TW200301135A

TW200301135A - Pharmaceutical compositions comprising a multifunctional phosphodiesterase inhibitor and an adenosine uptake inhibitor

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Publication number: TW200301135A
Application number: TW091137339A
Authority: TW
Inventors: Yongge Liu; Bing Sun; Masuhiro Yoshitake; Jun-Ichi Kamayashi
Original assignee: Otsuka Maryland Res Inst Inc
Priority date: 2001-12-27
Filing date: 2002-12-25
Publication date: 2003-07-01
Also published as: AU2002360798A1; DK1461039T3; KR20040083072A; BR0215392A; EP1461039A1; AR038091A1; PT1461039E; US20080200484A1; JP2005517680A; US20100184784A1; CA2471846A1; CN1607952A; ES2525418T3; MXPA04006275A; EP1461039B1; WO2003057222A1; US20050165030A1

Description

20030U3 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 _________五、發明説明（1 ) 技術領域本發明係有關包括至少一種多功能性磷酸二酯酶抑制劑（MPDEI)及至少一種腺苷攝入抑制劑之藥學組成物。 MPDEI爲一種藥劑，其至少可抑制地in型磷酸二酯酶 (PDE3)和腺苷攝入（例如西洛他唑）。本發明也有關使用該組成物治療多種徵候和疾病包括與周圍動脈閉塞疾病（PAOD) 相關聯的肢絕血症和間歇性跛行（1C)，用以預防和治療中風 ’及用以預防冠狀動脈血栓形成和再狹窄等之方法。本發明提出使用該組成物以達到比單獨使用 MPDEIs，傳統 PED3抑制劑，或腺苷攝取抑制劑更增強的效力和效益及較低的副作用之方法。該等組成物增強抗血小板作用和血管擴張作用及避開的MPDEIs或PED3抑制劑所具潛在強心副作用之能力也提供MPDEIs(例如西洛他唑）給患有1C、中風 '或冠狀動脈疾病和衝血性心臟衰竭（CHF)的病人更擴充的經證實的適應症和用法。先前技術 PAOD影響美國（US)高達5%的老年病人，而PAOD患者具有增高六倍因心臟和腦血管肇因致死之危險率。1C爲 PAOD的經常性殘疾徵候。病人典型地會不舒適，走路時在受感腿部有不定的疼痛、痛苦或疲乏感之特徵。在美國只有兩種經認可的藥物可用來治療1C。己酮可可豆鹼 (P e n t ο X i f y 11 i n e)業經使用有二十年之久，但其指具有邊緣效益。西洛他唑（Pletal®)((6-[4-(L·環己烷基-1H-四唑-5-基）丁 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -5 - 0030U3：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（2) 氧基]-3,4-二氫-2(1H))-喹啉酮）係在1 999年爲美國食品藥物署（FDA)獲准用於治療1C。於無效對照樣對照試驗中，西洛他唑相較於無效對照樣和己酮可可豆鹼明顯地可改良在踏車上的最大行走距離。西洛他唑於長久以來即用爲環狀核苷酸PDE3抑制劑。環狀核苷酸，例如環狀腺苷單磷酸（cAMP)和環狀鳥苷單磷酸（cGMP)，在心血管系統內媒介許多細胞反應中扮有重要角色。環狀核苷酸的細胞內水平係由經平衡的兩族酵素所具活性所控制。腺苷酸環化酶和鳥苷酸環化酶係分別調節 c AMP和cGMP的重新合成。相異者，11種遺傳上有區別且各具不同生物化學和藥物學特性的PDE異形體（isoforms)可調節cAMP及/或cGMP。PDE3異形體在許多不同細胞內表現，包括心肌細胞，血管平滑肌細胞（VSMC)，和血小板。因此，PDE3會分別影響心臟收縮力，VSMC張力和增生，及血小板活性。PDE3的抑制會造成肌肉內CAMP的選擇性蓄積，及蛋白質激酶（PKA)-誘導效應的增加。所以，在上述細胞內減低的PDE3活性會促成增加的心臟收縮，血管擴張，減少的細胞增生，及減弱的血小板聚集。西洛他唑對 1C患者的有益效應大部份是歸因於PDE3抑制的血管擴張和抗-血小板聚集效應，雖則其他效應也可能有些作用。 P D E 3抑制劑通常對心臟施發增強收縮力（丨n 01 r 0 p丨c)和心肌變速（chronotropic)作用（亦即，增高的收縮力和心律）。事實上，PDE3抑制劑業經證實會使CHF患者增加心輸出及減低肺充血。例如，二聯啶酮（milrinone)，一種原型PDE3 5 ；衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -6 - 200301135 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（3 ) 抑制劑，目前正在臨床上用於CHF的緊急治療。不過，二聯啶酮對於CHF患者的長期使用會伴隨著前節律不齊動作（可能因爲Camp-誘導的心臟收縮力過度增加所致（Packer， 1 9 92 ; Thadani and Roden，1 99 8))。西洛他唑尙未經在美國的1C臨床試驗中證明會增加心肌致死，而在亞洲國家中則經證明有安全長期用途（NDA of Cilostazol，Otsuka America Pharmaceutical, Inc.，1997)。一般而言，在美國內 CHF 病人不會參與西洛他唑試驗，係因爲運動-限制性CHF爲一項排除準則之故。因此，在美國內只有相當少的CHF病人（且沒有嚴重CHF者）參與臨床試驗，且該藥物對此組病人的致死率之影響係未知者。不過，根據對於PDE3抑制劑例如二聯啶酮的先前臨床經驗，FDA裁定西洛他唑限制用於任何嚴重度的CHF之患者。可惜者，1C患者的群數可能與 CHF重疊使得PDE3抑制的有益效應全盤不能爲此等並所得。因此之故，開發新的藥物學作法以消除或減少西洛他唑和其他PDE3抑制劑所具潛在心臟副作用，因而可使西洛他唑治療所具效益能擴展到展現1C和心臟障礙的患者即具有其重要性。發明內容本發明係經由提出可抑制PDE3活性和腺苷攝取的要學組成物來解決此等需求。此等藥學組成物包括至少一種 MPDEI(例如西洛他口坐）及至少一種腺苷攝入抑制齊U (例如，雙嘧達莫）。於本發明中，該至少一種MPDEI及至少一種腺本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 7 _ (諳先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 20030U35 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（4 ) 脊攝入抑制劑的組合可以增效方式作用以增加抗血小板效應和血管擴張，同時限制PDE3抑制的增強收縮力作用。該至少一種MPDEI及至少一種腺苷攝入抑制劑的組合在治療多種徵候和疾病包括PAOD(例如1C)，中風，和冠狀動脈血栓形成與再狹窄等之時應該比任一藥劑單獨使用者更爲安全且更有效益。圖式簡單說明圖1闡示腺苷（1//M)和西洛他唑（1//M)對於膠原-誘導血小板聚集之增效作用。洗滌過的血小板係使用膠原（1微克/微升）予以活化，如箭號所示者。圖2闡示雙嚼達莫（1，3和10// M)與西洛他唑（10 pM 到100 // Μ)對於洗滌過的血小板之血小板聚集的劑量相關增效作用。圖3闡示雙嘧達莫（1，3和10// Μ)在腺苷（1/ζ Μ)和西洛他唑（30 ηΜ和1 〇〇 ιιΜ)存在中對於洗滌過的血小板之血小板聚集的增效作用。圖4闡示西洛他唑（30 ηΜ和100 ηΜ)在腺苷（1 // M)和雙嘧達莫（1，3和10// Μ)存在中對於洗滌過的血小板之血小板聚集的增效作用。圖5闡示雙嘧達莫（3// Μ)和西洛他唑（3// Μ)在腺苷（0.3 // Μ和1 // Μ)存在中對於PRP血小板中細胞內cAMP水平增高之增效作用。圖6闡示雙嘧達莫（0.5、1.5和10// M)與西洛他唑（1// 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Μ規格（21〇父297公釐） _8 - (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 00301135 A7 B7 五、發明説明（5) M)在腺苷（1 // M)存在或不存在中對於腺苷A2a表現性中國倉鼠卵巢（CHO)細胞的細胞內cAMP水平增高之增效作用。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖7闡示雙嘧達莫（0.5、1.5和10// M)與西洛他唑（3 // M)在腺苷（1 // M)存在或不存在中對於腺苷A2a表現性中國倉鼠卵巢（CHO)細胞的細胞內cAMP水平增高之增效作用。圖8闡示西洛他唑與二聯啶酮相比對於在人類血小板和紅血球內的細胞攝入之抑制作用的比較。圖9闡示在全血液內於雙嘧達莫（1//M)存在或不存在中在膠原（2微克/毫升）刺激下血漿內腺苷水平的增加情形。圖10闡示雙嘧達莫（0.1、0.3、1和3 // M)和西洛他唑 (10//M和30// M)對於以0.5微克/毫升膠原誘導全血液中血小板聚集之增效作用。圖11闡示雙嘧達莫（1和3// M)和低濃度西洛他唑（0.3 、0.7、1、和3// M)對於以0.1或0.3微克/毫升膠原誘導全血液血小板聚集之增效作用。圖12闡示雙嘧達莫（〜1//M)和西洛他唑（〜1//M)對於活體外（ex vivo)全血液血小板聚集的抑制之增效作用。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製圖1 3闡示硏究西洛他唑和雙嘧達莫對於分離出的兔子 Langendorff心的心臟功能的影響所用實驗方案。圖14闡示西洛他唑（1、3，和10// M)和雙嘧達莫（0.3、 1和3// M)單獨地或組合地對於收縮力（A)、心律（B)和冠狀動脈流速（C)的影響。圖1 5闡示試驗低水平西洛他唑和雙嘧達莫的組合對於休息中、運動中（使用電刺激），及經由閉塞股動脈及再注輸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -9- ,0030113 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（6) 所致絕血中腓腸肌血流的影響所用實驗方案。圖1 6闡示西洛他唑（1 // M)和雙嘧達莫（1 // M)的組合治療時相對於未處理肌肉，明顯增加運動後腓腸肌內的血流，及在絕血期後改良血流恢復的情形。實施方式發明詳細說明本發明解決技藝中對於諸如PAOD(例如1C)、中風、冠狀動脈血栓形成，和再狹窄等狀況所用安全有效性藥學組成物的需要。西洛他唑可用來治療1C且經證明可以有效地預防中風（Gotoh，Tohgi，Hirai，Terashi, Fukuuchi, Otomo, Shinohara，Itoh，Matsuda, Sawada, Yamaguchi, Nishimaru, and Ohashi，2000)，在冠狀動脈經皮轉腔冠狀動脈血管形成術 (PYCA)之後的冠狀動脈血栓形成（Park，Lee，Kim，Lee，Park， Hong, Kim，and Park，1999)與再狹窄（Tsuchikane，Fukuhara， Kobayashi, Kiri no, Yamasaki, Izumi, Otsuj i, Tateyama， S a k u r a i，a n d A w a t a，19 9 9)。西洛他哇可抑制P D E 3，且所得抗-血小板和血管擴張效應顯得有助於其治療作用。不過， PDE3抑制的可能心臟副作用爲一項顧慮。事實上，因爲先前對於二聯啶酮的臨床經驗，西洛他唑被禁用於任何嚴重度的CHF。最近的硏究指出西洛他唑具有不與二聯啶酮共有的意料外作用機制。事實上，西洛他唑業經證明可抑制在多種細胞包括室肌細胞、冠狀動脈平滑肌細胞、內皮細胞、紅 I J---ϊ-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 1〇 _ 200301135 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（）血球，和血小板等的腺苷攝入。西洛他唑可在約5 -10 // Μ 的IC5〇下抑制腺苷攝入。相異者，二聯啶酮在高達100// Μ 的濃度下仍沒有明顯的抑制作用（Liu et al·，2000)。因爲其抑制PDE3和腺苷攝入的能力，本案發明人乃視西洛他唑爲一種 MPDEI。腺苷酸射入的抑制具有重要性，因爲腺苷酸會誘導廣範圍的生物效應包括血管擴張及血小板聚集的抑制之故。腺苷也會對心臟發出減弱收縮力和心肌變速作用。腺苷酸對於脈管系統和血小板的作用係由腺苷A2受體的活化所媒介。腺苷A2受體會促發Gs蛋白質而刺激腺苷酸環化酶及，因而，增加細胞內cAMP濃度。腺苷酸對於心肌的熟知抗-腺上素能效應係經由腺苷A!受體的活化所媒介。腺苷A!受體會促發Gi蛋白質而抑制腺苷酸環化酶及，因而.，減低細胞內 cAMP 濃度（Dobson and Fenton，1998; George et al.， 1991 ; Nai'ayan et al，2000)。腺苷攝入的抑制會增加腺苷的間質水平和循環水平。細胞外腺苷的增加具有增加PDE3抑制的抗-血小板（Sun et al.，2001)和血管擴張效應及減弱 PDE3抑制的增強收縮力效應（Wang et al.，2001)。腺苷對於 PDE3抑制所引起的增強收縮力作用之潛在拮抗作用係經由西洛他唑所誘導相較於二聯啶酮較小的心收縮力增加（Cone et al·，1999)，及在分離的兔子心臟內腺苷A1拮抗劑增加西洛他哇的強心效用之能力（W a n g，C ο n e, F ο n g，Y 〇 s h i t a k e， Kambayashi，and Liu，2001)而獲得證實。此外，腺苷業經指出爲一種重要的局部心臟保護媒介劑（Downey et al.，1994) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -11 - 20030U35 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（8) ，且經證明可以減弱骨骼肌和神經元中因絕血和再注輸所致傷害（Wang et al·，1 996; Whetzel et al.，1 997)。整體而言，腺苷可能在運動訓練所致跛行距離的增加上具有作用且可能對IC -相關徵候施發有利的影響（L a g h i e t a 1.，1 9 9 7 ; Pasini et al·, 2000) 0 西洛他唑對於腺苷攝入抑制的效力比其對於PDE3的抑制較低一數量級以上（5-10//1^¥3.0.32//14)(1^116131·， 2000)。西洛他唑所引起的細胞外腺苷之增加，雖然足以衰減收縮力增強性及增強抗-血小板聚集，不過與強效腺苷攝入抑制劑雙嘧達莫（IC5〇 10 nM)所引起者相比則較爲微弱。所以，一種增加西洛他唑治療1C的效力及減低潛在心臟副作用之治療作法爲將MPDEI與至少一種腺苷攝入抑制劑（例如雙嘧達莫）相組合。本案申請人發現西洛他唑與一強效腺苷攝入抑制劑的組合所產生的抗-血小板效應大於PDE3抑制劑單獨者或腺苷攝入抑制劑單獨者的加成效應。確實，該組合可以產生對血小板功能的增效性抑制，因而肯定獨特作用機制的貢獻。再者，也發現該組合會減低西洛他唑單獨者的增強收縮力效應。此外，低水平西洛他唑和雙嘧達莫的組合可增加運動過的腓腸肌中的血流及在一段絕血期之後改良組織的流動恢復（而，於每一種藥物單獨的情況中，不會明顯地改變血液流動）。因此，所得組合對於涉及血小板聚集和血管收縮的疾病可以提供安全有效的治療。此等疾病包括PAOD(例如1C)，中風，和冠狀動脈血栓形成。此組合也可以用來治療因爲西洛他唑對於平滑肌增生的 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） _ 12 - 0030113 Α7 Β7 經濟部智慧財產局工消費合作社印製五、發明説明（9) 抑制所造成的冠狀動脈再狹窄。除了其對於1C的有益作用之外，西洛他唑也經證明可以有效地預防中風復發（Gotoh et al·，2000)。雖然不知道雙嘧達莫單獨時是否有效，不過雙嘧達莫與阿斯匹靈的組合現時正以Aggrenox® (Boehringer Ingelheim)之名銷售用以預防中風。Aggrenox®的有異效用可歸因於雙嘧達莫與阿斯匹靈的加成性抗-血小板作用。有多種硏究證明西洛他唑比其他抗-血小板藥劑例如阿斯匹靈較爲優（Igawa et al.，1990; Mat sumo to et al·，1 99 9)。因爲西洛他唑和雙嘧達莫可以增效地抑制血小板聚集，所以此兩種藥物的組合在對於中風的預防應該至少有同等效益。西洛他唑業經成功地用來預防冠狀動脈PTCA後的血栓形成（Park et al·，1999)，及在有用或沒有使用撐開器（stent) 的PTCA之後預防再狹窄（Tsuchikane et al·，1999)。西洛他唑和雙嘧達莫的組合應該可以經由減少有害的心臟副作用而至少與西洛他唑單獨者一樣有效且更安全。於本發明一具體實例中，該組成物包括至少一種 MPDEI及至少一種腺苷攝入抑制劑，其量能夠提供血小板聚集的增效性抑制。本發明另一具體實例爲提出一種包括至少一種MPDEI及至少一種腺苷攝入抑制劑的組成物，其量爲能夠提供細胞內c A Μ P水平的增效性提高。本發明也提出一種使用該組成物治療PA0D(例如1C)，中風，和冠狀動脈血栓形成與再狹窄之方法，以達到比單獨使用PDE3抑制劑或腺苷攝入抑制劑任一者治療時可能發生者較爲增強的 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -13- 0030U35 A7 B7 五、發明説明（1(D) 效力和效益及較少的副作用。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) “ P D E 3抑制劑’如本文中所用者，指的是一種能夠抑制或選擇性減低第ΙΠ型PDE的活性之藥劑。本發明PDE3抑制劑可爲可抑制PDE3的任何已知或待發現之化合物。可接受的PDE3抑制劑包括下列：聯吡啶類例如二聯啶酮和氨力農（氨利酮）Umrinone);咪唑酮類例如派路西蒙（piroximone) 和伊諾西蒙（enoximone);咪唑琳類例如伊馬佐丹（imaz〇dan) 和 5-甲基-伊馬佐丹；二氫褡丼酮類例如吲哚林丹 (indolidan)和.LY181512 ;二氫喹啉酮化合物例如西洛他麥 (cilostamide)，西洛他唑和OPC3911 ;及其他化合物例如亞那貴賴（anagrelide)、本莫拉丹（bemoradan)、伊步狄拉 (ibudilast)、異馬哇（isomazole)、利沙秦酮（lixazinone)、莫他皮酮（motapizone)、歐皮酮（olprinone)、.駄秦醇 (Phthlazinol)、皮莫本丹（pimobendan)' 夸秦酮（quazinone)、西古哇丹（siguazodan)、和崔古辛（trequinsin)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 “MPDEI”如本文中所用者係指一種藥劑，其能抑制或選擇性地減低PDE3的活性且可以有效地阻斷腺苷傳輸到細胞內。本發明MPDEI可爲可抑制PDE3且減低腺苷攝入的任何已知或待發現之多官能PDE抑制劑化合物。可接受的 MPDEI包括西洛他唑和待發現的其他者。 “腺苷攝入抑制劑”如本文中所用者係指可以有效地阻斷腺苷傳輸到細胞內之任何藥劑。此等腺苷攝入抑制劑包括業經證明可抑制腺苷傳輸的已知化合物，彼等的類似物和衍生物，以及其他待發現的腺苷攝入抑制劑。可接受的腺本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14- 20030U35 A7 B7 五、發明説明（11) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 苷攝入抑制劑包括：雙嘧達莫、波本飛林（propentofylline) ; 狄拉哲（dilazep)；硝基苯甲硫基肌苷 (nitrobenzylthioinosine); S-(4-硝基苯甲基）-6-硫代鳥嘌呤； S-(4-硝基苯曱基）-6-硫代肌苷；碘基羥基硝基苯甲基硫代肌苷；麥費拉秦（mioflazine);和彼等的酯類、醯胺類與前體藥物，以及彼等的藥學可接受鹽類。本發明也有關PAOD(例如1C)，中風，冠狀動脈血栓形成，或因過度血小板聚集或動脈閉塞，等所導致的其他徵候或疾病，及因平滑肌增生所致冠狀動脈再狹窄之治療，其包括給用一藥學有效量的至少一種MPDEI及至少一種腺苷攝入抑制劑之藥學組成物（亦即，本發明藥學組成物）。如本文所用者，”藥學有效”係指能夠減低上述任何徵候或疾病的復發率或嚴重性的藥劑量。如諳於此技者所知.者，上述徵候包括罹病肢體的不舒適或疼痛，及壞疽，等。整體而言，藥學組成物的有效劑量可促成在血小板和其他血液細胞，以及血管平滑肌細胞內的PDE3活性與腺苷攝入之減低 ’其量足以預防，紆解，或以其他方式治療所述徵候和疾病。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製諳於此技者都能夠使用技藝中已知的技術定出且最優化個別MPDEIs和腺苷攝入抑制劑的劑量。彼等技術係經載於，例如 Goodman and Gilman，s The Pharmacological Basis of Therapeutics，Ninth Edition，（ 1 996)的 3-41 頁（其全文以弓[ 用方式倂於本文）。可以透過使用經建立的檢定，習用的劑量-和時間-反應性硏究，與習用的藥物代謝動力學和代謝硏本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 15 _ 0030U3 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（12) 究等的使用來確定和最優化該劑量。定出治療所用恰當劑量所需計算的進一步精確化係由諳於此技者例常地進行者且都在彼等所例行實施的工作列中而不必使用過度的實驗。例如，可以使用從細胞培養檢定和動物硏究所得數據來調配一病人所用的劑量範圍。該劑量可在此範圍內變異，決定於所採用的劑型與所利用的給藥途徑。對於本發明方法所用的任何組成物，可於初期從細胞培養檢定估計治療有效劑量。可以調配出一劑以達到如細胞培養所定出的循環血液血漿濃度範圍。在給用兩種或更多種化合物，如呈單一調配物或呈分開的調配物，之時，該劑可經調配成該兩種或更多種化合物之間在如細胞培養所定出的循環血液血漿中之莫耳比例範圍。例如，於本發明一具體實例中，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的組成物可以產生約0.3 // Μ到約1 0 // Μ的西洛他唑血液濃度與約1 # Μ到約3 // Μ的雙嘧達莫血液濃度。於另一具體實例中，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的組成物可以產生約0.5 // Μ到約5 // Μ，或1 // Μ 到約3 // Μ的西洛他唑血液濃度與1 // Μ到3 // Μ的雙嘧達莫血液濃度。因此，於本發明一具體實例中，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的組成物可以在血液中產生約0.1 : 1到約 1 : 0.01的西洛他唑：雙嘧達莫莫耳比例。於本發明另一具體實例中，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的組成物可以在血液中產生約0.16 : 1到約1 : 0.2，或0.33 : 1到約1 : 0.33 的西洛他唑：雙嘧達莫莫耳比例。在現有的臨床可取得之調配物之下，此等血液濃度水平相當於20毫克到300毫克 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） _ 16 _ 20030U35 Μ Β7 五、發明説明（13) 的西洛他唑（Pletal®)每日劑量與200毫克到600毫克的雙嚼達莫（Persantine-Retard®)每日劑量。於另一具體實例中，此等血液濃度水平相當於50毫克到200毫克，或50毫克到 1 60毫克的西洛他唑每日劑量與200毫克到600毫克的雙嘧達莫每日劑量。因此，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的藥學製劑具有約1 : 〇·7到約1 : 30的西洛他唑··雙嘧達莫重量比例。於另一具體實例中，一包括西洛他唑和雙嘧達莫的藥學製劑具有約1 : 1到約1 : 12的西洛他唑：雙嘧達莫重量比例。血液中的水平可以用高性能液體層析術或技藝中已知的其他方法予以測量。此外’於本發明方法中給用的個別MPDEIs和腺苷攝入抑制劑之劑量會根據，例如，要治療的特別徵候和疾病，給藥方式’及要治療的病人之年齡、重量和性別等而變異。事實上，因爲個別病人在徵候和疾病的嚴重性上可能呈現廣泛的變異，且每一種藥物具有其獨特的治療特性，所以對於每一病人所用的正確給藥方式和劑量都有待執事者的斟酌決定。病人如本文中所使用者是指有需要治療上述徵候和疾病的任何人或非人類動物，或該治療可能對其有益的任何對象，包括人類和非人類動物。此等要治療的非人類動物包括所有家庭和野生的脊椎動物，較佳者，但不限於：小鼠、大鼠、兔子、魚類、鳥類、倉鼠、狗、貓、豬、綿羊、馬、牛和非人類靈長類。本發明藥學組成物包括活性成分（亦即，至少一 — ^---；------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 it 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Ad規格（2丨〇><297公釐） -17- 20030U3 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（14) mpdei或其藥學可接受的鹽及至少一種腺苷攝入抑制劑或其藥學可接受的鹽）與一或更多種藥學可接受載劑或賦形劑和視需要的其他治療劑之調配物。該（等）載劑必須在與組成物的其他成分可相容且對其接受者無害的感覺上爲可接受者。當該組合的個別成分係一起或分別地給用時，彼等通常是以藥學調配物形式呈出。適當的調配物包括適合經口、經直腸、經鼻、局部（包括透皮、經頰和舌下），經陰道或非經腸（包括皮下、肌肉內、靜脈內和皮內）給用所用者。該等調配物可以經由藥劑學技藝中熟知的任何方法予以製備，例如，使用在Gennaro et al.， Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th ed.，Mack Publishing Company, 1990 ，參看特別者 Part 8;Pharmaceutical Preparations and their Manufacture)中戶斤述者（其全文以引用方式倂於本文）。此等方法包括下述步驟：將該等活性成分與構成一或多種輔助成分的載劑締合在一起。此等輔助成分包括技藝中習用者，例如，塡充劑、黏合劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑、調味劑，和濕潤劑。適合經口給用的調配物可呈現爲分立的單位例如九、錠劑或膠囊，各含預定量呈粉末或顆粒形式或溶液或懸浮液形式的活性成分。該活性成分也可以呈現爲大九藥或糊劑，或可包含在微脂粒之內。供經直腸給用的調配物可製備成爲栓藥或灌腸劑形式〇供非經腸給藥時，適當的調配物包括水性和非水性無 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） · 18 - ^0301135 A7 B7 五、發明説明（15) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 菌注射液。該等調配物可呈現在單劑或多劑容器，例如，密封的管瓶和針藥瓶之內，且可以貯存在冷凍乾燥 (lyophilized)狀況之下只要在使用之前添加無菌液體載劑，例如，水，即可。適合經鼻吸入給用的調配物包括係灑粉或霧狀物（mist) ’其可經由利用計量劑壓縮氣霧器，噴霧器或吸入器予以產生。本發明更包括一種製備藥學組成物之方法，其包括將至少一種MPDEI (或其藥學可接受的鹽）及至少一種腺苷攝入抑制劑（或其藥學可接受的鹽）的組合與一或更多種用於彼等的藥學可接受載劑締合在一起。本發明要用下列實施例予以闡明，彼等無意於任何方面具有限制性。實施例1 西洛他唑和雙嘧達莫在試管內增效性地抑制人類經洗過的血小板之聚集經洗過的血小板之製備經濟部智慧財產局員工消費合作社印製從10個健康捐血者（至少10天沒有服醫藥者）經由使用 19G頭皮針（butterfly needle)以兩注射筒技術採集周圍血液樣品。抽血的程序係根據Helsinki公約經健全人體試驗委員會（Institutional Review committee)認可者。有 9 個捐血者係直接採集到裝有一體積檸檬酸三鈉（3 . 8 %)的注射筒之內。在室溫下以1 5 0 X g離心1 5分鐘後收集到富血小半血漿本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 20030i：3b A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（16) (PRP) 〇從加檸檬酸的 PRP 以 Cone et al· (Cone et al·， 1 999a)(以引用方式倂於本文）中所述的檸檬酸洗滌法製備經洗過的血小板（WP)。最後將血小板再懸浮於Tyrode ’ s HEPES 緩衝液中（136.7 mM NaCl，5.5 mM 右旋糖 ’ 2.6 mM KCM，13.8 mM NaHCCh，1 mM MgCh，0.36 mMNaHP〇4 ’ 和 10 mM HEPES ; pH 7.4)。將血小板濃度調整到3.8 x 108血小板/毫升。試驗化合物說明西洛他唑（OPC-13013): —種 MPDEI，可選擇性抑制 PDE3及經由提高 Camp水平防止血小板聚集（Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd·， Tokushima, Japan 戶斤提供， Lot#B8E88M) ° 雙嘧達莫：一種抗血小板藥物，可阻斷腺苷攝入到血管細胞和血細胞之內。（Calbiochem， La Jolla， CA.， Cat#322328，Lot#Bl 1 755)。 ZM24 1 3 85 : —種選擇性腺苷 A2a受體阻斷劑（Tocris， Ballwin，MO，Cat#1 036，Batch#2/1 8074)。經洗血小板的聚集之偵檢聚集現象係經由使用AG-10聚集分析儀（Kowa，Japan) 以透光率的變化予以定量分析。將經洗血小板保持在室溫下並在血液收集後3小時之內實施硏究。將西洛他唑溶解在DMS0內並將腺苷溶解在水中。施以恰當的稀釋以得到 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -20- 0030ii3b A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（17) 合意的操作濃度，同時保持DMSO的最後濃度使其不超過 0.2%。將血小板懸浮液（400微升）吸取到聚集小瓶內並使其於1，000 rpm攪拌下在37° C保溫1分鐘。然後添加藥物或無效對照劑（DMSO)(4微升）並再保溫3分鐘。在檢驗與雙嘧達莫的增效性時，係於添加藥物或DMSO後1分鐘加入雙嘧達莫（1，3，和10// M)與1// Μ腺苷使得雙嘧達莫和腺苷的整體保溫時間爲2分鐘。然後，使用1-2微克/毫升的膠原（Chrono-Log Corp.，Havertown，ΡΑ)刺激該懸浮液。所記錄的整體聚集時間爲15分鐘。將最後11分鐘（自添加膠原之後算起）內的最大透光率値表爲對照樣（DMSO +乙醇+腺苷）聚集値的表分比。西洛他唑和雙嘧達莫增效性地抑制經洗過的血小板.之聚集爲硏究腺苷和西洛他唑對於經洗過的血小板之聚集的增效性效應，乃對每一個別捐血者在1 // Μ腺苷存在中滴定膠原的量。使用1 // Μ腺苷對聚集沒有顯示出效應的最低膠原濃度（1-5微克/毫升）。西洛他唑（1/ζ Μ)或腺苷（1// Μ)本身對於膠原-誘導血小板聚集具有很小的影響（圖la，lb，lc) 。不過，將兩者組合時即可完全抑制血小板聚集（圖Id)。西洛他唑與雙嘧達莫（丨，3和丨〇 # M)的組合對於經洗血小板的膠原誘導聚集所產生的濃度相關性抑制係在腺苷 (1 // M)存在中實施的。如圖2中所示者，西洛他唑可用劑量-相關性方式抑制血小板聚集。腺苷的添加會使抑制曲線向左偏移（表2)。所g十算出的ICs。會從2.66±0.41//M減低 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） _ 21 - 0030U3 Α7 Β7 五、發明説明（18) 到 0·3 8± 0·05// Μ (ρ<〇·〇〇ι，兩尾配對 student t-測驗）。雙嘧達莫可用劑量-相關性方式將西洛他唑與腺苷的抑制曲線進一步向左偏移。於1，3和10//M雙嘧達莫的存在中， IC5。會分別偏移到 0·17± 0.04/z M (p<0.05)，0.11± 0.66// Μ (Ρ<0·05)，和〇·〇1± 0·01 // Μ (ρ<0·005)(表 1)。該數據指出雙嘧達莫和西洛他唑的組合對於血小板聚集的抑制係發出增效效應，而非加成效應 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇X 297公釐） 200301135 A7 B7 五、發明説明（ 19、 M¾Ι0·0+ιΙ0·0 1 soodvd (OPV ¥ .00Λ)

:afT W删響粼· (s 5 2¾ 900-hln.o (SMU: sdvd (opv /M .SA; (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) Μ侧響ΙΚ+ (M¾I) S3 寸 0·0+!卜 Ι·ο

(SHI soovd (opv /豸-ΟΟΛ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (1/Μ^ο 诽盤 Μ^,ςοο+ΙΟΟΓΟ (ςπι 100,0>d (opv o/M .SA) ^¾ I 寸ο+ι99·ΓΝ1 (i) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -23 - 200301135 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（2Q) 西洛他唑與雙嘧達莫的增效性效應也使用取自另外5 個捐血者的經洗滌血小板予以確定，不過此次係針對30和 100 nM西洛他唑。圖3顯示出在腺苷（1// Μ )和雙嘧達莫（1 ，3和10 // Μ )存在中，添加1和3 // Μ西洛他唑，與對照樣（沒有添加藥物）相比較時的血小板聚集之％抑制率。與對照樣相比之下，雙嘧達莫（1，3和10// Μ )或西洛他唑（3 0和 1 00 ηΜ)單獨者在所試驗的濃度下對於經洗血小板的聚集沒有明顯的抑制作用（圖3和4)。腺苷的添加（1 // Μ，於此濃度之下，腺苷單獨者沒有觀察到有效應）可明顯地增強雙嘧達莫的效應（圖3)。於添加100 ηΜ但非30 ηΜ西洛他唑時可觀察到進一步的增強。所以，10 // Μ雙嘧達莫對於血小板聚集的抑制效應可以使用1 // Μ雙嘧達莫與1 00 ηΜ西洛他唑的組合，在腺苷存在中，因爲該兩種化合物之間的增效作用而達到。圖4顯示出相對於對照樣，在1 // Μ腺苷和 30或100 ηΜ西洛他唑的存在中，添加1，3和10 // Μ雙嘧達莫所得到的血小板聚集之％抑制率。30或100 ηΜ西洛他唑與1 // Μ腺苷的組合顯示出與對照樣有明顯差異但與任一者單獨者沒有差異。於該組合中添加雙嘧達莫，在該兩種西洛他唑濃度（30和100 ηΜ)下，於所有三種（雙嘧達莫）濃度下都可明顯地增強抑制效應。再度地，可以闡示出兩種化合物之間的增效效應，其中經由在腺苷存在中，將30 ηΜ 西洛他唑與3 // Μ雙嘧達莫的組合可以達到1 ΟΟηΜ西洛他唑的相等效應。如所預期者，沒有腺苷時西洛他唑與雙嘧達莫的組合對於經洗滌血小板的聚集沒有影響（沒有顯示出 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） _ 24 _ 0030U35 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（21) 數據），可推測腺苷爲西洛他唑與雙嘧達莫之間的增效效應之媒介劑。如此，可促成使用遠較爲低的各藥劑濃度組合起來而達到與使用更高濃度單獨使用的各藥劑所得者相同的效力。該增效性效應經認爲是因爲增高的細胞內cAMP水平所致者，如下面要證實者。實施例2 西洛他唑和雙嘧達莫增效性地增加細胞內cAMP濃度血小板內cAMP之測量首先將腺苷，西洛他唑，或雙嘧達莫單獨者或組合者等分到個別的聚丙烯試管內。使用DMSO和乙醇作爲對照樣。將單獨或組合的試驗藥劑與PRP經由略爲迴轉予以混合。最後樣品體積爲200微升且每一實驗都以二重複實施。於將樣品在37° C下保溫5分鐘之後，經由添加50微升冰冷的過氯酸（PCA，1.2 5 N)。於凍結與解凍一次之後，使用50微升KHC〇3(1.25 N)中和該混合物且在4° C下以 20,000 X g離心15分鐘。收集所得上澄液並使用套組所提供的乙酸鹽緩衝液稀釋。使用cAMP放射免疫檢定套劑 (NEK-033，NEN Life Science，Boston，MA)以二重複測量 cAMP濃度。表現人類腺苷A2a受體的CH0細胞之建立從新鮮人類血小板萃取總RNA並使用5微克反轉錄到 cDNA且用爲聚合酶鏈型反應（PCR)之模板。設計供腺苷A2a (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25 - 20030U35 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（22) 受體所用具有Kozak序列（CCCACC)的特異性引子（前向引子 :5，-CCCACCATGCCCATCATGGGCT -3’，反向弓丨子：5、 TCAGGACACTCCTGACTCC-3，）並以 Life Technologies (Rockville，MD)予以合成。使用此等引子，以PCR擴增完整密碼區並進一步重組到選殖載體，pCR2.1(Invitrogen， Carsbad，CA)。該插入體的DNA序列係在插入到哺乳動物表現載體，pcDNA3.1+ (Invitrogen)內之前確定者。在啓動基因區內含有cAMP-反應性要素（CRE)且可驅動蟲螢光素酶的表現之表現載體（pCRE-Luc)係購自 Stratagene (La Jolla，CA) 。蟲螢光素酶表現水平反映出細胞內cAMP的濃度。腺苷 A2a受體係已知會偶合到Gs蛋白者（Huttermann et al·，1 984) 。所以，該等受體的活化即由蟲螢光素酶表現所反映出，其中該表現水平可由蟲螢光素酶活性檢定予以測量出。蟲螢光素酶報導者載體與含有腺苷Α2Α受體的載體之共轉染係經由將磷酸鈣沉澱到中國倉鼠卵巢（CHO)細胞內而進行。使用1.0毫克/毫升的G418 (Life Technologies)選擇適當的轉染株1 2天。可過度表現功能性腺苷A2a受體的細胞株係經由在腺苷刺激下由蟲螢光素酶表現予以定出。蟲螢光素酶檢定要檢驗西洛他唑和雙嘧達莫在有或沒有腺苷之下對於 cAMP增高的增效性效應時，係在具有透明底部的白壁96-洞板（Corning Costar Co.，Cambridge，MA)內將該細胞再次培養到近乎匯聚。於次日，使用補充0.5% FCS的F12K培養 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -26 - 200301135 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（23) 基洗該細胞一次，然後與100微升只有培養基（基底）或有加試驗劑的培養基一起在37° C下保溫4小時。於平衡到室溫之後，於每一洞內加入100微升的偵檢受質（Bnght-GloTM 蟲螢光素酶檢定系統，Promega，Madison，WI)。於5分鐘之後，使用 Mediators PhL螢光板讀取器（lmmTech, New Windsor, MD)測量蟲螢光素酶活性。採用在半秒鐘內偵檢到的螢光値（隨意單位）作爲蟲螢光素酶活性。西洛他唑和雙嘧達莫增效性地增加細胞內cAMP濃度首先在PRP內硏究雙嘧達莫和西洛他唑對於細胞內 cAMP濃度的影響。如圖5A和5B中所示者，於0.3或1 // Μ腺苷存在中，雙嘧達莫（3 // M)和西洛他唑（3 // M)的組合，在與任一者單獨時比較之下，可進一步增加血小板內 cAMP水平（二重複檢定η = 2)。因爲在血小板內的低基底 cAMP水平之故，我們遂建立在可過度表現人類血小板腺苷 A2a受體的CH0細胞內之蟲螢光素酶檢定。蟲螢光素酶活性的量反映出細胞內cAMP水平。雙嘧達莫對於腺苷攝入的抑制效應在血小板內與在紅血球內係類似者。圖6顯示出在 0.03// Μ腺苷及/或1// Μ西洛他唑存在中，雙嘧達莫對於蟲螢光素酶活性的影響。類似地，圖7顯示出在〇.〇3 // Μ腺苷及/或3 // Μ西洛他唑存在中，雙嘧達莫對於蟲螢光素酶活性的影響（在至少3獨立實驗的三重複樣知代表値）。如圖 6和7中所示者，1和3 // Μ西洛他唑，於雙嘧達莫存在中，可增效地提高蟲螢光素酶活性’即使在3 // Μ西洛他唑情 IJ. ; -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） · 27 - 0 030113! A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（24) 況中沒有腺脊也一樣。雙嘧達莫可在0 · 5到1 〇 // Μ範圍內劑量相關地增強西洛他唑的效應，其最高峰出現於約5 // Μ 。整體而言，此硏究確定西洛他唑與雙嘧達莫可用增效方式作用以增加細胞內cAMP濃度，且彼等經由增效地抑制血小板聚集而提供一可能的機制。實施例3 西洛他唑抑制腺苷攝入腺苷攝入到經洗血小板和紅血球內之檢定按照下述製備經洗過的紅血球。於起始離心移除PRP 和血沉棕黃層（buffy coat)之後，將100微升紅色沉九部份稀釋到12毫升含有鈣和鎂的PBS內。以150 X g旋轉5分鐘分離出RBC。用PBS洗一次之後，將沉九再懸.浮於PBS 內到1 X 108 RBC/毫升。根據先前所述方法實施腺苷攝入實驗（Liu，Fong，Cone，Wang，Yoshitake，and Kambayashi，2000) 。取100微升WP或RBC與50微升西洛他唑或二聯啶酮在 3 7° C下保溫5分鐘。然後，加入50微升1微居禮（// Ci)的 [3H]-腺脊（Amerslian Pharmacia，Piscataway，NJ)，1 // Μ 腺苷，和 25 // Μ 的 erytliro-9-(2-hydroxy-3-nonyl)adenosine (EHNA，最後濃度，Sigma Chemical)，接著力口入200微升油 (苯二甲酸二丁酯··苯二甲酸二辛酯 =1 : 1，Aldrich)，且之後保溫1分鐘。以1 6,000 X g離心2分鐘將細胞與水相中的腺苷分開。於移除油相和水相之後，使用冷-液體閃爍計數器（ 1 209 Rackbeta，LKB，Turku，Finland)測量細胞九的放射 (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X297公釐） -28- 0030113 A7 B7 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製五、發明説明（25) 性。西洛他唑抑制腺苷攝入 [3H]-腺苷攝入實驗係使用經洗過的血小板和經洗過的紅血球實施的且將其結果顯示於圖8之中。西洛他唑可在血小板和紅血球兩者之內抑制腺苷攝入，其IC5。爲約7 // M(n = 3)。西洛他唑在攝入抑制上的效力類似於先前對兔子心肌細胞，人類血管平滑肌細胞，和內皮細胞所報導之値 (5〜10 ji M) (Liu, Fong， Cone, Wang, Yoshitake, and Kambayashi，2000)。相異者，二聯D定酮對於血小板或紅血球的腺苷攝入幾乎沒有影響。使用可過度表現功能性人類腺苷A2a受體的CH〇細胞進一步確定西洛他唑在抑.制腺苷攝入上的作用。西洛他唑可抑制[3H]-腺苷攝入到此等CH0細胞內，其效力類似於對血小板和紅血球，而二聯啶酮則沒有影響（沒有顯示出數據）。實施例4 西洛他唑和雙嘧達莫在試管內增效性地抑制人類全血液中的血小板之聚集全血液之製備從10個健康捐血者（至少10天沒有服醫藥者）經由使用裝有4微升水蛭素（250 U/微升）/10毫升血液的注射筒以兩注射筒技術採集周圍血液樣品。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 29 _ 00301135 Α7 Β7 五、發明説明（26) 全血液血小板聚集硏究 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將血液樣品用生理食鹽水稀釋1 : 1並使用Chrono-Log Whole Blood Aggregometer以1000 rpm的攪拌速率進行檢驗。於起始處，將攪拌棒浸入到一塑膠管瓶內接著添加1毫升經稀釋的血液樣品。然後將電極放置到該管瓶內並將樣品置於 37 ° C下保溫同時校準儀器。將西洛他唑和 ZM24 1 385溶解在DMS0內到1〇〇 mM的儲液濃度。將雙嘧達莫稀釋在乙醇（EtOH)內到1〇〇 mM的儲液濃度。進一步稀釋以在添加到1毫升全血液內之時得到恰當的西洛他唑 (10 // Μ和30 // Μ，因爲西洛他唑對蛋白質的結合性質之故），雙嘧達莫（0.1，0.3，1 或 3 // Μ)，和 ΖΜ24 1 385 (0·1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 // Μ)檢驗濃度。藥物和媒劑係以1微升的體積添加使得 DMS0的最後濃度不超過0.2%。於添加膠原之前.，將懸浮液保溫3分鐘。此硏究中所使用的膠原濃度爲〇.5微克/毫升，係由預備篩選所定出者。要檢驗西洛他唑和雙嘧達莫之間的增效性之時，係添加西洛他唑之後1分鐘才添加雙嘧達莫（1微升儲液）。要觀察此等藥物的逆反效應時，係在添加諸藥物之1分鐘前添加0.1 # Μ的ΖΜ24 1 385( 1微升）。在添加諸藥物之後3分鐘添加膠原，使得ΖΜ24 1 395有總共 4分鐘，西洛他唑或DMS0有3分鐘，且雙嘧達莫有2分鐘之保溫時間。於刺激之後，觀察大小値11分鐘，採用其最大値作爲數據呈現。要檢驗更低的西洛他唑濃度是否也可以與雙嚼達莫以起增效化以抑制全血液中的血小板聚集，我們乃使用稍微較低，產生較不強的聚集但與病人的狀況 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐）〇 00301135 A7 B7 五、發明説明（27) 更相關的膠原濃度（0.1或0.3// Μ)。以西洛他唑（0.3、0.7、 1和3/ζ Μ)與雙嘧達莫（1和3// Μ)的不銅組合進行硏究。將數據表爲相對於在沒有任何抑制下所偵檢到的値之百分比經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

血漿中腺苷濃度的測量抽取血樣並與重組人類水蛭素（100 U/毫升）混合。使用對血小板聚集所用的相同程序以膠原（2微克/毫升）刺激此等血小板。於5分鐘保溫之後，將500微升WB與500微升冰冷食鹽水迅速混合。在4° C下以20,000 X g將細胞旋轉4 分鐘。將上澄液（600微升）先與300微升PCA (2.5N)混合，然後使用300微升KHC〇3 (2.5N)予以中和。最後，在4° C 下以20,000 X g將混合物離心15分鐘。以逆相高性能液體層析術（HPLC，Waters Alliance 2690)使用 Hypersil 3// Cis 管柱（150毫米x 4.6毫米）及從5到20%甲醇/20 mM KH2P〇3 的梯度測量上澄液中的腺苷濃度。腺苷係使用二極體陣列偵檢器（Water 996)於258奈米的吸光度變化予以偵檢並與已知的外標準比對滯留時間與峰高度進行定量分析。定量分析係使用 Waters Millennium 32 Client/Server 軟體實施的。於血小板活化過程中在全血液內產生大量的腺苷使用HPLC，在用2微克/毫升膠原刺激5分鐘之後，測量全血液細胞外培養基內的腺普濃度。如圖9中所示者，在膠原刺激之後於全血液內產生大量的腺苷（31 52土 428 nM (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -31 - Q030U3 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（28) ，相對於基底的240± 53 11M，η = 5)，可能是因爲從經活化的血小板所釋出的ΑΤΡ和ADP發生降解之故。於雙嘧達莫 (1从Μ)存在中，血小板聚集不受影響，但腺苷水平明顯地進一步增高到591 6± 641 (η = 3)。西洛他唑和雙嘧達莫增效性地抑制全血液中的血小板聚集如上面所觀察到者，因爲在血小板活化過程中可能產生大量的腺苷，所以不需要添加任何外源腺苷。於全血液中，實驗證明西洛他唑（10或30// Μ)或雙嘧達莫（0.1，0.3， 1或3// Μ)單獨者對於血小板聚集沒有明顯的影響（圖10)。不過，1 0 // Μ西洛他唑和3 // Μ雙嘧達莫的組合會明顯地抑制血小板聚集（從10 // Μ西洛他唑單獨者的98.9± 2.0%， 1】=8，和3//1^雙嘧達莫單獨者的97.9±0.7%變成74.8±6.2% ，η=8，ρ<0.005，圖10Α)。使用30/2 Μ西洛他唑與甚至更低濃度的雙嘧達莫之組合可看到更淸晰的證明（η = 5到14，圖1 0Β)。該增效性效應對於西洛他唑和雙嘧達莫兩者都是劑量相關者。此外，於Ζ Μ 2 4 1 3 8 5 (0.1 // Μ)…一種選擇性腺苷Α2α受體拮抗劑一的存在中，雙嘧達莫和西洛他唑的增效性效應會逆返回到西洛他唑單獨時所得基底水平（η= 8)，可以推測該增效性效應係由血漿中的腺苷蓄積所媒介者。在使用0.1或0.3微克/毫升膠原誘導全血液聚集之時，我們發現西洛他唑（0.3 // Μ與3 μ Μ之間）和雙嘧達莫（1或 3// Μ)的組合可明顯地抑制血小板聚集（圖11)。例如，0.7 // Μ西洛他唑和3 // Μ雙嘧達莫的組合可抑制57± 1 1 %的血 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -32 - 200301135 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（29) 小板聚集，且1 // Μ西洛他唑和3 // Μ雙嘧達莫的組合可抑制7 2±11%的血小板聚集（？<0.001)。在此等濃度之下，西洛他唑或雙嘧達莫單獨者都不會引起任何明顯的抑制作用。實施例5 西洛他唑和雙嘧達莫在活體外增效性地抑制人類全血液中的血小板之聚集臨床硏究之設計設計一-期，開放標記，序列性，互換硏究以檢驗是否可以在健康捐血者體內以臨床相關劑量觀察到西洛他唑和雙嘧達莫對於血小板聚集抑制之增效性效應。於硏究的第一天，6個對象接受1粒100毫克西洛他唑錠（Pletal®)。於硏究的第4天，諸對象接受1粒200毫雙嘧達莫錠。於硏究的第6天，給此等對象接受西洛他唑和雙嘧達莫的組合〇全血液血小板聚集於投藥之前，與投藥2和4小時之後，抽取5毫升的血液到一裝有10U/毫升經部份分離的肝素之注射筒內。然後用生理食鹽水稀釋血液樣品並使用Chrono-Log Whole Blood A gg re gome ter以1000 rpm的攪拌速率測量血小板聚集。經由添加膠原（最後濃度爲0.3微克/毫升，Nycomed Αι·zneimi11e 1，Muncheη，Germany)誘導血小板聚集。於每一時點記錄聚集百分比。爲了比較諸藥物處理的效應，將在2- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -33- 20030U35 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

五、發明説明（30) 時和4-時的聚集歸一化到投藥前的値之百分比。西洛他唑和雙嘧達莫的組合在活體外增效性地抑制全血液血小板聚集單一 100毫克投劑後的2-和4-小時所得血液中西洛他唑濃度爲約2 // Μ。根據先前的藥物代謝動力學數據，單一 200毫克投劑後的2-和4-小時所得血液中雙嘧達莫濃度也在2//Μ範圍內。因爲根據Aggregometer製造商指示中對於用食鹽水對血液的1 : 1稀釋之要求，所以在活體外血小板聚集檢定中的有效藥物濃度經估計對於西洛他唑爲1 /z Μ而對於雙嘧達莫爲1 // Μ。如預期者，在此等濃度之下，西洛他唑或雙嘧達莫單獨者都不會抑制血小板聚集（圖1 2)。不過，在對象接受西洛他唑和雙嘧達莫的組合處理之後的第 4-小時，可抑制血小板聚集達45%(ρ<0.001相對於投藥之前 )。此等結果非常類似於實施例4中所述試管內全血液聚集硏究中所得數據。實施例6 雙嘧達莫抵消西洛他唑對於心臟功能的潛在有害效應手術準備此硏究係根據 t h e N a t i ο n a 1 R e s e a r c h C 〇 u n c i 1，1 9 9 6， Washington DC 出版的”Guide for the Care And Use of Laboratory Animals”，且由 the'Institutional Animal Care and Use Committee of Otsuke Maryland Research Institiute, LLC (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -34- 200301135 A7 _____ B7 五、發明説明（31) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製所准許而進行的。將體重爲2-2.5公斤的雄兔子（New Zealand White)經由穿過邊緣耳靜脈施以靜脈內注射戊巴比妥（pentobarbital)(30毫克/公斤）予以麻醉。實施氣管切開術並在動物喉頭插管。使用補充1〇〇% 〇2的室內空氣透過 Harvard小動物換氣器予以換氣。調整呼吸速率以將動脈血液P〇2，PCCh和pH保持在生理範圍之內。使用加熱毯將體溫保持在近乎3 8 ° C。透過中線開胸暴露出心臟，且經由在心臟底部切開迅速切取出並放置在冰冷的Krebs-Henseleit 碳酸氫鹽緩衝液中。然後將心臟經由主動脈根接到 Langendorff設備，並用不循環的Krebs-Henseleit緩衝液以 7 5 mmHg的固定壓力予以灌注。使用95% 〇2和5% C〇2氣體混合物泡通灌注液，且調整泡通速率以維持生理PH(7.35-7.45)。灌注液溫度係經由包圍緩衝液儲器的循環.水套管予以維持在38° C。心臟也經由包圍心臟懸掛處的循環水套管予以維持在38° C。將該套管的開放頂部以一片石蠟膜覆蓋以維持溼度和溫度。將包住主動脈根部右側的肺動脈插管以收集冠狀動脈流出液及用於使用量筒進行冠狀動脈流速之測量。於左心室內插置一塡充著食鹽水的乳膠氣球，將該氣球透過一導管連接到一壓力轉導器並予以充氣以產生 0-5 mmHg的末端疏張壓。該壓力轉導器係經接到一 Grass Chart Recorder (Model 7)以記錄左心室壓及其第一導數 (dp/dt)，與心博數。在15-分鐘平衡期結束具有低於85 mmHg的左心室發展壓的心臟不包括在本硏究之內。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -35 - 00301135 A7 ______ B7 五、發明説明（32) 心臟功能的測量 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 所測量的心臟功能指數爲LVDP(左心室發展壓）， dp/dt(LVDP第一導數的最大値），心博數，和冠狀動脈流。實驗方案爲圖13中所示者。於15-分鐘平衡之後，用西洛他唑處理心臟5分鐘，接著用西洛他唑和雙嘧達莫處理5 分鐘。於1 0分鐘的無藥物灌注之後，用雙嘧達莫處理心臟 5分鐘。於每一 5 -分鐘藥物處理結束時，進行心臟功能測量。將藥物處理的效應表爲每一次藥物之前與之後的數値變化百分比：相對於基線的改變％ =[(投藥之後的値-投藥之前的値）/投藥之前的値]X 100 統計分析將數據表爲平均値± SEM。使用配對t-測驗來偵檢意義値（p<0.05) 〇 (Sigma Stat 2.0，Jan del Corporation，San Rafael, CA) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製雙嘧達莫抵消西洛他唑-誘導的心臟收縮力和心博數之增加先前硏究揭曉出西洛他唑在低於1 // Μ的濃度下對於心臟功能具有最小的影響。也證明出雙嘧達莫在〇. 3到1 // Μ 的濃度下爲一種非常強力且有效的腺苷攝入抑制劑。所以，本實驗係採用1、3和1 0 // Μ的西洛他唑濃度，與0.3，1 和3 // Μ的雙嘧達莫濃度來實施。 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 0030ii3b A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（33) 如所預期者，濃度0.3，1或3 // Μ的雙嘧達莫單獨者對於心臟功能沒有明顯的影響。不過，濃度3或10// Μ的西洛他唑可明顯地增加心臟收縮力、心博數和冠狀動脈流。濃度0.3，1或3 // Μ的雙嘧達莫可以明顯地減低西洛他唑-誘導的心臟收縮力（圖14Α)、和心博數（圖14Β)。濃度1 和3// Μ的雙嘧達莫也可以增強西洛他唑（10// Μ)-誘導的冠狀動脈流之增加（圖14C)。總結言之、此硏究推斷出雙嘧達莫可抵消西洛他唑對心臟功能的有害影響。實施例7 低水平西洛他唑和雙嘧達莫的組合增加運動中的腓腸肌內血液流動且可改善絕血後的血液流動恢復此實驗證明給用西洛他唑和雙嘧達莫的組合可增加對於運動後骨骼肌的血液供給及改善活體內絕血期後的流動恢復。按上述準備兔子的後肢進行藥物輸液，刺激肢體以模擬運動及血流測量。手術準備將體重爲2.5-3.5公斤的雄兔子（New Zealand White)經由穿過邊緣耳靜脈施以靜脈內注射戊巴比妥（30毫克/公斤）予以麻醉。實施氣管切開術並在動物喉頭插管。使用補充 100% 〇2的室內空氣透過Harvard小動物換氣器予以換氣。使用加熱毯將體溫保持在近乎.38° C。將頸靜脈插管供追加麻醉和藥物給用所用。於左主動脈內插置具有內腔（4F)的 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -37- 0 030U35 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（34) Millar 壓力轉導器（Millar Instruments, Houston)並使其進入到左心室用以測量左心室壓（LVP)及注輸螢光性微球體。在右主動脈插管用以測量動脈血壓。透過在中大腿部從鼠蹊部韌帶延伸到後膝關節的縱向皮膚切開以暴露出兩後肢的股動脈。使用動脈夾子完成動脈閉塞，並經由移除夾子實施再灌流。爲了刺激肌肉收縮，將一對電極左後肢的坐骨神經並連接到一 Grass SD9刺激器。刺激係在1 Hz以超最大10V的8 ms方形脈衝產生的。將後肢放置成與大腿呈 90° 。使用對側的後肢作爲對照樣而不予以刺激。局部血流測定使用螢光微球體根據”Manual for Using Fluorescent Microspheres to Measure Organ Perfusion” 測量血流 (Fluorescent Microsphere Resource Center, University of Washingtοn，Seatt 1 e，WA)。藍-綠、黃-綠、橘色、紅色和深紅色的螢光標記聚苯乙烯微球體（直徑1 5微米）係購自 Molecular Probes (Eugene，OR)。將每一種顏色的微球體以五十萬每公斤體重之量於20秒期間透過導管注射到左心室內。同時，自注射微球體之30秒鐘前開始的2分鐘期間，從右主動脈以2.5毫升/分鐘抽取血樣。於結束之時，使用致死劑量的戊巴比妥鈉（1 00毫克/公斤）使兔子安樂死。從左心室自由壁，腎臟、和兩後肢的腓腸肌採取組織樣品（每樣約1克）。稱取樣品的重量，放置在管子內並於以處理供消化和螢光測定所用。使用光譜螢光計（Fluomax-2, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2】0X297公釐） -38 - 0030U3b A7 B7 經濟部智葸財產局員工消費合作社印製五、發明説明（3δ) Instruments S. A.，Inc.，Edison，New York)測量螢光。以標準參比流動技術計算局部血流，並表爲毫升/分/100克。實驗方案實驗的時程爲圖5中所示者。手術準備60分鐘之後，將動物分成4組且使彼等接受媒劑（對照樣）或接受西洛他唑 (0.226毫克/公斤大九劑接著0.0175毫克/公斤/分靜脈內注輸）與雙嘧達莫（20微克/公斤/分鐘靜脈內）之組合（Cil + Dip) 。藥物注輸方泛係事先決定者且產生約1 // Μ西洛他唑和約 1// Μ雙嘧達莫的血液中濃度。手術後60分鐘，起始媒劑或藥物組合的注射。於20分鐘之後，於實驗的剩餘期間都刺激左後肢的腓腸肌。刺激20分鐘之後（圖1 5中的40分鐘時點），將左股動脈夾20分鐘以誘導絕血，然後釋放使其再灌流。經由在0，20，40，60，和80分鐘處分別注射藍-綠、黃-綠、橘色、紅色和深紅色的螢光微球體以測定局部血流。統計分析將數據表爲平均値土 SEM。採ρ<0.05作爲統計學意義的水平（Sigma Stat 2.0，Jandel Corporation, San Rafael，CA) 。重複測量之後接著後續Student- Newman-Keuls測驗以雙向（以組別和時間作爲變異數）AN〇VA(變異分析）分析數據。低水平西洛他唑和雙嘧達莫的組合增加運動後肌肉內血液 I---^-----^裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 J· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -39- 00301135 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（36) 流動且改善絕血後的血液流動恢復西洛他唑和雙嘧達莫的組合之給用不會明顯變更休息中的腓腸肌內之血液流動。雖然在兩組中，刺激都可明顯地增加對腓腸肌之血液流動，不過在組合藥物處理肌肉中的血流相對於媒劑處理肌肉明顯較爲高（從媒劑處理肌肉內的35± 7毫升/分/100克到組合藥物處理肌肉中的56± 11毫升/分/100克，p<0.05)(圖16)。在左股動脈的20-分鐘完全連接之後組合藥物處理肌肉也具有明顯較高的血流（51 ± 9 毫升/分/100克相對於媒劑處理肌肉中的29± 6毫升/分/100 克，p<0.05)。此等結果推斷西洛他唑和雙嘧達莫的組合可增加對運動骨骼肌的血液供給且改善絕血期後的血液流動恢復。上述諸實驗證實腺苷攝入抑制劑可以檢低PED3抑制劑的收縮增強和心肌變速作用。再者，該等實施例展示出 MPDEI和腺苷攝入抑制劑的組合可以導致血小板聚集的增效性減低，因而可以在比單獨使用任一藥劑者較低的濃度下使用，而不會不良地影響心臟收縮力。該等實施例也證實低水平MPDEI和腺苷攝入抑制劑，於單獨使用時不預期可增加肌肉血流，但於組合時可明顯地增加運動後肌肉內的血流且改善絕血期後的血流恢復。例如，血液濃度爲0.3 到1 0 // Μ的西洛他唑與血液濃度爲0.1到1 0 // Μ的雙嘧達莫之組合可以產生最優的血小板聚集和可忽略的心臟副作用。因此，至少一種MPDEI和至少一種腺苷攝入抑制劑的組合，例如西洛他唑與雙嘧達莫，可以提供對於諸如1C和 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、·! 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4〇 - 0030113 Α7 Β7 五、發明説明（37) 中風等狀況的有效力性且較少心臟副作用之治療。本說明書可從本說明書中所引述的參可文獻之敘述內容獲得最徹底的了解，所有彼等文獻都以全文以引用方式倂於本文。本說明書內的具體實例係提出作爲對本發明諸具體實例的示範說明而不可視爲係用以限制本發明的範圍者。諳於此技者都可明察出本發明涵蓋許多其他具體實例且要將本說明書和實施例視爲只作爲範例，本發明的χ Ε 範圍和旨意係由下面的申請專利範圍所指定。 —：——^-----•裝—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 1· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)Α4規格（210x 297公釐） _41 _ 20030U3 A7 B7 五、發明説明（38) 參考文獻表 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

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Claims

200301135 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 · 一種包括至少一種多功能性磷酸二酯酶抑制劑 (MPDEI)或其藥學可接受鹽和至少一種腺苷攝入抑制劑或其藥學可接受鹽的組成物。 2. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該至少一種 MPDEI 爲西洛他哇（cilostazol)。 3. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該至少一種腺苔攝入抑制劑爲選自下列之中者：雙喷達莫（dipyridamole) ，波本飛林（propentofylline);狄拉哲（dilazep);硝基苯甲硫基肌苔（nitrobenzylthioinosine) ; S-(4-硝基苯甲基）-6-硫代鳥嘌呤；S-(4-硝基苯甲基）-6-硫代肌苷；碘基羥基硝基苯甲基硫代肌替；麥費拉秦mioflazine);和彼等的酯類、醯胺類與前體藥物，以及彼等的藥學可接受鹽類。 4 ·如申請專利範圍第1項之組成物，其包括西洛他D坐與雙嘧達莫。 5.—種基本上由西洛他唑與雙嘧達莫，或彼等的鹽所構成的組成物。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物產生約0.3// Μ到約10// Μ的西洛他唑血液濃度與約0.1 // Μ到約3 // Μ的雙嘧達莫血液濃度。 7·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物產生約0· 5 // Μ到約5 // Μ的西洛他唑血液濃度與1 // Μ到3 // Μ的雙嘧達莫血液濃度。 8 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物產生約1 // Μ到約3 // Μ的西洛他唑血液濃度與1 // Μ到3 本紙^尺度適用中國國家標準（〇犯）八4規格（21(^297公釐） -45- " "" 200301135 A8 B8 C8 D8_____ 六、申請專利範圍 2 // Μ的雙嘧達莫血液濃度。 9 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物’其中該組成物在血液中產生約0· 1 : 1到約1 : 〇·01的西洛他唑：雙嘧達莫莫耳比例。 10 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物在血液中產生約0.1 6 : 1到約1 : 0·2的西洛他坐：雙嘧達莫莫耳比例。 11 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物在血液中產生約0.33 : 1到約1 ·· 0·33的西洛他唑^雙嘧達莫莫耳比例。 12 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物具有約1 : 〇. 7到約1 : 30的西洛他唑：雙嘧達莫重量比例。 1 3 ·如申請專利範圍第4或5項之組成物’其中該組成. 物具有約1 : 1到約1 : 12的西洛他唑：雙嘧達莫重量比例〇 14.如申請專利範圍第4或5項之組成物，其中該組成物具有約1 : 1.2 5到約1 : 12的西洛他唑：雙嘧達莫重量比例。 1 5. —種用於 (a) 治療周圍動脈閉塞疾病（PAOD)或中風； (b) 誘導血管擴張及/或血小板聚集的阻斷； (c) 治療冠狀動脈再狹窄；或 (d) 減少平滑肌增生 ( CNS ) ( 210X297^ ) - 46 - I"：----Γ------ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20030U35 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 3 之藥學組成物，其包含申請專利範圍第1-14項中任一項之組成物，及一或多種藥學上可接受之載劑。 1 6 ·如申請專利範圍第1 5項之藥學組成物，其中該藥學組成物係用於製備治療病患用之醫藥品，且係以治療有效量投服予病患。 1 7 ·如申請專利範圍第1 6項之藥學組成物，其中該藥學組成物係以約20毫克/天到約300毫克/天的西洛他唑與約 200毫克/天到約600毫克/天的雙嘧達莫給用。 18·如申請專利範圍第16項之藥學組成物，其中該·藥學組成物係以約5 0毫克/天到約2 0 0毫克/天的西洛他η坐與約 200毫克/天到約600毫克/天的雙嘧達莫給用。 19·如申請專利範圍第16項之藥學組成物，其中該藥學組成物係以約5 0毫克/天到約1 6 0毫克/天的西洛他D坐與約 200毫克/天到約600毫克/天的雙嘧達莫給用。 20·如申請專利範圍第1 6項之藥學組成物，其中該藥學組成物係用以治療病患的PAOD或中風。 2 1 ·如申請專利範圍第20項之藥學組成物，其中該 PAOD爲間歇性跛行。 22·如申請專利範圍第16項之藥學組成物，其中該藥學組成物係用以在病患體內誘導血管擴張及/或血小板聚集的阻斷。 23·如申請專利範圍第16項之藥學組成物，其中該藥學組成物係用以治療病患的冠狀動脈再狹窄。 24.如申請專利範圍第16項之藥學組成物，其中該藥學本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -47 - ：： -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 • —1— ·1ϋ ·1Υ · 00301135 A8 B8 C8 D8 「、申請專利範圍 4 組成物係用以在病患體內減少平滑肌增生 (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -48 -