)化合物(例如化合物029、091、106和114)是否为MEK1抑制剂。使用ELISA检定评估化合物的生物化学MEK1抑制作用。所有检定都以96孔格式进行。使用经ERK2(MEK1的底物蛋白)涂布的培养盘进行生物化学MEK1检定。在40μL的最终体积中，在不存在或存在测试化合物的情况下，与50mmol/L HEPES、20mmol/LMgCl2、4mmol/L MnCl2和0.5mmol/L Na3VO4一起培育MEK1(25ng)。通过添加1μmol/L ATP启始反应。在30℃下培育40分钟后，丢弃反应混合物，且培养盘接着以0.05％Tween20/PBS洗涤4次。各孔在室温下以100μL 1:4000倍稀释的磷酸-ERK1/2单克隆抗体(马萨诸塞州细胞信号公司(Cell Signaling,MA))培育1.5小时。接着丢弃抗体，且培养盘以0.05％Tween20/PBS洗涤6次。最终，添加100μL 1:2000倍稀释的HRP结合抗小鼠IgG抗体(马萨诸塞州细胞信号公司)。培育90分钟后，丢弃此抗体，且培养盘以0.05％Tween20/PBS洗涤8次。接着通过过氧化物酶反应观测磷酸化ERK2，且在450nm下读取。图2A为描绘MEK1检定结果的表。
实验确认化合物091和106为具有低nM活性的有效MEK1抑制剂(参看图2A)。化合物091显示在低浓度ATP下具有更有效MEK1抑制活性，表明与MEK1的结合模式为ATP竞争性模式。
实例3
进行研究，研究化合物对各种癌症相关性激酶的活体外特异性。对一组95种癌症相关性激酶在0.1μM和1μM浓度下测试化合物091和106，所述激酶包括：Abl(h)、Abl(T315I)(h)、ALK(h)、AMPK(r)、Arg(m)、Aurora-A(h)、Axl(h)、Blk(m)、Bmx(h)、BTK(h)、CaMKII(r)、CaMKIV(h)、CDK1/细胞周期素B(h)、CDK2/细胞周期素A(h)、CDK2/细胞周期素E(h)、CDK3/细胞周期素E(h)、CDK5/p35(h)、CDK6/细胞周期素D3(h)、CDK7/细胞周期素H/MATl(h)、CHK1(h)、CHK2(h)、CK1δ(h)、CK2(h)、c-RAF(h)、CSK(h)、cSRC(h)、EGFR(h)、EphB2(h)、EphB4(h)、Fes(h)、FGFR3(h)、Flt3(h)、Fms(h)、Fyn(h)、GSK3α(h)、GSK3β(h)、IGF-1R(h)、IKKα(h)、IKKβ(h)、IR(h)、JNK1α1(h)、JNK2α2(h)、JNK3(h)、Lck(h)、Lyn(h)、MAPK1(h)、MAPK2(h)、MAPKAP-K2(h)、MEK1(h)、Met(h)、MKK4(m)、MKK6(h)、MKK7β(h)、MSK1(h)、MST2(h)、NEK2(h)、p70S6K(h)、PAK2(h)、PAR-1Bα(h)、PDGFRα(h)、PDGFRβ(h)、PDK1(h)、PKA(h)、PKBα(h)、PKBβ(h)、PKBγ(h)、PKCα(h)、PKCβII(h)、PKCγ(h)、PKCδ(h)、PKCε(h)、PKCη(h)、PKCτ(h)、PKCμ(h)、PKCθ(h)、PKCξ(h)、PKD2(h)、PRAK(h)、PRK2(h)、ROCK-II(r)、ROCK-II(h)、Ros(h)、Rsk1(h)、Rsk2(h)、Rsk3(h)、SAPK2a(h)、SAPK2b(h)、SAPK3(h)、SAPK4(h)、SGK(h)、Syk(h)、Tie2(h)、TrkB(h)、Yes(h)和ZAP-70(h)(图2B)。
在25μL的最终反应体积中，以适当缓冲液培育各人类酶。通过添加具有[γ33P-ATP]的MgATP混合物启始反应。在室温下培育40分钟后，通过添加5μL磷酸溶液中止反应。所有检定都在10μM的ATP浓度下进行。
在P30过滤垫上点样10μL反应物，且在磷酸溶液中洗涤3次历时5分钟。接着通过闪烁计数测定转移至底物肽的33P。结果表示为对照培育中转移至底物肽的33P的百分比。认为在0.1μM化合物浓度下具有>50％抑制的激酶(1)和浓度-抑制反应介于0.1μM和1μM之间的(2)是化合物的目标激酶。
除了强MEK1抑制之外，化合物在0.1μM浓度下还抑制Src酪氨酸激酶家族的成员(Lyn、Fyn、Lck、Yes、c-Src)、FLT-3和TrkB激酶活性。此外，如缺乏对大量丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制所表明，化合物看似对酪氨酸激酶具有高度选择性。
此外，确认化合物在全部浓度范围内对这些激酶中的6种具有抑制活性。研究三种细胞质Src家族激酶：c-Src、Fyn和Lyn。还研究了细胞质Abl激酶和两种受体酪氨酸激酶：Flt3和TrkB。在所有反应种都使用10μM的标准ATP浓度。对所有实验都进行重复测量。如图2B中所见，六种激酶显示对化合物091具有低于214nM的IC50。TrkB和Src家族成员为对化合物091抑制最敏感的酶。
实例4
例示性化合物的活体外抗癌活性。在实体肿瘤细胞系中广泛测试化合物091和106(图3中显示对化合物091的18个细胞系和对化合物106的20个细胞系进行测试)。所有细胞系都引入至96孔培养盘中，且在不存在化合物091或化合物106或持续存在0.3-10000nM化合物091或化合物106的情况下生长96小时。使用CellTiter-发光细胞生活力检定(普洛麦格(Promega))或亚甲基蓝检定评估细胞生长。测定IC50值，其为和未经处理细胞群相比将细胞生长抑制50％的物质浓度。
如图3所示，具有B-RAF V600E突变的细胞系在低nM或次μM浓度范围内对化合物091和106极敏感。
实例5
Colo205人类结肠癌异种移植物中的活体内抗肿瘤活性(图4)。进行研究，以研究化合物091和106在人类Colo205BRAF突变型结肠癌异种移植物中的抗癌活性。在雌性无胸腺小鼠中以皮下植入的Colo205人类结肠癌异种移植物评估化合物。
将具有B-RAF(V600E)突变的人类结肠癌细胞系Colo205皮下移植至雌性裸小鼠中。实验由处理第1天时每组6只小鼠组成。静脉内投与化合物达两轮，其中每轮每周5次每日注射(qld×5)，各轮之间有2天的休息期。以每10g体重0.1mL的媒剂体积投与化合物091。
每日监测小鼠的一般健康状况。在处理第一天开始，每周两次记录肿瘤尺寸和体重。使用等式(l×w2)/2计算肿瘤重量，其中l和w指的是每次测量时收集的较大和较小尺寸。当平均肿瘤体积达到140mm3时，向小鼠(6只/组)投与媒剂(十六醇聚氧乙烯醚:乙醇:5％葡萄糖；1:1:8)或测试化合物(30mg/kg)。
如自图4可见，化合物091在COLO205 BRAF突变型结肠癌异种移植物中产生约70％肿瘤退化。在使用不同给药时程的类似研究中，化合物106从处理第一天开始在COLO205BRAF突变型结肠癌异种移植物中引起70％肿瘤退化。
实例6
BxPC-3人类胰腺癌异种移植物中的活体内抗肿瘤活性(图5)。进行研究，以研究化合物091在人类BxPC-3胰腺癌异种移植物中的抗癌活性。在雌性无胸腺小鼠中以皮下植入的BxPC-3人类胰腺癌异种移植物评估化合物。
将人类胰腺癌细胞系BxPC-3-T1(在B-RAF和Ras基因上无突变)皮下移植至雌性裸小鼠中。实验由处理第1天时每组8只小鼠组成。静脉内投与化合物达两轮，其中每轮每周5次每日注射(qld×5)，各轮之间有2天的休息期。以每10g体重0.1mL的媒剂体积投与化合物。
每日监测小鼠的一般健康状况。在处理第一天开始，每周两次记录肿瘤尺寸和体重。使用等式(l×w2)/2计算肿瘤重量，其中l和w指的是每次测量时收集的较大和较小尺寸。当平均肿瘤体积达到130mm3时，向小鼠(8只/组)投与媒剂(十六醇聚氧乙烯醚:乙醇:5％葡萄糖；1:1:8)或测试化合物(15、30mg/kg)。
如图5中可见，30mg/kg化合物091产生50％肿瘤退化。
实例7
LOX人类黑素瘤异种移植物中的活体内抗肿瘤活性(图6)。进行研究，以研究化合物091和106在人类LOX BRAF突变型黑素瘤异种移植物中的抗癌活性。在雌性无胸腺小鼠中以皮下植入的LOX人类黑素瘤异种移植物评估化合物。
将具有B-RAF(V600E)突变的人类黑素瘤细胞系LOX皮下移植至雌性裸小鼠中。实验由处理第1天时每组8只小鼠组成。静脉内独立投与化合物达两轮，其中每轮每周5次每日注射(qld×5)，各轮之间有2天的休息期。以每10g体重0.1mL的媒剂体积投与化合物。
每日监测小鼠的一般健康状况。在处理第一天开始，每周两次记录肿瘤尺寸和体重。使用等式(l×w2)/2计算肿瘤重量，其中l和w指的是每次测量时收集的较大和较小尺寸。当平均肿瘤体积达到128mm3时，向小鼠(8只/组)投与媒剂(十六醇聚氧乙烯醚:乙醇:5％葡萄糖；1:1:8)或一种测试化合物(10、20、30或40mg/kg)。
如图6中可见，10mg/kg化合物091在前3周产生100％肿瘤退化。化合物091还在所有小鼠中在20、30、40mg/kg的剂量下产生100％肿瘤退化。投与091的小鼠在研究结束时无肿瘤。此外，在三种剂量(每次给药10、20和40mg/kg)下投与化合物106引起统计学上显著的抗癌活性。在研究结束时，10mg/kg 106使8只小鼠中的5只无肿瘤，且20mg/kg或40mg/kg都使8只小鼠中的8只无肿瘤。
实例8
对B细胞驱使的血液科恶性癌细胞生长/非霍奇金氏淋巴瘤的抑制(图7)。进行研究，以研究化合物091和106在一组人类血液科癌细胞系中的活体外抗癌活性。在呈现数种不同类型的血液科恶性癌症的7种人类癌细胞系中评估化合物091和106的抗增殖活性。将经培养人类癌细胞置于96孔培养盘中，且在不存在测试化合物或持续存在0.3-1000nM测试化合物的情况下生长96小时。使用MTT检定评估细胞生长。测定IC50值，其为和未经处理细胞群相比将细胞生长抑制50％的物质浓度。
如图7中表明，来源于B细胞非霍奇金氏淋巴瘤的两种细胞系对化合物091敏感，且来源于白血病或B细胞所述非霍奇金氏淋巴瘤的细胞系对化合物106敏感。
实例9
CPT-11(SN-38)在PANC-1胰腺癌细胞中抗癌活性的增强(图8)。熟知SN-38(CPT-11的活性代谢物)会增强NF-κB活性，此导致化学抗性。为了测定与SN-38组合的化合物091或106是否将因MEKK1抑制而增强化学疗法的抗癌活性，对PANC-1人类胰腺癌细胞进行检验。
应注意，1μM单独的化合物091或化合物106不会影响单独实验中的PANC-1癌细胞生长(数据未显示)。在PANC-1胰腺癌细胞中评估与化合物091或106组合的SN-38的抗增殖作用。将经培养人类癌细胞置于96孔培养盘中，且在具有或不具有1μM测试化合物的情况下，在不存在SN-38或持续存在0.03-1000nM SN-38的情况下生长96小时。使用CellTiter-发光细胞生活力检定(普洛麦格)评估细胞生长。测定IC50值，其为和未经处理细胞群相比将细胞生长抑制50％的物质浓度。
单独SN-38抑制细胞生长的IC50值为82.5nM。1μM化合物091和化合物106都增强组合情形中SN-38的细胞毒性(例如IC50值为16.2nM)。化合物091和106在两个独立实验中在此细胞系中都增强CPT-11(SN-38)的抗癌活性。这些结果表明化合物091和106会阻断化学疗法诱发的NF-κB活化，提高化学敏感性，不过这些实验仍在进行。化合物091和106可增强组合情形中的抗癌活性。
实例10
化合物091穿透血脑屏障(BBB)(图9)。如脑/血浆AUC0-t比为3.170所测量，化合物091大量穿透至脑组织中。这些资料表明化合物091可通过抑制如本文所示的激酶组合(例如抑制MEK和TrkB和/或其它激酶)适用于治疗CNS肿瘤(包括神经胶质瘤)。
实例11
对Flt-3受体酪氨酸激酶(FLT3)磷酸化的抑制(图10)。进行研究，以研究化合物106活体外抑制FLT3-突变型(AML)细胞系中Flt-3受体磷酸化的能力。将具有Flt-3活化突变的MV-4-11人类急性骨髓白血病(AML)细胞(目录号CRL-9591,ATCC,马里兰州洛克维尔(Rockville,MD))涂铺于25mm3烧瓶中且培育1天。接着，向各烧瓶中添加浓度为0.1nmol/L-300nmol/L的化合物106(或培养基)且培养24小时。对照盘仅接受培养基。使用冰冷溶解缓冲液制备细胞溶解物。
为了检测磷酸-Flt-3蛋白，使MV-4-11细胞溶解物在还原条件下经受SDS-PAGE，且以针对磷酸-Flt-3抗体的抗体(目录号3464,细胞信号科技公司(Cell SignalingTechnology),马萨诸塞州丹弗斯(Danvers,MA))作免疫印迹。以二级IRDye抗体(LI-COR,Inc.,内布拉斯加州林肯(Lincoln,NE))探测西方印迹。使用奥地赛红外成像系统(Odysseyinfrared imaging system)(LI-COR,Inc.,内布拉斯加州林肯)观测印迹蛋白。使用抗肌动蛋白抗体(目录号sc-8432,圣克鲁斯生物技术公司(Santa Cruz Biotechnologies,Inc.),加利福利亚州圣克鲁斯(Santa Cruz,CA))作为装载对照。
MV-4-11细胞显示在无化合物106存在的情况下Flt-3受体的组成性磷酸化。在MV-4-11细胞系中，磷酸-Flt-3的蛋白含量因化合物106而以浓度依赖性方式降低。10nmol/L化合物106完全抑制Flt-3受体的组成性磷酸化，表明化合物106是全细胞中Flt-3受体酪氨酸激酶的有效抑制剂。
实例12
对FLT3突变型细胞系的活体外细胞增殖的抑制(图11)。进行研究，以研究化合物106在FLT-3突变型(AML)细胞系中的活体外抗癌活性。在细胞增殖检定中使用MV-4-11AML细胞测定化合物106的抗增殖作用。
将具有Flt-3活化突变的MV-4-11人类急性骨髓白血病(AML)细胞涂铺于96孔培养盘中，且在不存在化合物106或持续存在0.03-1,000nmol/L化合物106的情况下生长96小时。使用CellTiter-发光细胞生活力检定(普洛麦格,威斯康星州麦迪逊(Madison,WI))评估细胞生长。在EnVision 2102多标签计数器(Multilabel Counter)(帕金-埃尔默/华莱士(Perkin-Elmer/Wallac),马萨诸塞州沃尔瑟姆(Waltham,MA))上读取发光。使用软件Graphpad Prism(第4版,加利福利亚州圣地亚哥(San Diego,CA))测定IC50值。未经处理对照组的原始值代表4孔的平均值。
具有Flt-3受体酪氨酸激酶活化突变的MV-4-11细胞在低nmol/L浓度范围内对化合物106敏感。化合物106显示针对FLT-3突变型人类癌细胞的抗增殖活性，其中IC50值在低nmol/L范围内。

Claims (10)

1.一种式(II)化合物或其医药学上可接受的盐或酯的用途：
其中
R3是-NHRb，且Rb是经0、1、或2个羟基部分取代的C1-C3烷基；
其用于制造供治疗有需要的患者的FLT-3突变型癌症的药物。
2.根据权利要求1所述的用途，其中R3是未经取代的C1-C3烷基氨基。
3.根据权利要求1所述的用途，其中R3是选自由以下基团组成的群组的基团：甲基氨基、乙基氨基、2-羟基乙基氨基和2,3-二羟基丙基氨基。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述式(II)化合物是：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述FLT-3突变型癌症包括D835Y、Y842C、K6630或V592A突变或残基1836的突变。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述FLT-3突变型癌症包括内部串联重复。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述FLT-3突变型癌症是血液科癌症。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述血液科癌症是急性骨髓白血病。
9.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物是供与第二化学治疗药物组合使用。
10.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物是供静脉内投予。
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