PT2231708E - Remédios para pênfigo contendo anticorpos anti-ligando de faz - Google Patents
Remédios para pênfigo contendo anticorpos anti-ligando de faz Download PDFInfo
- Publication number
- PT2231708E PT2231708E PT88597927T PT08859792T PT2231708E PT 2231708 E PT2231708 E PT 2231708E PT 88597927 T PT88597927 T PT 88597927T PT 08859792 T PT08859792 T PT 08859792T PT 2231708 E PT2231708 E PT 2231708E
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- cdr
- seq
- fasl
- tyr
- antibody
- Prior art date
Links
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 title claims description 61
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 33
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 21
- 101000638161 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 claims description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 claims description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 9
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 8
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 4
- ICHZYBVODUVUKN-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ICHZYBVODUVUKN-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 claims description 3
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- REAQAWSENITKJL-DDWPSWQVSA-N Ala-Met-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O REAQAWSENITKJL-DDWPSWQVSA-N 0.000 claims description 2
- WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N WMEVEPXNCMKNGH-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- CGYKCTPUGXFPMG-IHPCNDPISA-N Asn-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O CGYKCTPUGXFPMG-IHPCNDPISA-N 0.000 claims description 2
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 2
- KXRORHJIRAOQPG-SOUVJXGZSA-N Glu-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O KXRORHJIRAOQPG-SOUVJXGZSA-N 0.000 claims description 2
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 2
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 claims description 2
- KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KWLWZYMNUZJKMZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- JLYUZRKPDKHUTC-WDSOQIARSA-N Leu-Pro-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JLYUZRKPDKHUTC-WDSOQIARSA-N 0.000 claims description 2
- IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N Phe-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N 0.000 claims description 2
- 241000169446 Promethis Species 0.000 claims description 2
- MICSYKFECRFCTJ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O MICSYKFECRFCTJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 2
- TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TZXFLDNBYYGLKA-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 2
- OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N 0.000 claims description 2
- BIVIUZRBCAUNPW-JRQIVUDYSA-N Tyr-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BIVIUZRBCAUNPW-JRQIVUDYSA-N 0.000 claims description 2
- WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N 0.000 claims description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010057952 lysyl-phenylalanyl-lysine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010037335 tyrosyl-prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims description 2
- HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N Asn-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KHGPWGKPYHPOIK-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- AZOFEHCPMBRNFD-BZSNNMDCSA-N Lys-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 AZOFEHCPMBRNFD-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N Lys-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N)O JAWUQFCGNVEDRN-MEYUZBJRSA-N 0.000 claims 1
- PEVVXUGSAKEPEN-AVGNSLFASA-N Tyr-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PEVVXUGSAKEPEN-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 64
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 64
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 39
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 29
- 206010058820 Acantholysis Diseases 0.000 description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 22
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 16
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 15
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 15
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 101100044298 Drosophila melanogaster fand gene Proteins 0.000 description 13
- 101150064015 FAS gene Proteins 0.000 description 13
- 101100335198 Pneumocystis carinii fol1 gene Proteins 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000034725 extrinsic apoptotic signaling pathway Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 229940100513 Caspase 8 inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- WLDHEUZGFKACJH-UHFFFAOYSA-K amaranth Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C12=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C12 WLDHEUZGFKACJH-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 4
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 3
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 3
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 3
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 108010052621 fas Receptor Proteins 0.000 description 3
- 102000018823 fas Receptor Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 238000013042 tunel staining Methods 0.000 description 3
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 3
- YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=CC=C2C(OP(O)(=O)O)=CC=CC2=C1 YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 2
- 102000010579 Fas-Associated Death Domain Protein Human genes 0.000 description 2
- 108010077716 Fas-Associated Death Domain Protein Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N Gly-Asn-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- AZBIIKDSDLVJAK-VHWLVUOQSA-N Trp-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N AZBIIKDSDLVJAK-VHWLVUOQSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000005775 apoptotic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000029411 keratinocyte apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 2
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 2
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- MSILNNHVVMMTHZ-UWVGGRQHSA-N Arg-His-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CN=CN1 MSILNNHVVMMTHZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 102100023995 Beta-nerve growth factor Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N Dapsone Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- ZGXGVBYEJGVJMV-HJGDQZAQSA-N Glu-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O ZGXGVBYEJGVJMV-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101000983528 Homo sapiens Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010065395 Neuropep-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000036364 Normal newborn Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- VGTJSEYTVMAASM-RPTUDFQQSA-N Phe-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VGTJSEYTVMAASM-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- QXNSKJLSLYCTMT-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Asp Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O QXNSKJLSLYCTMT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- GXXTUIUYTWGPMV-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GXXTUIUYTWGPMV-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OBXVZEAMXFSGPU-FXQIFTODSA-N Ser-Asn-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N OBXVZEAMXFSGPU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QGAHMVHBORDHDC-YUMQZZPRSA-N Ser-His-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CN=CN1 QGAHMVHBORDHDC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BVLGVLWFIZFEAH-BPUTZDHNSA-N Ser-Pro-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O BVLGVLWFIZFEAH-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 description 1
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 208000024340 acute graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001078 anti-cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000008619 cell matrix interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000860 dapsone Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000001047 desmosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000526 effect on acantholysis Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000053535 human FASLG Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000000495 immunoinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091006086 inhibitor proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 108010027775 interleukin-1beta-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 description 1
- DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N minocycline Chemical compound C([C@H]1C2)C3=C(N(C)C)C=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229940126703 systemic medication Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 238000003108 two site enzyme immunoassay Methods 0.000 description 1
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Absorbent Articles And Supports Therefor (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
DESCRIÇÃO "Remédios para pênfigo contendo anticorpos anti-ligando de Fas" A presente invenção refere-se ao uso de antagonistas do ligando de Fas humano (também denominado CD95L ou ApolL e doravante abreviado como FasL), mais particularmente ao uso de anticorpos humanizados contra FasL para a prevenção e/ou tratamento de doenças da pele associadas com acantólise de queratinócitos, nomeadamente para a prevenção e/ou tratamento de pênfigo. 0 pênfigo é uma condição bolhosa e autoimune da pele caracterizada pela perda de adesão dos queratinócitos devido a autoanticorpos dirigidos contra proteínas desmossómicas (desmogleínas, dsg). 0 pênfigo tem uma distribuição mundial com uma incidência de aproximadamente 1-5 por 100 000 por ano e com uma predominância no sexo feminino. O pênfigo caracteriza-se pela perda de adesão dos queratinócitos suprabasais que se tornam arredondados num processo conhecido como acantólise. A patogénese do pênfigo está a sofrer uma revisão importante maioritariamente porque, além de anticorpos anti-desmogleína, um novo grupo de anticorpos de recetor anticolinérgico pode induzir acantólise (Kalish, 2000). Além disso, demonstrou-se que o impedimento estereoquímico não é o único responsável pela formação de vesículas por ligação antigénio-anticorpo (Kitajima, 2002) . Além disso, demonstrou-se que a formação de desmossomas não é inibida pela ligação dos autoanticorpos de pênfigo (PVIgG) a pênfigo, ao passo que as ligações desmossómicas se dissociam 24-36 horas após tratamento com PvIgG. Durante este período de tempo, ocorrem uma série de etapas de transdução de sinal desencadeadas por PVIgG.
Estas observações sugerem um papel para a apoptose em pênfigo. De facto, o pênfigo é uma doença devida à ausência de adesão celular (Payne AS et al., 1978) e pode ocorrer apoptose em associação com descolamento celular (Marconi et al., 2004) . Estes conceitos são completamente confirmados por deteção de apoptose em pele com lesões de pênfigo. Nomeadamente, as células acantólicas expressam os principais marcadores de apoptose (Wang X et al., 2004) . Mais interessante ainda, também se encontram núcleos com marcação TUNEL ligados ao teto da vesícula, o que sugere a presença de células apoptóticas em pele perilesional antes do descolamento. Além disso, detetam-se células apoptóticas que expressam Ig e caspase-8 ativada nos bordos da lesão, em áreas nas quais não é visível qualquer disrupção do contacto célula-célula (Wang X et al., 2004) . Estes dados demonstram inequivocamente que no pênfigo, a apoptose ocorre nos queratinócitos antes da acantólise. A apoptose desempenha um papel fundamental na regulação da homóstase celular e está envolvida em muitos processos patofisiológicos. A apoptose pode seguir-se tanto a descolamento entre células (Rezgui et al., 2000; Bergin et al., 2000) como a perda de interação célula-matriz (Giancotti e Ruoslahti, 1999) . O Fas (ou FasR) é um membro da superfamília de recetores TNF que, por ligação a ligando de Fas (FasL) , desencadeia apoptose em muitos sistemas celulares (Sharma et al., 2000) . A sinalização intracelular da apoptose induzida por Fas-FasL opera através do recrutamento de várias moléculas adaptadoras tais como FADD (domínio de morte associado a Fas) e FLICE (ICE do tipo FADD, caspase 8), que por sua vez é inibida por FLIP (proteína inibidora de FLICE) (Juo et al., 1998) . A interação Fas-FasL está envolvida nos mecanismos patológicos de várias condições imuno-inflamatórias e infeciosas, tais como SIDA (Bahr et al., 1997) e lúpus eritematoso sistémico (Kovacs et al., 1997) . As doenças cutâneas caracterizadas por uma implicação da via Fas-FasL incluem doença enxerto-contra-hospedeiro aguda, necrólise epidérmica tóxica e melanoma (Wehrli et al., 2000) . Além disso, foi relatada a observação de lesões do tipo acantolíticas em queratinócitos em cultura tratados tanto com PVIgG como com anti-FasR, enquanto PvIgG induz a agregação de FasR, FasL e caspase-8 na membrana celular várias horas antes da formação das lesões (Wang X et al., 2004) . Além disso, relatou-se que o inibidor do tipo caspase-1 bloqueou significativamente a formação de vesículas num modelo de pênfigo de ratinho (Li et al., 2006). Tomados conjuntamente, estes dados indicam que FasL e a via apoptótica extrínseca desempenham um papel crítico nos mecanismos subjacentes a acantólise. Qualquer que seja a natureza dos autoanticorpos de pênfigo, a exposição a PVIgG regula positivamente a expressão de vários genes pró-apoptóticos, incluindo FasL, muitas horas antes de acantólise.
Além disso, o IgG intravenoso (IVIgG) previne a regulação positiva de FasL induzida por PvIgG e apoptose em queratinócitos. 0 IVIgG também previne acantólise e apoptose in vivo (Arredondo J et al., 2005) .
Puviani et al. (J. Investigative Dermatology, vol. 20, η2 1, Jan. 2003, páginas 164-169) divulgam que a adição de anticorpos neutralizantes anti-FasL inibe parcialmente a apoptose de queratinócitos induzida por soros de pênfigo in vitro. Puviani et al. não proporcionam qualquer evidência de um efeito sobre a acantólise ou de eficácia in vivo dos referidos anticorpos.
Sem tratamento, a mortalidade do pênfigo vulgar é próxima dos 100%. A terapia sistémica precoce é necessária para controlar o pênfigo, mas os efeitos secundários da terapia sistémica são uma complicação importante. O tratamento inclui a administração de corticosteroides, medicamentos contendo ouro, o fármaco anti-inflamatório dapsona ou medicamentos que suprimem o sistema imunitário (tais como azatioprina, metotrexato, ciclosporina, ciclofosfamida ou micofenolato mofetilo). O tratamento mais comum para pênfigo é atualmente constituído por esteroides que necessitam ser administrados durante toda a vida e podem ter efeitos secundários graves. A maioria dos doentes de pênfigo morre devido a estes efeitos secundários. Alguns antibióticos são também eficazes, nomeadamente minociclina e doxiciclina. Ocasionalmente usa-se imunoglobulina intravenosa (IVIg). A plasmaferese é um processo pelo qual se remove do sangue o plasma contendo anticorpos e se substituem com fluidos intravenosos ou plasma doado. Pode usar-se plasmaferese além da medicação sistémica para reduzir a quantidade de anticorpos na corrente sanguínea. Várias novas moléculas estão também em desenvolvimento: micofenolato mofetilo, PI-0824, PRTX-100, anti-CD20 são fármacos imunossupressores que atuam nas células T e B. A taxa de mortalidade está ainda hoje em dia na gama entre 5 e 25%, sendo a infeção a causa de morte mais frequente e a terapia prolongada de imunossupressão (principalmente com corticosteroides) é um dos fatores mais significativos que ainda provoca uma taxa de mortalidade elevada. A imunoglobulina pode produzir alguma melhoria a curto prazo, mas não parece induzir remissão durável e o seu custo torna-a impraticável para utilização a longo prazo.
Existem também várias questões associadas ao uso de plasmaferese. Os doentes suprimidos com prednisona ou outros agentes imunossupressores e que recebem plasmaferese, apresentam um risco mais elevado de morte súbita por sépsis. Além disso, o tratamento é muito dispendioso e é necessário um período de hospitalização de duas semanas para administrar a terapia. Consequentemente, devido ao risco de morte súbita por sépsis e ao custo elevado, a plasmaferese é indicada apenas nos casos mais refratários quando o doente está claramente em risco de morrer devido à própria doença. É um objeto da presente invenção proporcionar um agente terapêutico para pênfigo. 0 desenvolvimento de um novo fármaco que bloqueie FasL permitirá prevenir completamente o descolamento celular e a formação da lesão na pele.
De um modo geral, a presente invenção refere-se ao tratamento de uma doença de pele associada com acantólise de queratinócitos por administração de um antagonista de FasL. Os antagonistas de FasL podem ser selecionados de anticorpos anti-FasL, nomeadamente anticorpos anti-FasL humanizados ou humanos, moléculas efectoras de ácido nucleico de expressão de Fas tais como moléculas antissentido ou moléculas capazes de interferência por ARN tais como moléculas de ARNsi, moléculas de recetor de Fas solúveis, muteínas antagonistas de FasL e compostos químicos de baixo peso molecular que inibem a interação Fas-FasL. Os antagonistas de FasL previnem a apoptose de queratinócitos e subsequente descolamento célula-célula (acantólise) . Assim, os antagonistas de FasL são particularmente adequados para a prevenção e/ou tratamento de pênfigo, e.g. para a prevenção e/ou tratamento de pênfigo mucocutâneo. A presente invenção refere-se a um medicamento contendo pelo menos um composto que inibe os efeitos biológicos de FasL. A expressão "composto que inibe os efeitos biológicos de FasL" aqui usada refere-se a todos os compostos que podem inibir completamente ou pelo menos inibir parcialmente ou que podem neutralizar, os efeitos biológicos de FasL. Por exemplo, o efeito inibidor ou neutralizante pode basear-se na supressão da ligação de FasL ao seu recetor natural e consequentemente nas transmissões de sinal assim causadas. Tal pode conseguir-se e.g. pela utilização de anticorpos que se ligam a FasL sozinho ou a recetores solúveis que mimetizam Fas ou a muteínas antagonistas de FasL, bloqueando assim a ligação de FasL aos recetores celulares. A interferência com a expressão de Fas ou FasL por ARNsi, bloqueará o sistema Fas/FasL. A terapia com antagonistas de FasL é uma monoterapia ou pode ser administrada em combinação com outros medicamentos adequados para o tratamento de pênfigo ou outras doenças da pele, particularmente como descrito anteriormente. Por exemplo, uma terapia de combinação de antagonistas de FasL e esteroides pode permitir uma redução drástica das doses de esteroides.
Numa concretização preferida da presente invenção, proporciona-se um agente terapêutico para pênfigo, compreendendo um anticorpo contra um ligando de Fas humano ou um seu fragmento ativo como um ingrediente ativo. 0 anticorpo é preferentemente um anticorpo anti-FasL quimérico, humanizado ou humano ou um fragmento ou derivado de ligação a antigénio, e.g. um anticorpo de cadeia simples recombinante. Caso pretendido, pode conjugar-se o anticorpo com moléculas efectoras, e.g. compostos citostáticos, citotóxicos e/ou radioativos.
Descrevem-se anticorpos humanizados preferidos adequados para o tratamento de doença da pele associada com acantólise de queratinócitos, em particular pênfigo de acordo com a presente invenção, em WO 1997/002290A1 ("Anticorpos anti-ligando de Fas e método de ensaio usando o mesmo anticorpo") ou em WO 1998/010070 Ai ("Imunoglobulina humanizada que reage especificamente com ligando de Fas ou seus fragmentos ativos e região que induz apoptose com origem em anticorpos humanizados contra ligando de Fas").
Descrevem-se anticorpos humanizados preferidos adicionais adequados para o tratamento de doença de pele associada com acantólise de queratinócitos, em particular pênfigo, de acordo com a presente invenção, em US 7 262 277 ("Anticorpos humanos anti-ligando de hFas antagonistas e seus fragmentos").
Os anticorpos humanos ou humanizados têm pelo menos três vantagens potenciais comparativamente aos de ratinho e em alguns casos, a anticorpos quiméricos para uso em terapia humana: 1) devido à parte efectora ser humana pode interagir melhor com as outras partes do sistema humano; 2) o sistema imunitário humano não deve reconhecer a região de esqueleto ou região C do anticorpo humanizado como sendo heteróloga e consequentemente a resposta de anticorpo contra tal anticorpo injetado deve ser menor que contra um anticorpo de ratinho totalmente heterólogo ou contra um anticorpo quimérico parcialmente heterólogo; 3) os anticorpos humanizados injetados terão presumivelmente uma semivida mais semelhante à de anticorpos humanos de ocorrência natural, permitindo a administração de doses menores e menos frequentes.
Os antagonistas de FasL preferidos adicionais são moléculas FasR solúveis compreendendo a parte solúvel extracelular do recetor de Fas ou moléculas antagonistas de FasL modificadas que têm uma atividade de antagonista competitiva ou não competitiva. Estas moléculas inibem interações FasL/FasR na medida em que FasL se liga ao análogo de recetor solúvel ou a molécula antagonista de FasL liga-se ao recetor natural e assim reduz ou elimina completamente a ligação de FasL ativo biologicamente ao recetor natural. Durante o tratamento com ARNsi, pode usar-se uma análise dos niveis de proteína ou de ARN de Fas e/ou FasL para determinar o tipo de tratamento e o decurso da terapia no tratamento de um indivíduo. Pode usar-se a monitorização dos níveis de proteína ou de ARN de Fas e/ou FasL para prever o resultado do tratamento e para determinar a eficácia de compostos e composições que modulam o nível e/ou atividade de determinadas proteínas Fas e/ou FasL associadas com uma característica, condição ou doença.
Num aspeto especialmente preferido, a presente invenção refere-se a um anticorpo selecionado entre (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o referido anticorpo monoclonal compreende pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região variável da cadeia leve, em que as sequências de aminoácidos da região determinante da complementaridade (CDR) da cadeia pesada são: (ai) CDR Hl: Asn Tyr Trp lie Gly (SEQ ID NO:1), (bi) CDR H2 : Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr
Asn Glu Lys Phe Lys Gly (SEQ ID NO:2),
(ci) CDR H3: Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr (SEQ ID NO:3) e as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia leve são (a2) CDR LI : Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly
Phe Thr Tyr Leu Gly (SEQ ID N0:4), (b2) CDR L2: Leu Vai Ser Asn Arg Phe Ser (SEQ ID NO:5),
(c2) CDR L3: Phe Gin Ser Asn Tyr Leu Pro Leu Thr (SEQ ID NO: 6) para uso na prevenção e/ou tratamento de pênfigo. É aqui também descrito um anticorpo ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo em FasL humano que o anticorpo (i) descrito acima, para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença de pele associada com acantólise de queratinócitos, nomeadamente de pênfigo. 0 presente fascículo divulga também o uso de (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação de anticorpo específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o anticorpo monoclonal é produzido pela célula de hibridoma com n2 de acesso FERM BP-5045 ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo dele derivado, ou (ii) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo de FasL humano que o anticorpo de (i) para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença de pele associada com acantólise de queratinócitos, nomeadamente de pênfigo.
Num aspeto adicional, a presente invenção refere-se a um anticorpo selecionado de entre (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio especifico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o referido anticorpo monoclonal compreende pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região variável da cadeia leve, em que as sequências de aminoácidos da região determinante da complementaridade (CDR) da cadeia pesada são: (ai) CDR Hl: Glu Tyr Pro Met His (SEQ ID NO:7) , (bi) CDR H2 : Met lie Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Ala Glu Glu Phe Lys Gly (SEQ ID N0:8), (Ci) CDR H3: Phe Tyr Trp Asp Tyr Phe Asp Tyr (SEQ ID NO:9) e as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia leve são (a2) CDR LI: Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn (SEQ ID NO:10), (b2) CDR L2: Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser (SEQ ID NO:11),
(c2) CDR L3: Gin Gin Gly Ser Thr Leu Pro Trp Thr (SEQ ID NO:12), para uso na prevenção e/ou tratamento de pênfigo. É aqui também descrito um anticorpo ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo em FasL humano que o anticorpo (i) descrito acima, para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença de pele associada com acantólise de queratinócitos, nomeadamente de pênfigo. 0 presente fascículo divulga ainda o uso de (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação de anticorpo específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o anticorpo monoclonal é produzido pela célula de hibridoma com o n2 de acesso FERM BP-5533, FERM BP-5534 e/ou FERM BP-5535 ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo dele derivado, ou (ii) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo de FasL humano que o anticorpo de (i) para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença de pele associada com acantólise de queratinócitos, nomeadamente de pênfigo. 0 presente fascículo divulga além disso o uso de anticorpos anti-FasL humanos, ou suas porções de ligação ao antigénio, compreendendo uma região variável da cadeia leve e/ou uma região variável da cadeia pesada tal como descrito em US 7 262 277.
Em particular, os anticorpos anti-FasL humanos adequados para o tratamento de doença de pele associada a acantólise de queratinócitos aqui divulgados compreendem uma região variável da cadeia leve compreendendo um polipéptido com a sequência apresentada em SEQ ID NO 2 de US 7 262 277 e compreendem adicionalmente uma região variável da cadeia pesada compreendendo um polipéptido com a sequência apresentada em SEQ ID NO 10 ou 18 de US 7 262 277.
Mais particularmente, o fascículo divulga o uso do anticorpo anti-hFas humano 3E1 e/ou 4G11 tal como descritos em US 7 262 277 para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de doença de pele associada a acantólise de queratinócitos, particularmente de pênfigo.
Neste aspeto, o presente fascículo divulga o uso de (i) um anticorpo monoclonal humano ou um seu fragmento de ligação ao antigénio específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o referido anticorpo monoclonal compreende pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região variável da cadeia leve, em que as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia pesada são: (ai) CDR Hl: Arg His Gly He Thr (SEQ ID NO: 13) ou (a2) CDR Hl: Ser His Gly lie Ser (SEQ ID NO: 14), (bi) CDR H2 : Trp Ile Asn Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr
Ala Gin Lys Vai Gin Gly (SEQ ID NO: 15) ou (b2) CDR H2: Trp Ile Asn Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr
Ala Gin Lys Leu Gin Gly (SEQ ID NO: 16), (ci) CDR H3: Glu Thr Met Vai Arg Gly Vai Pro Leu Asp Tyr (SEQ ID NO: 17) ou (c2) CDR H3: Glu Thr Met Vai Arg Gly Vai Pro Cys Asp Tyr (SEQ ID NO: 18) ou (di) uma sequência derivada por substituição de 1, 2 ou 3 aminoácidos de SEQ ID NO: 13, 14, 15, 16, 17 e/ou 18, e/ou as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia leve são (a3) CDR LI : Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Ser Tyr Leu Ala (SEQ ID NO: 19), (b3) CDR L2: Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr (SEQ ID NO: 20), (c3) CDR L3: Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr (SEQ ID NO: 21) ou (ch) uma sequência derivada por substituição de 1, 2 ou 3 aminoácidos de SEQ ID NO: 19, 20 e/ou 21 ou (ii) um anticorpo ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo em FasL humana do que um anticorpo (i) , para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença da pele associada a acantólise de queratinócitos, particularmente de pênfigo.
Finalmente, o presente fascículo divulga o uso de (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação de anticorpo específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o anticorpo monoclonal é produzido pela célula de hibridoma com o n2 de acesso ATCC PTA-4017 e/ou ATCC PTA-4018 ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo dele derivado, ou (ii) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio que reconhece o mesmo epitopo de FasL humana do que o anticorpo de (i) para o fabrico de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento de uma doença de pele associada a acantólise de queratinócitos, nomeadamente de pênfigo. O medicamento da presente invenção pode ser proporcionado como uma composição farmacêutica conjuntamente com um transportador farmaceuticamente aceitável. De preferência, a composição farmacêutica é administrada por injeção ou infusão, e.g. intravenosamente, intra-arterialmente, subcutaneamente, intraperitonealmente ou por outros meios adequados. A composição pode ser administrada local ou sistemicamente. De preferência, a composição é administrada sistemicamente.
As composições farmacêuticas adequadas para uso na invenção compreendem o agente ativo numa quantidade eficaz para atingir o objetivo pretendido. Uma quantidade eficaz de um medicamento da presente invenção pode estar na gama de 0,1 pg a 100 mg, até uma dose total de cerca de 1 g dependendo da via de administração. As composições farmacêuticas podem ser administradas diariamente, e.g. uma ou várias vezes, ou a intervalos de dois a quatro dias, uma vez por semana ou uma vez de duas em duas semanas. 0 medicamento pode ser administrado num ciclo de tratamento único, consistindo de uma ou várias administrações de medicamento, ou em vários ciclos de tratamento, cada um dos quais consistindo de uma ou várias administrações de medicamento. Cada ciclo de tratamento pode ter uma duração de um dia até várias semanas, meses ou mesmo anos.
Assim, de acordo com a presente invenção, o medicamento pode também ser usado numa terapia de combinação com pelo menos uma terapia adicional eficaz contra uma doença de pele associada a acantólise de queratinócitos e em particular contra pênfigo. 0 medicamento será usado quer sozinho, quer em combinação com outros fármacos imunossupressores, em particular com esteroides, de modo a reduzir a sua dose e/ou para minimizar os seus efeitos secundários crónicos. Quando usados em combinação, o medicamento será administrado de preferência numa base mensal. Quando usado sozinho, o medicamento será administrado de preferência continuamente num intervalo de tempo dependente do caso individual.
Adicionalmente, a presente invenção deve ser explicada mais detalhadamente pelos seguintes exemplos.
Exemplos
Avaliámos inicialmente a presença de apoptose em epiderme de pele perilesional em secções congeladas de doentes de pênfigo não tratados por coloração TUNEL. Os espécimes fluorescentes foram analisados por microscopia confocal de varrimento laser. Nas camadas suprabasais da epiderme perilesional a maioria dos queratinócitos estão apoptóticos, comparativamente a pele normal (figura 1).
De modo a confirmar a apoptose em lesões de pênfigo, usamos biopsias fixadas com formalina e embebidas em parafina e detetámos a forma ativa de caspase-3. 0 protocolo de coloração foi efetuado por UltraVision LP Detection System AP Polymer e Fast Red Chromogen (Lab Vision Corporation, CA, USA) de acordo com as instruções do fabricante. A visualização foi obtida com comprimidos de Fast Red em substrato de fosfato de naftol. Em amostras de pênfigo verificámos que o fragmento de caspase-3 se encontra localizado tanto no topo como na base da vesícula, com algumas células positivas em epiderme perilesional (figura 2). Este resultado parece indicar que a morte de células de queratinócitos ocorre antes do descolamento de queratinócitos levando a acantólise.
Dado que os queratinócitos apoptóticos são expressos abundantemente em pênfigo, quisemos explorar se os soros de pênfigo são capazes de induzir apoptose em queratinócitos humanos normais. Para este objetivo, plaqueiam-se queratinócitos em lâminas de câmara e cultivam-se em meio isento de soro (KGM) até pré-confluência. Cultivaram-se então as células em meio basal de queratinócitos e trataram-se durante 48 h com a adição de soro a 25% de doentes não tratados ou de doentes tratados com corticosteroides sistémicos. Usaram-se soros de indivíduos saudáveis como controlos. Avaliou-se a apoptose por coloração TUNEL in situ. Avaliaram-se aproximadamente 100 células, em campos selecionados aleatoriamente, e contou-se a percentagem de células positivas para TUNEL. Os soros de doentes de pênfigo, mas não de indivíduos saudáveis ou de doentes em tratamento com esteroides, induziram apoptose em queratinócitos humanos (figuras 3A-B).
Dado que o sistema Fas/FasL está implicado em muitos processos apoptóticos também ao nível da pele (Wehrli et al., 2000), medimos os níveis de FasL em soros de doentes de pênfigo com um imunoensaio enzimático (ELISA) de dois locais. Determinou-se a concentração de soro pela absorvância a 450 nm contra proteína FasL humana recombinante padrão. Os níveis de FasL foram muito elevados em soros de doentes não tratados e abaixo do limite de deteção em soros de doentes tratados com corticosteroides ou em soros de indivíduos saudáveis. Usaram-se soros de doentes de HBV como controlo positivo (figura 4A). Num doente, os níveis de FasL diminuíram progressivamente com terapia de esteroides sistémica (figura 4B).
Dado que FasL está presente em elevadas quantidades em soros de pênfigo, avaliamos a expressão do seu recetor congénere FasR. Para este fim usamos biopsias fixadas com formalina e embebidas em parafina. 0 protocolo de coloração foi efetuado por UltraVision LP Detection System AP Polymer e Fast Red Chromogen (Lab Vision Corporation, CA, USA) de acordo com as instruções do fabricante. A visualização foi obtida com comprimidos de Fast Red em substrato de fosfato de naftol. Enquanto FasR é expresso apenas em queratinócitos basais na pele normal, em lesões ativas de pênfigo FasR é detetado tanto em células basais, como nas células suprabasais. Ainda mais curiosamente, em pênfigo mucocutâneo (PMC) FasR parece ser expresso ao longo das camadas epidérmicas e mesmo antes de formação de vesícula (figura 5).
FasL é um dos principais desencadeadores da via apoptótica extrínseca ativada por caspase-8. Assim, quisemos avaliar se esta via desempenha um papel na apoptose em pênfigo. Para este fim, pré-trataram-se soros de doentes com anticorpo neutralizantes anti-FasL ou inibidor de caspase-8 e adicionaram-se a culturas de queratinócitos. Cultivaram-se os queratinócitos em KGM e trataram-se com soros de pênfigo ou com soros de doentes não tratados. Os soros foram pré-tratados com anticorpo neutralizante anti-FasL (2,5 mg por ml durante 30 min) ou inibidor de caspase-8 Z-IETD-FMK (100 μΜ durante 30 min). Avaliou-se a apoptose por coloração com TUNEL. A adição de anticorpo neutralizante anti-FasL ou de inibidor de caspase-8 preveniu parcialmente a apoptose de queratinócitos induzida por soros de pênfigo (figura 6).
Além disso, trataram-se queratinócitos tal como na figura 6 e proporcionaram-se com anticorpo anti-FasL ou imunoglobulinas irrelevantes. As células foram seguidamente homogeneizadas em tampão RIPA para análise por transferência "Western". Incubaram-se membranas com anticorpos anti-caspase-8 humana ou anti-b-actina. Quantificou-se a intensidade relativa das bandas nos autorradiogramas por densitometria de varrimento laser. Os resultados demonstraram que a caspase-8 foi ativada acentuadamente em queratinócitos tratados com soros de pênfigo, comparativamente a células não tratadas, enquanto a clivagem de caspase foi inibida parcialmente por pré-tratamento com anticorpo anti-FasL (figura 7).
Tomados conjuntamente, estes dados sugerem que os soros de pênfigo induzem apoptose de queratinócitos através da via apoptótica extrínseca desencadeada pelo sistema Fas/FasL.
Estudos recentes demonstraram que componentes do complexo de adesão caderina-catenina em junções de aderência epiteliais são o alvo de caspases durante apoptose (Weiske et al., 2001) .
De modo a avaliar se a via apoptótica induzida por Fas/FasL também é responsável por separação desmossómica, tratamos queratinócitos confluentes durante 72 h, cultivados em KGM na presença de CaCÍ2 1,8 mM, com soros de pênfigo com ou sem terapia. Analisaram-se extratos de proteína da cultura por transferência "Western" usando anticorpos anti-Dsgl e anti-Dsg3. Usou-se -actina como controlo interno. Verificámos que os soros de pênfigo podem clivar Dsgl e Dsg3. Em particular, os soros de doentes não tratados, mas não de doentes em terapia com esteroide, clivam notoriamente Dsgl e Dsg3. (figura 8).
Mais importante ainda, o tratamento de queratinócitos com quantidades crescentes de FasL (0,1, 10, 100 ng/ml) durante 72 h, clivou dsg de uma forma dependente da dose. Os extratos de proteína da cultura foram analisados por transferência "Western" usando anticorpos anti-Dsgl e anti-Dsg3. Usou-se actina como controlo interno. Estas doses são consistentes com as detetadas em soros de pênfigo (figura 9).
Dado que FasL exerce um papel importante na patogénese de pênfigo, ensaiámos um anticorpo anti-FasL (NOK2, anticorpo produzido pela linha celular de hibridoma NOK2, n2 de acesso FERM BP-5045). Trataram-se queratinócitos confluentes, cultivados em KGM com CaCl2 1,8 mM, durante 72 h com: 1. apenas KGM; 2. Ab anti-FasL (NOK2, 15 yg/ml); 3. FasL (50 ng/ml); 4.
FasL + Ab anti-FasL. Apresentamos evidência que Ab anti-FasL (NOK2) previne a clivagem de dsg induzida por FasL. Também demonstramos que Ab anti-FasL (NOK2) inibe apoptose induzida por caspase-8 (figura 10 A). A figura 10B mostra que Ab anti-FasL (NOK2) previne descolamento célula-a-célula induzido por FasL, i.e. acantólise.
De modo a confirmar adicionalmente o papel central de FasL, usamos outros anticorpos anti-FasL (F918-7-3, anticorpo produzido pela linha celular de hibridoma com o número de acesso FERM BP-5533; F918-7-4, anticorpo produzido pela linha celular de hibridoma com o número de acesso FERM BP-5534; F919-9-18, anticorpo produzido pela linha celular de hibridoma com o número de acesso FERM BP-5535). Trataram-se queratinócitos confluentes, cultivados em KGM com CaCl2 1,8 mM, durante 72 h com: apenas KGM; FasL recombinante (50 ng/ml); meio de hibridoma diluído a 1:1 em KGM; FasL + meio de hibridoma a diferentes diluições em KGM. Apresentámos evidências que os anticorpos anti-FasL previnem clivagem de dsg3 induzida por FasL de uma forma dependente da dose (figura 11A e figura 11B), inibem ativação de apoptose induzida por caspase-8 (figura 11 A) . A figura 11C mostra que o Ab contra FasL contido no meio da linha celular de hibridoma FERM BP-5535 previne o descolamento célula-a-célula induzido por FasL, i.e. acantólise.
Para investigar se a via apoptótica extrínseca é responsável pela clivagem de dsg, pré-tratamos queratinócitos confluentes com inibidor de caspase-8 Z-IETD-FMK (100 μΜ durante 30 min) ou com Ab anti-FasL (NOK2, 15 pg/ml). Seguidamente incubaram-se as células durante 72 h com soros saudáveis ou de pênfigo não tratado. Analisaram-se extratos de proteína da cultura por transferência "Western" usando anticorpos anti-Dsg3 e Ab anti-caspase-8. Usou-se vinculina como controlo interno. (figura 12A). A figura 12B mostra que o descolamento das células (i.e. acantólise) é prevenido por Ab anti-FasL ou inibidor de caspase-8. Estes resultados indicam que a inibição de FasL ou da via apoptótica ativada por caspase-8 previne tanto a ativação de caspase-8, como a clivagem de dsg, bloqueando assim acantólise.
Em conclusão, demonstrámos que FasL exerce uma atividade dupla, ativando a via apoptótica extrínseca mediada por caspase-8 e clivagem de Dsg. De acordo com o nosso trabalho, Wang e colaboradores (Wang et al., 2004) sugeriram que a apoptose poderia ser a causa do fenómeno de acantólise. Eles demonstraram que PV-IgG e um anticorpo contra recetor de Fas (anti-FasR) induzem lesões in vitro de uma forma semelhante, causando: (1) excreção de FasL solúvel; (2) quantidades celulares elevadas de proteínas FasR, FasL (solúvel e membranar) , Bax e p53; (3) redução dos níveis de Bcl-2 celular; (4) enriquecimento em caspase 8 e ativação de caspases 1 e 3; (5) coagregação de FasL e FasR com caspase 8 em complexo membranar de sinalização indutor de morte (DISC) . Assim, a via de sinalização de morte mediada por Fas parece estar envolvida na formação de lesão.
Um modelo animal bem estabelecido tem sido desde há muito tempo largamente usado para estudar pênfigo. A transferência passiva de PVIgG para ratinhos neonatais induz descolamento celular e a formação das bolhas. Este modelo tem sido usado para avaliar o envolvimento de apoptose e FasL na patogénese de pênfigo. Injetámos subcutaneamente PVIgG (5 mg/g/peso corporal) purificado de soros de doentes em ratinhos C57BL/6N Cri recém-nascidos. Serão usados como controlos ratinhos recém-nascidos normais tratados com IgG purificada de soros de indivíduos saudáveis (NIgG). Os animais foram sacrificados 20 horas após injeção. A coloração com hematoxilina e eosina mostra que se desenvolvem vesículas apenas em ratinhos tratados com PVIgG, mas não em ratinhos tratados com IgG humana normal (figura 13A). Detetou-se apoptose quer por TUNEL, quer por ativação de caspase-3 apenas em ratinhos tratados com PVIgG (figura 13B) .
De modo a avaliar o papel de FasL in vivo, trataram-se ratinhos com PVIgG ou PVIgG mais anticorpo anti-FasL (clone MFL3, específico para ratinho). Administrou-se anti-FasL (40 yg/ratinho) 3 h após injeção de PVIgG e preveniu a formação de vesículas em ratinhos, tal como apresentado pela coloração H e E. Além disso, o comprimento das gretas em ratinhos tratados com anti-FasL foi reduzido acentuadamente (figura 14).
Em conclusão, demonstramos que FasL exerce atividade dupla, ativando a via apoptótica extrínseca mediada por caspase-8 e clivagem de Dsg. Ainda com maior importância, o bloqueamento de FasL protege de acantólise in vitro e in vivo.
Referências
Aoudjit F e Vuori K: Matrix attachment regulates FAS-induced apoptosis in endothelial cells: a role for c-FLIP e implications for anoikis. J Cell Biol 152: 633-643, 2001
Arredondo J et al. Am J Pathol 167:1531-1544, 2005
Bahr GM, Capron A, Dewulf J, Nagata S, Tanaka M, Bourez JM, Mouton Y. Elevated serum level of Fas ligand correlates with the asymptomatic stage of human immunodeficiency virus infection. Blood 90:896-898, 1997
Bergin E, Levine JS, Koh JS, Lieberthal W: Mouse proximal tubular cell-cell adhesion inhibits apoptosis by a cadherin-dependent mechanism. Am J Physiol Renal Physiol 278:F758-F768, 2000
Du, Z., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996 22 6, 595-600
Frisch SM: Evidence for a function of death-receptor- related, death-domain-containing proteins in anoikis. Current Biol 9:1047-1049, 1999
Frisch SM, Francis H: Disruption of epithelial cell-matrix interactions induces apoptosis. J Cell Biol 124:619-626, 1994
Frisch SM, Screaton RA: Anoikis mechanisms. Curr Opin Cell Biol 13:555-562, 2001
Giancotti FG, Ruoslahti E: Integrin signaling. Science 285: 1028-1032, 1999
Gniadecki R, Jemec GBE, Thomsen BM, Hansen M: Relationship between keratinocyte adhesion and death: anoikis in acantholytic diseases. Arch Dermatol Res 290:528-532, 1998
Grossman J, Walther K, Artinger M, Kiessling S, Scholmerich J: Apoptotic signaling during initiation of detachment-induced apoptosis ("anoikis") of primary human intestinal epithelial cells. Cell Growth & Diff 12:147-155, 2001
Jolles S, Hughes J, Whittaker S: Dermatological uses of high-dose intravenous immunoglobulin. Arch Dermatol 134:80-86, 1998
Juo P, Kuo CJ, Yuan J, Blenis J: Essential requirement for caspase-8/FLICE in the initiation of the Fas-induced apoptotic cascade. Curr Biol 8:1001-1008, 1998
Kalish RS: Pemphigus vulgaris: the other half of the story. J Clin Invest 106: 1433-1435, 2000
Kitajima Y: Mechanisms of desmosome assembly and disassembly. Clin Exp Dermatol. 27:684-90, 2002
Kovacs B, Liossis SN, Dennis GJ, Tsokos GC: Increased expression of functional Fas ligand in activated T-cells from patients with systemic lupus erythematosus. Autoimmunity 25:213-221, 1997
Lee, J., et al. Endocrinology, 1997, 138, 2081-2088
Li N, Zhao M, Liu Z, Diaz LA: Pathogenic role of apoptosis in experimental pemphigus. J Invest Dermatol 126: resumo 173, 2006
Marconi A, Atzei P, Panza C, Fila C, Tiberio R, Truzzi F, Wachter T, Leverkus M, Pincelli C: FLICE/caspase-8 activation triggers anoikis induced by i integrin blockade in human keratinocytes. J Cell Sci 117: 5815-5823, 2004
Marconi A, Vaschieri C, Zanoli S, Giannetti A, Pincelli C Nerve growth factor protects human keratinocytes from ultraviolet-B-induced apoptosis. J Invest Dermatol 113:920-927, 1999
Nishimura S, Adachi M, Ishida T, Matsunaga T, Uchida H, Hamada H, Imai K: Adenovirus-mediated transfection of caspase-8 augments anoikis and inhibits peritoneal dissemination of human gastric carcinoma cells. Cancer Res 61:7009-7014, 2001 O' Connell, J.,et al. J. Exp. Med., 184, 1075-1082, 1996
Payne AS Curr Opin Cell Biol 16: 536-543, 2004
Pincelli C, Haake AR, Benassi L, Grassilli E, Magnoni C, Ottani D, Polakowska R, Franceschi C, Giannetti A Autocrine nerve growth factor protects human keratinocytes from apoptosis through its high affinity receptor (trk): a role for bcl-2. J Invest Dermatol 109: 757-764, 1997
Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989), 10029, e Verhoeyan et al., Science 239 (1988), 1534
Reed JC: Mechanisms of apoptosis. Am J Pathol 157:1415-1430
Rezgui SS, Honoré S, Rognoni J-B, Martin P-M, Penei C: Up-regulation of 21 integrin cell-surface expression protects A431 cells from epidermal growth factor-induced apoptosis. Int J Cancer 87: 360-367, 2000
Rytomaa M, Martins LM, Downward J: Involvement of FADD and caspase-8 signalling in detachment-induced apoptosis. Current Biol 9:1043-1046, 1999
Sharma K, Wang RX, Zhang LY, Yin DL, Luo XY, Solomon JC, Jiang RF, Markos K, Davidson W, Scott DW, Shi YF: Death the Fas way: regulation and pathophysiology of Fas and its ligand.
Pharmacol Ther. 88:333-347, 2000
Tiberio R, Marconi A, Fila C, Fumelli C, Pignatti M, Krajewski S, Giannetti A, Reed JC, Pincelli C: Keratinocytes enriched for stem cells are protected from anoikis via an integrin signaling pathway, in a Bcl-2 dependent manner. FEES Letters 26318:1-6, 2002
Turley, J. M., et al. Cancer Res., 1997, 57, 881-890
Viard I, Wehrli P, Bullani R, Schneider P, Holler N, Salomon D, Hunzinker T, Saurat J-H, Tschopp J, French L: Inhibition of toxic epidermal necrolysis by blockade of Fas with human intravenous immunoglobulin. Science 282:490-493, 1998
Wang X. et al.: Possible apoptotic mechanism in epidermal cell acantholisis induced by pemphigus vulgaris autoimmunoglobulins Apoptosis 2004; 9: 131-143
Wehrli P, Viard I, Bullani R, Tschopp J, French LE. Death receptors in cutaneous biology and disease. J Invest Dermatol 115:141-148, 2000
Weiske J, Schoneberg T, Schroder W, Hatzfeld M, Tauber R, Huber 0: The fate of desmosomal proteins in apoptotic cells. J Biol Chem 276:41175-41181, 2001
Yang, Y., et al., J. Exp. Med., 1995, 181, 1673-1682
Yu, W. et al. Cancer Res., 1999, 59, 953-961
Lisboa, 2015-06-22
Claims (5)
- REIVINDICAÇÕES 1. Anticorpo selecionado de: (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio especifico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o referido anticorpo monoclonal compreende pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região variável da cadeia leve, em que as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia pesada são: (ai) CDR Hl: Asn Tyr Trp lie Gly (SEQ ID NO:1), (bi) CDR H2 : Tyr Leu Tyr Pro Gly Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly (SEQ ID NO:2), (Ci) CDR H3: Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr (SEQ ID NO:3) e as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia leve são (a2) CDR LI : Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Gly (SEQ ID N0:4), (b2) CDR L2: Leu Vai Ser Asn Arg Phe Ser (SEQ ID NO:5), (c2) CDR L3: Phe Gin Ser Asn Tyr Leu Pro Leu Thr (SEQ ID NO: 6) para uso na prevenção e/ou tratamento de pênfigo.
- 2. Anticorpo selecionado de (i) um anticorpo monoclonal ou um seu fragmento de ligação ao antigénio específico para proteína ligando de Fas (FasL) humana, em que o referido anticorpo monoclonal compreende pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região variável da cadeia leve, em que as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia pesada são: (ai) CDR HI: Glu Tyr Pro Met His (SEQ ID N0:7), (bi) CDR H2: Met lie Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Ala Glu Glu Phe Lys Gly (SEQ ID NO:8), (ci) CDR H3: Phe Tyr Trp Asp Tyr Phe Asp Tyr (SEQ ID NO:9) e as sequências de aminoácidos das regiões determinantes da complementaridade (CDR) da cadeia leve são (a2) CDR LI: Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr Leu Asn (SEQ ID NO:10), (b2) CDR L2: Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser (SEQ ID NO:11), (c2) CDR L3: Gin Gin Gly Ser Thr Leu Pro Trp Thr (SEQ ID NO:12) para uso na prevenção e/ou tratamento de pênfigo.
- 3. Anticorpo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que o anticorpo ou um seu fragmento de ligação ao antigénio é selecionado de entre um anticorpo parcial ou completamente humanizado, um anticorpo em cadeia simples parcial ou completamente humanizado ou um seu fragmento.
- 4. Anticorpo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores numa terapia de combinação com pelo menos uma terapia adicional eficaz contra pênfigo.
- 5. Anticorpo para uso de acordo com a reivindicação 4 em combinação com pelo menos um fármaco imunossupressor adicional, em particular com pelo menos um esteroide adicional. Lisboa, 2015-06-22
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1314707P | 2007-12-12 | 2007-12-12 | |
| US5180108P | 2008-05-09 | 2008-05-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT2231708E true PT2231708E (pt) | 2015-07-30 |
Family
ID=40565064
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT88597927T PT2231708E (pt) | 2007-12-12 | 2008-12-12 | Remédios para pênfigo contendo anticorpos anti-ligando de faz |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20110038867A1 (pt) |
| EP (1) | EP2231708B1 (pt) |
| JP (1) | JP2011506371A (pt) |
| KR (1) | KR20100130584A (pt) |
| CN (1) | CN101918449A (pt) |
| AU (1) | AU2008334912B8 (pt) |
| BR (1) | BRPI0820877A2 (pt) |
| CA (1) | CA2708790A1 (pt) |
| DK (1) | DK2231708T3 (pt) |
| ES (1) | ES2538489T3 (pt) |
| HR (2) | HRP20150457T1 (pt) |
| HU (1) | HUE025525T2 (pt) |
| IL (1) | IL206280A0 (pt) |
| MX (1) | MX2010006450A (pt) |
| NZ (2) | NZ586148A (pt) |
| PL (1) | PL2231708T3 (pt) |
| PT (1) | PT2231708E (pt) |
| RU (1) | RU2558260C2 (pt) |
| SI (1) | SI2231708T1 (pt) |
| WO (1) | WO2009074339A1 (pt) |
| ZA (1) | ZA201004271B (pt) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2534799T3 (es) * | 2008-12-12 | 2015-04-29 | Pincell Srl | Remedios para pénfigo que contienen anticuerpos contra el ligando Fas |
| CA2824151A1 (en) * | 2011-01-10 | 2012-07-19 | Opko Pharmaceuticals, Llc | Antigen surrogates in autoimmune disease |
| KR102428492B1 (ko) | 2013-08-30 | 2022-08-03 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 엽산 수용체 1의 검출을 위한 항체 및 분석 |
| CN104645303B (zh) * | 2015-03-23 | 2017-12-08 | 重庆妙坤生物科技有限责任公司 | 一种治疗类天疱疮的中药组合物 |
| JP6880006B2 (ja) | 2015-09-17 | 2021-06-02 | イミュノジェン， インコーポレイテッド | 抗ｆｏｌｒ１免疫複合体を含む治療組み合わせ |
| MA43814A (fr) * | 2016-03-08 | 2018-11-28 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-gitr, méthodes et utilisations |
| EA037973B1 (ru) * | 2016-10-12 | 2021-06-18 | Янссен Байотек, Инк. | Антитела к gitr, способы и применение |
| US20250002596A1 (en) * | 2021-12-01 | 2025-01-02 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Neutralizing anti-cd95l monoclonal antibodies |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0872488B1 (en) * | 1995-03-20 | 2006-05-24 | Ko Okumura | MONOCLONAL ANTIBODY REACTING SPECIFICALLY WITH Fas LIGAND AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME |
| AU724856B2 (en) * | 1995-06-30 | 2000-10-05 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Anti-Fas ligand antibody and assay method using the anti-Fas ligand antibody |
| US6114507A (en) * | 1995-06-30 | 2000-09-05 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Anti-Fas ligand antibody and assay method using the anti-Fas ligand antibody |
| EP0957166A4 (en) * | 1996-09-02 | 2004-12-15 | Ko Okumura | HUMANIZED IMMUNOGLOBULIN SPECIFICALLY REACTING WITH A LIGAND Fas OR ONE OF ITS ACTIVE FRAGMENTS AND REGION FOR INDUCING APOPTOSIS BORN IN A LIGAND Fas |
| CA2478386A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-10-02 | Eli Lilly And Company | Antagonistic anti-hfas ligand human antibodies and fragments thereof |
| FR2933264B1 (fr) * | 2008-06-25 | 2012-10-26 | Actimagine | Procede d'authentification d'un utilisateur d'un service sur terminal mobile. |
-
2008
- 2008-12-12 PT PT88597927T patent/PT2231708E/pt unknown
- 2008-12-12 PL PL08859792T patent/PL2231708T3/pl unknown
- 2008-12-12 NZ NZ586148A patent/NZ586148A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-12-12 CN CN2008801241807A patent/CN101918449A/zh active Pending
- 2008-12-12 EP EP08859792.7A patent/EP2231708B1/en active Active
- 2008-12-12 WO PCT/EP2008/010597 patent/WO2009074339A1/en active Application Filing
- 2008-12-12 ES ES08859792.7T patent/ES2538489T3/es active Active
- 2008-12-12 RU RU2010128556/10A patent/RU2558260C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-12-12 DK DK08859792.7T patent/DK2231708T3/en active
- 2008-12-12 BR BRPI0820877A patent/BRPI0820877A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-12-12 US US12/747,765 patent/US20110038867A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-12 MX MX2010006450A patent/MX2010006450A/es active IP Right Grant
- 2008-12-12 JP JP2010537326A patent/JP2011506371A/ja active Pending
- 2008-12-12 NZ NZ602964A patent/NZ602964A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-12-12 KR KR1020107015082A patent/KR20100130584A/ko not_active Ceased
- 2008-12-12 CA CA2708790A patent/CA2708790A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-12 SI SI200831424T patent/SI2231708T1/sl unknown
- 2008-12-12 AU AU2008334912A patent/AU2008334912B8/en not_active Ceased
- 2008-12-12 HR HRP20150457TT patent/HRP20150457T1/hr unknown
-
2009
- 2009-12-14 HU HUE09801201A patent/HUE025525T2/en unknown
- 2009-12-14 HR HRP20150409TT patent/HRP20150409T1/hr unknown
-
2010
- 2010-06-10 IL IL206280A patent/IL206280A0/en unknown
- 2010-06-17 ZA ZA2010/04271A patent/ZA201004271B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2008334912A1 (en) | 2009-06-18 |
| CN101918449A (zh) | 2010-12-15 |
| AU2008334912B2 (en) | 2013-09-26 |
| JP2011506371A (ja) | 2011-03-03 |
| WO2009074339A1 (en) | 2009-06-18 |
| US20110038867A1 (en) | 2011-02-17 |
| MX2010006450A (es) | 2010-12-15 |
| ZA201004271B (en) | 2011-03-30 |
| SI2231708T1 (sl) | 2015-06-30 |
| CA2708790A1 (en) | 2009-06-18 |
| PL2231708T3 (pl) | 2015-09-30 |
| EP2231708A1 (en) | 2010-09-29 |
| HRP20150457T1 (hr) | 2015-06-05 |
| EP2231708B1 (en) | 2015-04-08 |
| RU2558260C2 (ru) | 2015-07-27 |
| BRPI0820877A2 (pt) | 2017-06-06 |
| NZ602964A (en) | 2013-06-28 |
| ES2538489T3 (es) | 2015-06-22 |
| NZ586148A (en) | 2012-11-30 |
| AU2008334912B8 (en) | 2013-10-24 |
| HRP20150409T1 (hr) | 2015-05-22 |
| DK2231708T3 (en) | 2015-07-13 |
| RU2010128556A (ru) | 2012-01-20 |
| KR20100130584A (ko) | 2010-12-13 |
| IL206280A0 (en) | 2010-12-30 |
| HUE025525T2 (en) | 2016-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PT2231708E (pt) | Remédios para pênfigo contendo anticorpos anti-ligando de faz | |
| EP2376536B1 (en) | Remedies for pemphigus containing anti fas ligand antibodies | |
| US8197811B2 (en) | Methods of use of sialoadhesin factor-2 antibodies | |
| US9365652B2 (en) | Use of IL-20 antagonists for treating liver diseases | |
| CA2199940C (en) | Anti-receptor and growth blocking agents to the vitamin b12/transcobalamin ii receptor and binding sites | |
| HK1161884B (en) | Remedies for pemphigus containing anti fas ligand antibodies | |
| HK1151049A (en) | Remedies for pemphigus containing anti fas ligand antobodies |