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JPH11508919A - Arylacrylic acid derivatives useful as protein tyrosine phosphatase inhibitors - Google Patents

Arylacrylic acid derivatives useful as protein tyrosine phosphatase inhibitors

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Publication number
JPH11508919A
JPH11508919A JP9511473A JP51147397A JPH11508919A JP H11508919 A JPH11508919 A JP H11508919A JP 9511473 A JP9511473 A JP 9511473A JP 51147397 A JP51147397 A JP 51147397A JP H11508919 A JPH11508919 A JP H11508919A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
alkyl
group
formula
compound
tyrosine phosphatase
Prior art date
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Pending
Application number
JP9511473A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
ムジヤリ，アドナン・エム・エム
カオ，シヤオドン
モラン，エドムンド・ジエイ
Original Assignee
オントジエン・コーポレイシヨン
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/543,630 external-priority patent/US5770620A/en
Application filed by オントジエン・コーポレイシヨン filed Critical オントジエン・コーポレイシヨン
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、アリールアクリル酸構造を有する新規タンパクチロシンホスファターゼ変調化合物、該化合物を含む組成物、およびその製法および使用方法を提供する。   (57) [Summary] The present invention provides a novel protein tyrosine phosphatase modulating compound having an arylacrylic acid structure, a composition containing the compound, and a method for producing and using the same.

Description

【発明の詳細な説明】蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤として有用なアリールアクリル酸誘導体 発明の分野 本発明は、新規蛋白質チロシンホスファターゼ変調化合物、該化合物を含む組 成物、およびそれを製造、使用する方法を提供する。発明の背景 蛋白質の可逆的リン酸化および脱リン酸化は生体における酵素活性の変調のた めの普遍的な生物学的メカニズムを含む。Ｔｏｎｋｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ ｍ．，２６３（１４）：６７２２−３０（１９８８）。かかる可逆的リン酸化は 、一般に、特定の部位において蛋白質をリン酸化するための蛋白質キナーゼ（Ｐ Ｋ）、およびホスフェート基を除去するための蛋白質ホスファターゼ（ＰＰ）を 必要とすると考えられる。一般に、Ｈｕｎｔｅｒ，Ｃｅｌｌ，８０：２２５−２ ３６（１９９５）参照。最近、ヒトは２０００もの多くの通常のＰＫ遺伝子、お よび１０００もの多くのＰＰ遺伝子を有すると見積もられている。同上。 ＰＫ／ＰＰの１つの主要なクラスであるセリン／チロシンキナーゼ／ホスファ ターゼは、該メカニズムの調整で非常に重要な役割を演ずることが示されている 。Ｃｏｈｅｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１７：４０８−４１ ３（１９９２）；Ｓｈｅｎｏｌｉｋａｒ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ． １０：５５−８６（１９９４）；Ｂｏｌｌｅｎら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃ ｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７：２２７−８１（１９９２）参照。それらの 名称が暗示するごとく、蛋白質セリン／スレオニンキナーゼおよびホスファター ゼは基質蛋白質のセリンまたはスレオニンをリン酸化し脱リン酸化する。蛋白質 セリン／スレオニンホスファターゼおよびキナーゼの阻害は既に記載されている 。例えば、ＭａｃＫｉｎｔｏｓｈおよびＭａｃＫｉｎｔｏｓｈ，ＴＩＢＳ，１９ ：４４４−４４８（１９９４）参照。 蛋白質チロシンキナーゼ／ホスファターゼは、正常および新生物形成細胞成長 および増殖の制御に関係づけられてきた重要なＰＫ／ＰＰ酵素の第２の異なるフ ァミリーをなす。Ｆｉｓｈｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：４０１−４０６（ １９９１）。蛋白質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）遺伝子は進化的期限は古く、高 度の種間保存を有する。ＨｕｎｔｅｒおよびＣｏｏｐｅｒ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂ ｉｏｃｈｅｍ．，５４：８９７−９３０（１９８５）。ＰＴＫ酵素はチロシンに つき高い特異性を呈し、通常は、セリン、スレオニンまたはヒドロキシプロリン をリン酸化しない。 蛋白質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰａｓｅ）は、元々、種々の人工基質を 用い、細胞および組織溶解物から同定・精製されたものであり、従って、天然に おけるそれらの脱リン酸化機能は十分に特徴付けられてはいない。ＰＴＫ酵素に よるチロシンリン酸化は通常、細胞増殖、細胞転換および細胞分化と関連するの で、ＰＴＰａｓｅもこれらの事象と関連すると推定された。多数のＰＴＰａｓｅ につき、この関連は今日では確認されている。例えば、ＰＴＰ−１Ｂ（その構造 は最近解明された［Ｂａｒｆｏｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６３：１３９７−１ ４０４（１９９４）；Ｈｏｐｐｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２３： １０６９−７７（１９９４）；Ｃｈｅｒｎｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２７３５−３９（１９９０）；Ｃｈａｒｂｏｎｎ ｅａｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６： ５２５２−５２５６（１９８９）］）はインシュリン−誘導卵母細胞成熟に関与 することが示されている。Ｃｉｃｉｒｅｌｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：５５１４−１８（１９９０）；Ｆｌｉｎｔら，Ｔｈ ｅ ＥＭＢＯ Ｊ．１２：１９３７−４６（１９９３）。インシュリン−誘導卵 母細胞成熟メカニズムはＳ６キナーゼの活性化をブロックするＰＴＰ−１Ｂの能 力に関連付けられてきた。 最近、Ｗｅｉｎｅｒら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｓｅｒ Ｉｎｓｔ．，８６：３ ７２−８（１９９４）は、ＰＴＰ−１Ｂ過剰発現と乳癌の有意な相関、より厳密 には、ＰＴＰ−１Ｂ過剰発現とｐ１８５c-erbB-2（ヒト乳癌患者の１／３で過剰 発現されるＰＴＫ）の過剰発現との間の相関を証明した。同様の相関が、ｐ１８ ５c-erbB-2−関連卵巣癌に関して証明されている。Ｗｅｉｎｅｒら，Ａｍ．Ｊ． Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１７０：１１７７−８８３（１９９４）。 恐らくは、最良に特徴付けられているＰＴＰａｓｅ分子は白血球−共通抗原Ｃ Ｄ４５である。専ら造血細胞で発現されるＣＤ４５は、最も豊富な細胞表面糖蛋 白質の１つであり、リンパ球シグナル伝達における臨界的成分として機能する。 ＴｒｏｗｂｒｉｄｇｅおよびＴｈｏｍａｓ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． ，１２：８５−１１６（１９９４）参照。特に、ＣＤ４５はＴおよびＢ両リンパ 球の抗原−刺激増殖で中枢的な役割を演じることが証拠によって示唆されている 。ＴｒｏｗｂｒｉｄｇｅおよびＴｈｏｍａｓ、前掲，Ｋｉｓｈｉｈａｒａら，Ｃ ｅｌｌ，７４：１４３−５６（１９９３）。ＣＤ４５−欠陥マウスを使用した研 究において、ＣＤ４５は肥満細胞の抗体−（ＩｇＥ−）媒介脱顆粒に必須である ことが示された。Ｂｅｒｇｅｒら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８０：４７１−６ （１９９４）。 最近発見された誘導性リンパ系−特異的蛋白質チロシンホスファターゼ（Ｈｅ ＰＴＰと命名）も免疫応答に関連付けられた。ＨｅＰＴＰは休止ＴおよびＢリン パ球で発現されるが、非造血細胞では発現されない。これらの細胞の刺激に際し て、ＨｅＰＴＰ ｍＲＮＡレベルは１０−１５倍増大する。Ｚａｎｋｅら，Ｅｕ ｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：２３５−２３９（１９９２）。 多数の他の新しく考察されたホスファターゼの活性は現在調査中である。これ らのうち２つ：ＰＴＰ−１ＣおよびＳｙｐ／ ＰＴＰ １Ｄ／ＳＨＰＴＰ２／ＰＴＰ２Ｃは、最近、血小板由来成長因子および 土皮成長因子誘導応答の活性化と関連付けられた。Ｌｉら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１４：５０９−１７（１９９４）。これらの両成長因子は共に正常 細胞プロセッシングならびに癌およびアテローム性動脈硬化症のごとき病状と関 連付けられ、これは、これらのＰＴＰａｓｅ酵素の阻害剤に対する治療適応性を 示唆する。 より一般的には、ＰＴＰａｓｅはある種のサイトカイン（例えば、ＩＬ−４） およびインターフェロンの分裂促進効果に必要であるようだ。Ｂｕｒｋｅら，Ｂ ｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．，２０４(１)： １２９−３４（１９９４）参照。 ＰＴＰａｓｅファミリーの４０を超えるメンバーが真核生物、原核生物および ウイルスにおいてでさえも同定されている。Ｂａｒｆｏｒｄら，前掲。注目すべ きは、ＰＴＰａｓｅ Ｙｏｐ２ｂは、腺ペストの原因である病原性細菌エルジニ ア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）における必須ビルレンス決定基である。Ｂｌｉｓｋａ ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１１８７−９１（ １９９１）。 蛋白質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）の７つの区別される膜貫通形態の比 較により、これらの蛋白質の細胞外セグメントが非常に様々であることが明らか になった。対照的に、細胞内セグメントは、必須システイニル残基を含有する２ つの保存された触媒ドメインを含め（ＨＰＴＰｂを除く、これはかかる触媒ドメ インをただ一つ有する）、顕著な類似性を有した。Ｆｉｓｈｅｒら，前掲，また Ｂａｒｄｆｏｒｄら，前掲参照。ＰＴＰａｓｅの可変非触媒セグメントは、ＰＴ Ｐａｓｅ分子を特異的細胞下区画に標的化することによって、または酵素活性の 直接的変調を介して、ＰＴＰａｓｅ機能を制御するように見える。Ｆｌｉｎｔら ，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：１９３７−４６（１９９３）。 ＰＴＰａｓｅが正常および新生物形成細胞成長および増殖で演ずると信じられ る基本的な役割のため、ＰＴＰａｓｅ活性を変調できる薬剤に対して当該分野で 要望が存在する。基本的なレベルにおいて、かかる薬剤は、細胞シグナリング経 路および細胞成長および増殖における蛋白質チロシンホスファターゼおよびキナ ーゼの正確な役割を解明するのに有用である。ＭａｃＫｉｎｔｏｓｈおよびＭａ ｃＫｉｎｔｏｓｈ，ＴＩＢＳ，１９： ４４４−４４８（１９９４）参照。 さらに重要なことに、ＰＴＰａｓｅ活性の変調は重要な臨床的意義を有する。 例えば、ＰＴＰ−１Ｂの過剰発現は新生物形成状態と関連付けられているゆえに 、ＰＴＰ−１Ｂ活性を変調する薬剤はこれらの疾患でＰＴＰ−１Ｂの役割を解明 するのに、およびこれらの病気状態に対する効果的な治療剤の開発に必要である 。造血成長におけるＣＤ４５の重要な役割は、同様に、自己免疫疾患と関連する 疾患におけるＰＴＰａｓｅ阻害剤に対する治療的有用性を示す。肥満細胞におけ る抗体−媒介脱顆粒におけるＣＤ４５の役割は、アレルギー障害に対するＰＴＰ ａｓｅ阻害剤の治療的有用性を示す。同様に、免疫応答におけるＨｅＰＴＰの役 割は、免疫系と関連する病気におけるＨｅＰＴＰ阻害剤に対する治療的有用性を 示す。 ＰＴＰａｓｅ蛋白質は病原性エルジニア株のビルレンスに必須であるゆえに、 ＰＴＰａｓｅ阻害剤化合物に対する抗生物質適用も存在する。やはり抗新生物形 成適用を有するようである抗生物質スラミンは、最近、ＣＤ４５の優れた不可逆 的非競合性阻害剤であることが示された。ＧｈｏｓｈおよびＭｉｌｌｅｒ，Ｂｉ ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｓｙ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ． １９４：３６−４４（１９９３）参照。 ＰＴＰａｓｅは糖尿病疾患に関連付けられてきた。ＰＴＰａｓｅ阻害剤の１つ のファミリー、バナジウム誘導体での実験は、高血糖症の治療のために経口アジ ュバントまたはインシュリンに対する代替物としてのかかる化合物に対する治療 的有用性を示す。Ｐｏｓｎｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：４５９ ６−４６０４（１９９４）。しかしながら、かかる金属含有阻害剤はかなり非特 異的に作用し［Ｂｕｒｋｅら，前掲］、全てのＰＴＰａｓｅ酵素に対して同様の 効力でもって作用することが期待される。 バナジウム誘導体に加えて、ある種の有機ホスホチロシンミメティックスが、 かかるミメティックスを６−１１アミノ酸残基のポリペプチド人工ＰＴＰａｓｅ 基質に取り込んだ場合に、ＰＴＰａｓｅ分子を競合的に阻害できると報告されて いる。例えば、式： によって示すことができる「天然」（リン酸化チロシン）ＰＴＰａｓｅ基質は、 化学式： によって示されるホスホノメチルフェニルアラニン（Ｐｍｐ）を含有する１１量 体オリゴペプチドによって模擬されてきた。Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら，「蛋白質 チロシンホスファターゼのホスホペプチド基質およびホスホノペプチド阻害剤」 Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ［Ｒｉｖｅｒ およびＳｍｉｔｈ編］，１９９２，Ｅｓｃｏｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓ ｈｅｒｓ：ライデン、オランダ国，５５３−５５頁；Ｂｕｒｋｅら，Ｂｉｏｈｅ ｍｉｓｔｒｙ，３３：６４９０−９４（１９９４）。より最近では、Ｂｕｒｋｅ ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．２０４（１）：１ ２９−１３４（１９９４）は、構造式： によって示される、Ｐｍｐ部分またはより好ましくはホスホノジフルオロメチル フェニルアラニン（Ｆ2Ｐｍｐ）部分を含む特定のヘキサマーペプチド配列は競 合的にＰＴＰ−１Ｂを阻害したことを報告した。しかしながら、かかるヘキサペ プチド阻害剤は、それにも拘わらず、イン・ビボでＰＴＰａｓｅ変調に対して欠 点を有する。より具体的には、Ｂｕｒｋｅらによって記載されているヘキサペプ チド阻害剤は、細胞膜内にある膜貫通および細胞内ＰＴＰａｓｅ酵素の触媒ドメ インとの相互作用のため、細胞膜を横切っての効果的な移動を優先的に阻害する のに十分大きくかつアニオン性である。細胞膜を横切っての移動を容易とする、 より少数のアニオン性分子を有する、小さい有機分子をベースとした阻害剤に対 する要望が存在する。 前記理由の全てのため、蛋白質チロシンホスファターゼ分子のホスファターゼ 活性を変調し、特に阻害するのに効果的な新 規化合物に対する要望が当該分野に存在する。 発明の概要 本発明は、ＰＴＰ−１Ｂおよび／またはＨｅＰＴＰのごとき１種以上の蛋白質 チロシンホスファターゼ（ＰＴＰａｓｅ）酵素のホスファターゼ活性を変調する 、特に阻害するのに有用なアリールアクリル酸化合物およびその誘導体を提供す る。本発明は、さらに、該化合物の塩、エステル、溶媒和物等、および該化合物 を含む組成物を提供する。 本発明は、以下の式（Ａ）のアリールアクリル酸化合物およびそれらの誘導体 が蛋白質チロシンホスファターゼ活性を阻害するという発見に基づく。 ［式中、ｎ＝０または１であり、ｎ＝１である場合、ＸはＣＨまたは窒素（すな わち、アリール基は、それぞれ、フェニルまたはピリジル基となる）、またはｎ ＝０である場合、Ｘは酸素または硫黄（すなわち、アリール基は、それぞれ、フ リルまた はチオフェニル（チエニル）基となる）を示す］。 「誘導体」とは、表４および実施例１１において、さらに詳しく記載するごと く、芳香環の１以上の原子において（例えば、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、カル ボキシ、ニトロ、シアノ、メトキシ等での）置換を有する式（Ａ）のアリールア クリル酸を意味する。さらに、「誘導体」は、例えば、電子吸引基（例えば、Ｃ ｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＦ3、フェニル）または電気供与基（例えば、ＣＨ3、アルコキ シ）でのアルケン炭素における置換を有する式（Ａ）の化合物：およびカルボン 酸基が、例えば、テトラゾリル基で置き換えられた、あるいは例えばイミダゾー ルでエステル化された式（Ａ）の化合物を含む。 １つの態様において、本発明は、式（ＡＡ）： ［式中、 （ａ）ｎ＝０または１、 （ｉ）ｎ＝１である場合、ＸはＮおよびＣＨよりなる群から選択され、 （ｉｉ）ｎ＝０である場合、ＸはＯおよびＳよりなる群から選択され； （ｂ）ｍは０ないし４の整数であり、各Ｒ’は独立してハロ、ニトロ、アミノ、 ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ1-11アルキル、カルボキシＣ1-6アルキル、−ＣＨ ＝ＣＨＣＯＯＨ、Ｃ1-6アルキルオキシ、トリハロメチル、ホルミル、Ｃ1-6アル キルカルボニル、およびヒドロキシＣ1-6アルキルよりなる群から選択され； （ｃ）Ｒ’’およびＲ’’’は独立して水素、ハロ、シアノ、フェニル、および Ｃ1-11アルキルよりなる群から選択される］ を有する蛋白質チロシンホスファターゼ変調化合物を含む。本発明の好ましい組 成物は、医薬上許容される希釈剤、アジュバント、または担体と混合した、かか る化合物（または該化合物の医薬上許容される塩、エステル、または溶媒和物） よりなる組成物を含む。 本発明の好ましい蛋白質チロシンホスファターゼ活性変調アリールアクリル酸 誘導体化合物は以下の一般的構造式（Ｉ）： ［式中、（ａ）Ｒ1、Ｒ2およびＲ3置換基の少なくとも１つは式（ＩＲ）を有し 、 （式中、ｎ＝０または１であり、ｎ＝１である場合、ＸはＮおよびＣＨよりなる 群から選択され、ｎ＝０である場合、ＸはＯおよびＳよりなる群から選択され； （ｂ）Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の残りは独立して （ｉ）水素、Ｃ1-11アルキル、 （ｉｉ）置換されたＣ1-11アルキル（置換基はヒドロキシ、ハロ、メルカプ ト、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、 グアニジノ、アリール、ヒドロキシフェニル、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6アル キルチオ、Ｃ1-6アルキルアミノ、フェニルＣ1-6アルキルオキシ、フェニルＣ1- 6 アルキルチオおよびフェニルＣ1-6アルキルアミノよりなる群から選択される） 、 （ｉｉｉ）アリール、 （ｉｖ）Ｃ1-11アルキルアリール、 （ｖ）モノ−、ジ−およびトリ−置換アリール（置換基は独立してＣ1-6ア ルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6 アルキルチオ、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、アミノＣ1-6アルキル、Ｃ1-6ア ルキルカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノカル ボニル、カルボキシおよびカルボキシＣ1-6アルキルから選択される）、 （ｖｉ）ＣＨ2ＣＯＸＲ4（Ｘは酸素またはＮＨであり、Ｒ4は独立して水素 、Ｃ1−Ｃ11アルキル、アリールおよびＣ1−Ｃ11アルキルアリールから選択され る）； から選択され、 （ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）のアリールは独立し てフェニル、ナフチル、ピリジル、フリル、 ピリル、チエニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、テト ラゾリル、ピラジニル、ピリミジル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフリル、 ベンゾチエニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾジオキソリル、ピペロニル、 イソインドリル、プリニル、カルバゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オ キサゾリル、ベンズチアゾリル、およびベンゾオキサゾリルよりなる群から選択 され、 （ｃ）式（Ｉ）のＲ3は式（ＩＲ）を有し、Ｒ2はさらに式（Ｂ）のものであって もよい、 （式中、Ｒ5およびＲ6は独立して（ｂ）（ｉ）および（ｂ）（ｉｉ）よりなる群 から選択される）］ を有する。 好ましい具体例において、式（Ｉ）のＲ3は式： ［式中、ｎおよびＸは式（ＩＲ）で前記したものと同じ］ を有する。好ましい具体例において、Ｒ3はケイ皮酸置換基であり、すなわち、 ｎ＝１であってＸ＝ＣＨである。従って、これらの化合物は一般式（ＩＩ）： ［式中、Ｒ1およびＲ2は式（Ｉ）の化合物に関して定義したものと同じ： のものである。 式（ＩＩ）のＰＴＰａｓｅ変調化合物は一般式（ＩＩＡ）： ［式中、Ｒ1およびＲ2は前記定義に同じ］ のパラ−置換ケイ皮酸誘導体化合物であるのが好ましい。 本明細書で用いる「アルキル」なる用語は、特定数の炭素原子を有する分岐鎖 または直鎖および環状（例えば、シクロアルキル）飽和脂肪族炭化水素基、例え ば、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（Ｐｒ）、ブチル（Ｂｕ）、ペ ンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、イソプロピル（ｉ− Ｐｒ）、イソブチル（ｉ−Ｂｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）、ｓｅｃ−ブ チル（ｓ−Ｂｕ）、イソペンチル、シクロヘキシル等を含む。 「アルキルオキシ」または「アルコキシ」なる用語は、酸素ブリッジを通じて 結合した、示した数の炭素原子を有する前記定義のアルキル基、例えば、メトキ シ、エトキシ、プロピルオ キシ等を表す。 「アルキルチオ」および「アルキルアミノ」なる用語は、各々、硫黄ブリッジ およびアミンブリッジを介して結合した、示した数の炭素原子を有する前記定義 のアルキル基を表す。該アミンブリッジ自体がアルキル基またはアリール基で置 換されていてもよい。同様に、「アミノ」なる用語はアルキル置換アミノ基を含 めることを意図する。 「アミノアルキル」（例えば、アミノＣ1-6アルキル）なる用語は、示した数 の炭素原子を有する前記定義のアルキル基を介して結合したアミノ基であって、 該アミノ基が該アルキル基のいずれかの炭素に結合したものを表す。 「アルキルカルボニル」なる用語は、カルボニル基を介して結合した示した数 の炭素原子を有する前記定義のアルキル基を表す。「アルキルカルボニルアミノ 」なる用語は、該カルボニルが前記定義のアミノ基の窒素原子を介して結合した 前記定義のアルキルカルボニル基を表す。 「アルキルアミノカルボニル」なる用語は、前記定義のアミノ基の窒素原子を 介して結合した、示した数の炭素原子を有する前記定義のアルキル基であって、 該窒素原子はカルボニル基 を介して結合したものを表す。 「カルボキシアルキル」（例えば、「カルボキシＣ1-6アルキル」）なる用語 は、示した数の炭素原子を有する前記定義のアルキル基を介して結合したカルボ キシ基であって、該カルボキシ基がアルキル基のいずれかの炭素を介して結合し たものを表す。 「アリール」なる用語は、当該アリール基とで安定な共有結合を形成できるい ずれかの環位置に共有結合した、示した単環、多環、および複素環芳香族基を含 み、好ましい結合点は当業者に明らかである（例えば、３−インドリル、４−イ ミダゾリル）。 「アルキルアリール」なる用語は、前記定義のアリール基を介して結合した、 示した数の炭素原子を有する前記定義のアルキル基を表し、該アルキル基はアル キル基と安定な共有結合を形成できるアリール基のいずれかの位置にて結合する 。 「フェニルアルキル」（例えば、「フェニルＣ1-6アルキルオキシ」、「フェ ニルＣ1-6アルキルチオ」、「フェニルＣ1-6アルキルアミノ」）なる用語は、示 した数の炭素原子を有する前記定義のアルキル基を介して結合したフェニル基を 表し、該フェニル基はアルキル基のいずれかの炭素に結合している（該 アルキル基は酸素ブリッジ、硫黄ブリッジ、アミンブリッジ等を介して結合して いる）。 本発明の好ましい蛋白質チロシンホスファターゼ活性変調／阻害化合物はカル ボキシル置換ケイ皮酸であり、ここに、該カルボキシル基環置換基はアミドを結 合するように誘導体化されている。これらの化合物のいくつかの現在好ましい形 態において、アミド結合はカルボキシル置換ケイ皮酸部分を、天然のアミノ酸の ジペプチドまたはトリペプチドに構造的に類似したまたは同一のジペプチドまた はトリペプチド部分に結合させる。 従って、本発明により、ホスファターゼ変調活性を有する新規アリールアクリ ル酸が提供され、ならびに従来公知のアリールアクリル酸化合物の新しいホスフ ァターゼ活性変調用途が提供される。 本発明のもう１つの態様は、哺乳動物への投与に適した本発明のＰＴＰａｓｅ 変調化合物を含む組成物を提供する。 本発明は、さらに、ＰＴＰａｓｅ変調／阻害活性を有する本発明の化合物の製 法を提供する。好ましい方法において、本発明の化合物は、他成分組合せアレイ で合成され、これは引き続いての評価のために多数の構造的に関連する化合物の 迅速な合 成を可能とする。好ましい合成プロトコルにおいて、化合物のアクリル酸部分は 、例えば、ｔ−ブチル保護基でのエステル化によって合成の間、保護される。か くして、本発明の化合物の好ましい製法は、保護されたアクリル酸試薬の使用お よび、例えば、酸での前駆体エステル化合物の処理による保護基の除去を含む。 所望により、かかる方法は、さらに、それにより得られたアクリル酸生成物のエ ステル化または塩化を含んでもよい。 本発明の多数の他の態様および利点は、図面を参照し、以下のその詳細な記載 により明らかとなるであろう。 図１は、本発明のホスホチロシル構造およびケイ皮酸誘導体の構造を示す。 図２は、本発明の化合物の４成分Ｕｇｉ反応合成を示す。 図３は、アリールアクリレート試薬の合成を示し、この試薬は本発明のＰＴＰ ａｓｅ活性−変調化合物を合成するのに利用された。 図４は、本発明の化合物の４成分Ｕｇｉ反応合成を示し、ここに、ケイ皮酸ｔ −ブチルカルボン酸試薬を使用する。 図５は、本発明のトリペプチドケイ皮酸アミド誘導体の、１０ｍＭ濃度におけ る％阻害として表した阻害活性を示す。ト リペプチドアミド化合物は３文字のトリペプチド表記が続く文字Ｃ（ｐ−カルボ キシシンナメート）で示される。 詳細な記載 特定の理論に限定されるつもりはないが、置換および非置換アクリル酸、アリ ールアクリル酸、および誘導体化アリールアクリル酸のＰＴＰａｓｅ阻害活性は 、かかる化合物のアリールアクリル酸部分およびＰＴＰａｓｅ酵素の天然の標的 であるリン酸化チロシン（ホスホチロシル）部分の間の微妙な立体障害および電 子類似性に帰せられる。図１に示すごとく、ホスホチロシル残基は酸素原子を介 してホスホノ成分（丸）に共有結合したフェニル成分（ボックス）を有する。こ の酸素原子は、ホスホチロシル残基および蛋白質チロシンホスファターゼ酵素の 触媒ドメインの間の化学的相互作用の座であると考えられる。比較すると、パラ −置換ケイ皮酸のごときアリールアクリル酸誘導体はアルケン基を介してカルボ ン酸成分（丸）に共有結合したフェニル成分（ボックス）を有する。図１に示さ れるホスホノおよび対応するカルボン酸成分、対応する芳香族成分、および酸素 およびこれらの部分の対応するアルケン成分は、ＰＴＰａｓｅ酵素の触媒ドメイ ンに結合するホスホチロシル部 分と競合し、それにより、かかる酵素のＰＴＰａｓｅ活性を阻害するアリールア クリル酸部分につき十分な立体障害および分子類似性を有すると信じられている 。 本発明のアリールアクリル酸ＰＴＰａｓｅ阻害剤の立体障害要件を、さらに、 かかる分子の誘導体をＰＴＰａｓｅ活性につきアッセイすることによってさらに 特徴付けた。重要なことには、カルボン酸のエステル化および／またはアルケン 結合の還元はこれらの化合物のＰＴＰａｓｅ阻害活性を実質的になくすると判断 された。同等に重要なことには、本発明のＰＴＰａｓｅ阻害剤のアリール置換基 に関して、可変性の尺度が許容されると判断された。かくして、ホスホチロシル 残基の構造にかなり類似するパラ−置換フェニルアクリル酸（ケイ皮酸）に加え て、オルト−およびメタ−置換ケイ皮酸はＰＴＰａｓｅ活性を阻害すると判断さ れた。さらに、非置換および置換フリルアクリル酸、ピリジルアクリル酸、チエ ニルアクリル酸、および他のアクリル酸はＰＴＰａｓｅ酵素活性を阻害し；芳香 環の１を超える原子においてアルケン炭素または置換を有するアリールアクリル 酸はＰＴＰａｓｅ酵素活性を阻害すると判断された。 いずれの方法を用いて本発明の化合物を合成してもよく、通 常の有機化学合成を用いて、商業的規模で本発明の化合物を得ることができると 考えられる。しかしながら、好ましい具体例において、式（Ｉ）のＰＴＰａｓｅ 化合物は、１９９４年７月１５日に出願され、１９９５年１月２６日に公開され た国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９４／０８１４１［公開番号ＷＯ９５／０２５６６ ］に記載されているごとく、４成分組合せアレイＵｇｉ反応合成を用いて合成さ れる。Ｕｇｉら，「Ｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」ｉｎ Ｅｎｄｅａｖｏｒ，Ｎｅｗ Ｓ ｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ．１８，Ｎｏ．３，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌ ｔｄ．，英国（１９９４）参照。 多成分合成における各成分は、１以上の共通の官能基、例えば、アミン、アル デヒド等を有する一連の医薬化合物よりなる。該合成は、種々の化合物の共通の 官能基が相互に反応して、共通のコア構造を有する生成物化合物を形成するよう な条件下で行われる。より詳しくは、各個々の成分よりなる一連の試薬を「組合 せ的に」複数の反応容器に添加して、当該アレイの各反応容器が個々の試薬のユ ニークな組合せを含むようにアレイを 形成させる。試薬成分は、注目する共通コア構造を有するユニークな生成物が各 反応容器で形成されるような適当な条件下で添加される。合成された類似体の合 計数は、アレイ中の各成分の構造的変化の数の積に等しい。かくして、多成分組 合せアレイ合成は、注目するコア構造を有する多数の構造変化の自由度の合成の ための比較的単純で迅速な手段を提供する。 より詳細には、式（Ｉ）の化合物を合成するには、図２に示したＵｇｉ反応を 行い、ここに、所与の反応の４成分は（ａ）式３のアルデヒド；（ｂ）式２の商 業的に入手できるＲｉｎｋ樹脂または他の適当な固体支持体樹脂；（ｃ）式４の イソシアネート；および（ｄ）式５の酸である。第１段階において、４成分を反 応させて、式６の化合物を得る。第２段階において、式６の成分を酸、例えば、 ＣＨ2Ｃｌ2中の１０％トリフルオロ酢酸と反応させて、式（Ｉ）の化合物を得る 。所望により、次いで、該化合物をエステル化し、塩化し、または処方して、本 明細書に記載する組成物を形成させる。 本明細書に記載する化合物の合成方法に加え、本発明は、ＰＴＰａｓｅ阻害活 性につき化合物をスクリーニングするイン・ビトロ手法を提供する。好ましいス クリーニング手法は迅 速で、マイクロモル量の注目する化合物で行うことができる。かくして、本発明 により、小規模にて、非常に多数の化合物を迅速かつ安価に合成することができ 、迅速な初期スクリーニングに付し、続いて、十分な規模のスタリーニングに付 して、特に注目する蛋白質チロシンホスファターゼ−変調化合物を選択すること ができる。 さらに、ＰＴＰａｓｅ阻害アッセイを２つの特定のＰＴＰａｓｅ分子（ＰＴＰ −１ＢおよびＨｅＰＴＰ）に関して記載したが、多数のさらなるＰＴＰａｓｅ酵 素を特徴付け、他のＰＴＰａｓｅ分子が同定され特徴付けされると理解される。 本明細書に記載されたアッセイおよび他のイン・ビトロおよびイン・ビボＰＴＰ ａｓｅ阻害アッセイをかかる他の酵素で行って、本発明の化合物のＰＴＰａｓｅ 変調活性を示すことができる。 以下の実施例は本発明の態様をさらに説明する。実施例１において、アリール アクリレート試薬の合成を記載し、その試薬は本発明の化合物のＵｇｉ反応合成 で有用である。実施例２において、本発明のケイ皮酸誘導体化合物を合成するた めのかかるアリールアクリレート試薬の使用を記載する。 実施例３ないし５は、本発明の化合物をＰＴＰａｓｅ変調活 性につきアッセイするプロトコルに関する。特に、実施例３はＰＴＰａｓｅ活性 を有する切形(truncated)ＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質の精製を記載し、その融合蛋 白質を使用して、本発明の化合物のＰＴＰａｓｅ阻害活性をアッセイした。実施 例４は、第２の組換えＰＴＰａｓｅ酵素、ＨｅＰＴＰの精製を記載し、これをや はり使用して本発明の化合物のＰＴＰａｓｅ変調活性をアッセイした。実施例５ はＰＴＰ−１ＢおよびＨｅＰＴＰで行ったＰＴＰａｓｅ阻害アッセイを特に記載 する。 実施例６ないし８は、本発明のさらなるケイ皮酸誘導体化合物の合成および特 徴付けを記載する。実施例９は本発明の多数のフリルアクリル酸誘導体化合物の 合成および特徴付けを記載する。 実施例１０は、多様な商業的に入手できるアリールアクリル酸のＰＴＰａｓｅ 阻害活性を証明した手法を記載する。 実施例１１は、公知のブロトコルを用いて合成した１２５のケイ皮酸誘導体化 合物のライブラリーを記載する。該ライブラリーは、かなりの機能的変化のトリ ペプチドアミド置換基を有するケイ皮酸誘導体のファミリーよりなる。実施例１ ０に教示されるごとく、このように設計し、選択した酵素に対する ＰＴＰａｓｅ変調活性につきスクリーニングした小化合物ライブラリーは、選択 酵素に対して増強された活性をもつＰＴＰａｓｅ変調化合物を設計するための有 用な情報を提供する。 実施例１２は、本発明の化合物が細胞増殖阻害活性を示した全細胞増殖阻害ア ッセイを記載する。 実施例１ アリールアクリレート試薬の合成 前記した好ましい具体例において、Ｕｇｉ反応合成（図２参照）を用いて式（ Ｉ）の化合物を合成し、ここに、式（Ｉ）のＲ3は式： ［式中、ｎおよびＸは式（ＩＲ）で定義したに同じ］ を有する。Ｕｇｉ反応を用いてかかるＰＴＰａｓｅ阻害活性を合成するには、以 下のごとくに合成したアリールアクリレート試薬を用いてＲ3置換基を提供した 。 図３を参照し、ほぼ１０ミリモルの一般式（Ｉ）のアリール ブロミド化合物、１２．５ミリモルのｔ−ブチルアクリレート、２０ミリモルの 乾燥トリエチルアミン、０．１ミリモルの酢酸パラジウム、および０．４ミリモ ルのトリ−ｏ−トリルホスフィンの混合物をフラスコ中で調製する。該フラスコ にアルゴンを吹き付け、１００℃で加熱する。この反応は薄層クロマトグラフィ ーでモニターすることができ、これは、約２時間後に、全てのアリールブロミド 化合物が反応し、固体生成物を形成することを明らかとする。固体生成物をＥｔ ＯＡｃおよび水で抽出し、次いで、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ３に調整する。有 機相を濾過し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、さらに蒸発によって乾燥する。 式（Ｉ）の最初のアリールブロミド試薬がメチルエステル（すなわち、Ｒ＝Ｍ ｅ）である場合、１，４−ジオキサン：水の１：１混合液中の０．５Ｍ ＬｉＯ Ｈを用い、一般式（２）の反応生成物を凍結乾燥して一般式（３）の所望の酸試 薬とする。一般式（３）の試薬を乾燥し、その同定はＮＭＲおよび質量分析によ って確認する。一般的（３）の乾燥した試薬は、本明細書に記載するＵｇｉ反応 合成においてカルボン酸試薬で使用するのに適する。例示的ＮＭＲおよび質量分 析データは選択した化 合物につき以下の通り。 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ：１．４６ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ）；６．４２ｐｐｍ （ｄ，１Ｈ）；７．５６−７．５９ｐｐｍ（ｍ，３Ｈ）；８．１２ｐｐｍ（ｄ， ２Ｈ） Ｍ．Ｓ．２４８．３（計算値）：２４７．０（観測値） Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ：１．４５ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ）；６．４１ｐｐｍ （ｄ，１Ｈ）；７．４１ｐｐｍ（ｔ．１Ｈ）；７．５８ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７ ．６２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）； ８．０４ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；８．２１ｐｐｍ（ｓ，１Ｈ） Ｍ．Ｓ．２４８．３（計算値）：２４７．０（観測値） Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ：１．４５ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ）；３．８４ｐｐｍ （ｓ，３Ｈ）；６．１９ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７．３６ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）；７ ．４３ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）；７．５２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７．８６ｐｐｍ（ｄ ，１Ｈ）；８．２４ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ） Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ：１．４５ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ）；６．２１ｐｐｍ （ｄ，１Ｈ）；７．４２ｐｐｍ（ｔ．１Ｈ）； ７．４７ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ）；７．５０ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；８．０６ｐｐｍ（ ｄ，１Ｈ）；８．４２ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ） Ｍ．Ｓ．２４８．３（計算値）：２４７．０（観測値） Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ｄ：１．４６ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ）；６．２８ｐｐｍ （ｄ，１Ｈ）；７．０３ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７．２２ｐｐｍ（ｄ，１Ｈ）；７ ．３３ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ） 実施例２ケイ皮酸誘導体の合成およびＰＴＰａｓｅ阻害活性についての最初のスクリーニ ング ケイ皮酸誘導体化合物を組合せＵｇｉ反応で合成し、後記するごとく蛋白質チ ロシンホスファターゼ変調活性につき最初にスクリーニングした。 ここに図４を参照し、所与の反応の４試薬成分は（ａ）式３のアルデヒド；（ ｂ）式２の商業的に入手可能なＲｉｎｋ樹脂； （ｃ）式４のイソシアネート；および（ｄ）式５のケイ皮酸誘導体である。最初 の段階において、４成分を反応させて、式６の化合物を得る。第２の段階におい て、式６の化合物をＣＨ2Ｃｌ2中の１０％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と反応さ せて、式ＩＩの化合物を得る。 より詳細には、表１に記載するごとく、各成分の０．５Ｍ溶液を、例えば、０ ．０５ミリモルの成分を１００ｍｌの適当な好ましい溶媒に溶解させることによ って調製する。 他の適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、ＴＨＦ、クロロホルム）は当業者 に明らかであろう。Ｒ1＝メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘ キシル、ｎ−ヘプチル、フェニルおよびＰｈＣＨ2ＣＨ2を供するように式３の商 業的に入手可能なアルデヒド化合物を選択した。Ｒ2＝ｎ−ブチル；１，１，３ ，３−テトラメチルブチル；ｔ−ブチル； ＣＨ2ＣＯ2Ｈ；ＣＨ2ＣＯ2メチル；ＣＨ2ＣＯ2エチル；シクロヘキシル；および ベンジルを供するように式４の商業的に入手可能なイソシアナイド化合物を選択 した。オルト−、メタ−、およびパラ−カルボン酸ｔ−ブチルシンナメートを前 記実施例のごとくに合成して式５の酸試薬を供した。 表題「化学ライブラリーの生成のための方法および装置」の１９９５年４月１ ８日出願の（Ｊｏｈｎ ＣａｒｇｉｌｌおよびＲｏｍａｉｎｅ Ｒ．Ｍａｉｅｆ ｓｋｙ，発明者）同時係属米国特許出願第０８／４２２，８６９号（代理人書類 番号８１４０−００８−９９９）に記載されているＯｎｔｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓ ｂａｄ ＣＡ）９６−ウェル反応プレート（２．０ｍｌ／ウェル容量）およびマ ルチシンセサイザーを用いて、多成分組合せ合成反応を行った。 まず、アミン結合基を供するＲｉｎｋ樹脂（４−（２’，４’−ジメトキシフ ェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシ樹脂，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈ ｅｍ Ｔｅｃｈ（ＡＣＴ，Ｌｏｕｓｖｉｌｌｅ ＫＹ）の溶液を各プレートを横 切って、８×１０アレイ（１００ｍｌ／ウェル）にて、８０ウェルに分配した。 次いで、アルデヒド化合物の溶液を各プレートを横切 って組合せ様式にて添加した（１００ｍｌ／ウェル）。プレートを室温にて１時 間、軌道振盪機上に置いた。 しかる後、プレートを再度マルチシンセサイザーに入れ、酸およびイソシアネ ート溶液を実質的に組合せ様式にてプレートを横切って添加した。「組合せ様式 」でのアルデヒド、イソシアネートおよび酸の分配は、ユニークな化合物が各プ レートの各ウェルで合成されるような、一連のプレートでの、三次元アレイにて の、区別されるアルデヒド（例えば、異なるＲ1基を有するもの）、区別される 酸（例えば、オルト−、メタ−、またはパラ−置換）の分配を含む。例えば、８ つの区別されるアルデヒド、１０の区別されるイソシアネート、および３つの区 別される酸成分を３つのプレート（８０ウェル／プレート）にて組合せ的に合わ せて、式ＩＩの属内の少なくとも２４０の区別される化合物（例えば、立体化学 は無視する）を得る。 酸およびイソシアネートのウェルへの組合せ的添加の後、プレートを室温にて ７２時間軌道振盪機に入れた。合成反応は、選択した溶媒または試薬の沸点によ って実質的に限定される高温（例えば、約８０−９０℃）にて行うことができる ことは明らかであろう。しかる後、プレート中の溶媒を排出し、樹脂を ＤＭＳＯで３回洗浄し、次いで、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で３回洗浄した。合 成のこの段階において、各ウェルは式６に示したＲｉｎｋ樹脂に共有結合した化 合物を含有する（図４）。 本発明の化合物を得るために、Ｒｉｎｋ樹脂ポリマーおよびｔ−ブチル保護基 を、乾燥した酸での処理によって除去した。ＤＣＭ（６００μｌ）中の１０％ト リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の溶液を各ウェルに添加し、プレートを軌道振盪機で ２０分間振盪した。次いで、（注目する化合物を溶解させた）ウェル中の溶媒を 排出し、ウェルをＴＦＡ溶液（３００μｌ）で再度すすいだ。次いで、ＴＦＡ溶 液を、真空中の蒸発によって除去して、反応当たり１つの式ＩＩの化合物を得た （反応当たりほぼ０．０２５ミリモル化合物）。 組合せ合成からの反応生成物をＤＭＳＯに再懸濁し、後記実施例５に記載のイ ン・ビトロＰＴＰａｓｅ阻害アッセイを用いて、ＰＴＰａｓｅ阻害活性につきス クリーニングした。より詳細には、各合成は所望の反応生成物ほぼ０．０２５ミ リモルを生じたことを前提として、化合物を、１０ｍＭの有効濃度にてＰＴＰ− １ＢまたはＨｅＰＴＰ阻害活性につきスクリーニングした。これらの酵素の少な くとも１つに対する少なくとも約 ５０パーセント阻害を呈する化合物をさらなる分析のために選択した。 さらなる分析のために選択した化合物を前記と同様に再合成し、それらの同定 および純度を質量分析および核磁気共鳴分光（ＮＭＲ）によって確認した。選択 した化合物についての例示的ＮＭＲおよび質量分析データを以下に記載する。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ０．８６（ｔ，３Ｈ）：１．２２−１．４６（ ｍ，４Ｈ）；１．８４−１．９５（ｍ，２Ｈ）；３．７６（ｓ，３Ｈ）；４．０ ５（ｍ，２Ｈ）；４．７４（ｍ，１Ｈ）；６．６３（ｄ，１Ｈ）；７．０４−７ ．４３（ｍ，５Ｈ） Ｍ．Ｓ．３７６．２（計算値）：３７５．０（観測値） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ０．８４（ｔ，３Ｈ）：１．２２（ｔ，３Ｈ） ；１．３０−１．４６（ｍ，８Ｈ）；１．７３−１．９５（ｍ，２Ｈ）；３．９ ０（ｑ，２Ｈ）；４．１２（ｑ，２Ｈ）；４．５６（ｔ，１Ｈ）；６．５６（ｄ ，１Ｈ）；７．６４−７．９３（ｍ，５Ｈ） Ｍ．Ｓ．４１８．２（計算値）：４１７．０（観測値） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ０．８４（ｔ，３Ｈ） １．２２−１．３８（ｍ，１６Ｈ）；１．７３−１．９１（ｍ，２Ｈ）；４．３ ８（ｄｄｄ，２Ｈ）；４．５６（ｑ，１Ｈ）；６．５８（ｄ，１Ｈ）；７．２４ −７．９３（ｍ，９Ｈ） Ｍ．Ｓ．４３６．３（計算値）：４３４．９（観測値） 実施例３ ＰＴＰ−１Ｂ遺伝子クローニングおよび蛋白質精製 以下の手法は、ＰＴＰａｓｅ阻害アッセイにおける基質として使用するために 、蛋白質チロシンホスファターゼＰＴＰ−１Ｂの組換え生産および精製につき行 った。 Ａ．ＰＴＰ−１Ｂ ｃＤＮＡの生産 １ｍｇヒト胎盤ポリ（Ａ）+ｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔ ｏ，ＣＡ）、４ｍｌランダムヘキサマープライマー、８ｍｌの１０ｍＭ ｄＮＴ Ｐ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、１ｍｌ（２００Ｕ／ ｍｌ）モロニーネズミ白血病ウイルス逆転写酵素（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，カナダ 国）、０．５ｍｌ（２６Ｕ／ｍｌ）ＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓ ｏｎ ＷＩ）、および１２ｍｌ５×緩衝液（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を含有する５ ０ｍｌ反応中、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリーを合成した。合成反応を３７℃ で１時間インキュベートし、次いで、９５℃で５分間加熱不活化させた。 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用い、前記したごとくに合成したｃＤＮＡ からＰＴＰ−１Ｂ ｃＤＮＡを増幅した。より詳しくは、ＰＴＰ−１Ｂの公表さ れた配列に基づき、２種のＰＣＲプライマーを合成して、ＰＴＰ−１Ｂ触媒ドメ インを含有し、ＰＴＰａｓｅ活性を有する３２１アミノ酸断片をコードすること が知られているＰＴＰ−１Ｂの一部を増幅した。Ｈｏｐｐｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂ ｉｏｃｈｅｍ．２２３：１０６９−７７（１９９４）；ｂａｒｆｏｒｄ，Ｄ．ら ，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２３９：７２６−７３０（１９９４）；Ｃｈｅｒ ｎｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２７３５ −２７３９（１９９０）；Ｃｈａｒｂｏｎｎｅａｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６．５２５２−５２５６（１９８６）。プライマー は以下の各配列を有していた。 ＰＴＰ−１Ｂ−Ａ（５）（配列番号：１） ５’ＣＧＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＧＧＡＧＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧ３’ ＰＴＰ−１Ｂ−Ｂ（３）（配列番号：２） ５’ＣＴＣＣＣＴＧＡＡＴＴＣＣＴＡＡＴＴＧＴＧＴＧＧＣＴＣＣＡＧＧ３’ 非暗号ストランドにハイブリダイズする第１プライマーはＰＴＰ−１Ｂ暗号配 列の５’部分に対応し、クローニングを容易とするための開始コドンの上流のＢ ａｍＨＩ制限部位をコードする。暗号ストランドにハイブリダイズする第２のプ ライマーは、注目するＰＴＰ−１Ｂ断片の３’部分に対応し、停止コドンおよび 該停止コドンから下流のＥｃｏＲＩ制限部位をコードする。 ほぼ１μｌのヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリー、０．２ｍＭの各ｄＮＴＰ、３０ μＭの各プライマー、１×ＡｍｐｌｉｔａｑＤＮＡポリメラーゼ緩衝液（Ｐｅｒ ｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｎｏｒｗａｌｋ ＣＴ）を含有する１００μｌのＰＣＲ反 応混合物を９４℃で５分間変性し、以下の通り２５サイクルの増幅に付した：１ ）１分間の９４℃変性；２）１分間の５５℃アニーリング；および１分間の７２ ℃プライマー伸長。 ＰＣＲ反応産物（９９２ｂｐ）をＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ（Ｎｅｗ Ｅｎ ｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｙ， ＭＡ）で消化して、３２１アミノ酸ＰＴＰ−１Ｂ蛋白質断片をコードし、クロー ニングを容易とするための「粘着末端」を有する９７５ｂｐ産物を得た。 Ｂ．ＰＴＰ−１Ｂ発現ベクターの生産 アガロースゲル電気泳動によって、９７５ｂｐＰＴＰ−１Ｂ部分ｃＤＮＡを精 製し、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ−消化ｐＧＥＸ−３Ｘプラスミドベクター（Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に連結した。該ｐＧＥＸベク ターは、ベクターの暗号部位に挿入されたもう１つのＤＮＡ断片によってコード された蛋白質へのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）の融合を生 じるように設計される。ｐＧＥＸ−３Ｘ−ＰＴＰ−１Ｂと命名された得られたプ ラスミドのインサートの完全に配列決定により、ＰＴＰ−１Ｂ ｃＤＮＡの同定 および適当な向きおよびリーディングフレームへの挿入が確認された。 Ｃ．ＧＳＴ／ＰＴＰＩＢ融合蛋白質の発現および精製 イー・コリＤＨ５ａ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を供給業者の形質転換プロトコル によりプラスミドｐＧＥＸ−３Ｘ−ＰＴＰ−１Ｂで形質転換し、１００ｍｇ／ｍ ｌアンピシリンを補足した Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉブロス中で激しく撹拌しつつ３７℃で増殖させた。 培養が０．７−１のＯ．Ｄ．600に達すると、ＧＳＴ／ＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質 の生産物を０．１ｍＭＩＰＴＧ（イソプロピルｂ−Ｄ−チオガラクトシド）と共 にインキュベートした。さらに３７℃で３時間培養した後、細菌を遠心によって ペレット化した。 細菌ペレットを、１２．５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．０ 、１５ｍＭ ｂ−メルカプトエタノール（ｂｍｅ）および１ｍＭ ＰＭＳＦより なる１０×（ｗ／ｖ）溶解緩衝液に再懸濁した。わずかな清澄化が観察されるま で（ほぼ３分）溶解物を（氷上で）音波処理し、次いで、１０，０００ｒｐｍに て１０分間遠心した。上清を緩衝液Ａ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、お よび１５ｍＭ ｂｍｅ）で１：４希釈した。 ５ｍｌ Ｈｉ−ＴｒａｐプレパックＱカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、 一次精製を達成した。希釈上清をカラムに負荷した後、カラムを１０ベッド容量 の緩衝液Ａで洗浄した。次いで、ＧＳＴ／ＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質を、緩衝液Ａ および緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋１Ｍ ＮａＣｌ）の直線グラジエントを用 いて溶出させた。蛋白質を含有する溶出画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクーマシ ーブルー染色（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｐｈａｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ）によって同定 し、ＰＴＰ−１Ｂ活性を含有する画分を、後記するＰＴＰ−１Ｂ活性アッセイを 用いて同定した。融合蛋白質の溶出は約３０％緩衝液Ｂで起こった。 ＰＴＰａｓｅ活性を含有する画分をプールし、ＮＥＴ緩衝液（２０ｍＭトリス 、ｐＨ８．８、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび１５ｍ Ｍｂｍ ｅ）で１：４希釈し、１０ｍｌ ＧＳＴ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂカラム（Ｐ ｈａｒｍａｃｉａ）に負荷した。負荷の後、カラムをまず３ベッド容量のＮＥＴ 緩衝液＋１％ＮＰ４０（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕ ｉｓｅ，ＭＯ）で洗浄し、次いで、２８０のＯ．Ｄ．がベースとなるまでＮＥＴ 緩衝液で洗浄した。３３ｍＭトリス、ｐＨ８．８中の１０ｍＭグルタチオンを用 い、ＧＳＴ／ＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質をカラムから溶出させた。蛋白質の溶出は Ｏ．Ｄ．280でモニターし、画分を活性につきアッセイし、前記したごとくにＳ ＤＳ−ＰＡＧＥで泳動させた。ＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質はほぼ４−５分後に溶出 した（流速１ｍｌ／分）。 ＧＳＴ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ精製からのＧＳＴ／ＰＴＰ−１Ｂ含有画分 をプールし、１ｍｌ Ｈｉ−ＴｒａｐＱカラム（プレパックしたもの、Ｐｈａｒ ｍａｃｉａ）を用い、最終貯蔵緩衝液（０．２Ｍ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ＨＥＰ ＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．０）に濃縮し、−８０ ℃で貯蔵した（０．５２ｍｇ／ｍｌの最終濃度）。前記手法は、ＳＤＳ−ＰＡＧ Ｅによって評価して実質的に均一になるまで精製された、培養細胞５００ｍｌ当 たりＰＴＰ−１Ｂ融合蛋白質ほぼ５ｍｇを生じた。 ＰＴＰ−１Ｂ活性のアッセイ 試料のＰＴＰ−１Ｂ酵素活性を以下の通りに１マイクロリットルプレートでア ッセイした。 Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅ ｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用い、ＰＴＰ−１Ｂ酵素調製物の蛋白質濃度を測定した 。各試料のアリコットを採取し、活性アッセイ緩衝液（１００ｍＭ酢酸ナトリウ ム、ｐＨ６．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ＴＸ−１００［Ｉｎｔｅｒｎａｔ ｉｏｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．］および１５ｍＭ ｂ ＭＥ）を用いて２ｍｇ蛋白質／ ｍｌまで希釈してＰＴＰ−１Ｂストック溶液を得た。 １０ｍｌのＰＴＰ−１Ｂストック溶液、１０ｍｌの９ｍＭｐ−ニトロフェニル ホスフェート((ｐＮＰＰ)、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏ ｕｉｓｅ，ＭＯ)、および８０ｍｌの活性アッセイ緩衝液を含有する１００ｍｌ 反応混合物を調製した。反応を穏やかに混合し、３７℃で６５分間インキュベー トした。ｐＮＰＰからのホスフェートの酵素切断（チロシンホスフェート類似体 ）はこの基質における色変化で特徴付けられる。例えば、Ｉｍｂｅｒｔら，Ｂｉ ｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２９７：１６３−１７３（１９９４）：ＧｈｏｓｈおよびＭ ｉｌｌｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９４： ３６−４４（１９９３）：Ｚａｎｋｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２： ２３５−３９（１９９２）。 １０ｍｌの０．５Ｍ ＮａＯＨ／５０％ ＥｔＯＨ溶液１０ｍｌの添加によっ て反応を停止させた。酵素活性を測定するために、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖ ｉｃｅｓ Ｔｈｅｒｍｏｍａｘ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｍｅｎｌｏ Ｐａ ｒｋ ＣＡ）を用い、反応の吸光度の読みを４０５ｎｍで測定した。 実施例４ ＨｅＰＴＰ遺伝子クローニングおよび蛋白質精製 以下の手法を行って、ＰＴＰａｓｅ阻害アッセイにおける基質で使用するため に、蛋白質チロシンホスファターゼＨｅＰＴＰを組換えにより生成させ精製した 。 Ａ．ＨｅＰＴＰ ｃＤＮＡの生産 文献に記載されたよく知られた方法によって、ＨｅＰＴＰの全長ｃＤＮＡクロ ーンを生成させる。例えば、Ｚａｎｋｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２ ：２３５−２３９（１９９２）参照。別法として、例えば、１００ｍｇのポリ（ Ａ）+ＲＮＡおよびＰＣＲ増幅のための後記プライマーを用い、ＨｅＰＴＰ ｃ ＤＮＡを前記実施例に記載したごとくに生成させる。これらのまたは他の手段に よって単離したＨｅＰＴＰ ｃＤＮＡを用いて、本明細書に記載するごとくにＨ ｅＰＴＰを組換えにより生成させる。 Ｂｒｅｎｔ Ｚａｎｋｅ博士によって提供された単離ＨｅＰＴＰをＰＣＲを用 いて増幅した。２種のプライマーを合成して、この遺伝子の公表されたＤＮＡ配 列に基づき、ＨｅＰＴＰ暗号配列を増幅した。Ｚａｎｋｅら（１９９２）、前掲 ＮＤＥ２７６０．３（Ｎ3）（配列番号：３） ５’ＣＣＴＣＣＡＴＡＴＧＧＴＣＣＡＡＧＣＣＣＡＴＧＧ３’ＢＡＭ２７６０． ２（Ｂ2）（配列番号：４） ５’ＴＴＡＴＧＧＡＴＣＣＡＧＧＧＴＧＧＣＡＧＧＧＧＴＣＡＧＧ３’ 非暗号ストランドにハイダリダイズする最初のプライマーはＨｅＰＴＰ暗号配 列の５’部分に対応し、クローニングを容易にするための、開始コドンの上流の ＮｄｅＩ制限部位をコードする。暗号ストランドにハイダリダイズする第２プラ イマーはＨｅＰＴＰ暗号配列の３’部分に対応し、ＨｅＰＴＰ終止コドンから下 流のＢａｍＨＩ制限部位をコードする。 ２００ｎｇのＨｅＰＴＰ ｃＤＮＡ、０．２ｍｌの各ｄＮＴＰ、３０μＭの各 プライマー、１×Ｖｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ緩衝液、および２ユニットＶｅ ｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を含有 する８７μｌ ＰＣＲ反応混合物を以下の通りに増幅させた：１）５分間の９４ ℃変性；および２）１分間の９４℃変性、１分間の５５℃アニーリング、および １分間の７２℃伸長の１５サイク ル。 Ｂ．ＨｅＰＴＰ発現ベクターの生成 得られた１１１５塩基対ＰＣＲ産物をＢａｍＨＩおよびＮｄｅＩ（Ｎｅｗ Ｅ ｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化し、ゲル精製し、ＢａｍＨＩ／ＮｄｅＩ −消化ｐＥＴ１２ａ発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）に連結した。ｐＥＴ１２ａ −ＨｅＰＴＰと命名した得られたプラスミドのインサートの完全な配列決定によ り、ＨｅＰＴＰ ｃＤＮＡの同定および適当な向きおよびリーディングフレーム での挿入が確認された。 Ｃ．組換えＨｅＰＴＰ蛋白質の発現および精製 イー・コリ株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ） をプラスミドｐＥＴ １２ａ−ＨｅＰＴＰで形質転換し、１００ｍｇ／ｍｌアン ピシリンを補足したＬｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉブロス中、激しく撹拌しつつ３ ７℃で増殖させた。培養が０．７−１のＯ．Ｄ．600に達すると、ＨｅＰＴＰ蛋 白質の生産を０．１ｍｌ ＩＰＴＧと共にインキュベートした。３７℃における ３時間のさらなる培養の後、細菌をペレット化した。 細菌ペレットを、１２．５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ ＥＤ ＴＡ、ｐＨ７．０、１５ｍＭ ｂｍｅおよび１ｍＭ ＰＭＳＦよりなる１０×（ ｗ／ｖ）溶解緩衝液に再懸濁した。わずかな清澄化が観察されるまで（ほぼ３分 ）溶解物を（氷上で）音波処理し、次いで、１０，０００ｒｐｍにて１０分間遠 心した。上清を緩衝液Ａ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、および１５ｍＭ ｂｍｅ）で１：４希釈した。 ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、一次精製を 達成した。希釈上清をカラムに負荷した後、カラムを１０ベッド容量の緩衝液Ａ で洗浄した。次いで、ＨｅＰＴＰ蛋白質を、緩衝液Ａおよび緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ ＋１ＭＮａＣｌ）の直線グラジエントを用いて溶出させた。蛋白質を含有する溶 出画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびクーマシーブルー染色（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｐｈａｓｔ Ｓｙｓｔｅｍ）によって同定し：画分中のＨｅＰＴＰ活性を、後記 するＨｅＰＴＰアッセイを用いて同定した。ＨｅＰＴＰの溶出は約２３−３０％ 緩衝液Ｂで起こった。 ＰＴＰａｓｅ活性を含有する画分をプールし、ＴＢ緩衝液（２０ｍＭトリス、 ｐＨ８、および１５ｍＭ ｂｍｅ）で１：４希釈し、さらなる精製のために１０ ｍｌ Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に負荷した。負荷の後、カラムを３ベッド容量の ＴＢ緩衝液で洗浄した。前記したごとくに緩衝液Ａおよび緩衝液Ｂの直線グラジ エントを用い、ＨｅＰＴＰ蛋白質をカラムから溶出させ、前記したごとくに蛋白 質含有量およびＰＴＰａｓｅ活性につき画分をアッセイした。ＨｅＰＴＰの溶出 は約２５％緩衝液Ｂで起こった。ＨｅＰＴＰ含有画分をプールし、１ｍｌ Ｈｉ −ＴｒａｐＱカラム（プレパックしたもの、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、最終 貯蔵緩衝液（０．２Ｍ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡお よび５ｍＭ ＤＴＴ、ｐＨ７．０）に濃縮し、−８０℃で貯蔵した（最終濃度３ ．１２７ｍｇ／ｍｌ）。該手法により、２リットルの培養当たり、ほぼ５ｍｇの ＨｅＰＴＰ蛋白質を得た。 ＨｅＰＴＰ活性のアッセイ ＰＴＰ−１Ｂ反応で使用した９ｍＭ ｐＮＰＰに代えて２０ｍＭ ｐＮＰＰで 置き換えた以外は、ＰＴＰ−１Ｂにつき記載したごとくにＨｅＰＴＰ酵素活性を アッセイした。 実施例５ イン・ビトロＰＴＰａｓｅ阻害アッセイ 実施例３および４に記載したＰＴＰ−１ＢおよびＨｅＰＴＰ 活性アッセイの修飾を用いて、ＰＴＰ−１ＢおよびＨｅＰＴＰのＰＴＰａｓｅ活 性を阻害する、実施例２のケイ皮酸誘導体化合物のごとき、本発明の化合物の能 力を測定した。 まず、０．００１ミリモルのケイ皮酸誘導体（または他のＰＴＰａｓｅ阻害剤 化合物）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解させて、１０ｍＭストック溶液を得た。 １０ｍＭストック溶液を用いて、変化させた濃度（１００μＭ、３３μＭ、１０ μＭ、３μＭ、１μＭ、０．３μＭ、０．１μＭ、０．０３μＭ、０．０１μＭ または０．００３μＭ）の阻害化合物を一連の他の同一のＰＴＰａｓｅ活性アッ セイ反応（マイクロタイターウェル中１００μｌ最終容量）に添加した。かくし て、各１００μｌ反応は、ＤＭＳＯ中の、１０μｌＰＴＰａｓｅ酵素ストック溶 液（２０ｎｇ／ウェルの最終ＰＴＰ−１ＢまたはＨｅＰＴＰ濃度）、７０μｌ活 性アッセイ緩衝液、１０μｌｐＮＰＰストック溶液（ＰＴＰ−１Ｂアッセイ用の ．９ｍＭの最終ｐＮＰＰ濃度およびＨｅＰＴＰアッセイ用の２ｍＭ）、および１ ０μｌの希釈された阻害剤化合物を含有した。ＧＳＴ／ＰＴＰ−１ＢまたはＨｅ ＰＴＰ酵素を反応混合物に添加して反応を開始させ、これを３７℃で６５分間イ ンキュベートし、停止させ、前記し たごとくに比色分析した。陽性および陰性対照として、阻害剤化合物を含まない １０μｌ ＤＭＳＯを含有する、あるいは本発明の阻害剤化合物の代わりに置き 換えた既知ＰＴＰａｓｅ阻害剤バナデート（最終濃度．５ｍｌ）を含有する反応 を行った。 ＰＴＰａｓｅ活性の５０％を阻害するのに必要な阻害剤化合物の濃度（ＩＣ５ ０）を以下の通りに測定した。まず、バナデート対照反応からの吸光度の読みを ベースラインとして処理し、実験反応の吸光度の読みから差し引いた。次いで、 各反応につき、パーセント阻害を以下の式を用いて計算した。 １００×［１−（Ｏ．Ｄ．405反応／Ｏ．Ｄ．405ＤＭＳＯ）］ テストした各阻害剤化合物につき、化合物の種々の希釈物のために計算したパ ーセント阻害の最良フィットコンピューター解析からＩＣ５０濃度を計算した。 特定のＰＴＰａｓｅにつき１０μＭ未満（最適には５μＭ末満）のＩＣ５０を 有する阻害剤化合物をそのＰＴＰａｓｅ酵素の高度に有効な阻害剤として評点を 与え、それは本発明の好ましい阻害剤である。表２は、本発明の多数の式ＩＩ（ 図４）のケイ皮酸誘導体化合物についてのＩＣ５０濃度を報告する。 実施例６ さらなるケイ皮酸誘導体化合物の合成およびスクリーニング 実質的には実施例２に記載したごとくに、Ｕｇｉ反応組合せ合成を用いてさら なるケイ皮酸誘導体化合物を合成した。式３のアルデヒド化合物（図４）を選択 して、Ｒ1＝３−（３−トリフルオロメチル）フェノキシフェニル：４−（ドエ チルアミノ）フェニル；４−（メチルチオ）フェニル；３−（４−ブチルフェノ キシ）フェニル；３−（４−メトキシフェノキシ）フェニル；３−（４−クロロ フェノキシ）フェニル；３−（３，４−ジクロロフェノキシ）フェニル；および ３−（３，５−ジクロロフェノキシ）フェニルを供した。実施例２に記載した８ 種の商業的に入手可能なイソシアニド試薬のうちの７種を使用した（１，１，３ ，３−テトラメチルブチルイソシアニドは選択しなかった）。メタ−およびパラ −カルボン酸ｔ−ブチルシンナメートを実施例１に記載したごとくに合成して、 式５の酸試薬を供した。 式ＩＩの合成した化合物を、実施例２に記載したごとくに、１０ｍＭの有効濃 度にてＰＴＰ−１ＢおよびＨｅＰＴＰにつきスクリーニングした。これらの化合 物のいずれもこの最初のス クリーニングにおいてこれらの２種の酵素に対して実質的ＰＴＰａｓｅ阻害活性 を示さなかったので、反応生成物はさらに特徴付けしなかった。 実施例７ さらなるケイ皮酸誘導体化合物の合成およびスクリーニング 実質的に実施例２に記載したごとくに組合せＵｇｉ反応を用いて、さらなるケ イ皮酸誘導体化合物を合成した。図４を再度参照し、式３のアルデヒド試薬を選 択して、以下のＲ1置換基を供した： ３−（Ｎ−メチルインドリル） ３−（Ｎ−アセチルインドリル） ３−（インドリル） ４−トリフルオロメチルフェニル ２−ナフチル １−ナフチル ４−（ジメチルアミノ）フェニル ３，４，５−トリメトキシフェニル ２，４，５−トリメトキシフェニル ２，４，６−トリメトキシフェニル ２，３，４−トリメトキシフェニル ２，４，６−トリメトキシフェニル ３，４，５−トリヒドロキシフェニル 実施例２に記載した８種の商業的に入手できるイソシアニド試薬のうち７種を 選択して、Ｒ2置換基を供した（１，１，３，３−テトラメチルブチルイソシア ニドは選択しなかった）。オルト−およびパラ−カルボン酸ｔ−ブチルシンナメ ートを実施例１に記載したごとくに合成して式５の酸試薬を得た。 実施例２に記載したごとくに、１０ｍＭの有効濃度にてＨｅＰＴＰ阻害活性に つき合成化合物をスクリーニングし、多数の化合物は実質的ＨｅＰＴＰ阻害活性 を示した。例えば、Ｒ1＝２，４，５−トリメトキシフェニルの反応生成物はＲ2 ＝ｎ−ブチル、ベンジルまたはシクロヘキシルである場合に６０−６５％ＨｅＰ ＴＰ阻害剤を示した；Ｒ1＝２，４，６−トリメトキシフェニルである反応生成 物はＲ2＝ｔ−ブチル、シクロヘキシル、またはベンジルである場合に５０−７ ０％ＨｅＰＴＰ阻害を示した；Ｒ1＝２，３，４−トリメトキシフェニルである 反応生成物はＲ2＝ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、またはベンジルである場合に４０ −５５％ＨｅＰＴＰ阻害を示した。 さらなる分析のために少なくとも１種の化合物を選択し、再合成し、質量分析 およびＮＭＲによって確認した。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ３．７６−３．８４（３×Ｓ、９Ｈ）；４．４ ２（ｍ，２Ｈ）；５．６２（ｓ，１Ｈ）；６．４１（ｄ，１Ｈ）；６．７８（ｓ ，２Ｈ）；７．１４−７．９３（ｍ，１０Ｈ） Ｍ．Ｓ．５０４．２（計算値）；５０３．０（観測値） この化合物についてのＨｅＰＴＰａｓｅ阻害化合物は実施例５に記載したごと くに測定し、表２に報告する。 実施例８さらなるメタ−置換ケイ皮酸誘導体化合物の合成およびスクリーニング Ｕｇｉ反応によって、本発明のさらなるメタ−置換ケイ皮酸 誘導体化合物を合成し、これまでの実施例に記載したごとくにＰＴＰａｓｅ阻害 活性につきスクリーニングした。さらなる特徴付けのために選択した４種のかか る化合物につきＮＭＲおよび質量分析データを以下に記載する。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ０．８６（ｔ，３Ｈ）；１．２０−１．４２（ ｍ，４Ｈ）；３．１６（ｍ，２Ｈ）；５．５１（ｓ，１Ｈ）；５．９２（ｓ，２ Ｈ）；６．５６（ｄ，１Ｈ）；６．７７（ｄ，１Ｈ）；６．８４（ｄ，１Ｈ）； ６．８５（ｓ，１Ｈ）；７．４３（ｔ，１Ｈ）；７．６６（ｄ，１Ｈ）；７．７ ３（ｄ，１Ｈ）；７．８４（ｄ，１Ｈ）；８．０７（ｓ，１Ｈ） Ｍ．Ｓ．４２５．５（計算値）；４２３．０（観測値） 1Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ3ＯＤ）：ｄ１．３２（ｓ，９Ｈ）；２．６１２（ｓ，３ Ｈ）；５．９３（ｓ，１Ｈ）；６．５（ｄ，１Ｈ）；７．２２−８．２６（ｍ， １１Ｈ） Ｍ．Ｓ．４６０．６（計算値）；４６０．０（観測値） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ３．８５（ｓ，２Ｈ）； ５．７８（ｓ，１Ｈ）；６．５８（ｄ，１Ｈ）；７．４１−８．１２（ｍ，８Ｈ ） Ｍ．Ｓ．４５１．２（計算値）；４５０．６（観測値） 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ１．０９−１．９１（ｍ，１０Ｈ）；３．６３ （ｍ，１Ｈ）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；５．６２（ｓ，１Ｈ）；６．５６（ｄ， １Ｈ）；６．７４（ｄ，１Ｈ）；６．８４ （ｄ，１Ｈ）；７．０３（ｓ，１Ｈ ）；７．４３（ｔ，１Ｈ）；７．６４（ｄ，１Ｈ）；７．７４（ｄ，１Ｈ）；７ ．８４（ｄ，１Ｈ）；８．０６（ｓ，１Ｈ） Ｍ．Ｓ．４５１．２（計算値）；４５１．０（観測値） 実施例５に記載したごとくに測定した、ＨｅＰＴＰに対するこれらの４種の化 合物のＰＴＰａｓｅ阻害活性を表２に記載する。 実施例９２−フリルアクリル酸誘導体合成およびＰＴＰａｓｅ阻害活性についての初期ス クリーニング 実施例１に記載したごとくに合成した以下のフリルアクリル酸誘導体をカルボ ン酸試薬として使用した以外は、実施例２に記載したごとくに組合せＵｇｉ反応 を用いて、２−フリルアクリル酸誘導体化合物を合成した。 かくして、図２に示したように、以下の式（ＩＩＩ）を有する化合物を組合せ 反応によって合成した。 合成した化合物を前記したごとくにＰＴＰ−１ＢまたはＨｅＰＴＰ阻害活性に つき５．０ｍＭ濃度でスクリーニングした。表３に記載するスクリーニングアッ セイの結果は、フリルアクリル酸誘導体が効果的なＰＴＰａｓｅ阻害化合物であ ることの指標を供する。 実施例１０ 商業的に入手できるアクリル酸のＰＴＰａｓｅ阻害活性 前記したイン・ビトロＨｅＰＴＰ阻害アッセイを用い、種々の商業的に入手で きる種々のアリールアクリル酸の新規ＰＴＰａｓｅ阻害活性を示す。表４に示す ごとく、６０を超えるかかる酸の５０マイクロモル濃度は測定可能なＨｅＰＴＰ 阻害活性を有していた。ケイ皮酸およびフリルアクリル酸誘導体に加え、チエニ ルアクリル酸およびピリジルアクリル酸誘導体は測定可能なＨｅＰＴＰ阻害活性 を有することが示された。総じて、このデータは、ここに特別に例示したもの（ 例えば、別の芳香族部分、置換基、および／または置換パターンを有するもの） およびここに特別に例示したアリールアクリル酸の誘導体に加えて、アリールア クリル酸がＰＴＰａｓｅ阻害活性を有するという徴候を提供する。 表４に提示したデータより、本発明は、新規アクリル酸化合物および式（ＡＡ ）： ［式中、Ｘおよびｎは式（Ａ）で定義したに同じ、前掲、ここにｍは０ないし４ の整数であり、ここに、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は水素および／または芳香 環（ピリジル、フリル、フェニル、チオフェニル）の１以上の独立して選択され る適当な置換基（例えば、電子吸引基および／または供与基、極性基、カチオン および／またはアニオン基、酸性および／または塩基性基、親水性基および／ま たは疎水性基、水素結合ドナーまたはアクセプター、芳香族基等）または異なる ＰＴＰａｓｅ酵素に向けられたかかる阻害性化合物の効力、選択性、特異性等を 最適化するために選択されたアルケン炭素を表す］ のアクリル酸についての新しい用途を共に提供することが明らかであろう。例え ば、ＲｏｂｅｒｔｓおよびＰｒｉｃｅ， Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｄｒｕ ｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｓｉｌｖ ｅｒｍａｎ，Ｒ．Ｂ．，Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ， Ａｃａｄｅｍｉ ｃ Ｐｒｅｓｓｍ １９９２参照。 実施例１１ トリペプチドアミドケイ皮酸誘導体 トリペプチドアミドケイ皮酸誘導体のライブラリーを合成し、ＰＴＰａｓｅ阻 害活性につきアッセイした。 ライブラリー設計 一般式ＩＶ（ここに、Ａ1、Ａ2およびＡ3はアミノ酸側鎖を表す）： を有する、ｐ−カルボキシシンナメートを持つＮ−末端においてアシル化したト リペプチドアミドのライブラリーをよく知られた手段によって合成した。Ｋｎｏ ｒｒら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０：１９２７−３０（１９８９ ）参照。より詳細には、（アミノ酸側鎖Ａ1を有する）第１のアミノ酸部位のカ ルボン酸基をアミン結合基を有する商業的に入手可能な樹脂基質に連結し；しか る後、（側鎖Ａ2およびＡ3を有する）２つのさらなるアミノ酸部位を順次第１ア ミノ酸にカップリングさせた。ケイ皮酸部位は、実施例１に記載したカルボン酸 試薬との反応によって、第３アミノ酸部位に結合させた。 最後に、樹脂基質およびケイ皮酸部位のｔ−ブチル保護基を乾燥した酸での処 理によって除去した。 ライブラリー化合物は式（ＡＡ）（前掲）（式中、１のＲ’置換基はトリペプ チドアミドであって、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’の残りは水素である）のもの であることが分かる。同様に、ライブラリー化合物は式（Ｉ）（前掲）（ここに 、式（Ｉ）のＲ3は式（ＩＲ）を有し、Ｒ1およびＲ2は前記したごとく独立して 選択される。トリペプチドアミドのアミノ酸置換基は、種々の側鎖官能基を有す る化合物のライブラリーを生じるように選択 した。特に、ロイシン（Ｌ）は親油性のために、チロシン（Ｙ）は芳香族構造の ため、グルタメート（Ｅ）はアニオン性電荷のため、リシン（Ｋ）はカチオン性 特徴のため、およびグリシン（Ｇ）は立体配座の柔軟性のために選択した。該ラ イブラリーは、５つの選択したアミノ酸を用いて合成できる全ての１２５のユニ ークなトリペプチドアミド化合物を含有した。 阻害アッセイの結果 １０ｍＭ最終濃度の各トリペプチドアミドを用い、１２５の化合物のライブラ リーをここに記載したごとくにＰＴＰ−１Ｂ阻害活性につきアッセイし、化合物 をそれらの観察された阻害活性に基づいて、ランク付けした。図５は、ライブラ リーの１２の最良のおよび最悪のＰＴＰ−１Ｂ阻害剤のパーセント阻害を示す。 ＰＴＰ−１Ｂの最も優れた阻害は、化合物Ｃｉｎｎ−ＧＥＬ（９６％）およびＣ ｉｎｎ−ＧＥＥ（９５％）につき観察され、その構造を以下に示す。 ライブラリーからのＰＴＰａｓｅ阻害の全部の分析は、効果的なＰＴＰ−１Ｂ 阻害剤の設計についてのかなりのガイダンスを提供する。例えば、グルタメート 残基の顕著な豊富さはＰＴＰ−１Ｂ阻害剤のトップの１０パーセント（１２化合 物）で観察された。より微妙なのは、この残基で観察された位置選択性であった 。トップの１２の化合物のうちの８つは、シンナメートキャップに隣接する第３ 位にグルタメートを有する。しかしながら、２つの最も優れた阻害剤はこの位置 選択性を欠く。 第１および第２位にグルタメート以外の残基を有する化合物 は、リシン（この残基はライブラリーの最も活性な配列のいずれにも存在しなか った）の顕著な例外を除き、依然として有意なＰＴＰａｓｅ阻害活性を有した。 事実、リシンは阻害活性には有害なようで、ライブラリーの最も貧弱な阻害剤に 豊富である。かくして、リガンド電荷は化合物のＰＴＰ−１Ｂ阻害活性を測定す るのに影響を及ぼす。 ＰＴＰ−１Ｂ阻害活性に対するアミノ酸置換基の電荷の影響は、ＰＴＰ−１Ｂ で利用できる構造データを考慮すると、予測できない。推定ＰＴＰ−１Ｂ活性部 位を含有するキャビティーを囲む蛋白質表面の電子密度地図は、正に荷電した残 基の過度を明らかにする。 逆相ＨＰＬＣによって精製された２つの最良および最悪のトリペプチドアミド 化合物の速度論的解析は、最初のスクリーニングデータと一致した。化合物Ｃｉ ｎｎ−ＧＥＬおよびＣｉｎｎ−ＧＥＥは、各々、４９０ｎＭおよび７９ｎＭのＫi を有した。両化合物はｐＮＰＰ基質と競合した。対照的に、２つの最悪の阻害 剤、Ｃｉｎｎ−ＬＹＫおよびＣｉｎｎ−ＬＧＫは４９ｍＭおよび４６ｍＭのＩＣ ５０を融資、混合された非競合挙動を示した。かくして、ライブラリーにおいて は約１０００倍範囲の 活性であるようである。活性の同様の範囲が他のトロシンホスファターゼに対す る阻害剤のこのライブラリー内で観察された。 前記実施例は、選択的に設計された化合物（１２５の化合物）の比較的小さい ライブラリーを用いる比較的迅速なスクリーニング手法が、個々のＰＴＰａｓｅ 酵素の効果的な阻害剤の設計で有用なガイダンスを提供するのに十分であること を示した。 実施例１２ ＭＬＲ細胞増殖阻害アッセイ 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを用いて、本発明の化合物の免疫変調特 性を証明した。Ｍｉｓｈｅｌｌ ＆ Ｓｈｉｉｇｉ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔ ｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ：Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，１６３−６４頁（１９８０）参照 。また、Ｓａｓａｋｉら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４７：２０８−２１５ （１９９５）；Ｃｏｌｉｇａｎら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｖｏｌ．１．，Ｃｈａｐｔ．３， Ｓｅｃｔｉｏｎ ３ ．１２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，（１９９１）；Ａｂｂａｓら，Ｃｅ ｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，フィラデ ルフィア；Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，９９−１０４頁（１９９１）参 照 Ｂａｌｂ ＣおよびＣ５７ＢＬ６マウス、２つの区別される同系繁殖株から脾 臓を摘出した。組織培養フードにおいて、微細なスクリーンを通して脾臓を穏や かに潰して１０ｃｍのペトリ皿中のハンクスのバランス生理食塩水（Ｂｉｏ ｗ ｈｉｔｔａｋｅｒ １０−５０８８）培地に入れた。赤血球細胞を低張ショック によって調製物から溶解させ、次いで、１０×濃縮ＰＢＳ溶液を添加して、浸透 圧を回復させ、続いて４ｍｌのハンクスのバランス生理食塩水（ＢＳＳ）を添加 した。次いで、細胞調製物をピペットで吸い上げたり吸い下ろしたりした。死滅 した赤血球細胞をピペットの側面に付着させた。次いで、細胞をＢＳＳ中で２回 洗浄した。 少数の（２×１０7）のＢａｌｂ Ｃ細胞（バックグラウンド対照用）および 全てのＣ５７ＢＬ６に２００ラドを照射して細胞増殖を終止させた。これらの損 傷細胞（スティミュレータ ー細胞）および非照射Ｂａｌｂ Ｃ細胞（リスポンダー細胞）を、各々、１０％ 胎児ウシ血清、１％Ｌ−グルタメート、１０ｍＭ ｂｍｅおよび各１００ｍｇ／ ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを含むＩｓｃｏｖｅの培地に再懸濁した 。 ＭＬＲ反応（最終容量−１５０ｍｌ）を、以下のごとくに、９６−ウェル平底 マイクロタイタープレート中、三連で調製した。各ウェルにおいて、５０ｍｌ中 の５×１０5リスポンダー細胞；５０ｍｌ中の５×１０5非照射スティミュレータ ー細胞；および５０ｍｌの本発明の希釈された阻害剤化合物を添加した。阻害剤 化合物をまずＤＭＳＯに溶解させて、１００ｍＭストック溶液を形成させ、次い で、最終濃度１５００、５００、１６６、５５、１８および６マイクロモラーで ウェルに添加した。陰性対照につき、５０ｍｌの培地単独またはＤＭＳＯ単独を 阻害剤化合物の代わりに置き換えて反応を行った。陽性対照では、ＭＬＲ阻害剤 サイクロスポリンＡでの滴定を行った。 培養を５％ＣＯ2にて３７℃で４日間インキュベートした。共培養において、 リスポンダー細胞はスティミュレーター細胞の外来性ＭＨＣ分子を認識し、増殖 を開始し、免疫応答を備える。阻害剤化合物の増殖−阻害特性をアッセイするた めに、第 ４日に各ウェルを１ｍＣｉ［3Ｈ］−チミジンでパルスした。第５日に、［3Ｈ］ −チミジン添加の１６−１８時間後に、９６−ウェルハーベスターを用いてプレ ートをフィルターマットに収穫し、Ｐａｃｋａｒｄ Ｍａｔｒｉｘ気相シンチレ ーションカウンターで計数した。バックグラウンドを測定するために、スティミ ュレーター細胞に変えて照射したＢａｌｂ Ｃ脾臓細胞で置き換えて、陰性対照 を実行した。 シンチレーションカウンターデータの各三連セットにつき、平均値および標準 偏差を測定した。［3Ｈ］−チミジン取り込みを５０％低下させるのに必要な阻 害剤の量［ＩＣ５０濃度］をシンチレーションカウンターデータからグラフによ り決定した。表５は、本発明の多数のケイ皮酸誘導体化合物［一般式ＩＩ］につ いてのＩＣ５０濃度を報告する。ＩＣ５０≦１００ｍＭを有する化合物をＭＬＲ アッセイにおいて高度に効果的な阻害剤として評価した。 本発明を特別の具体例の点で記載してきたが、変形および修飾が起こるのは当 業者に理解される。例えば、本発明のＰＴＰａｓｅ変調化合物は非対称中心を有 し、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、および個々のエナンチオマーまたはジ アステレオマーとして生じ、全ての異性体形ならびにその混合物は本発明に含ま れる。 本発明は、特に、本発明の化合物に塩基性または酸性基が存在する場合に、そ の範囲内に医薬上許容される塩を含む。例えば、ＣＯＯＨのごとき酸性置換基が 存在する場合、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム等の塩は生物 学的受容体への投与で好ましい具体例と考えられる。［ピリジルのごと きアミノまたは塩基性ヘテロアリール基のごとき］塩基性基が存在する場合、塩 酸塩、臭化水素塩、酢酸塩、マレイン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、メタンスルホ ン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のごとき酸塩が生物学的受容体への投与で 好ましい形態と考えられる。 同様に、酸性基が存在する場合、化合物の医薬上許容されるエステル（例えば 、メチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ピバロイルオキシメチル、スクシニル等）が化合 物の好ましい形態と考えられ、かかるエステルは、持続性放出およびプロドラッ グ処方用のために溶解性および／または加水分解特性を修飾するのに当該分野で 公知である。 加えて、本発明のホスファターゼ変調化合物は水または通常の有機溶媒とで溶 媒和物を形成することができる。かかる溶媒和物は本発明の範囲内と考えられる 。 本発明はさらに組成物、例えば、本発明のホスファターゼ変調化合物を含む医 薬組成物を含む。医薬組成物とは、通常の非毒性担体、希釈剤、アジュバント、 ビヒクル等を含有する単位投与処方にて、哺乳動物受容体に、例えば、経口、局 所、非経口、吸入スプレイ、または直腸投与することができる組成物を 意味する。ここに使用する非経口なる用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、槽内 注射または注入技術を含む。 ＰＴＰａｓｅ変調化合物を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤 、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハ ードまたはソフトゼラチンカプセル、またはシロップまたはエリキシルとして経 口使用で適する形態とできる。経口使用を意図した組成物はいずれかの公知の方 法に従って調製でき、かかる組成物は、医薬上エレガントで口に合う製剤を供す るために甘味剤、フレーバー剤、着色剤および保存剤よりなる群から選択される １種以上の剤を含有することができる。錠剤は、錠剤の調製に適した非毒性の医 薬上許容される賦形剤と混合した有効成分を含有することができる。これらの賦 形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシ ウムまたはリン酸ナトリウムのごとき不活性希釈剤；顆粒化剤および崩壊剤、例 えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、スターチ、ゼラチ ンまたはアカシアおよび滑沢剤、例えば、ストアリン酸マグモシウム、ストアリ ン酸またはタルクであり得る。錠剤は被覆しないでもよいか、あるいは公知の技 術によって被覆して、 胃腸管における崩壊および吸収を遅らせ、それにより、長時間にわたって維持作 用を供することができる。例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリ ルジステアレートのごとき時間遅延物質を使用することができる。それらは、米 国特許第４，２５６，１０８号；第４，１６６，４５２号；および第４，２６５ ，８７４号に記載された技術によって被覆して制御放出のための浸透圧治療錠剤 を形成することもできる。 経口使用のための処方は、有効成分を不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシ ウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合したハードゼラチンカプセルとし て供することもでき、あるいは有効成分を水または油媒体、例えば、落花生油、 流動パラフイン、またはオリーブ油と混合するソフトゼラチンカプセルとして供 することもできる。 水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性化合物を含有 することもできる。かかる賦形剤は懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロ ースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカント ガムおよびアラビアガムであり；分散剤または湿潤剤は天然ホスファチド、例え ば、レシチンあるいは脂肪酸とアルキレンオキシドの縮合 生成物、例えば、ポリオキシエチレンステアレート、または長鎖脂肪族アルコー ルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチル−エンオキシセ タノール、または脂肪酸およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートの ごときヘキシトールに由来する部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物 、または脂肪酸およびヘキシトールアンヒドリド、例えば、ポリオキシエチレン ソルビタンモノオレエートに由来する部分エステルとエチレンオキシドとの縮合 生成物であり得る。また、水性懸濁液は１種以上の保存剤、例えば、エチルもし くはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１種以上のフレーバー剤、お よび１種以上のスクロースまたはサッカリンのごとき甘味剤を含有することもで きる。 油性懸濁液は、有効成分を植物油、例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油ま たはヤシ油に、あるいは流動パラフィンのごとき鉱物油に懸濁させることによっ て処方することができる。油性懸濁液は増粘剤、例えば、ミツロウ、ハードパラ フィンまたはセチルアルコールを含有することができる。前記したごとき甘味剤 、およびフレーバー剤を添加して、口に合う経口製剤を供することもできる。こ れらの組成物は、アスコルビン酸の ごとき抗酸化剤の添加によって調製することができる。 水の添加による水性懸濁液の調製に適した分散性粉末および顆粒剤は、分散剤 または湿潤剤、懸濁化剤および１種以上の保存剤と混合した活性化合物を供する 。適当な分散剤または湿潤剤はおよび懸濁化剤は既に前記したものが例示される 。さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、フレーバー剤および着色剤も存在させるこ とができる。 また、本発明の医薬組成物は水中油型エマルジョンの形態とすることもできる 。油相は植物油、例えば、オリーブ油または落花生油、あるいは鉱油、例えば流 動パラフィンまたはこれらの混合物とすることができる。適当な乳化剤は天然ガ ム、例えば、アカシアガムまたはトラガカントガム、天然ホスファチド、例えば 大豆レシチン、および脂肪酸およびヘキシトールアンヒドリド、例えばソルビタ ンモノオレエートに由来するエステルまたは部分エステルであり得る。また、エ マルジョンは甘味剤およびフレーバー剤を含有することができる。 シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレ ングリコール、ソルビトールまたはスクロースで処方することができる。かかる 処方は粘滑剤、保存剤およ びフレーバー剤および着色剤を含有することもできる。医薬組成物は滅菌注射水 性もしくは油性懸濁液の形態とすることができる。この懸濁液は、それらの適当 な分散剤または湿潤剤および前記した懸濁化剤を用い、公知の技術に従って処方 することができる。滅菌注射製剤は、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液 のごとき非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液また は懸濁液であってよい。使用できる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水 、リンゲル溶液および等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌不揮発性油 が溶媒または懸濁化媒体として通常使用される。この目的では、合成モノ−およ びジグリセリドを含めたいずれのブランドの不揮発性油も使用できる。加えて、 オレイン酸のごとき脂肪酸は注射剤の製剤で使用される。 該組成物はＰＴＰａｓｅ変調化合物の直腸投与用の坐薬の形態であってもよい 。これらの組成物は、薬物を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、 従って、直腸で融解して薬物を放出する適当な非刺激性賦形剤と混合することに よって調製することができる。かかる物質は、例えば、カカオバターおよびポリ エチレングリコールである。 局所的使用では、ＰＴＰａｓｅ変調化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー 、懸濁液の溶液等が考えられる。この適用の目的では、局所適用は嗽薬およびゴ ーグルを含む。 従って、添付の請求の範囲で出現するかかる制限のみが本発明に課せられる。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTIONArylacrylic acid derivatives useful as protein tyrosine phosphatase inhibitors Field of the invention   The present invention relates to a novel protein tyrosine phosphatase modulating compound, and a group comprising the compound. Provided are products and methods of making and using the same.Background of the Invention   Reversible phosphorylation and dephosphorylation of proteins modulate enzymatic activity in vivo Including universal biological mechanisms. Tonks et al. Biol. Che m. , 263 (14): 6722-30 (1988). Such reversible phosphorylation In general, protein kinases for phosphorylating proteins at specific sites (P K), and a protein phosphatase (PP) for removing a phosphate group. It is considered necessary. In general, Hunter, Cell, 80: 225-2. 36 (1995). Recently, humans have had as many as 2000 normal PK genes, And as many as 1000 PP genes. Same as above.   Serine / tyrosine kinase / phospha, one of the major classes of PK / PP Tase has been shown to play a very important role in regulating the mechanism . Cohen, Trends Biochem. Sci. , 17: 408-41. 3 (1992); Shenolikar, Ann. Rev .. Cell Biol. 10: 55-86 (1994); Bollen et al., Crit. Rev .. Bioc hem. Mol. Biol. , 27: 227-81 (1992). Them As the name implies, protein serine / threonine kinases and phosphatars The enzyme phosphorylates and dephosphorylates serine or threonine of the substrate protein. protein Inhibition of serine / threonine phosphatases and kinases has been described . For example, MacKintosh and MacKintosh, TIBS, 19 : 444-448 (1994).   Protein tyrosine kinase / phosphatase is used for normal and neoplastic cell growth And a second distinct family of key PK / PP enzymes that have been implicated in the control of growth Make a family. Fisher et al., Science, 253: 401-406 ( 1991). The protein tyrosine kinase (PTK) gene has an earlier evolutionary deadline, Has a degree of interspecies preservation. Hunter and Cooper, Ann. Rev .. B iochem. , 54: 897-930 (1985). PTK enzyme to tyrosine High specificity, usually serine, threonine or hydroxyproline Does not phosphorylate.   Protein tyrosine phosphatase (PTPase) originally used various artificial substrates. Used and identified and purified from cell and tissue lysates, Their dephosphorylation function in is not well characterized. PTK enzyme Tyrosine phosphorylation is usually associated with cell proliferation, cell transformation and cell differentiation. Therefore, it was estimated that PTPase was also associated with these events. Many PTPases This association has been confirmed today. For example, PTP-1B (its structure Was recently elucidated [Barford et al., Science, 263: 1397-1. 404 (1994); Hoppe et al., Eur. J. Biochem. , 223: 1069-77 (1994); Chernoff et al., Proc. Natl. Ac ad. Sci. USA, 87: 2735-39 (1990); Charbonn. eau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 5252-5256 (1989)]) is involved in insulin-induced oocyte maturation. It is shown to be. Cicillili et al., Proc. Natl. Aca d. Sci. USA, 87: 5514-18 (1990); Flint et al., Th. e EMBO J.C. 12: 1937-46 (1993). Insulin-induced eggs The mother cell maturation mechanism is based on the ability of PTP-1B to block S6 kinase activation. Has been associated with power.   Recently, Weiner et al. Natl. Cancer Inst. , 86: 3 72-8 (1994) shows a significant correlation between PTP-1B overexpression and breast cancer, more rigorously. Include PTP-1B overexpression and p185c-erbB-2(Excessive in 1/3 of human breast cancer patients A correlation between overexpression of (expressed PTK) was demonstrated. A similar correlation is p18 5c-erbB-2-Proven for associated ovarian cancer. Weiner et al., Am. J. Obstet. Gynecol. , 170: 1177-883 (1994).   Perhaps the best characterized PTPase molecule is leukocyte-common antigen C D45. CD45, which is expressed exclusively on hematopoietic cells, is the most abundant cell surface glycoprotein. It is one of white matter and functions as a critical component in lymphocyte signaling. See Trowbridge and Thomas, Ann. Rev .. Immunol. , 12: 85-116 (1994). In particular, CD45 is both T and B lymphatic Evidence suggests that it plays a central role in antigen-stimulated proliferation of spheres . Trowbridge and Thomas, supra, Kishihara et al., C. ell, 74: 143-56 (1993). Laboratory using CD45-deficient mice Investigation Involves CD45 Is Essential for Antibody- (IgE-)-Mediated Degranulation of Mast Cells It was shown that. Berger et al. Exp. Med. , 180: 471-6. (1994).   A recently discovered inducible lymphoid-specific protein tyrosine phosphatase (He PTP) was also associated with the immune response. HePTP is resting T and B phosphorus It is expressed on papocytes but not on non-hematopoietic cells. When stimulating these cells Thus, HePTP mRNA levels are increased 10-15 fold. Zanke et al., Eu r. J. Immunol. , 22: 235-239 (1992).   The activity of a number of other newly discussed phosphatases is currently under investigation. this Two of them: PTP-1C and Syp / PTP 1D / SHPTP2 / PTP2C has recently been identified as platelet-derived growth factor and Activation of the bark growth factor-induced response was associated. Li et al., Mol. Cell Biol. , 14: 509-17 (1994). Both of these growth factors are normal Cell processing and related conditions such as cancer and atherosclerosis Linked to the therapeutic potential of these PTPase enzyme inhibitors. Suggest.   More generally, PTPase is a type of cytokine (eg, IL-4) And it seems necessary for the mitogenic effect of interferon. Burke et al., B iochem. and Biophys Res. Commu. , 204 (1): 129-34 (1994).   More than 40 members of the PTPase family are eukaryotic, prokaryotic and Even in viruses have been identified. Barford et al., Supra. Noteworthy Ki, PTPase Yop2b is the pathogenic bacterium Erzini that causes glandular plague. It is an essential virulence determinant in the genus Yersinia. Bliska Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 1187-91 ( 1991).   Ratio of seven distinct transmembrane forms of protein tyrosine phosphatase (PTP) Comparison reveals that the extracellular segments of these proteins are very diverse Became. In contrast, the intracellular segment contains two essential cysteinyl residues. Including two conserved catalytic domains (except for HPTPb, Having only one in) and significant similarity. Fisher et al., Supra, also See Bardford et al., Supra. The variable non-catalytic segment of PTPase is PT By targeting Pase molecules to specific subcellular compartments or by enzymatic activity It appears to control the PTPase function via direct modulation. Flint et al. , The EMBO J .; , 12: 1937-46 (1993).   PTPase is believed to play a role in normal and neoplastic cell growth and proliferation Because of its fundamental role, drugs in the art that can modulate PTPase activity There is a demand. At a basic level, such agents are not Tyrosine Phosphatase and Quina in Pathways and Cell Growth and Proliferation It is useful for elucidating the exact role of ose. MacKintosh and Ma cKintosh, TIBS, 19: 444-448 (1994).   More importantly, modulation of PTPase activity has important clinical implications. For example, PTP-1B overexpression is associated with a neoplastic state, Modulates PTP-1B activity elucidates role of PTP-1B in these diseases And is needed to develop effective therapeutics for these disease states . An important role for CD45 in hematopoietic growth is also associated with autoimmune diseases Figure 2 shows therapeutic utility for PTPase inhibitors in disease. In mast cells Role of CD45 in Antibody-Mediated Degranulation 4 illustrates the therapeutic utility of ase inhibitors. Similarly, the role of HePTP in the immune response Perhaps the therapeutic utility of HePTP inhibitors in diseases associated with the immune system Show.   Because the PTPase protein is essential for virulence of pathogenic Ergeria strains, There are also antibiotic applications for PTPase inhibitor compounds. Again anti-neoplastic form The antibiotic suramin, which appears to have an active application, has recently been an excellent irreversible It was shown to be an effective non-competitive inhibitor. Ghosh and Miller, Bi ochem. Biophsy. Res. Commu. 194: 36-44 (1993).   PTPase has been linked to diabetic diseases. One of PTPase inhibitors An experiment with a family of vanadium derivatives has shown that oral azide can be used to treat hyperglycemia. Treatment against such compounds as an alternative to ubvant or insulin Show usefulness. Posner et al. Biol. Chem. , 269: 459 6-4604 (1994). However, such metal-containing inhibitors are rather unspecific. Act differently [Burke et al., Supra] and are similar for all PTPase enzymes. It is expected to work with efficacy.   In addition to vanadium derivatives, certain organic phosphotyrosine mimetics Such mimetic is converted to a polypeptide artificial PTPase having 6-11 amino acid residues. It has been reported that PTPase molecules can be competitively inhibited when incorporated into a substrate. I have. For example, the formula: A “natural” (phosphorylated tyrosine) PTPase substrate that can be demonstrated by Chemical formula: 11 containing phosphonomethylphenylalanine (Pmp) represented by Have been mimicked by body oligopeptides. Chatterjee et al., "Protein Phosphopeptide substrates and phosphonopeptide inhibitors of tyrosine phosphatase " Peptides: Chemistry and Biology [River And Smith ed.], 1992, Escom Science Publications hers: Leiden, The Netherlands, pp. 553-55; Burke et al., Biohe. mystery, 33: 6490-94 (1994). More recently, Burke Et al., Biochem. Biophys. Res. Commu. 204 (1): 1 29-134 (1994) has the structural formula: A Pmp moiety or more preferably a phosphonodifluoromethyl, represented by Phenylalanine (FTwoThe specific hexamer peptide sequence containing the Reported PTP-1B. However, such hexape Peptide inhibitors are nonetheless absent for PTPase modulation in vivo. Have a point. More specifically, hexapep described by Burke et al. Tide inhibitors are transmembrane and intracellular PTPase enzymes that are located in the cell membrane. Preferentially inhibits efficient translocation across cell membranes due to interaction with ins Large enough to be anionic. Facilitates movement across cell membranes, For inhibitors based on small organic molecules with fewer anionic molecules There is a demand to do.   For all of the above reasons, phosphatases of protein tyrosine phosphatase molecules A new drug that is particularly effective at modulating and There is a need in the art for reference compounds.                                Summary of the Invention   The present invention relates to one or more proteins, such as PTP-1B and / or HePTP. Modulates phosphatase activity of tyrosine phosphatase (PTPase) enzyme And particularly useful arylacrylic acid compounds and derivatives thereof. You. The present invention further provides salts, esters, solvates and the like of the compound, and the compound A composition comprising:   The present invention provides an aryl acrylate compound represented by the following formula (A) and a derivative thereof: Inhibits protein tyrosine phosphatase activity. [In the formula, when n = 0 or 1, and n = 1, X is CH or nitrogen (e.g., That is, the aryl group is a phenyl or pyridyl group, respectively), or n = 0, X is oxygen or sulfur (ie, the aryl group is Lil again Represents a thiophenyl (thienyl) group).   “Derivatives” are defined in Table 4 and Example 11 in more detail. At one or more atoms of an aromatic ring (eg, hydroxy, halo, amino, Aryla of formula (A) with substitutions (eg, with boxy, nitro, cyano, methoxy, etc.) Means crylic acid. Further, “derivatives” include, for example, electron withdrawing groups (eg, C 1, F, Br, CFThree, Phenyl) or an electron donating group (eg, CHThree, Alkoki Compounds of formula (A) having a substitution at the alkene carbon in b): The acid group is replaced, for example, by a tetrazolyl group, or A compound of formula (A) esterified with   In one embodiment, the present invention provides a compound of formula (AA): [Where, (A) n = 0 or 1,     (I) when n = 1, X is selected from the group consisting of N and CH;     (Ii) when n = 0, X is selected from the group consisting of O and S; (B) m is an integer from 0 to 4 and each R 'is independently halo, nitro, amino, Hydroxy, carboxy, C1-11Alkyl, carboxy C1-6Alkyl, -CH = CHCOOH, C1-6Alkyloxy, trihalomethyl, formyl, C1-6Al Kill carbonyl, and hydroxy C1-6Selected from the group consisting of alkyl; (C) R "and R" "are independently hydrogen, halo, cyano, phenyl, and C1-11Selected from the group consisting of alkyls] And a protein tyrosine phosphatase modulator having the formula: Preferred sets of the invention The composition is mixed with a pharmaceutically acceptable diluent, adjuvant, or carrier. (Or a pharmaceutically acceptable salt, ester, or solvate of the compound) A composition comprising:   Preferred Aryl Acrylic Acid Modulating Protein Tyrosine Phosphatase Activity of the Invention Derivative compounds have the following general structural formula (I): [Wherein (a) R1, RTwoAnd RThreeAt least one of the substituents has the formula (IR) , (Wherein n = 0 or 1, and when n = 1, X consists of N and CH X is selected from the group consisting of O and S when selected from the group and n = 0. (B) R1, RTwoAnd RThreeThe rest of the     (I) hydrogen, C1-11Alkyl,     (Ii) substituted C1-11Alkyl (substituents are hydroxy, halo, mercap , Amino, carboxy, carbamoyl, Guanidino, aryl, hydroxyphenyl, C1-6Alkyloxy, C1-6Al Kircio, C1-6Alkylamino, phenyl C1-6Alkyloxy, phenyl C1- 6 Alkylthio and phenyl C1-6Selected from the group consisting of alkylamino) ,     (Iii) aryl,     (Iv) C1-11Alkylaryl,     (V) mono-, di- and tri-substituted aryl (substituents are independently C1-6A Alkyl, trifluoromethyl, hydroxy, halo, C1-6Alkyloxy, C1-6 Alkylthio, amino, C1-6Alkylamino, amino C1-6Alkyl, C1-6A Alkylcarbonyl, C1-6Alkylcarbonylamino, C1-6Alkyl aminocar Bonyl, carboxy and carboxy C1-6Alkyl)),     (Vi) CHTwoCOXRFour(X is oxygen or NH;FourIs independently hydrogen , C1-C11Alkyl, aryl and C1-C11Selected from alkylaryl ); Selected from   The aryls of (ii), (iii), (iv), (v) and (vi) are independently Phenyl, naphthyl, pyridyl, furyl, Pyryl, thienyl, isothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tet Lazolyl, pyrazinyl, pyrimidyl, quinolyl, isoquinolyl, benzofuryl, Benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, benzodioxolyl, piperonyl, Isoindolyl, prenyl, carbazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, Select from the group consisting of xazolyl, benzothiazolyl, and benzoxazolyl And (C) R of formula (I)ThreeHas the formula (IR) and RTwoIs further of formula (B) Good, (Where RFiveAnd R6Is independently a group consisting of (b) (i) and (b) (ii) Selected from) Having.   In a preferred embodiment, R of formula (I)ThreeIs the formula: [Wherein, n and X are the same as those described above for formula (IR)] Having. In a preferred embodiment, RThreeIs a cinnamic acid substituent, ie, n = 1 and X = CH. Thus, these compounds have the general formula (II): [Wherein, R1And RTwoIs the same as defined for the compound of formula (I): belongs to.   The PTPase modulating compound of formula (II) has the general formula (IIA): [Wherein, R1And RTwoIs the same as the above definition] Is preferred.   The term "alkyl" as used herein refers to a branched chain having the specified number of carbon atoms Or linear and cyclic (eg, cycloalkyl) saturated aliphatic hydrocarbon groups, eg, For example, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (Pr), butyl (Bu), Methyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, isopropyl (i- Pr), isobutyl (i-Bu), tert-butyl (t-Bu), sec-butyl Butyl (s-Bu), isopentyl, cyclohexyl and the like.   The term “alkyloxy” or “alkoxy” is applied through an oxygen bridge Attached to an alkyl group as defined above with the indicated number of carbon atoms, e.g., methoxy Si, ethoxy, propylo Represents xy and the like.   The terms “alkylthio” and “alkylamino” are each a sulfur bridge And the above definition having the indicated number of carbon atoms attached through an amine bridge Represents an alkyl group. The amine bridge itself is replaced by an alkyl or aryl group. It may be replaced. Similarly, the term "amino" includes alkyl-substituted amino groups. Intended to   “Aminoalkyl” (eg, amino C1-6Alkyl) is the number indicated An amino group attached via an alkyl group as defined above having the carbon atom of The amino group is bonded to any carbon of the alkyl group.   The term "alkylcarbonyl" is an indicated number linked through a carbonyl group Represents an alkyl group as defined above having a carbon atom of "Alkylcarbonylamino The term `` is attached via the nitrogen atom of the amino group as defined above Represents an alkylcarbonyl group as defined above.   The term "alkylaminocarbonyl" refers to a nitrogen atom of an amino group as defined above. An alkyl group as defined above with the indicated number of carbon atoms attached through The nitrogen atom is a carbonyl group Represents a compound bonded through   “Carboxyalkyl” (for example, “Carboxy C1-6Alkyl)) Is a carbohydrate linked through an alkyl group as defined above having the indicated number of carbon atoms. A xy group, wherein the carboxy group is bonded via any carbon of the alkyl group. Represents   The term "aryl" refers to the group capable of forming a stable covalent bond with the aryl group. Including the indicated monocyclic, polycyclic, and heterocyclic aromatic groups covalently attached to some ring positions However, preferred points of attachment will be apparent to those skilled in the art (eg, 3-indolyl, 4-a Midazolyl).   The term "alkylaryl" is linked through an aryl group as defined above, Represents an alkyl group as defined above having the indicated number of carbon atoms, wherein the alkyl group is Bond at any position of the aryl group that can form a stable covalent bond with the kill group .   “Phenylalkyl” (for example, “phenyl C1-6Alkyloxy, Nil C1-6Alkylthio "," phenyl C1-6The term "alkylamino") A phenyl group bonded through an alkyl group as defined above having the specified number of carbon atoms. Wherein the phenyl group is bonded to any carbon of the alkyl group (the Alkyl groups are linked via oxygen bridges, sulfur bridges, amine bridges, etc. There).   Preferred protein tyrosine phosphatase activity modulating / inhibiting compounds of the present invention are Boxyl-substituted cinnamic acid, wherein the carboxyl ring substituent substitutes an amide. Derivatized to match. Some currently preferred forms of these compounds In an embodiment, the amide bond forms a carboxyl-substituted cinnamic acid moiety with a naturally occurring amino acid. Dipeptide or structurally similar or identical to a dipeptide or tripeptide Is attached to the tripeptide moiety.   Accordingly, the present invention provides a novel arylacrylic acid having phosphatase modulating activity. Is provided, as well as new phosphines of previously known arylacrylic compounds. A use for modulating vatase activity is provided.   Another embodiment of the present invention is directed to a PTPase of the present invention suitable for administration to a mammal. A composition comprising a modulator compound is provided.   The present invention further relates to the production of a compound of the present invention having PTPase modulation / inhibitory activity. Provide the law. In a preferred method, the compounds of the invention are combined with other component arrays. Synthesized from a number of structurally related compounds for subsequent evaluation. Quick go Enable In a preferred synthetic protocol, the acrylic acid moiety of the compound is , For example by esterification with a t-butyl protecting group. Or Thus, a preferred method of preparing the compounds of the present invention involves the use of a protected acrylic acid reagent. And, for example, removal of protecting groups by treatment of the precursor ester compound with an acid. If desired, such a method may further comprise the step of reducing the resulting acrylic acid product. It may include sterilization or salification.   Numerous other aspects and advantages of the present invention are described in detail below with reference to the drawings. Will become more apparent.   FIG. 1 shows the structures of the phosphotyrosyl structure and the cinnamic acid derivative of the present invention.   FIG. 2 shows a four-component Ugi reaction synthesis of the compounds of the present invention.   FIG. 3 shows the synthesis of an aryl acrylate reagent, which is a PTP of the invention. ase activity-modulated compounds were used to synthesize.   FIG. 4 shows a four-component Ugi reaction synthesis of a compound of the present invention, wherein cinnamic acid t -Use the butyl carboxylic acid reagent.   FIG. 5 shows the tripeptide cinnamamide derivative of the present invention at a concentration of 10 mM. Inhibition activity expressed as% inhibition. G Ripeptide amide compounds are identified by the letter C (p-carbo) followed by the three letter tripeptide notation. Xycinnamate).                                Detailed description   While not intending to be limited to any particular theory, substituted and unsubstituted acrylic acids, PTPase inhibitory activity of peroxyacrylic acid and derivatized arylacrylic acid , The arylacrylic acid moiety of such compounds and the natural target of the PTPase enzyme Steric hindrance and charge between phosphorylated tyrosine (phosphotyrosyl) moieties Attributed to child similarity. As shown in FIG. 1, the phosphotyrosyl residue is linked via an oxygen atom. And a phenyl component (box) covalently bonded to a phosphono component (circle). This The oxygen atom of is a phosphotyrosyl residue and a protein tyrosine phosphatase enzyme. It is thought to be the locus of chemical interaction between the catalytic domains. By comparison, para -Arylacrylic acid derivatives such as substituted cinnamic acids It has a phenyl component (box) covalently linked to an acid component (circle). Shown in FIG. Phosphono and corresponding carboxylic acid components, corresponding aromatic components, and oxygen And the corresponding alkene components of these parts are the catalytic domain of the PTPase enzyme. Phosphotyrosyl moiety that binds to That inhibit the PTPase activity of such enzymes It is believed that the crylic acid moiety has sufficient steric hindrance and molecular similarity .   The steric hindrance requirements of the arylacrylic acid PTPase inhibitors of the present invention, By assaying derivatives of such molecules for PTPase activity, Characterized. Importantly, the esterification of the carboxylic acid and / or the alkene Judgment that reducing the bond would substantially eliminate the PTPase inhibitory activity of these compounds Was done. Equally important is the aryl substituent of the PTPase inhibitors of the present invention. For, a measure of variability was determined to be acceptable. Thus, phosphotyrosyl In addition to the para-substituted phenylacrylic acid (cinnamic acid), which is very similar to the residue structure, Thus, ortho- and meta-substituted cinnamic acids were determined to inhibit PTPase activity. Was. In addition, unsubstituted and substituted furylacrylic acid, pyridylacrylic acid, Nylacrylic acid, and other acrylic acids, inhibit PTPase enzyme activity; Arylacryl having alkene carbon or substitution at more than one atom of the ring The acid was determined to inhibit PTPase enzyme activity.   Any of the methods may be used to synthesize the compounds of the present invention. Using conventional organic chemical synthesis, the compounds of the present invention can be obtained on a commercial scale. Conceivable. However, in a preferred embodiment, the PTPase of formula (I) The compound was filed on July 15, 1994 and published on January 26, 1995. International Patent Application PCT / US94 / 08141 [Publication No. WO95 / 02566] ] As described in Example 4], using a four component combinatorial array Ugi reaction synthesis. It is. Ugi et al., "Multicomponent Reactions In.   Organic Chemistry "in Endeavor, New S eries, Vol. 18, No. 3, Elsevier Science L td. , UK (1994).   Each component in a multi-component synthesis may have one or more common functional groups, such as amines, It consists of a series of pharmaceutical compounds having a aldehyde and the like. The synthesis involves the common use of various compounds. The functional groups react with each other to form product compounds having a common core structure It is carried out under conditions. More specifically, a series of reagents consisting of each individual component In addition, each reaction vessel of the array is added to multiple reaction vessels so that each Arrays to include unique combinations Let it form. The reagent components consist of unique products with a common core structure of interest. It is added under appropriate conditions as formed in the reaction vessel. Synthesis of synthesized analogs The count is equal to the product of the number of structural changes for each component in the array. Thus, a multi-component set The overlay array synthesis is a synthesis of multiple degrees of freedom of structural change with a core structure of interest. To provide a relatively simple and quick means for.   More specifically, to synthesize the compound of formula (I), the Ugi reaction shown in FIG. Where the four components of a given reaction are (a) an aldehyde of Formula 3; Commercially available Rink resin or other suitable solid support resin; (c) Isocyanates; and (d) acids of formula 5. In the first stage, the four components are In reaction, a compound of formula 6 is obtained. In a second stage, the component of formula 6 is converted to an acid, for example, CHTwoClTwoReacting with 10% trifluoroacetic acid in to obtain a compound of formula (I) . If desired, the compound is then esterified, salified, or formulated to give the compound Form the composition described herein.   In addition to the methods for synthesizing compounds described herein, the present invention provides a method for inhibiting PTPase. An in vitro approach to screening compounds for gender is provided. Preferred Cleaning method is quick It can be done quickly, with micromolar amounts of the compound of interest. Thus, the present invention Makes it possible to synthesize very large numbers of compounds quickly and inexpensively on a small scale. , Subject to rapid initial screening, followed by sufficient size screening To select protein tyrosine phosphatase-modulating compounds of particular interest Can be.   In addition, the PTPase inhibition assay was performed on two specific PTPase molecules (PTP IB and HePTP), but a number of additional PTPase enzymes It is understood that other PTPase molecules are identified and characterized. Assays and Other In Vitro and In Vivo PTPs Described herein An enzyme inhibition assay is performed with such other enzymes to determine the PTPase of the compound of the invention. Can exhibit modulation activity.   The following examples further illustrate aspects of the present invention. In Example 1, the aryl The synthesis of acrylate reagents is described, which reagents are used for the Ugi reaction synthesis of the compounds of the invention. Useful in In Example 2, a cinnamic acid derivative compound of the present invention was synthesized. The use of such aryl acrylate reagents is described.   Examples 3 to 5 show that the compounds of the present invention were used to modulate PTPase. Gender assay protocol. In particular, Example 3 shows PTPase activity Purification of a truncated PTP-1B fusion protein having The PTPase inhibitory activity of the compounds of the present invention was assayed using white matter. Implementation Example 4 describes the purification of a second recombinant PTPase enzyme, HePTP, which The compounds of the invention were assayed for PTPase modulating activity using a beam. Example 5 Specifically describes PTPase inhibition assays performed with PTP-1B and HePTP I do.   Examples 6 to 8 describe the synthesis and features of further cinnamic acid derivative compounds of the present invention. Describe the signing. Example 9 demonstrates the use of a number of furylacrylic acid derivative compounds of the present invention. Describes synthesis and characterization.   Example 10 demonstrates the PTPase of a variety of commercially available arylacrylic acids. Described are techniques that have demonstrated inhibitory activity.   Example 11 demonstrates the cinnamic acid derivatization of 125 synthesized using known protocols. Describe the library of the compound. The library contains a trivial list of significant functional changes. Consisting of a family of cinnamic acid derivatives having a peptide amide substituent. Example 1 As taught in US Pat. Small compound libraries screened for PTPase modulation activity Useful for designing PTPase-modulating compounds with enhanced activity against enzymes Provide useful information.   Example 12 shows that the compound of the present invention showed a whole cell growth inhibition Describe the essay.                                 Example 1                      Synthesis of aryl acrylate reagent   In the preferred embodiment described above, Ugi reaction synthesis (see FIG. 2) is used to formula ( A compound of formula I) is synthesized, wherein R of formula (I)ThreeIs the formula: [Wherein n and X are the same as defined in formula (IR)] Having. To synthesize such PTPase inhibitory activity using the Ugi reaction, Using an aryl acrylate reagent synthesized as shown below,ThreeProvided substituents .   Referring to FIG. 3, approximately 10 mmol of the aryl of general formula (I) Bromide compound, 12.5 mmol t-butyl acrylate, 20 mmol Dry triethylamine, 0.1 mmol palladium acetate, and 0.4 mmol A mixture of tri-o-tolylphosphine is prepared in a flask. The flask Is blown with argon and heated at 100 ° C. This reaction is a thin layer chromatography At about 2 hours after all aryl bromides It is apparent that the compound reacts to form a solid product. Et the solid product Extract with OAc and water, then adjust to pH 3 with 1N HCl. Yes The phases are filtered, dried over sodium sulfate and further dried by evaporation.   The first aryl bromide reagent of formula (I) is a methyl ester (ie, R = M e) if 0.5M LiO in a 1: 1 mixture of 1,4-dioxane: water Using H, the reaction product of the general formula (2) is lyophilized to give the desired acid test of the general formula (3). Take medicine. The reagent of the general formula (3) is dried, and its identity is determined by NMR and mass spectrometry. I confirm. The dried reagent of general (3) can be used for the Ugi reaction described herein. Suitable for use with carboxylic reagents in the synthesis. Exemplary NMR and mass fraction Analysis data is selected The following is for the compound.   H-NMR (CDClThree) D: 1.46 ppm (s, 9H); 6.42 ppm (D, 1H); 7.56-7.59 ppm (m, 3H); 8.12 ppm (d, 2H)   M. S. 248.3 (calculated): 247.0 (observed)   H-NMR (CDClThree) D: 1.45 ppm (s, 9H); 6.41 ppm (D, 1H); 7.41 ppm (t. 1H); 7.58 ppm (d, 1H); . 62 ppm (d, 1H); 8.04 ppm (d, 1H); 8.21 ppm (s, 1H)   M. S. 248.3 (calculated): 247.0 (observed)   H-NMR (CDClThree) D: 1.45 ppm (s, 9H); 3.84 ppm (S, 3H); 6.19 ppm (d, 1H); 7.36 ppm (t, 1H); . 43 ppm (t, 1H); 7.52 ppm (d, 1H); 7.86 ppm (d , 1H); 8.24 ppm (d, 2H)   H-NMR (CDClThree) D: 1.45 ppm (s, 9H); 6.21 ppm (D, 1H); 7.42 ppm (t. 1H); 7.47 ppm (t, 1H); 7.50 ppm (d, 1H); 8.06 ppm ( 8.42 ppm (d, 2H)   M. S. 248.3 (calculated): 247.0 (observed)   H-NMR (CDClThree) D: 1.46 ppm (s, 9H); 6.28 ppm (D, 1H); 7.03 ppm (d, 1H); 7.22 ppm (d, 1H); . 33 ppm (d, 2H)                                 Example 2First Screenini for Synthesis and PTPase Inhibition Activity of Cinnamic Acid Derivatives Ning   A cinnamic acid derivative compound was synthesized by a combined Ugi reaction, and the protein It was first screened for rosin phosphatase modulating activity.   Referring now to FIG. 4, the four reagent components of a given reaction are (a) an aldehyde of Formula 3; b) a commercially available Rink resin of formula 2; (C) an isocyanate of formula 4; and (d) a cinnamic acid derivative of formula 5. the first In the step, the four components are reacted to obtain a compound of the formula 6. In the second stage And converting the compound of formula 6 to CHTwoClTwoReacted with 10% trifluoroacetic acid (TFA) in To give a compound of formula II.   More specifically, as described in Table 1, a 0.5 M solution of each component is added to, for example, 0% . By dissolving 0.05 mmol of the components in 100 ml of a suitable preferred solvent To be prepared.   Other suitable solvents (eg, acetonitrile, THF, chloroform) are known to those skilled in the art. It will be obvious. R1= Methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n- Xyl, n-heptyl, phenyl and PhCHTwoCHTwoTo provide Commercially available aldehyde compounds were selected. RTwo= N-butyl; 1,1,3 , 3-tetramethylbutyl; t-butyl; CHTwoCOTwoH; CHTwoCOTwoMethyl; CHTwoCOTwoEthyl; cyclohexyl; and Select a commercially available isocyanide compound of formula 4 to provide benzyl did. With ortho-, meta-, and para-t-butyl cinnamate The acid reagent of Formula 5 was synthesized as described in the Examples.   April 1, 1995, entitled "Methods and Apparatus for the Generation of Chemical Libraries" (John Cargill and Romane R. Maief, filed on August 8) sky, inventor) co-pending US patent application Ser. No. 08 / 422,869 (Attorney's Document) No. 8140-008-999). bad CA) 96-well reaction plate (2.0 ml / well volume) and A multi-component combination synthesis reaction was performed using a ruthe synthesizer.   First, a Rink resin (4- (2 ', 4'-dimethoxyphenyl) that provides an amine linking group. Enyl-Fmoc-aminomethyl) -phenoxy resin, Advanced Ch Em Tech (ACT, Looseville KY) solution The cells were cut and distributed into 80 wells in an 8 × 10 array (100 ml / well). Next, the solution of the aldehyde compound was traversed through each plate. (100 ml / well). Plate at room temperature for 1 hour While on an orbital shaker.   Thereafter, the plate is put into the multi-synthesizer again and acid and isocyanate are removed. The plate solution was added across the plate in a substantially combinatorial manner. `` Combination style The distribution of aldehydes, isocyanates and acids in In a three-dimensional array, in a series of plates, as synthesized in each well of the rate Of distinct aldehydes (eg, different R1Having a group) Includes the distribution of acids (eg, ortho-, meta-, or para-substituted). For example, 8 One distinct aldehyde, ten distinct isocyanates, and three The separated acid components are combined in three plates (80 wells / plate). Thus, at least 240 distinct compounds within the genus of Formula II (eg, stereochemistry) Ignore).   After the combined addition of acid and isocyanate to the wells, the plate is Placed in orbital shaker for 72 hours. The synthesis reaction depends on the boiling point of the selected solvent or reagent. At a substantially limited high temperature (eg, about 80-90 ° C.). It should be clear. After that, drain the solvent from the plate and remove the resin. Washed three times with DMSO, then three times with dichloromethane (DCM). Combination At this stage of the formation, each well was covalently bonded to a Rink resin as shown in equation 6. Compound (FIG. 4).   To obtain the compounds of the present invention, a Rink resin polymer and a t-butyl protecting group Was removed by treatment with dry acid. 10% in DCM (600 μl) A solution of trifluoroacetic acid (TFA) was added to each well and the plate was shaken on an orbital shaker. Shake for 20 minutes. Then, the solvent in the well (in which the compound of interest was dissolved) was removed. Drained and wells were rinsed again with TFA solution (300 μl). Then, the TFA solution The liquid was removed by evaporation in vacuo to give one compound of formula II per reaction (Approximately 0.025 mmol compound per reaction).   The reaction product from the combinatorial synthesis was resuspended in DMSO and treated as described in Example 5 below. In vitro PTPase inhibition assay was used to determine the activity of PTPase inhibition. Cleaned. More specifically, each synthesis yields the desired reaction product of approximately 0.025 Assuming that remoles had occurred, the compounds were converted to PTP- at an effective concentration of 10 mM. Screened for 1B or HePTP inhibitory activity. Less of these enzymes At least about one at least Compounds exhibiting 50 percent inhibition were selected for further analysis.   The compounds selected for further analysis were resynthesized as before and their identification And purity was confirmed by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR). Choice Exemplary NMR and mass spectrometry data for the compounds identified are set forth below.   1H NMR (CDClThree): D0.86 (t, 3H): 1.22-1.46 ( m, 4H); 1.84-1.95 (m, 2H); 3.76 (s, 3H); 5 (m, 2H); 4.74 (m, 1H); 6.63 (d, 1H); 7.04-7 . 43 (m, 5H)   M. S. 376.2 (calculated): 375.0 (observed)   1H NMR (CDThreeOD): d0.84 (t, 3H): 1.22 (t, 3H) 1.30-1.46 (m, 8H); 1.73-1.95 (m, 2H); 3.9 0 (q, 2H); 4.12 (q, 2H); 4.56 (t, 1H); 6.56 (d , 1H); 7.64-7.93 (m, 5H).   M. S. 418.2 (calculated value): 417.0 (observed value)   1H NMR (CDThreeOD): d0.84 (t, 3H) 1.22-1.38 (m, 16H); 1.73-1.91 (m, 2H); 4.3 8 (ddd, 2H); 4.56 (q, 1H); 6.58 (d, 1H); 7.24 -7.93 (m, 9H)   M. S. 436.3 (calculated): 434.9 (observed)                                 Example 3              PTP-1B gene cloning and protein purification   The following procedure is for use as a substrate in a PTPase inhibition assay. Conducts recombinant production and purification of protein tyrosine phosphatase PTP-1B Was.   A. Production of PTP-1B cDNA   1mg human placenta poly (A)+mRNA (Clontech, Palo Alt) o, CA), 4 ml random hexamer primer, 8 ml 10 mM dNT P (Pharmacia, Piscataway, NJ), 1 ml (200 U / ml) Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase (Gibco-BRL, Canada) Country), 0.5 ml (26 U / ml) RNAsin (Promega, Madis) on WI), and 5 containing 12 ml 5 × buffer (Gibco-BRL) During the 0 ml reaction, a human placenta cDNA library was synthesized. 37 ° C For 1 hour and then heat inactivated at 95 ° C. for 5 minutes.   CDNA synthesized as described above using the polymerase chain reaction (PCR) From PTP-1B cDNA. More specifically, the publication of PTP-1B Based on the sequence obtained, two types of PCR primers were synthesized to produce a PTP-1B catalytic domain. Coding for a 321 amino acid fragment containing PTPase activity Amplified a part of PTP-1B known to Hoppe et al., Eur. J. B iochem. 223: 1069-77 (1994); barford, D .; La , J. et al. Molec. Biol. 239: 726-730 (1994); Cher. noff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2735 -2739 (1990); Charboneneau et al., Proc. Natl. A cad. Sci. USA, 86.5252-5256 (1986). Primer Had the following sequences: PTP-1BA (5) (SEQ ID NO: 1) 5'CGCACTGGATCCTTCATGGGAGATGGAAAAGG3 ' PTP-1B-B (3) (SEQ ID NO: 2) 5'CTCCCTGAATTCCTAATTGTGTGGCTCCAGGG3 '   The first primer that hybridizes to the non-coding strand is the PTP-1B coding sequence. B corresponding to the 5 'portion of the row and upstream of the start codon to facilitate cloning encodes an amHI restriction site. Second step that hybridizes to the cryptographic strand The primer corresponds to the 3 'portion of the PTP-1B fragment of interest, with a stop codon and Encodes an EcoRI restriction site downstream from the stop codon.   Approximately 1 μl of human placenta cDNA library, 0.2 mM of each dNTP, 30 μM of each primer, 1 × Amplitaq DNA polymerase buffer (Per Kin-Elmer Norwalk CT) The reaction mixture was denatured at 94 ° C. for 5 minutes and subjected to 25 cycles of amplification as follows: 2) 55 ° C. annealing for 1 minute; and 72 minutes for 1 minute. ° C primer extension.   The PCR reaction product (992 bp) was converted to BamHI and EcoRI (New En). grand Biolabs, Beverly, MA) to encode a 321 amino acid PTP-1B protein fragment, A 975 bp product was obtained with "sticky ends" to facilitate tuning.   B. Production of PTP-1B expression vector   The 975 bp PTP-1B partial cDNA was purified by agarose gel electrophoresis. BamHI / EcoRI-digested pGEX-3X plasmid vector (Ph armacia, Piscataway, NJ). The pGEX vector Is encoded by another DNA fragment inserted into the coding site of the vector. Fusion of glutathione-S-transferase (GST) to the Designed to twist. The resulting plasmid, designated pGEX-3X-PTP-1B, Identification of PTP-1B cDNA by Complete Sequencing of Rasmid Inserts And proper orientation and insertion into the reading frame.   C. Expression and purification of GST / PTPIB fusion protein   E. coli DH5a (Gibco-BRL) was used as the supplier's transformation protocol. With the plasmid pGEX-3X-PTP-1B, supplemented with 1 ampicillin Grow at 37 ° C. in Luria-Bertani broth with vigorous shaking. The culture was O.O. D.600Reaches the GST / PTP-1B fusion protein Was combined with 0.1 mM IPTG (isopropyl b-D-thiogalactoside). Incubated. After further culturing at 37 ° C. for 3 hours, the bacteria were centrifuged. Pelletized.   Bacterial pellet was washed with 12.5 mM HEPES, 2 mM EDTA, pH 7.0. From 15 mM b-mercaptoethanol (bme) and 1 mM PMSF And resuspended in 10 × (w / v) lysis buffer. Until slight clarification is observed Lysate (on ice) at (approximately 3 minutes) then to 10,000 rpm And centrifuged for 10 minutes. The supernatant was washed with buffer A (25 mM HEPES, pH 7.0, And 15 mM bme).   Using a 5 ml Hi-Trap prepack Q column (Pharmacia), Primary purification was achieved. After loading the diluted supernatant onto the column, the column is Buffer A. The GST / PTP-1B fusion protein was then added to buffer A And a linear gradient of buffer B (buffer A + 1 M NaCl) And eluted. The eluted fraction containing the protein was analyzed by SDS-PAGE and Coomassie. -Identified by blue staining (Pharmacia Past System) Then, the fraction containing PTP-1B activity was subjected to a PTP-1B activity assay described below. And identified. Elution of the fusion protein occurred at approximately 30% buffer B.   Fractions containing PTPase activity were pooled and NET buffer (20 mM Tris PH 8.8, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA and 15 mM Mbm e), diluted 1: 4 with a 10 ml GST-Sepharose 4B column (P (H. mariacia). After loading, the column is first loaded with 3 bed NET Buffer + 1% NP40 (Sigma Chemical Co., St. Lou) ise, MO) and then 280 O.D. D. NET until becomes base Washed with buffer. Using 10 mM glutathione in 33 mM Tris, pH 8.8 First, the GST / PTP-1B fusion protein was eluted from the column. Protein elution O. D.280And fractions are assayed for activity and analyzed by S The sample was electrophoresed by DS-PAGE. PTP-1B fusion protein elutes after approximately 4-5 minutes (Flow rate 1 ml / min).   GST / PTP-1B containing fraction from GST-Sepharose 4B purification Were pooled and 1 ml Hi-TrapQ column (prepacked, Phar macia) and a final storage buffer (0.2 M NaCl, 25 mM HEP). ES, 1 mM EDTA and 5 mM DTT, pH 7.0), Stored at 0 ° C. (0.52 mg / ml final concentration). The method is based on SDS-PAG Equivalent to 500 ml of cultured cells purified to substantially uniformity as assessed by E Yielded approximately 5 mg of PTP-1B fusion protein.   Assay for PTP-1B activity   The PTP-1B enzyme activity of the sample was assayed on a 1 microliter plate as follows. I did it.   Bio-Rad Protein Assay Kit (Bio-Rad, He rcules, CA) was used to determine the protein concentration of the PTP-1B enzyme preparation. . An aliquot of each sample was taken and the activity assay buffer (100 mM sodium acetate) was collected. PH, 6.0 mM, 1 mM EDTA, 0.1% TX-100 [Internat ionical Biotechnologies, Inc. ] And 15 mM b ME) using 2 mg protein / The PTP-1B stock solution was obtained by dilution to ml.   10 ml PTP-1B stock solution, 10 ml 9 mM p-nitrophenyl Phosphate ((pNPP), Sigma Chemical Co., St. Lo uise, MO), and 100 ml containing 80 ml of activity assay buffer. A reaction mixture was prepared. Mix the reaction gently and incubate at 37 ° C for 65 minutes. I did it. Enzymatic cleavage of phosphate from pNPP (tyrosine phosphate analog ) Is characterized by a color change in this substrate. For example, Imbert et al., Bi ochem. J. , 297: 163-173 (1994): Ghosh and M. iller, Biochem. Biophys. Res. Comm. , 194: 36-44 (1993): Zanke et al., Eur. J. Immunol. 22: 235-39 (1992).   By adding 10 ml of 0.5 M NaOH / 50% EtOH solution, To stop the reaction. To measure enzyme activity, use Molecular Dev. ices Thermomax Plate Reader (Menlo Pa The reaction absorbance reading was measured at 405 nm using rk CA).                                 Example 4               HePTP gene cloning and protein purification   Perform the following procedure to use as a substrate in a PTPase inhibition assay In addition, the protein tyrosine phosphatase HePTP was recombinantly produced and purified. .   A. Production of HePTP cDNA   HePTP full-length cDNA clones are obtained by well-known methods described in the literature. To generate See, for example, Zanke et al., Eur. J. Immunol. 22 : 235-239 (1992). Alternatively, for example, 100 mg of poly ( A)+HePTP c using the primers described below for RNA and PCR amplification DNA is produced as described in the previous example. To these or other means Thus, the isolated HePTP cDNA was used to generate HP as described herein. ePTP is produced recombinantly.   Using isolated HePTP provided by Dr. Brent Zanke with PCR And amplified. Two primers were synthesized to give the published DNA sequence of this gene. Based on the columns, the HePTP coding sequence was amplified. Zanke et al. (1992), supra. NDE2760.3 (NThree) (SEQ ID NO: 3) 5'CCTCCATATGGTCCAAGCCCATGG3'BAM2760. 2 (BTwo) (SEQ ID NO: 4) 5'TTATGGATCCAGGGTGGCAGGGGTCAGG3 '   The first primer that hybridizes to non-coding strands is the HePTP coding sequence. Corresponding to the 5 'portion of the row and upstream of the start codon to facilitate cloning. Encodes an NdeI restriction site. The second plastic that hides on the crypto strand The immer corresponds to the 3 'portion of the HePTP coding sequence, below the HePTP stop codon. Encodes a BamHI restriction site in the flow.   200 ng of HePTP cDNA, 0.2 ml of each dNTP, 30 μM of each Primers, 1 × Vent DNA polymerase buffer, and 2 units Ve Contains nt DNA polymerase (New England Biolabs) The 87 μl PCR reaction mixture was amplified as follows: 1) 94 min for 5 minutes And 2) denaturation at 94 ° C. for 1 minute, annealing at 55 ° C. for 1 minute, and 15 cycles of 72 ° C extension for 1 minute Le.   B. Generation of HePTP expression vector   The resulting 1115 base pair PCR product was digested with BamHI and NdeI (New E ngland Biolabs), gel purified, and BamHI / NdeI. -Ligation to digested pET12a expression vector (Novagen). pET12a By complete sequencing of the insert of the resulting plasmid, designated -HePTP. Identification of HePTP cDNA and proper orientation and reading frame Insertion in was confirmed.   C. Expression and purification of recombinant HePTP protein   E. coli strain BL21 (DE3) (Novagen, Madison WI) Was transformed with the plasmid pET 12a-HePTP, In Luria-Bertani broth supplemented with picillin, 3 with vigorous stirring Grow at 7 ° C. The culture was O.O. D.600Is reached, the HePTP protein White matter production was incubated with 0.1 ml IPTG. At 37 ° C After a further 3 hours of culture, the bacteria were pelleted.   Bacterial pellet was mixed with 12.5 mM HEPES, 2 mM ED 10 × consisting of TA, pH 7.0, 15 mM bme and 1 mM PMSF w / v) resuspended in lysis buffer. Until slight clarification is observed (approximately 3 minutes ) Sonicate the lysate (on ice) and centrifuge at 10,000 rpm for 10 minutes I thought. The supernatant was buffer A (25 mM HEPES, pH 7.0, and 15 mM   bme).   Primary purification was performed using SP-Sepharose column (Pharmacia). Achieved. After loading the diluted supernatant onto the column, the column was loaded with 10 bed volumes of buffer A And washed. Then, the HePTP protein was added to Buffer A and Buffer B (Buffer A (+ 1M NaCl) using a linear gradient. Solution containing protein The fractions were subjected to SDS-PAGE and Coomassie blue staining (Pharmacia). (Past System): HePTP activity in the fractions is described below. Using the HePTP assay. Elution of HePTP is about 23-30% Occurred in buffer B.   Fractions containing PTPase activity were pooled and added to TB buffer (20 mM Tris, pH 8, and 15 mM bme) diluted 1: 4 and 10 ml Q-Sepharose Loaded on column (Pharmacia). After loading, the column was Washed with TB buffer. As described above, the linear gradient of buffer A and buffer B The HePTP protein was eluted from the column using the Fractions were assayed for quality content and PTPase activity. Elution of HePTP Occurred with about 25% buffer B. Fractions containing HePTP were pooled and 1 ml Hi -Using a TrapQ column (prepacked, Pharmacia), final Storage buffer (0.2 M NaCl, 25 mM HEPES, 1 mM EDTA and And 5 mM DTT, pH 7.0) and stored at −80 ° C. (final concentration 3). . 127 mg / ml). With this technique, approximately 5 mg per 2 liter of culture HePTP protein was obtained.   Assay for HePTP activity   20 mM pNPP instead of 9 mM pNPP used in the PTP-1B reaction Except for the replacement, HePTP enzyme activity was as described for PTP-1B. Assayed.                                 Example 5                   In vitro PTPase inhibition assay   PTP-1B and HePTP described in Examples 3 and 4 Using a modification of the activity assay, the PTPase activity of PTP-1B and HePTP was Ability of compounds of the present invention, such as the cinnamic acid derivative compound of Example 2, which inhibits The force was measured.   First, 0.001 mmol of cinnamic acid derivative (or other PTPase inhibitor Compound) was dissolved in 100 μl of DMSO to give a 10 mM stock solution. Using 10 mM stock solutions, varying concentrations (100 μM, 33 μM, 10 μM μM, 3 μM, 1 μM, 0.3 μM, 0.1 μM, 0.03 μM, 0.01 μM Or 0.003 μM) of the inhibitory compound in a series of other identical PTPase activities. Added to Say reaction (100 μl final volume in microtiter well). Hide Each 100 μl reaction was performed with a 10 μl PTPase enzyme stock solution in DMSO. Solution (20 ng / well final PTP-1B or HePTP concentration), 70 μl activity Buffer, 10 μl pNPP stock solution (for PTP-1B assay) . 9 mM final pNPP concentration and 2 mM for HePTP assay), and 1 It contained 0 μl of the diluted inhibitor compound. GST / PTP-1B or He The reaction was started by adding the PTP enzyme to the reaction mixture, which was incubated at 37 ° C for 65 minutes. Incubate, stop, and Colorimetric analysis was performed as before. No inhibitor compound for positive and negative controls Contains 10 μl DMSO or replaces the inhibitor compound of the invention Reactions containing the modified known PTPase inhibitor Vanadate (final concentration 0.5 ml) Was done.   Concentration of inhibitor compound required to inhibit 50% of PTPase activity (IC5 0) was measured as follows. First, read the absorbance reading from the vanadate control reaction. Treated as a baseline and subtracted from the absorbance reading of the experimental reaction. Then For each reaction, the percent inhibition was calculated using the following formula.   100 × [1- (OD.405Reaction / O. D.405DMSO)]   For each inhibitor compound tested, the calculated parameters for various dilutions of the compound IC50 concentrations were calculated from best fit computer analysis of the percent inhibition.   An IC50 of less than 10 μM (optimally less than 5 μM) for a particular PTPase Inhibitor compounds with high scores as highly effective inhibitors of the PTPase enzyme And it is a preferred inhibitor of the present invention. Table 2 shows a number of Formula II of the present invention ( The IC50 concentration for the cinnamic acid derivative compound of FIG. 4) is reported.                                 Example 6          Synthesis and screening of additional cinnamic acid derivative compounds   Further using Ugi reaction combinatorial synthesis substantially as described in Example 2. The following cinnamic acid derivative compounds were synthesized. Select aldehyde compound of formula 3 (FIG. 4) Then R1= 3- (3-trifluoromethyl) phenoxyphenyl: 4- (doe 4- (methylthio) phenyl; 3- (4-butylpheno) Xy) phenyl; 3- (4-methoxyphenoxy) phenyl; 3- (4-chloro Phenoxy) phenyl; 3- (3,4-dichlorophenoxy) phenyl; and 3- (3,5-Dichlorophenoxy) phenyl was provided. 8 described in Example 2 Seven of the seven commercially available isocyanide reagents were used (1,1,3 , 3-tetramethylbutyl isocyanide was not selected). Meta and para T-butyl cinnamate carboxylate was synthesized as described in Example 1, An acid reagent of Formula 5 was provided.   The synthesized compound of Formula II was treated with an effective concentration of 10 mM as described in Example 2. Were screened for PTP-1B and HePTP. These compounds All of these things Substantial PTPase inhibitory activity against these two enzymes in cleaning , The reaction product was not further characterized.                                 Example 7          Synthesis and screening of additional cinnamic acid derivative compounds   Using the combined Ugi reaction substantially as described in Example 2, Synthetic acid derivatives were synthesized. Referring again to FIG. 4, the aldehyde reagent of Formula 3 was selected. Select the following R1Provided substituents:   3- (N-methylindolyl)   3- (N-acetylindolyl)   3- (Indrill)   4-trifluoromethylphenyl   2-naphthyl   1-naphthyl   4- (dimethylamino) phenyl   3,4,5-trimethoxyphenyl   2,4,5-trimethoxyphenyl   2,4,6-trimethoxyphenyl   2,3,4-trimethoxyphenyl   2,4,6-trimethoxyphenyl   3,4,5-trihydroxyphenyl   Of the eight commercially available isocyanide reagents described in Example 2, seven were used. Select RTwoProvided with a substituent (1,1,3,3-tetramethylbutyl isocyanate) Nido was not selected). Ortho- and para-carboxylic acid t-butyl synname The salt was synthesized as described in Example 1 to give the acid reagent of formula 5.   As described in Example 2, at an effective concentration of 10 mM, And synthetic compounds are screened, and a large number of compounds have substantial HePTP inhibitory activity. showed that. For example, R1= 2,4,5-trimethoxyphenyl has a reaction product of RTwo = 60-65% HeP when n-butyl, benzyl or cyclohexyl TP inhibitors indicated; R1= 2,4,6-trimethoxyphenyl Things are RTwo= 50-7 when t-butyl, cyclohexyl or benzyl Showed 0% HePTP inhibition; R1= 2,3,4-trimethoxyphenyl The reaction product is RTwo= 40 when n-butyl, t-butyl or benzyl Showed -55% HePTP inhibition.   Selecting at least one compound for further analysis, resynthesizing, and mass spectrometry And NMR.   1H NMR (CDThreeOD): d 3.76-3.84 (3 x S, 9H); 4.4 5.62 (s, 1H); 6.41 (d, 1H); 6.78 (s , 2H); 7.14-7.93 (m, 10H).   M. S. 504.2 (calculated); 503.0 (observed)   The HePTPase inhibitor compound for this compound was as described in Example 5. Measured and reported in Table 2.                                 Example 8Synthesis and screening of additional meta-substituted cinnamic acid derivative compounds   According to the Ugi reaction, further meta-substituted cinnamic acids of the invention Derivative compounds were synthesized and PTPase inhibition was performed as described in the previous examples. Screened for activity. Four elephants selected for further characterization The NMR and mass spectrometry data for the compound are described below.   1H NMR (CDThreeOD): d0.86 (t, 3H); 1.20-1.42 ( m, 4H); 3.16 (m, 2H); 5.51 (s, 1H); 5.92 (s, 2 H); 6.56 (d, 1H); 6.77 (d, 1H); 6.84 (d, 1H); 6.85 (s, 1H); 7.43 (t, 1H); 7.66 (d, 1H); 7.7 7.84 (d, 1H); 8.07 (s, 1H)   M. S. 425.5 (calculated); 423.0 (observed)   1H NMR (CDThreeOD): d1.32 (s, 9H); 2.612 (s, 3 H); 5.93 (s, 1H); 6.5 (d, 1H); 7.22-8.26 (m, 11H)   M. S. 460.6 (calculated); 460.0 (observed)   1H NMR (CDThreeOD): d3.85 (s, 2H); 5.78 (s, 1H); 6.58 (d, 1H); 7.41-8.12 (m, 8H )   M. S. 451.2 (calculated); 450.6 (observed)   1H NMR (CDThreeOD): d1.09-1.91 (m, 10H); 3.63. (M, 1H); 3.82 (s, 3H); 5.62 (s, 1H); 6.56 (d, 6.74 (d, 1H); 6.84 (d, 1H); 7.03 (s, 1H). ); 7.43 (t, 1H); 7.64 (d, 1H); 7.74 (d, 1H); . 84 (d, 1H); 8.06 (s, 1H)   M. S. 451.2 (calculated); 451.0 (observed)   These four modifications to HePTP, measured as described in Example 5 Table 2 shows the PTPase inhibitory activity of the compound.                                 Example 9Initial studies on 2-furylacrylic acid derivative synthesis and PTPase inhibitory activity cleaning   The following furylacrylic acid derivative synthesized as described in Example 1 was Combination Ugi reaction as described in Example 2, except used as acid reagent Was used to synthesize a 2-furylacrylic acid derivative compound.   Thus, as shown in FIG. 2, the compound having the following formula (III) is combined Synthesized by reaction.   As described above, the synthesized compound was converted to PTP-1B or HePTP inhibitory activity. At a concentration of 5.0 mM. The screening procedure described in Table 3 Say's results show that furylacrylic acid derivatives are effective PTPase-inhibiting compounds. Provide an index of what to do.                                Example 10            PTPase inhibitory activity of commercially available acrylic acid   Using the in vitro HePTP inhibition assay described above, a variety of commercially available 3 shows novel PTPase inhibitory activities of various arylacrylic acids. See Table 4 As such, 50 micromolar concentrations of more than 60 such acids are measurable HePTPs. It had inhibitory activity. In addition to cinnamic and furylacrylic acid derivatives, Ruacrylic acid and pyridylacrylic acid derivatives have measurable HePTP inhibitory activity It was shown to have In general, this data is specifically illustrated here ( Eg, having another aromatic moiety, substituent, and / or substitution pattern) And, in addition to the derivatives of arylacrylic acid specifically exemplified herein, Provides an indication that crylic acid has PTPase inhibitory activity.   From the data presented in Table 4, the present invention relates to a novel acrylic compound and a compound of formula (AA) ): Wherein X and n are the same as defined in formula (A), where m is 0 to 4 Where R ', R "and R" "are hydrogen and / or aromatic One or more independently selected rings (pyridyl, furyl, phenyl, thiophenyl) Suitable substituents (eg, electron withdrawing and / or donating groups, polar groups, cations And / or anionic groups, acidic and / or basic groups, hydrophilic groups and / or Or hydrophobic groups, hydrogen bond donors or acceptors, aromatic groups, etc.) or different The potency, selectivity, specificity, etc. of such inhibitory compounds directed to the PTPase enzyme Represents the alkene carbon selected for optimization] It will be clear that it will also provide a new use for acrylic acid. example For example, Roberts and Price, The Role of Organic Chemistry in Dru g Research, Academic Press (1985); Silv erman, R .; B. , The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, Academi c Pressm 1992.                                Example 11                     Tripeptide amide cinnamic acid derivatives   A library of tripeptide amide cinnamate derivatives was synthesized, and PTPase inhibition was performed. Assay for harmful activity.   Library design   Formula IV (where A1, ATwoAnd AThreeRepresents an amino acid side chain): An acylated N-terminus with p-carboxycinnamate having Lipopeptide amide libraries were synthesized by well known means. Kno rr et al., Tetrahedron Lett. 30: 1927-30 (1989) )reference. More specifically, (amino acid side chain A1) Of the first amino acid site Linking the rubonic acid group to a commercially available resin substrate having an amine linking group; After that, (Side chain ATwoAnd AThreeTwo additional amino acid sites in the first Coupling to amino acids. The cinnamic acid moiety is the carboxylic acid described in Example 1. Binding to the third amino acid site was achieved by reaction with the reagent.   Finally, treatment of the resin substrate and the t-butyl protecting group at the cinnamic acid site with a dry acid Removed by treatment.   The library compound is represented by the formula (AA) (supra) (wherein the 1 'R' substituent is tripep And the rest of R ', R "and R" "are hydrogen) It turns out that it is. Similarly, the library compounds are of formula (I) (supra) (where , R of formula (I)ThreeHas the formula (IR) and R1And RTwoIs independent as described above Selected. Amino acid substituents of tripeptide amide have various side chain functional groups Selected to produce a library of compounds did. In particular, leucine (L) is lipophilic, and tyrosine (Y) has an aromatic structure. Therefore, glutamate (E) is anionic and lysine (K) is cationic Glycine (G) was chosen for features and for conformational flexibility. The la The library contains all 125 units that can be synthesized using five selected amino acids. Contained a pure tripeptide amide compound.   Inhibition assay results   Library of 125 compounds using 10 mM final concentration of each tripeptide amide Were assayed for PTP-1B inhibitory activity as described herein and the compounds Were ranked based on their observed inhibitory activity. Figure 5 shows the library 3 shows the percent inhibition of Lee's 12 best and worst PTP-1B inhibitors. The best inhibition of PTP-1B is due to the compounds Cinn-GEL (96%) and C Observed for inn-GEE (95%), the structure of which is shown below.   A complete analysis of PTPase inhibition from the library is effective PTP-1B Provides considerable guidance on inhibitor design. For example, glutamate The remarkable abundance of residues was 10% (12 compounds) of the top of the PTP-1B inhibitor. Object). More subtle was the regioselectivity observed at this residue . Eight of the top twelve compounds are in the third adjacent to the cinnamate cap Has glutamate in the position. However, the two best inhibitors are in this position Lack of selectivity.   Compounds having residues other than glutamate at the first and second positions Is lysine (this residue is not present in any of the most active sequences in the library) ) Still had significant PTPase inhibitory activity. In fact, ricin appears to be detrimental to inhibitory activity, making it the poorest inhibitor in the library. Abundant. Thus, ligand charge measures a compound's PTP-1B inhibitory activity. Affect   The effect of the charge of the amino acid substituent on the PTP-1B inhibitory activity was It is not predictable considering the structural data available in. Putative PTP-1B active part The electron density map of the protein surface surrounding the cavity containing the site shows a positively charged residue. Reveal the excess of groups.   Two best and worst tripeptide amides purified by reverse phase HPLC Kinetic analysis of the compound was consistent with the initial screening data. Compound Ci nn-GEL and Cinn-GEE have K of 490 nM and 79 nM, respectively.i It had. Both compounds competed with the pNPP substrate. In contrast, the two worst inhibitions The agents, Cinn-LYK and Cinn-LGK, have an IC of 49 mM and 46 mM Loaned 50 and showed mixed non-competitive behavior. Thus, in the library Is about 1000 times Seems to be active. A similar range of activity is associated with other trosin phosphatases Inhibitors were observed within this library.   The above examples demonstrate the relatively small size of selectively designed compounds (125 compounds). A relatively rapid screening procedure using libraries is an individual PTPase Sufficient to provide useful guidance in designing effective inhibitors of enzymes showed that.                                Example 12                        MLR cell proliferation inhibition assay   Using the mixed lymphocyte reaction (MLR) assay, the compounds of the invention are immunomodulated. Proof of sex. Mishell & Shiigi, Selected Met hods in Cellular Immunology, New York : W. H. Freeman and Co. 163-64 (1980). . See also Sasaki et al. Antibiotics, 47: 208-215 (1995); Colligan et al. (Eds.), Current Protocols.   in Immunology New York; John Wiley &   Sons, Inc. , Vol. 1. , Chapter. 3, Section 3 . 12, National Institute of Health, (1991); Abbas et al., Ce. llll and Molecular Immunology, Philadelphia Luffia; B. Saunders Co. , 99-104 (1991). Teru   Balb C and C57BL6 mice, spleen from two distinct inbred strains The gut was removed. In a tissue culture hood, gently smooth the spleen through a fine screen. Crank and crush Hanks' balanced saline in a 10 cm Petri dish (Bio w hittaker 10-5088) medium. Hypotonic shock of red blood cells From the preparation, then add 10 × concentrated PBS solution to allow osmosis Restore pressure, then add 4 ml Hank's Balanced Saline (BSS) did. The cell preparation was then pipetted up and down. Death The red blood cells were attached to the side of the pipette. The cells are then washed twice in BSS Washed.   A few (2 × 107) Balb C cells (for background control) and All C57BL6 were irradiated with 200 rads to terminate cell growth. These losses Wound cells (stimulator Cells) and non-irradiated Balb C cells (responder cells) Fetal bovine serum, 1% L-glutamate, 10 mM bme and 100 mg / each resuspended in Iscove's medium containing ml of penicillin / streptomycin .   The MLR reaction (final volume -150 ml) was performed as follows on a 96-well flat bottom Prepared in triplicate in microtiter plates. In each well, in 50 ml 5 × 10FiveResponder cells; 5 × 10 in 50 mlFiveNon-irradiation stimulator Cells; and 50 ml of the diluted inhibitor compound of the invention were added. Inhibitor Compounds are first dissolved in DMSO to form a 100 mM stock solution and then At a final concentration of 1500, 500, 166, 55, 18 and 6 micromolar Added to wells. For each negative control, add 50 ml of medium alone or DMSO alone The reaction was performed in place of the inhibitor compound. In the positive control, the MLR inhibitor Titration with cyclosporin A was performed.   5% COTwoFor 4 days at 37 ° C. In co-culture, Responder cells recognize exogenous MHC molecules of stimulator cells and proliferate To initiate an immune response. To assay the growth-inhibition properties of inhibitor compounds First, On day 4, each well was charged with 1 mCi [ThreePulsed with [H] -thymidine. On the fifth day,ThreeH] 16-18 hours after thymidine addition, pre-press using a 96-well harvester. Harvested on a filter mat, Packard Matrix gas phase scintillation The number was counted by an application counter. To measure the background, Negative control, replacing irradiated Balb C spleen cells with neutrophil cells Was executed.   Mean and standard values for each triplicate set of scintillation counter data The deviation was measured. [ThreeH] -Thymidine Inhibition Required to Reduce Incorporation by 50% The amount of the harmful agent [IC50 concentration] was determined from the scintillation counter data as a graph. Decided. Table 5 shows a number of cinnamic acid derivative compounds [General Formula II] of the present invention. The IC50 concentration is reported. Compounds having an IC50 ≦ 100 mM were MLR It was evaluated as a highly effective inhibitor in the assay.   Although the present invention has been described in terms of particular embodiments, it will be understood that variations and modifications may occur. Understandable by traders. For example, the PTPase-modulating compounds of the present invention have asymmetric centers. And as individual racemates, racemic mixtures, and as individual enantiomers or dimers. Occurs as astereomers, and all isomeric forms and mixtures thereof are included in the present invention. It is.   The present invention is particularly useful when a compound of the present invention has a basic or acidic group. And pharmaceutically acceptable salts. For example, an acidic substituent such as COOH When present, salts of ammonium, sodium, potassium, calcium etc. Is considered a preferred embodiment for administration to biological receptors. [The Pyridyl Amino or basic heteroaryl group] when a basic group is present, a salt Acid, hydrogen bromide, acetate, maleate, pamoate, phosphate, methanesulfo Acid salts, such as phosphates and p-toluenesulfonate, are administered to biological receptors It is considered a preferred form.   Similarly, when an acidic group is present, a pharmaceutically acceptable ester of the compound (eg, , Methyl, tert-butyl, pivaloyloxymethyl, succinyl, etc.) Such esters are considered to be sustained release and prodrugs. In the art to modify solubility and / or hydrolysis properties for It is known.   In addition, the phosphatase modulator of the present invention is soluble in water or common organic solvents. A solvate can be formed. Such solvates are considered within the scope of the present invention .   The present invention further relates to a composition, for example, a medicament comprising a phosphatase modulatory compound of the present invention. A drug composition. Pharmaceutical compositions include ordinary non-toxic carriers, diluents, adjuvants, In a unit dosage formulation containing a vehicle or the like, a mammalian receptor can be administered, for example, orally or locally. Compositions that can be administered parenterally, parenterally, by inhalation spray, or rectally. means. The term parenteral as used herein refers to subcutaneous injection, intravenous, intramuscular, intracisternal Includes injection or infusion techniques.   Pharmaceutical compositions containing a PTPase modulating compound include, for example, tablets, troches , Lozenges, aqueous or oily suspensions, dispersible powders or granules, emulsions, Capsules or soft gelatin capsules or as syrup or elixir Suitable form for mouth use. Compositions intended for oral use may be any of the known Can be prepared according to methods, such compositions provide a pharmaceutically elegant and palatable formulation Selected from the group consisting of sweeteners, flavoring agents, coloring agents and preservatives One or more agents may be included. Tablets are non-toxic medicaments suitable for tablet preparation. The active ingredient can be mixed with a pharmaceutically acceptable excipient. These charges Excipients include, for example, calcium carbonate, sodium carbonate, lactose, calcium phosphate. Inert diluents such as sodium or sodium phosphate; granulating and disintegrating agents, eg For example, corn starch, or alginic acid; binders, such as starch, gelatin Or acacia and lubricants, for example, It can be acid or talc. Tablets may be uncoated or they may be Covered by surgery, Slows disintegration and absorption in the gastrointestinal tract, thereby maintaining Can be provided. For example, glyceryl monostearate or glyceryl A time delay material such as lustearate can be used. They are rice Nos. 4,256,108; 4,166,452; and 4,265. Osmotic tablets for controlled release coated by the technique described in U.S. Pat. Can also be formed.   Formulations for oral use may contain an active ingredient in an inert solid diluent, such as calcium carbonate. Hard gelatin capsules mixed with sodium, calcium phosphate or kaolin Alternatively, the active ingredient may be added to a water or oil medium such as peanut oil, Serve as liquid gelatin or soft gelatin capsules mixed with olive oil You can also.   Aqueous suspensions contain the active compounds in admixture with excipients suitable for the manufacture of aqueous suspensions. You can also. Such excipients may be suspending agents, for example, carboxymethyl cellulose. Sodium, sodium alginate, polyvinylpyrrolidone, tragacanth Gum and gum arabic; the dispersing or wetting agent is a natural phosphatide, such as For example, condensation of lecithin or fatty acid with alkylene oxide Products such as polyoxyethylene stearate, or long-chain aliphatic alcohols Condensation products of ethylene oxide and ethylene oxide, such as heptadecaethyl-enoxyse. Tanol, or fatty acids and polyoxyethylene sorbitan monooleate Product of partial ester derived from hexitol and ethylene oxide Or fatty acids and hexitol anhydrides, such as polyoxyethylene Condensation of ethylene oxide with partial ester derived from sorbitan monooleate It can be a product. Aqueous suspensions may also contain one or more preservatives, for example ethyl N-propyl, p-hydroxybenzoate, one or more flavoring agents, And one or more sweeteners such as sucrose or saccharin. Wear.   Oily suspensions contain the active ingredient in a vegetable oil, for example arachis oil, olive oil or sesame oil. Or in coconut oil or mineral oil such as liquid paraffin. Can be prescribed. Oil suspensions may be thickening agents such as beeswax, hard para It can contain fins or cetyl alcohol. Sweetener as described above , And flavoring agents may be added to provide a palatable oral preparation. This These compositions contain ascorbic acid It can be prepared by adding an antioxidant.   Dispersible powders and granules suitable for preparation of an aqueous suspension by the addition of water include dispersing agents Or providing the active compound in admixture with a wetting agent, suspending agent and one or more preservatives. . Suitable dispersing or wetting agents and suspending agents are exemplified by those already mentioned above. . Additional excipients, for example, sweetening, flavoring and coloring agents may also be present. Can be.   Further, the pharmaceutical composition of the present invention can be in the form of an oil-in-water emulsion. . The oily phase may be a vegetable oil such as olive oil or peanut oil, or a mineral oil such as stream It can be kinetic paraffin or a mixture thereof. A suitable emulsifier is natural gas. Gums such as acacia or tragacanth, natural phosphatides such as Soy lecithin, and fatty acids and hexitol anhydrides such as sorbitan It can be an ester or partial ester derived from monomonooleate. Also, The marjon may contain sweetening and flavoring agents.   Syrups and elixirs are sweeteners, for example glycerol, propyle It can be formulated with glycol, sorbitol or sucrose. Take Formulations include demulcents, preservatives and And flavoring and coloring agents. The pharmaceutical composition is sterile water for injection It can be in the form of an oily or oily suspension. This suspension is suitable for those Formulation using known dispersing or wetting agents and the suspending agents described above according to known techniques. can do. Sterile injectable preparations are, for example, solutions in 1,3-butanediol. Sterile injectable solutions in non-toxic parenterally-acceptable diluents or solvents such as May be a suspension. Among the acceptable vehicles and solvents that may be employed are water. , Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution. In addition, sterile, fixed oils Is commonly used as a solvent or suspending medium. For this purpose, synthetic objects and Any brand of fixed oil can be used, including glycerides and diglycerides. in addition, Fatty acids such as oleic acid are used in the preparation of injectables.   The composition may be in the form of a suppository for rectal administration of the PTPase modulating compound. . These compositions allow the drug to be solid at room temperature but liquid at rectal temperature, Therefore, mixing with an appropriate non-irritating excipient that melts in the rectum and releases the drug Therefore, it can be prepared. Such materials include, for example, cocoa butter and poly. Ethylene glycol.   For topical use, creams, ointments, jellies containing PTPase modulating compounds , Suspension solutions and the like. For the purpose of this application, topical application may be Including Google.   Accordingly, only such limitations as appear in the appended claims are imposed on the invention.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＥ Ｃ０７Ｄ 209/20 Ｃ０７Ｄ 209/20 307/68 307/68 317/60 317/60 Ｃ０７Ｋ 5/065 Ｃ０７Ｋ 5/065 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＥ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者 モラン，エドムンド・ジエイ アメリカ合衆国、カリフオルニア・92007、 カーデイフ、ケンブリツジ・アベニユー・ 2174──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FI A61K 38/00 ADE C07D 209/20 C07D 209/20 307/68 307/68 317/60 317/60 C07K 5/065 C07K 5 / 065 A61K 37/02 ADE (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), AU , CA, JP (72) Inventor Moran, Edmund J. United States, California 92007, Cardiff, Cambridge Bridge 2174

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １． 式（Ｉ）： ［式中、 （ａ）Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも１つは式（ＩＲ） （式中、ｎ＝０または１であり、ｎ＝１である場合、ＸはＮおよびＣＨよりなる 群から選択され、ｎ＝０である場合、ＸはＯおよびＳよりなる群から選択され） を有し、 （ｂ）Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の残りは独立して、 （ｉ）水素、Ｃ1-11アルキル、 （ｉｉ）置換されたＣ1-11アルキル（置換基はヒドロキシ、ハロ、メルカプ ト、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、アリール、ヒドロキシフ ェニル、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルアミノ、フ ェニルＣ1-6アルキルオキシ、フェニルＣ1-6アルキルチオおよびフェニルＣ1-6 アルキルアミノよりなる群から選択される）、 （ｉｉｉ）アリール、 （ｉｖ）Ｃ1-11アルキルアリール、 （ｖ）モノ−、ジ−およびトリ−置換アリール（置換基は独立してＣ1-6ア ルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6 アルキルチオ、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、アミノＣ1-6アルキル、Ｃ1-6ア ルキルカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノカル ボニル、カルボキシおよびカルボキシＣ1-6アルキルから選択される）、 （ｖｉ）ＣＨ2ＣＯＸＲ4（ここに、Ｘは酸素またはＮＨであり、Ｒ4は独立 して水素、Ｃ1−Ｃ11アルキル、アリールおよびＣ1−Ｃ11アルキルアリールから 選択される） からなる群選択され｛ここに、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および （ｖｉ）のアリールは独立してフェニル、ナフチル、ピリジル、フリル、ピリル 、チエニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、テトラゾリ ル、ピラジニル、ピリミジル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフリル、ベンゾ チエニル、ビラゾリル、インドリル、ベンゾジオキソリル、ピペロニル、イソイ ンドリル、プリニル、カルバゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾ リル、ベンズチアゾリル、およびベンズオキサゾリルよりなる群から選択される ｝、 （ｃ）式（Ｉ）のＲ3は式（ＩＲ）を有し、Ｒ2はさらに式（Ｂ） （式中、Ｒ5およびＲ6は独立して（ｂ）（ｉ）および（ｂ）（ｉｉ）よりなる群 から選択される）のものであってもよい］ を有する蛋白質チロシンホスファターゼ活性変調化合物または該化合物の医薬上 許容される塩、エステルもしくは溶媒和物。 ２． 蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤、または該阻害剤の医薬上許容され る塩、エステルもしくは溶媒和物である請求項１記載の蛋白質チロシンホスファ ターゼ活性変調化合物。 ３． 式（Ｉ）のＲ3が式： を有する請求項２記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 ４． Ｒ2が式（Ｂ）： のものであり、Ｒ1、Ｒ5およびＲ6が独立して （ｉ）水素、Ｃ1-11アルキル、 （ｉｉ）置換されたＣ1-11アルキル（置換基はヒドロキシ、 ハロ、メルカプト、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、アリール 、ヒドロキシフェニル、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アル キルアミノ、フェニルＣ1-6アルキルオキシ、フェニルＣ1-6アルキルチオおよび フェニルＣ1-6アルキルアミノよりなる群から選択される） よりなる群から選択される請求項３記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤 化合物。 ５． 式： を有する請求項３記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 ６． Ｒ1およびＲ2が独立して （ｉ）水素、Ｃ1-11アルキル、 （ｉｉ）置換されたＣ1-11アルキル（置換基はヒドロキシ、ハロ、メルカプ ト、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、 グアニジノ、アリール、ヒドロキシフェニル、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6アル キルチオ、Ｃ1-6アルキルアミノ、フェニルＣ1-6アルキルオキシ、フェニルＣ1- 6 アルキルチオおよびフェニルＣ1-6アルキルアミノよりなる群から選択される） 、 （ｉｉｉ）アリール、 （ｉｖ）Ｃ1-11アルキルアリール、 （ｖ）モノ−、ジ−およびトリ−置換アリール（置換基は独立してＣ1-6ア ルキル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ1-6アルキルオキシ、Ｃ1-6 アルキルチオ、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、アミノＣ1-6アルキル、Ｃ1-6ア ルキルカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノカル ボニル、カルボキシおよびカルボキシＣ1-6アルキルから選択される）、 （ｖｉ）ＣＨ2ＣＯＸＲ4（ここに、Ｘは酸素またはＮＨであり、Ｒ4は独立 して水素、Ｃ1−Ｃ11アルキル、アリールおよびＣ1−Ｃ11アルキルアリールから 選択される） よりなる群から選択される請求項３記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤 化合物。 ７． Ｒ1が水素、非置換Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11 アルキル、およびフェニルよりなる群から選択される請求項５または６記載の蛋 白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 ８． Ｒ2が水素、Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11アルキル、およびＣＨ2 ＣＯＯＲ4（ここに、Ｒ4は水素およびＣ1-11アルキルから選択される）よりなる 群から選択される請求項７記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 ９． Ｒ2が水素、Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11アルキル、およびＣＨ2 ＣＯＯＲ4（ここに、Ｒ4は水素およびＣ1-11アルキルから選択される）よりなる 群から選択される請求項５または６記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤 化合物。 １０． Ｒ1がアリール、およびモノ−、ジ−およびトリ−置換アリールよりな る群から選択される請求項６記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物 。 １１． Ｒ2が水素、Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11アルキル、およびＣ Ｈ2ＣＯＯＲ4（ここに、Ｒ4は水素およびＣ1-11アルキルから選択される）より なる群から選択される請求項１０記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化 合物。 １２． Ｒ1が１，３−ベンゾジオキソリル、Ｎ−アセチル− ３−インドリル、３，４−ジクロロフェニル、４−ヒドロキシ−３−メトキシフ ェニル、および３，４，５−トリメトキシフェニルよりなる群から選択される請 求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １３． ｎが１であり、ＸがＣＨである請求項２、３、４、６、１０、１１また は１２記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １４． 式： を有する請求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １５． 式： を有する請求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １６． 式： を有する請求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １７． 式： を有する請求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 １８． 式： を有する請求項１１記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害 剤化合物。 １９． 式： を有する請求項２記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤化合物。 ２０． Ｒ1が水素、非置換Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11アルキル、お よびフェニルよりなる群から選択される請求項１９記載の蛋白質チロシンホスフ ァターゼ阻害剤化合物。 ２１． Ｒ2が水素、Ｃ1-11アルキル、フェニル置換Ｃ1-11アルキル、およびＣ Ｈ2ＣＯＯＲ4（Ｒ4は水素およびＣ1-11アルキルから選択される）よりなる群か ら選択される請求項１９または２０記載の蛋白質チロシンホスファターゼ阻害剤 化合物。 ２２． 式（ＡＡ）： ［式中、 （ａ）ｎ＝０または１であり、 （ｉ）ｎ＝１である場合、ＸはＮおよびＣＨよりなる群から選択され、 （ｉｉ）ｎ＝０である場合、ＸはＯおよびＳよりなる群から選択され； （ｂ）ｍは０ないし４の整数であり、各Ｒ’は独立してハロ、ニトロ、アミノ、 ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ1-11アルキル、カルボキシＣ1-6アルキル、−ＣＨ ＝ＣＨＣＯＯＨ、Ｃ1-6アルキルオキシ、トリハロメチル、ホルミル、Ｃ1-6アル キルカルボニル、およびヒドロキシルＣ1-6アルキルよりなる群から選択され； （ｃ）Ｒ’’およびＲ’’’は独立して水素、ハロ、シアノ、フェニル、および Ｃ1-11アルキルよりなる群から選択される］ を有する蛋白質チロシンホスファターゼ変調化合物または該化合物の医薬上許容 される塩、エステルもしくは溶媒和物を含む組成物であって、該化合物またはそ の塩、エステルもしくは溶媒和物が医薬上許容される希釈剤、アジュバントまた は担体と混合されている組成物。 ２３． 蛋白質チロシンホスファターゼ変調化合物が蛋白質チロシンホスファタ ーゼ阻害剤である請求項２２記載の組成物。 ２４． 各Ｒ’が独立してハロ、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、メ トキシ、トリフルオロメチル、ホルミル、メチルおよびヒドロキシメチルよりな る群から選択される請求項２３記載の組成物。 ２５． Ｒ’’が水素である請求項２３または２４記載の組成物。 ２６． Ｒ’’’が水素である請求項２５記載の組成物。 ２７． 式： ［式中、 （ａ）ｎ＝０または１であり、 （ｉ）ｎ＝１である場合、ＸはＮおよびＣＨよりなる群から選択され、 （ｉｉ）ｎ＝０である場合、ＸはＯおよびＳよりなる群から選択され； （ｂ）ｍは０ないし３の整数であり、各Ｒ’は独立してハロ、ニトロ、アミノ、 ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ1-11アルキル、カルボキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6ア ルキルオキシ、トリハロメチル、ホルミル、Ｃ1-6アルキルカルボニル、および ヒドロキシＣ1-6アルキルよりなる群から選択され； （ｃ）Ｒ’’およびＲ’’’は独立して水素、ハロ、シアノ、フェニル、および Ｃ1-11アルキルよりなる群から選択される］ を有する蛋白質チロシンホスファターゼ変調化合物または該化合物の医薬上許容 される塩、エステルもしくは溶媒和物を含む組成物であって、該化合物またはそ の塩、エステルもしくは溶媒和物が医薬上許容される希釈剤、アジュバントまた は担体と混合されている組成物。 ２８． Ｒ’’およびＲ’’’の各々が水素である請求項２７記載の組成物。[Claims] 1. Formula (I): [Where, (A) R1, RTwoAnd RThreeAt least one of the formula (IR) (Wherein n = 0 or 1, and when n = 1, X consists of N and CH Selected from the group, and if n = 0, X is selected from the group consisting of O and S) Has, (B) R1, RTwoAnd RThreeThe rest of the     (I) hydrogen, C1-11Alkyl,     (Ii) substituted C1-11Alkyl (substituents are hydroxy, halo, mercap , Amino, carboxy, carbamoyl, guanidino, aryl, hydroxy Enil, C1-6Alkyloxy, C1-6Alkylthio, C1-6Alkylamino, Henil C1-6Alkyloxy, phenyl C1-6Alkylthio and phenyl C1-6 Selected from the group consisting of alkylamino),     (Iii) aryl,     (Iv) C1-11Alkylaryl,     (V) mono-, di- and tri-substituted aryl (substituents are independently C1-6A Alkyl, trifluoromethyl, hydroxy, halo, C1-6Alkyloxy, C1-6 Alkylthio, amino, C1-6Alkylamino, amino C1-6Alkyl, C1-6A Alkylcarbonyl, C1-6Alkylcarbonylamino, C1-6Alkyl aminocar Bonyl, carboxy and carboxy C1-6Alkyl)),     (Vi) CHTwoCOXRFour(Where X is oxygen or NH;FourIs independent And hydrogen, C1-C11Alkyl, aryl and C1-C11From alkylaryl Selected) Selected from the group consisting of (ii), (iii), (iv), (v) and Aryl of (vi) is independently phenyl, naphthyl, pyridyl, furyl, pyryl , Thienyl, isothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazoli , Pyrazinyl, pyrimidyl, quinolyl, isoquinolyl, benzofuryl, benzo Thienyl, virazolyl, indolyl, benzodioxolyl, piperonyl, isoi Ndrill, prenyl, carbazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, oxazolyl Selected from the group consisting of ril, benzothiazolyl, and benzoxazolyl ｝, (C) R of formula (I)ThreeHas the formula (IR) and RTwoIs also the formula (B) (Where RFiveAnd R6Is independently a group consisting of (b) (i) and (b) (ii) Selected from the following): MODIFICATION OF PROTEIN TYROSINE PHOSPHATASE ACTIVITY COMPOUND HAVING SYNTHETIC OR MEDICINE OF THE COMPOUND Acceptable salts, esters or solvates. 2. Protein tyrosine phosphatase inhibitor, or a pharmaceutically acceptable agent of the inhibitor 2. The protein tyrosine phospha according to claim 1, which is a salt, ester or solvate. A compound that modulates the activity of a protease. 3. R of the formula (I)ThreeIs the formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 2, which has: 4. RTwoIs the formula (B): And R1, RFiveAnd R6But independently     (I) hydrogen, C1-11Alkyl,     (Ii) substituted C1-11Alkyl (substituent is hydroxy, Halo, mercapto, amino, carboxy, carbamoyl, guanidino, aryl , Hydroxyphenyl, C1-6Alkyloxy, C1-6Alkylthio, C1-6Al Killamino, phenyl C1-6Alkyloxy, phenyl C1-6Alkylthio and Phenyl C1-6Selected from the group consisting of alkylamino) The protein tyrosine phosphatase inhibitor according to claim 3, which is selected from the group consisting of: Compound. 5. formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 3, which has: 6. R1And RTwoBut independently     (I) hydrogen, C1-11Alkyl,     (Ii) substituted C1-11Alkyl (substituents are hydroxy, halo, mercap , Amino, carboxy, carbamoyl, Guanidino, aryl, hydroxyphenyl, C1-6Alkyloxy, C1-6Al Kircio, C1-6Alkylamino, phenyl C1-6Alkyloxy, phenyl C1- 6 Alkylthio and phenyl C1-6Selected from the group consisting of alkylamino) ,     (Iii) aryl,     (Iv) C1-11Alkylaryl,     (V) mono-, di- and tri-substituted aryl (substituents are independently C1-6A Alkyl, trifluoromethyl, hydroxy, halo, C1-6Alkyloxy, C1-6 Alkylthio, amino, C1-6Alkylamino, amino C1-6Alkyl, C1-6A Alkylcarbonyl, C1-6Alkylcarbonylamino, C1-6Alkyl aminocar Bonyl, carboxy and carboxy C1-6Alkyl)),     (Vi) CHTwoCOXRFour(Where X is oxygen or NH;FourIs independent And hydrogen, C1-C11Alkyl, aryl and C1-C11From alkylaryl Selected) The protein tyrosine phosphatase inhibitor according to claim 3, which is selected from the group consisting of: Compound. 7. R1Is hydrogen, unsubstituted C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11 7. The protein according to claim 5, which is selected from the group consisting of alkyl and phenyl. White matter tyrosine phosphatase inhibitor compound. 8. RTwoIs hydrogen, C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11Alkyl, and CHTwo COORFour(Where RFourIs hydrogen and C1-11Selected from alkyl) 8. The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 7, which is selected from the group. 9. RTwoIs hydrogen, C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11Alkyl, and CHTwo COORFour(Where RFourIs hydrogen and C1-11Selected from alkyl) 7. The protein tyrosine phosphatase inhibitor according to claim 5, which is selected from the group Compound. 10. R1Is less than aryl, and mono-, di- and tri-substituted aryl. 7. A compound according to claim 6, which is selected from the group consisting of: . 11. RTwoIs hydrogen, C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11Alkyl, and C HTwoCOORFour(Where RFourIs hydrogen and C1-11Selected from alkyl) 11. A protein tyrosine phosphatase inhibitor according to claim 10, which is selected from the group consisting of: Compound. 12. R1Is 1,3-benzodioxolyl, N-acetyl- 3-indolyl, 3,4-dichlorophenyl, 4-hydroxy-3-methoxyphenyl Phenyl, and 3,4,5-trimethoxyphenyl. 12. The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 11. 13. wherein n is 1 and X is CH. Is a protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to 12. 14． formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 11, which has: 15. formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 11, which has: 16. formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 11, which has: 17． formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 11, which has: 18. formula: The protein tyrosine phosphatase inhibition according to claim 11, which has: Agent compound. 19. formula: The protein tyrosine phosphatase inhibitor compound according to claim 2, which has: 20. R1Is hydrogen, unsubstituted C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11Alkyl 20. The protein tyrosine phosphine according to claim 19, which is selected from the group consisting of phenyl and phenyl. Vatase inhibitor compounds. 21. RTwoIs hydrogen, C1-11Alkyl, phenyl substituted C1-11Alkyl, and C HTwoCOORFour(RFourIs hydrogen and C1-11Selected from alkyl) The protein tyrosine phosphatase inhibitor according to claim 19 or 20, which is selected from the group consisting of: Compound. 22. Formula (AA): [Where, (A) n = 0 or 1,     (I) when n = 1, X is selected from the group consisting of N and CH;     (Ii) when n = 0, X is selected from the group consisting of O and S; (B) m is an integer from 0 to 4 and each R 'is independently halo, nitro, amino, Hydroxy, carboxy, C1-11Alkyl, carboxy C1-6Alkyl, -CH = CHCOOH, C1-6Alkyloxy, trihalomethyl, formyl, C1-6Al Kill carbonyl, and hydroxyl C1-6Selected from the group consisting of alkyl; (C) R "and R" "are independently hydrogen, halo, cyano, phenyl, and C1-11Selected from the group consisting of alkyls] Tyrosine phosphatase modulatory compound having the formula: or a pharmaceutically acceptable compound of the compound A composition comprising a salt, ester or solvate of the formula A salt, ester or solvate of a pharmaceutically acceptable diluent, adjuvant or Is a composition mixed with a carrier. 23. Protein tyrosine phosphatase modulating compound is a protein tyrosine phosphatase 23. The composition according to claim 22, which is a protease inhibitor. 24. Each R 'is independently halo, nitro, amino, hydroxy, carboxy, Than toxic, trifluoromethyl, formyl, methyl and hydroxymethyl 24. The composition according to claim 23, wherein the composition is selected from the group consisting of: 25. 25. The composition according to claim 23, wherein R "is hydrogen. 26. 26. The composition of claim 25, wherein R "" is hydrogen. 27. formula: [Where, (A) n = 0 or 1,     (I) when n = 1, X is selected from the group consisting of N and CH;     (Ii) when n = 0, X is selected from the group consisting of O and S; (B) m is an integer from 0 to 3 and each R 'is independently halo, nitro, amino, Hydroxy, carboxy, C1-11Alkyl, carboxy C1-6Alkyl, C1-6A Alkyloxy, trihalomethyl, formyl, C1-6Alkylcarbonyl, and Hydroxy C1-6Selected from the group consisting of alkyl; (C) R "and R" "are independently hydrogen, halo, cyano, phenyl, and C1-11Selected from the group consisting of alkyls] Tyrosine phosphatase modulatory compound having the formula: or a pharmaceutically acceptable compound of the compound A composition comprising a salt, ester or solvate of the formula A salt, ester or solvate of a pharmaceutically acceptable diluent, adjuvant or Is a composition mixed with a carrier. 28. 28. The composition of claim 27, wherein each of R "and R" "is hydrogen.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006316001A (en) * 2005-05-13 2006-11-24 Keio Gijuku Naphthoquinone derivative compounds
US7163952B2 (en) 2001-12-03 2007-01-16 Japan Tobacco Inc. Azole compound and medicinal use thereof

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2381497A (en) * 1996-04-19 1997-11-12 Novo Nordisk A/S Modulators of molecules with phosphotyrosine recognition units
US6043247A (en) * 1996-04-19 2000-03-28 Novo Nordisk A/S Modulators of molecules with phosphotyrosine recognition units
US6242493B1 (en) 1998-03-13 2001-06-05 Merck Frosst Canada & Co. Carboxylic acids and acylsulfonamides, compositions containing such compounds and methods of treatment
WO1999047497A2 (en) * 1998-03-13 1999-09-23 Merck Frosst Canada & Co. Carboxylic acids and acylsulfonamides, compositions containing such compounds and methods of treatment
CA2331056A1 (en) * 1998-05-12 1999-12-02 Wyeth 2,3,5-substituted biphenyls useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
US6451827B2 (en) 1998-05-12 2002-09-17 Wyeth 2,3,5-substituted biphenyls useful in the treatment of insulin resistance and hyperglycemia
US6613903B2 (en) 2000-07-07 2003-09-02 Novo Nordisk A/S Modulators of protein tyrosine phosphatases (PTPases)
US6498182B2 (en) 2000-09-26 2002-12-24 Biovitrum Ab Compounds
US7230133B2 (en) 2003-05-01 2007-06-12 Bristol-Myers Squibb Company Malonamides and malonamide derivatives as modulators of chemokine receptor activity

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5216024A (en) * 1987-07-28 1993-06-01 Baylor College Of Medicine Cell growth inhibitors and methods of treating cancer and cell proliferative diseases
GB8913708D0 (en) * 1989-06-14 1989-08-02 Unilever Plc Cosmetic composition
JPH05507072A (en) * 1990-04-16 1993-10-14 イッスム　リサーチ　ディヴェロプメント　カンパニー　オブ　ザ　ヒーブルー　ユニヴァーシティ　オブ　エルサレム Heterocyclic ethenediyl compounds that inhibit EGF receptor tyrosine kinase
US5206392A (en) * 1992-04-27 1993-04-27 American Cyanamid Company Facile synthesis of arylmaleic acids and anhydrides
WO1994008600A1 (en) * 1992-10-09 1994-04-28 Joslin Diabetes Center Inhibition of signal transduction molecules
GB9306473D0 (en) * 1993-03-29 1993-05-19 Bioglan Lab Ltd Pharmaceutically useful compounds
CA2167153A1 (en) * 1993-07-15 1995-01-26 Caroline Joy Springer Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors
IL112205A0 (en) * 1994-01-06 1995-03-15 Res Dev Foundation Curcumin, analogues of curcumin and novel uses thereof
WO1996023813A1 (en) * 1995-02-01 1996-08-08 Affymax Technologies N.V. Peptides and compounds that bind to sh2 domains
AU2381497A (en) * 1996-04-19 1997-11-12 Novo Nordisk A/S Modulators of molecules with phosphotyrosine recognition units

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7163952B2 (en) 2001-12-03 2007-01-16 Japan Tobacco Inc. Azole compound and medicinal use thereof
JP2006316001A (en) * 2005-05-13 2006-11-24 Keio Gijuku Naphthoquinone derivative compounds

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