TW201925241A - 用於監測對免疫檢查點抑制劑ｐｄ－１和ｐｄ－ｌ１的抗體治療的免疫測定法和基因工程蛋白 - Google Patents
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Abstract
本發明揭露包含PD-1(程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域及/或PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白(CD274或B7-H1))蛋白之細胞外區域的融合蛋白。前述細胞外區域之部分係以專一性組態表現且純化為蛋白質並用於免疫測定法以監測對該些蛋白質之生物治療抗體的循環位準。亦描述一種在自患者獲得的生物樣本中測定生物治療抗體之循環位準量的方法，其中患者已經歷至少一個劑量之免疫療法。
Description
本申請案係關於包含PD-1(programmed cell death protein-1；程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域的融合蛋白及/或包含PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白)(CD274或B7-H1)之細胞外區域的融合蛋白。細胞外區域之部分係以專一性組態表現且純化為蛋白質並用於免疫測定法以監測對該些蛋白質之生物治療抗體的循環位準。本文亦描述用於偵測及監測自患者獲得的生物樣本中之治療抗體的方法，其中患者已經歷至少一種劑量之免疫療法。
程序性細胞死亡1(PD-1)受體係研究最多的免疫檢查點標靶之一，其係表現在包括T細胞、B細胞、自然殺手(natural killer；NK)/自然殺手T(natural killer T；NKT)細胞及其他的活化免疫細胞類型之表面上1。靶向PD-1及PD-L1之多種治療單株抗體(mAb)為市售的且超過12種的傳統及雙專一性mAb正受FDA及EMA的核查。
PD-1為T細胞活性之陰性調節蛋白且PD-1與其在腫瘤表面處的配位體PD-L1之相互作用產生檢查點阻斷，從而降
低活化T細胞產生有效免疫反應之能力。腫瘤細胞表面上的高位準PD-L1之表現允許藉由抑制包括細胞毒性活性之T細胞功能避開腫瘤反應。靶向PD-1或PD-L1之治療抗體將阻斷配位體-受體相互作用，且恢復對腫瘤微環境之免疫功能。該些mAb之使用已跨於許多癌症類型產生令人振奮的臨床反應且越來越多的該些mAb現已進入臨床開發。
歸因於靶向免疫檢查點阻斷藉由癌細胞活化的新穎性，用於投與該些mAb之最佳劑量及時程及測定該些參數所必需的工具尚未完全得到開發。雖然當前的抗PD-1 mAb治療方案已顯示有前景的結果，但有必要界定更為準確及個人化的給藥方案來增加功效並降低成本。對相同抗體方案而言，穩態抗體位準可變化多至10倍，且在使用子治療給藥時變化甚至更大2-4。該些研究可最佳化治療同時降低成本負荷及不利事件發生率。大量的免疫調節性mAb正受FDA及EU核查，許多以快速追蹤方式進行，從而進一步突顯對量測PD-1及PD-L1靶向的mAb之循環位準的測試的需要。處於開發中的免疫測定法將提供對治療方案之有效指導，尤其給出(1)在諸多疾病適應症內及跨於該些疾病適應症在穩態mAb位準方面觀察到的總體變化2-4及(2)在處於該些療法下之患者中觀察到的變化的進程狀態1,3,5。
量測抗PD-1及抗PD-L1位準不僅在測定用於不同腫瘤或分子病理學之最佳給藥量中具有潛在的重要性，而且對計量循環位準是否可解釋或預測已知隨緩解發生的不利事件具有潛在重要性。存在尚未滿足的需要，因為當前不存在監測程序，且需要更多資料來評估及判定給藥時程並排除不必要的免疫毒性及成本。
納武單抗(Nivolumab)為人源化IgG4抗PD-1 mAb。
納武單抗係充當檢查點抑制劑，其阻斷原本將防止活化T細胞進攻癌症的陰性調節蛋白，從而允許免疫系統清除癌症。此在Medarex的情況中發現，該Medarex係藉由Medarex及Ono Pharmaceutical開發，且由Bristol-Myers Squibb(其於2009獲得Medarex)及Ono出售。
納武單抗(Opdivo®)為用於治療癌症且首先由日本權責機關於2014年6並亦由FDA於2014年7批准的生物治療mAb。其係用作用於不能手術或轉移性皮膚黑素瘤之第一線治療。若癌症在BRAF中確實或並不具有突變，則其係以不同方式與依匹單抗(針對CTLA-4，即細胞毒性T淋巴細胞相關聯蛋白-4的mAb)組合。考慮將其用作用於鱗狀非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer；NSCLC)的第二線治療8，及用作用於腎細胞惡性腫瘤之第二線治療9且在2016年5月經批准用於經典的頑固性霍奇金氏淋巴瘤9。正針對許多其他的癌症來對其測試且可能將具有大大擴展的用途。
Merck產生了一種類似的mAb療法派姆單抗(pembrolizumab)(Keytruda)，其亦為針對PD-1的IgG4類mAb，同樣在2014年獲批准。到2017年，派姆單抗係經由靜脈內輸注來使用以治療不能手術或轉移性黑素瘤，在某些情況下為轉移性NSCLC，其係作為用於頭頸鱗狀細胞癌、經典的難治性霍奇金氏淋巴瘤之第二線治療。對於NSCLC，若癌症過度表現PD-L1且癌症在EGFR或在ALK不具有突變，則派姆單抗為第一線治療；必須用確認及獲批准的伴隨式診斷進行PD-L1之評定。此外，基於生物標誌物(PD-1)之存在而非標靶組織，派姆單抗為由FDA批准的第一藥物。10許多其他的抗PD-1及抗PD-L1生物治療抗體現已出現在診所中且包括諸如雙專一性物、DART(罕見腫
瘤中之雙抗CTLA-4 &抗PD-1阻斷物)及BiTes(雙專一性T細胞結合物)之替代型式。
相反地，PD-L1之上調允許癌症避開寄主免疫系統且PD-L1之高腫瘤表現與增加的腫瘤侵襲性及死亡風險的4-5倍增加相關聯。11除已批准用於治療的PD-L1抑制劑之外，許多PD-L1正作為免疫腫瘤學療法處於開發中且在臨床試驗中正顯示有前景的結果，這包括阿特珠單抗(Atezolizumab)及阿維魯單抗(Avelumab)。
該些藥物增加T細胞之功效，從而能夠更積極地進攻並殺死癌細胞。對於納武單抗，在一些情況下存在嚴重的副作用，包括肺、結腸、肝、腎、及甲狀腺之免疫相關炎症；及對皮膚、中樞神經系統、心臟、及消化系統之影響。12對於派姆單抗，患者已發展出嚴重的輸注相關反應及不利效應，包括肺炎症(一些為致命的)及內分泌器官之炎症，其引起炎症(腦下垂體、甲狀腺(在不同患者中引起甲狀腺低能症及甲狀腺高能症)、及胰臟炎，其引起1型糖尿病及糖尿病酮酸中毒)，從而造成一些患者經歷終身激素療法(例如胰島素療法或甲狀腺激素)。患者已發展出歸因於mAb藥物之結腸、肝、及腎炎症。13針對兩者報告了許多其他的症狀及不適。
顯示該些副作用的患者停用mAb藥物，隨後若副作用平息/在副作用平息時返回服用該藥物。有可能可將所使用的給藥時滴定或若患者中之位準受監測，則將其大大地減少。然而，當前不存在可利用來測試循環mAb藥物位準的監測測定且用於該些測試之抗原沒有合格者。
本申請案提供與程序性細胞死亡1(PD-1)及程序
性細胞死亡-配位體(PD-L1)蛋白有關的融合蛋白。該融合蛋白可為重組蛋白，其包含天然蛋白之修飾及/或包含具有相異性質之另一區域的融合蛋白之重組蛋白以改良在診斷測定中之功能。
本文描述的一個態樣提供包含融合至寡聚區域之PD-1蛋白的重組蛋白。本文描述的另一態樣提供包含融合至寡聚區域之PD-1蛋白的融合蛋白。本文描述的另一態樣提供包含融合至寡聚區域之PD-L1蛋白的重組蛋白。本文描述的另一態樣提供包含融合至寡聚區域之PD-L1蛋白的融合蛋白。本文描述的又一態樣提供包含融合至寡聚區域的PD-1及PD-L1蛋白的融合蛋白。在一些實施例中，融合蛋白為重組蛋白。
PD-1及/或PD-L1蛋白可來自多種物種或來自單一物種。在一個態樣中，PD-1及/或PD-L1蛋白為人類PD-1及/或人類PD-L1蛋白。在另一態樣中，融合蛋白包含PD-1及/或PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段。在一個實施例中，融合蛋白包含PD-1之細胞外區域的類免疫球蛋白區域。在另一實施例中，融合蛋白包含PD-L1之細胞外區域的類免疫球蛋白區域。
PD-1及/或PD-L1細胞外區域或其片段可包含各種經修飾蛋白或肽。修飾可為野生型PD-1及/或PD-L1中的至少一種胺基酸之取代、缺失或添加，只要其不改變PD-1及PD-L1之功能即可。此等各種蛋白或肽可具有與野生型蛋白70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之序列同源性。
本文描述的融合蛋白包含PD-1或PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段、及寡聚區域。
在一些態樣中，本文描述的融合蛋白包含PD-1蛋白之細胞外區域或其片段、及寡聚區域，其中該寡聚區域係選
自由以下各項組成之群：鼠類IgG1 Fc區域、鼠類IgG2A Fc區域、GCN4三聚物區域、格形蛋白(clathrin)三聚物區域、及p53四聚物區域、或其片段。
在其他態樣中，本文描述的融合蛋白包含PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段、及寡聚區域，其中該寡聚區域係選自由以下各項組成之群：鼠類IgG1 Fc區域、鼠類IgG2A Fc區域、GCN4三聚物區域、格形蛋白三聚物區域、及p53四聚物區域、或其片段。
本文描述的寡聚區域可包含選自由以下各項組成之群的區域：格形蛋白、GCN4三聚區域、p53四聚區域、及五聚區域。在一些態樣中，寡聚區域可包含Fc區域、Fc區域之片段、及Fc區域之變異體。在一個實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係融合至該Fc區域或其片段之C末端。在另一實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係融合至該Fc區域或其片段之N末端。在一個實施例中，Fc區域可為人類或小鼠免疫球蛋白。在另一實施例中，寡聚區域可包含小鼠IgG1或小鼠IgG2A之Fc片段或其片段。
在一些態樣中，本文描述的融合蛋白之寡聚區域為鼠類IgG1 Fc區域或鼠類IgG2A Fc區域。在一些態樣中，鼠類IgG1 Fc區域或鼠類IgG2A Fc區域包含鉸鏈區。
如本文描述的包含PD-1蛋白之細胞外區域或其片段及寡聚區域的融合蛋白可包含鼠類IgG1 Fc區域或鼠類IgG2A Fc區域，其包含鉸鏈區。
如本文描述的包含PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段及寡聚區域的融合蛋白可包含鼠類IgG1 Fc區域或鼠類IgG2A Fc區域，其包含鉸鏈區。
本文描述的融合蛋白可為較高級結構之部分，諸如
蛋白或多聚複合物。此可經由具有多聚區域之蛋白的有意設計或固有地經由重組蛋白之意外性質達成。在一些態樣中，PD-1及/或PD-L1蛋白或其片段係經由一個或多個肽連接子融合至寡聚區域。在一些態樣中，PD-1蛋白之細胞外區域或其片段係經由一個或多個肽連接子融合至寡聚區域。在一些態樣中，PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段係經由一個或多個肽連接子融合至寡聚區域。在一些態樣中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由一個或多個肽連接子融合至Fc區域或其片段。在一些態樣中，在本文描述的融合蛋白中，PD-1蛋白之細胞外區域或其片段係經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸的撓性連接子融合至寡聚區域，或經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸、脯胺酸、及絲胺酸的撓性pro連接子融合至寡聚區域。在一些態樣中，該一個或多個肽連接子包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5中闡述的胺基酸序列。在一些態樣中，在本文描述的融合蛋白中，PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段係經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸的撓性連接子融合至寡聚區域，或經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸、脯胺酸、及絲胺酸的撓性pro連接子融合至寡聚區域。在一些態樣中，該一個或多個肽連接子包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5中闡述的胺基酸序列。
在一些實施例中，融合蛋白可包含在SEQ ID NOs：14-27或SEQ ID NOs：29-30中闡述的胺基酸序列。
本發明之其他態樣包括如本文描述的融合蛋白，其進一步包含訊號序列，其中該訊號序列係融合在PD-1蛋白之細胞外區域或其片段的N末端處。本發明之其他態樣包括如本文描述的融合蛋白，其進一步包含訊號序列，其中該訊號序列係融合在PD-L1蛋白之細胞外區域或其片段的N末端處。
在一些態樣中，訊號序列包含SEQ ID NO：3中闡述的胺基酸序列。在其他態樣中，訊號序列之胺基酸序列與SEQ ID NO：3中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性。
在本發明之一些態樣中，本文描述的融合蛋白包含PD-1之細胞外區域，其胺基酸序列與由SEQ ID NO：1之殘基21至170、殘基21至145、殘基33至170、殘基33至145、殘基35至170或殘基35至145組成的胺基酸序列共有至少70%同源性。在一些態樣中，融合蛋白包含PD-1之細胞外區域，其胺基酸序列與由SEQ ID NO：1之殘基21至170組成的胺基酸序列共有至少70%同源性。在一些態樣中，融合蛋白包含PD-1之細胞外區域，其胺基酸序列由SEQ ID NO：1之殘基21至170組成。
在本發明之其他態樣中，本文描述的融合蛋白包含PD-L1之細胞外區域，其胺基酸序列與由SEQ ID NO：2之殘基18至239、殘基18至238、殘基18至225、殘基18至134、殘基18至127、殘基19至239、殘基19至238、殘基19至225、殘基19至134、殘基19至127、殘基133至225、殘基133至238、或殘基133至239組成的胺基酸序列共有至少70%同源性。在一些態樣中，融合蛋白包含PD-L1之細胞外區域，其胺基酸序列與由SEQ ID NO：2之殘基18至239組成的胺基酸序列共有至少70%同源性。在一些態樣中，融合蛋白包含PD-L1之細胞外區域，其胺基酸序列由SEQ ID NO：2之殘基18至239組成。
在又一態樣中，如本文描述的融合蛋白包含PD-1之細胞外區域，其胺基酸序列包含與SEQ ID NO：12中闡述的胺基酸序列具有至少70%同源性的序列。
在又一態樣中，如本文描述的融合蛋白包含PD-L1之細胞外區域，其胺基酸序列包含與SEQ ID NO：22中闡述的胺
基酸序列具有至少70%同源性的序列。
根據本發明之融合蛋白可包含PD-1之細胞外區域或其片段，及寡聚區域，其胺基酸序列係選自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、及SEQ ID NO：28組成之群。
根據本發明之融合蛋白可包含PD-L1之細胞外區域或其片段，及寡聚區域，其胺基酸序列係選自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、及SEQ ID NO：28組成之群。
在一些態樣中，本文描述的融合蛋白之胺基酸序列係選自由SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、及SEQ ID NO：29組成之群。在一些態樣中，本文描述的融合蛋白之胺基酸序列係選自由與SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、或SEQ ID NO：29中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列組成之群。
在一些態樣中，本文描述的融合蛋白之胺基酸序列係選自由SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、及SEQ ID NO：30組成之群。在一些態樣中，本文描述的融合蛋白之胺基酸序列係選自由與SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、或SEQ ID NO：30中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列組成之群。
本發明之一些態樣係關於如本文描述的融合蛋
白，其中該PD-1為重組PD-1。本發明之其他態樣係關於如本文描述的融合蛋白，其中該PD-1為重組人類PD-1。
本發明之一些態樣係關於如本文描述的融合蛋白，其中該PD-L1為重組PD-L1。本發明之其他態樣係關於如本文描述的融合蛋白，其中該PD-L1為重組人類PD-L1。
本文描述的一個態樣提供編碼重組融合蛋白之核酸、包含核酸之載體、及包含載體之寄主細胞。在一個實施例中，載體編碼連接至訊號肽序列之核酸分子。
本文描述的另一態樣提供製造包含PD-1及/或PD-L1蛋白之細胞外區域的融合蛋白之方法，該方法包含：(a)用編碼融合蛋白之核酸分子轉染寄主細胞，其中該核酸分子包含編碼訊號肽之核苷酸序列，其融合至i)在PD-1及/或PD-L1肽之細胞外區域之N末端處連接至編碼PD-1及/或PD-L1肽之該細胞外區域的核苷酸序列的編碼人類或小鼠IgG之Fc區域的核苷酸序列，ii)在該Fc區域之N末端處連接至編碼人類或小鼠或其他哺乳動物IgG之Fc區域的核苷酸序列的編碼PD-1及/或PD-L1肽的核苷酸序列；及(b)藉由在寄主細胞中表現(a)之核酸分子來製造該融合蛋白。在一個實施例中，細胞外區域係經由連接子融合至Fc區域。連接子可為SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5。本文描述的另一態樣提供製造包含PD-1及/或PD-L1蛋白之細胞外區域的融合蛋白之方法，該方法包含：(a)用編碼如本文描述的融合蛋白之核酸分子轉染寄主細胞；及(b)藉由在寄主細胞中表現(a)之核酸分子來製造該融合蛋白。
對於融合蛋白之重組產生而言，可基於共同的分子選殖協定來構築多種表現載體。載體組件通常包括但不限於以下一種或多種：用於所表現蛋白之分泌的訊號序列、包括用於
在真核生物細胞中進行穩定細胞系篩選的選擇標誌基因之一個或多個標誌基因、複製起點、增強子元件、啟動子、轉錄終止序列、poly A訊號、隔絕子等等。
本文亦提供包含融合蛋白之組合物，該融合蛋白包含PD-1及/或PD-L1或其片段、及寡聚區域。本文進一步提供製造包含融合蛋白之組合物的方法，該融合蛋白如本文所述包含PD-1及/或PD-L1或其片段及寡聚區域。亦提供包含融合蛋白或組合物之套組。
另外，本文提供使用融合蛋白作為抗原進行抗體生物監測之方法。本文描述的融合蛋白可用作用於治療抗體生物監測之抗原。抗體包括抗PD-1(諸如納武單抗及派姆單抗)及/或抗PD-L1抗體(阿特珠單抗及阿維魯單抗)。
本文描述的一個態樣提供用於診斷、監測或分級藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病的方法，其包含使來自已經歷至少一種劑量之免疫療法的患者的樣本與本文揭示的融合蛋白接觸。
本文描述的一個態樣提供用於測定治療抗PD-1及/或PD-L1抗體之功效的方法，其包含使來自已經歷至少一種劑量之免疫療法的患者的樣本與本文揭示的融合蛋白接觸。
本文描述的另一態樣包括向患者提供免疫療法的方法，其包含向該患者投與治療抗體且偵測抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體之存在。可設想該些方法可用於監測基於抗體的療法之功效。
本文描述的另一態樣包括藉由量測抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體來偵測及/或監測藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病的方法。在一些態樣中，方法包含使來自患者的樣本與本文
描述的融合蛋白接觸。在一些態樣中，患者已經歷用治療抗體的一系列免疫療法。
在一些態樣中，本發明係關於測定選自由納武單抗、派姆單抗及其他抗PD-1療法組成之群的生物治療抗體之循環位準量的方法，其包含(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本，及(ii)使該樣本與本文描述的融合蛋白接觸。
在一些態樣中，本發明係關於測定選自由阿特珠單抗、阿維魯單抗、及其他抗PD-L1療法組成之群的生物治療抗體之(自由)循環位準量的方法，其包含(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本；及(ii)使該樣本與本文描述的融合蛋白接觸。
當在申請專利範圍及/或說明書中與術語「包含」結合使用時，詞語「一(a/an)」之使用可意指「一個/種」，但其亦符合「一個或多個/種」、「至少一個/種」及「一個/種或一個/種以上」之含義。
前文已相當廣泛地概述本文揭示的實施例之特徵及技術優勢以便隨後的詳細描述可得以更好地理解。另外的特徵及優點將在下文描述，其形成申請專利範圍之標的。熟習此項技術者應瞭解所揭示的概念及特定實施例可容易地用作用於修改或設計其他結構之基礎，該等其他結構用於實施本文揭示的各種實施例之相同目的。熟習此項技術者亦應理解此等等效構造不脫離如所附申請專利範圍中闡述的本發明之精神及範疇。咸信為本文揭示的各種實施例之特性的新穎特徵就其組織及操作方法而言連同進一步目標及優點將自以下描述在結合隨附圖式考慮時得以更好地理解。然而，將明確地理解圖式中之每一者係僅提供用於說明及描述之目的且不欲作為所揭示實施例之限制的定義。
圖1-表示在表現及用還原性4-20% Tris-甘胺酸TGX凝膠純化後的各種融合蛋白之SDS-PAGE層析法。
圖2-表示在表現及用非還原性4-20% Tris-甘胺酸TGX凝膠純化後的各種融合蛋白之SDS-PAGE層析法。
圖3A-顯示在連續稀釋系列(自0.5μg/ml至0.04μg/ml之稀釋)中重組PD-1融合蛋白針對抗PD-1抗體之專一反應性。
圖3B-顯示在如上文提及的稀釋系列中重組PD-L1融合蛋白針對抗PD-L1抗體之專一反應性。圖式亦顯示PD-L1-Fc單體及PD-L1-p53四聚物之反應性的比較。
圖4A-顯示用於定量人類血漿中之抗PD-1抗體(派姆單抗)的各種PD-1融合蛋白之比較。
圖4B-顯示用於定量人類血漿中之抗PD-1抗體(派姆單抗)的各種PD-1融合蛋白之訊號對截止雜訊。
圖5-顯示各種PD-L1融合蛋白針對抗PD-L1抗體之專一反應性。
[序列簡述]
SEQ ID NO：1為PD-1之胺基酸序列(UniProt：Q15116)。
SEQ ID NO：2為PD-L1之胺基酸序列(UniProt：Q9NZQ7)
SEQ ID NO：3為人類IL2訊號肽之胺基酸序列。
SEQ ID NO：4為撓性Gly-Ser連接子之胺基酸序列。
SEQ ID NO：5為撓性Gly-Pro-Ser連接子(撓性Pro連接子)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：6為僅含有CH2及CH3區域的鼠類IgG1之胺基酸序列。
SEQ ID NO：7為含有Fc區的鼠類IgG1之胺基酸序列。
SEQ ID NO：8為含有Fc區的鼠類IgG2A之胺基酸序列。
SEQ ID NO：9為GCN4三聚物區域之胺基酸序列。
SEQ ID NO：10為格形蛋白三聚物區域之胺基酸序列。
SEQ ID NO：11為p53四聚物區域之胺基酸序列。
SEQ ID NO：12為PD-1片段之胺基酸序列。
SEQ ID NO：13為PD-L1片段之胺基酸序列。
SEQ ID NO：14為根據本發明之一個實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1(GGGGS)2-鼠類IgG1(僅CH2、CH3)362 AA撓性連接子)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：15為根據本發明之另一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1(GGGPS)2-鼠類IgG1(僅CH2、CH3)362 AA撓性Pro連接子)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：16為根據本發明之另一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1-鼠類IgG1 Fc 365 AA，無鉸鏈)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：17為根據本發明之另一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1-鼠類IgG2A Fc 370 AA，無鉸鏈)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：18為根據本發明之又一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1-GCN4三聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：19為根據本發明之又一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1-格形蛋白三聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：20為根據本發明之又一實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1-p53四聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：21為根據本發明之一個實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1(GGGGS)2-鼠類IgG1(僅CH2、CH3)361 AA撓性連接子)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：22為根據本發明之另一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1(GGGPS)2-鼠類IgG1(僅CH2、CH3)361 AA撓性pro連接子)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：23為根據本發明之另一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1-鼠類IgG1 Fc 364 AA，無鉸鏈)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：24為根據本發明之另一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1-鼠類IgG2A Fc 370 AA，無鉸鏈)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：25為根據本發明之又一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1-GCN4三聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：26為根據本發明之又一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1-格形蛋白三聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：27為根據本發明之又一實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1-p53四聚物區域)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：28為僅含有CH2及CH3區域的鼠類IgG2A之胺基酸序列。
SEQ ID NO：29為根據本發明之一個實施例的PD-1融合蛋白(HuIL2SS-PD-1(GGGGS)2-p53-Histag)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：30為根據本發明之一個實施例的PD-L1融合蛋白(HuIL2SS-PD-L1(GGGGS)2-p53-Histag)之胺基酸序列。
SEQ ID NO：31為根據本發明之一個實施例的聚組胺酸標籤(tag)之胺基酸序列。
以下描述僅僅意欲說明本揭示內容之各種實施例。因而，所論述的特定修改不意欲為限制性的。熟習此項技術者將明白，各種等效物、改變、及修改可在不脫離本文提出的標的之精神或範疇的情況下做出，且應瞭解此等等效實施例將包括在本文中。
如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數指示物，除非內容另外清楚地指定。
遍及本說明書，除非上下文另外需要，否則詞語「包含(comprise)」或變化形式諸如「包含(comprise)」或「包含(comprising)」將理解為暗示包括所述元件或整數或元件或整數之群組但不排除任何其他元件或整數或元件或整數之群組。
本說明書中之每一實施例將以必要的變更應用於
每一其他實施例，除非另外明確地陳述。
除非另外指示，否則以下術語應理解為具有以下含義。
如本文所使用，術語「重組」係指生物分子，例如，基因或蛋白質，其(1)已自其天然存在的環境移除，(2)不與其中在自然界發現基因的多核苷酸之全部或一部分相關聯，(3)可操作地連接至本質上不與其有關的多核苷酸，或(4)在自然界不存在。術語「重組」可用於提及經選殖的DNA分離物、化學上合成的多核苷酸類似物、或藉由異源系統生物合成的多核苷酸類似物、以及藉由此種核酸編碼的蛋白質及/或mRNA。
如本文所使用，術語「核酸」係指包含DNA或RNA的任何物質。核酸可以合成方式製得或藉由活細胞來製得。
如本文所使用，術語「多核苷酸」係指核苷酸之聚合鏈。術語包括DNA分子(例如，cDNA或基因組或合成DNA)及RNA分子(例如，mRNA或合成RNA)，以及含有非天然核苷酸類似物、非原生內核苷鍵、或兩者的DNA或RNA之類似物。核酸可呈任何拓撲學構形。例如，核酸可為單鏈、雙鏈、三鏈、四鏈體、部分雙鏈、分支、髮夾形、圓形、或呈掛鎖式構形。
如本文所使用，術語「蛋白質」係指大的生物分子或巨分子，其由胺基酸殘基之一個或多個鏈組成。許多蛋白質為催化生物化學反應且對新陳代謝至關重要的酶。蛋白質亦具有結構或機械功能，諸如肌肉中之肌動蛋白及肌球蛋白及細胞骨架中之蛋白質，該細胞骨架形成維持晶胞形狀之支架系統。其他蛋白質在細胞傳訊、免疫反應、細胞黏著、及細胞週期中為重要的。然而，蛋白質可為完全人工或重組的，亦即，在生物系統中不是天然存在的。
如本文所使用，術語「多肽」係指天然存在及非天然存在的蛋白質，及其片段、突變體、衍生物及類似物。多肽可為單體的或聚合的。多肽可包含許多不同的區域，其每一者具有一種或多種相異活性。多肽可為融合蛋白，如本文描述。
如本文所使用，術語「融合蛋白」係指包含不共同存在於天然存在蛋白質中的兩個或兩個以上胺基酸序列之蛋白質。融合蛋白可包含來自相同或來自不同生物體的兩個或兩個以上胺基酸序列。融合蛋白之兩個或兩個以上胺基酸序列典型地同框而在其之間無終止密碼子，且典型地轉譯自mRNA以作為融合蛋白之部分。
如本文所使用，術語「抗原」係指專一地結合至各別抗體之生物分子。來自多樣行為戲目之抗體憑藉其可變區相互作用(CDR環)，即成為鎖與匙之間的配合的類似物結合專一性抗原結構。
當在多核苷酸序列之上下文中使用時，術語「變異體」可涵蓋與野生型基因有關的多核苷酸序列。此定義亦可包括例如「對偶基因」、「拼接(splice)」、「物種」、或「多形」變異體。拼接變異體可具有與參考分子之顯著一致性，但將通常歸因於在mRNA加工期間外顯子之交替拼接而具有較多或較少數量之多核苷酸。相應多肽可擁有另外的功能區域或不存在區域。物種變異體為自一種物種至另一物種有所變化的多核苷酸序列。本發明之特定實用性為野生型標靶基因產物之變異體。變異體可由核酸序列中之至少一種突變產生且可產生變更的mRNA或由多肽中之至少一種突變產生，該等多肽之結構或功能可或可不變更。任何給定天然或重組基因可不具有、具有一種或許多種對偶基因形式。產生變異體的常見突變改變通常係歸
結於核苷酸之天然缺失、添加、或取代。該些類型改變中之每一者可單獨發生，或與其他改變組合發生，在給定序列中發生一次或多次。
如本文所使用，術語「抗體」或「免疫球蛋白」具有相同的含義，且將在本發明中等效地使用。如本文所使用的術語「抗體」係指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，亦即，含有專一地免疫結合抗原的抗原結合位點之分子。因而，術語抗體不僅涵蓋完整抗體分子，而且涵蓋抗體片段或衍生物。抗體片段包括但不限於Fc、Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、sc(Fv)2及雙功能抗體。
在天然抗體中，兩個重鏈係藉由二硫鍵彼此連接且每一重鏈係藉由二硫鍵連接至輕鏈。存在兩個類型之輕鏈拉目達(lambda；λ)及卡帕(kappa；κ)。存在五個決定抗體分子之功能活性的主要重鏈類別(或同型)：IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。每一鏈含有相異序列區域。輕鏈包括兩個區域可變域(VL)及恆定域(CL)。重鏈包括四個區域可變域(VH)及三個恆定域(CH1、CH2及CH3，共同稱為CH)。輕鏈可變區(VL)及重鏈可變區(VH)決定對抗原之結合識別及專一性。輕鏈恆定區的區域(CL)及重鏈恆定區的區域(CH)賦予重要的生物學性質，諸如抗體鏈締合、分泌、跨胎盤遷移率、補體結合、及與Fc受體(FcR)之結合。Fv片段為免疫球蛋白之Fab片段之N末端部分且由一個輕鏈及一個重鏈之可變部分組成。抗體之專一性在於抗體組合位點與抗原決定位之間的結構互補性。抗體結合位點由主要來自高度變異或互補決定區(complementarity determining region；CDR)的殘基構成。偶爾地，來自非高度變異或框架區(framework region；FR)之殘基影響總體區域結構且因此影響組合位點。互補決定區或
CDR係指共同界定原生免疫球蛋白結合位點之天然Fv區之結合親和力及專一性的胺基酸序列。免疫球蛋白之輕鏈及重鏈各自具有三個CDR，其分別稱為L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3及H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3。因此，抗原結合位點包括六個CDR，其包含來自重鏈V區及輕鏈V區中之每一者的CDR集合。框架區(FR)係指插入CDR之間的胺基酸序列。
許多經批準的治療抗體已使用G1m17.1：Km3重鏈及輕鏈恆定區異型(Jeffris及Lefranc 2009)。其他使用替代的G1m3：Km3異型。異型在治療抗體之排斥中的作用則mAb療法開始時是不明顯的，因為異型之差異並不如其在當下一般被普遍知曉。治療mAb之異型與清除率之間存在清楚的聯繫。此係歸因於與FcRn新生兒Fc受體的相互作用差異，該FcRn新生兒Fc受體起作用來保持一些mAb螯合在細胞隔室內以再循環回血流中且不被快速清除(Ternant等人2016)。異型的該些差異及對細胞免疫刺激之效應當下正逐漸變得更為人所知(Webster等人2016)。雖然不可能產生免疫原性，但其對半衰期具有明確的效應。因此，量測循環治療抗體之量的測試可揭露藥物之位準及對劑量增量之潛在需要。替代地，一些患者可需要較少藥物來維持有效位準，詳言之，在T細胞表面上的抗PD-1之位準維持高位準的情況下如此。若結合特定試劑使用或在免疫測定法之技藝人士所熟悉的競爭測定中使用，則該些抗原可用於量測藉由任何類型之抗體(IgG1、IgG4、DART、BiTes等等)的結合。
使用多種免疫檢查點抑制劑mAb及其他藥物的下一代組合療法亦需要監測位準的有效手段。該些類型之組合治療不僅更為有效而且正變得普遍(Dempke等人2017)。本文描述的測定將亦在該些情況下對量測抗PD-1或抗PD-L1組分為重要
的。
如本文所使用，「定點突變誘發」係指其中突變在DNA分子中的限定位點處產生的過程。限定位點係指基於相互作用之親和力選擇的位點。用於突變誘發的DNA分子通常為稱為質體之圓形分子。大致上，定點突變需要已知野生型基因序列。此技術亦稱為「位點專一性突變誘發」或「定寡核苷酸突變誘發」。因此，「定點突變」意指藉由定點突變誘發之技術在DNA分子中之限定位點處產生的突變。在一個實施例中，使用定點突變誘發產生的突變DNA序列與野生型序列具有多於40%、多於45%、多於50%、多於55%、多於60%、多於65%、多於70%、多於75%、多於80%、多於85%、多於90%、多於95%、或大於98%的同源性。替代地，突變DNA可使用任何已知的突變程序(例如，輻射、亞硝基胍等等)活體內產生。DNA構築序列可為野生型、突變的或經修飾的。另外，序列可為同源或異源的。
術語「野生型序列」或「野生型基因」在本文可互換地使用來指代在寄主細胞中原生或天然存在的序列。在一些實施例中，野生型序列係指所關注的序列，其為蛋白質基因工程計劃之起始點。野生型序列可編碼同源或異源蛋白。同源蛋白為寄主細胞將在無介入情況下產生的蛋白質。異源蛋白為寄主細胞若是沒有介入就不會產生的蛋白質。
術語「經修飾序列」及「經修飾基因」在本文中可互換地使用來指代包括天然存在的核酸序列之缺失、插入或中斷的序列。在一些較佳實施例中，經修飾序列之表現產物為截斷蛋白(例如，若修飾為序列之缺失或中斷)。在一些尤其較佳實施例中，截斷蛋白保留生物活性。在替代實施例中，經修飾序
列之表現產物為伸長蛋白(例如，包含於核酸序列中之插入的修飾)。在一些實施例中，插入產生截斷蛋白(例如，當插入產生終止密碼子之形成時)。因此，插入可產生截斷蛋白或伸長蛋白作為表現產物。
如本文所使用，術語「突變序列」及「突變基因」可互換地使用且係指在存在於寄主細胞之野生型序列中的至少一個密碼子中具有變更的序列。突變序列之表現產物為相對於野生型具有經變更胺基酸序列之蛋白質。表現產物可具有經變更的功能容量(例如，增強的結合親和力)。
如本文所使用，術語「連接子」係指包含1-30個胺基酸、較佳3-6個胺基酸之多肽。連接子之胺基酸可選自由以下各項組成之群：白胺酸(Leu,L)、異白胺酸(Ile,I)、丙胺酸(Ala,A)、甘胺酸(Gly,G)、纈胺酸(Val,V)、脯胺酸(Pro,P)、離胺酸(Lys,K)、精胺酸(Arg,R)、絲胺酸(Ser,S)、天冬醯胺酸(Asn,N)、及麩醯胺(Gln,Q)、色胺酸(Trp,W)、甲硫胺酸(Met,M)、天冬胺酸(Asp,D)、半胱胺酸(Cys,C)、麩胺酸(Glu,E)、組胺酸(His,H)、苯丙胺酸(Phe,F)、蘇胺酸(The,T)、及酪胺酸(Tyr,Y)。
「診斷」或「經診斷」意指識別病理學病狀或對疾病敏感之患者的存在或性質。診斷方法在其靈敏度及專一性方面有所不同。診斷測定之「靈敏度」為其測試為陽性的患病個體之百分比(「真陽性」之百分比)。未由測定偵測到的患病個體為「假陰性」。並未患病且在測定中測試為陰性的受試者稱為「真陰性」。診斷測定之「專一性」為1減假陽性率，其中「假陽性」率係定義為不患有疾病的測試為陽性的彼等者之比例。雖然特定診斷方法可不提供對病狀之限定診斷，但若方法提供輔助診斷的積極指示，則該方法足矣。
術語「患者」或「個體」在本文可互換地使用，且係指待治療的哺乳動物受試者，其中人類患者較佳。在一些情況下，本發明之方法在實驗動物、在獸醫學應用、及在開發用於疾病之動物模型中得到使用，該等動物模型包括但不限於齧齒動物，包括小鼠、大鼠、及倉鼠；及靈長類動物。
如本文所使用的術語「樣本」係指自受試者或患者獲得的任何生物材料。在一個態樣中，樣本可包含血液、腹膜液、CSF、唾液或尿。在其他態樣中，樣本可包含全血、血漿、血清、自血液樣本富集的B細胞、及經培養細胞(例如，來自受試者之B細胞)。樣本亦可包括包括神經組織之生物檢體或組織樣本。在其他態樣中，樣本可包含整個細胞及/或細胞之溶解產物。
如本文所使用的術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」意指逆轉應用此種術語的病症或病狀或此種病症或病狀的一個或多個症狀、減輕該病症或病狀或此種病症或病狀的一個或多個症狀、抑制該病症或病狀或此種病症或病狀的一個或多個症狀之進程、或預防該病症或病狀或此種病症或病狀的一個或多個症狀。「治療有效量」意欲達成向受試者賦予治療益處所必需的活性劑之最小量。例如，對哺乳動物之「治療有效量」為此種量，其誘導、改善或以其他方式引起病理學症狀、疾病進程或與病症相關聯之生理病狀或屈服於病症之阻力的改良。
如本文所使用的術語「預防」係指預防疾病或病狀發生在尚未診斷為患有該疾病或病狀的受試者中。
如本文所使用的術語「癌症」、「過度增殖」及「贅生性(neoplastic)」係指具有自體生長能力，亦即，異常狀態或
藉由快速增殖的細胞生長表徵的狀況之細胞。過度增殖及贅生性疾病狀態可分類為病理性的，亦即，表徵或構成疾病狀態，或可分類為非病理性的，亦即，自正常偏離但不與疾病狀態相關聯。術語意欲包括所有類型之癌性生長或致癌性過程、轉移性組織或惡性轉化細胞、組織、或器官，不管組織病理學類型或是侵襲性階段。術語「癌症」或「贅生物」包括各種器官系統之惡性腫瘤，其諸如影響肺、乳房、甲狀腺、淋巴樣、胃腸、及生殖泌尿道，以及腺癌，其包括諸如大多數結腸癌、腎細胞癌、前列腺癌及/或陰囊腫瘤的惡性腫瘤，肺之非小細胞癌，小腸癌及食管癌。
本文描述的一個態樣利用治療抗體來診斷、監測或分級藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病及療法之功效。更特地而言，揭示偵測及監測治療抗體之方法，其中患者已經歷至少一個免疫療法過程。各種癌症或慢性感染可根據本文揭示的方法監測、分級或診斷。
癌症之實例包括但不限於血液學惡性腫瘤，諸如B細胞淋巴樣贅生物、T細胞淋巴樣贅生物、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、B-NHL、T-NHL、慢性淋巴球性白血病(chronic lymphocytic leukemia；CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma；SLL)、套膜細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma；MCL)、NK-細胞淋巴樣贅生物及骨髓細胞譜系贅生物。非血液學癌症之實例包括但不限於結腸癌、乳癌、肺癌、腦癌、前列腺癌、頭頸癌、胰臟癌、膀胱癌、結腸直腸癌、骨癌、子宮頸癌、肝癌、口腔癌、食管癌、甲狀腺癌、腎癌、胃癌、睾丸癌及皮膚癌。
慢性感染之實例包括但不限於病毒、細菌、寄生蟲
或真菌感染，諸如慢性肝炎、肺感染、下呼吸道感染、支氣管炎、流感、肺炎及性傳播疾病。病毒感染之實例包括但不限於肝炎(HAV、HBV、HCV)、單純皰疹(HSV)、帶狀皰疹、HPV、流感(Flu)、AIDS及AIDS相關複徵症候群、水痘(chickenpox)(水痘(varicella))、普通感冒、巨細胞病毒(cytomegalovirus；CMV)感染、天花(smallpox)(天花(variola))、克羅拉多壁蝨熱、登革熱、伊波拉(ebola)出血熱、口蹄疫、賴薩熱、麻疹、馬爾堡出血熱、感染性單核血球病、流行性腮腺炎、諾羅病毒、脊髓灰白質炎、進行性多灶性白質腦病(progressive multifocal leukoencephalopathy；PML)、狂犬病、風疹、SARS、病毒性腦炎、病毒性胃腸炎、病毒性腦膜炎、病毒性肺炎、西尼羅河病及黃熱病。細菌感染之實例包括但不限於肺炎、細菌性腦膜炎、霍亂、白喉、結核病、炭疽、肉毒中毒、布氏桿菌病、曲狀桿菌病、斑疹傷寒、淋病、李氏菌病、來母病、風濕性熱、百日咳(pertussis)(百日咳(Whooping Cough))、瘟疫、沙氏桿菌病、猩紅熱、志賀桿菌病、梅毒、破傷風、沙眼、兔熱病、傷寒熱、及尿路感染。寄生蟲感染之實例包括但不限於瘧疾、利什曼體病、錐蟲病、查加斯氏(Chagas)病、隱胞子蟲病、肝蛭症、絲蟲病、變形蟲感染、梨形鞭毛蟲症、蟯蟲感染、血吸蟲病、條蟲病、弓蟲症、旋毛蟲症、及錐蟲病。真菌感染之實例包括但不限於念珠菌病、麴菌病、球黴菌症、隱球菌症、組織漿菌症及足癬。
本文揭示的方法可用於測定治療抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之劑量。特別而言，方法包含測試來自已經歷至少一個免疫療法過程的人類之樣本以量測治療抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之位準，其中取決於抗體之位準，可調整用抗體之進一步
治療。
在另一實施例中，本文的揭示內容係關於用於偵測患者對治療抗體治療之反應性的方法，其中該治療抗體係針對PD-1及/或PD-L1，該方法包含在來自患者之樣本中測定無活性TNFalpha之存在或量，該存在或量指示患者對該治療之低或逐漸降低反應性。在一較佳實施例中，方法亦包含測定治療抗體及針對該治療抗體的抗藥物抗體之存在或量以獲得患者分佈，其中該患者分佈指示對該治療之反應性。
[PD-1及PD-L1]
本發明係關於融合蛋白，其包含PD-1(程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域及寡聚區域，及/或係關於融合蛋白，其包含PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白)之細胞外區域及寡聚區域。
PD-1及PD-L1序列可為原生人類序列之變異體。如本文所使用，術語「變異體」係指顯示與參考實體顯著的結構一致性但與參考實體比較則一種或多種化學部分之存在或位準下在結構式與該參考實體有所不同的實體。在許多實施例中，變異體亦在功能上與其參考實體有所不同。一般而言，特定實體是否適當地考慮為「參考實體」之變異體係基於其與參考實體的結構一致性程度。熟習此項技術者將瞭解，任何生物或化學參考實體具有某些特性結構元件。按定義，變異體係共有一個或多個此種特性結構元件之相異化學實體。多肽可具有包含複數個胺基酸的特性序列元件，該等胺基酸具有在線性或三維空間中相對於彼此的及/或貢獻於特定生物功能的指定位置。例如，變異體多肽可由於胺基酸序列之一個或多個差異及/或共價地附接至多肽主鏈之化學部分(例如，碳水化合物、脂質等等)
之一個或多個差異而不同於參考多肽。在一些實施例中，變異體多肽顯示與參考多肽的至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、或99%的總體序列一致性。替代地或另外，在一些實施例中，變異體多肽不與參考多肽共有至少一個特性序列元件。在一些實施例中，參考多肽具有一種或多種生物學活性。在一些實施例中，變異體多肽共有參考多肽之生物學活性的一種或多種。在一些實施例中，變異體多肽缺乏參考多肽之生物學活性的一種或多種。在一些實施例中，變異體多肽顯示與參考多肽比較減少位準的一種或多種生物學活性。在許多實施例中，若所關注多肽除在特定位置處的少量序列變更外具有與母體之胺基酸序列一致的胺基酸序列，則該所關注多肽係考慮為該母體或參考多肽之「變異體」。典型地，與母體比較，變異體的殘基中少於20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%經取代。在一些實施例中，與母體比較，變異體具有10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1個經取代殘基。常常，變異體具有極小數量(例如，少於5、4、3、2、或1個)之經取代功能殘基(亦即，參與特定生物活性之殘基)。此外，與母體比較，變異體典型地具有不大於5、4、3、2、或1個添加或缺失，且常常不具有添加或缺失。此外，任何添加或缺失典型地少於約25、約20、約19、約18、約17、約16、約15、約14、約13、約10、約9、約8、約7、約6個殘基，且通常少於約5、約4、約3、或約2個殘基。在一些實施例中，母體或參考多肽為在自然界發現的多肽。如一般技藝人士將理解的，所關注特定多肽之複數個變異體可通常在自然界中發現，尤其所關注多肽為感染物多肽時如此。
在本文描述的一個實施例中，融合蛋白包含PD-1
蛋白(SEQ ID NO：1)之預測細胞外區域或其片段。在一個態樣中，PD-1蛋白之細胞外區域包含SEQ ID NO：12或其片段。在另一態樣中，PD-1之細胞外區域可與由SEQ ID NO：1之位置21至170處的胺基酸組成的多肽序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。
PD-1之細胞外區域包含：包含SEQ ID NO：1之殘基1至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基1至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基1至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基35至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基35至170的多肽、及包含SEQ ID NO：1之殘基35至145的多肽。在一個實施例中，PD-1之細胞外區域可與以下各項具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性：包含SEQ ID NO：1之殘基1至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基1至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基1至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基21至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至170的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基33至145的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基35至171的多肽、包含SEQ ID NO：1之殘基35至170的多肽、及包含SEQ ID NO：1之殘基35至145的多肽。在另一實施例中，PD-1之細胞外區域包
含SEQ ID NO：12中闡述的胺基酸序列。在另一實施例中，PD-1之細胞外區域可與SEQ ID NO：12中闡述的胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。
在本文描述的另一實施例中，融合蛋白包含PD-L1蛋白(SEQ ID NO：2)之細胞外區域或其片段。在另一實施例中，PD-L1蛋白之細胞外區域包含SEQ ID NO：13或其片段。另外，PD-L1之細胞外區域可與由SEQ ID NO：2之位置19至238處的胺基酸組成的多肽序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。
PD-L1之細胞外區域可為包含SEQ ID NO：2之殘基1至240的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基1至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基1至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至240的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至134的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至127的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至134的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至127的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基133至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基133至238的多肽、及包含SEQ ID NO：2之殘基133至239的多肽。在一個實施例中，PD-L1之細胞外區域可與以下各項具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、
92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性：包含SEQ ID NO：2之殘基1至240的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基1至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基1至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至240的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至134的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基18至127的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至239的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至238的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至134的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基19至127的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基133至225的多肽、包含SEQ ID NO：2之殘基133至238的多肽、及包含SEQ ID NO：2之殘基133至239的多肽。在另一實施例中，PD-L1之細胞外區域包含SEQ ID NO：13中闡述的胺基酸序列。在另一實施例中，PD-L1之細胞外區域可與SEQ ID NO：13中闡述的胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。
另外，某些殘基可藉由定點突變誘發修飾以達成在已知mAb與其標靶之間的改良的較高親和力相互作用。在一些實施例中，與母體比較，該修飾構成10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1個殘基之取代。常常，利用定點突變誘發之修飾具有極小數量(例如，少於5、4、3、2、或1個)之經取代功能殘基(亦即，參與結合親和力之殘基)。此外，與母體比較，利用定點突變誘發的修飾典型地具有不大於5、4、3、2、或1個添加或缺失，且
常常不具有添加或缺失。此外，任何添加、缺失或取代典型地少於約50個殘基、約45個殘基、約40個殘基、約35個殘基、約30個殘基、約25個殘基、約20個殘基、約19個殘基、約18個殘基、約17個殘基、約16個殘基、約15個殘基、約14個殘基、約13個殘基、約12個殘基、約11個殘基、約10個殘基、約9個殘基、約8個殘基、約7個殘基、約6個殘基，且通常少於約5個殘基、約4個殘基、約3個殘基、或約個殘基。在一些實施例中，母體或參考多肽為在自然界發現的多肽。
在一個實施例中，PD-1內對與抗PD-1抗體相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基經修飾以達成在抗體與其標靶之間的改良的較高親和力相互作用。在一些實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及氫鍵合。在另一實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及形成鹽橋。在另一實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及水介導的相互作用。在另一實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及凡得瓦相互作用。
在一個實施例中，PD-1內對與派姆單抗mAb相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基係經修飾的。在相關實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1N66、PD-1T76、PD-1K78、PD-1S87、PD-1K131 PD-1F63、PD-1E84、PD-1S87、PD-1G90及PD-1A132。在另一相關實施例中，PD-1內經修飾的胺基酸殘基為PD-1D85。在另一相關實施例，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1K78、PD-1S87及PD-1D85。在另一實施例中，相關實施例，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1V64、PD-1Y68、PD-1Q75、PD-1D77、PD-1A81、PD-1F82、
PD-1P83、PD-1R86、PD-1Q88、PD-1P89、PD-1G90、PD-1I126、PD-1L128、PD-1A129、及PD-1I134。在另一實施例中，相關實施例，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1N66、PD-1T76、PD-1K78、PD-1S87、PD-1K131 PD-1F63、PD-1E84、PD-1S87、PD-1G90、PD-1A132、PD-1D85、PD-1K78、PD-1S87 and PD-1D85、PD-1V64、PD-1Y68、PD-1Q75、PD-1D77、PD-1A81、PD-1F82、PD-1P83、PD-1R86、PD-1Q88、PD-1P89、PD-1G90、PD-1I126、PD-1L128、PD-1A129、及PD-1I134。
在一個實施例中，PD-1內對與納武單抗mAb相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基係經修飾的。在相關實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1P28、PD-1L128、PD-1A129、PD-1P130、PD-1A132、PD-1D29、PD-1R30、PD-1S60及PD-1K131。在另一相關實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1S27、PD-1P28、PD-1P31、PD-1E61、PD-1A129、PD-1P130、PD-1K131、PD-1A132及PD-1Q133。
在一個實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及氫鍵合或納武單抗或派姆單抗與PD-1之間的凡得瓦相互作用。在特定實施例中，PD-1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：PD-1L128、PD-1A129、PD-1A130、PD-1K131、及PD-1A132。
在一個實施例中，派姆單抗mAb內對與PD-1相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基係經修飾的。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR1(HCDR1)內的殘基。在一些實施例中，HCDR1派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成
之群：重T30、重Y33、及重Y35。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR2(HCDR2)內的殘基。在一些實施例中，HCDR2派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：重N52、重S54、重N55、重G57、重T58、及重N59。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR3(HCDR3)內的殘基。在一些實施例中，HCDR3派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：重R99、重Y101、重R102、重F103、重D104、重M105、及重D108。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR1(LCDR1)內的殘基。在一些實施例中，LCDR1派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：輕T31、輕S32、輕Y34、及輕Y36。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR2(LCDR2)內的殘基。在一些實施例中，LCDR2派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：輕Y53、輕L54、輕Y57、及輕E59。在一些實施例中，派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR3(LCDR3)內的殘基。在一些實施例中，LCDR3派姆單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：輕S95、輕R96、輕D97、輕L98及輕L100。
在一個實施例中，納武單抗mAb內對與PD-1相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基係經修飾的。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR1(HCDR1)內的殘基。在一些實施例中，HCDR1納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成
之群：重G26、重I27、重N31及重G33。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR2(HCDR2)內的殘基。在一些實施例中，HCDR2納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：重V50、重W52及重Y53。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括重鏈CDR3(HCDR3)內的殘基。在一些實施例中，HCDR3納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：重N99、重D100、重D101及重Y102。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR1(LCDR1)內的殘基。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR2(LCDR2)內的殘基。在一些實施例中，LCDR2納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基可選自由以下各項組成之群：輕L46、輕A55及輕T56。在一些實施例中，納武單抗mAb內經修飾的一個或多個胺基酸殘基包括輕鏈CDR3(LCDR3)內的殘基。在一些實施例中，LCDR3納武單抗mAb內經修飾的胺基酸殘基為輕S91。
在另一實施例中，PD-L1內對與抗PD-L1抗體相互作用關鍵的一個或多個胺基酸殘基經修飾以達成在抗體與其標靶之間的改良的較高親和力相互作用。在一些實施例中，PD-L1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及氫鍵合。在另一實施例中，PD-L1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及形成鹽橋。在另一實施例中，PD-L1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及水介導的相互作用。在另一實施例中，PD-L1內經修飾的一個或多個胺基酸殘基涉及凡得瓦相互作用。
[寡聚區域]
本發明揭示融合蛋白，其包含PD-1(程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域或PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白)之細胞外區域及寡聚區域。本文描述的寡聚區域可包含選自由以下各項組成之群的區域：Fc區域、格形蛋白三聚區域、GCN4三聚區域、p53四聚區域、及五聚區域或甚至產生新穎蛋白的無鉸鏈單體Fc區域。在一些實施例中，寡聚區域缺乏寡聚區且融合蛋白為單體。在一些實施例中，寡聚區域為無鉸鏈單體Fc區域且融合蛋白為單體。寡聚區域可包含類病毒粒子作為用於暴露抗原或抗體可變域的結構。雖然該些寡聚區域由熟習此項技術者所知，但其尚未用於產生用於診斷之新穎蛋白。
在一些態樣中，寡聚區域可包含選自由以下各項組成之群的胺基酸序列：Fc區域、Fc區域之片段、及Fc區域之變異體。在一個實施例中，本文描述的融合蛋白可為較高級結構之部分，諸如蛋白或多聚複合物。在一些實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由一個或多個肽連接子融合至Fc區域或其片段。在一個實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係融合至該Fc區域或其片段之C末端。在另一實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係融合至該Fc區域或其片段之N末端。
在一些實施例中，寡聚區域包含選自由以下各項組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、或SEQ ID NO：28。
在一個實施例中，寡聚區域係選自由以下各項組成之群：SEQ ID NO：9中闡述的胺基酸序列(GCN4三聚物區域)、SEQ ID NO：10中闡述的胺基酸序列(格形蛋白三聚物區域)、及SEQ ID NO：11中闡述的胺基酸序列(p53四聚物區域)。在一些實
施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：9中闡述的胺基酸序列(GCN4三聚物區域)具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：10中闡述的胺基酸序列(格形蛋白三聚物區域)具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：11中闡述的胺基酸序列(p53四聚物區域)具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。
在一個實施例中，Fc區域包含免疫球蛋白CH2區域或免疫球蛋白CH3區域。在另一實施例中，Fc區域包含免疫球蛋白CH2及CH3區域。在一些實施例中，Fc區域係選自由以下各項組成之群：IgG1 CH2及CH3區域、IgG4 CH2及CH3區域、IgG1 CH2及IgG4 CH3區域、及IgG4 CH2及IgG1 CH3區域。在一些實施例中，Fc區域可為小鼠或人類。在一些實施例中，Fc區域可為小鼠IgG1或IgG2A。在其他實施方案中，Fc區域包含IgG鉸鏈區域。
在一個實施例中，Fc區域係選自由以下各項組成之群：SEQ ID NO：6中闡述的胺基酸序列(鼠類IgG1、CH2及CH3)、SEQ ID NO：7中闡述的胺基酸序列(鼠類IgG1 Fc)、SEQ ID NO：8中闡述的胺基酸序列(鼠類IgG2A Fc)、及SEQ ID NO：28中闡述的胺基酸序列(鼠類IgG2A、CH2及CH3)。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：6中闡述的胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ
ID NO：7中闡述的胺基酸序列具有約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大的同源性。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：8中闡述的胺基酸序列具有約80%、85%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、98%、98%、99%或更大的同源性。在一些實施例中，Fc區域可與SEQ ID NO：28中闡述的胺基酸序列具有約80%、85%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、98%、98%、99%或更大的同源性。
如本文所使用，術語Ig「鉸鏈」區係指包含與天然存在的Ig鉸鏈區序列共有序列一致性或相似性的胺基酸序列的多肽，該天然存在的Ig鉸鏈區序列包括半胱胺酸殘基，在該等半胱胺酸殘基處，二硫鍵將免疫球蛋白之兩個重鏈連接。本文描述的具有天然存在的免疫球蛋白鉸鏈區胺基酸序列的鉸鏈區連接子之序列相似性可則至少50%至約75-80%的範圍，且典型地大於約90%。
在一些實施例中，本申請案之融合蛋白的鼠類IgG1 Fc區域包含鉸鏈。在一些實施例中，本申請案之融合蛋白的鼠類IgG1 Fc區域缺乏鉸鏈。鼠類IgG1 Fc區域之示範性胺基酸序列為SEQ ID NO：6(無鉸鏈)及SEQ ID NO：7(具有鉸鏈)。
在一些實施例中，本申請案之融合蛋白的鼠類IgG2A Fc區域包含鉸鏈。在一些實施例中，本申請案之融合蛋白的鼠類IgG2A Fc區域缺乏鉸鏈。鼠類IgG2A Fc區域之示範性胺基酸序列為SEQ ID NO：28(無鉸鏈)及SEQ ID NO：8(具有鉸鏈)。
[連接子]
在一些實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由一
個或多個肽連接子融合至寡聚區域或其片段。在一個實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由一個或多個肽連接子融合至該寡聚區域或其片段之C末端。在另一實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由一個或多個肽連接子融合至該寡聚區域或其片段之N末端。
在一些實施例中，肽連接子可由典型地包括至少一個甘胺酸及至少一個絲胺酸的連續胺基酸之序列組成。肽連接子亦可由典型地包括至少一個甘胺酸、至少一個脯胺酸及至少一個絲胺酸的連續胺基酸之序列組成。示範性撓性連接子及撓性pro連接子包括SEQ ID NO：4(GGGS)或SEQ ID NO：5(GGGPS)中闡述的胺基酸序列，儘管肽連接子之精確胺基酸序列不受特定限制。在一些實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由兩個或兩個以上不同的肽連接子融合至寡聚區域或其片段。在一些實施例中，PD-1及/或PD-L1蛋白係經由兩個或兩個以上相同肽連接子融合至寡聚區域或其片段。
如本文描述的肽連接子典型地在自然界中未發現，儘管一些天然存在的胺基酸序列可用作適合的連接子或可用以設計適合的連接子。連接子可包括約1至30個胺基酸，諸如約2至25個、約3至20個、約4至16個、或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個胺基酸。
[訊號肽序列]
本文揭示的融合蛋白典型地包含訊號肽序列(或「訊號序列」以有利於蛋白質跨於表現載體之細胞膜諸如哺乳動物細胞、尤其人類細胞的易位。然而多肽可缺乏訊號肽序列，例如，本文揭示的融合蛋白典型地包含訊號肽序列以有利於多
肽跨於表現載體之細胞膜諸如哺乳動物細胞、尤其人類細胞的易位的情況。然而融合蛋白可缺乏訊號肽序列。合成產生的多肽可類似地缺乏訊號肽序列。
訊號肽序列典型地包括在融合蛋白之N末端處。訊號肽序列較佳地足以在蛋白質於真核細胞中轉譯後使蛋白質易位於真核細胞之細胞表面膜外部，儘管融合蛋白之其他序列基元亦可輔助易位。
示範性訊號肽序列具有SEQ ID NO：3中闡述的胺基酸序列(MYRMQLLSCIALSLALVTNS)，其為人類介白素-2訊號肽序列。此良好表徵的序列能夠將蛋白質易位出人類細胞及其他哺乳動物細胞。
[親和力標籤]
融合蛋白可視情況包括親和力標籤。親和力標籤適用於純化，且其亦可適用於利用融合蛋白之測定。示範性親和力標籤包括聚組胺酸、幾丁質結合蛋白、麥芽糖結合蛋白、Strep標籤、麩胱甘肽-S-轉移酶、FLAG標籤、V5標籤、Myc標籤、HA標籤、NE標籤、AviTag、攜鈣蛋白標籤、聚麩胺酸、S標籤、SBP標籤、Softag 1、Softag 3、TC標籤、VSV標籤、Xpress標籤、Isopeptag、SpyTag、SnoopTag、生物素羧基載體蛋白、綠色螢光蛋白標籤、HaloTag、Nus標籤、及硫氧還蛋白標籤，儘管親和力標籤之選擇不受特定限制。然而融合蛋白可缺乏親和力標籤，例如，親和力標籤在使用之後移除的情況或融合蛋白係使用不需要親和力標籤之策略純化的情況。示範性親和力標籤為聚組胺酸，其典型地包括包含七個連續組胺酸之胺基酸序列(SEQ ID NO：31)。另一示範性親和力標籤為包含4個與10個連續組胺酸之間的聚組胺酸標籤。
[融合蛋白]
在本文描述的實施例中表徵融合蛋白可包含PD-1(程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域或PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白)之細胞外區域及寡聚區域，其中寡聚區域係選自由以下各項組成之群：鼠類IgG1 Fc區域、鼠類IgG2A Fc區域、GCN4三聚物區域、格形蛋白三聚物區域、及p53四聚物區域、或其片段。
本文揭示的融合蛋白種類可具有以下各項中闡述的胺基酸序列：SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、或SEQ ID NO：30。融合蛋白可具有胺基酸序列，該胺基酸序列與以下各項中闡述的胺基酸序列具有至少約85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或99.5%的序列一致性：SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、或SEQ ID NO：30。
[核酸、選殖細胞、及表現細胞]
本文描述的實施例亦包括包含編碼本文描述的融合蛋白的核苷酸序列之核酸。核酸可為DNA或RNA。包含編碼本文描述的融合蛋白的核苷酸序列之DNA典型地包含可操作地連接至核苷酸序列的啟動子。啟動子較佳地能夠驅動核苷酸序列在所關注表現細胞中之構成性或可誘導表現。核酸之精確核
苷酸序列不受特定限制，只要核苷酸序列編碼本文描述的融合蛋白即可。密碼子可例如經選擇以匹配所關注表現細胞(例如，哺乳動物細胞，諸如人類細胞)之密碼子偏離及/或達成在選殖期間的便利性。DNA可例如為質體，其可包含複製起點(例如，用於在原核細胞中複製質體)。
本發明之各種態樣亦係關於包含核酸之細胞，該核酸包含編碼本文描述的融合蛋白的核苷酸序列。細胞可為表現細胞或選殖細胞。核酸典型地在大腸桿菌中選殖，儘管可使用其他選殖細胞。若細胞為表現細胞，則核酸視情況為染色體之核酸，亦即，其中核苷酸序列係整合至染色體中，儘管核酸可存在於表現細胞中，例如，作為染色體外DNA。
本發明之各種態樣包括包含核酸之細胞，該核酸包含編碼本文描述的融合蛋白的核苷酸序列。細胞典型地為表現細胞。表現細胞之性質不受特定限制。哺乳動物表現細胞可允許融合蛋白或寡聚融合蛋白之有利折疊、轉譯後修飾、及/或分泌，儘管其他真核細胞或原核細胞可用作表現細胞。示範性表現細胞包括CHO、BHK、NS0、Sp2/0、COS、C127、HEK、HT-1080、PER.C6、HeLa、及Jurkat細胞。
本文的本發明之另一態樣提供製造融合蛋白之方法，該融合蛋白包含PD-1(程序性細胞死亡-1蛋白)之細胞外區域及/或PD-L1(程序性細胞死亡-配位體1蛋白)之細胞外區域及寡聚區域，該方法包含以下步驟：a)用編碼根據本發明之融合蛋白之核酸分子轉染寄主細胞；b)藉由在寄主細胞中表現(a)之核酸分子來製造該融合蛋白。
[免疫測定法及試劑]
免疫測定法通常用於量測樣本中之細胞表面抗原或量測樣本中之抗體。典型地，使用流式細胞術之免疫螢光為所選的免疫測定法。然而，可使用其他免疫測定法，例如酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay；ELISA)。此技術係基於利用簡單的相分離進行抗原-抗體相互作用以產生用於偵測生物分子之強大測定的特殊性質。
用於ELISA之方法及儀器比免疫螢光之彼者簡單。另外，ELISA及免疫螢光測定為完全不同的測定。ELISA測定量測血漿/血清中之蛋白質(抗原)或抗體，該血漿/血清反映全身。相反地，表面免疫螢光測定特別而言量測個別細胞之表面上的抗原且不提供關於身體內細胞之量的資訊。因此，在開發ELISA測定中存在提供量測全身的優點。
一種熟知及高度專一的ELISA為夾心ELISA。在此測定中，抗體係結合至固相或支撐體，其隨後與待測試的樣本接觸以藉由二元固相抗體：抗原複合物之形成自樣本提取抗原。在適合的培養期之後，將固體支撐體洗滌以移除流體樣本之殘餘物且隨後與含有已知數量之經標記抗體的溶液接觸。
本發明之一些實施例係關於用於測定含有抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之組合物的免疫測定法。其他實施例係關於用於測定含有PD-1及/或PD-L1抗原之組合物的免疫測定法。
根據本發明之示範性免疫測定法為例如ELISA測定(酶聯免疫吸附測定)，其使用比色、螢光或化學發光偵測。根據本發明之其他示範性免疫測定法係熟練人士所熟知的，例如使用傾斜改正之ELISA、RIA(radioimmunoassay；放射免疫測定)、競爭性EIA(competitive enzyme immunoassay；競爭性酶免
疫測定)、DAS-ELISA(double antibody sandwich-ELISA；雙抗體夾心ELISA)、橋接ELISA、基於蛋白質或抗體微陣列之使用的技術(包括基於液體珠粒之陣列，如基於Luminex技術之彼等者)、基於離散微粒的技術、基於膠態金或其他可見微粒或螢光粒子之沉澱的測定如基於典型地用於快速測試的免疫層析法的側向或垂直流動測試及使用可見(藉由眼睛)判讀或如智慧型電話或可攜式閱讀器或臺式閱讀器的閱讀器的護理點應用、親和力層析技術、均質遷移率移位測定(Homogeneous Mobility Shift Assay；HMSA)、配位體結合測定、凝集素結合測定、生物感測器等等。
已知循環抗PD-1抗體具有與其他IgG4抗體類似的半衰期(Farolfi等人2016)。此外，PD-1抗體包覆循環T細胞且有效地自循環將其自身移除(在血漿中不再自由循環)。此引起人類的循環抗PD-1(納武單抗)位準之相對快速的減少。循環位準、T細胞駐留位準與結果之間的關係並不明確且因此可將其明晰的測定為有價值的。然而，已知抗PD-1(納武單抗)保持駐留在循環T細胞達延長時期，其中取決於0.3至10mg/kg之初始劑量佔用位準為60-80%(Brahmer等人2010)。在此功能中，抗PD-1充當PD-1之拮抗劑以防止配位體結合至腫瘤上之PD-L1及免疫反應之後續停止。重要的是將給藥、T細胞佔用及可量測的循環抗PD-1或抗PD-L1與結果關聯。因此，本揭示內容之目標係提供用於偵測及/或監測抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之方法。
特別而言，抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體、抗體：抗原複合物及/或定向於PD-1及/或PD-L1處的抗體可藉由使用修改的夾心ELISA技術或熟習此項技術者已知的其他免疫測定技術來偵測或監測。
在特定實施例中，抗PD-1或抗PD-L1生物學藥物之濃度係藉由ELISA量測，類似地的是，其係顯示於本發明之實例中。
本文描述的融合蛋白亦可用於防止或競爭抗體對T細胞之表面上或腫瘤細胞上的同一抗原的結合。
在一個態樣中，抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體係在已經歷用治療抗體進行的至少一個劑量之免疫療法的患者中量測。治療抗體可包括但不限於抗PD-1或抗PD-L1治療抗體。抗體：抗原複合物係藉由ELISA技術或其他免疫測定法量測且提供對治療抗體之循環位準的測定。此結果及治療改變之判讀隨後係藉由熟悉臨床徵象及症狀的腫瘤學家判定以測定抗體免疫療法之功效。在一些患者中，抗體治療比在其他人中清除得更快，詳言之，患者具有不同異型(恆定區多形性)的情況。
本發明之一個態樣包括向患者提供免疫療法的方法，其包含向該患者投與治療抗體且使用本文描述的融合蛋白偵測抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體之存在。可設想該些方法可用於監測基於抗體的療法之功效。在一個實施例中，若功效呈現緩慢且並未消除症狀，則醫師會希望增加劑量。本文中吾等描述的該些工具將允許對治療抗體之循環位準的預期改變的靈敏偵測。
在其他實施例中，本發明提供藉由量測抗PD-1及/或抗PD-L1治療抗體來偵測及/或監測藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病之方法。用於偵測及/或監測藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病之該等方法包含使來自患者之樣本與本文描述的融合蛋白接觸。在其他實施例中，用於偵測及/或監測藉由PD-1及/或PD-L1介導的疾病之方法係對已經歷用治療抗體進行的一系列
免疫療法之患者進行。
本發明之一些態樣係關於測定生物治療抗體之循環位準之量的方法，該生物治療抗體選自由以下各項組成之群：納武單抗、派姆單抗及其他抗PD-1療法。在一些實施例中，測定生物治療抗體之循環位準之量的方法包含以下步驟(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本，及(ii)使樣本與根據本發明之融合蛋白接觸。
本發明之其他態樣係關於測定選自由阿特珠單抗、阿維魯單抗、及其他抗PD-L1療法組成之群的生物治療抗體之(自由)循環位準量的方法，其包含(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本，及(ii)使該樣本與根據本發明之融合蛋白接觸。
一些實施例係關於包含融合蛋白之組合物，該融合蛋白包含PD-1及/或PD-L1或其片段，及寡聚區域。本文進一步提供製造包含融合蛋白之組合物的方法，該融合蛋白如本文所述包含PD-1及/或PD-L1或其片段及寡聚區域。亦提供包含融合蛋白或組合物之套組。
一些實施例包括包含如本文描述的融合蛋白的免疫測定試劑，以用於測定含有抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之組合物。免疫測定試劑可結合至固體支撐體。固體支撐體可例如為珠粒、膜、微量滴定板、多肽晶片、或層析管柱之固相。
各種實施例亦包括用於測定含有抗PD-1及/或抗PD-L1抗體之組合物的裝置。裝置可為用於測定樣本是否含有抗PD-1及/或抗PD-L1抗體的裝置。除非另外定義，否則本文使用的所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域的一般技藝人士通常所理解相同的含義。示範性方法及材料描述如下，儘管亦可使用類似或等效於本文描述的彼等者的方法及材料且將對熟
習此項技術者而言為明顯的。本文提及的所有出版物及其他參考文獻係以全文引用方式併入。在衝突的情況下，將以本說明書為準，包括定義。材料、方法、及實例僅為說明性的且並非意欲為限制性的。
遍及本說明書及申請專利範圍，詞語「包含(comprise)」或諸如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」之變化形式將理解為暗示包括所述整數或整數群組但不排除任何其他整數或整數群組。
本發明將藉由參考以下實例來更全面地理解。然而其不應解釋為限制本發明之範疇。本文提及的所有文獻及專利引用係以引用方式明確地併入。
實例
實例1：檢查點蛋白之表現及純化
編碼人類PD-1及PD-L1之各種融合蛋白的基因係合成產生，針對哺乳動物表現進行密碼子最佳化，且選殖於pTT5載體或其他高表現哺乳動物載體中。質體DNA之低內毒素按比例增加製備係執行來準備瞬態哺乳動物表現。
人類胚腎(Human embryonic kidney；HEK)293衍生細胞之培養物係利用標準轉染協定用按比例增加的表現質體暫態地轉染並生長。藉由離心收穫細胞團塊且在轉染後4-5天藉由西方墨點及SDS-PAGE驗證在細胞培養上清液(cell culture supernatant；CCS)中之蛋白質表現。
包含IgG1或IgG2a之融合蛋白係藉由蛋白質A親和力層析純化且經由透析調配，等分試樣，且在-80℃下儲存。含有p53多聚區域之蛋白質具有C末端組胺酸標籤且係藉由固定金屬親和力層析純化，進行緩衝液交換，試樣等分，且在-80℃下
儲存。四聚之蛋白質表現及確認係藉由SDS-PAGE及CE-SDS(PD-1-p53-His)評定。
圖1及圖2顯示分別在還原性及非還原性條件下運作的4-20% tris-甘胺酸TGXTM SDS-PAGE凝膠。將凝膠用InstantBlueTM蛋白染色物染色。每一凝膠之泳道自左至右編為1至10號。第一泳道含有分子量標誌物，泳道2-5含有相應於SEQ ID NOs：14至17的融合蛋白，且泳道6至8含有相應於SEQ ID NOs：21至23的融合蛋白，將其選殖且隨後在真核細胞中表現。每一融合蛋白能夠在可偵測位準下表現。
實例2：PD-1及PD-L1重組蛋白之專一性
[2a.針對抗PD-1及抗PD-L1抗體之專一反應性]
測試若干重組PD-1及PD-L1蛋白的針對來自商業來源之抗PD-1及抗PD-L1抗體的專一反應性。PD-L1及PD-1蛋白之重組型式係使用ELISA測定利用直接標記螢光抗體單獨地測試。
ELISA板係用PD-1或PD-L1融合蛋白塗覆且使用螢光閱讀器利用APC共軛的抗PD-1或抗PD-L1抗體偵測。在等莫耳濃度下測試不同抗原及相同抗原之不同型式，50nM補償蛋白質之不同MW。圖3A顯示在連續稀釋系列(自0.5μg/ml至0.04μg/ml之稀釋)中PD-1-p53(PD1-(GGGPS)2-p53-HisTag,SEQ ID NO：29)針對抗PD-1抗體之專一反應性。圖3B顯示在如上文提及的稀釋系列中PD-L1-p53蛋白(PD-L1-(GGGPS)2-p53-HisTag,SEQ ID NO：30)針對抗PD-L1抗體之專一反應性。圖3B亦顯示PD-L1 Fc單體(SEQ ID NO：22)及PD-L1 p53四聚物(SEQ ID NO：30)之反應性的比較。
[2b.用於在人類血漿中定量抗PD1抗體的PD-1融合蛋白之比較]
測試重組蛋白PD1-(GGGPS)2-IgG1-Fc(僅CH2、CH3)(SEQ ID.14)、PD1-IgG1-Fc(SEQ ID.16)及PD1-p53(SEQ ID NO：29)以偵測用於癌症治療之抗PD1治療mAb以及用於在人類血漿中測定抗PD1 mAb藥物濃度；在此情況下，使用派姆單抗(Keytruda®)。
將ELISA板用以50nM之濃度稀釋於p.H 7.4的作為塗覆緩衝液的PBS中的若干PD-1融合蛋白塗覆隔夜。次日，將板用1xELISA洗滌緩衝液(BioRad,BUF031C)洗滌五次。阻斷步驟係藉由添加200μL根據製造商之說明書製備的1：4 BlockACE(BioRad,BUF029)水溶液起始。將板在37℃下培養一個小時；之後進行另一次洗滌步驟。在測定緩衝液(1：8 BlockACE水溶液)中稀釋一百微升的每一派姆單抗標準濃縮物以及IgG1陰性對照且將其添加至每一孔。將板在37℃下培養一個小時且隨後如先前所述用1xELISA洗滌緩衝液洗滌五次。此步驟之後，將與辣根過氧化酶抗體Fc專一性共軛的100μL之0.5μg/mL完整小鼠抗人類IgG4添加至每一孔(Thermoscientific，純系HP6023產品號A-10654)。將板在37℃下培養三十分鐘；在1XELISA洗滌緩衝液中洗滌五次且在15、30及60min量測光學密度；之後添加ABTS底物(Roche，產品號11684302001)。
圖4A顯示使用PD-1重組蛋白來在人類血漿中測定派姆單抗之濃度。將六個濃度(10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL、0.01μg/ml、0.001μg/mL、及0.0001μg/mL)下的派姆單抗標準用於產生所產生重組PD1蛋白中之每一者的標準曲線。所測試的PD1蛋白以不同的寡聚狀態存在，即『類單體』、二聚物及四聚物。資料顯示PD1-p53(四聚物)具有比PD1-Fc(二聚物)及PD1-Fc(CH2、CH3)(『單體』)高的結合性及低的EC50值。另外，使用
PD1-p53提供在範圍為0.01-10μg/ml之濃度的改良S/CO(訊號對截止雜訊)。在此測定中，截止值係藉由三個陰性血漿樣本加三個時間之平均值及針對該些樣本獲得的光學密度之標準偏差測定。
[2c.PD-L1重組蛋白之反應性]
測試不同的PD-L1融合蛋白的針對專一性抗PD-L1抗體之反應性。用螢光標記的抗PD-L1 mAb測試PD-L1(PD-L1-p53四聚物(SEQ ID NO：30)及PD-L1-Fc二聚物(R&D systems))之重組型式。簡言之，ELISA板(黑色)係用等莫耳濃度20nM的不同PD-L1蛋白塗覆，且使用螢光閱讀器，利用APC共軛的抗PD-L1抗體直接偵測。圖5顯示在連續稀釋系列(自5μg/ml至0.001μg/ml的4倍稀釋)中針對抗PD-L1抗體的PD-L1 Fc二聚物(R& D sys)及PD-L1 p53四聚物(SEQ ID NO：30)反應性之比較且描繪訊號對截止雜訊與濃度。PD-L1 p53四聚物顯示比PD-L1-Fc二聚物高的結合反應性。
參考文獻：
1. Goodman, Patel & Kurzrock, PD-1-PD-L1 immune-checkpoint blockade in B-cell lymphomas, Nature Reviews Clinical Oncology, 14:203-220,2017。
2. Elassaiss-Schaap等人, Using Model-Based 「Learn and Confirm」 to Reveal the Pharmacokinetics-Pharmacodynamics Relationship of Pembrolizumab in the KEYNOTE-001 Trial CPT Pharmacometrics Syst. Pharmacol. (2017) 6,21-28;doi:10.1002/psp4.12132。
3. Agrawal等人, Nivolumab dose selection: challenges, opportunities, and lessons learned for cancer immunotherapy.
Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2016) 4:72 DOI 10.1186/s40425-016-0177-2。
4. Gardiner等人, A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Assessment of BMS-936558, a Fully Human Monoclonal Antibody to Programmed Death-1 (PD-1), in Patients with Chronic Hepatitis C Virus Infection. PLoS ONE, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0063818 2013。
5. Zheng等人, Level of circulating PD-L1 expression in patients with advanced gastric cancer and its clinical implications. Chin Journal of Cancer Research, 26, 104-111, 2014。
6. Ono Pharmaceutical Co. Ltd. (2014), Human Anti-human PD-1 Monoclonal Antibody 「OPDIVO® Intravenous Infusion 20 mg/100 mg」 Receives Manufacturing and Marketing Approval in Japan for the Treatment of Unresectable Melanoma [press release]. Retrieved from http://www.ono.co.jp/eng/news/pdf/sm_cn140704.pdf.]
7. Bristol-Meyers Squibb (2016), Opdivo® (nivolumab) Granted First Approval of a PD-1 Inhibitor in Hematology for the Treatment of Classical Hodgkin Lymphoma Patients Who Have Relapsed or Progressed After Auto-HSCT and Post-transplantation Brentuximab Vedotin by the FDA1 [press release]。檢索自https://news.bms.com/press-release/cancer/opdivo-nivolumab-granted-first-approval-pd-1-inhibitor-hematology-treatment-cla
8. Federal Drug Administration (2014), FDA expands approved use of Opdivo to treat lung cancer, [press announcement]。檢索自
https://www.fda.gov/NewsEvents/newsroom/PressAnnouncements/ucm436534.htm
9. Federal Drug Administration (2015), FDA approves Opdivo to treat advanced form of kidney cancer, [press announcement]。檢索自https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm473971.htm
10. Federal Drug Administration (2017), FDA grants accelerated approval to pembrolizumab for first tissue/site agnostic indication [press announcement]。檢索自https://www.fda.gov/Drugs/InformationOnDrugs/ApprovedDrugs/ucm560040.htm
11. Thompson RH, Gillett MD, Cheville JC, Lohse CM, Dong H, Webster WS, Krejci KG, Lobo JR, Sengupta S, Chen L, Zincke H, Blute ML, Strome SE, Leibovich BC, Kwon ED (2004). Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target. PNAS USA. 101 (49): 17174-9. doi:10.1073/pnas.0406351101
12. Opdivo (package insert), Bristol-Meyers Squibb, New York, NY; 2017。
13. Pembrolizumab (package insert), Merck, Kelinworth, NJ; 2017。
14. Ybe JA, Fontaine SN, Stone T, Nix J, Lin X, and S Mishra. 2013 Nuclear localization of clathrin involves a labile helix outside the trimerization domain. FEBS Lett. 2013 January 16; 587(2): 142-149. doi:10.1016/j.febslet.2012.11.005
15. Yang X, Lee J, Mahony EM, Kwong PD, Wyatt R, and J Sodroski. 2002. Highly Stable Trimers Formed by Human Immunodeficiency Virus Type 1 Envelope Glycoproteins Fused with the Trimeric Motif of T4 Bacteriophage Fibritin J Virology第4634-4642頁第76卷第9期
16. Lee W, Harvey TS, Yin Y, Yau P, Litchfield D, and CH Arrowsmith. 1994. Solution structure of the tetrameric minimum transforming domain of p53 Nature Structural Biology 1, 877 - 890
17. Lee JY, Lee, HT, Shin W, Chae J, Kin SH, Lim H, Heo TW, Park KY, Lee YJ, Ruy SE, Lee JU, Heo YS. Structural Bassi of checkpoint blockade by monoclonal antibodies in cancer immunotherapy. et al, Nat. Commun,,2016, 7:13354。
18. Brahmer JR, Drake CG, Wollner I, Powderly JD, Picus J, Sharfman WH, Stankevich E, Pons A, Salay TM, McMiller TL, Gi1son MM, Wang C, Selby M, Taube JM, Anders R, Chen L, Korman AJ, Pardoll DM, Lowy I, Topalian SL. Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates. J Clin Oncol. 2010 Jul 1;28(19):3167-75。
19. Farolfi A, Schepisi G, Conteduca V, Burgio SL, Lolli C, De Giorgi U. Pharmacokinetics, pharmacodynamics and clinical efficacy of nivolumab in the treatment of metastatic renal cell carcinoma. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 2016 Sep;12(9):1089-96。
20. Jefferis R, Lefranc MP. Human immunoglobulin allotypes:
possible implications for immunogenicity.MAbs.2009 Jul-Aug;1(4):332-8。
21. Ternant D, Arnoult C, Pugnière M, Dhommée C, Drocourt D, Perouzel E, Passot C, Baroukh N, Mulleman D, Tiraby G, Watier H, Paintaud G, Gouilleux-Gruart V. IgG1 Allotypes Influence the Pharmacokinetics of Therapeutic Monoclonal Antibodies through FcRn Binding. J Immunol. 2016 Jan 15;196(2):607-13。
22. Webster CI, Bryson CJ, Cloake EA, Jones TD, Austin MJ, Karle AC, Spindeldreher S, Lowe DC, Baker MP A comparison of the ability of the human IgG1 allotypes G1m3 and G1m1,17 to stimulate T-cell responses from allotype matched and mismatched donors. MAbs. 2016; 8(2):253-63。
23. Dempke WCM, Fenchel K, Uciechowski P, Dale SP. Second-and third-generation drugs for immuno-oncology treatment-The more the better? Eur J Cancer. 2017 Mar;74:55-72。
<110> 美商格里佛診斷方法股份有限公司
<120> 用於監測對免疫檢查點抑制劑PD-1和PD-L1的抗體治療的免疫測定法和基因工程蛋白
<130> 107P001877TW
<140> 107142741
<141> 2018-11-29
<150> US 62/593080
<151> 2017-11-30
<160> 31
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 288
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<210> 2
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Claims (29)
- 一種融合蛋白，其包含程序性細胞死亡-1(PD-1)蛋白之細胞外區域或其片段；及寡聚區域，其中前述寡聚區域係選自由以下各項組成之群：鼠類IgG1 Fc區域、鼠類IgG2A Fc區域、GCN4三聚物區域、格形蛋白三聚物區域、p53四聚物區域、及其片段。
- 如請求項1所記載之融合蛋白，其中前述鼠類IgG1 Fc區域或前述鼠類IgG2A Fc區域包含鉸鏈區。
- 如請求項1或2所記載之融合蛋白，其中前述PD-1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個肽連接子融合至前述寡聚區域。
- 如請求項1至3中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸的撓性連接子融合至前述寡聚區域，或經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸、脯胺酸、及絲胺酸的撓性pro連接子融合至前述寡聚區域。
- 如請求項1至4中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5中闡述的胺基酸序列的肽連接子融合至前述寡聚區域。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其進一步包含訊號序列，其中前述訊號序列係融合在前述PD-1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段之N末端處。
- 如請求項6所記載之融合蛋白，其中前述訊號序列與SEQ ID NO：3中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-1 之前述細胞外區域之前述胺基酸序列係選自由以下各項組成之群：(i)與由SEQ ID NO：1之殘基21至170組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ii)與由SEQ ID NO：1之殘基21至145組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與由SEQ ID NO：1之殘基33至170組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與由SEQ ID NO：1之殘基33至145組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(v)與由SEQ ID NO：1之殘基35至170組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(iv)與由SEQ ID NO：1之殘基35至145組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-1之前述細胞外區域之前述胺基酸序列包含與SEQ ID NO：12中闡述的胺基酸序列具有至少70%同源性的序列。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中前述寡聚區域之前述胺基酸序列係選自由以下各項組成之群：(i)與SEQ ID NO：6中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ii)與SEQ ID NO：7中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與SEQ ID NO：8中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與SEQ ID NO：9中闡述的胺基酸序列共有至少 70%同源性的胺基酸序列；(v)與SEQ ID NO：10中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vi)與SEQ ID NO：11中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(vii)與SEQ ID NO：28中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中前述融合蛋白之前述胺基酸序列係選自由以下各種組成之群：(i)與SEQ ID NO：14中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ii)與SEQ ID NO：15中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與SEQ ID NO：16中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與SEQ ID NO：17中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(v)與SEQ ID NO：18中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vi)與SEQ ID NO：19中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vii)與SEQ ID NO：20中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(viii)與SEQ ID NO：29中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-1 為重組PD-1。
- 如前述請求項中任一項所記載之融合蛋白，其中PD-1為重組人類PD-1。
- 一種融合蛋白，其包含程序性細胞死亡-配位體1(PD-L1)蛋白之細胞外區域或其片段；及寡聚區域，其中前述寡聚區域係選自由以下各項組成之群：鼠類IgG1 Fc區域、鼠類IgG2A Fc區域、GCN4三聚物區域、格形蛋白三聚物區域、p53四聚物區域、及其片段。
- 如請求項14所記載之融合蛋白，其中前述鼠類IgG1 Fc區域或前述鼠類IgG2A Fc區域包含鉸鏈區。
- 如請求項14或15所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個肽連接子融合至前述寡聚區域。
- 如請求項14至16中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸及絲胺酸的撓性連接子融合至前述寡聚區域，或經由一個或多個包含胺基酸甘胺酸、脯胺酸、及絲胺酸的撓性pro連接子融合至前述寡聚區域。
- 如請求項14至17中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段係經由一個或多個包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5中闡述的胺基酸序列的肽連接子融合至前述寡聚區域。
- 如請求項14至18中任一項所記載之融合蛋白，其進一步包含訊號序列，其中前述訊號序列係融合在前述PD-L1蛋白之前述細胞外區域或其前述片段之N末端處。
- 如請求項19所記載之融合蛋白，其中前述訊號序列與SEQ ID NO：3中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性。
- 如請求項14至20中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1之前述細胞外區域之前述胺基酸序列係選自由以下各項組成之群：(i)與由SEQ ID NO：2之殘基18至239組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ii)與由SEQ ID NO：2之殘基18至238組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與由SEQ ID NO：2之殘基18至225組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與由SEQ ID NO：2之殘基18至134組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(v)與由SEQ ID NO：2之殘基18至127組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vi)與由SEQ ID NO：2之殘基19至239組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vii)與由SEQ ID NO：2之殘基19至238組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(viii)與由SEQ ID NO：2之殘基19至225組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ix)與由SEQ ID NO：2之殘基19至134組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(x)與由SEQ ID NO：2之殘基19至127組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(xi)與由SEQ ID NO：2之殘基133至225組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列； (xii)與由SEQ ID NO：2之殘基133至238組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(xiii)與由SEQ ID NO：2之殘基133至239組成的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如請求項14至21中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1之前述細胞外區域之前述胺基酸序列包含與SEQ ID NO：13中闡述的胺基酸序列具有至少70%同源性的序列。
- 如請求項14至22中任一項所記載之融合蛋白，其中前述寡聚區域之前述胺基酸序列係選自由以下各項組成之群：(i)與SEQ ID NO：6中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(ii)與SEQ ID NO：7中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與SEQ ID NO：8中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與SEQ ID NO：9中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(v)與SEQ ID NO：10中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vi)與SEQ ID NO：11中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(vii)與SEQ ID NO：28中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如請求項14至23中任一項所記載之融合蛋白，其中前述融合蛋白之前述胺基酸序列係選自由以下各種組成之群：(i)與SEQ ID NO：21中闡述的胺基酸序列共有至少 70%同源性的胺基酸序列；(ii)與SEQ ID NO：22中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iii)與SEQ ID NO：23中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(iv)與SEQ ID NO：24中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(v)與SEQ ID NO：25中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vi)與SEQ ID NO：26中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；(vii)與SEQ ID NO：27中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列；及(viii)與SEQ ID NO：30中闡述的胺基酸序列共有至少70%同源性的胺基酸序列。
- 如請求項14至24中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1為重組PD-L1。
- 如請求項14至25中任一項所記載之融合蛋白，其中前述PD-L1為重組人類PD-L1。
- 如請求項1至26中任一項所記載之融合蛋白，其進一步包含聚組胺酸親和力標籤。
- 一種測定選自由納武單抗、派姆單抗、及其他抗PD-1療法組成之群的生物治療抗體之循環位準量的方法，其包含以下步驟：(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本；及(ii)使前述樣本與如請求項1所記載之融合蛋白接觸。
- 一種測定選自由阿特珠單抗、阿維魯單抗、及其他抗PD-L1 療法組成之群的生物治療抗體之(自由)循環位準量的方法，其包含以下步驟：(i)自經歷抗體治療之患者獲得樣本；及(ii)使前述樣本與如請求項14所記載之融合蛋白接觸。
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