JP2025134552A - インフルエンザワクチン製剤 - Google Patents

Abstract

【課題】安定性が向上したインフルエンザＨＡワクチン製剤を提供する。
【解決手段】抗原としてインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種以上の添加剤を含有するインフルエンザＨＡワクチン組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は安定性が向上したインフルエンザワクチン製剤に関する。

冬季に流行するインフルエンザは、インフルエンザウイルスを病原体とする急性の呼吸器感染症であり、くしゃみ等の飛沫や飛沫が付着した物への接触を介して伝播する。このインフルエンザの流行が大きいシーズンでは、インフルエンザ及びその関連疾患による死亡数が増加し、これは特に高齢者において顕著となる。この現象は、先進国で共通の現象であり、高齢者の割合が急増している我が国においても深刻な社会的問題である。

この季節性インフルエンザの予防に最も効果的な方法の１つとしてワクチンが挙げられる。現在、日本国において用いられているインフルエンザワクチンは、ウイルス粒子を解裂し、そのヘムアグルチニン（ＨＡ）画分を抗原として用いるスプリットワクチンであり、インフルエンザＨＡワクチンと称されている。
インフルエンザＨＡワクチンは、ウイルス表面に存在する自然な状態とは異なるＨＡを抗原とすることから、その製造工程ではホルマリンや界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）を添加することにより抗原の安定化が図られているが、長期保存安定性試験では力価が低下することが問題となっている。

一般に、ワクチン製剤は凍結乾燥により安定性が向上することが知られており、凍結乾燥時の抗原の変性を避けるために糖類を添加することが一般的に行われている。例えば、組換えインフルエンザウイルスベクターにトレハロースを添加して乾燥製剤とすることによりウイルスの安定性が向上することが報告されている（非特許文献１）。
しかしながら、凍結乾燥製剤は生産のサイクル長期化及び大規模な設備投資が必要となる。

また、弱毒生ワクチンの液体製剤については、添加剤としてスクロース・グルタミン酸ナトリウム、アルギニン及びアルブミンを用いた場合に抗原の安定性が向上することが報告されている（非特許文献２、非特許文献３）。
しかしながら、インフルエンザＨＡワクチン製剤について、その安定性を向上させるために特に有効な添加剤は見出されていない。

Int J Pharm . 2019 Apr 20:561:66-73 Vaccine . 2016 Jul 12;34(32):3676-83 J Pharm Sci . 2019 Jul;108(7):2315-2322

本発明は、安定性が向上したインフルエンザＨＡワクチン製剤を提供することに関する。

本発明者らは、インフルエンザＨＡワクチンの安定性について検討したところ、特定の糖類やアミノ酸類を複数種組み合わせて用いることにより、溶液状態での熱安定性が格段に向上することを見出した。

すなわち、本発明は、以下の１）～１０）に係るものである。
１）抗原としてインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種以上の添加剤を含有するインフルエンザＨＡワクチン組成物。
２）液体である、１）の組成物。
３）添加剤がスクロース及び／又はトレハロースを含む、１）又は２の組成物。
４）添加剤がスクロース及びトレハロースを含み、且つＮ－アセチル－Ｌ－システイン及び／又はグリシンを含む、１）又は２）の組成物。
５）抗原がＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有する、４）の組成物。
６）組成物溶液中のスクロース又はトレハロースの濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭである、３）～５）のいずれかの組成物。
７）組成物溶液中のＮ－アセチル－Ｌ－システインの濃度が０．５～４ｍＭであり、グリシンの濃度が２０～６０ｍＭである、４）又は５）の組成物。
８）組成物溶液中のスクロース及びトレハロースの濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭである、７）の組成物。
９）抗原としてＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンからなる添加剤を含有するインフルエンザＨＡワクチン組成物。
１０）組成物溶液中のスクロース及びトレハロース濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭであり、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度が０．５～４ｍＭであり、グリシン濃度が２０～６０ｍＭである、９）の組成物。

本発明のワクチン組成物によれば、インフルエンザＨＡ抗原の安定性を向上できることから、ワクチン接種者における免疫誘導の堅牢性を高めることができ、また海外等の遠隔の輸送における温度逸脱許容時間（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｕｄｇｅｔ）の長時間化が可能となる。

２種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 ２種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 ２種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ａ型）。 ２種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ａ型）。 ３種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 ３種の添加剤を用いた熱安定性評価（ＨＡ抗原：Ａ型）。 Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ａ型）。 グリシン濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 グリシン濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ａ型）。 アスパラギン酸濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ｂ型）。 アスパラギン酸濃度と熱安定性向上効果の関係（ＨＡ抗原：Ａ型）。

本発明のインフルエンザＨＡワクチン組成物（以下、「ワクチン組成物」とも称する）は、抗原としてインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン(「ＨＡ」と略される)画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種以上の添加剤を含有する。
抗原として用いられるインフルエンザウイルスのＨＡ画分は、Ａ型インフルエンザウイルス由来のＨＡ、Ｂ型インフルエンザウイルス由来のＨＡのいずれでも良いが、両者を含むのが好ましい。また、Ａ型又はＢ型インフルエンザウイルスの複数の亜型株由来のＨＡを含むものであっても良い。亜型は、現在知られているすべての亜型、及び将来単離、同定される亜型が包含される。本発明において抗原として用いられる好適なインフルエンザウイルスのＨＡとしては、例えば、Ａ／Ｈ１Ｎ1亜型株及びＡ／Ｈ３Ｎ２亜型株の２種のＡ型株由来のＨＡと、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ系統株及びＢ／Ｙａｍａｇａｔａ系統株から選ばれる１種又は２種のＢ型株由来のＨＡを含むものが好適に挙げられる。

インフルエンザウイルスのＨＡ画分は、例えば、インフルエンザ感染動物又はインフルエンザの患者から単離されたウイルス株を発育鶏卵法若しくは細胞培養法を用いて増殖させ、ウイルス粒子を含むウイルス液を界面活性剤やエーテル等により処理して分解・不活化することにより得ることができる。
具体的には、インフルエンザウイルス株を孵化鶏卵若しくは培養細胞に接種し、３０～３７℃で１～７日程度、好ましくは３３～３５℃で２日間程度培養を行う。培養終了後、ウイルス浮遊液（感染尿膜腔液若しくは感染細胞培養上清）を回収し、清澄化のため遠心分離または濾過を行う。次いで、濃縮のためバリウム塩吸着溶出反応や限外濾過を行う。ウイルス精製は、ショ糖密度勾配遠心分離等の超遠心分離や液体クロマトグラフィー等の手段を用いて行うことができる。精製ウイルス液は、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ、デオキシコール酸ナトリウム、ＣＴＡＢ等の界面活性剤やジエチルエーテルで処理することでウイルス粒子の解裂及び感染性の不活化を促す。
なお、培養細胞は、インフルエンザウイルスが増殖性を示す細胞であれば特に限定されず、例えば、ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙ Ｃａｎｉｎｅ Ｋｉｄｎｅｙ）、Ｖｅｒｏ、Ｃａｃｏ－２、ＰＥＲ．Ｃ６、ＥＢ６６及びウイルスが侵入に使用するレセプターを高発現するよう組換えた細胞が挙げられる。

本発明のワクチン組成物中のインフルエンザウイルスのＨＡの含有量は、ウイルス１株当たり１５μｇ以上、すなわち１５μｇＨＡ／株以上であり、好ましくは１５～６０μｇＨＡ／株であり、より好ましくは１５～２１μｇＨＡ／株である。
なお、ＨＡ含量は、一元放射免疫拡散試験法等の、ＷＨＯや国の基準で定められた試験法で測定することによって得られる値である。

本発明のワクチン組成物においては、添加剤として、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種以上が用いられ、好ましくは３種、より好ましくは４種又は５種が用いられる。
斯かる添加剤を２種以上配合することによって、組成物が液状であっても熱安定性が向上し、温度逸脱許容時間（Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｕｄｇｅｔ）の長時間化が可能となる。
熱安定性の評価は、例えばタンパク質高次構造評価装置であるＮａｎｏ ｔｅｍｐｅｒ社 Ｔｙｃｈｏ ＮＴ．６を用いて、組成物溶液を３５～９５℃の範囲で３０℃／分の速度で加温し、その間に検出される蛍光（３３０ｎｍと３５０ｎｍ）を測定し、得られた３５０ｎｍ／３３０ｎｍの蛍光強度の比率により、タンパク質の熱変性を評価することにより行うことができる。

添加剤の組み合わせは、熱安定性向上の点から、Ｂ型のインフルエンザＨＡについては、例えば、１）スクロース＋トレハロース、２）（スクロース又はトレハロース）＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、３）グリシン＋（グルタミン酸又はアスパラギン酸）、４）グルタミン酸＋アスパラギン酸、５）スクロース＋トレハロース＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、６）スクロース＋トレハロース＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン＋グリシンの組み合わせが好ましい。
また、Ａ型のインフルエンザＨＡについては、例えば、１）スクロース＋トレハロース、２）（スクロース又はトレハロース）＋（グリシン、グルタミン酸又はアスパラギン酸）、３）グリシン＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、４）グルタミン酸＋アスパラギン酸、５）（スクロース又はトレハロース）＋グリシン＋アスパラギン酸、５）スクロース＋トレハロース＋（グリシン又はアスパラギン酸）、７）スクロース＋トレハロース＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、８）スクロース＋トレハロース＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン＋グリシン、９）スクロース＋トレハロース＋Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン＋グリシン＋アスパラギン酸の組み合わせが好ましい。

Ａ型及びＢ型のインフルエンザＨＡを含むインフルエンザＨＡワクチンにおいては、スクロース又はトレハロース、或いはスクロース及びトレハロースの糖類を含むのが好ましく、これらにＮ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンから選ばれる１種以上を組み合わせて用いるのがより好ましく、さらには、スクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインの３種、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンの４種を組み合わせるのが好ましい。

ワクチン組成物中の添加剤の含有量は安定化効果が奏される量であれば限定されないが、組成物溶液中の最終濃度は、スクロース又はトレハロースとしては、６０ｍＭ以上とするのが好ましく、６０～２００ｍＭとするのがより好ましく、６０ｍＭとするのがさらに好ましい。
グリシンとしては、２０ｍＭ以上とするのが好ましく、２０～２５０ｍＭとするのがより好ましく、２０ｍＭとするのがさらに好ましい。グルタミン酸としては、１５０～３００ｍＭとするのが好ましく、２００～２５０ｍＭとするのがより好ましい。アスパラギン酸は、２０～２５０ｍＭとするのが好ましく、Ａ型においては４０～１００ｍＭとするのがさらに好ましい。
Ｎ－アセチル－Ｌ－システインとしては、０．５ｍＭ以上とするのが好ましく、０．５～４ｍＭとするのがより好ましく、０．５～２．０ｍＭとするのがさらに好ましい。

スクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインを組み合わせて用いる場合は、スクロース６０～２００ｍＭ、トレハロース６０～２００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン０．５～４ｍＭとするのが好ましく、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンを組み合わせて用いる場合は、スクロース６０～２００ｍＭ、トレハロース６０～２００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン０．５～４ｍＭ、グリシン２０～１００ｍＭとするのが好ましい。

Ａ型及びＢ型のインフルエンザＨＡを含むインフルエンザＨＡワクチンにおいて、スクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインを組み合わせて用いる場合は、スクロース６０～２００ｍＭ、トレハロース６０～２００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン０．５～４ｍＭとするのが好ましく、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンを組み合わせて用いる場合は、スクロース６０～２００ｍＭ、トレハロース６０～２００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン０．５～４ｍＭ、グリシン２０～６０ｍＭとするのが好ましい。

本発明のワクチン組成物の剤形は、液状、粉末状（凍結乾燥粉末、乾燥粉末）、カプセル状等の形態を取り得るが、液状であるのが好ましい。

本発明のワクチン組成物は、さらに医薬として許容され得る担体を含んでいてもよい。当該担体としては、ワクチンの製造に通常用いられる担体が挙げられ、具体的には、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、緩衝剤、乳化剤、保存剤（例えば、チメロサール）、等張化剤、ｐＨ調整剤、不活化剤（例えば、ホルマリン）、アジュバント若しくは免疫刺激剤等が例示される。アジュバントは抗原と共に投与することで、当該抗原に対する免疫応答を増強させる物質であり、例えば、沈降性アジュバントであるアルミニウム塩（水酸化アルミニウムゲル等）、油性アジュバントであるスクアレン、グラム陰性菌細胞壁外膜の構成成分であるリポ多糖ＬＰＳの改変体であるＭＰＬ、ＣｐＧやＰｏｌｙ Ｉ：Ｃ等に由来する核酸、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を活性化するバクテリア構成成分等を挙げることができる。

本発明のワクチン組成物の投与経路は、例えば、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、静脈内投与、経鼻投与及び経口投与が挙げられ、その投与方法は、例えば、シリンジ、マイクロニードル及びネブライザー等によって投与する方法が挙げられるが、シリンジによって皮下投与されるのが好ましい。

本発明のワクチン組成物の１回の投与量は、ウイルス１株当たり１５μｇＨＡ以上であればよく、対象の年齢、性別、体重等を考慮して適宜増量できるが、好ましくは、１５～６０μｇＨＡ／株、より好ましくは１５～２１μｇＨＡ／株、さらに好ましくは１５μｇＨＡ／株を、１回又は２回以上投与することが挙げられる。好ましくは複数回の投与であり、この場合、１～４週間の間隔をあけて投与することが好ましい。
以下、本発明の実施の形態を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

実施例１ ２種の添加剤を用いた熱安定性評価
添加剤として、糖類（スクロース、トレハロース）、アミノ酸類（グリシン（Ｇｌｙ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ））及び抗酸化剤（Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン：ＮＡＣ）より選択した２種類の添加剤を用いて、インフルエンザＨＡワクチンの熱安定性への寄与を評価した。

既承認であるインフルエンザＨＡワクチンの単原液を用いて、上記で示した添加剤を単剤もしくは２剤混合したものをＨＡタンパク質含量が５０μｇ／ｍＬとなるように調製した。なお、添加剤はスクロース、トレハロース、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸の終濃度が２００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの終濃度が０．５ｍＭとなるように添加し、これらをＴｙｃｈｏ ＮＴ．６（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ社）を用いてＨＡ抗原の熱安定性を評価した（図１－１，１－２：Ｂ型、図２－１，２－２：Ａ型）。なお、使用したインフルエンザＨＡワクチンの単原液は、２０２２／２０２３年シーズンのワクチン株で製造したものであり、Ａ／Ｈ１Ｎ１はＡ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／１／２０２０（ＩＶＲ－２１７）株、Ａ／Ｈ３Ｎ２はＡ／Ｄａｒｗｉｎ／９／２０２１（ＳＡＮ－０１０）株、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ系統はＢ／Ｐｈｕｋｅｔ／３０７３／２０１３株、Ｂ／Ｖｉｘｃｔｏｒｉａ系統はＢ／Ａｕｓｔｒｉａ／１３５９４１７／２０２１（ＢＶＲ－２６）株である。

Ｔｙｃｈｏ ＮＴ．６では、調製したＨＡ溶液を３５～９５℃の範囲を３０℃／分の速度で加温し、熱変性曲線の変曲点温度（Ｔｉ値）を測定し、添加剤を加えない場合（ＨＡ抗原のみ）に対する差分であるΔＴｉ値より、熱安定性を評価した。

図１－１、１－２、２－１，２－２より、Ｂ型及びＡ型のいずれも添加剤が1種類の場合に比べて、２種類を混合した場合は有意にΔＴｉ値が高くなった。このうちＢ型ではスクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインから得らればれる２種、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種、Ａ型ではスクロース、トレハロース、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種の組み合わせが、より熱安定性向上の高い混合処方であると考えられた。

実施例２ ３種の添加剤を用いた熱安定性評価
実施例１にてＨＡ抗原（Ａ型）の熱安定性に効果が確認されたスクロース、トレハロースグリシン、アスパラギン酸、ＨＡ抗原（Ｂ型）の熱安定性に効果が確認されたスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインより３種類を混合し、熱安定性効果を検証した。上記で示した添加剤を２剤混合もしくは３剤混合したものをＨＡタンパク質含量が５０μｇ／ｍＬとなるように調製した。なお、添加剤はスクロース、トレハロース、グリシン、アスパラギン酸はそれぞれ終濃度が６０ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの終濃度が０．５ｍＭとなるように添加し、これらをＴｙｃｈｏ ＮＴ．６（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ社）を用いてＨＡ抗原の熱安定性を評価した。（図３：Ｂ型、図４：Ａ型）
図３より、Ｂ型ではスクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインの３種類を混合した処方は２種類を混合する処方に比べてΔＴｉ値が有意に高くなり、このうちＮ－アセチル－Ｌ－システインが最も熱安定性向上への寄与が大きいと考えられた。
また、図４より、Ａ型ではスクロース、トレハロース、グリシン及びアスパラギン酸から選ばれる３種類を混合した処方は２種類を混合する処方に比べてΔＴｉ値が高くなり、このうちグリシンとアスパラギン酸が熱安定性向上への寄与が大きいと考えられた。

以上より、Ａ型、Ｂ型共に、スクロース、トレハロースの添加は熱安定性向上に重要であり、これらに熱安定性向上への寄与が大きいと考えられたＮ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、アスパラギン酸の濃度設定を行い、最適な処方を検討することとした。

実施例３ Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度と熱安定性向上効果の関係
熱安定性への寄与が大きいＮ－アセチル－Ｌ－システインについて、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度と熱安定性向上効果の関係を検討した。ＨＡ抗原にスクロース、トレハロース及びＮ－アセチル－Ｌ－システインを添加し、ＨＡタンパク質含量が５０μｇ／ｍＬとなるように調製した。なお、スクロース、トレハロースはそれぞれ終濃度が３００ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの終濃度が０．５、１、２、４ｍＭとなるように添加した。調製したこれらの溶液をＴｙｃｈｏ ＮＴ．６（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ社）を用いてＨＡ抗原の熱安定性を評価した（図５：Ｂ型、図６：Ａ型）。

図５及び６より、設定したＮ－アセチル－Ｌ－システインの濃度範囲内ではΔＴｉ値に濃度依存的な変化はなく、同程度であった。したがって、Ｂ型及びＡ型のいずれもＮ－アセチル－Ｌ－システインの添加濃度は０．５～４ｍＭまでは同程度の熱安定性効果があることがわかった。したがって、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの濃度は０．５ｍＭに設定することとした。

実施例４ グリシン濃度と熱安定性向上効果の関係
熱安定性への寄与が大きいグリシンについて、グリシン濃度と熱安定性向上効果の関係を検討した。ＨＡ抗原にスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシンを添加し、ＨＡタンパク質含量が５０μｇ／ｍＬとなるように調製した。なお、スクロース、トレハロースはそれぞれ終濃度が６０ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの終濃度が０．５ｍＭ、グリシンの終濃度が２０、４０、６０、８０、１００ｍＭとなるように添加した。調製したこれらの溶液をＴｙｃｈｏ ＮＴ．６（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ社）を用いてＨＡ抗原の熱安定性を評価した（図７：Ｂ型、図８：Ａ型）。

図７では設定したグリシンの濃度範囲内でΔＴｉ値が濃度依存的に低下したが、図８ではΔＴｉ値が濃度依存的に上昇した。ただし、Ｂ型及びＡ型のいずれもグリシン濃度を２０ｍＭ添加することで、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの３種類混合に比べてΔＴｉ値が高くなっており、熱安定性が向上することがわかった。よって、グリシン濃度は２０ｍＭに設定することとした。

実施例５ アスパラギン酸濃度と熱安定性向上効果の関係
熱安定性への寄与が大きいアスパラギン酸について、アスパラギン酸濃度と熱安定性向上効果の関係を検討した。ＨＡ抗原にスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、アスパラギン酸を添加し、ＨＡタンパク質含量が５０μｇ／ｍＬとなるように調製した。なお、スクロース、トレハロースはそれぞれ終濃度が６０ｍＭ、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインの終濃度が０．５ｍＭ、グリシンの終濃度が２０ｍＭ、アスパラギン酸の終濃度が２０、４０、６０、８０、１００ｍＭとなるように添加した。調製したこれらの溶液をＴｙｃｈｏ ＮＴ．６（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ社）を用いてＨＡ抗原の熱安定性を評価した（図９：Ｂ型、図１０：Ａ型）。
図９ではアスパラギン酸を添加することでスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシンの４種類混合に比べてΔＴｉ値が低下した。一方で、図１０ではアスパラギン酸を４０ｍＭ以上添加することで、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシンの４種類混合に比べてΔＴｉ値が高くなっており、熱安定性が向上することがわかった。よって、スクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンの４種混合に対するアスパラギン酸の添加効果はＡ型にのみ有効であると考えられた。

以上の結果より、Ａ型及びＢ型由来のＨＡを含むインフルエンザＨＡワクチンについては、６０ｍＭスクロース、６０ｍＭトレハロース、０．５ｍＭ Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及び２０ｍＭグリシンの組成が熱安定性向上効果の高い処方であると考えられた。

Claims (10)

1. 抗原としてインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン、グリシン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる２種以上の添加剤を含有するインフルエンザＨＡワクチン組成物。
2. 液体である、請求項１記載の組成物。
3. 添加剤がスクロース及び／又はトレハロースを含む、請求項２記載の組成物。
4. 添加剤がスクロース及びトレハロースを含み、且つＮ－アセチル－Ｌ－システイン及び／又はグリシンを含む、請求項２記載の組成物。
5. 抗原がＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有する、請求項４記載の組成物。
6. 組成物溶液中のスクロース又はトレハロースの濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭである、請求項３～５のいずれか１項記載の組成物。
7. 組成物溶液中のＮ－アセチル－Ｌ－システインの濃度が０．５～４ｍＭであり、グリシンの濃度が２０～６０ｍＭである、請求項４又は５記載の組成物。
8. 組成物溶液中のスクロース及びトレハロースの濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭである、請求項７記載の組成物。
9. 抗原としてＡ型及びＢ型のインフルエンザウイルスのヘムアグルチニン画分を含有し、併せてスクロース、トレハロース、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン及びグリシンからなる添加剤を含有するインフルエンザＨＡワクチン組成物。
10. 組成物溶液中のスクロース及びトレハロース濃度がそれぞれ６０～２００ｍＭであり、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン濃度が０．５～４ｍＭであり、グリシン濃度が２０～６０ｍＭである、請求項９記載の組成物。