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JP2025508066A - 目的としたｔ細胞活性化のためのｃｄ２８二重特異性抗体 - Google Patents

目的としたｔ細胞活性化のためのｃｄ２８二重特異性抗体 Download PDF

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クシシュトフ マステルナク
リミン シャン
ニコラス フィッシャー
グザヴィエ ショーシェ
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ノビミューン エスアー
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Abstract

Figure 2025508066000001
本発明は、ヒトＣＤ２８にアゴニスト的に結合する抗体アームに関する。本発明は、本明細書に記載されるアゴニスト抗ＣＤ２８アームを用いてヒトがん胎児性抗原（ＣＥＡ）およびヒトＣＤ２８に結合する二重特異性抗体に関する。本発明は、本明細書に記載されるアゴニスト抗ＣＤ２８アームを用いてヒトメソテリン（ＭＳＬＮ）およびヒトＣＤ２８に結合する二重特異性抗体に関する。

Description

関連出願
本出願は、２０２２年３月７日に出願された米国仮特許出願第６３／３１７，４９１号、および２０２２年３月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／３２３，８９３号の優先権および利益を主張するものであり、その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表の参照による組み込み
電子配列表（ＮＯＶＩ＿０５０＿００１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ、サイズ：１２９，７３０バイト、および作成日：２０２３年３月６日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
分野
本発明は、全体として、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）の生成に有用な、定義された親和性のアゴニスト完全ヒトおよびκλ体適合性ＣＤ２８結合ドメインに関する。具体的には、ＣＤ２８結合ドメインは、ＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂ、特にＣＥＡ×ＣＤ２８およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体、の生成のために、抗腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインと対形成される。
発明の背景
過去数年間、がん細胞をより良く攻撃し殺滅するために、身体自体の免疫細胞を刺激する新しい方法が開発されてきた。がん免疫療法の成功の例は、いわゆる免疫チェックポイントを遮断することができるモノクローナル抗体である。現在承認されている免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）は、ＣＴＬＡ－４を遮断する（例えば、イピリムマブ、商標名Ｙｅｒｖｏｙで販売されている）、ＰＤ－１（例えば、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、商標名ＫｅｙｔｒｕｄａおよびＣｅｍｉｐｌｉｍａｂで販売されている、商標名Ｌｉｂｔａｙｏで販売されている）ならびにＰＤ－Ｌ１（例えば、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ、商標名Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑで販売されている）。持続可能な抗腫瘍応答は、ＩＣＩを使用して、様々ながんタイプで得ることができる。残念なことに、応答は、患者サブセットに限定され、多くのがんタイプは、ＩＣＩ単独療法に対して本質的に抵抗性であることが知られている。
他の承認されたがん免疫療法としては、Ｔ細胞を、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現する標的細胞に、Ｔ細胞上およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞上のＣＤ３受容体を介して架橋するＴ細胞二重特異性抗体が挙げられる。血液悪性腫瘍におけるＴ細胞二重特異性抗体またはＣＡＲ Ｔ細胞を使用した治療で非常に良好な抗腫瘍応答が観察されたにもかかわらず、固形がんの文脈では、今日までこれらのアプローチの有意なブレークスルーはなく、多くのがん患者が治療の選択肢を失ったままである。
したがって、一部のがんタイプにおけるこれらの免疫療法の成功にもかかわらず、がん患者の大多数は、有効な治療選択肢を欠いており、新しい治療の必要性を強調している。Ｔ細胞上において共刺激シグナルをターゲティングすることによって免疫系を活性化することができる分子の使用は、完全には研究されておらず、固形がん患者の新規の治療選択肢への道を開く可能性がある。
固形がんの治療に有用なＴ細胞活性化を目的とするための組成物および方法に対するニーズが存在する。このニーズに対処する方法および組成物が本明細書に提供される。
本開示は、二重特異性抗体を提供し、二重特異性抗体は、ａ．ＣＤ２８に結合する第一の抗原結合ドメインであって、ｉ．（配列番号１）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、（配列番号２）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および（配列番号３）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を有する、第一の重鎖可変領域と、ｉｉ．１．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または１６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または１９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を有する、第一の軽鎖可変領域とを含む、第一の抗原結合ドメイン、ならびにｂ．腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する第二の抗原結合ドメインであって、ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を有する、第二の重鎖可変領域を含む、第二の抗原結合ドメイン、を含む。
一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＣＥＡである。一部の態様では、ＴＡＡは、メソテリン（ＭＳＬＮ）である。
一部の実施形態では、ａ．パートａ．ｉｉ．１．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートａ．ｉｉ．２．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、ｃ．パートａ．ｉｉ．３．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含むか、ｄ．パートａ．ｉｉ．４．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むか、ｅ．パートａ．ｉｉ．５．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むか、ｆ．パートａ．ｉｉ．６．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むか、ｇ．パートａ．ｉｉ．７．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むか、ｈ．パートａ．ｉｉ．８．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、ｉ．パートａ．ｉｉ．９．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むか、ｊ．パートａ．ｉｉ．１０．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むか、ｋ．パートａ．ｉｉ．１１．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を含むか、ｌ．パートａ．ｉｉ．１２．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含むか、ｍ．パートａ．ｉｉ．１３．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、ｎ．パートａ．ｉｉ．１４．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むか、ｏ．パートａ．ｉｉ．１５．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含むか、ｐ．パートａ．ｉｉ．１６．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むか、ｑ．パートａ．ｉｉ．１７．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９６のアミノ酸配列を含むか、ｒ．パートａ．ｉｉ．１８．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、またはｓ．パートａ．ｉｉ．１９．の第一の軽鎖可変領域は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ａ．パートａ．ｉｉ．１．の第一の軽鎖は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートａ．ｉｉ．２．の第一の軽鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むか、ｃ．パートａ．ｉｉ．３．の第一の軽鎖は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、ｄ．パートａ．ｉｉ．４．の第一の軽鎖は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、ｅ．パートａ．ｉｉ．５．の第一の軽鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むか、ｆ．パートａ．ｉｉ．６．の第一の軽鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ｇ．パートａ．ｉｉ．７．の第一の軽鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むか、ｈ．パートａ．ｉｉ．８．の第一の軽鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むか、ｉ．パートａ．ｉｉ．９．の第一の軽鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むか、ｊ．パートａ．ｉｉ．１０．の第一の軽鎖は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むか、ｋ．パートａ．ｉｉ．１１．の第一の軽鎖は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、ｌ．パートａ．ｉｉ．１２．の第一の軽鎖は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むか、ｍ．パートａ．ｉｉ．１３．の第一の軽鎖は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むか、ｎ．パートａ．ｉｉ．１４．の第一の軽鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むか、ｏ．パートａ．ｉｉ．１５．の第一の軽鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むか、ｐ．パートａ．ｉｉ．１６．の第一の軽鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むか、ｑ．パートａ．ｉｉ．１７．の第一の軽鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むか、ｒ．パートａ．ｉｉ．１８．の第一の軽鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか、またはｓ．パートａ．ｉｉ．１９．の第一の軽鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第二の抗原結合ドメインは、ｉｉ．１．配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２．配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または３．配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を有する第二の軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、またはｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の第二の軽鎖は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の第二の軽鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、またはｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の第二の軽鎖は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第二の抗原結合ドメインは、ｉｉ．１．配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２．配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、３．配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、４．配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または５．配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を有する第二の軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むか、ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むか、ｄ．パートｂ．ｉｉ．４．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むか、またはｅ．パートｂ．ｉｉ．５．の第二の軽鎖可変領域は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の第二の軽鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むか、ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の第二の軽鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか、ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の第二の軽鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むか、ｄ．パートｂ．ｉｉ．４．の第二の軽鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むか、またはｅ．パートｂ．ｉｉ．５．の第二の軽鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第一の重鎖可変領域および第二の重鎖可変領域は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一の重鎖および第二の重鎖は、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、第一の軽鎖は、カッパーであり、第二の軽鎖は、ラムダである。一部の実施形態では、第一の軽鎖は、ラムダであり、第二の軽鎖は、カッパーである。
一部の実施形態では、二重特異性抗体は、活性化Ｆｃ受容体への結合を低減しかつ／またはエフェクター機能を低減する一つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、またはＰ３２９Ｒ置換を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧアイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトである。
本開示は、本開示の二重特異性抗体のいずれか一つを含む組成物を提供する。一部の実施形態では、二重特異性抗体を含む組成物は、腫瘍特異的Ｔ細胞活性化を可能にする。
本開示は、腫瘍細胞の増殖を低減する方法および／または腫瘍細胞を殺滅する方法であって、細胞を本開示の組成物のいずれか一つと接触させることを含む、方法を提供する。
本開示は、対象に本開示の組成物のいずれか一つを投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法を提供する。
本開示は、ＣＤ２８に結合する抗原結合ドメインを含む抗体を提供し、抗原結合ドメインは、１．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または１６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、１８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または１９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、を含む。
一部の実施形態では、抗体は、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片または一本鎖Ｆｖ断片である。一部の実施形態では、抗体は、単一特異性である。一部の実施形態では、抗体は、一価である。
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が関連する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書に記載されるすべての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先する。さらに、本明細書に記載の材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。
本発明の他の特性および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであり、かつそれらに包含されるであろう。
図１Ａ～１Ｃは、本発明の抗ＣＤ２８アームのＣＤ２８を発現するジャーカット細胞への濃度依存性結合を示す一連のグラフである。抗ＣＤ２８アームは、二価のモノクローナル抗体（ｈＩｇＧ１）として試験された。ｈＩｇＧ１：アイソタイプ対照、ＴＧＮ１４１２（ｈＩｇＧ４）：陽性対照。図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、連続的なファージディスプレイ選択キャンペーン中に特定された候補を示す。 図２Ａ～２Ｄは、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体のＣＤ２８を発現するジャーカット細胞（図２Ａおよび図２Ｂ）、ＣＥＡを発現するＬＳ１７４Ｔ細胞（図２Ｃ）ならびにＣＤ２８およびＣＥＡ 二重陰性ＴＩＢ１５３細胞（図２Ｄ）への濃度依存性結合を示す一連のグラフである。ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのパネルは、高親和性抗ＣＥＡアームＡＣ８４、三つの変異ＬＡＬＡＰＡを有するＩｇＧ１ Ｆｃ、および異なる親和性の様々な抗ＣＤ２８アームを使用して生成された。ｈＩｇＧ１：アイソタイプ対照、ＴＧＮ１４１２：陽性対照、１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ、ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８およびＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ１５：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。 図３Ａ～３Ｄは、試験プレート上での抗体のいわゆるウエットコーティング（図３Ａおよび３Ｃ）またはドライコーティング（図３Ｂおよび３Ｄ）後の、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体によって媒介される、健康なドナーＰＢＭＣ由来のヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞（それぞれ、図３Ａおよび３Ｃ、ならびに３Ｂおよび３Ｄ）の増殖を示す一連のグラフである。抗ＣＤ２８アームのパネルは、二重特異性フォーマットでスーパーアゴニスト活性について試験された。「ＡＩ１９」を除き、本発明の抗ＣＤ２８アームのいずれも、この種のアッセイにおいてスーパーアゴニスト活性を示さなかった。ＰＢＳ：ビヒクル対照、ＴＧＮ１４１２：陽性対照、１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ、ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８およびＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ１５：ＣＥＡｘＣ２８参照二重特異性抗体、ｍＡｂ １４２２６Ｐ２、ｍＡｂ Ｖ８およびｍＡｂ Ｖ１５：参照モノクローナル抗体。 図３Ａの説明を参照のこと。 図３Ａの説明を参照のこと。 図３Ａの説明を参照のこと。 ＣＥＡを発現するＭＫＮ－４５細胞および固定濃度（１ｎＭ）のＣＥＡ×ＣＤ３の存在下での発光読み取りによって測定される、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体の濃度依存性ＩＬ－２レポーター細胞活性化を示す一連のグラフである。本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂによって誘導される異なるレベルのＣＤ２８共刺激が観察され、これは、これらの抗ＣＤ２８アームの別個の結合能力を反映している。ＤＲ＝用量応答、標的なし：ＣＤ３およびＣＤ２８ ｂｓＡｂは、エフェクター／レポーター細胞の存在下だが、ＴＡＡ陽性標的細胞の不存在下でインキュベートされる。 図５Ａ～５Ｄは、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと組み合わされたときの、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体による、Ｔ細胞を再び標的としたＬＳ１７４Ｔ細胞の殺滅／溶解を示す一連のグラフである。エフェクター細胞は、二つの異なる健康なドナーに由来するＰＢＭＣである（図５Ａおよび５Ｂ）。ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂは、ＣＥＡ×ＣＤ３と協同して、ＣＥＡ陽性標的細胞を殺滅する。シグナル１の不存在下で誘導される殺滅はない（図５Ｃおよび５Ｄ、それぞれ、図５Ａおよび５Ｂで使用される同じＰＢＭＣドナーで得られたデータ）。Ｙ４Ｌ３－１／Ｎ：ターゲティングされていないＣＤ３一価抗体、１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。使用されたＣＤ２８ ｂｓＡｂ濃度：１μｇ／ｍＬ。 図６Ａ～６Ｂは、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと組み合わされたときの、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体による、Ｔ細胞を再び標的としたＫＡＴＯ－ＩＩＩ（図６Ａ）およびＨＴ－２９（図６Ｂ）細胞の殺滅／溶解を示す一連のグラフである。ＣＥＡ陽性標的細胞の殺滅におけるＣＥＡ×ＣＤ３とＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの間の相乗作用は、これらの低発現細胞株でも観察される。１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。使用されたＣＤ２８ ｂｓＡｂ濃度：２．５μｇ／ｍＬ。 図７Ａ～７Ｂは、ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＴ細胞活性化マーカーＣＤ２５の上方制御を示す一連のグラフである（それぞれ、図７Ａおよび７Ｂ）。ＰＢＭＣは、ＣＥＡ×ＣＤ３単独（Ｔ細胞活性化シグナル１の引き金を引くため）または本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせて（Ｔ細胞活性化シグナル２をもたらす）、のいずれかの存在下でＣＥＡ陽性ＬＳ１７４Ｔ細胞と共培養された。ＣＥＡ×ＣＤ３とＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせは、ＣＥＡ×ＣＤ３単独療法よりＣＤ４＋細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方のはるかに強い活性化を誘導する。１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。 図８Ａ～８Ｂは、ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を示す一連のグラフである（それぞれ、図８Ａおよび８Ｂ）。ＰＢＭＣは、ＣＥＡ×ＣＤ３単独（Ｔ細胞活性化シグナル１の引き金を引くため）または本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせて（Ｔ細胞活性化シグナル２をもたらす）、のいずれかの存在下でＣＥＡ陽性ＬＳ１７４Ｔ細胞と共培養された。ＣＥＡ×ＣＤ３とＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせは、ＣＥＡ×ＣＤ３単独療法と比較して増殖性ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を強く増加させる。１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。 図９Ａ～９Ｆは、ＰＢＭＣのＣＥＡ陽性ＬＳ１７４Ｔ腫瘍細胞との共培養後の、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと組み合わせたときの、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体によって媒介されるグランザイムＢ（図９Ａ）、ＩＦＮ－γ（図９Ｂ）、ＴＮＦ－α（図９Ｃ）、ＩＬ－２（図９Ｄ）、ＩＬ－６（図９Ｅ）、ＩＬ－１０（図９Ｆ）の分泌を示す一連のグラフである。ＣＥＡ×ＣＤ３によるサイトカインの誘導は、Ｔ細胞が、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂｓによって同時に共刺激されるときに、増加される。１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ：ＣＥＡ×ＣＤ２８参照二重特異性抗体。 ＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／ＮおよびＡＩ５ＡＣ８４／Ｎが、ＮＯＧマウスでのＬＳ１７４Ｔ：ＰＢＭＣ共移植モデルにおいてＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせて試験された、図１１に示されるインビボ有効性試験の実験設計の模式図である。 図１１Ａ～１１Ｂは、図１０に記載されるＬＳ１７４Ｔ：ＰＢＭＣ共移植モデルにおけるＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／ＮおよびＡＩ５ＡＣ８４／Ｎのインビボ抗腫瘍有効性を示す一連のグラフである。個々のマウスにおける腫瘍の平均腫瘍体積（図１１Ａ）および成長（図１１Ｂ）は、すべての処置群について示される。ＣＥＡ×ＣＤ３のインビボ抗腫瘍活性は、両方のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂによって増強される。 ＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ（用量範囲内）およびＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎが、ＮＯＧマウスでのＬＳ１７４Ｔ：ＰＢＭＣ共移植モデルにおいてＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせて試験された、図１３に示されるインビボ有効性試験の実験設計の模式図である。 図１３Ａ～１３Ｂは、図１２に記載されるＬＳ１７４Ｔ：ＰＢＭＣ共移植モデルにおけるＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ（用量範囲内）およびＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎのインビボ抗腫瘍有効性を示す一連のグラフである。個々のマウスにおける腫瘍の平均腫瘍体積（図１３Ａ）および成長（図１３Ｂ）は、すべての処置群について示される。ＣＥＡ×ＣＤ３のインビボ抗腫瘍活性は、両方のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂによって増強される。しかしながら、同等の治療用量では、抗体ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎは、ＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎよりも良好な腫瘍制御をもたらした。 図１４Ａ～１４Ｄは、本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体のＭＳＬＮを発現するＨ２２６（図１４Ａ）およびＯＶＣＡＲ－３（図１４Ｂ）細胞、ＣＤ２８を発現するジャーカット細胞（図１４Ｃ）、ならびにＣＤ２８およびＭＳＬＮ二重陰性ＴＩＢ１５３細胞（図１４Ｄ）への濃度依存性結合を示す一連のグラフである。ｈｕＩｇＧ１－ＬＡＬＡＰＡ ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂのパネルは、「ＡＩ５」または「ＡＩ１０」抗ＣＤ２８アームのいずれかに結合した高親和性抗ＭＳＬＮアームＯ３０、Ｏ３５およびＯ４１を使用して生成された。ｈＩｇＧ１：アイソタイプ対照。 図１５Ａ～１５Ｆは、ＭＳＬＮ×ＣＤ３およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体の組み合わせの標的細胞殺滅（図１５Ａおよび１５Ｄ）、Ｔ細胞活性化（図１５Ｂおよび１５Ｅ）ならびにＴ細胞増殖（図１５Ｃおよび１５Ｆ）に対する効果を示す一連のグラフである。ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂは、ＨＰＮ５３６アナログと協同して、ＭＳＬＮ陽性標的細胞を殺滅し、Ｔ細胞活性化および増殖を誘導する。ＨＰＮ５３６アナログが、Ｔ細胞活性化シグナル１をもたらすことができないターゲティングされていないＣＤ３一価抗体であるＹ４Ｌ３－１／Ｎによって置き換えられたとき、殺滅もＴ細胞活性化もＴ細胞増殖も誘導されない。 図１６Ａ～１６Ｆは、ＰＢＭＣのＭＳＬＮ陽性Ｈ２２６腫瘍細胞との共培養後にＨＰＮ５３６アナログと組み合わされたときの、本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体によって媒介されるグランザイムＢ（図１６Ａ）、ＩＦＮ－γ（図１６Ｂ）、ＴＮＦ－α（図１６Ｃ）、ＩＬ－２（図１６Ｄ）、ＩＬ－６（図１６Ｅ）、ＩＬ－１０（図１６Ｆ）の分泌を示す一連のグラフである。ＨＰＮ５３６アナログによるサイトカインの誘導は、Ｔ細胞が、ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂによって同時に共刺激されるとき、重要なことに増加される。 図１７Ａ～１７Ｄは、本発明の例示的なＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体のＭＳＬＮを発現するＨ２２６（図１７Ａ）およびＯＶＣＡＲ－３（図１７Ｂ）細胞、ＣＤ２８を発現するジャーカット細胞（図１７Ｃ）、ならびにＣＤ２８およびＭＳＬＮ二重陰性ＴＩＢ１５３細胞（図１７Ｄ）への濃度依存性結合を示す一連のグラフである。ＡＩ３抗ＣＤ２８アームに結合した高親和性抗ＭＳＬＮアームＯ３５およびＯ４１を使用して生成された例示的なＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂが示される。ｈＩｇＧ１：アイソタイプ対照。 図１８Ａ～１８Ｄは、異なるＥ：Ｔ比（１０：１（図１８Ａ）、３：１（図１８Ｂ）、１：１（図１８Ｃ）および１：３（図１８Ｄ））の存在下でＨＰＮ５３６アナログであるＭＳＬＮ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと組み合わせたときの、本発明の例示的なＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体による、Ｔ細胞を再び標的としたＯＶＣＡＲ３細胞の殺滅／溶解を示す一連のグラフである。ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂは、ＭＳＬＮ×ＣＤ３と協同して、ＭＳＬＮ陽性標的細胞を殺滅する。相乗作用は、組み合わせが、ＭＳＬＮ×ＣＤ３ ｂｓＡｂ単独の有効性の喪失を補償する、好ましくないＥ：Ｔ比で、特に見ることができる。シグナル１の不存在下では、殺滅は誘導されない（ＣＤ２８ ｂｓＡｂ単独）。使用されたＣＤ２８ ｂｓＡｂ濃度：２．５μｇ／ｍＬ。 図１９Ａ～１９Ｄは、異なるＥ：Ｔ比（１０：１（図１９Ａ）、３：１（図１９Ｂ）、１：１（図１９Ｃ）および１：３（図１９Ｄ））の存在下でＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わされたときの、本発明の例示的なＣＤ２８二重特異性抗体による、Ｔ細胞を再び標的としたＣＥＡ／ＭＳＬＮ二重陽性ＨＰＡＣ細胞の殺滅／溶解を示す一連のグラフである。ＣＥＡ×ＣＤ２８とＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの両方が、ＣＥＡ×ＣＤ３と協同して、標的細胞を殺滅する。相乗作用は、組み合わせが、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂ単独の有効性の喪失を補償する、好ましくないＥ：Ｔ比で、特に見ることができる。シグナル１の不存在下では、殺滅は誘導されない（ＣＤ２８ ｂｓＡｂ単独）。使用されたＣＤ２８ ｂｓＡｂ濃度：２．５μｇ／ｍＬ。 図２０Ａ～２０Ｄは、ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＴ細胞活性化マーカーＣＤ２５の上方制御（それぞれ、図２０Ａおよび２０Ｂ）ならびにヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖（それぞれ、図２０Ｃおよび２０Ｄ）を示す一連のグラフである。ＰＢＭＣは、ＣＥＡ×ＣＤ３単独（Ｔ細胞活性化シグナル１の引き金を引くため）または本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８もしくはＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせて（Ｔ細胞活性化シグナル２をもたらす）、のいずれかの存在下でＣＥＡ／ＭＳＬＮ二重陽性ＨＰＡＣ細胞と共培養された。ＣＥＡ×ＣＤ３とＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせは、試験した異なるＥ：Ｔ比でＣＥＡ×ＣＤ３単独療法よりＣＤ４＋細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方のはるかに強い活性化を誘導した。同様に、ＣＥＡ×ＣＤ３とＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせはまた、試験した全てのＥ：Ｔ比で、ＣＥＡ×ＣＤ３単独療法と比較して、より高い割合の増殖性ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞をもたらした。 図２０－１の説明を参照のこと。 ＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎが、ＨＰＡＦ－ＩＩ細胞が皮下移植片された６７マウスにおいてＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせて試験された、図２２に示されるインビボ有効性試験の実験設計の模式図である。 図２２Ａ～２２Ｂは、図２１に記載されるマウスモデルにおけるＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎのインビボ抗腫瘍有効性を示す一連のグラフである。移植後５６日目の生存率（図２２Ａ）および個々のマウスにおける腫瘍の成長（図２２Ｂ）が、全ての処置群について示される。ＣＥＡ×ＣＤ３のインビボ抗腫瘍活性は、ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎによって増強される。
発明の詳細な説明
本発明は、一部、腫瘍依存性Ｔ細胞活性化および腫瘍細胞殺滅が可能な二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）に基づく。具体的には、本発明は、ＣＤ２８クラスター形成、したがって腫瘍特異的Ｔ細胞活性化を媒介するための、標的細胞の表面で発現した腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）のｂｓＡｂ共結合に基づく。本発明はまた、ＣＤ２８抗原結合ドメイン、抗原結合断片および抗体を提供する。
本発明のｂｓＡｂは、ＣＤ２８の一価共刺激のための単一のアゴニストＣＤ２８抗原結合ドメイン、およびｂｓＡｂの腫瘍微小環境への標的送達のための腫瘍関連抗原に特異的に結合し、一価で結合する能力がある第二の抗原結合ドメインによって特徴付けられる。本発明のｂｓＡｂは、本明細書ではＣＤ２８×ＴＡＡ ｂｓＡｂまたはＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂと呼ばれる。
ＣＤ２８は、Ｔリンパ球の表面で発現される重要な共刺激受容体である。これは、細胞外可変免疫グロブリン様ドメインによって特徴付けられる共刺激分子のサブファミリーに属する。分子のファミリーの他のメンバーとしては、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１およびＢＴＬＡが挙げられる。
ヒトでは、ＣＤ２８は、ジスルフィド結合ホモ二量体としてＴリンパ球の細胞表面で発現され、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の約８０％およびＣＤ８＋Ｔ細胞の５０％に見られる。
内因性酵素活性を欠くにもかかわらず、そのリガンドによるＣＤ２８の結合は、特定のリン酸化および転写シグナル伝達をもたらし、最終的には、代謝変化ならびにＴ細胞の長期拡大および分化に必須である重要なサイトカイン、ケモカイン、および生存シグナルの産生をもたらす。
ＣＤ２８の一次リガンドは、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）であり、これは主に専門抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面で発現される。ＣＤ８０およびＣＤ８６は、それらの発現パターン、多量体状態、および機能性において分かれる。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４は、高度に相同であるため、同じリガンドに対して競合する。しかしながら、ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８より高い親和性でこれらのリガンドに結合するため、ＣＴＬＡ－４は、リガンドに対してＣＤ２８と競合し、最終的にＴ細胞応答を抑制する。
いくつかの抗ＣＤ２８モノクローナル抗体が、ＣＤ２８の治療ターゲティングのため提案されている。スーパーアゴニスト（ＳＡ）抗体と呼ばれる、特定された抗ＣＤ２８抗体の断片が、Ｔ細胞の表面でのＣＤ２８のクラスター形成を介して、ＴＣＲライゲーションの不存在下（シグナル１）であっても、一次静止Ｔ細胞の完全な活性化を誘導することが見出された。しかしながら、かかるＳＡ抗ＣＤ２８抗体のうちの一つであるＴＧＮ１４１２のヒト初回投与試験は、治療を受けたすべての健康なボランティアにおいて重度の炎症反応ならびに慢性臓器不全をもたらした。インビボの前臨床安全性試験でもインビトロの前臨床安全性試験でも予測されなかったサイトカインストームが、これらの有害事象の原因であった。
ＳＡ抗体または全身ＣＤ２８共刺激に関連する安全性の問題を回避するために、腫瘍を標的とするＣＤ２８二重特異性抗体は、腫瘍微小環境内で特異的にＴ細胞を共刺激するように設計することができる。アゴニスト抗ＣＤ２８結合ドメインを抗ＴＡＡ結合ドメインに対形成させることによって、Ｔ細胞を、選択されたＴＡＡを発現する悪性細胞に架橋する能力がある分子が生成される。ＣＤ２８ ｂｓＡｂは、一価でＣＤ２８にのみ結合することができるため、ＣＤ２８は、ＴＡＡ陽性標的細胞の不存在下でクラスター形成することができず、したがって、全身Ｔ細胞活性化を防止する。
さらに、Ｔ細胞の表面でのＣＤ２８のクラスター形成を可能にするＴＡＡ陽性がん細胞の存在下であっても、Ｔ細胞の細胞傷害性の全可能性は、ＴＣＲを介した初代Ｔ細胞刺激の存在下でＴＡＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体によってのみ放出され得る。これは、上述の二価のスーパーアゴニストＣＤ２８モノクローナル抗体とは対照的である。前臨床試験は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーまたはＰＤ－（Ｌ）１チェックポイント阻害剤の有効性をブーストする、固形腫瘍の治療のための共刺激ＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを添加する利点を示している。アゴニストＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの例は、ＷＯ２０１９２４６５１４、ＷＯ２０２０１９８００９、ＷＯ２０２０１３２０６６、ＷＯ２０２０１３２０２４、ＷＯ２０２０１２７６１８、ＷＯ２０２１２５９８９０、ＷＯ２０２１１５５０７１およびＷＯ２０２２０４０４８２に記載され、これらの分子のうちのいくつかは、現在、臨床試験で試験されている（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０４５９０３２６、ＮＣＴ０３９７２６５７、ＮＣＴ０４６２６６３５）。
ＴＡＡは、当該技術分野で周知であり、例えば、神経膠腫関連抗原、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ｃＭｅｔ、ＩＬ－ＩＩＲａ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＥＧＦＲ、ＦＡＰ、ＦｃＲＨ５、Ｂ７Ｈ３、Ｋｉｔ、ＣＡ ＬＸ、ＣＳ－１、ＭＵＣ１、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂｌ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＡＬＫ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、レクチン反応性ＡＦＰ、Ｆｏｓ関連抗原１、ＡＤＲＢ３、サイログロブリン、ＥｐｈＡ２、ＲＡＧＥ－１、ＲＵＩ、ＲＵ２、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、ＬＣＫ、ＯＹ－ＴＥＳＩ、ＰＡＸＳ、ＳＡＲＴ３、ＣＬＬ－１、フコシルＧＭ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ＥＰＣＡＭ、ＥＶＴ６－ＡＭＬ、ＴＧＳＳ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＲＵＩ、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ルイスＹ、ｓＬｅ、ＬＹ６Ｋ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰＩＢＩ、ＢＯＲＩＳ、プロスターゼ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＸ３、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－Ｉａ、ＬＭＰ２、ＮＣＡＭ、Ｒａｓ変異体、ｇｐＩＯＯ、プロステイン、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＮＸ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＡＶＣＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲ－β、サバイビンおよびテロメラーゼ、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、精子タンパク質１７、ＳＳＥＡ－４、チロシナーゼ、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ １、ＸＡＧＥ１、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、好中球エラスターゼ、肉腫転座切断点、ＮＹ－ＢＲ－１、ｅｐｈｎｎＢ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＦＡＰ，ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ３、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲ２０、ＣＸＯＲＦ６１、葉酸受容体（ＦＲａ）、葉酸受容体ベータ、ＲＯＲ１、Ｆｌｔ３、ＴＡＧ７２、ＴＮ Ａｇ、Ｔｉｅ ２、ＴＥＭ１、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＴＳＨＲ、ＵＰＫ２、およびメソテリン（ＭＳＬＮ）を含む。
特定の実施形態では、ＴＡＡは、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＥｐＣＡＭ、ＧＰＣ３、ＭＳＬＮ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＢＣＭＡに対するものである。一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＣＥＡである。一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＭＳＬＮである。
がん胎児抗原
がん胎児抗原（ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＤ６６ｅ）は、がん胎児抗原関連細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）ファミリーのメンバーである。ＣＥＡＣＡＭは、細胞接着、細胞内および細胞間シグナル伝達、がんの進行、血管新生、ならびに転移を含むが、これらに限定されない、様々な生物学的プロセスに関与する。
ＣＥＡは、最初は、ヒト胃腸（ＧＩ）系の特定のがん胎児性抗原として発見された。胎児発生中にＧＩ組織によって高度に発現されることが見出されたが、その発現は、出生前に劇的に低減され、健康な人では、ＣＥＡは、通常、胃腸上皮の上皮細胞の頂端側および上咽頭、肺、および泌尿生殖器管などの他の粘膜上皮上でのみ低レベルで発現されることが見出されている。このような極性化および制限された発現は、腫瘍形成中に失われ、ＣＥＡは、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、非小細胞肺がんおよび乳がんを含む上皮起源の様々な固形腫瘍において過剰発現される。
ＣＥＡは、がん細胞と正常な上皮細胞との間で観察される差次的発現パターンおよび発現レベルのため、抗体ベースの療法の開発のための有望なＴＡＡを表す。後者は、上皮の頂端表面でのみＣＥＡを発現し、治療用抗体が、強固な結合のために除外される領域である。
ＣＥＡを標的とする複数のモノクローナル抗体は、研究目的のため、診断ツールとして、および治療目的のために開発されている（例えば、ＷＯ２０１２１１７００２を参照）。過去数年間、ＣＥＡ×ＣＤ３二重特異性抗体シビサタマブ（（Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，２０１６）およびＵＳ２０１４０２４２０７９）、ＭＥＤＩ－５６５（（Ｏｂｅｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，２０１４）およびＷＯ２０１６０３６６７８Ａ１）またはＷＯ２０２１０５３５８７に記載されるもの、ならびにより最近では、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂ（例えば、ＷＯ２０２０１２７６２８Ａ１およびＷＯ２０２０１２７６１８）ならびにＣＥＡ×ＣＤ４７ ｂｓＡｂ（例えば、ＷＯ２０２１１１０６４７）を含む、ターゲティングアームとして抗ＣＥＡアームを担持するいくつかの二重特異性抗体が記載されている。
抗ＣＥＡ抗体
本開示の例示的な抗ＣＥＡ抗体（例えば、「ＡＣ２２」、「ＡＣ６１」、「ＡＣ８４」）が、以下に記載される。表１は、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列を示す。
一部の実施形態では、ＡＣ２２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ２２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ２２二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ８４抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ８４抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ８４二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
メソテリン
メソテリン（ＭＳＬＮ）は、比較的低いレベルで正常組織において発現されるグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）固定膜タンパク質である。メソテリン遺伝子は、細胞膜にアドレス指定される６２８個のアミノ酸の前駆体タンパク質をコードし、そこで、４０ｋＤａの膜結合成熟形態に処理され、巨核球増強因子（ＭＰＦ）と称される３１ｋＤａの断片を放出する。
メソテリンは、中皮腫、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、トリプルネガティブ乳がんおよび前立腺がんを含む、多くの固形腫瘍において過剰発現されることが見出された。メソテリンは、がん細胞の増殖、局所浸潤、および腫瘍転移において役割を果たすことが示唆され、腫瘍細胞上でのその発現は、腫瘍攻撃性の増加および臨床結果の不良と相関している。
がん細胞と健康な組織との間で差次的発現が観察されるため、メソテリンは、メソテリンを標的とする治療剤の開発に好ましいＴＡＡを表し、その一部は、現在臨床試験を受けている。
抗ＭＳＬＮ抗体
本開示の例示的な抗ＭＳＬＮ抗体（例えば、「Ｏ３０」、「Ｏ２５」、「Ｏ３５」、「Ｏ３８」、「Ｏ４１」）が、以下に記載される。表１は、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列を示す。
一部の実施形態では、Ｏ３０抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３０抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３０二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ２５抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ２５抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、Ｏ２５二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３５抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３５抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３５二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３８抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３８抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、Ｏ３８二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ４１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む軽鎖を有する。
一部の実施形態では、Ｏ４１抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、Ｏ４１二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
二重特異性抗体
本発明によるｂｓＡｂｓ抗体は、新規に生成されてもよいか、または既存の単一特異性ＣＤ２８抗体およびＴＡＡ抗体から操作されてもよい。本発明の二重特異性抗体は、ＣＤ２８に特異的な一つの抗原結合領域およびＴＡＡに特異的な第二の抗原結合領域を有する。一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＣＥＡである。一部の実施形態では、ＴＡＡは、ＭＳＬＮである。一部の態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ２８、ＣＥＡおよびＭＳＬＮに対して一価である。
本発明のｂｓＡｂは、既に記載された異なる抗体フォーマットのいずれかに基づき得る。一般に、ＩｇＧ様フォーマットは、長い半減期および潜在的に低減された免疫原性などの好ましい特性を提供するため好ましいが、任意の他の分子の二重特異性フォーマットも、本発明に使用され得る。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、共通の重鎖を共有する。一部の実施形態では、重鎖は、天然重鎖である（すなわち、いかなる変異も含有しない（「野生型」））。一部の実施形態では、重鎖は、少なくとも一つの変異を含む（すなわち、「ＬＡＬＡ」変異または「ＬＡＬＡＰＡ」変異を有する）。任意選択的に、二重特異性抗体は、異なるタイプの軽鎖を有する。例えば、一方の軽鎖は、カッパー軽鎖であり、他方の軽鎖は。ラムダ軽鎖（すなわち、ｋｌ体）である。異なる軽鎖は、カッパーおよびラムダ選択樹脂を使用して二特異性を容易に精製することを可能にする。
抗体の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列は、それらの米国一般名（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ａｄｏｐｔｅｄ Ｎａｍｅ）（ＵＳＡＮは、例えば、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｍａ－ａｓｓｎ．ｏｒｇ／のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎを介して、またはＣＡＳレジストリーを介して入手可能である）によって同定される。
単一特異性ＣＤ２８およびＴＡＡ結合可変ドメインは、例えば、ファージディスプレイライブラリーから新規に選択されてもよく、ファージは、Ｆａｂ、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または不対もしくは対の抗体可変領域などのヒト免疫グロブリンまたはその一部を発現するように操作され、その後、二重特異性フォーマットに操作される。ＣＤ２８およびＴＡＡ可変ドメインは、例えば、バクテリオファージｇ３タンパク質との融合タンパク質（ｓｃＦｖ－ｇ３融合タンパク質）として抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリーから単離され得る。
抗体ライブラリーは、ＣＤ２８抗体およびＴＡＡの結合についてスクリーニングされ、得られた陽性クローンは、さらに特徴決定される。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ方法は、当該技術分野で確立される。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、および同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号および同第６，５９３，０８１号を参照のこと。得られた新規可変領域結合は、当該技術分野で公知であり、本明細書に記載される方法を使用して、二重特異性フォーマットに操作される。
さらに、本発明の二重特異性抗体は、２０１１年８月１６日に出願されたＷＯ２０１２／０２３０５３に開示されているものを含む技術を使用して作製することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＷＯ２０１２／０２３０５３に記載される方法は、ヒト免疫グロブリンと構造が同一である二重特異性抗体を生成する。このタイプの分子は、二つのコピーの、固有の重鎖ポリペプチド、定常カッパードメインに融合された第一の軽鎖可変領域および定常ラムダドメインに融合された第二の軽鎖可変領域から構成される。各組み合わせ部位は、重鎖と軽鎖の両方が寄与する異なる抗原特異性を示す。軽鎖可変領域は、ラムダファミリーまたはカッパーファミリーのものであってもよく、好ましくは、それぞれ、ラムダ定常ドメインおよびカッパー定常ドメインに融合される。これは、非天然ポリペプチド接合部の生成を回避するために好ましい。
しかしながら、第一の特異性のためにカッパー軽鎖可変ドメインを定常ラムダドメインに融合し、第二の特異性のためにラムダ軽鎖可変ドメインを定常カッパードメインに融合することによって、本発明の二重特異性抗体を得ることも可能である。ＷＯ２０１２／０２３０５３に記載される二重特異性抗体は、ＩｇＧκλ抗体または「κλ体」、新しい完全ヒト二重特異性ＩｇＧフォーマットと呼ばれる。このκλ体フォーマットは、標準的なモノクローナル抗体から区別できない特徴を有し、したがって、前のフォーマットと比較して好ましい、標準的なＩｇＧ分子から区別できない二重特異性抗体の親和性精製を可能にする。
上記の方法に加えて、本発明の二重特異性抗体は、国際特許公報番号ＷＯ２０１１／１３１７４６に記載される方法により、二つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称変異を導入し、還元条件で二つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成して、ジスルフィド結合異性体化を可能にすることによって、細胞のない環境においてインビトロで生成することができる。本方法では、第一の単一特異性二価抗体および第二の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体安定性を促進するＣＨ３ドメインで特定の置換を有するように操作され、抗体は、ヒンジ領域中のシステインがジスルフィド結合異性化を受けることを可能にするのに十分な還元条件下で一緒にインキュベートされ、それによってＦａｂアーム交換によって二重特異性抗体を生成する。
本発明の抗体は、二つ以上の抗原結合ドメインを有し、二重特異性である。本発明の二重特異性抗体は、全長抗体構造またはＦａｂなどの部分長抗体構造を有する抗体を含む。
本明細書で使用される「全長抗体」は、二つの全長抗体重鎖および二つの全長抗体軽鎖を有する抗体を指す。全長抗体重鎖（ＨＣ）は、周知の重鎖可変ドメインならびに定常ドメインＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。全長抗体軽鎖（ＬＣ）は、周知の軽鎖可変ドメインならびに定常ドメインＶＬおよびＣＬからなる。全長抗体は、一方または両方の重鎖のいずれかにおいてＣ末端リジン（Ｋ）を欠いていてもよい。
「Ｆａｂアーム」または「半分子」という用語は、抗原に特異的に結合する一つの重鎖－軽鎖対を指す。
本発明の全長二重特異性抗体は、例えば、インビトロで細胞を含まない環境において別個の特異性を有する二つの抗体半分子のヘテロ二量体形成に有利にするために、各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、または共発現を使用することによって、二つの単一特異性二価抗体間でＦａｂアーム交換（または半分子交換）を使用して生成され得る。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応およびＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。親単一特異性抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合が低減される。親単一特異性抗体のうちの一つの結果として生じる遊離システインは、第二の親単一特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖間ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインが放出し、解離－会合によって再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりもヘテロ二量体形成を好むように操作されてもよい。得られた生成物は、各々が別個のエピトープに結合する二つのＦａｂアームまたは半分子を有する二重特異性抗体である。
本明細書で使用される場合、「ホモ二量体形成」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する二つの重鎖の相互作用を指す。本明細書で使用される場合、「ホモ二量体」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する二つの重鎖を有する抗体を指す。
本明細書で使用される場合、「ヘテロ二量体形成」とは、非同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する二つの重鎖の相互作用を指す。本明細書で使用される場合、「ヘテロ二量体」とは、非同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する二つの重鎖を有する抗体を指す。
「ノブ・イン・ホール」戦略（例えば、ＰＣＴ国際公報番号ＷＯ２００６／０２８９３６を参照のこと）を使用して、全長二重特異性抗体を生成してもよい。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧ中のＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置で変異させて、ヘテロ二量体形成を促進することができる。小さな側鎖（ホール）を有するアミノ酸は、第一の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖に導入され、大きな側鎖（ノブ）を有するアミノ酸は、第二の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖に導入される。二つの抗体の共発現後、ヘテロ二量体は、重鎖の「ホール」と重鎖の「ノブ」との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブおよびホールを形成する例示的なＣＨ３置換対は、（第一の重鎖の第一のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第二の重鎖の第二のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表される）Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４ＳおよびＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである。
米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第ＵＳ２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２８６３７号または米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０１２３５３２号に記載される、一つのＣＨ３表面の正に荷電した残基および第二のＣＨ３表面の負に荷電した残基を置換することによる電気的相互作用を使用した重鎖ヘテロ二量体形成の促進などの他の戦略が使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、以下の置換（第一の重鎖の第一のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第二の重鎖の第二のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表される）：米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／０１４９８７６号または米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１９５８４９号に記載されるＬ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、またはＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗによって促進され得る。
二重特異性分子を操作するために使用され得る例示的な抗細胞表面抗体は、例えば、当該技術分野で公知の抗腫瘍関連抗原抗体、例えば、ペルツズマブおよびトラスツズマブ（ＨＥＲ－２）、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブおよびアミバンタマブ（ＥＧＦＲ）、ラベツズマブおよびシビサタマブ（ＣＥＡ）、アマツキシマブ（メソテリン）、コドリツズマブ（グリピカン３）、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブ（ＰＤ－Ｌ１）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９）、ブレンツキシマブベドチン（ＣＤ３０）、ダラツムマブ（ＣＤ３８）、ゲムツズマブ（ＣＤ３３）、トシツモマブ９ＣＤ２２）またはオビヌツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ、ならびにイブリツモマブ（ＣＤ２０）を含む。
二重特異性分子を操作するために使用され得る例示的なＣＤ２８抗体、ＣＥＡ抗体およびＭＳＬＮ抗体としては、本明細書に開示される抗体が挙げられる。ＣＤ２８抗原結合領域が由来し得る例示的な抗ＣＤ２８抗体としては、「ＡＩ３」、「ＡＩ５」、「ＡＩ７」、「ＡＩ８」、「ＡＩ９」、「ＡＩ１０」、「ＡＩ１１」、「ＡＩ１２」、「ＡＩ１３」、「ＡＩ１４」、「ＡＩ１５」、「ＡＩ１６」、「ＡＩ１７」、「ＡＩ１８」、「ＡＩ１９」、「ＡＩ２０」、「ＡＩ２１」、「ＡＩ２２」または「ＡＩ２３」抗体が挙げられる。ＣＥＡ抗原結合領域が由来し得る例示的な抗ＣＥＡ抗体としては、「ＡＣ２２」、「ＡＣ６１」または「ＡＣ８４」抗体が挙げられる。ＭＳＬＮ抗原結合領域が由来し得る例示的な抗ＭＳＬＮ抗体としては、「Ｏ３０」、「Ｏ２５」、「Ｏ３５」、「Ｏ３８」または「Ｏ４１」抗体が挙げられる。表１は、本開示の抗体の領域のアミノ酸配列を示す。
（表１）本開示の例示的なアミノ酸配列
Figure 2025508066000002
Figure 2025508066000003
Figure 2025508066000004
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Figure 2025508066000007
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表２は、本開示の例示的な二重特異性抗体を示す。各抗体の命名法が示され、本開示のκλ体の個々のカッパー軽鎖、ラムダ軽鎖および重領域が記載される。「ＡＩ」は、抗ヒトＣＤ２８抗原結合領域を示し、「ＡＣ」は、抗ヒトＣＥＡ抗原結合領域を示し、「Ｏ」は、抗ヒトＭＳＬＮ抗原結合領域を示す。／Ｎは、ＬＡＬＡＰＡ変異を有する重鎖を示す。代替命名法は、括弧内に示される。
（表２）本開示の例示的な二重特異性抗体
Figure 2025508066000014
一部の実施形態では、ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８３のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８６のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１４ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１４ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１４ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１５ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１６ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１６ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１６ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１７ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１７ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９２のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１７ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９３のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１８ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１９ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２０ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９６のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２１ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２２ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号９８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ２３ＡＣ８４／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１ＡＩ７／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１ＡＩ７／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号１８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＣ６１ＡＩ７／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号２１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１０１のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４８のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４５のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５０のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５１のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８０のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号９９のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４８のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４５のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５０のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５１のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８１のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ５Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１００のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４８のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４５のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５０のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５１のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８５のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１０Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３０／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４８のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４４のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ２５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４５のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３５／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５０のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ３８／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５１のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むカッパー軽鎖、ならびに配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含むラムダ軽鎖を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号８８のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖可変領域、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖可変領域を有する。
一部の実施形態では、ＡＩ１３Ｏ４１／Ｎ二重特異性抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および定常領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むカッパー軽鎖、および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むラムダ軽鎖を有する。
使用方法
本発明のｂｓＡｂを含む本発明の治療用製剤を使用して、非限定的な例として、白血病、リンパ腫、乳がん、大腸がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、グリオーマ、肺がんおよび気管支がん、結腸直腸がん、膵臓がん、食道がん、肝臓がん、膀胱がん、腎臓がんおよび腎盂がん、口腔がんおよび咽頭がん、子宮体部がん、ならびに／またはメラノーマなどのがんと関連する症状を治療するか、または緩和する。本発明はまた、がんに関連する症状を治療または緩和する方法を提供する。治療レジメンは、標準的な方法を使用して、対象、例えば、がんに罹患している（または発症するリスクがある）ヒト患者を同定することによってなされる。
治療の有効性は、特定の免疫関連障害を診断または治療するための任意の公知の方法に関連して決定される。免疫関連障害の一つまたは複数の症状の軽減は、抗体が臨床的利益をもたらすことを示す。
医薬組成物
本発明の抗体（本明細書では「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにその誘導体、断片、類似体および相同体は、投与に適した医薬組成物に組み込まれ得る。かかる組成物は、典型的には、抗体および薬学的に許容可能な担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、医薬投与に適合する、任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、当該技術分野の標準的な参照テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。このような担体または希釈剤の好ましい例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび不揮発性油などの非水性ビヒクルも使用され得る。医薬的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が、活性化合物と不適合である場合を除き、組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物も、組成物に組み込まれ得る。
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち、局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下投与に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分：注射用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌の希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧を調節するための薬剤を含み得る。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調節することができる。非経口調製物は、アンプル剤、使い捨てシリンジまたはガラスもしくはプラスチックで作製された複数回投与バイアルに封入され得る。
注射可能な使用に適した医薬組成物には、無菌の水溶液（水溶性の場合）または分散液および無菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための無菌の粉末が含まれる。静脈内投与のための、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。いずれの場合も、組成物は、無菌でなければならず、容易なシリンジ化性が存在する程度まで流動的であるべきである。これは、製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の混入作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにその好適な混合物を含有する溶媒または分散媒体であり得る。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。
無菌の注射用溶液は、必要に応じて、上記に列挙された成分の一つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に必要量の活性化合物を組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散液媒体および上記に列挙されたものから必要な他の成分を含有する無菌のビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌の注射溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これは、従前の滅菌濾過されたその溶液からの有効成分および任意の追加の所望の成分の粉末をもたらす。
経口組成物は、概して、不活性希釈剤または食用の担体を含む。それらは、ゼラチンカプセル剤に封入するか、または錠剤に圧縮することができる。経口治療投与の目的で、活性化合物は、賦形剤と共に組み込まれ、錠剤、トローチ、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、口腔洗浄液として使用するための流体担体を使用して調製することができ、ここで、流体担体中の化合物は、経口的に適用され、嚥下され、排痰または嚥下される。医薬的に適合可能な結合剤、および／またはアジュバント材料は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、ピル剤、カプセル剤、トローチなどは、以下の成分、または類似の性質の化合物：微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチンなどの結合剤、デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤、スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチル、オレンジ香味料などの香味剤のいずれかを含有することができる。
吸入による投与のために、化合物は、好適な噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。
全身投与は、経粘膜的手段または経皮的手段による場合もある。経粘膜投与または経皮投与については、透過されるべきバリアに適切な浸透剤が、製剤に使用される。このような浸透剤は、当該技術分野で一般的に知られており、例えば、経粘膜投与のため、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは座薬の使用を通して達成することができる。経皮投与については、活性化合物は、当該技術分野で一般的に知られている軟膏、軟膏、ゲル剤、またはクリーム剤に製剤される。
前記化合物はまた、直腸送達のための座薬（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなどの従来の座薬基材を含む）または保持浣腸の形態で調製することができる。
一実施形態では、活性化合物は、植込錠およびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、身体からの迅速な除去から化合物を保護する担体を用いて調製される。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明らかであろう。材料は、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販で得ることができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞を標的とするリポソームを含む）も、薬学的に許容可能な担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載される、当業者に公知の方法に従って調製することができる。
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、経口組成物または非経口組成物を投薬単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される場合、投薬単位形態は、治療されるべき対象のための単位投薬量として好適な物理的に別個な単位を指し、各単位は、必要な医薬担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された予め決定された量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態の仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の治療のためのかかる活性化合物を配合する技術に固有の制限によって決定され、かつそれらに直接依存する。
前記医薬組成物は、投与のための説明書と共に、容器、パック、またはディスペンサーに含まれ得る。
定義
添付の特許請求の範囲を含む、本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」などの単数形の単語は、文脈が別途明確に示さない限り、それらの対応する複数の参照物を含む。
本明細書で使用される場合、「ｍＡｂ Ｖ８」は、ＷＯ２０２０１２７６１８の配列番号３７７および配列番号３７８のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０２０１２７６１８（その全体が参照により組み込まれる）に記載される「分子１１Ｕ：ｈｕＩｇＧｌ ＰＧ－ＬＡＬＡアイソタイプにおけるＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント８）（ＰＧ－ＬＡＬＡ）、ＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント８）抗体」を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍＡｂ Ｖ１５」は、ＷＯ２０２０１２７６１８の配列番号３８１および配列番号３８２のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０２０１２７６１８（その全体が参照により組み込まれる）に記載される「分子１１Ｗ：ｈｕＩｇＧｌ ＰＧ－ＬＡＬＡアイソタイプにおけるＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント１５）（ＰＧ－ＬＡＬＡ）、ＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント１５）抗体」を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８」は、ＷＯ２０２０１２７６１８の配列番号３５１、３５２、３５５および３５６のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０２０１２７６１８（その全体が参照により組み込まれる）に記載される「分子１１Ｂ：ＣＥＡ（Ａ５Ｈ１ＥＬ１Ｄ）－ＣＤ２８（ＳＡバリアント８）１＋１フォーマット、ＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント８）Ｆａｂ断片（ノブ）における荷電修飾およびＣＥＡ（Ａ５Ｈ１ＥＬ１Ｄ）Ｆａｂ断片（ホール）におけるＶＨ／ＶＬ交換を有する二重特異性ｈｕＩｇＧｌ ＰＧＬＡＬＡ ＣｒｏｓｓＦａｂ分子」を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ１５」は、ＷＯ２０２０１２７６１８の配列番号３５１、３５２、３５７および３５８のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０２０１２７６１８（その全体が参照により組み込まれる）に記載される「分子１１Ｃ：ＣＥＡ（Ａ５Ｈ１ＥＬ１Ｄ）－ＣＤ２８（ＳＡバリアント１５）１＋１フォーマット、ＣＤ２８（ＳＡ＿バリアント１５）Ｆａｂ断片（ノブ）における荷電修飾およびＣＥＡ（Ａ５Ｈ１ＥＬ１Ｄ）Ｆａｂ断片（ホール）におけるＶＨ／ＶＬ交換を有する二重特異性ｈｕＩｇＧｌ ＰＧＬＡＬＡ ＣｒｏｓｓＦａｂ分子」を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍＡｂ １４２２６Ｐ２」は、ＷＯ２０１９２４６５１４の配列番号８１および８３のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０１９２４６５１４（その全体が参照により組み込まれる）に記載されるｂｓ１６４２９Ｄ（ＰＳＭＡ×ＣＤ２８「Ａ」）の生成のために使用される抗ＣＤ２８アームである、「ｍＡｂ１４２２６Ｐ２（ＣＤ２８親「Ａ」）」を指す。
本明細書で使用される場合、「１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ」は、ｃｒｏｓｓＭＡｂ／ノブ・イン・ホールテクノロジーを使用してｍＡｂ １４２２６Ｐ２の抗ＣＤ２８アームを抗ＣＥＡアームＡＣ８４と対形成させることによって生成され、配列番号１２２、１２３、１２４および１２５のアミノ酸配列を含む、ベンチマークＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを指す。
本明細書で使用される場合、「ＴＧＮ１４１２」は、配列番号１２６および１２７のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２００６０５０９４９に記載されるヒトＩｇＧ４アイソタイプにおけるスーパーアゴニストの（ＳＡ）抗ｈｕＣＤ２８抗体を指す。
本明細書で使用される場合、「ＨＰＮ５３６類似体」は、ＷＯ２０１８２０９３０４の配列番号１００のアミノ酸配列を含む、ＷＯ２０１８２０９３０４（その全体が参照により組み込まれる）に記載されるＭＳＬＮ陽性標的細胞にＴ細胞を再指向化することができる三重特異性ＭＳＬＮ×ＣＤ３×ＨＳＡ分子を指す。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別段示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（ＫＤ）によって一般的に表すことができる。親和性は、ＫｉｎＥｘＡおよびＢｉａｃｏｒｅを含む、当該技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全ヒト抗体、およびキメラ抗体を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、別段示されない限り、「抗原結合断片」とは、抗体の抗原結合断片、すなわち、全長抗体によって結合される抗原に結合する能力を保持する抗体断片、例えば、一つまたは複数のＣＤＲ領域を保持する断片を指す。抗体結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片および個々の抗体重鎖または軽鎖、ならびに個々の重鎖または軽鎖可変領域が挙げられるが、これらに限定されない。
「Ｆａｂ断片」は、一つの軽鎖ならびに一つの重鎖のＣＨ１および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂ断片」は、抗体のパパイン切断の産物であり得る。
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む二つの重鎖断片を含有する。二つの重鎖断片は、二つ以上のジスルフィド結合によって、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって一緒に保持される。
「Ｆａｂ’断片」は、一つの軽鎖ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメイン、ならびにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域も含有する一つの重鎖の一部または断片を含有し、それにより、鎖間ジスルフィド結合が、二つのＦａｂ’断片の二つの重鎖の間に形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、二つの軽鎖およびＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部を含有する二つの重鎖を含有し、それにより、鎖間ジスルフィド結合が、二つの重鎖の間に形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２断片は、二つの重鎖間のジスルフィド結合によって一緒に保持される二つのＦａｂ’断片から構成される。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、抗体のペプシン切断の産物であり得る。「Ｆｖ領域」は、重鎖と軽鎖の両方の可変領域を含むが、定常領域を欠く。
「単離抗体」とは、精製状態を指し、そのような文脈では、分子は、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞破片および成長培地などの他の材料などの他の生物学的分子を実質的に含まないことを意味する。概して、「単離された」という用語は、本明細書に記載される結合化合物の実験的または治療的使用に実質的に干渉する量で存在しない限り、かかる材料の完全な不在、または水、緩衝液、もしくは塩の不在を指すことを意図するものではない。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団を指し、すなわち、集団を含む抗体分子は、少量で存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて、アミノ酸配列において同一である。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープにしばしば特異的である可変ドメイン内に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作られてもよいか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作られてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８およびＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７などに記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１を参照されたい。
「完全ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、マウス炭水化物鎖を含有してもよい。同様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。あるいは、完全ヒト抗体は、ラット、ラット細胞、またはラット細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、ラット炭水化物鎖を含有してもよい。同様に、「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。
一般に、基本的な「抗体」構造単位は、四量体を含む。単一特異性抗体では、各四量体は、二つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対は、一つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）および一つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個以上のアミノ酸の「可変領域」または「可変ドメイン」を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、主に、エフェクター機能に関与する定常領域を定義し得る。
典型的には、ヒト定常軽鎖は、カッパー軽鎖およびラムダ軽鎖に分類される。さらに、ヒト定常重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして定義する。これらのＩｇＧのサブタイプには、例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４が含まれる。
本明細書で使用される場合、「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、または「Ｖ鎖」は、異なる抗体間で配列が可変であるＩｇＧ鎖のセグメントを意味する。抗体の「可変領域」とは、単独または組み合わせのいずれかの、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と呼ばれてもよい。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と呼ばれてもよい。典型的には、重鎖と軽鎖の両方の可変領域は、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる三つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、フレームワーク領域によって整列され、これにより、特定のエピトープへの結合が可能になる。一般に、Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当は、概して、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．、ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）、Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３．のタンパク質の配列の定義に従う。
「ＣＤＲ」は、抗体ＶＨベータ－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、もしくはＨ３）のうちの一つ、または抗体ＶＬベータ－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の三つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、もしくはＬ３）のうちの一つを指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、例えば、抗体可変ドメイン内の最も超可変性の領域としてＫａｂａｔによって定義されてきた。ＣＤＲ領域配列はまた、保存されたベータシートフレームワークの一部ではなく、したがって、異なる構造に適合することができる残基としてＣｈｏｔｈｉａによって構造的に定義されている。両方の用語は、当該技術分野で周知である。ＣＤＲ領域配列は、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、およびＩＭＧＴによっても定義される。標準抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－４８、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７－７９）。超可変領域内の残基の数は、異なる抗体で異なるため、標準位置に対する追加の残基は、標準可変領域ナンバリングスキームの残基数の隣にａ、ｂ、ｃなどで従来ナンバリングされる（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．、上記）。こうした命名法は、当業者には同様に周知である。例えば、ＫａｂａｔナンバリングおよびＩＭＧＴ固有ナンバリングシステムを含むナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによって定義されるとおりである。他の実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムによって定義されるとおりである。さらに他の実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングシステムによって定義されるとおりである。なお他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステムによって定義されるとおりである。さらに他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングシステムによって定義されるとおりである。
配列同一性は、二つの配列が最適に整列されるとき、二つのポリペプチドのアミノ酸が、同等の位置で同じである程度を指す。
配列類似性には、同一の残基および非同一の生化学的に関連するアミノ酸が含まれる。類似の特性を共有し、交換可能であり得る生化学的に関連するアミノ酸が、上で考察されている。
「保存的に改変されたバリアント」または「保存的置換」とは、タンパク質の生物学的活性を変化させることなく変更を頻繁に行うことができるように、タンパク質中のアミノ酸を、類似の特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造および剛性など）を有する他のアミノ酸と置換することを指す。当業者であれば、概して、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は、生物学的活性を実質的に変化させないことを認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照）。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体または抗原結合断片が結合する抗原上の範囲または領域を指す。本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片のエピトープへの結合は、抗体またはその抗原結合性断片が、エピトープ内の一つまたは複数のアミノ酸残基に結合することを意味する。
「単離」核酸分子またはポリヌクレオチドとは、ＤＮＡまたはＲＮＡ、例えば、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源のＤＮＡまたはＲＮＡ、あるいは単離ポリヌクレオチドが自然界で見出されるポリヌクレオチドのすべてもしくは一部と関連付けられていないか、または自然界で関連付けられていないポリヌクレオチドに関連付けられている、そのいくつかの組み合わせを意味する。本開示の目的のために、特定のヌクレオチド配列「を含む（またはこれに類するもの）ポリヌクレオチド」は、インタクトな染色体を包含しないことが理解されるべきである。特定の核酸配列「を含む」単離されたポリヌクレオチドは、特定の配列に加えて、最大１０個、もしくはさらに最大２０個以上の他のタンパク質またはその部分もしくは断片のコード配列を含んでもよいか、または列挙された核酸配列のコード領域の発現を制御する作動可能に連結された制御配列を含んでもよく、かつ／またはベクター配列を含んでもよい。
「制御配列」という語は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要または有用なポリヌクレオチド配列を指す。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、任意選択的に、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを使用することが知られている。本発明の一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウイルスプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーターもしくは非ウイルスプロモーターもしくは伸長因子（ＥＦ）－１プロモーターなどのプロモーター、および／またはイントロンに作動可能に連結される。
核酸は、別のポリヌクレオチドと機能的関係に置かれるとき、「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結され、またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられる場合、コード配列に作動可能に連結される。概して、必ずしもそうではないが、「作動可能に連結された」とは、連結されているポリヌクレオチド配列が連続的であり、分泌リーダーの場合、連続的であり、読み取段階にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、連続的である必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。こうした部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーは、従来の慣行に従って使用される。
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養物」という表現は、互換的に使用され、このよう命名のすべては、その子孫を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」という用語は、形質転換の数に関係なく、初代対象細胞およびそこから誘導された培養物を含む。すべての子孫が、意図的または偶発性な変異に起因して、正確に同一のＤＮＡ含有量を有するわけではないことも理解される。元々形質転換された細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が含まれる。別個の命名が意図されている場合、文脈から明らかになるであろう。
宿主細胞には、哺乳類細胞を含む真核細胞および原核宿主細胞が含まれる。宿主細胞としては、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、乳児ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞がん細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞およびＨＥＫ－２９３細胞が挙げられる。哺乳類宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞が挙げられる。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株（例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）またはイラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ））、両生細胞、細菌細胞、植物細胞、および真菌細胞である。真菌細胞には、例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・フィンランジカ（Ｐｉｃｈｉａ ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロピア（Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｎｕｔａ）（オガタエ・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ ｍｉｎｕｔａ）、ピキア・リンドネン（Ｐｉｃｈｉａ ｌｉｎｄｎｅｎ））、ピキア・オプティアエ（Ｐｉｃｈｉａ ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）種、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）種、クリベロマイセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルクノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、ニセツリガネゴケ（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）を含む、酵母細胞および糸状真菌細胞が含まれる。ピキア属種、任意のサッカロマイセス属種、ハンゼヌラ・ポリモルファ、任意のクリベロマイセス属種、カンジダ・アルビカンス、任意のアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、トリコデルマ・レーゼイ、クリソスポリウム・ルクノウエンス、任意のフザリウム属種、ヤロウイア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ。本発明は、抗ＩＬＴ４抗体もしくはその抗原結合断片を含有するか、またはこのような抗体もしくは断片を含有するポリヌクレオチドを含有するか、またはポリヌクレオチドを含有するベクターを含有する、任意の宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞またはピキア細胞、例えば、ピキア・パストリス）を含む。
「治療する」または「治療すること」は、本発明の抗体またはその抗原結合断片を、抗体および抗原結合断片が、例えば、薬剤が治療活性を有する、がんまたは感染性疾患を有する、またはがんまたは感染性疾患を有することが疑われる対象の治療において有効である、疾患の一つまたは複数の症状を有する対象に投与することを意味する。典型的には、抗体または断片は、治療される対象または集団における一つまたは複数の症状（例えば、がんまたは感染性疾患の症状）を、そのような症状の退行もしくは除去を誘導することによって、または任意の臨床的に測定可能な程度まで、例えば、腫瘍成長もしくは転移などのがん症状などのそのような症状の進行を阻害することによって軽減するであろう、「有効量」または「有効用量」で投与される。抗体または断片の有効量は、患者の疾患段階、年齢、および体重、ならびに対象において所望の応答を誘発する薬物の能力などの因子に応じて変化し得る。
実施例１：固定可変重鎖ドメインを含有するヒトｓｃＦｖライブラリーを使用したＣＤ２８ Ｆｖのファージディスプレイの選択
Ｍ１３バクテリオファージ上に提示したヒトｓｃＦｖライブラリーの構築および取り扱いの一般的な手法は、Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９６，１４：３０９－３１４）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。選択およびスクリーニングのためのライブラリーは、その全てが、同じＶＨドメインを共有し、ＶＬドメイン内でのみ多様化されているｓｃＦｖをコードする。固定ＶＨライブラリーの生成方法および二重特異性抗体の同定およびアセンブリーのためのその使用は、ＵＳ２０１２／０１８４７１６およびＷＯ２０１２／０２３０５３に記載されており、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ヒトＣＤ２８（ｈｕＣＤ２８）に結合するｓｃＦｖを同定する手法を以下に記載する。選択を、ビオチン化ｈｕＣＤ２８タンパク質を含む溶液中および／またはｈｕＣＤ２８を発現する細胞上で実施した。選択戦略には、（ｉ）組み換えタンパク質上で最大４ラウンドの選択、（ｉｉ）組換えタンパク質と細胞の交互で最大４ラウンドの選択、（ｉｉｉ）組換えタンパク質上で２ラウンド、続いて細胞上で２ラウンドが含まれた。
タンパク質の選択
ｓｃＦｖファージライブラリーのアリコートを、２％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含有するＰＢＳでブロッキングした。ブロッキングしたファージを、まずストレプトアビジン／ニュートラビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンＴ１磁気ビーズまたはＳｅｒａ－Ｍａｇ ＳｐｅｅｄＢｅａｄｓ Ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ（商標）被覆磁気粒子）上で脱選択し、次いで２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭまたは５ｎＭのビオチン化組換えヒトＣＤ２８（ＣＤ８－Ｈ８２Ｅ５、Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と予めインキュベートした。次いで、ファージ＋抗原混合物を、遮断した磁気ビーズ（脱選択に使用したのと同じ種類）によって捕捉し、ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で五回、およびＰＢＳのみで二回洗浄した。ファージを１ｍｇ／ｍＬのトリプシンで溶出し、ＡＥＢＳＦを添加してトリプシン活性を遮断した後、指数関数的に増殖するＴＧ１細胞に直接添加した。感染したＴＧ１のアリコートを連続希釈して、選択出力を力価測定した。次いで、結果物を救済し、次の選択ラウンドに使用した。
細胞表面の選択
ファージ含有上清を、１０％ＦＢＳを含有するＰＢＳでブロッキングした。ブロッキングしたファージを、まずＣＤ２８ＮＥＧ ＴＩＢ－１５３細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ １５３）上で脱選択し、次いでＣＤ２８ＰＯＳジャーカット細胞（ジャーカットクローンＥ６－１、ＡＴＣＣ ＴＩＢ １５２）上で選択した。細胞をペレット化し、１０％ＦＢＳを含有するＰＢＳで五回洗浄し、続いてＰＢＳのみで一回洗浄した。ファージを１ｍｇ／ｍＬのトリプシンで溶出し、ＡＥＢＳＦを添加してトリプシン活性を遮断した後、指数関数的に増殖するＴＧ１細胞に直接添加した。感染したＴＧ１のアリコートを連続希釈して、選択出力を力価測定した。次いで、結果物を救済し、次の選択ラウンドに使用した。
実施例２：ヒトＣＤ２８へのｓｃＦｖ結合／非結合のスクリーニング
ＣＤ２８への結合についてのｓｃＦｖのスクリーニングを、ビオチン化ｈｕＣＤ２８－Ｈｉｓ（または陰性対照としてのビオチン化ｈｕＣＥＡ＿ＥＣＤ）を使用するＥＬＩＳＡ、またはＣＤ２８ＰＯＳ（ジャーカット）細胞およびＣＤ２８ＮＥＧ（ＴＩＢ－１５３）細胞を使用するフローサイトメトリーのいずれかによって試験した。
結合ＥＬＩＳＡについては、ＰＢＳ中の１％カゼイン溶液を用いて、ニュートラビジン被覆プレートをブロッキングした。ビオチン化ｈｕＣＤ２８－Ｈｉｓおよびビオチン化ｈｕＣＥＡ＿ＥＣＤを、５ｎＭで捕捉した。選択したｓｃＦｖを含有する新たに調製した周辺質抽出物の希釈液をプレートに適用し、マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体とロバ抗マウスＩｇＧ ＨＲＰ抗体の組み合わせを使用して検出した。ＴＭＢの添加後生じた４５０ｎｍでのＯＤを、分光光度計プレートリーダーを使用して測定した。無関係のｈｕＣＥＡタンパク質に結合できない場合、およびｈｕＣＤ２８上のＯＤ４５０がバックグラウンドＯＤ４５０よりも少なくとも３倍高い場合、ヒットを特異的な結合剤として分類した。
フローサイトメトリー結合アッセイのため、細胞を採取し、洗浄し、１５０，０００細胞または２００，０００細胞／ウェルでＶ底部９６ウェルプレートに分配した。選択したｓｃＦｖを含有する新たに調製した周辺質抽出物の希釈物を、マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体と予めインキュベートし、細胞に添加した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＡＰＣ検出抗体とインキュベートし、ｉＱＵＥ３スクリーニング装置（Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ）で分析した。細胞の少なくとも５％が、バックグラウンドのＧｅｏＭＦＩよりも３倍高いＣＤ２８ＰＯＳジャーカット細胞上に結合シグナルを示していた場合およびＣＤ２８ＮＥＧ ＴＩＢ－１５３細胞上でそのようなシグナルを観察しなかった場合、ヒットを陽性かつ特異的と分類した。
単一クローンからのＤＮＡ抽出後に陽性かつ特異的なヒットを配列決定した。
実施例３：ＩｇＧへの固定ＶＨ候補の再フォーマットおよび哺乳類細胞における一過性発現
スクリーニングおよび配列決定後、所望の結合特性を有するｓｃＦｖ候補をＩｇＧに再フォーマットし、ＰＥＡＫ細胞への一過性トランスフェクションによって発現させた。選択したｓｃＦｖのＶＨ配列およびＶＬ配列を、特定のオリゴヌクレオチドで増幅し、重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含有する発現ベクターにクローニングした。発現ベクターを、配列決定によって検証し、製造業者の指示に従い、リポフェクタミン２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して哺乳類細胞にトランスフェクトした。簡潔に述べると、４×１０６個のＰＥＡＫ細胞を、Ｔ７５フラスコにおいて、ウシ胎児血清を含有する２５ｍｌの培養培地中で培養した。トランスフェクトした細胞を、３７℃で５～６日間培養し、ＩｇＧ産生を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６機器を使用して定量した。製造業者の指示に従って、ＦｃＸＬアフィニティ樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上でＩｇＧ精製のために上清を採取した。簡潔に述べると、トランスフェクトした細胞からの上清を、適切な量のＦｃＸＬ樹脂と共に４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで樹脂を洗浄した後、試料を、Ａｍｉｃｏｎ Ｐｒｏカラムに充填し、結果としてＩｇＧを５０ｍＭのグリシンｐＨ３．５で溶出した。次いで、溶出したＩｇＧ画分を、ヒスチジンＮａＣｌ ｐＨ６．０緩衝液に対してＡｍｉｃｏｎ ５０ｋＤａによって透析し、ＩｇＧ含有量を、２８０ｎｍでの吸収によって定量化した。純度およびＩｇＧの完全性を、製造業者（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の指示に従って、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００を使用した電気泳動によって検証した。
実施例４：抗ＣＤ２８ ｍＡｂのＣＤ２８陽性ジャーカット細胞への結合
二価のｍＡｂとして試験した本発明の抗ＣＤ２８抗体アームの結合能力を、フローサイトメトリーによってＣＤ２８陽性ジャーカット細胞（ジャーカットクローンＥ６－１、ＡＴＣＣ ＴＩＢ １５２）を使用して評価した。
細胞を採取し、生存率をチェックし、計数した。２００，０００個の細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ ２％ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３）中に希釈した抗体の濃度を増加させながら、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を、冷ＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄し、好適な抗ヒトＩｇＧ二次抗体と４℃でさらに１５分間再インキュベートした。細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄し、適合性生存率マーカーを有する１５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。生細胞への抗体の結合を、Ｃｙｔｏｆｌｅｘ Ｐｌａｔｆｏｒｍ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用したフローサイトメトリーによって測定した。ＦｌｏｗＪｏ（商標）ｖ１０ソフトウェア（ＢＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてデータを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアを使用して用量応答結合曲線を作成した。
κλ体適合抗ＣＤ２８アームの選択の得られた結合プロファイルを、図１Ａ～１Ｃに示す。スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８ ｍＡｂ ＴＧＮ１４１２および無関係なｈＩｇＧ１ ｍＡｂは、それぞれ、陽性対照およびアイソタイプ対照として機能し、比較のため示した全ての実験で使用した。連続ファージディスプレイキャンペーン中に特定した抗ＣＤ２８候補を表す、三つのグラフ上に示す結合曲線の幅広いスペクトルは、ＣＤ２８に対する異なる結合親和性を有する抗ＣＤ２８抗体アームのパネルを、ファージディスプレイによって特定したという事実を強調している。
実施例５：ラムダおよびカッパー軽鎖を担持する二重特異性抗体の発現および精製
同じ細胞における一つの重鎖と二つの軽鎖の同時発現は、三つの異なる抗体のアセンブリーをもたらし得る。同時発現は、共発現させる鎖のうちの一つを発現する複数のベクターのトランスフェクション、または複数の遺伝子発現を駆動するベクターを使用することなど、異なる方法で達成することができる。
ここで、二つの軽鎖を、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１２０１８４７１６およびＷＯ２０１２０２３０５３に記載される一つの重鎖、一つのカッパー軽鎖および一つのラムダ軽鎖の共発現を可能にするよう従前に生成したベクターｐＮｏｖｉ κＨλにクローニングした。三つの遺伝子の発現を、ヒトサイトメガロウイルスプロモーター（ｈＣＭＶ）によって駆動させ、ベクターはまた、安定な細胞株の選択および確立を可能にするグルタミンシンテターゼ遺伝子（ＧＳ）を含有する。抗ＣＤ２８ ＩｇＧおよび抗ＣＥＡ ＩｇＧの共通ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子を、哺乳類細胞における一過性発現のため、ベクターｐＮｏｖｉ κＨλ内でクローニングした。Ｅｘｐｉ２９３細胞を、適切な数の細胞および培養培地体積を有する適切な三角フラスコにおいて懸濁液中で培養した。ＰＥＩを使用してプラスミドＤＮＡをＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞の上清中の抗体濃度を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６を使用して産生中に測定した。抗体濃度に従って、トランスフェクションの５～７日後に上清を採取し、珪藻土（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）の添加後の濾過によって清澄化した。精製は、三工程の精製プロセスに基づいていた。まず、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＦｃＸＬ親和性基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をＰＢＳで洗浄し、次いで清澄化した上清に添加した。＋４℃および２０ｒｐｍで一晩インキュベーション後、上清を２０００ｇで１０分間遠心分離し、フロースルーを保存し、樹脂をＰＢＳで二回洗浄した。次いで、樹脂をＡｍｉｃｏｎ Ｐｒｏカラムに移し、ｐＨ３．５の５０ｍＭのグリシンを含有する溶液を溶出に使用した。いくつかの溶出画分を生成し、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．４で中和し、プールした。総ヒトＩｇＧ（二重特異性抗体および二つの単一特異性抗体）を含有するプールを、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して定量した。さらなる分析のために少量のアリコートを保存し、残りの試料を、適切な体積のＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）カッパーＸＬ親和性基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに、室温で３０分間、２０ｒｐｍでインキュベートした。樹脂回収および洗浄、溶出および中和工程を、上記のように行った。最後の親和性精製工程を、カッパー精製工程と同じプロセスを適用するＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ラムダＦａｂ親和性基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して行った。あるいは、精製は、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）カッパーＸＬ親和性基質およびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ラムダＦａｂ親和性基質のみを使用した二工程の精製プロセスに基づいていた。すべての溶出画分をプールし、５０ｋＤａのＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心フィルターユニット（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、Ｈｉｓ－ＮａＣｌ ｐＨ ６．０製剤緩衝液に対して脱塩した。最終生成物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐを使用して定量した。
精製した二重特異性抗体を、製造業者（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって記載されるように、タンパク質８０キットを用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用して、変性および還元条件で電気泳動によって分析した。凝集体レベルを、ＳＥＣ－ＵＰＬＣによって決定した。すべての試料を、Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ試験（ＬＡＬ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用してエンドトキシン汚染について試験した。表２は、生成したＣＥＡ×ＣＤ２８およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８κλ－二重特異性抗体を概説する。
実施例６：ＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体のインビトロ特徴決定
ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのＣＤ２８陽性ジャーカット細胞、ＣＥＡ陽性ＬＳ１７４Ｔ細胞またはＣＥＡおよびＣＤ２８二重陰性ＴＩＢ１５３細胞への結合を試験した。標的細胞へのＣＤ２８×ＣＥＡκλ体の結合を示すために、フローサイトメトリーに基づく一連の実験を実施した。
使用することができる細胞の例としては、結腸直腸腺がん細胞株ＬＳ１７４ＴなどのＣＥＡ陽性細胞株、白血病ジャーカットＴ細胞などのＣＤ２８陽性細胞株ならびに白血病ＴＩＢ１５３細胞などのＣＥＡおよびＣＤ２８二重陰性細胞株が挙げられる。細胞染色および結合評価を、実施例４に記載したように実施した。
ジャーカット細胞、ＬＳ１７４Ｔ細胞およびＴＩＢ１５３細胞を使用して得られた本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの結合曲線を、それぞれ、図２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄに示す。κλ体に加えて、他の抗体を、参照抗体として含めた：ｈＩｇＧ１は、アイソタイプ対照として機能するｈＩｇＧ１ Ｆｃの無関係なモノクローナル抗体を示し、１ａ２８／ＡＣ８４／Ｎは、配列番号１２２、１２３、１２４および１２５のアミノ酸配列を含むＷＯ２０２１１１０６４７に記載される抗ＣＥＡアームＡＣ８４をターゲティングアームとして使用して、ＷＯ２０１９２４６５１４Ａ１に記載される抗ＣＤ２８ 抗体アームｍＡｂ１４２２６Ｐ２に基づく１＋１二重特異性分子である、ＬＡＬＡＰＡ変異ｈｕＩｇＧ１を示し、一方、ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８およびＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ１５は、それぞれ、文中で分子１１Ｂおよび分子１１Ｃと呼ばれる、ＷＯ２０２０１２７６１８に記載されるＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体に対応する。
ジャーカット細胞上の結合は、公開されている抗ＣＤ２８抗体またはより低い結合親和性に則して、本発明の選択した抗ＣＤ２８抗体アームのｈｕＣＤ２８に対する結合親和性の範囲を強調する（図２Ａおよび２Ｂ）。ＬＳ１７４Ｔ細胞上の結合は、同じ抗ＣＥＡアームを共有する抗体がどのように細胞と同様に結合するかを強調し、ＡＣ８４含有抗体（高親和性抗ＣＥＡアーム）が、同等の用量範囲プロファイルを示し、続いて二つのＣＥＡ＿ＣＤ２８（Ｖ８およびＶ１５）が、両方とも同じ中親和性抗ＣＥＡアームを含有し、最後に低親和性抗ＣＥＡアームＡＣ６１、ＡＣ６１ＡＩ７／Ｎに基づく唯一の分子が続く（図２Ｃ）。ＴＩＢ－１５３上の結合シグナルの不存在は、本発明の全ての結合アームが、指定した標的に特異的であることを示唆している（図２Ｄ）。
実施例７：ウエットおよびドライプレートコーティングＴ細胞増殖アッセイ
スーパーアゴニスト活性を有する抗ＣＤ２８アームを除外するために、シグナル１の不存在下でＴ細胞増殖を誘導するＣＤ２８ ｂｓＡｂの能力を、ウエットおよびドライプレートコーティングＴ細胞増殖アッセイを使用して評価した。
９６ウェルポリプロピレンプレートを、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌに希釈した抗体で一晩、１００μｌの抗体溶液（ウエットコーティング）を用いて４°Ｃで、または室温、非密封、およびクラスＩＩ層流キャビネット（緩衝液の蒸発を可能にするため＝ドライコーティング）において、５０μＬの抗体溶液のいずれかを用いてコーティングした。いずれかのコーティング手法に従って、プレートをＰＢＳで二回洗浄した。並行して、健康なドナーから得たバフィーコートから単離したＰＢＭＣを、製造業者の指示に従ってＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した。１００，０００個の染色したＰＢＭＣ細胞を、２００ｕＬ／ウェルの最終体積で９６ウェルプレートに添加し、３７℃＋５％ＣＯ２で６日間インキュベートした。次いで、細胞を採取し、実施例４および６ｂに詳述したように、抗ＣＤ４－ＡＰＣ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、１７－００４９－４１）および抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５ （ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、３０１０３２）を使用してフローサイトメトリー評価のため染色した。生ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖速度を、ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用したフローサイトメトリーによるＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ染色のレベルを測定することによって計算し、結果を、両方のコーティング手法についてＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって評価した（図３Ａ～３Ｄ）。ＣＤ２８ ＳＡ抗体ＴＧＮ１４１２は陽性対照として機能し、一方、Ｔ細胞のバックグラウンド増殖速度を、任意の抗体の不存在下で決定した（ＰＢＳのみ）。三つのＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ、ＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８およびＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ１５（上記）ならびにそれらのそれぞれの親抗ＣＤ２８モノクローナル抗体ｍＡｂ １４２２６Ｐ２、ｍＡｂ Ｖ８およびｍＡｂ Ｖ１５を、参照抗体として含めた。
軽度ではあるが有意なＴ細胞増殖を誘導した候補ＡＩ１９ＡＣ８４／Ｎを除き、他の試験した全ての候補が、両方のコーティング手法でビヒクル対照（ＰＢＳ）が誘導したものと一致して、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞増殖をもたらし、それによって、これらの抗ＣＤ２８アームに対する望ましくないスーパーアゴニスト特性を除外した。候補ＡＩ１９ＡＣ８４／Ｎを、さらなる分析から予防的に除外した。
本発明の抗ＣＤ２８アーム（ＡＩ１９アームを除く）のすべてとは対照的に、ＷＯ２０２０１２７６１８に記載される抗ＣＤ２８アームＶ８およびＶ１５は、両方の実験条件（ウエットおよびドライコーティング）下で静止ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の誘導によって決定する、モノクローナル抗体（ｍＡｂ Ｖ８およびｍＡｂ Ｖ１５）ならびに二重特異性ＣＥＡ×ＣＤ２８抗体（ＣＥＡ×ＣＤ２８ Ｖ８およびＣＥＡ×ＣＤ２８ Ｖ１５）の両方として、いくらかのスーパーアゴニスト活性を示す。抗ＣＤ２８アーム１４２２６Ｐ２については、モノクローナル抗体（ｍＡｂ １４２２６Ｐ２）としてもｂｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／Ｎの一部としても、スーパーアゴニスト活性を観察しなかった。
実施例８：Ｔ細胞活性化バイオアッセイ（ＩＬ－２プロモーター）
可能性のあるスーパーアゴニスト活性を除外すると、Ｔ細胞の表面でＣＤ２８共刺激受容体を刺激する抗ＣＤ２８アームの選択能力を、二重特異性フォーマット、すなわち、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのＩＬ－２レポーターシステムを使用して評価した。
Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｊ１６５１）が開発したＴ細胞活性化バイオアッセイ（ＩＬ－２）キットは、ＩＬ－２プロモーターが駆動させるルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する操作したジャーカットＴ細胞を含有する。ＣＤ３刺激とＣＤ２８刺激の両方の存在下で、受容体介在性シグナル伝達は、ＩＬ－２経路の活性化を誘導し、操作したジャーカットＴ細胞の発光をもたらす。ＣＤ２８ ｂｓＡｂは、Ｔ細胞を共刺激するために、Ｔ細胞シグナル１プロバイダーおよびＴＡＡ陽性標的細胞株の両方を必要とするため、アッセイを、ＣＥＡ陽性ＭＫＮ－４５細胞およびＣＥＡ×ＣＤ３（元々ＷＯ２０２１０５３５８７に記載された、配列番号１１８の共通重鎖ＨＣ、配列番号１１９のカッパー軽鎖、配列番号１２０のラムダ軽鎖を含むＣＥＡ×ＣＤ３二重特異性κλ体）の存在下で実行した。
簡潔に述べると、３７，５００個の腫瘍標的細胞（ＭＫＮ－４５）を、７５０００個のＩＬ－２レポーター細胞（Ｅ：Ｔ＝２：１）と共に、固定用量（１ｎＭ）のＣＥＡ×ＣＤ３単独の存在下、または増加する濃度のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせて、３７℃で６時間インキュベートした。あるいは、ＣＥＡ×ＣＤ３を、配列番号１１８の共通重鎖ＨＣ、配列番号１２１のカッパー軽鎖、配列番号１２０のラムダ軽鎖を含むターゲティングされていない抗ＣＤ３ ｂｓＡｂであるＹ４Ｌ３－１／Ｎで置き換えた。測定前に、プレートを室温で１５分間平衡化した。７５μｌの基質（Ｂｉｏ－Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を細胞に加え、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３Ｘ照度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて暗所、室温で５～１０分間インキュベーションした後、発光（相対発光単位）を測定した。
基礎的ＣＤ３刺激（１ｎＭのＣＥＡ×ＣＤ３）の存在下で、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂ濃度の増加と共にＩＬ－２プロモーター介在性発光の濃度依存性上昇が観察され、これは、ｂｓＡｂの抗ＣＤ２８アームを介した適切なＣＤ２８刺激を示唆し、強化されたＴ細胞活性化をもたらした。標的細胞の不存在下では、またはＣＥＡ×ＣＤ３を、Ｔ細胞活性化シグナル１を送達することができないターゲティングされていないＣＤ３ ｂｓＡｂであるＹ４Ｌ３－１／Ｎで置き換えた場合、Ｔ細胞活性化を観察することはできなかった（図４）。
このレポーターアッセイは、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体が、（１）ＣＥＡ陽性標的細胞および（２）初代Ｔ細胞活性化（シグナル１）の存在下でのみＴ細胞応答を強化することができることを確認する。
実施例９：ＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体が介在するＴ細胞依存性細胞傷害（ＴＤＣＣ）
ＣＥＡ陽性細胞株およびＣＥＡ陰性細胞株のＴＤＣＣ
本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体が誘導した、異なるＣＥＡ陽性腫瘍細胞株およびＣＥＡ陰性腫瘍細胞株のＴ細胞依存性細胞傷害活性（ＴＤＣＣ）を、ヒトＰＢＭＣまたは精製初代Ｔ細胞のいずれかをエフェクター細胞として使用してＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと組み合わせて評価した。
ＰＢＳで二回洗浄した後、標的細胞をトリプシンまたは細胞解離溶液で剥離させる。遠心分離工程の後、細胞をアッセイ培地中に再懸濁し、必要な濃度に調整し、９６ウェルプレートに播種する。
エフェクター細胞は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）または精製Ｔ細胞のいずれかであり得る。ＰＢＭＣを、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（商標）緩衝液（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＳｅｐＭａｔｅ（商標）Ｔｕｂｅｓ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、健康なヒトドナーに由来するバフィーコートから単離した。精製したＴ細胞をエフェクター細胞として使用した場合、追加の精製工程を実施し、ここでＴ細胞を、Ｔ細胞免疫磁気陰性選択キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＰＢＭＣから陰性に単離した。
ＴＤＣＣアッセイについては、ＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用した場合、これらを最終Ｅ：Ｔ比１０：ｌで標的細胞に添加し（別段の記載がない限り）、精製したＴ細胞を使用した場合、最終Ｅ：Ｔ比５：１を使用した。用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３および固定用量（２．５、１．０、０．５、または０．１μｇ／ｍＬ）の本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８抗体を、予め播種した標的細胞およびエフェクター細胞に添加した。あるいは、ＣＥＡ×ＣＤ３の代わりに、ターゲティングされていないＣＤ３ ｂｓＡｂ（Ｙ４Ｌ３－１／Ｎ）を使用することができる。標的細胞の殺滅を、アポトーシス／壊死細胞（細胞毒性検出キットＰＬＵＳ（ＬＤＨ）、Ｒｏｃｈｅ）によって培地中に放出されたＬＤＨを定量することによって（別段の記載がない限り）、３７℃、５％ＣＯ２での２４時間、４８時間、７２時間または６日間のインキュベーションのいずれかの後に評価する。最大ＬＤＨ放出（＝１００％溶解）を、キットが提供した溶解溶液と標的細胞をインキュベートすることによって得た。自然ＬＤＨ放出（＝０％溶解）は、いかなる抗体も添加することなくエフェクター細胞と共インキュベートした標的細胞を指す。ＴＤＣＣ曲線（図５Ａ～５Ｄおよび６Ａ～６Ｂ）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ９を使用してプロットした。あるいは、ＬＤＨ放出の代わりに、ＡＴＰ定量に基づくアッセイを使用した（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）生存率アッセイ＃Ｇ７５７１）。この場合、プレートを揺動プラットフォーム上で振盪して、上清にＰＢＭＣを再懸濁した。次いで、プレートをＰＢＳで二回洗浄して、全てのＰＢＭＣを除去した。その間に、キットの試薬を再構成し、室温で１０分間安定化させた。その後、１００μＬの再構成試薬を各ウェルに加え、直接光から保護して、室温で１０分間インキュベートした。ウェル中の残りの生標的細胞が含むアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）から来る発光シグナルを、発光取得モード（Ｓｐｅｃｔｒａ ｉ３Ｍａｘ）のマイクロプレートリーダーを使用して測定した。特異的溶解の割合を、以下の式：特異的溶解％＝［１－（試料の値）／（エフェクター＋標的）]×１００（式中、エフェクター＋標的は、抗体の不存在下でのベースライン値に対応する）を使用して計算した。次いで、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて特定の溶解結果を分析した。
ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂは、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと協同して、２６’０００のＣＥＡ／細胞を発現するＣＥＡ陽性ＬＳ１７４Ｔ標的細胞を殺滅する（図５Ａ～５Ｄ）。用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３および１μｇ／ｍＬの固定用量のＣＥＡ×ＣＤ２８抗体の存在下で、二つのＰＢＭＣドナーが誘導した殺滅を示す。相乗効果を、より低いＥＣ５０としてもしくは試験した最大濃度でのより高い全体的な殺滅として、またはその両方として観察することができる。重要なことに、ＣＥＡ×ＣＤ３を、シグナル１をエフェクター細胞に送達することができないターゲティングされていないＣＤ３ ｂｓＡｂであるＹ４Ｌ３－１／Ｎによって置き換えた場合、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが誘導した殺滅はなく、ＣＤ２８ ｂｓＡｂの活性に対する一次Ｔ細胞刺激（シグナル１）の重要性を強調する。ＢｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／ＮおよびＣＥＡ＿ＣＤ２８＿Ｖ８（上記）を、参照ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂとして含み、インビトロで弱い活性を一貫してもたらした候補ＡＩ１１ＡＣ８４／Ｎを除いて、試験したκλ体と同等の殺滅を示した。
ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂとＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂとの間の相乗効果は、それぞれ、１５，０００および約１，０００のＣＥＡ／細胞を発現するＫＡＴＯ－ＩＩＩ細胞およびＨＴ－２９細胞も、ＣＥＡ×ＣＤ３（用量応答）およびＣＥＡ×ＣＤ２８（２．５μｇ／ｍＬ）ｂｓＡｂの組み合わせがＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂ単独よりも効率的に殺滅するため、細胞株特異的ではない（図６Ａ～５Ｂを参照されたい）。ＢｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ（上記）を、参照ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂとして含めた。
ＣＥＡ×ＣＤ３およびＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせが誘導したＣＥＡ発現腫瘍細胞殺滅の際のＴ細胞活性化マーカーの上方制御
ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂが誘導したＣＥＡ陽性腫瘍細胞殺滅は、Ｔ細胞活性化に基づく。Ｔ細胞の活性化状態は、ＣＤ２８共刺激によってさらに増加させることができる。したがって、適切なシグナル１の存在下でＴ細胞活性化を強化するＣＥＡ×ＣＤ２８ κλ体の能力を、ＣＤ６９（早期活性化マーカー）またはＣＤ２５（後期活性化マーカー）などの特定のＴ細胞活性化マーカーを認識する抗体を使用したフローサイトメトリーによって定量化した。
殺滅アッセイの終了時のＴ細胞の活性化状態を評価するために（実施例９ａに詳述）、以下の手法に従った：浮遊細胞（ＣＤ４＋とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を含む）を新しいＶ底９６ウェルプレートに移した。上清を遠心分離により除去し、細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ ２％ ＢＳＡ、０．１％ ＮａＮ３）で二回洗浄した後、Ｆｃブロック試薬（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と４℃で１５分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄した後、細胞を、以下の抗体：抗ＣＤ６９－ＦＩＴＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）および抗ＣＤ４－ＡＰＣ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）と４℃で１５分間インキュベートした。細胞を洗浄し、Ｃｙｔｏｆｌｅｘ Ｐｌａｔｆｏｒｍ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用したフローサイトメトリーによって分析した。ＦｌｏｗＪｏ（商標）ｖ１０ソフトウェア（ＢＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してデータを分析した。ＬＳ１７４Ｔ細胞を、用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３の存在下、および１μｇ／ｍＬの固定用量のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの存在下で、１０：１のＥ：Ｔ比で７２時間、ＰＢＭＣと共培養した実験の結果を、図７Ａ～７Ｂに示す。
Ｔ細胞活性化を、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の表面での後期活性化マーカーＣＤ２５を定量化することによって測定した（それぞれ、図７Ａおよび７Ｂ）。ＣＥＡ×ＣＤ３を用いた単一処置と比較して、ＣＥＡ×ＣＤ３およびＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせは、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方をより大幅に活性化し、併用処置に対してはるかに明るいＣＤ２５染色を伴った。ＢｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ（上記）を、参照ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂとして含めた。
ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂの存在下でのＴ細胞増殖に対する、ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが介在するＣＤ２８共刺激の効果
ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、ＣＥＡ陽性腫瘍標的細胞の存在下でＴ細胞増殖の導入に関してＣＥＡ×ＣＤ３の効果を強化する能力について分析した。新たに単離したヒトＰＢＭＣを、製造業者の指示に従ってＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色し、洗浄し、最終Ｅ：Ｔ比１０：１（別段の記載がない限り）で、用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３および指定固定用量のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの存在下で標的細胞と５～６日間共培養した。共培養後、エフェクター細胞を採取し、洗浄し、死細胞を除去するための適切な生存率マーカーでならびに抗ＣＤ４－ＡＰＣ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ、１７－００４９－４１）および抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、３０１０３２）で染色して、対象集団を同定した。Ｔ細胞の増殖速度を、ＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用したフローサイトメトリーによって、生きたＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ染色強度のレベルを測定することによって計算した。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって評価し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してプロットした（図８Ａ～８Ｂ）。
増殖性ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を、それぞれ、図８Ａおよび８Ｂに示す。Ｔ細胞増殖を誘導するＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂの能力を、２．５μｇ／ｍＬのＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの添加が大きく増強し、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が、併用処置と等しく反応した。
ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを用いたＣＤ２８共刺激によるＣＥＡ発現腫瘍細胞の強化された殺滅の際の上清中に放出されるサイトカイン
ＣＥＡ×ＣＤ３の存在下でＣＥＡ発現腫瘍細胞を殺滅する際に、本発明のＣＤ２８二重特異性抗体がＴ細胞によるサイトカインの放出を強化する能力を、ＴＤＣＣアッセイの終了時に上清中の選択したサイトカインを定量化することによって評価した。実施例９に記載したＣＥＡ陽性標的細胞およびＴ細胞含有ＰＢＭＣの共培養後、培養上清を遠心分離により採取し、さらなる分析まで－８０℃で凍結保存した。グランザイムＢ、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＴＮＦαおよびＩＦＮγなどのサイトカイン／酵素を、マルチプレックスキットを使用することによって、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｐｌａｔｆｏｒｍを使用して定量化した。ＬＳ１７４Ｔ細胞を、用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３、および１μｇ／ｍＬの固定用量のＣＥＡ×ＣＤ２８と５：１のＥ：Ｔ比で７２時間、ＰＢＭＣと共培養した実験の結果を、図９Ａ～９Ｆに示す。ＢｓＡｂ １ａ２８／ＡＣ８４／Ｎ（上記）を、参照ＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂとして含めた。
ＣＥＡ×ＣＤ３を用いた単剤処置は、Ｔ細胞による中程度のサイトカイン放出をもたらし、一方、試験したＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのいずれかとのＣＥＡ×ＣＤ３の併用処置は、測定した全てのサイトカインを実質的に増加させ、以前に観察したＴ細胞のより良好な活性化および増殖を反映した。
実施例１０：ヒト化マウス腫瘍モデルにおけるＣＥＡ×ＣＤ３ Ｔ細胞再ターゲティングｂｓＡｂの抗腫瘍活性に対するＣＤ２８ ｂｓＡｂ介在性Ｔ細胞共刺激の評価
ＰＢＭＣヒト化マウス腫瘍モデルにおけるＡＩ３ＡＣ８４／ＮおよびＡＩ５ＡＣ８４／Ｎの抗腫瘍活性
この有効性研究は、ＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせた場合の、中間親和性（ＡＩ３およびＡＩ５）の抗ＣＤ２８を担持する二つのＣＥＡ×ＣＤ２８κλ体の抗腫瘍効果を評価することを目的とする。
実験設計を図１０に要約し、処置群および処置レジメンも示す。簡潔に述べると、１×１０６個のＬＳ１７４Ｔ細胞を、７～８週齢のＮＯＧマウス（ＮＯＤ／Ｓｈｉ－ｓｃｉｄ／ＯＬ－２Ｒγヌルマウス、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において１×１０６個のＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝１：１）を皮下共移植し、無作為化後、生着の７日後に処置を開始した。ＣＥＡ×ＣＤ３およびＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、１０ｍｇ／ｋｇで週に二回、合計６回の注射で同時注射した。マウスを週に２～３回腫瘍発生についてモニタリングし、実験のエンドポイント（腫瘍体積＝１５００ｍｍ３またはＧｖＨＤ症状の発症）まで、腫瘍をデジタルキャリパーによって測定した。腫瘍体積を、式（長さ×幅２）×０．５を使用して計算した。図１１Ａ～１１Ｂは、群（図１１Ａ）およびマウス（図１１Ｂ）当たりの腫瘍成長動態（平均＋ＳＥＭ）を示す。
ＣＥＡ×ＣＤ３で処置したマウスでは、ビヒクル群よりも腫瘍成長の軽度の阻害のみを観察した。しかしながら、ＡＩ３ＡＣ８４／ＮとＡＩ５ＡＣ８４／Ｎの両方とＣＥＡ×ＣＤ３との組み合わせは、完全な腫瘍退縮を誘導し、処置が完了した場合、移植の２８日後に触診ではできなかった腫瘍を有する。実験を４１日目に中止し、ＣＥＡ×ＣＤ３＋ＡＩ５ＡＣ８４／Ｎ群のマウスは、ＣＥＡ×ＣＤ３＋ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ群とは対照的に、まだ腫瘍を有しておらず、２匹のマウスが再発し、腫瘍はゆっくりと成長していた。
ＰＢＭＣヒト化マウス腫瘍モデルにおけるＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ（用量範囲で試験）およびＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎの抗腫瘍活性
この有効性研究は、中間親和性（ＡＩ３）の抗ＣＤ２８アームを担持する用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ２８κλ体の抗腫瘍効果を評価すること、およびＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせて、より低い親和性（ＡＩ１０）の抗ＣＤ２８アームを担持するＣＥＡ×ＣＤ２８κλ体の抗腫瘍効果と比較することを目的とする。
実験設計を図１２に要約し、処置群および処置レジメンも示す。簡潔に述べると、１×１０６個のＬＳ１７４Ｔ細胞を、７～８週齢のＮＯＧマウス（ＮＯＤ／Ｓｈｉ－ｓｃｉｄ／ＯＬ－２Ｒγヌルマウス、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において１×１０６個のＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝１：１）を皮下共移植し、無作為化後、生着の７日後に処置を開始した。ＣＥＡ×ＣＤ３およびＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、示した用量で週に二回、合計６回の注射で同時注射した。マウスを週に２～３回腫瘍発生についてモニタリングし、実験のエンドポイント（腫瘍体積＝１５００ｍｍ３またはＧｖＨＤ症状の発症）まで、腫瘍をデジタルキャリパーによって測定した。腫瘍体積を、式（長さ×幅２）×０．５を使用して計算した。図１３Ａ～１３Ｂは、群（図１３Ａ）およびマウス（図１３Ｂ）当たりの腫瘍成長動態（平均＋ＳＥＭ）を示す。
ＣＥＡ×ＣＤ３で処置したマウスでは、ビヒクル群よりも腫瘍成長の軽度の阻害のみが観察し、一方、ＣＥＡ×ＣＤ３を用いたＣＤ２８ ｂｓＡｂのすべての組み合わせは、重要な異なる抗腫瘍活性を誘導した。より具体的には、最高用量のＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ（１０ ｍｇ／ｋｇ）は、６／８匹のマウスにおいて完全な腫瘍退縮をもたらし、残りの２匹のマウスにおいて、触知可能であるが測定不可能な腫瘍を有し、中間用量のＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ（２ｍｇ／ｋｇ）は、強力な腫瘍制御をもたらし、再発腫瘍をもたらさず、全ての腫瘍体積は、最終的に＜５０ｍｍ３減少し（完全な腫瘍根絶を、１匹のマウスでのみ観察した）、最低用量（０．４ｍｇ／ｋｇ）は、様々な腫瘍制御をもたらし、マウスの半分は、腫瘍を根絶し、処置が腫瘍成長の遅延のみをもたらした。より低い親和性（ＡＩ１０）の抗ＣＤ２８アームを含有するＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂである、１０ｍｇ／ｋｇのＡＩ１０ＡＣ８４／Ｎを用いた処置は、同等の用量でのＡＩ３ＡＣ８４／Ｎを用いた処置よりも全体的に有効性が低く、２匹のマウスで、腫瘍成長の遅延のみを観察し、３匹のマウスでのみ完全な腫瘍根絶を観察した。
実施例１１：ＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体のインビトロ特徴決定
ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂのＣＤ２８陽性ジャーカット細胞、ＭＳＬＮ陽性Ｈ２２６およびＯＶＣＡＲ－３細胞またはＭＳＬＮおよびＣＤ２８二重陰性ＴＩＢ１５３細胞への結合。
ＭＳＬＮ×ＣＤ２８κλ体の標的細胞への結合を示すために、フローサイトメトリーに基づく一連の実験を実施した。
使用し得る細胞の例としては、中皮腫細胞株Ｈ２２６または卵巣腺がん細胞株ＯＶＣＡＲ－３などのＭＳＬＮ－陽性細胞株、白血病ジャーカットＴ細胞などのＣＤ２８陽性細胞株ならびに白血病ＴＩＢ１５３細胞などのＭＳＬＮおよびＣＤ２８二重陰性細胞株が挙げられる。Ｈ２２６細胞およびＯＶＣＡＲ－３細胞のメソテリン細胞表面発現を、それぞれ、１８０，０００および６８，０００のＭＳＬＮ／細胞で測定した。細胞染色および結合評価を、実施例４に記載したように実施した。
Ｈ２２６、ＯＶＣＡＲ－３、ジャーカットおよびＴＩＢ１５３細胞を使用して得られた本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの結合曲線を、それぞれ、図１４Ａ、１４Ｂ、１４Ｃおよび１４Ｄに示す。本発明の追加のＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂのＨ２２６、ＯＶＣＡＲ－３、ジャーカットおよびＴＩＢ１５３細胞への結合曲線を、それぞれ、図１７Ａ、１７Ｂ、１７Ｃおよび１７Ｄに示す。ｈＩｇＧ１は、アイソタイプ対照として機能するｈＩｇＧ１ Ｆｃの無関係なモノクローナル抗体を示す。
Ｈ２２６細胞およびＯＶＣＡＲ－３細胞への結合は、いかにして同じ抗ＭＳＬＮアームを共有する抗体が、同様に、ＭＳＬＮ陽性細胞に対して高い親和性で結合するかを強調する（図１４Ａおよび１４Ｂならびに図１７Ａおよび１７Ｂ）。ジャーカット細胞への結合は、ＡＩ５アーム対ＡＩ１０アームとの結合親和性の差を反映する（図１４Ｃ）が、本発明のＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂで生成したデータに則して、ＡＩ５アーム対ＡＩ３アームの結合親和性の類似性を強調する（図１７Ｃ）。ＴＩＢ－１５３上の結合シグナルの不存在は、本発明の全ての結合アームが、指定した標的に特異的であることを示唆している（図１４Ｄおよび１７Ｄ）。
実施例１２：ＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体が介在するＴ細胞依存性細胞傷害（ＴＤＣＣ）
ＭＳＬＮ陽性細胞株のＴＤＣＣ
本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体が誘導した、異なるＭＳＬＮ陽性細胞株のＴ細胞依存性細胞傷害（ＴＤＣＣ）を、実施例９に記載したように評価した。ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂを、Ｔ細胞をＭＳＬＮ陽性標的細胞に向け直すことができる三特異性ＭＳＬＮｘＣＤ３ｘＨＳＡ分子であるＨＰＮ５３６類似体と組み合わせて試験した。標的としてＨ２２６細胞、ＨＰＮ５３６類似体の用量範囲およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの１または０．１μｇ／ｍＬの固定用量で得たＴＤＣＣ曲線を、図１５Ａおよび１５Ｄに示す。標的としてＯＶＣＡＲ３細胞、用量範囲のＨＰＮ５３６類似体および２．５μｇ／ｍＬの固定用量のＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂを用いて得たＴＤＣＣ曲線（異なるＥ：Ｔ比で）を、図１８Ａ～１８Ｄに示す。
ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂは、ＨＰＮ５３６類似体と協同して、ＭＳＬＮ陽性Ｈ２２６標的細胞を殺滅した。相乗効果は、試験した濃度（１μｇ／ｍＬ対０．１μｇ／ｍＬ）のいずれかでＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの大部分について観察することができるが、ターゲティング抗ＭＳＬＮアームとしてＯ３５またはＯ４１を担持するｂｓＡｂについて最も顕著である。ほぼ同じ最大特異的溶解５０～６０％の腫瘍細胞を、０．１ならびに１μｇ／ｍｌでＡＩ５Ｏ３５およびＡＩ５Ｏ４１について得られ、達成したより低い親和性ＡＩ１０アームの最大溶解は、４０～６０％である。重要なことに、ＨＰＮ５３６類似体を、シグナル１をエフェクター細胞に送達することができないターゲティングされていないＣＤ３ ｂｓＡｂであるＹ４Ｌ３－１／Ｎによって置き換えた場合、ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが誘導した殺滅はなく、ＣＤ２８ ｂｓＡｂの活性に対する一次Ｔ細胞刺激（シグナル１）の重要性を強調する。
注目すべきことに、Ｅ：Ｔ比が低くなると（１０：１から３：１、１：１、最後に１：３、図１８Ａ～１８Ｄ）、ＨＰＮ５３６類似体の殺滅の可能性を低減した。１０：１と３：１のＥ：Ｔ比の両方で、９０％を超える標的細胞を、最高濃度のＨＰＮ５３６類似体用量範囲で殺滅し、Ｅ：Ｔ比が１：１および１：３に等しい場合、最高ＭＳＬＮ×ＣＤ３濃度で、それぞれ７０％および２６％の標的細胞のみを殺滅した。本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの添加は、このような活性の減少を補償し、Ｅ：Ｔ＝１：１でＨＰＮ５３６類似体の活性を完全に回復させ、Ｅ：Ｔ＝１：３で最大６０％の標的細胞の殺滅をもたらした。
ＭＳＬＮ×ＣＤ３およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせが誘導した、ＭＳＬＮ発現腫瘍細胞殺滅の際のＴ細胞活性化マーカーの上方制御
適切なシグナル１の存在下でＴ細胞活性化を強化するＭＳＬＮ×ＣＤ２８κλ体の能力を、実施例９に記載した特定のＴ細胞活性化マーカーを認識する抗体を使用したフローサイトメトリーによって定量化した。Ｈ２２６細胞を、用量範囲のＭＳＬＮ×ＣＤ３（ＨＰＮ５３６類似体）の存在下、および１μｇ／ｍＬまたは０．１μｇ／ｍＬの固定用量のＣＤ２８ ｂｓＡｂの存在下で、１０：１のＥ：Ｔ比で４８時間、ＰＢＭＣと共培養した実験の結果を、図１５Ｂおよび１５Ｅに示す。
ＨＰＮ５３６類似体を用いた単一処置と比較して、ＭＳＬＮ×ＣＤ３およびＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの組み合わせは、ＣＤ４＋Ｔ細胞をより大幅に活性化し、併用処置の大部分に対してはるかに明るいＣＤ２５染色を伴った。試験したＣＤ２８ ｂｓＡｂの用量に応じて、Ｔ細胞の活性化レベル間の差を観察し、１μｇ／ｍＬは、０．１μｇ／ｍＬよりも良好なＴ細胞活性化をもたらした。抗ＭＳＬＮアームと抗ＣＤ２８アームの両方の重要性も示し、Ｏ３５およびＯ４１ベースのｂｓＡｂは、Ｏ３０ベースのｂｓＡｂよりＴ細胞を良好に活性化し、中間親和性ＡＩ５アームは、低親和性ＡＩ１０アームよりも良好なＴ細胞活性化を誘導した。
ＭＳＬＮ×ＣＤ３の存在下でのＴ細胞増殖に対する、ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが介在するＣＤ２８共刺激の効果
実施例９に記載したように、ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、ＭＳＬＮ陽性腫瘍標的細胞の存在下でＴ細胞増殖の導入に関してＭＳＬＮ×ＣＤ３の効果を強化する能力について分析した。増殖性ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を、それぞれ、図１５Ｃおよび１５Ｆに示す。Ｔ細胞増殖を誘導するＨＰＮ５３６類似体の能力を、ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの添加が大幅に強化したが、最大の効果を、１μｇ／ｍＬで投与したターゲティングアームとしてＯ３５またはＯ４１のいずれかを担持するＡＩ５ベースのｂｓＡｂで得た。
ＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを用いたＣＤ２８共刺激によるＭＳＬＮ発現腫瘍細胞の強化された殺滅の際の上清中に放出されるサイトカイン
ＭＳＬＮ×ＣＤ３（ＨＰＮ５３６類似体）の存在下でＭＳＬＮ発現腫瘍細胞を殺滅する際に、本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体がＴ細胞によるサイトカインの放出を強化する能力を、実施例９に記載したように、ＴＤＣＣアッセイの終了時に上清中の選択したサイトカインを定量化することによって評価した。Ｈ２２６細胞を、用量範囲のＨＰＮ５３６類似体、および１μｇ／ｍＬまたは０．１μｇ／ｍＬの固定用量のＭＳＬＮ×ＣＤ２８と１０：１のＥ：Ｔ比で４８時間、ＰＢＭＣと共培養した実験の結果を、図１６Ａ～１６Ｆに示す。
ＨＰＮ５３６類似体を用いた単剤処置は、Ｔ細胞による中程度のサイトカイン放出をもたらし、一方、試験したＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのいずれかとのＨＰＮ５３６類似体の併用処置は、測定した全てのサイトカイン、特に、ＩＬ－２を実質的に増加させ、以前に観察したＴ細胞のより良好な活性化および増殖を反映した。
実施例１３：異なるＴＡＡを標的とするＴＡＡ×ＣＤ３およびＴＡＡ×ＣＤ２８二重特異性抗体の組み合わせが介在するＴ細胞依存性細胞傷害活性（ＴＤＣＣ）。
ＣＥＡ／ＭＳＬＮ二重陽性細胞のＴＤＣＣ
本発明のＭＳＬＮ×ＣＤ２８二重特異性抗体が誘導した、ＣＥＡ／ＭＳＬＮ二重陽性細胞株（ＨＰＡＣ細胞、２８０，０００のＣＥＡ／細胞および１４，０００のＣＥＡ／細胞）のＴ細胞依存性細胞傷害活性（ＴＤＣＣ）を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）生存率アッセイを読み出しとして使用して、実施例９に記載したように評価した。ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、ＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせて試験した。標的としてＨＰＡＣ細胞、用量範囲のＣＥＡ×ＣＤ３および２．５μｇ／ｍＬの固定用量のＣＥＡ×ＣＤ２８またはＭＳＬＮ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂのいずれかを用いて得たＴＤＣＣ曲線（異なるＥ：Ｔ比で）を、図１９Ａ～１９Ｄに示す。
ＣＥＡ×ＣＤ２８とＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂの両方は、ＣＥＡ×ＣＤ３と同等に良好に協同して、ＣＥＡ／ＭＳＬＮ二重陽性ＨＰＡＣ標的細胞を殺滅し、ＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが、異なるＴＡＡを標的とするＴＡＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと首尾よく対形成し得ることを示唆している。相乗効果を、全ての試験したＥ：Ｔ比で観察することができるが、より低いＥ：Ｔ比で最もよく強調され、ＣＤ２８ ｂｓＡｂの添加は、ＣＥＡ×ＣＤ３のより低い活性を補償する。
重要なことに、単独で（すなわち、シグナル１の非存在下で）試験した場合、ＣＤ２８ ｂｓＡｂが誘導した殺滅はなく、ＣＤ２８ ｂｓＡｂの活性に対する一次Ｔ細胞刺激（シグナル１）の重要性を強調する。
異なるＴＡＡを標的とするＣＤ３ ｂｓＡｂとＣＤ２８ ｂｓＡｂの組み合わせが誘導するＴ細胞活性化およびＴ細胞増殖
適切なシグナル１の存在下でＴ細胞活性化および増殖を強化するＣＤ２８ κλ体の能力を、図１９に示すＴＤＣＣ実験の後に定量化した。Ｔ細胞活性化データを、それぞれ、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞について図２０Ａおよび２０Ｂに示し、一方、図２０Ｃおよび２０Ｄは、それぞれ、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のＴ細胞増殖を示す。試験した異なるＥ：Ｔ比を示し、図の上部に明確にマークする。
ＣＥＡ×ＣＤ３を用いた単一処置と比較して、ＣＥＡ×ＣＤ３のＣＥＡ×ＣＤ２８またはＭＳＬＮ×ＣＤ２８ｂｓＡｂのいずれかとの組み合わせは、ＣＤ４＋Ｔ細胞をより大幅に活性化し、併用処置の両方に対して、および異なるＥ：Ｔ比にわたって、より多くのＣＤ２５陽性Ｔ細胞を伴った。ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化のためのＣＤ３とＣＤ２８ ｂｓＡｂとの間の相乗効果は、より低いＥ：Ｔ比でより明らかであり、Ｅ：Ｔ＞１では、ＣＥＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂは、それ自体でＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を上手く誘導する。二つのｂｓＡｂで同様のレベルのＴ細胞活性化を観察し、ＴＡＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂが、異なるＴＡＡを標的とするＴＡＡ×ＣＤ３ ｂｓＡｂと首尾よく対形成し得ることを示唆している。
Ｔ細胞の増殖能は、組み合わせを使用した場合に観察したより高いＴ細胞活性化を反映し、試験した４つのＥ：Ｔ比にわたって組み合わせが誘導した強化されたＴ細胞増殖をもたらした。注目すべきことに、ＣＥＡ×ＣＤ３単独は、１以下のＥ：Ｔ比で最小限に誘導したＴ細胞増殖のみであり、ＣＤ２８ ｂｓＡｂとの組み合わせが、好ましくないＥ：Ｔ比でもＴ細胞増殖を誘導するという利点を強調する。
実施例１３：ＢＲＧＳＦ－ＨＩＳマウスにおけるＣＥＡ×ＣＤ３ Ｔ細胞再ターゲティングｂｓＡｂの抗腫瘍活性に対するＣＤ２８ ｂｓＡｂ介在性Ｔ細胞共刺激の評価
この有効性研究は、ＣＥＡ＋ＨＰＡＦ－ＩＩ腫瘍を皮下移植したＢＲＧＳＦ－ＨＩＳマウスにおいてＣＥＡ×ＣＤ３と組み合わせた場合のＡＩ３ＡＣ８４／Ｎの抗腫瘍効果を評価することを目的とした。実験設計を図２２に要約し、処置群および処置レジメンを示す。簡潔に述べると、４人の別個のＣＤ３４＋造血幹細胞ドナー（９匹のマウス／ドナー、処置群当たり各ドナーからの３匹のマウス）でヒト化したＢＲＧＳＦ－ＨＩＳマウス（ｇｅｎＯｗａｙ）において、１．５×１０６個のＨＰＡＦ－ＩＩ細胞を皮下移植した。処置を、無作為化後、移植の７日後に開始した（平均腫瘍体積約８５ｍｍ３）。ＣＥＡ×ＣＤ３およびＣＥＡ×ＣＤ２８ ｂｓＡｂを、１０ｍｇ／ｋｇで週に二回、合計６回の注射で同時注射した。マウスを週に２～３回腫瘍発生についてモニタリングし、実験のエンドポイント（腫瘍体積＝１５００ｍｍ３）まで、腫瘍をデジタルキャリパーによって測定した。腫瘍体積を、式（長さ×幅２）×０．５を使用して計算した。図２３Ａは、生着の５６日後の生存の割合を示し、一方、図２３Ｂは、各処置群における個々のマウスの腫瘍成長動態を示す。
ＣＥＡ×ＣＤ３で処置したマウスでは、ビヒクル群よりも軽度の生存上の利点のみを測定した。しかしながら、ＡＩ３ＡＣ８４／ＮのＣＥＡ×ＣＤ３との組み合わせは、５６日目（実験が終了したとき）により低い腫瘍成長動態およびより高い生存可能性を誘導し、ＣＥＡ×ＣＤ３＋ＡＩ３ＡＣ８４／Ｎ群の１２匹中８匹のマウスは、それぞれ、ビヒクル群およびＣＥＡ×ＣＤ３群の１２匹中１匹および１２匹中３匹のマウスとは対照的に、まだ腫瘍エンドポイントに達しなかった。
その他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と併せて説明されてきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を説明することを意図しており、限定することを意図していない。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
本開示の追加の実施形態は、以下を含む。
実施形態１．
以下を含む、二重特異性抗体：
ａ．ＣＤ２８に結合する第一の抗原結合ドメインであって、
ｉ．（配列番号１）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、（配列番号２）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および（配列番号３）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を有する、第一の重鎖可変領域と、
ｉｉ．第一の軽鎖可変領域であって、
１．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３
を有する、第一の軽鎖可変領域と
を含む、第一の抗原結合ドメイン、ならびに
ｂ．腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する第二の抗原結合ドメインであって、
ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を有する、第二の重鎖可変領域
を含む、第二の抗原結合ドメイン。
実施形態２．
ＴＡＡがＣＥＡである、請求項１に記載の二重特異性抗体。
実施形態３．
第二の抗原結合ドメインが、
ｃ．第二の軽鎖可変領域であって、
ｉ．配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
ｉｉ．配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
ｉｉｉ．配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を有する、第二の軽鎖可変領域
を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
実施形態４．
第一の重鎖可変領域および第二の重鎖可変領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態５．
第一の重鎖および第二の重鎖が、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態６．
ｄ．パートｉｉ（１）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、
ｅ．パートｉｉ（２）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、
ｆ．パートｉｉ（３）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８２のアミノ酸配列を含み、
ｇ．パートｉｉ（４）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、
ｈ．パートｉｉ（５）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、
ｉ．パートｉｉ（６）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、
ｊ．パートｉｉ（７）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８６のアミノ酸配列を含み、
ｋ．パートｉｉ（８）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８７のアミノ酸配列を含み、
ｌ．パートｉｉ（９）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
ｍ．パートｉｉ（１０）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、
ｎ．パートｉｉ（１１）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
ｏ．パートｉｉ（１２）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、
ｐ．パートｉｉ（１３）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９２のアミノ酸配列を含み、
ｑ．パートｉｉ（１４）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、
ｒ．パートｉｉ（１５）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９４のアミノ酸配列を含み、
ｓ．パートｉｉ（１６）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、
ｔ．パートｉｉ（１７）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９６のアミノ酸配列を含み、
ｕ．パートｉｉ（１８）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、
ｖ．パートｉｉ（１９）の第一の軽鎖可変領域が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の二重特異性抗体。
実施形態７．
ａ．パートｉｉ（１）の第一の軽鎖が、配列番号９９のアミノ酸配列を含み、
ｂ．パートｉｉ（２）の第一の軽鎖が、配列番号１００のアミノ酸配列を含み、
ｃ．パートｉｉ（３）の第一の軽鎖が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、
ｄ．パートｉｉ（４）の第一の軽鎖が、配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、
ｅ．パートｉｉ（５）の第一の軽鎖が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、
ｆ．パートｉｉ（６）の第一の軽鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、
ｇ．パートｉｉ（７）の第一の軽鎖が、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、
ｈ．パートｉｉ（８）の第一の軽鎖が、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、
ｉ．パートｉｉ（９）の第一の軽鎖が、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、
ｊ．パートｉｉ（１０）の第一の軽鎖が、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、
ｋ．パートｉｉ（１１）の第一の軽鎖が、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、
ｌ．パートｉｉ（１２）の第一の軽鎖が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、
ｍ．パートｉｉ（１３）の第一の軽鎖が、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、
ｎ．パートｉｉ（１４）の第一の軽鎖が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、
ｏ．パートｉｉ（１５）の第一の軽鎖が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、
ｐ．パートｉｉ（１６）の第一の軽鎖が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、
ｑ．パートｉｉ（１７）の第一の軽鎖が、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、
ｒ．パートｉｉ（１８）の第一の軽鎖が、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、
ｓ．パートｉｉ（１９）の第一の軽鎖が、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の二重特異性抗体。
実施形態８．
ａ．パートａ（ｉ）の第二の軽鎖可変領域が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、
ｂ．パートａ（ｉｉ）の第二の軽鎖可変領域が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
ｃ．パートａ（ｉｉｉ）の第二の軽鎖可変領域が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、
請求項３に記載の二重特異性抗体。
実施形態９．
ａ．パートａ（ｉ）の第二の軽鎖が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
ｂ．パートａ（ｉｉ）の第二の軽鎖が、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、
ｃ．パートａ（ｉｉｉ）の第二の軽鎖が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、
請求項３に記載の二重特異性抗体。
実施形態１０．
第一の軽鎖がカッパーであり、第二の軽鎖がラムダである、請求項１～９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態１１．
第一の軽鎖がラムダであり、第二の軽鎖がカッパーである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態１２．
活性化Ｆｃ受容体への結合を低減しかつ／またはエフェクター機能を低減する一つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃドメインを含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
実施形態１３．
アミノ酸置換が、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む、請求項１２に記載の二重特異性抗体。
実施形態１４．
アミノ酸置換が、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、またはＰ３２９Ｒ置換を含む、請求項１２に記載の二重特異性抗体。
実施形態１５．
抗体が、ＩｇＧアイソタイプを有する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態１６．
抗体が、ヒトである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態１７．
組成物が、腫瘍特異的Ｔ細胞活性化を可能にする、請求項１～１６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
実施形態１８．
請求項１～１７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を含む、組成物。
実施形態１９．
ＣＤ３×ＣＥＡ二重特異性抗体をさらに含む、請求項１８に記載の組成物。
実施形態２０．
ＣＤ３×ＣＥＡ二重特異性抗体が、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む二つの重鎖、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む第一の軽鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含む第二の軽鎖を含む、請求項１９に記載の組成物。
実施形態２１．
腫瘍細胞の増殖を低減しかつ／または腫瘍細胞を殺滅する方法であって、細胞を請求項１８～２０のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
実施形態２２．
請求項１８～２０のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法。
実施形態２３．
ＣＤ２８に結合する抗原結合ドメインを含む抗体であって、
抗原結合ドメインが、
ｉ．（配列番号１）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、（配列番号２）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および（配列番号３）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を有する重鎖可変領域と
ｉｉ．軽鎖可変領域であって、
１．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
１９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３
を有する、軽鎖可変領域と
を含む、抗体。
実施形態２４．
Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片または一本鎖Ｆｖ断片である、請求項２３に記載の抗体。
実施形態２５．
単一特異性である、請求項２３に記載の抗体。
実施形態２６．
一価である、請求項２３に記載の抗体。

Claims (28)

  1. 以下を含む、二重特異性抗体：
    ａ．ＣＤ２８に結合する第一の抗原結合ドメインであって、
    ｉ．（配列番号１）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、（配列番号２）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および（配列番号３）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を有する、第一の重鎖可変領域と、
    ｉｉ．第一の軽鎖可変領域であって、
    １．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
    １６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
    １９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３
    を有する、前記第一の軽鎖可変領域と
    を含む、前記第一の抗原結合ドメイン、ならびに
    ｂ．腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する第二の抗原結合ドメインであって、
    ｉ．配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３を有する、第二の重鎖可変領域
    を含む、前記第二の抗原結合ドメイン。
  2. ａ．パートａ．ｉｉ．１．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートａ．ｉｉ．２．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８１のアミノ酸配列を含むか、
    ｃ．パートａ．ｉｉ．３．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８２のアミノ酸配列を含むか、
    ｄ．パートａ．ｉｉ．４．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８３のアミノ酸配列を含むか、
    ｅ．パートａ．ｉｉ．５．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８４のアミノ酸配列を含むか、
    ｆ．パートａ．ｉｉ．６．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８５のアミノ酸配列を含むか、
    ｇ．パートａ．ｉｉ．７．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８６のアミノ酸配列を含むか、
    ｈ．パートａ．ｉｉ．８．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８７のアミノ酸配列を含むか、
    ｉ．パートａ．ｉｉ．９．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８８のアミノ酸配列を含むか、
    ｊ．パートａ．ｉｉ．１０．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号８９のアミノ酸配列を含むか、
    ｋ．パートａ．ｉｉ．１１．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９０のアミノ酸配列を含むか、
    ｌ．パートａ．ｉｉ．１２．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９１のアミノ酸配列を含むか、
    ｍ．パートａ．ｉｉ．１３．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９２のアミノ酸配列を含むか、
    ｎ．パートａ．ｉｉ．１４．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９３のアミノ酸配列を含むか、
    ｏ．パートａ．ｉｉ．１５．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９４のアミノ酸配列を含むか、
    ｐ．パートａ．ｉｉ．１６．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９５のアミノ酸配列を含むか、
    ｑ．パートａ．ｉｉ．１７．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９６のアミノ酸配列を含むか、
    ｒ．パートａ．ｉｉ．１８．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、または
    ｓ．パートａ．ｉｉ．１９．の前記第一の軽鎖可変領域が、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、
    請求項１に記載の二重特異性抗体。
  3. ａ．パートａ．ｉｉ．１．の前記第一の軽鎖が、配列番号９９のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートａ．ｉｉ．２．の前記第一の軽鎖が、配列番号１００のアミノ酸配列を含むか、
    ｃ．パートａ．ｉｉ．３．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、
    ｄ．パートａ．ｉｉ．４．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、
    ｅ．パートａ．ｉｉ．５．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むか、
    ｆ．パートａ．ｉｉ．６．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、
    ｇ．パートａ．ｉｉ．７．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むか、
    ｈ．パートａ．ｉｉ．８．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むか、
    ｉ．パートａ．ｉｉ．９．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むか、
    ｊ．パートａ．ｉｉ．１０．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むか、
    ｋ．パートａ．ｉｉ．１１．の前記第一の軽鎖が、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、
    ｌ．パートａ．ｉｉ．１２．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むか、
    ｍ．パートａ．ｉｉ．１３．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むか、
    ｎ．パートａ．ｉｉ．１４．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むか、
    ｏ．パートａ．ｉｉ．１５．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むか、
    ｐ．パートａ．ｉｉ．１６．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むか、
    ｑ．パートａ．ｉｉ．１７．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むか、
    ｒ．パートａ．ｉｉ．１８．の前記第一の軽鎖が、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むか、または
    ｓ．パートａ．ｉｉ．１９の前記第一の軽鎖が、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む、
    請求項１～２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  4. 前記ＴＡＡがＣＥＡである、請求項１～３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  5. 前記第二の抗原結合ドメインが、
    ｉｉ．第二の軽鎖可変領域であって、
    １．配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    ２．配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    ３．配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２および
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を有する、前記第二の軽鎖可変領域
    を含む、請求項４に記載の二重特異性抗体。
  6. ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
    ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、
    請求項４～５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  7. ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の前記第二の軽鎖が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の前記第二の軽鎖が、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、または
    ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の前記第二の軽鎖が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、
    請求項４～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  8. 前記ＴＡＡがメソテリン（ＭＳＬＮ）である、請求項１～３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  9. 前記第二の抗原結合ドメインが、
    ｉｉ．第二の軽鎖可変領域であって、
    １．配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    ２．配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    ３．配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    ４．配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    ５．配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、
    配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および
    配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を有する、前記第二の軽鎖可変領域
    を含む、請求項８に記載の二重特異性抗体。
  10. ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むか、
    ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むか、
    ｄ．パートｂ．ｉｉ．４．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むか、または
    ｅ．パートｂ．ｉｉ．５．の前記第二の軽鎖可変領域が、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む、
    請求項７～８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  11. ａ．パートｂ．ｉｉ．１．の前記第二の軽鎖が、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むか、
    ｂ．パートｂ．ｉｉ．２．の前記第二の軽鎖が、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むか、
    ｃ．パートｂ．ｉｉ．３．の前記第二の軽鎖が、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むか、
    ｄ．パートｂ．ｉｉ．４．の前記第二の軽鎖が、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むか、または
    ｅ．パートｂ．ｉｉ．５．の前記第二の軽鎖が、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む、
    請求項７～９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  12. 前記第一の重鎖可変領域および前記第二の重鎖可変領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  13. 前記第一の重鎖および前記第二の重鎖が、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  14. 前記第一の軽鎖がカッパーであり、前記第二の軽鎖がラムダである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  15. 前記第一の軽鎖がラムダであり、前記第二の軽鎖がカッパーである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  16. 活性化Ｆｃ受容体への結合を低減しかつ／またはエフェクター機能を低減する一つ以上のアミノ酸置換を含むＦｃドメインを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  17. 前記アミノ酸置換が、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含む、請求項１６に記載の二重特異性抗体。
  18. 前記アミノ酸置換が、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、またはＰ３２９Ｒ置換を含む、請求項１６に記載の二重特異性抗体。
  19. 前記抗体が、ＩｇＧアイソタイプを有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  20. 前記抗体が、ヒトである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  21. 前記組成物が、腫瘍特異的Ｔ細胞活性化を可能にする、請求項１～２０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  22. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を含む、組成物。
  23. 腫瘍細胞の増殖を低減しかつ／または腫瘍細胞を殺滅する方法であって、前記細胞を請求項２２に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
  24. 請求項２２に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記対象におけるがんを治療する方法。
  25. ＣＤ２８に結合する抗原結合ドメインを含む抗体であって、
    前記抗原結合ドメインが、
    ｉ．（配列番号１）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、（配列番号２）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、および（配列番号３）のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を有する、第一の重鎖可変領域と
    ｉｉ．第一の軽鎖可変領域であって、
    １．配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ２．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ３．配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ４．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ５．配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ６．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ７．配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ８．配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    ９．配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １０．配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １１．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １２．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １３．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １４．配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １５．配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
    １６．配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １７．配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、
    １８．配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３、または
    １９．配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、
    配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および
    配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３
    を有する、前記第一の軽鎖可変領域と
    を含む、前記抗体。
  26. Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片または一本鎖Ｆｖ断片である、請求項２５に記載の抗体。
  27. 単一特異性である、請求項２５に記載の抗体。
  28. 一価である、請求項２５に記載の抗体。
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