JP2023538891A

JP2023538891A - 抗ｃｄ２８組成物

Info

Publication number: JP2023538891A
Application number: JP2023511778A
Authority: JP
Inventors: デスジャルレイス，ジョン，アール．; ムーア，グレゴリー; ヘドバット，マイケル; ディアス，フアン; ゼン，ヴェロニカグスティ
Original assignee: ゼンコアインコーポレイテッド
Priority date: 2020-08-19
Filing date: 2021-08-19
Publication date: 2023-09-12
Also published as: US20230257466A1; KR20230052293A; AU2021329378A1; WO2022040482A1; US20220119530A1; US20220098306A1; KR102607909B1; EP4200332A1; CA3192204A1; US11919958B2; KR20230166150A; IL300666A; MX2023001962A; US11591401B2

Abstract

本明細書では、新規の抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３（「αＣＤ２８×αＢ７Ｈ３」とも呼ばれる）ヘテロ二量体二重特異性抗体、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。主題のαＣＤ２８×αＢ７Ｈ３抗体は、Ｔ細胞上のＣＤ２８共刺激分子にアゴニスト的に結合し、腫瘍細胞上のＢ７Ｈ３を標的とすることができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、他の抗がん療法と組み合わせて使用される場合、抗腫瘍活性を増強するのに特に有用である。
【選択図】図１

Description

優先権
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０２０年８月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／０６７，８３４号及び２０２０年１０月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／０９２，２７２号の利益を主張する。

配列表の組み込みの段落
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年８月１９日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは０６７４６１－５２７２－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１，１３０，４１７バイトである。

腫瘍に対する自然免疫応答は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びＴ細胞などの免疫エフェクター細胞を送り出し、腫瘍細胞を攻撃して破壊する。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、多くの場合、複数の免疫チェックポイント受容体（ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４など）及び共刺激受容体（ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８など）を発現する。ＴＩＬは、抑制性免疫チェックポイントのアップレギュレーションにより、時間の経過とともに細胞毒性を失う。チェックポイント遮断は、他の治療オプションと比較して臨床反応率の増加を示しているが、多くの患者は依然としてチェックポイント遮断に対する反応を達成できていない。ＴＩＬ上の共刺激受容体の関与は、免疫チェックポイントの負のシグナルを克服できる正のシグナルを提供し得る。アゴニスト共刺激受容体抗体の前臨床及び臨床研究は、共刺激受容体のアゴニズムが印象的な抗腫瘍応答をもたらし、Ｔ細胞を活性化して腫瘍細胞を攻撃できることを実際に実証した。

末梢毒性を最小限に抑えながら腫瘍細胞を特異的に破壊することにより、抗腫瘍活性を高めることもがん治療にとって重要である。この文脈では、標的腫瘍細胞の存在下でＴ細胞のみが共刺激シグナルを提供されることが重要である。しかしながら、単一特異性完全長抗体による共刺激受容体のアゴニズムは、ＴＩＬ対末梢Ｔ細胞対自己免疫毒性に寄与する自己抗原反応性Ｔ細胞に関して非差別的である可能性が高い。例えば、単一特異性で非差別的なｐａｎ－４－１ＢＢアゴニスト抗体であるウレルマブは、初期段階の臨床試験で重大な肝臓毒性を示した（Ｓｅｇａｌｅｔａｌ．，２０１６）。したがって、がんの治療のための新規免疫応答増強組成物が依然として必要とされている。

本明細書では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ（例えば、αＣＤ２８×αＢ７Ｈ３）抗体を含む新規抗ＣＤ２８組成物、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。主題の抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、Ｔ細胞上のＣＤ２８共刺激分子及び腫瘍細胞上の腫瘍関連抗原（例えば、Ｂ７Ｈ３）にアゴニスト的に結合することができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、例えばチェックポイント阻害剤を含む他の抗がん療法と組み合わせて特に有用である。本明細書ではまた、新規αＣＤ２８及びαＢ７Ｈ３結合ドメインも提供される。

第１の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、それぞれ第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、共通軽鎖は、別々に第１の単量体中の各ＶＨ１－ＣＨ１及び第２の単量体中のＶＨ２－ＣＨ１と対合し、ＶＨ１及びＶＬは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、ＶＨ２及びＶＬは、一緒に第２のＡＢＤを形成し、第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、第１及び第２のＡＢＤのうちの他方はヒトＢ７Ｈ３に結合する。

いくつかの実施形態では、第１のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合し、第２のＡＢＤはヒトＢ７Ｈ３に結合する。ある特定の実施形態では、第１のＡＢＤはヒトＢ７Ｈ３に結合し、第２のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合する。

いくつかの実施形態では、ＶＨ１ドメインのアミノ酸配列は、配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択され、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、配列番号８７４である。

いくつかの実施形態では、ＶＨ２ドメインのアミノ酸配列は、配列番号５８５、配列番号８７０、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択される。

ある特定の実施形態では、第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインは、それぞれバリアントＦｃドメインである。

ヘテロ二量体抗体のいくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。いくつかの実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第２の単量体は、配列番号１０１９のアミノ酸配列を含み、第１の単量体は、配列番号１０２０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１０２１のアミノ酸配列を有する。

別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第１のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、一緒に第１のＡＢＤを形成し、第２のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、一緒に第２のＡＢＤを形成し、第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、第１及び第２のＡＢＤのうちの他方はヒトＢ７Ｈ３に結合する。

ある特定の実施形態では、ＶＨ１ドメインのアミノ酸配列は、配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択され、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、配列番号８７４である。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む。

別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－第１のドメインリンカー－ｓｃＦｖ－第２のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖが、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、ＶＨ１ドメイン及び第１のＶＬ１ドメインのそれぞれは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、ｓｃＦｖは、第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２及びＶＬ２は、第２のＡＢＤを形成し、第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、第１及び第２のＡＢＤのうちの他方は腫瘍標的抗原（ＴＴＡ）に結合する。

ある特定の実施形態では、第１のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合し、第２のＡＢＤはＴＴＡに結合する。いくつかの実施形態では、第１のＡＢＤはＴＴＡに結合し、第２のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む。

いくつかの実施形態では、ＶＨ２のアミノ酸配列は、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される。

ある特定の実施形態では、ＴＴＡはヒトＢ７Ｈ３である。

いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインは、それぞれバリアントＦｃドメインである。

例示的な実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む。

一態様では、ａ）ｉ）第１の可変重鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー及び第１の可変軽鎖ドメインを含むｓｃＦｖと、ｉｉ）第１のＦｃドメインとを含む第１の単量体であって、ｓｃＦｖが、ドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨが、第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、ＶＨ１及びＶＬ１は、一緒に第１のＡＢＤを形成し、ｓｃＦｖは、第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２及びＶＬ２は、第２のＡＢＤを形成し、第１のＡＢＤ及び第２のＡＢＤのうちの一方はＣＤ２８に結合し、第１のＡＢＤ及び第２のＡＢＤのうちの他方はＴＴＡに結合する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む。

ある特定の実施形態では、第２のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合し、ＶＨ２のアミノ酸配列は、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ｓｃＦｖを含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖが、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、軽鎖とを含む、ヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、ＶＨ１ドメイン及び第１のＶＬ１ドメインのそれぞれは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、ｓｃＦｖは、第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２及びＶＬ２は、一緒に第２のＡＢＤを形成し、第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、第１及び第２のＡＢＤのうちの他方は腫瘍標的抗原（ＴＴＡ）に結合する。

ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む。

ある特定の実施形態では、ＶＨ２のアミノ酸配列は、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＴＴＡはヒトＢ７Ｈ３である。

いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインは、それぞれバリアントＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

別の態様では、ａ）本明細書に記載のヘテロ二量体抗体のいずれかの第１の単量体をコードする第１の核酸と、ｂ）ヘテロ二量体抗体の第２の単量体をコードする第２の核酸と、ｃ）ヘテロ二量体抗体の軽鎖をコードする第３の核酸とをそれぞれ含む核酸組成物が、本明細書に提供される。第１、第２及び第３の核酸のうちの１つ以上を含む発現ベクターを含む発現ベクター組成物、そのような発現ベクター組成物を含む宿主細胞、並びに本明細書に記載のヘテロ二量体抗体を作製する方法もまた、本明細書に提供される。

別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、本明細書に記載のヘテロ二量体抗体を患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。

別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、ａ）本明細書に記載のヘテロ二量体抗体であって、ＴＴＡがヒトＢ７Ｈ３であるヘテロ二量体抗体と、ｂ）ＣＤ３及びＢ７Ｈ３に結合する二重特異性抗体とを患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。

更に別の態様では、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、ａ）本明細書に記載のヘテロ二量体抗体であって、ＴＴＡがヒトＢ７Ｈ３であるヘテロ二量体抗体と、ｂ）抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択されるチェックポイント阻害剤とを患者に投与することを含む方法が本明細書に提供される。

更に別の態様では、ａ）配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６７０、配列番号６７１及び配列番号６７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗ＣＤ２８ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、ａ）ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む重鎖と、ｂ）ＶＬ－ＣＬを含む軽鎖とを含む抗体である。

別の態様では、ａ）配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号８７４及び配列番号９３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。

一態様では、ａ）配列番号９４６のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号９５０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。

別の態様では、ａ）配列番号９５６のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号９６０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。

一態様では、ａ）配列番号９６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号９６８のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。

別の態様では、ａ）配列番号９７２のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、ｂ）配列番号９７６のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、組成物は、ａ）－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３に連結したＶＨを含む重鎖と、ｂ）－ＣＬに連結したＶＬを含む軽鎖とを含む抗体である。

別の態様では、ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ２８ＡＢＤ又は抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤのいずれかのＶＨをコードする第１の核酸と、ｂ）抗ＣＤ２８又は抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤのＶＬをコードする第２の核酸とをそれぞれ含む核酸組成物が、本明細書に提供される。第１及び第２の核酸のうちの１つ以上を含む発現ベクターを含む発現ベクター組成物、そのような核酸組成物又は発現ベクター組成物を含む宿主細胞、並びに本明細書に記載の抗ＣＤ２８ＡＢＤ又は抗－Ｂ７Ｈ３ＡＢＤ組成物を作製する方法もまた、本明細書に提供される。

一態様では、ＣＤ２８抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む組成物が、本明細書で提供される。ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域１－３（ｖｈＣＤＲ１－３）及び可変軽鎖相補性決定領域（ｖｌＣＤＲ１－３）を含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。例示的な実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインから選択される：ＣＤ２８結合ドメイン：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

別の態様では、ＣＤ２８抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む抗ＣＤ２８抗体が本明細書に提供される。ＣＤ２８抗原結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域１－３（ｖｈＣＤＲ１－３）及び可変軽鎖相補性決定領域（ｖｌＣＤＲ１－３）を含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。例示的な実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインから選択される：ＣＤ２８結合ドメイン：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８抗体は、ａ）第１の抗原結合ドメイン及び第１の定常ドメインを含む第１の単量体と、ｂ）第２の抗原結合ドメイン及び第２の定常ドメインを含む第２の単量体と、を含み、第１の抗原結合ドメイン又は第２の抗原結合ドメインのいずれかが、ＣＤ２８抗原結合ドメインである。

いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、異なる抗原に結合する。

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、抗ＣＤ２８一本鎖フラグメント（ｓｃＦｖ）である。例示的な実施形態では、ｓｃＦｖは、荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。

いくつかの実施形態では、第１及び第２の定常ドメインはそれぞれ、ＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な実施形態では、第１及び第２の定常ドメインはそれぞれ、バリアント定常ドメインである。ある特定の実施形態では、第１及び第２の定常ドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。ある特定の実施形態では、第１及び第２の単量体それぞれ、１つ以上の除去バリアントを更に含む。例示的な実施形態では、除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋである。いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの少なくとも１つは、１つ以上のｐＩバリアントを更に含む。特定の実施形態では、ｐＩバリアントは、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄである。

一態様では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む組成物が、本明細書で提供される。Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域１－３（ｖｈＣＤＲ１－３）及び可変軽鎖相補性決定領域（ｖｌＣＤＲ１－３）を含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインから選択される：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

更に別の態様では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインを含む抗Ｂ７Ｈ３抗体が本明細書に提供され、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖相補性決定領域１－３（ｖｈＣＤＲ１－３）及び可変軽鎖相補性決定領域（ｖｌＣＤＲ１－３）を含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３抗体は、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインを含む。Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれか１つから選択される：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

いくつかの実施形態では、抗体は、ａ）第１の抗原結合ドメイン及び第１の定常ドメインを含む第１の単量体と、ｂ）第２の抗原結合ドメイン及び第２の定常ドメインを含む第２の単量体と、を含み、第１の抗原結合ドメイン又は第２の抗原結合ドメインのいずれかが、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、異なる抗原に結合する。

例示的な実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインであり、第２の抗原結合ドメインは、ＣＤ２８結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかのｖｈＣＤＲ１－３及びｖｌＣＤＲ１－３を含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖである。例示的な実施形態では、ｓｃＦｖは、荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。

いくつかの実施形態では、第１及び第２の定常ドメインはそれぞれ、ＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な実施形態では、第１及び第２の定常ドメインはそれぞれ、バリアント定常ドメインである。

特定の実施形態では、第１及び第２の定常ドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。ある特定の実施形態では、第１及び第２の単量体それぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。ある特定の実施形態では、除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋである。いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの少なくとも１つは、１つ以上のｐＩバリアントを更に含む。特定の実施形態では、ｐＩバリアントは、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄである。

別の態様では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃヘテロ二量体抗体が本明細書に提供される。一実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ａ）ｉ）第１の可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー及び第１の可変軽鎖ドメインを含む抗ＣＤ２８ｓｃＦｖと、ｉｉ）第１のＦｃドメインと、を含む第１の単量体であって、ｓｃＦｖが、ドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）第２の可変軽鎖ドメインを含む第３の単量体であって、第２の可変重鎖ドメイン及び第２の可変軽鎖ドメインが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを形成する、第３の単量体と、を含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかのｖｈＣＤＲ１－３及びｖｌＣＤＲ１－３を含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖの第１の可変重鎖ドメイン及び第１の可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

特定の実施形態では、ＴＡＡ結合ドメインは、Ｂ７Ｈ３結合ドメインである。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかのｖｈＣＤＲ１－３及びｖｌＣＤＲ１－３を含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

例示的な実施形態では、第２の可変重鎖ドメイン及び第２の可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

例示的な実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の可変軽鎖ドメイン－ｓｃＦｖリンカー－第１の可変重鎖ドメインの方向を向いている。他の実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の可変重鎖ドメイン－ｓｃＦｖリンカー－第１の可変軽鎖ドメインの方向を向いている。多くの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーである。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、バリアントＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、１つ以上のｐＩバリアントを含む。例示的な実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）_４を有する荷電ｓｃＦｖリンカーである。

特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含む。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃヘテロ二量体抗体は、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖ－リンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、ＶＨ及びＶＬは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを形成し、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、以下のＣＤ２８抗原結合ドメイン：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１のうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、ＴＡＡ結合ドメインは、Ｂ７Ｈ３結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、それぞれ以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

例示的な実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）_４を有する荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、ここで、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－抗ＣＤ２８ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、リンカー１及びリンカー２が、それぞれ第１のドメインリンカー及び第２のドメインリンカーであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖と、を含む抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃが本明細書に提供され、第１の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第１の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを形成し、第２の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第２のＴＡＡ結合ドメインを形成する。

例示的な実施形態では、第１のＴＡＡ結合ドメイン及び第２のＴＡＡ結合ドメインは、それぞれＢ７Ｈ３結合ドメインである。例示的な実施形態では、第１及び第２のＢ７Ｈ３結合ドメインはそれぞれ、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかのｖｈＣＤＲ１－３及びｖｌＣＤＲ１－３を含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。いくつかの実施形態では、第１及び第２の可変重鎖ドメインはそれぞれ、Ｂ７Ｈ３結合ドメインの可変重鎖ドメインを含み、可変軽鎖ドメインは、Ｂ７Ｈ３結合ドメインの可変軽鎖ドメインを含み、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体のいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインとｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインとを接続するｓｃＦｖリンカーを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかのｖｈＣＤＲ１－３及びｖｌＣＤＲ１－３を含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖのｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン及びｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインは、それぞれ以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ可変重鎖ドメインは、第１のドメインリンカーを使用して第１の単量体のＣＨ１のＣ末端に結合され、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインは、第２のＦｃドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している。他の実施形態では、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインは、第１のドメインリンカーを使用して第１の単量体のＣＨ１のＣ末端に結合され、ｓｃＦｖ可変重鎖ドメインは、第２のＦｃドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーである。

ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、バリアント定常ドメインである。第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化スキューバリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインはそれぞれ、１つ以上の除去バリアントを含む。例示的な実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、１つ以上のｐＩバリアントを含む。特定の実施形態では、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１の単量体の第１のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ｑ２９５Ｅ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）_４を有する荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。ある特定の実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、ここで、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体は、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－抗ＣＤ２８ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のバリアントＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のバリアントＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖とを含み、第１のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、ＶＨ１及びＶＬはそれぞれ、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを形成し、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖは、以下のＣＤ２８抗原結合ドメイン：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１のいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、ＶＨ１及びＶＬは、Ｂ７Ｈ３結合ドメインを形成する。例示的な実施形態では、ＶＨ１及びＶＬは、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）_４を有する荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。ある特定の実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含む。

別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－Ｃ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、抗ＣＤ２８×抗－ＴＡＡ１＋１ＣＬＣヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第１の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第１の抗原結合ドメインを形成し、第２の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第２の抗原結合ドメインを形成する。

いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインは、それぞれバリアントＦｃドメインである。ある特定の実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体化スキューバリアントのセットを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。特定の実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを含む。

ある特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメイン又は第２の結合ドメインはＣＤ２８に結合し、他の抗原結合ドメインは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。

ある特定の実施形態では、第２の抗原結合ドメインはＣＤ２８に結合し、ＶＨ２及びＶＬは、それぞれ以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれか１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインはＴＴＡに結合する。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。例示的な実施形態では、ＶＨ１及びＶＬは、それぞれ以下のＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれか１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

例示的な実施形態では、第１の抗原結合ドメインはＢ７Ｈ３に結合し、第２の抗原結合ドメインはＣＤ２８に結合し、ＶＨ１は可変重鎖ドメイン２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２であり、ＶＨ２は可変重鎖ドメイン１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４であり、ＶＬは可変軽鎖ドメイン１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１である。

一態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１がそれぞれ、第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－Ｃ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが、可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含む、抗ＣＤ２８×抗－ＴＡＡ２＋１ＣＬＣヘテロ二量体抗体が本明細書に提供され、第１の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインはそれぞれ、第１の抗原結合ドメインを形成し、第２の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、第２の抗原結合ドメインを形成する。

特定の実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、ｐＩバリアントを更に含む。例示的な実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ２＋１ＣＬＣヘテロ二量体抗体のいくつかの実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

ある特定の実施形態では、第１の抗原結合ドメインはＣＤ２８に結合し、第２の抗原結合ドメインは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。例示的な実施形態では、ＶＨ１及びＶＬは、それぞれ以下のＣＤ２８結合ドメインのいずれか１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１。

いくつかの実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。例示的な実施形態では、ＶＨ２及びＶＬは、それぞれ以下のＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれか１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４。

いくつかの実施形態では、ＶＨ１は可変重鎖ドメイン１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４であり、ＶＨ２は可変重鎖ドメイン２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２であり、ＶＬは可変軽鎖ドメイン１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１である。

別の態様では、以下のヘテロ二量体抗体から選択されるヘテロ二量体抗体が本明細書に提供される：ＸＥＮＰ３４７３０、ＸＥＮＰ３４３８９、ＸＥＮＰ３４７２８、ＸＥＮＰ３４７１７及びＸＥＮＰ３４３３９。

また、本明細書に提供される組成物及び抗体をコードする核酸組成物、そのような核酸を含む発現ベクター、並びに発現ベクターを含む宿主細胞も本明細書に提供される。

別の態様では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体）をそれを必要とする患者に投与することを含む、がんを治療する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、患者にはがん治療薬も投与される。特定の実施形態では、治療薬は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）又は抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体である。

ヒト、マウス、及びカニクイザルＣＤ２８の配列を示す。そのようなＣＤ２８は、臨床開発を容易にする交差反応性ＣＤ２８抗原結合ドメインの開発に有用である。ヒト、マウス、及びカニクイザルＢ７Ｈ３の配列を示す。そのようなＢ７Ｈ３は、臨床開発を容易にする交差反応性Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインの開発に有用である。ヘテロ二量体化バリアントのセット（スキュー（ｓｋｅｗ）バリアント及びｐＩバリアントを含む）の有用な対を示す。図３Ｆには、対応する「単量体２」バリアントが存在しないバリアントがある。そのようなバリアントは、αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂのいずれかの単量体で単独で使用され得るｐＩバリアントであり、又は、例えば、構成要素としてｓｃＦｖを利用するフォーマットの非ｓｃＦｖ側に含まれ得、適切な荷電ｓｃＦｖリンカーは、ＣＤ２８結合ドメインとしてｓｃＦｖを利用する第２の単量体で使用され得る。好適な荷電リンカーは、図６に示される。等配電子バリアント抗体定常領域及びそれらのそれぞれの置換の一覧を示す。ｐＩ＿（－）はより低いｐＩバリアントを示し、ｐＩ＿（＋）はより高いｐＩバリアントを示す。これらのバリアントは、本明細書に概説されているヘテロ二量体化バリアントを含む他のバリアントと任意にかつ独立して組み合わせることができる。ＦｃγＲ結合を除去する有用な除去バリアントを示す（「ノックアウト」又は「ＫＯ」バリアントとも称される）。いくつかの実施形態では、そのような除去バリアントは、本明細書に記載の対象抗体の両方の単量体のＦｃドメインに含まれる。他の実施形態では、除去バリアントは、１つのバリアントＦｃドメインのみに含まれる。本明細書に記載されるように、構成要素として、１つ以上のｓｃＦｖを利用する主題のヘテロ二量体αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂのｐＩを増加又は減少することにおいて使用されるいくつかの荷電ｓｃＦｖリンカーを示す。（＋Ｈ）正のリンカーは本明細書で、特に本明細書で示される抗ＣＤ２８Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ配列で、特に使用される。単一電荷を有する単一の先行技術ｓｃＦｖリンカーは、Ｗｈｉｔｌｏｗｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ６（８）：９８９－９９５（１９９３）から「Ｗｈｉｔｌｏｗ」として参照される。このリンカーは、ｓｃＦｖにおける凝集を低減させ、タンパク質分解安定性を高めるために使用されたことに留意すべきである。そのような荷電ｓｃＦｖリンカーは、ｓｃＦｖを含む本明細書に開示される主題の抗体フォーマットのいずれかで使用することができる（例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット）。いくつかの例示的なドメインリンカーを示す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、単鎖ＦｖをＦｃ鎖に連結する用途を見出す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーを任意の配向で組み合わせることができる。例えば、ＧＧＧＧＳリンカーは、Ｎ末端又はＣ末端で「下ハーフヒンジ」リンカーと組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、図７に示すドメインリンカーの２つ以上を組み合わせて、本明細書に記載のヘテロ二量体抗体で使用するためのより長いドメインリンカーを形成することができる。本発明のαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂのヘテロ二量体Ｆｃドメイン（すなわち、この実施形態ではＣＨ２－ＣＨ３）の特に有用な実施形態を示す。本明細書に記載のヘテロ二量体抗体で使用され得る様々なヘテロ二量体スキューバリアントアミノ酸置換を示す。サイトカイン配列を含まない、ヒトＩｇＧ１に基づくいくつかの有用なヘテロ二量体αＢ７－Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ骨格の配列を示す。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格１は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格２は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格３は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格４は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＫ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ／Ｔ４１１Ｅのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＤ４０１Ｋのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格５は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格６は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアント及びグリコシル化を除去するＮ２９７Ａのバリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格７は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアント及びグリコシル化を除去するＮ２９７Ｓバリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格８は、ヒトＩｇＧ４に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＦａｂアーム交換を除去するＳ２２８Ｐ（ＥＵ番号付けによる、ＫａｂａｔではＳ２４１Ｐ）バリアント（当技術分野で知られている）を含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格９は、ヒトＩｇＧ２に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格１０は、ヒトＩｇＧ２に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアント及び両方の鎖にＳ２６７Ｋ除去バリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格１１は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、及びＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアント及びＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳＸｔｅｎｄバリアントを含む。ヘテロ二量体Ｆｃ骨格１２は、ヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、第１のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを含み、第２のヘテロ二量体Ｆｃ鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアント及びＰ２１７Ｒ／Ｐ２２９Ｒ／Ｎ２７６ＫのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。これらの骨格の各々に含まれるのは、列挙された配列に対して（本明細書に定義されるように）９０、９５、９８、及び９９％同一である配列であり、かつ／又は（当業者には理解されるように、親ヒトＩｇＧ１（又は骨格に応じたＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４）と比較していくつかのアミノ酸修飾をすでに含む、図の「親」と比較して）１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の追加のアミノ酸置換を含む。すなわち、列挙された骨格は、この図の骨格内に含まれるスキューバリアント、ｐＩバリアント及び除去バリアントに加えて、又はその代替として、追加のアミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換）を含み得る。追加的に、本明細書に示される骨格は、Ｃ末端グリシン（Ｋ４４６＿）及び／又はリジン（Ｋ４４７＿）の欠失を含み得る。Ｃ末端のグリシン及び／又はリジンの欠失は、不均一性を低減するために、又はｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットなどのある特定の二重特異性フォーマットとの関連で、意図的に操作することができる。追加的に、Ｃ末端のグリシン及び／又はリジンの欠失は、例えば生産及び保存中に自然に発生し得る。２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットで使用するためのヘテロ二量体Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂ骨格の例示的な配列を示す。ここに示されているフォーマットは、図Ｘに示されるヘテロ二量体Ｆｃ骨格１に基づいているが、単量体１（－）にＧ４４６＿及び単量体２（＋）にＧ４４６＿／Ｋ４４７＿が更に含まれている。図Ｘに示される追加の骨格のいずれも、一方又は両方の鎖にＫ４４７＿を含む又は含まない２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットでの使用に適合され得ることに留意されたい。これらの配列は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを更に含み得ることに留意されたい。Ｆａｂａ結合ドメインを利用するαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの実施形態で使用される「ＣＨ１＋ヒンジ」の配列を示す。「ＣＨ１＋ヒンジ」配列は、可変重鎖ドメイン（Ｖ_Ｈ）をＦｃ骨格に連結するのに使用される（図３９に示される通り）。Ｆａｂが（＋）側にある特定の実施形態では、「ＣＨ１（＋）＋ヒンジ」配列が使用され得る。Ｆａｂが（－）側にある特定の実施形態では、「ＣＨ１（－）＋ヒンジ」配列が使用され得る。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット又は２＋１ＣＬＣフォーマットのαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの実施形態で使用される「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」ドメインリンカーの配列を示す。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットでは、「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」配列は、可変重鎖ドメイン（Ｖ_Ｈ）を二重特異性抗体のＦａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ側のｓｃＦｖドメインに連結するのに使用される。２＋１ＣＬＣフォーマットでは、「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」配列は、第１の可変重鎖ドメイン（Ｖ_Ｈ）を二重特異性抗体のＦａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ側の第２のＶ_Ｈドメインに連結するのに使用される。「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」の代わりに、他のリンカーが使用されてもよいことに留意されたい。ここでの配列はＩｇＧ１配列に基づいているが、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４配列に基づいて等価物が構築され得ることにも留意されたい。 αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの実施形態で使用される「ＣＨ１」の配列を示す。 αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの実施形態で使用される「ヒンジ」の配列を示す。Ｆａｂ結合ドメインを利用する主題のαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂで使用される同族軽鎖の定常ドメインを示す。ＸＥＮＰ１６４３２、ニボルマブに基づく抗ＰＤ－１ｍＡｂ及び及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有するＩｇＧ１骨格の配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。例示的なファージ由来ＣＤ２８結合ドメインである１Ａ７の可変重鎖及び可変軽鎖配列、並びにＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有する１Ａ７及びＩｇＧ１骨格に基づく抗ＣＤ２８ｍＡｂであるＸＥＮＰ２８４２８の配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。例示的な親和性最適化１Ａ７ＶＨバリアントの配列を示す。本明細書で示されるＶＨは、本明細書で示される他の可変軽鎖ドメインのいずれかと対をなすことができることに留意されたい。例示的な親和性最適化１Ａ７由来可変軽鎖ドメインの配列を示す。このＶＬは、本明細書で示される他の可変重鎖ドメインのいずれかと対をなすことができることに留意されたい。例示的な親和性最適化１Ａ７ＶＨ／ＶＨ対の配列を示す。これらの対は、Ｆａｂ又はｓｃＦｖとしてフォーマットされ得ることに留意されたい。例示的な親和性操作１Ａ７ＶＨ／ＶＬ対、並びにＡ）ｓｃＦｖ（１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－ＦｃｂｓＡｂフォーマットに関連）及びＢ）Ｆａｂ（２＋１ＣＬＣｂｓＡｂフォーマットに関連）に関連したその結合親和性を示す。ＨｕＴＮ２２８結合ドメイン及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有するＩｇＧ１骨格に基づく二価抗ＣＤ２８ｍＡｂであるＸＥＮＰ２７１８１、並びにＨｕＴＮ２２８結合ドメイン（ｓｃＦｖとしてフォーマット）及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有するＩｇＧ１骨格に基づく一価抗ＣＤ２８ｍＡｂであるＸＥＮＰ２７６５６の配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。Ｏｃｔｅｔによって決定された、ヒトＣＤ２８に対する様々なＣＤ２８結合ファージクローン（二価ｍＡｂとしてフォーマット）のＫ_Ｄａｐｐ（二価結合による見かけのＫ_Ｄ）を示す。解離の最初の６０秒は、データの適合に使用された。ヒトＰＢＭＣ上のファージ由来クローンに基づく例示的な二価抗ＣＤ２８ｍＡｂの結合を示す。データは、ファージキャンペーンが、先行技術のＨｕＴＮ２２８よりも弱い最大結合を有するＣＤ２８結合ドメインを生成したことを示す（これは、実施例１Ａに記載のヒト化ＣＤ２８結合ドメインに関連する）。例示的なファージ由来Ｂ７Ｈ３結合ドメインである２Ｅ４Ａ３．１８９の可変重鎖及び可変軽鎖配列、並びにＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有する２Ｅ４Ａ３．１８９及びＩｇＧ１骨格に基づく抗Ｂ７Ｈ３ｍＡｂであるＸＥＮＰ３２６３７の配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。親和性－最適化可変重鎖２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２の配列を示す。このＶＨは、本明細書で示される他の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）のいずれかと対をなすことができることに留意されたい。例示的なラットハイブリドーマ由来Ｂ７Ｈ３結合ドメインであるヒト化６Ａ１の可変重鎖及び可変軽鎖配列、並びにＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ除去バリアントを有する６Ａ１及びＩｇＧ１骨格に基づく抗Ｂ７Ｈ３ｍＡｂであるＸＥＮＰ３３３８３の配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。例示的なラットハイブリドーマ由来Ｂ７Ｈ３結合ドメインであるヒト化３Ｃ４の可変重鎖及び可変軽鎖配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。例示的なウサギハイブリドーマ由来Ｂ７Ｈ３結合ドメインであるヒト化４Ｆ１２の可変重鎖及び可変軽鎖配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。例示的なウサギハイブリドーマ由来Ｂ７Ｈ３結合ドメインであるヒト化３８Ｅ２の可変重鎖及び可変軽鎖配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と定常ドメインとの境界を示す。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。１＋１二重特異性フォーマットに関連する、様々なＢ７Ｈ３結合ドメインの一価結合親和性（Ｋ_Ｄ）を示す。２Ｅ４Ａ３＿Ｈ１．２２＿１Ａ７＿Ｌ１及び２Ｅ４Ａ３＿Ｈ１．３＿１Ａ７＿Ｌ１は、抗ＣＤ２８クローン１Ａ７のＶＬを利用することに留意されたい。本発明の例示的なフォーマットを示す。図３３Ａは、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットを示し、第１のＦａｂアームが第１の抗原に結合し、第２のｓｃＦｖアームが第２の抗原に結合する。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）を含む第１の単量体と、第２の対応するヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した単鎖Ｆｖを含む第２の単量体と、軽鎖定常ドメインに共有結合した軽鎖可変領域を含む第３の単量体であって、軽鎖可変領域はＶＨ１に相補的である、第３の単量体とを含む。図３３Ｂは、第１のＦａｂアーム及び第２のＦａｂ－ｓｃＦｖアームを有する「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットを示し、Ｆａｂは第１の抗原に結合し、ｓｃＦｖは第２の抗原に結合する。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）を含む第１の単量体と、第２の対応するヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した単鎖Ｆｖに（任意選択でリンカーを介して）共有結合したＶＨ１を含む第２の単量体と、軽鎖定常ドメインに共有結合した軽鎖可変領域を含む第３の単量体であって、軽鎖可変領域はＶＨ１に相補的である、第３の単量体とを含む。図３３Ｃは、「１＋１共通軽鎖」又は「１＋１ＣＬＣ」フォーマットを示し、第１のＦｃは第１の抗原に結合する第１のＦａｂアームを含み、第２のＦｃは第２の抗原に結合する第２のＦａｂアームを含む。１＋１ＣＬＣフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬはＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。図３３Ｄは、「２＋１共通軽鎖」又は「２＋１ＣＬＣ」フォーマットを示し、第１のＦｃは、それぞれが第１の抗原に結合する２つのＦａｂアームを含み、第２のＦｃは、第２の抗原に結合する１つのＦａｂアームを含む。２＋１ＣＬＣフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬは第１及び第２のＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。図３３Ｅは、「２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」フォーマットを示し、第１のＦｃは第１の抗原に結合するＮ末端Ｆａｂアームを含み、第２のＦｃは第１の抗原に結合するＮ末端Ｆａｂアーム及び第２の抗原に結合するＣ末端ｓｃＦｖを含む。２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ｓｃＦｖを含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬは、第１及び第２のＶＨ１と対になって、第１の抗原に対する結合特異性を有する結合ドメインを形成する。ＣＤ２８二重特異性抗体に利用される本発明の例示的なフォーマットを示す。図３４Ａは、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットを示し、第１のＦａｂアームが腫瘍関連抗原に結合し、第２のｓｃＦｖアームがＣＤ２８に結合する。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）を含む第１の単量体と、第２の対応するヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した単鎖Ｆｖを含む第２の単量体と、軽鎖定常ドメインに共有結合した軽鎖可変領域を含む第３の単量体であって、軽鎖可変領域はＶＨ１に相補的である、第３の単量体とを含む。図３４Ｂは、第１のＦａｂアーム及び第２のＦａｂ－ｓｃＦｖアームを有する「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットを示し、Ｆａｂは腫瘍関連抗原に結合し、ｓｃＦｖはＣＤ２８に結合する。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ１）を含む第１の単量体と、第２の対応するヘテロ二量体Ｆｃ骨格のＮ末端に（任意選択でリンカーを介して）共有結合した単鎖Ｆｖに（任意選択でリンカーを介して）共有結合したＶＨ１を含む第２の単量体と、軽鎖定常ドメインに共有結合した軽鎖可変領域を含む第３の単量体であって、軽鎖可変領域はＶＨ１に相補的である、第３の単量体とを含む。図３４Ｃは、「１＋１共通軽鎖」又は「１＋１ＣＬＣ」フォーマットを示し、第１のＦｃは腫瘍関連抗原に結合する第１のＦａｂアームを含み、第２のＦｃはＣＤ２８に結合する第２のＦａｂアームを含む。１＋１ＣＬＣフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬはＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。図３４Ｄは、「２＋１共通軽鎖」又は「２＋１ＣＬＣ」フォーマットを示し、第１のＦｃはそれぞれが腫瘍関連抗原に結合する２つのＦａｂアームを含み、第２のＦｃはＣＤ２８に結合する１つのＦａｂアームを含む。２＋１ＣＬＣフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬは第１及び第２のＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。図３４Ｅは、「２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」フォーマットを示し、第１のＦｃは腫瘍関連抗原に結合するＮ末端Ｆａｂアームを含み、第２のＦｃは腫瘍関連抗原に結合するＮ末端Ｆａｂアーム及びＣＤ２８に結合するＣ末端ｓｃＦｖを含む。２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ｓｃＦｖを含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む。ＶＬは、第１及び第２のＶＨ１と対になって、腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有する結合ドメインを形成する。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域、Ｆｃ領域及び定常ドメインの間の境界を示す。αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域、Ｆｃ領域及び定常ドメインの間の境界を示す。ｓｃＦｖドメインはＶ_Ｈ－ｓｃＦｖリンカー－Ｖ_Ｌの方向（Ｎ末端からＣ末端に向かう）を有するが、これを逆にすることができる。ｓｃＦｖドメイン配列は、可変重鎖領域と可変軽鎖領域との間のｓｃＦｖリンカーとして、配列ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ（配列番号７９６）を含むことに留意されたいが、このリンカーは、図６のｓｃＦｖリンカーのいずれかと置き換えることができる。鎖２配列は、ｓｃＦｖのＣ末端とＣＨ２ドメインのＮ末端との間のドメインリンカーとして、「フレックスハーフヒンジ」ドメインリンカーである配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号８１８）を含むことにも留意されたいが、このリンカーは、図７の「有用なドメインリンカー」のいずれかと置き換えることができる。αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。１＋１ＣＬＣフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域、リンカー、Ｆｃ領域及び定常ドメインの間の境界を示す。αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。２＋１ＣＬＣフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域、Ｆｃ領域及び定常ドメインの間の境界を示す。ｓｃＦｖドメインはＶ_Ｈ－ｓｃＦｖリンカー－Ｖ_Ｌの方向（Ｎ末端からＣ末端に向かう）を有するが、これを逆にすることができる。鎖２配列は、ドメインリンカー（二重下線）として、配列ＥＰＫＳＣＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ（配列番号１１８２）を含むことに留意されたいが、このリンカーは、図６の「有用なドメインリンカー」のいずれかを含む任意のドメインリンカーと置き換えることができる。αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域、Ｆｃ領域及び定常ドメインの間の境界を示す。ｓｃＦｖドメインはＶ_Ｈ－ｓｃＦｖリンカー－Ｖ_Ｌの方向（Ｎ末端からＣ末端に向かう）を有するが、これを逆にすることができる。鎖２配列は、ドメインリンカーとして配列ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ（配列番号７９６）を含むことに留意されたいが、このリンカーは、図６の「有用なドメインリンカー」のいずれかを含む任意のドメインリンカーと置き換えることができる。αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。ＣＤ３二重特異性抗体をＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせることによる、Ａ）古典的Ｔ細胞／ＡＰＣ相互作用、及びＢ）古典的Ｔ細胞／ＡＰＣ相互作用の複製を示す。古典的Ｔ細胞／ＡＰＣ相互作用では、ペプチド－ＭＨＣとのＴＣＲ反応性によって提供される第１のシグナル（シグナル１）、及びＡＰＣ上に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６によるＣＤ２８架橋によって提供される第２のシグナル（シグナル２）があり、これらが一緒になってＴ細胞を完全に活性化する。対照的に、ＣＤ３二重特異性での処理では、第１のシグナルのみが提供される。ＣＤ２８シグナルは、ＣＤ２８共刺激を通じて活性化及び増殖を促進するという考えのもと、ＣＤ２８二重特異性によって提供され得る。ＣＤ２８二重特異性抗体によるＣＤ２８シグナル伝達の導入、及びチェックポイント遮断（例えばＰＤ－１遮断）による付加されたＣＤ２８シグナルの任意のチェックポイント媒介抑制の緩和を示す。抗ＣＤ３ｓｃＦｖ（エフェクター：標的比１：１）及びＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂＸＥＮＰ３４３３９、ＸＥＮＰ３５６１２、ＸＥＮＰ３５６１１、及びＸＥＮＰ３４３３６（それぞれ７７ｎＭ、２７０ｎＭ、６１０ｎＭ、及び４４０ｎＭのＣＤ２８結合親和性を有する）でトランスフェクトしたＭＣＦ７がん細胞の存在下での、エフェクター細胞によるＩＬ－２放出の誘導を示す。データは、ＣＤ２８結合親和性を低下させると、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体の効力が低下することを示している。Ａ）ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｂ）ＬｎＣＡＰ、及びＣ）ＤＵ１４５標的細胞（Ｅ：Ｔ比率１：１）並びに例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂの一定用量の存在下でのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂによるＴ細胞からのＩＬ－２分泌の誘導を示す。抗ＣＤ２８クローン１Ａ７可変重鎖及び可変軽鎖ドメインバリアントのコンセンサスフレームワーク領域（ＦＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｋａｂａｔのように）を示す。カニクイザル研究における様々な抗体フォーマットにおけるＢ７Ｈ３ｘＣＤ２８ｂｓＡｂの薬物動態を示す。データは、調査した各用量レベルで、２＋１共通軽鎖フォーマットが最良の半減期及び薬物動態を有していたことを示している。Ａ）ＸＥＮＰ３４３９８、Ｂ）ＸＥＮＰ３７８０８、Ｃ）ＸＥＮＰ３７８１０、Ｄ）ＸＥＮＰ３４７３２、Ｅ）ＸＥＮＰ３５１５１、Ｆ）ＸＥＮＰ３５１５３５、Ｇ）ＸＥＮＰ３７８０７、及びＨ）ＸＥＮＰ３７９８２を投与したカニクイザルにおける経時的な血清濃度レベルの変化を示す。相対用量は次のように表される：丸は０．５×用量、逆三角形は１．３×用量、六角形は１．８×用量、正方形は２×用量、菱形は３．２５×用量、星形は４．５×用量、三角形は５×用量。Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂＸＥＮＰ３４３９８、ＸＥＮＰ３７８０８、ＸＥＮＰ３４７３２、及びＸＥＮＰ３５１５３の特性をまとめたものである。この要約表に示されているデータの一部は、開発の初期段階の実験データを示しているため、そのようなデータの一部は実施例の他の場所に示されている実験データと同じではない可能性があることに留意されたい。Ａ）Ａ５４９がん細胞並びにＢ）ＳＫＯＶ－３がん細胞及びＣＤ３^＋Ｔ細胞（１０：１のエフェクター：標的比）と、示された濃度のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体ＸＥＮＰ３４３３９又はＸＥＮＰ３４７１７とのインキュベーション後のＩＦＮγ放出を示す。データは、ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３４７１７の両方がＴ細胞によるサイトカイン放出を誘導したことを示している。二価Ｂ７Ｈ３結合を有するＸＥＮＰ３４３３９は、一価Ｂ７Ｈ３結合を有するＸＥＮＰ３４７１７より強力にサイトカイン放出を誘導した。ＸＥＮＰ３４３３９による混合リンパ球反応（１μｇ／ｍＬのＣＴＬＡ－４－Ｆｃとのインキュベーション後）におけるＣＤ２８シグナル伝達の回復を示す。エラーバーは、技術的な４連でテストされた１つのＭＬＲ反応からの培養上清中の平均発現を表す。ＮＬＶ負荷ＭＤＡ－ＭＢ－２３１がん細胞並びにＡ）第１のドナー及びＢ）第２のドナーから１０：１のエフェクター：標的比で精製されたＣＤ３^＋Ｔ細胞と、ＸＥＮＰ１６４３２、ＸＥＮＰ３４３３９、及びＸＥＮＰ３４３８９の示された組み合わせとのインキュベーション後のＩＦＮγ放出を示す。データは、ＸＥＮＰ３４３３９単独でのインキュベーションがＴ細胞からのサイトカイン放出を誘導し、ＰＤ－１遮断と相乗的に組み合わされてサイトカイン放出を増強することを示している。ＮＬＶ負荷ＭＣＦ７がん細胞及び１０：１のエフェクター：標的比で精製された精製ＣＤ３^＋Ｔ細胞と、ＸＥＮＰ１６４３２及びＸＥＮＰ３４３３９の示された組み合わせとのインキュベーション後のＮＬＶ四量体陽性細胞の増殖を示す。データは、ＸＥＮＰ３４３３９及びＰＤ－１遮断の組み合わせが、ＮＬＶ四量体陽性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を促進したことを示している。完全なＢ７Ｈ３細胞外Ｖ１Ｃ１－Ｖ２Ｖ２ドメイン又は個々のＶ１Ｃ１若しくはＶ２Ｃ２ドメインの抗Ｂ７Ｈ３クローン２Ｅ４Ａ３．１８９及びクローン６Ａ１の解離定数（Ｋ_Ｄ、及び対応するセンサグラム）を示す。抗ＣＤ２８クローン１Ａ７親和性バリアントＨ１．１４＿Ｌ１の解離定数（Ｋ_Ｄ、及び対応するセンサグラム）を、ＣＤ２８抗原の２＋１ＣＬＣフォーマットのＦａｂとして、又は２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖのｓｃＦｖフォーマットとして示す。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで示し、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７抗ＣＤ３ｓｃＦｖ（別名ＣＤ３Ｈｉｇｈ［ＶＨＶＬ］）を含む、例示的なαＰＳＭＡ×αＣＤ３ｂｓＡｂの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変領域と他の鎖構成要素（例えば、定常領域及びドメインリンカー）との間の境界を示す。αＰＳＭＡ×αＣＤ３ｂｓＡｂが、９０、９５、９８、及び９９％同一であり（本明細書で定義されるように）、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個のアミノ酸置換を含有する、可変領域、Ｆｃ領域、及び定常ドメインを利用できることに留意されたい。加えて、本明細書に概説される各配列は、一方又は好ましくは両方のＦｃドメイン中のＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを含むか又は除外することができ、これは血清中でより長い半減期をもたらす。１：１のエフェクター：標的比でのＬＮＣａＰがん細胞（ＰＳＭＡ^＋Ｂ７Ｈ３^＋）及びＣＤ３^＋Ｔ細胞と、示された濃度の例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）単独又はＸＥＮＰＸＥＮＰ３４３３９との組み合わせとのインキュベーション後の経時的な細胞死滅を示す。データは、ＸＥＮＰ３１６０２ αＰＳＭＡ×αＣＤ３単独では、がん及びＴ細胞単独のインキュベーションと比較して、細胞死滅の増強が最小限であることを示している。ＸＥＮＰ３４３３９ αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８の追加は、ＣＤ３二重特異性に対するがん細胞耐性を克服する。本発明のＣＤ２８二重特異性抗体と組み合わせることができるＣＤ３二重特異性抗体での使用に好適な例示的な抗ＣＤ３結合ドメインの配列を示す。ＣＤＲは下線が付され、ｓｃＦｖリンカーは二重下線が付され（配列中、ｓｃＦｖリンカーは正に荷電したｓｃＦｖ（ＧＫＰＧＳ）_４リンカー（配列番号７９６）であるが、当業者には理解されるように、このリンカーは、いくつかが図６に示されている無荷電又は負に荷電したリンカーを含む他のリンカーによって置き換えることができる）、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。加えて、命名規則は、Ｎ末端からＣ末端へ向かうｓｃＦｖの方向を示している。本明細書中に記され、本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表２に示されるように用いられる番号付けによってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の番号付けシステムを用いたＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。更に、図中の全ての配列に関して、これらのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、ｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）の用量滴定と組み合わせた、１：１のエフェクター：標的比でのＬＮＣａＰがん細胞（ＰＳＭＡ^＋Ｂ７Ｈ３^＋）及びＣＤ３^＋Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＸＥＮＰ３４３３９とのインキュベーション後のＡ）ＩＦＮγ放出、Ｂ）ＩＬ－２放出、及びＣ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖を示す。例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）の用量滴定と組み合わせた、１：１のエフェクター：標的比での２２Ｒｖ１がん細胞（ＰＳＭＡ^＋Ｂ７Ｈ３^＋）及びＣＤ３^＋Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＸＥＮＰ３４３３９とのインキュベーション後のＡ）ＩＦＮγ放出、Ｂ）ＩＬ－２放出、及びＣ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖を示す。例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）の用量滴定と組み合わせた、１：１のエフェクター：標的比でのＳＫＯＶ－３がん細胞（ＰＳＭＡ^－Ｂ７Ｈ３^＋）及びＣＤ３^＋Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＸＥＮＰ３４３３９とのインキュベーション後のＡ）ＩＦＮγ放出、Ｂ）ＩＬ－２放出、及びＣ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖を示す。例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）の用量滴定と組み合わせた、１：１のエフェクター：標的比でのＯＶＣＡＲ－８がん細胞（ＰＳＭＡ^－Ｂ７Ｈ３^＋）及びＣＤ３^＋Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＸＥＮＰ３４３３９とのインキュベーション後のＡ）ＩＦＮγ放出、Ｂ）ＩＬ－２放出、及びＣ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞増殖を示す。Ａ）第１の例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ１）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、Ｂ）第２の例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ２）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、Ｃ）ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ１（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、Ｄ）ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ２（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＥ）ＰＢＳを投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける個々のマウスの経時的（日単位）な腫瘍体積の変化を示す（キャリパー測定により決定、ベースライン補正）。Ｆ）示す第１の例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ１）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、第２の例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ２）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ１（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ２（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＰＢＳ対照を投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける経時的（日単位）な腫瘍体積の群中央値変化を示す（キャリパー測定により決定、ベースライン補正）。第１の例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ１）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、第２の例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ２）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ１（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、ＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ２（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＰＢＳ対照を第１の投与後１４日目に投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＣＤ４５＋細胞数を示す。低濃度又は高濃度用量の例示的なＰＳＭＡ×ＣＤ３ｂｓＡｂＸＥＮＰ３２２２０を単独で、又はＸＥＮＰ３４３３９と組み合わせて投与した２２ＲＶ１及びｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧ－ＤＫＯマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋、Ｂ）ＣＤ４＋（全て）、Ｃ）ＣＤ８＋（全て）、Ｄ）ＣＤ４＋（Ｋｉ６７＋）、及びＥ）ＣＤ８＋（Ｋｉ６７＋）細胞の増殖を示す（細胞数で示される）。ＣＤ３ｂｓＡｂ及びＣＤ２８ｂｓＡｂの両方で処理すると、ＣＤ３ｂｓＡｂ単独で処理した場合と比較して、Ｔ細胞の増殖が促進された。低濃度又は高濃度用量の例示的なＰＳＭＡ×ＣＤ３ｂｓＡｂＸＥＮＰ３２２２０を単独で、又はＸＥＮＰ３４３３９と組み合わせて投与した２２ＲＶ１及びｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧ－ＤＫＯマウスの血液中のＡ）ＣＤ４＋細胞の活性化（ＣＤ２５発現により示される）、Ｂ）ＣＤ４＋細胞の活性化（ＰＤ１発現により示される）、Ｃ）ＣＤ８＋細胞の活性化（ＣＤ２５発現により示される）、及びＤ）ＣＤ８＋細胞の活性化（ＰＤ１発現により示される）を示す。ＣＤ３ｂｓＡｂ及びＣＤ２８ｂｓＡｂの両方で処理すると、ＣＤ３ｂｓＡｂ単独で処理した場合と比較して、Ｔ細胞の活性化が促進された。例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３５６１２単独（１ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３４３３９（０．３ｍｇ／ｋｇ）とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、ＸＥＮＰ３５６１２（１ｍｇ／ｋｇ）とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＰＢＳ対照を投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１移植ＣＤ３４＋Ｈｕ－ＮＳＧマウスにおける経時的（日単位）な腫瘍体積の群中央値変化を示す（キャリパー測定により決定、ベースライン補正）。例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３５６１２単独（１ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３４３３９（０．３ｍｇ／ｋｇ）とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、ＸＥＮＰ３５６１２（１ｍｇ／ｋｇ）とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＰＢＳ対照を投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１移植ＣＤ３４＋Ｈｕ－ＮＳＧマウスにおけるＡ）６日目及びＢ）９日目（投与後）のベースライン補正腫瘍体積を示す。マンホイットニー検定を使用して、ベースライン補正データに対して実行された統計。例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３５６１２単独（１ｍｇ／ｋｇ）単独、ＸＥＮＰ３５６１２（１ｍｇ／ｋｇ）とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ（０．５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、又はＰＢＳ対照を投与したｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１移植ＣＤ３４＋Ｈｕ－ＮＳＧマウスの腫瘍におけるＡ）ＣＤ４５＋及びＢ）ＣＤ８＋細胞の増殖を示す。対応のないｔ検定を使用して、対数変換されたデータに対して実行された統計。室内（ｉｎ－ｈｏｕｓｅ）生産のＴＧＮ１４１２であるＸＥＮＰ２９１５４の配列を示す。空気乾燥したＸＥＮＰ３４３３９、ＴＧＮ１４１２（ＸＥＮＰ２９１５４）、又は陰性対照ＰＢＳで処理したヒトＰＢＭＣからのＡ）ＩＦＮγ、Ｂ）ＩＬ－６、及びＣ）ＴＮＦαの放出を示す。空気乾燥したＸＥＮＰ３７８０８、ＴＧＮ１４１２（ＸＥＮＰ２９１５４）、又は陰性対照ＰＢＳで処理したヒトＰＢＭＣからのＡ）ＩＦＮγ、Ｂ）ＩＬ－２、及びＣ）ＴＮＦαの放出を示す。 αＣＤ３ｓｃＦｖ（Ｂ７Ｈ３ノックアウトあり、又はなし）でトランスフェクトされたＨＥＫ細胞の存在下で、ＸＥＮＰ３７８０８によるＡ）ヒトドナーからのＰＢＭＣ又はＢ）カニクイザルドナーからのＰＢＭＣによるＩＬ－２放出の誘導を示す。Ａ）２２ＲＶ－ＮＬＲ（約１７０ＫＢ７Ｈ３抗原密度を有する）及びＢ）ＤＵ１４５－ＮＬＲ（約２７０ＫＢ７Ｈ３抗原密度を有する）標的細胞Ｂ７Ｈ３３×ＣＤ３ｍＡｂ単独、又はＸＥＮＰ３４３９８若しくはＸＥＮＰ３７８０８のいずれかとの組み合わせにおけるＲＴＣＣの誘導を示す。データは、ＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８０８（Ｂ７Ｈ３ＸＣＤ３との組み合わせ）が非常に類似したレベルのＲＴＣＣを誘導することを示している。Ａ）ＯＶＣＡＲ８（約２０ＫＢ７Ｈ３抗原密度を有する）、Ｂ）２２ＲＶ１－ＮＬＲ（約１７０ＫＢ７Ｈ３抗原密度を有する）、及びＣ）ＤＵ１４５－ＮＬＲ（約２７０ＫＢ７Ｈ３抗原密度を有する）、並びにＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂと組み合わせたＸＥＮＰ３４３９８又はＸＥＮＰ３７８０８の存在下でのＴ細胞によるＩＬ－２放出の誘導を示す。抗Ｂ７Ｈ３クローン２Ｅ４Ａ３．１８９可変重鎖及び可変軽鎖ドメインバリアントのコンセンサスフレームワーク領域（ＦＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｋａｂａｔのように）を示す。

Ｉ．概要
がんの治療におけるＴ細胞の活性化は、広く研究されている。Ｔ細胞は、完全な活性化及び分化のために複数のシグナルを必要とする。図４０に示されるように、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によるペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）複合体の認識によって促進されるシグナル１は、Ｔ細胞の活性化に絶対に必要である。シグナル１と相乗作用してそれを増幅するシグナル２は、典型的には、ＣＤ２８リガンドＣＤ８０及びＣＤ８６とＣＤ２８自体との相互作用によって提供される。ＣＤ２８の関与だけでは典型的には不活性であるが、シグナル１の活性化と組み合わせると、ＩＬ２分泌を含む更なる活性化、生存、及び増殖シグナルが促進される。ＣＤ８０及びＣＤ８６は専門的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）によってのみ自然に発現されるため、腫瘍環境におけるＣＤ２８共刺激の程度は非常に変動する可能性がある。したがって、本発明は、新規クラスの腫瘍標的化ＣＤ２８二重特異性抗体（本明細書でより十分に説明されるＢ７Ｈ３×ＣＤ２８を含む）を対象とし、ＣＤ２８のＣＤ８０／ＣＤ８６の関与を模倣して、シグナル２の人工的な供給源を提供することができる。特に、シグナルは、腫瘍細胞の自然なＴＣＲ：ｐＭＨＣ認識によって提供され得るか、又はＣＤ２８二重特異性とＣＤ３二重特異性（シグナル１を模倣することができる）の組み合わせによって提供され得る。

したがって、本明細書では、新規の抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３（「αＣＤ２８×αＢ７Ｈ３」及び時折「ＣＤ２８ＸＢ７Ｈ３」とも呼ばれる）二重特異性抗体、及びがんの治療のためにそのような抗体を使用する方法が提供される。多くの場合、これらの二重特異性抗体は、ヘテロ二量体である。主題のαＣＤ２８×αＢ７Ｈ３抗体は、Ｔ細胞上のＣＤ２８共刺激分子にアゴニスト的に結合し、腫瘍細胞上のＢ７Ｈ３を標的とすることができる。したがって、そのような抗体は、末梢の毒性を最小限に抑えながら、腫瘍部位での抗腫瘍活性を選択的に増強する。本明細書で提供される主題の抗体は、本明細書でより十分に説明されるように、単独で、単剤療法として、又は他の抗がん療法と組み合わせて使用される場合、抗腫瘍活性を増強するのに特に有用である。

したがって、一態様では、２つの異なる抗原に結合するヘテロ二量体抗体が本明細書で提供され、例えば、抗体は、本明細書に記載の２つの異なる標的抗原、一般にＣＤ２８及びＢ７Ｈ３に結合するという点で「二重特異性」である。これらのヘテロ二量体抗体は、標的抗原のそれぞれに一価（例えば、可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインのペアなどの単一の抗原結合ドメインがある）又は二価（それぞれが独立して抗原に結合する２つの抗原結合ドメインがある）のいずれかに結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、１つのＣＤ２８結合ドメイン及び１つのＢ７Ｈ３結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットのヘテロ二量体抗体、したがってこれは二重特異性及び二価である）を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、１つのＣＤ２８結合ドメイン及び２つのＢ７Ｈ３結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットのヘテロ二量体抗体、したがってこれは二重特異性であるが、３つの抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含有するため三価である）を含む。本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、以下でより完全に概説されるように、ホモ二量体上でヘテロ二量体の形成を「ゆがめる」アミノ酸置換を含む（すなわち「スキューバリアント」）異なる単量体の使用に基づいている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体はまた、以下で同様に概説されるように、ホモ二量体から離れたヘテロ二量体の単純な精製を可能にする「ｐＩバリアント」と連結される。提供されるヘテロ二量体二重特異性抗体は、一般に、産生細胞で自己集合してヘテロ二量体タンパク質を産生することができる操作された又はバリアントのＦｃドメインの使用、及びそのようなヘテロ二量体タンパク質を生成及び精製する方法に依存する。

ＩＩ．命名法
本明細書に提供される抗体は、いくつかの異なるフォーマットで列挙されている。場合によっては、特定の抗体の各単量体には、固有の「ＸＥＮＰ」番号が与えられるが、当該技術分野において離解されるように、より長い配列はより短いものを含み得る。例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」単量体は第１のＸＥＮＰ番号を有し得るが、ｓｃＦｖドメイン自体は異なるＸＥＮＰ番号を有する。いくつかの分子には３つのポリペプチドがあるため、ＸＥＮＰ番号が構成要素とともに名称として使用される。したがって、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの分子ＸＥＮＰ３４３８９は、３つの配列（図２８Ａを参照されたい）「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」単量体；２）「Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」単量体；及び３）「軽鎖」単量体又は同等物を含むが、当業者であれば、配列アラインメントを通してこれらを容易に同定することができるであろう。これらのＸＥＮＰ番号は、配列表並びに識別子にあり、図で使用される。加えて、３つの構成要素を含む１つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Ｆａｂのリストは、完全な重鎖配列、可変重鎖ドメイン配列、及び可変重鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲ、完全な軽鎖配列、可変の軽鎖ドメイン配列、及び可変軽鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲを含む。Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ単量体は、全長配列、可変重鎖ドメイン配列、３つの重鎖ＣＤＲ配列、及びｓｃＦｖ配列（ｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン配列、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン配列及びｓｃＦｖリンカーを含む）を含む。本明細書ではいくつかのｓｃＦｖドメインを有する分子の中は、単一の荷電ｓｃＦｖリンカー（＋Ｈ）を使用するが、他のものを使用できることに留意されたい。加えて、特定の抗原結合ドメイン（例えば、Ｂ７Ｈ３及びＣＤ２８結合ドメイン）の命名法は、「Ｈｘ．ｘｘ＿Ｌｙ．ｙｙ」タイプのフォーマットを使用し、数字は特定の可変鎖配列に対する固有の識別子である。したがって、Ｂ７Ｈ３結合ドメイン６Ａ［Ｂ７Ｈ３］のＦａｂ側の可変ドメイン（例えば、図２８Ａ）は「Ｈ１＿Ｌ１」であり、これは、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされたことを示している。これらの配列がｓｃＦｖとして使用される場合、名称「Ｈ１＿Ｌ１」は、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされ、ＮからＣ末端に向かってＶＨ－リンカー－ＶＬ方向にあることを示す。重可変ドメイン及び軽可変ドメインの同一の配列を有するが逆の順序（ＶＬ－リンカー－ＶＨ方向、Ｎ末端からＣ末端に向かって）であるこの分子は、「Ｌ１＿Ｈ１」と命名されるであろう。同様に、異なる構築物は、配列表及び図から明らかになるように、重鎖及び軽鎖を「混合及び適合させる」ことができる。

追加的に、配列表に関して、配列番号１～８８は、ＵＳＳＮ６３／０９２，２７２の図１７に以前に示された抗原結合ドメインに対応し、配列番号８９～４９６は、ＵＳＳＮ６３／０９２，２７２の図２４に以前に示された抗原結合ドメインに対応する。追加的に、配列番号４９７～５８４は全て、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］親抗体のバリアント可変重鎖ドメインであり、以下により十分に概説するように、それらの全てが本発明で使用される。配列番号５８５～６５１は全て、１Ａ７［ＣＤ２８］親抗体のバリアント可変重鎖ドメインであり、その全てが本発明で使用される。配列番号６５２～７５６は全て、１Ａ７［ＣＤ２８］親抗体のバリアント可変軽鎖ドメインであり、その全てが本発明で使用される。

ＩＩＩ．定義
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。

本明細書における「ＣＤ２８」、「分化のクラスター２８」、及び「Ｔｐ４４」（例えば、Ｇｅｎｅｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００１２３０００６（ヒト）、ＮＰ＿００１２３０００７（ヒト）、ＮＰ＿００６１３０（ヒト）、及びＮＰ＿０３１６６８（マウス））は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供するＴ細胞上に発現されたＢ７受容体を意味する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に加えてＣＤ２８を介したＴ細胞刺激は、様々なインターロイキンの産生に強力なシグナルを提供する。ＣＤ２８は、ＣＤ８０（Ｂ７．１）及びＣＤ８６（Ｂ７．２）タンパク質の受容体である。ＣＤ２８は、ＳＨ２ドメイン含有タンパク質、特にＰＩ３Ｋの動員に重要なＹＭＮＭモチーフを有する細胞間ドメインを含む。ＣＤ２８はまた、ＳＨ３含有タンパク質に結合できる２つのプロリンリッチモチーフを含む。例示的なＣＤ２８配列を図１に示す。別段の記載がない限り、ＣＤ２８への言及はヒトＣＤ２８配列に対するものである。

本明細書における「Ｂ７Ｈ３」、「Ｂ７－Ｈ３」、「Ｂ７ＲＰ－２」、「ＣＤ２７６」、「分化のクラスター２７６」（例えば、Ｇｅｎｅｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００１０１９９０７（ヒト）、ＮＰ＿００１３１６５５７（ヒト）、ＮＰ＿００１３１６５５８（ヒト）、ＮＰ＿０７９５１６（ヒト）、及びＮＰ＿５９８７４４（マウス））は、単一のＩｇＶ－ＩｇＣドメイン対で構成される外部ドメインを保有するＢ７ファミリーのメンバーである１型膜貫通タンパク質を意味する。Ｂ７Ｈ３は免疫チェックポイント分子であり、多くの種類のがんで異常に過剰発現している。例示的なＢ７Ｈ３配列を図２Ａ及びＢに示す。別段の記載がない限り、Ｂ７Ｈ３への言及はヒトＢ７Ｈ３配列に対するものである。

本明細書において「除去」は、活性の低下又は排除を意味する。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を切除する」とは、特定のバリアントを含有しないＦｃ領域と比較して、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、開始結合の５０％未満を有することを意味し、活性を７０～８０～９０～９５～９８％超えて喪失していることが好ましく、一般に、活性は、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＳＰＲ、又はＢＬＩアッセイにおいて、検出可能な結合レベルを下回る。ＦｃγＲ結合の切除において特に使用されるものは、図５に示すものであり、これらは一般に両方の単量体に付加される。

本明細書で使用される「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」は、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関し、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。

本明細書で使用される「ＡＤＣＰ」又は「抗体依存性細胞媒介性細胞食作用」とは、ＦｃγＲを発現する非特異的食細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語が一般的に使用される。本発明で提供される抗体は、本明細書に記載の従来の抗体並びに抗体誘導体、フラグメント及び模倣物を含む、本明細書に記載されているようにいくつかのフォーマットをとることができる。

従来の免疫グロブリン（Ｉｇ）抗体は、「Ｙ」字型の四量体である。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽鎖」単量体（典型的には、約２５ｋＤａの分子量を有する）と、１本の「重鎖」単量体（典型的には、約５０～７０ｋＤａの分子量を有する）とを有する。

他の有用な抗体フォーマットには、本明細書で提供される「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」フォーマット（例えば図３３を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。追加の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１８０１２７５０１Ａ１、特に抗体フォーマットに関係する関連部分（例えばＵＳ２０１８０１２７５０１Ａ１の図２）に開示されているように、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラル－Ｆｖ」、「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「ｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「デュアルｓｃＦｖ」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

抗体重鎖は、典型的には、ｖｈＣＤＲ１～３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、ＣＨ２－ＣＨ３単量体を含むＦｃドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗体重鎖は、ヒンジ及びＣＨ１ドメインを含む。従来の抗体重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって組織化された単量体：ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３である。ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、抗体、５つの異なるカテゴリー又は「アイソタイプ」：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＭがあるものの、重鎖「定常ドメイン」又は「定常領域」として総称される。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されないいくつかのサブクラスを有するＩｇＧアイソタイプ定常ドメインを含む。免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」は、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメイン及びヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、それぞれ３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧとの関連における「ＣＨ」ドメインは以下の通りである。「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数による位置１１８～２１５を指す。「ヒンジ」とは、Ｋａｂａｔにあるような、ＥＵ指数による位置２１６～２３０を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数による位置２３１～３４０を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数による位置３４１～４４７を指す。表１に示すように、重鎖ドメインの正確な付番及び配置は、異なる付番システムで異なり得る。本明細書に示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、以下に考察されるヒンジ領域と同様に１つ以上のＣＨ領域にあり得る。

ＩｇＧ１は、３５６（Ｄ又はＥ）及び３５８（Ｌ又はＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に示される配列は３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプも本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｄ／３５８Ｌを有することができる。治療用抗体は、アイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２００９／０１６３６９９号に示されるように、本抗体は、いくつかの実施形態ではＩｇＧ１／Ｇ２ハイブリッドを含む。

本明細書で使用される「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」とは、抗体の定常領域を含む、いくつかの場合では、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）の全て又はその一部を除外し、いくつかの場合では、任意にヒンジの全部又は一部を含む、ポリペプチドを意味する。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは免疫グロブリンドメインＣＨ２及びＣＨ３（Ｃγ２及びＣγ３）、並びに任意選択的に、ＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）との間のヒンジ領域の全て又は一部を含む。したがって、いくつかの場合では、Ｆｃドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＨ２－ＣＨ３及びヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４からのものであり、ＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、多くの実施形態において特定の用途が見出される。追加的に、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインの場合では、ヒンジはＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含み得る。更に、ヒトＩｇＧ４Ｆｃドメインの場合では、ヒンジはＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含み得る。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基Ｅ２１６、Ｃ２２６、又はＡ２３１を含むものと定義され、ここでの番号付けはＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下でより詳細に説明されるように、例えば、１つ以上のＦｃγＲ又はＦｃＲｎへの連結を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。

本明細書における「重鎖定常領域」とは、可変重鎖ドメインを除く、抗体（又はそのフラグメント）のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を意味し、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、これはアミノ酸１１８～４４７である。本明細書における「重鎖定常領域フラグメント」とは、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方からのアミノ酸がより少ない重鎖定常領域を意味するが、別の重鎖定常領域と二量体を形成する能力を依然として保持する重鎖定常領域を意味する。

重鎖のドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」とは、抗体の第１の及び第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧＣＨ１ドメインはＥＵ位置２１５で終わり、ＩｇＧＣＨ２ドメインは残基ＥＵ位置２３１で始まる。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、本明細書では、２１６位（ＩｇＧ１中のＥ２１６）～２３０位（ＩｇＧ１中のＰ２３０）を含むように定義され、付番はＫａｂａｔにあるようにＥＵインデックスによる。場合によっては、「ヒンジフラグメント」が使われ、それは、ヒンジドメインのＮ末端又はＣ末端のいずれか又は両方でより少ないアミノ酸を含む。本明細書に記載の通り、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。本明細書の抗体の多くは、セリンで置き換えられたＥＵ番号付け（ヒンジ領域）による位置２２０に少なくとも１つのシステインを有する。一般に、この修飾は、本明細書に示される配列のほとんどについて「ｓｃＦｖ単量体」側にある（１＋１又は２＋１フォーマットが使用される場合）が、ジスルフィド形成を低減するために「Ｆａｂ単量体」側、又はその両方にあることもできる。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方又は両方が置き換えられたもの（Ｃ２２０Ｓ）である。

当業者には理解されるように、重鎖定常領域ドメイン（すなわちＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン）の正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステムで異なり得る。ＥＵ及びＫａｂａｔによる重定常領域の番号付けの有用な比較は以下の通りであり、Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８－８５、及びＫａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ（参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。

抗体軽鎖は、一般に、２つのドメイン：軽鎖ＣＤＲｖｌＣＤＲ１～３を含む可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、定常軽鎖領域（しばしば、ＣＬ又はＣκとして称される）と、を含む。抗体軽鎖は通常、Ｎ末端からＣ末端に向かって組織化されている：ＶＬ－ＣＬ。

本明細書において「抗原連結ドメイン」又は「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察されるような標的抗原（例えば、Ｂ７Ｈ３又はＣＤ２８）に特異的に連結する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。当技術分野で知られるように、これらのＣＤＲは、一般に、可変重鎖ＣＤＲの第１のセット（ｖｈＣＤＲ又はＶＨＣＤＲ）及び可変軽鎖ＣＤＲの第２のセット（ｖｌＣＤＲ又はＶＬＣＤＲ）として存在し、それぞれが３つのＣＤＲ：ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３可変重鎖ＣＤＲ、及びｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３ｖｈＣＤＲ３可変軽鎖ＣＤＲを含む。ＣＤＲは、可変重鎖ドメイン（ｖｈＣＤＲ１～３）と可変軽鎖ドメイン（ｖｌＣＤＲ１～３）に存在する。Ｆｖ領域からの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメイン。

本発明は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖ＣＤＲ及び３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれ、より大きな可変軽鎖又は可変重鎖ドメインの一部であってもよい。加えて、本明細書により完全に概説されているように、可変重及び可変軽鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖が使用されるとき（例えば、Ｆａｂが使用されるとき）には別々のポリペプチド鎖上に、又はｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。

当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステムで異なり得る。しかしながら、可変重鎖及び／又は可変軽鎖配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ番号付けの有用な比較は以下の通りであり、Ｌａｆｒａｎｃｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３）を参照されたい。

本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ番号付けシステムは概して、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７及び重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ番号付けシステムは、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，上述（１９９１）を参照）。

ＣＤＲは、抗原結合の形成、又はより具体的には、抗原結合ドメイン及び抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、並びに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。

エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。

エピトープは、立体配座又は直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって生成される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって生成されるものである。立体配座エピトープ及び非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。

エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より通常には、少なくとも５個、又は８～１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメイン及び本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲには、可変重鎖及び可変軽鎖ドメインが寄与する。「Ｆａｂ」フォーマットにおいて、６つのＣＤＲのセットは、２つの異なるポリペプチド配列、可変重鎖ドメイン（ｖｈ又はＶＨ；ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３を含有する）及び可変軽鎖ドメイン（ｖｌ又はＶＬ；ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３を含有する）によって与えられ、ｖｈドメインのＣ末端が重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端と結合し、ｖｌドメインのＣ末端が定常軽鎖ドメインのＮ末端と結合している（その結果、軽鎖を形成している）。ｓｃＦｖフォーマットでは、ｖｈ及びｖｌドメインは、一般に本明細書に概説されているように、リンカー（「ｓｃＦｖリンカー」）の使用によって、単一のポリペプチド配列に共有結合され、それは（Ｎ末端から開始して）ｖｈ－リンカー－ｖｌ又はｖｌ－リンカー－ｖｈのいずれかであってよく、前者が一般的に好ましい（使用されるフォーマットに応じて、両側の任意選択的なドメインリンカーを含む）。一般に、ｓｃＦｖドメインのＣ末端は、第２の単量体のヒンジの全て又は一部のＮ末端に結合される。

本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、カッパ、ラムダ、及び重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するＶκ、Ｖλ、及び／又はＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含み、抗原特異性を付与するＣＤＲを含有する、免疫グロブリンの領域を意味する。したがって、「可変重鎖ドメイン」は「可変軽鎖ドメイン」と対になって抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）を形成する。加えて、各可変ドメインは、３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）（可変重鎖ドメインではｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３、可変軽鎖ドメインではｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３）と４つのフレームワーク（ＦＲ）領域とを含み、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、次の順序で配置される：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４。

本明細書で使用される「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」とは、概して２つの異なるポリペプチド鎖の（例えば、一方の鎖のＶＨ－ＣＨ１、他方の鎖のＶＬ－ＣＬ）、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬ免疫グロブリンドメインを含む抗体領域を意味する。Ｆａｂは、この領域単独、又は本発明の二重特異性抗体との関係においてこの領域を指し得る。Ｆａｂの関連で、Ｆａｂは、ＣＨ１及びＣＬドメインに加えてＦｖ領域を含む。

本明細書で使用される「Ｆｖ」又は「Ｆｖフラグメント」又は「Ｆｖ領域」は、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む抗体領域を意味する。Ｆｖ領域は、Ｆａｂ（上述の通り、概して上記に概説されている定常領域も含む２つの異なるポリペプチド）と単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）の両方としてフォーマットすることができ、ｖｌ及びｖｈドメインは、一般に本明細書で考察されるリンカーで結合した単鎖ペプチドに含まれる。

本明細書における「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は概して、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用してｓｃＦｖ又はｓｃＦｖドメインを形成する、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かっていずれかの配向（ｖｈ－リンカー－ｖｌ又はｖｌ－リンカー－ｖｈ）であり得る。配列表及び図に示す配列では、ｖｈ及びｖｌドメインの順序が名前に示される。例えば、Ｈ．Ｘ＿Ｌ．Ｙは、Ｎ末端からＣ末端方向に、ｖｈ－リンカー－ｖｌ、及びＬ．Ｙ＿Ｈ．Ｘがｖｌ－リンカー－ｖｈであることを意味する。

本明細書に提供される主題の抗体のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖドメインは、天然に存在しないが、一般に、ｓｃＦｖリンカーによってともに連結された可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説されるように、ｓｃＦｖドメインは、一般に、ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬとしてＮ末端からＣ末端まで配向されているが、これは、ｓｃＦｖドメイン（又は、Ｆａｂ由来のｖｈ及びｖｌ配列を使用して構築されたドメイン）のいずれに関しても、フォーマットに応じて一方又は両方の端部に任意選択的なリンカーを用いて、ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨへと逆転させることができる。

本明細書における「修飾」又は「バリアント」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、及び／若しくは欠失、又はタンパク質と化学的に連結された部分に対する改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物又はＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡ中にコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。

本明細書における「アミノ酸置換」又は「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、又はいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｅ２７２Ｙは、２７２位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はＦｃバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、開始アミノ酸を変化させない（例えば、宿主生物発現レベルを増加させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（アルギニンをなおコードする）に交換する）ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではない。すなわち、同じタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始される特定の位置に同じアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。

本明細書で使用される「アミノ酸挿入」又は「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、－２３３Ｅ又は２３３Ｅは、２３３位の後、及び２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。追加的に、－２３３ＡＤＥ又はＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後、及び２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。

本明細書で使用される「アミノ酸欠失」又は「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３－又はＥ２３３＃、Ｅ２３３（）又はＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。追加的に、ＥＤＡ２３３－又はＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。

本明細書で使用される「バリアントタンパク質」又は「タンパク質バリアント」又は「バリアント」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するが、バリアントタンパク質は、以下に記載されるようなアラインメントプログラムを使用して親タンパク質と整列しないほど多くはない。一般に、本明細書で概説するバリアントタンパク質（バリアントＦｃドメインなど）は、ＢＬＡＳＴなど、以下に説明するアラインメントプログラムを使用して親タンパク質に対して、一般に少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一である。

本明細書で使用される「バリアント」はまた、特定の機能を付与する特定のアミノ酸修飾（例えば、「ヘテロ二量体化バリアント」、「ｐＩバリアント」、「除去バリアント」など）を指す。

以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４由来の重鎖定常ドメイン又はＦｃ領域などのヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」として機能することができ、例えば、米国公開第２００６／０１３４１０５号のＩｇＧ１／２ハイブリッドを含めることができる。本明細書のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５－９８－９９％の同一性を有する。したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」又は「バリアント抗体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」又は「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親ＩｇＧ（ここでも、多くの場合はヒトＩｇＧに由来）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」又は「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」又は「バリアントＦｃ」は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４のＦｃドメインと比較してアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。

本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」又は「バリアントＦｃ」とは、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。修飾は、付加、欠失、又は置換であり得る。Ｆｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓ又は４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して４３４位に置換セリンを有するＦｃバリアントであり、番号付けはＥＵインデックスによるものである。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して置換Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを有するＦｃバリアントを定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは４２８Ｌ／４３４Ｓと称される。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば、４２８Ｌ／４３４Ｓは４３４Ｓ／４２８Ｌと同じＦｃバリアントなどであることが留意される。抗体又は誘導体及びそれらのフラグメント（例えば、Ｆｃドメイン）に関連する本発明において議論される全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置の番号付けはＥＵインデックスによるものである。「ＥＵインデックス」又は「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」若しくは「ＥＵ番号付け」スキームは、ＥＵ抗体の番号付けを指す（Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８－８５、これにより完全に参照により組み込まれる）。修飾は、付加、欠失、又は置換であり得る。

一般に、バリアントＦｃドメインは、対応する親ヒトＩｇＧＦｃドメインに対して少なくとも約８０、８５、９０、９５、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有する（以下に考察する同一性アルゴリズム（一実施形態では当技術分野で既知のＢＬＡＳＴアルゴリズム）をデフォルトパラメータを用いて使用する）。代替的に、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインに対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のアミノ酸修飾を有し得る。代替的に、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインに対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０までのアミノ酸修飾を有し得る。追加的に、本明細書で考察されるように、本明細書に記載のバリアントＦｃドメインは、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技術を使用して測定される別のＦｃドメインとともに二量体を形成する能力を依然として保持する。

本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。加えて、本発明の抗体を作成するポリペプチドには、１つ以上の側鎖又は末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質又はタンパク質ドメインへの融合、及びペプチドタグ又は標識の付加が含まれ得る。

本明細書で使用される「残基」は、タンパク質における位置及びその関連するアミノ酸素性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７又はＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。

本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」又は「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。

本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」は、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ヒトＩｇＧのうちのいずれも４３４位にセリンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４（又はそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは、天然に生じない修飾であるとみなされる。

本明細書で使用される「アミノ酸」及び「アミノ酸同一性」は、ＤＮＡ及びＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。

本明細書で使用される「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ＩｇＧＦｃリガンド」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌプロテインＧ、及びウイルスＦｃγＲが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドにはまた、ＦｃγＲと相同なＦｃ受容体のファミリーである、Ｆｃ受容体相同体（ＦｃＲＨ）が含まれる（Ｄａｖｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３－１３６（参照により全体が組み込まれる））。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子を含み得る。特定のＩｇＧＦｃリガンドは、ＦｃＲｎ及びＦｃガンマ受容体である。本明細書で使用される「Ｆｃリガンド」とは、抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。

本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、又は「ＦｃガンマＲ」は、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームであるＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームであるＦｃγＲＩＩａ（アロタイプであるＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、並びにＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；並びにアイソフォームであるＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプであるＶ１５８及びＦ１５８を含む）、並びにＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプであるＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（参照により全体が組み込まれるＪｅｆｆｅｒｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ８２：５７－６５）、並びに任意の発見されていないヒトＦｃγＲ又はＦｃγＲアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）、並びに任意の未発見のマウスＦｃγＲ又はＦｃγＲアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」又は「新生児Ｆｃ受容体」は、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。当技術分野において既知のように、機能的ＦｃＲｎタンパク質は、しばしば重鎖及び軽鎖と称される２つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ－２－ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされている。本明細書において別段の記載がない限り、ＦｃＲｎ又はＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とβ－２－ミクログロブリンとの複合体を指す。ＦｃＲｎ受容体への結合を増加させるために、いくつかの場合には血清半減期を増加させるために使用される様々なＦｃＲｎバリアントが使用できる。「ＦｃＲｎバリアント」とは、ＦｃＲｎ受容体への結合の増加に寄与するアミノ酸修飾であり、好適なＦｃＲｎバリアントを以下に示す。

本明細書で使用される「親ポリペプチド」は、バリアントを生成するように後に修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、又は天然に存在するポリペプチドのバリアント若しくは操作されたバージョンであってもよい。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを生成するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説するように、既知の市販の組換えで産生した抗体が含まれることに注意すべきである。このような関係では、「親Ｆｃドメイン」は、列挙されたバリアントに関連するものであり、したがって、「バリアントヒトＩｇＧ１Ｆｃドメイン」はヒトＩｇＧ１の親Ｆｃドメインと比較され、「バリアントヒトＩｇＧ４Ｆｃドメイン」は親ＦｃドメインヒトＩｇＧ４と比較される等である。

本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順次に、又は確立された形式、例えば、抗体ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３又はヒンジドメイン）の番号付けのためのＥＵインデックスに従って、番号付けされ得る。

「標的抗原」は、本明細書で使用されるとき、所与の抗体の可変領域を含む抗体結合ドメインによって特異的に結合される分子を意味する。

本明細書中の本発明のヘテロ二量体抗体の単量体に牽連して「撚り度（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は、「マッチ」する２本鎖ＤＮＡと同様に、「マッチ」してヘテロ二量体を形成する能力を保持するようにヘテロ二量体化バリアントを各単量体に組み込むことを意味する。例えば、いくつかのｐＩバリアントが単量体Ａへと操作される（例えば、ｐＩをより高くする）場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体バリアントはｐＩバリアントを妨害せず、例えば、ｐＩを高くした電荷バリアントが同一の「鎖」又は「単量体」に置かれ、両方の機能性を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー（ｓｋｅｗ）」バリアントついて、当業者は、対の１つのセットが、どちらの鎖又は単量体に入るかを決定する際に、ｐＩを考慮し、そのため、ｐＩ分離もまた、スキューのｐＩを使用して最大化される。

本明細書で使用される「標的細胞」とは、標的抗原を発現する細胞を意味する。

本明細書の本発明による二重特異性抗体を製造する文脈における「宿主細胞」とは、二重特異性抗体の構成要素をコードする外因性核酸を含み、好適な条件下で二重特異性抗体を発現できる細胞を意味する。好適な宿主細胞について以下で説明する。

本明細書における「野生型又はＷＴ」は、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。

本明細書には、ヒト抗体ドメインと配列同一性を有するいくつかの抗体ドメイン（例えばＦｃドメイン）が提供される。２つの類似した配列（抗体可変ドメインなど）間の配列同一性は、Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）”ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎＯｆＢｉｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，”Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［ｌｏｃａｌｈｏｍｏｌｏｇｙａｌｇｏｒｉｔｈｍ］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，ＣＤ．（１９７０）”ＡＧｅｎｅｒａｌＭｅｔｈｏｄＡｐｐｌｉｃａｂｌｅＴｏＴｈｅＳｅａｒｃｈＦｏｒＳｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓＩｎＴｈｅＡｍｉｎｏＡｃｉｄＳｅｑｕｅｎｃｅＯｆＴｗｏＰｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３［ｈｏｍｏｌｏｇｙａｌｉｇｎｍｅｎｔａｌｇｏｒｉｔｈｍ］、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｗ．Ｒ．＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８８）”ＩｍｐｒｏｖｅｄＴｏｏｌｓＦｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｅｑｕｅｎｃｅＣｏｍｐａｒｉｓｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４［ｓｅａｒｃｈｆｏｒｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｍｅｔｈｏｄ］、又はＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔａｌ，（１９９０）”ＢａｓｉｃＬｏｃａｌＡｌｉｇｎｍｅｎｔＳｅａｒｃｈＴｏｏｌ，“Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，ｔｈｅ”ＢＬＡＳＴ”ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ｈｔｔｐｓ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ参照されたい）などのアルゴリズムによって測定できる。前述のアルゴリズムのいずれかを使用する場合、デフォルトパラメータ（ウィンドウの長さ、ギャップペナルティなど）が使用される。一実施形態では、配列同一性は、デフォルトパラメータを使用して、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して測定される。

本発明の抗体は一般に、単離されるか、又は組換えである。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される「単離された」とは、それが発現された細胞又は細胞培養物から特定及び分離及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程によって調製されるであろう。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いて抗体が生成されることを意味し、それらも単離され得る。

特定の抗原又はエピトープへの「特異的結合」、あるいは、特定の抗原又はエピトープ「～に特異的に結合する」若しくは「～に対して特異的である」とは、測定し得るほどに非特異的相互作用とは異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に、結合活性を持たない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合によって決定することができる。

特定の抗原又はエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対して少なくとも約１０^－４Ｍ、少なくとも約１０^－５Ｍ、少なくとも約１０^－６Ｍ、少なくとも約１０^－７Ｍ、少なくとも約１０^－８Ｍ、少なくとも約１０^－９Ｍ、代替的に少なくとも約１０^－１０Ｍ、少なくとも約１０^－１１Ｍ、少なくとも約１０^－１２Ｍ、又はそれ以上のＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原又はエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、又はそれを超えて大きいＫＤを有することになる。

また、特定の抗原又はエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対するＫＡ又はＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、又はそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡ又はＫａは、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は一般的に、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＳＰＲ又はＢＬＩアッセイを用いて測定される。

ＩＶ．ＣＤ２８及びＢ７Ｈ３抗原結合ドメイン
本明細書では、Ｂ７Ｈ３又はＣＤ２８のいずれかに結合する抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）及びＡＢＤ組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＡＢＤの１つ以上が、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む本明細書に記載の抗体フォーマットに含まれる。

Ａ．ＣＤ２８抗原結合ドメイン及び抗体
一態様では、ヒトＣＤ２８に結合するＣＤ２８抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）、及びそのようなＣＤ２８抗原結合ドメインを含む組成物（例えば、本明細書に提供されるヘテロ二量体抗体を含む抗体）が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ２８抗原結合ドメインは、共刺激活性を有利に提供するアゴニストＣＤ２８ＡＢＤである。したがって、本明細書で提供されるそのようなＣＤ２８ＡＢＤは、例えば、単剤療法として、又は他の治療法（例えば、特定のがんの治療のための抗がん治療薬）と組み合わせて使用される場合、免疫応答を増強するのに有用である。

当業者によって理解されるように、好適なＣＤ２８結合ドメインは、下線が引かれているか、又は、本明細書に記載され、表２に示されるように異なる番号付けスキームが使用される場合、図１８～２１及び２３並びに配列表に示されるような可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）配列内の他のアラインメントを使用して同定されるＣＤＲとして、配列表及び図に示されるような６つのＣＤＲのセットを含むことができる。好適なＣＤ２８ＡＢＤはまた、ｓｃＦｖ又はＦａｂとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなＶＨ及びＶＬの全体の配列をも含み得る。

一実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＣＤ２８結合ドメインのいずれかの６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１～３及びｖｌＣＤＲ１～３）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ２８に結合するＣＤ２８ＡＢＤは、以下のうちの１つである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤはＣＤ２８ＡＢＤ：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１又は１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１である。

ＣＤ２８に対するＡＢＤを形成する図及び配列表に開示される親ＣＤＲセットに加えて、本明細書に開示されるＣＤ２８ＡＢＤＣＤＲの少なくとも１つの修飾を含むＣＤＲを有するバリアントＣＤ２８ＡＢＤＳが本明細書に提供される（例えば、図１８～２１及び２３、並びに配列表）。一実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＣＤ２８ＡＢＤの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のアミノ酸修飾を有する６つのＣＤＲのセットを含む。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のアミノ酸修飾を有する６つのＣＤＲのセットを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤはＣＤ２８ＡＢＤ：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１又は１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１である。

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ２８ＡＢＤの６つのＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である６つのＣＤＲを含む。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である６つのＣＤＲを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。

別の例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＣＤ２８ＡＢＤのうちのいずれか１つの可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。

本明細書に開示される親ＣＤ２８可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインに加えて、本明細書に開示されるＣＤ２８ＡＢＤＶＨ及びＶＬドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び／又は可変軽鎖ドメインを含むＣＤ２８ＡＢＤが本明細書に提供される。一実施形態では、バリアントＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ２８ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノ酸変化を有する：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。

一実施形態では、バリアントＶＨ及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ２８ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。例示的な実施形態では、バリアントＶＨ及び／又はＶＬドメインは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。

一実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、１Ａ７＿Ｈ１．１４のｖｈＣＤＲ１－３（すなわち、ｖｈＣＤＲ１－３）を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図１９）。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

一実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、１Ａ７＿Ｈ１．１４のｖｈＣＤＲ１－３と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸修飾を有するｖｈＣＤＲ１－３を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図１９）。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、１Ａ７＿Ｈ１．１４の６つのｖｈＣＤＲ１－３と少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一であるｖｈＣＤＲ１－３を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図１９）。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

別の例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン１Ａ７＿Ｈ１．１４を含む（図１９）。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

本明細書に開示される親ＣＤ２８重鎖可変ドメインに加えて、１Ａ７＿Ｈ１．１４のバリアントである重鎖可変ドメインを含むＣＤ２８ＡＢＤが本明細書に提供される（図１６）。一実施形態では、バリアントＶＨドメインは、１Ａ７＿Ｈ１．１４（図１９）からの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

一実施形態では、バリアントＶＨドメインは、１Ａ７＿Ｈ１．１４（図１９）と少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ２８に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ヒトＣＤ２８抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＣＤ２８結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

関心対象となる特定の抗ＣＤ２８ＡＢＤは、配列番号８７４のＶＬドメインと対をなした、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号１１９８及び配列番号１１９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。

他の場合では、抗ＣＤ２８ＶＨドメインは、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号１１９８、及び配列番号１１９９から選択されるアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインは、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの場合では、抗ＣＤ２８結合ドメインは、ａ）配列番号１及び５、ｂ）配列番号９及び１３、ｃ）配列番号１７及び２１、ｄ）配列番号２５及び２９、ｅ）配列番号３３及び３７、ｆ）配列番号４１及び４５、ｇ）配列番号４９及び５３、ｈ）配列番号５７及び６１、ｉ）配列番号６５及び６９、ｊ）配列番号７３及び７７、並びにｋ）配列番号８１及び８５の対から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを有する。

Ｂ．Ｂ７Ｈ３抗原連結ドメイン
一態様では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）、及び抗Ｂ７Ｈ３抗体を含むそのようなＢ７Ｈ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む組成物が本明細書で提供される。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメイン及び関連する抗体（例えば、抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体）は、例えば、Ｂ７Ｈ３関連がんの治療に使用される。

当業者によって理解されるように、好適なＢ７Ｈ３結合ドメインは、下線が引かれているか、又は、本明細書に記載され、表２に示されるように異なる番号付けスキームが使用される場合、図２６～３１及び配列表（表２を参照されたい）に示されるような可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）配列内の他のアラインメントを使用して同定されるＣＤＲとして、配列表及び図２６～３１に示されるような６つのＣＤＲのセットを含むことができる。好適なＢ７Ｈ３ＡＢＤはまた、ｓｃＦｖ又はＦａｂドメインとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなＶＨ及びＶＬの全体の配列をも含み得る。

一実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＢ７Ｈ３ＡＢＤの６つのＣＤＲ（すなわち、ｖｈＣＤＲ１～３及びｖｌＣＤＲ１～３）を含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

Ｂ７Ｈ３に対するＡＢＤを形成する図及び配列表に開示される親ＣＤＲセットに加えて、本明細書に開示されるＢ７Ｈ３ＡＢＤＣＤＲの少なくとも１つの修飾を含むＣＤＲを有するバリアントＢ７Ｈ３ＡＢＤＳが本明細書に提供される。一実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＢ７Ｈ３ＡＢＤの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のアミノ酸修飾を有する６つのＣＤＲのセットを含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、６、９、１０のアミノ酸修飾を有する６つのＣＤＲのセットを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。ある特定の実施形態では、バリアントＢ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。

一実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＢ７Ｈ３ＡＢＤの６つのＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である６つのＣＤＲを含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つの６つのＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である６つのＣＤＲを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３抗原に対して結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。

別の例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちのいずれか１つの可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のうちの１つである：Ｂ７Ｈ３ＡＢＤ：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、又は６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１。

本明細書に開示される親Ｂ７Ｈ３可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインに加えて、本明細書に開示されるＢ７Ｈ３ＡＢＤＶＨ及びＶＬドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び／又は可変軽鎖ドメインを含むＢ７Ｈ３ＡＢＤが本明細書に提供される。一実施形態では、バリアントＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＢ７Ｈ３ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有する：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。

一実施形態では、バリアントＶＨ及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＢ７Ｈ３ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。例示的な実施形態では、バリアントＶＨ及び／又はＶＬドメインは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。

一実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２のｖｈＣＤＲ１－３（すなわち、ｖｈＣＤＲ１－３）を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図２７）。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

一実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２のｖｈＣＤＲ１－３と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸修飾を有するｖｈＣＤＲ１－３を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図２７）。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２の６つのｖｈＣＤＲ１－３と少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一であるｖｈＣＤＲ１－３を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む（図２７）。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

別の例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２を含む（図２７）。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図１を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

本明細書に開示される親Ｂ７Ｈ３重鎖可変ドメインに加えて、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２のバリアントである重鎖可変ドメインを含むＢ７Ｈ３ＡＢＤが本明細書に提供される（図２７）。一実施形態では、バリアントＶＨドメインは、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２（図２７）からの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

一実施形態では、バリアントＶＨドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２（図２７）と少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインは、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３又はＣＤ２８結合ドメイン可変軽鎖ドメインのいずれかを更に含む。例示的な実施形態では、可変軽鎖ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｌ１（図２６）、１Ａ７＿Ｌ１（図１８）又はそのバリアントである。ある特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、Ｂ７Ｈ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ヒトＢ７Ｈ３抗原に結合することができる（図２を参照されたい）。そのようなＢ７Ｈ３結合ドメインは、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」抗体を含む、本明細書で提供される抗体のいずれかに含まれ得る。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ａ）オンブラマブからの配列番号８９及び９３、ｂ）エノブリツズマブからの配列番号９７及び１０１、ｃ）ＢＲＣＡ８４Ｄからの配列番号１０５及び１０９、ｄ）ＢＲＣＡ６９Ｄからの配列番号１１３及び１１７、ｅ）ＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２１及び１２５、ｆ）ｈｕＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２９及び１３３、ｇ）Ｍａｂ－Ｄからの配列番号１３７及び１４１、ｈ）配列番号１４５及び１４９のｈｕｍＡｂ－Ｄ、ｉ）ｍ３０からの配列番号１５３及び１５７、ｊ）Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４からの配列番号１６１及び１６５、ｋ）配列番号１６９及び１７３のＳＰ２６５、ｌ）Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８からの配列番号１７７及び１８１、ｍ）８Ｈ９からの配列番号１８５及び１８９、ｎ）ｍ８５２からの配列番号１９３及び１９７、ｏ）ｍ８５７からの配列番号２０１及び２０５、ｐ）ｍ８５２４からの配列番号２０９及び２１３、ｑ）１－１からの配列番号２１７及び２２１、ｒ）１－２からの配列番号２２５及び２２９、ｓ）１－４からの配列番号２３３及び２３７、ｔ）１－５からの配列番号２４１及び２４５、ｕ）１－７からの配列番号２４９及び２５３、ｖ）２－５からの配列番号２５７及び２６１、ｗ）２－８からの配列番号２６５及び２６９、ｘ）ｃｈＡｂ２からの配列番号２７３及び２７７、ｙ）配列番号２８１及び２８５のｃｈＡｂ３、ｚ）ｃｈＡｂ４からの配列番号２８９及び２９３、ａａ）ｃｈＡｂ１８からの配列番号２９７及び３０１、ｂｂ）ｃｈＡｂ１３からの配列番号３０５及び３０９、ｃｃ）ｃｈＡｂ１２からの配列番号３１３及び３１７、ｄｄ）ｃｈＡｂ１４からの配列番号３２１及び３２５、ｅｅ）ｃｈＡｂ６からの配列番号３２９及び３３３、ｆｆ）ｃｈＡｂ１１からの配列番号３３７及び３４１、ｇｇ）ｃｈＡＢ１６からの配列番号３４５及び３４９、ｈｈ）ｃｈＡｂ１０からの配列番号３５３及び３５７、ｉｉ）ＣｈＡｂ７からの配列番号３６１及び３６５、ｊｊ）ｃｈＡｂ８からの配列番号３６９及び３７３、ｋｋ）ｃｈＡｂ１７からの配列番号３７７及び３８１、ｌｌ）ｃｈＡｂ５からの配列番号３８５及び３８９、ｍｍ）ｈｕＡｂ３ｖ２．５からの配列番号３９３及び３９７、ｎｎ）ｈｕＡｂ３ｖ２．６からの配列番号４０１及び４０５、ｐｐ）ｈｕＡｂ１３ｖ１からの配列番号４０９及び４１３、ｑｑ）ＴＰＰ－５７０６からの配列番号４１７及び４２１、ｒｒ）ＴＰＰ－６６４２からの配列番号４２５及び４２９、ｓｓ）ＴＰＰ－６８５０からの配列番号４３３及び４３７、ｔｔ）ＴＰＰ－３８０３からの配列番号４４１及び４４５、ｕｕ）ＴＲＬ４５４２からの配列番号４４９及び４５３、ｖｖ）ｈ１７０２からの配列番号４５７及び４６１、ｗｗ）ｈ１７０３からの配列番号４６５及び４６９、ｘｘ）ｈｕＡ３からの配列番号４７３及び４７７、ｙｙ）ｈｕＡ９からの配列番号４８１及び４８５、並びにｚｚ）ｍ１７０４からの配列番号４８９及び４９３の対から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを有する。ＵＳＳＮ６３／０９２，２７２の図１７を参照されたい。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号９４２（２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２）のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号８７４（１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、これはＢ７Ｈ３及びＣＤ２８の両方の共通軽鎖である）のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを有する。

Ｖ．抗体
一態様では、抗ＣＤ２８抗体及び抗Ｂ７Ｈ３抗体が本明細書で提供される。本明細書で提供される抗体は、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３及び／又はＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含み得る（例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」及び「２＋１共通軽鎖」抗体）。

本明細書で提供される抗体は、異なる抗体ドメインを含む。本明細書中に記載され、当該技術分野において既知であるように、本明細書に記載のヘテロ二量体抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－Ｆｃドメイン又はＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、及びｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。

本明細書に示されるように、好適なリンカー（ドメインリンカー又はｓｃＦｖリンカーのいずれかとして使用）にはいくつかあり、列挙されたドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｃドメインなど）に共有結合（組換え技術により生成される従来型ペプチド結合を含む）するために使用することができる。対象の抗体のドメインを互いに取り付けるための例示的なリンカーを図７に示す。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長である。一実施形態では、１～２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態では、約５～約１０アミノ酸が使用されている。有用なリンカーには、例えば、ｎが少なくとも１つの整数（一般に３～４）である（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎ、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、並びに他の可動性リンカーを含むグリシンセリンポリマーが含まれる。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして有用であり得る。

他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列を含むが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基を含まない場合があり、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５～１２アミノ酸残基である。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えば、Ｃκ又はＣλに由来し得る。リンカーは、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε、及びＣμを含む任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得る。リンカー配列はまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、ヒンジ領域由来配列、及び他のタンパク質からの他の天然配列などの他のタンパク質に由来し得る。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」である。例えば、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおいて、ＦａｂのＣＨ１ドメインのＣ末端をｓｃＦｖのＮ末端に結合するドメインリンカーがあってよく、別の任意のドメインリンカーはｓｃＦｖのＣ末端をＣＨ２ドメインに結合している（ただし、多くの実施形態では、このドメインリンカーとしてヒンジが使用される）。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（一般に３～４～５）の整数である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎを含むドメインリンカーとしてグリシン－セリンポリマー、並びに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さ及び柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説する「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」に注意を払って、ｓｃＦｖリンカーのいくつかの実施形態において使用されるように、荷電ドメインリンカーを使用することができる。例示的な有用なドメインリンカーが、図７に示されている。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書で考察されるＶＨ及びＶＬドメインを共有結合するために使用される「ｓｃＦｖリンカー」である。多くの場合では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーであり、そのいくつかは図６に示されている。したがって、第１の単量体と第２の単量体との間のｐＩの分離を促進するための荷電ｓｃＦｖリンカーが本明細書で提供される。すなわち、正又は負のいずれかの荷電ｓｃＦｖリンカー（又は異なる単量体上にｓｃＦｖを使用する足場の場合は両方）を組み込むことによって、これは、Ｆｃドメインを更に変化させることなく、荷電リンカーを含む単量体のｐＩを変えることを可能にする。これらの荷電リンカーは、標準的なリンカーを含む任意のｓｃＦｖ中に置換することができる。また、当業者には理解されるように、ｐＩの所望の変化に従って、荷電ｓｃＦｖリンカーが正しい「鎖」又は単量体上に使用される。例えば、本明細書中で論じられるように、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットヘテロ二量体抗体を作製するために、所望の抗原連結ドメインのそれぞれについてのＦｖ領域の元のｐＩが計算され、そしてｓｃＦｖを作製するために１つが選択され、ｐＩに応じて、正又は負のリンカーのいずれかが選択される。

荷電ドメインリンカーも同様に、本発明の単量体のｐＩ分離を増加させるために使用することができ、したがって、図６に含まれるものは、リンカーが利用される、本明細書の任意の実施形態で使用することができる。

提供されるＢ７Ｈ３結合ドメイン及びＣＤ２８結合ドメインは、例えば、標準的な免疫グロブリン、並びに本明細書で提供される「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」及び「２＋１共通軽鎖」フォーマットを含む任意の有用な抗体フォーマットに含めることができる（例えば図２５を参照されたい）。他の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１８０１２７５０１Ａ１、特に抗体フォーマットに関係する関連部分（例えば図２を参照されたい）に開示されているように、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラル－Ｆｖ」、「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「ｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「デュアルｓｃＦｖ」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１つのＢ７Ｈ３ＡＢＤを含む。他の実施形態では、抗体は、２つのＢ７Ｈ３ＡＢＤを含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

例示的な実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるＢ７Ｈ３ＡＢＤのいずれかを含む、１つ又は２つのＢ７Ｈ３ＡＢＤを含む二重特異性抗体である。そのようなＢ７Ｈ３ＡＢＤを含む二重特異性抗体には、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」及び「２＋１共通軽鎖」二重特異性フォーマット抗体が挙げられる（図２５）。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインはＦａｂである。いくつかの実施形態では、そのような二重特異性抗体は、本明細書に記載のヘテロ二量体化スキューバリアント、ｐＩバリアント及び／又は除去バリアントのいずれかを含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。図８を参照されたい。

いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書で提供されるＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１つのＣＤ２８ＡＢＤを含む。他の実施形態では、抗体は、２つのＣＤ２８ＡＢＤを含む。例示的な実施形態では、抗体は、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。

例示的な実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるＣＤ２８ＡＢＤのいずれかを含む、１つ又は２つのＣＤ２８ＡＢＤを含む二重特異性抗体である。そのようなＣＤ２８ＡＢＤを含む二重特異性抗体には、例えば、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」及び「２＋１共通軽鎖」二重特異性フォーマット抗体が挙げられる（図２５）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、以下のＣＤ２８ＡＢＤのうちの１つである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」又は「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」二重特異性フォーマット抗体」に含まれる抗ＣＤ２８ｓｃＦｖである（図２５）。いくつかの実施形態では、そのような二重特異性抗体は、本明細書に記載のヘテロ二量体化スキューバリアント、ｐＩバリアント及び／又は除去バリアントのいずれかを含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。図８を参照されたい。

Ａ．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される主題の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び／又は特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」である又はそれ「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか又はそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（すなわち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって（本明細書に概説される方法を使用する）、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞突然変異又は部位特異的突然変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８若しくは９９％、又は少なくとも９６％、９７％、９８％、又は９９％までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０個以下のアミノ酸差しか示さない（本明細書中の任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５個以下、又は更には４、３、２、若しくは１個以下のアミノ酸差しか示さない場合がある（同様に、本明細書における任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。

一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知の通り、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、ＵＳＳＮ１１／００４，５９０に記載されているように、ヒト化及び親和性成熟のために用いられ得る。選択に基づく方法を使用して、抗体可変領域をヒト化及び／又は親和性成熟してもよく、限定されないが、Ｗｕら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１－１６２；Ｂａｃａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－１０６８４；Ｒｏｓｏｋら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８；Ｒａｄｅｒら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０－８９１５；Ｋｒａｕｓｓら、２００３、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１６（１０）：７５３－７５９に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみを移植することを含んでいてもよく、限定されないが、ＵＳＳＮ０９／８１０，５１０；Ｔａｎら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５；ＤｅＰａｓｃａｌｉｓら、２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に記載される方法を含み、全て全体が参照により組み込まれる。

Ｂ．抗ＣＤ２８×抗腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）抗体
別の態様では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、ＣＤ２８結合ドメイン、及び腫瘍関連抗原に結合する１つ以上の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体のＣＤ２８結合ドメインは、Ｔ細胞上のＣＤ２８に結合することによって共刺激機能を提供するアゴニストＣＤ２８結合ドメインである。したがって、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、特定のＴＡＡ（例えばＢ７Ｈ３）を発現する腫瘍部位で選択的に免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、二価抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、三価抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、二重特異性二価抗体である。例示的な実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、二重特異性三価抗体である。

本明細書でより詳細に概説されるように、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、以下に概説されるように、様々なフォーマットであり得る。例示的なフォーマットには、本明細書で提供される「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」、「１＋１共通軽鎖」、及び「２＋１共通軽鎖」フォーマットが挙げられる（例えば図２５を参照されたい）。他の有用な抗体フォーマットには、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１８０１２７５０１Ａ１、特に抗体フォーマットに関係する関連部分（例えば図２を参照されたい）に開示されているように、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラル－Ｆｖ」、「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「ｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「デュアルｓｃＦｖ」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、本明細書に記載されているものを含む、任意の好適なＣＤ２８ＡＢＤを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ＡＢＤは、ＣＤ２８に結合すると共刺激機能を提供するアゴニストＡＢＤである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、以下のＣＤ２８結合ドメインのうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むＣＤ２８結合ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、及びｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）又はそれらのバリアント。

本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、１つ以上のＴＡＡ結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、１つのＴＡＡ結合ドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、２つのＴＡＡ結合ドメインを含む。標的化に選択された腫瘍に応じて、任意の好適なＴＡＡ結合ドメインを対象の抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体に含めることができる。本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体によって標的化され得るＴＡＡには、Ｂ７Ｈ、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３；ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ；ＰＳＭＡ；ＳＳＴＲ２；ＳＳＴＲ５、ＣＤ１９、ＦＬＴ３、ＣＤ３３、ＰＳＣＡ、ＡＤＡＭ１７、ＣＥＡ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ－ｖＩＩＩ、ＣＤ３０、ＦＯＬＲ１、ＧＤ－２、ＣＡ－ＩＸ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＤ７０、ＣＤ３８、メソテリン、ＥｐｈＡ２、ＣＤ２２、ＣＤ７９ｂ、ＧＰＮＭＢ、ＣＤ５６、ＣＤ１３８、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ３０、ＣＤ１２３、ＲＯＮ、ＥＲＢＢ２、及びＥＧＦＲが挙げられるが、これらに限定されない。追加のＴＡＡは、例えば、ＵＳ２０１６／０３５５６０８及びＵＳ２０１７／０２０９４９２に記載されており、腫瘍関連抗原に関係する関連部分において本明細書に組み込まれる。主題の抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体に含めることができる好適なＴＡＡ結合ドメインは、例えば、ＵＳ２０１９／０２４８８９８Ａ１（ＳＳＴＲ２）、ＵＳ２０２０／０１６５３５６Ａ１（ＦＡＰ）、ＵＳ２０１７／０３２０９４７Ａ１（ＰＳＭＡ）に開示されており、これらは全てＴＡＡ結合ドメインに関係する関連部分において参照により組み込まれる。

ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体は、Ｂ７Ｈ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、そのような抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３（本明細書では「αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８」又は「αＣＤ２８×αＢ７Ｈ３」とも呼ばれる）二重特異性抗体は、少なくとも１つのＢ７Ｈ３ＡＢＤ及び少なくとも１つのＣＤ２８結合ドメインを含む。例示的な実施形態では、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３二重特異性抗体は、２つのＢ７Ｈ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のＣＤ２８結合ドメインは、Ｔ細胞上のＣＤ２８に結合することによって共刺激機能を提供するアゴニストＣＤ２８結合ドメインである。したがって、本明細書で提供される二重特異性αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８は、Ｂ７Ｈ３を発現する腫瘍部位において選択的に免疫応答を増強する。

抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３二重特異性抗体は、本明細書に記載のものを含む、任意の好適なＣＤ２８ＡＢＤ及びＢ７Ｈ３ＡＢＤを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３二重特異性抗体は、以下のＣＤ２８結合ドメインのうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むＣＤ２８結合ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、５．１１Ａ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）又はそれらのバリアント。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、以下のＢ７Ｈ３ＡＢＤのうちの１つの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）又はそれらのバリアント。

本明細書で指定されていない限り、名前の抗原リストの順序は構造を与えないことに注意されたく、すなわち、抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体は、ｓｃＦｖをＢ７Ｈ３又はＣＤ２８に結合させることができるが、場合によっては、指示されている通りの順序で構造が指定される。

加えて、主題の抗体がｓｃＦｖを含む実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ又はＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨのＮ末端からＣ末端への配向であり得る。いくつかのフォーマットでは、ＡＢＤの１つ以上は、概して、１つのタンパク質鎖上にＶＨドメインを（概して重鎖の構成要素として）、及び別のタンパク質鎖上にＶＬを（概して軽鎖の構成要素として）含むＦａｂである。

当業者には理解されるように、６個のＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬドメインの任意のセットはｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットにすることができ、次いでこれを重鎖及び軽鎖の定常ドメインに付加し、ここで重鎖定常ドメインは変異（ＣＨ１ドメイン及びＦｃドメイン内を含む）を含む。配列表に含まれるｓｃＦｖ配列は特定の荷電リンカーを利用するが、本明細書に概説するように、図６に示されるものを含めて、非荷電又は他の荷電リンカーを使用できる。

加えて、上記のように、ＣＤＲの同定のために配列表において使用される番号付けはＫａｂａｔであるが、異なる番号付けを使用することができ、それは表２に示されるようにＣＤＲのアミノ酸配列を変化させるであろう。

本明細書に記載されている全ての可変重鎖及び軽鎖ドメインについて、更なるバリアントを作製することができる。本明細書で概説されるように、いくつかの実施形態では、６つのＣＤＲのセットは、０、１、２、３、４又は５のアミノ酸修飾（特に使用されるアミノ酸置換による）を有し、並びに、可変重鎖及び軽鎖ドメインのフレームワーク領域であって、このフレームワーク（ＣＤＲを除く）が、図と説明文が組み込まれている米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されているもの（その図及び説明文は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）から選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも約８０、８５、又は９０％の同一性を保持している限りにおいてそのフレームワーク領域の変化を、有することができる。したがって、例えば、フレームワーク領域が米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されたものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも８０、８５又は９０％の同一性を保持している限り、本明細書に記載の同一のＣＤＲをヒト生殖系列配列由来の異なるフレームワーク配列と組み合わせることができる。代替的に、ＣＤＲは、アミノ酸改変（例えば、ＣＤＲのセットにおいて１、２、３、４、又は５個のアミノ酸改変を有し得（すなわち、ＣＤＲは、６個のＣＤＲのセット中の変化の全数が６アミノ酸改変未満である限り、任意の組み合わせのＣＤＲが変更され、例えば、ｖｌＣＤＲ１において１つの変更、ｖｈＣＤＲ２において２つの変更、ｖｈＣＤＲ３において変更がないなどであり得る））、同様に、フレームワーク領域が、米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されるものから選択されるヒト生殖細胞系列の配列に対して少なくとも８０、８５、又は９０％同一性を保持する限り、フレームワーク領域の変更を有する。

Ｃ．ヘテロ二量体抗体
例示的な実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３）抗体は、２つのバリアントＦｃドメイン配列を含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。そのようなバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体抗体の自己組織化及び／又は精製を容易にするためのアミノ酸修飾を含む。

抗体技術における継続的な問題は、２つの異なる抗原に同時に結合する「二重特異性」抗体であって、一般に、異なる抗原を近接させ、新しい機能と新しい治療法をもたらすことができる、「二重特異性」抗体に対する要望である。一般に、これらの抗体は、各重鎖及び軽鎖の遺伝子を宿主細胞に含めることによって作成される。これにより、一般に、２つのホモ二量体（Ａ－Ａ及びＢ－Ｂ（軽鎖ヘテロ二量体の問題は含まない））だけでなく、所望のヘテロ二量体（Ａ－Ｂ）が形成される。しかしながら、二重特異性抗体形成における主な障壁は、ホモ二量体形成を上回るようにヘテロ二量体形成に偏らせること及び／又はホモ二量体から離してヘテロ二量体抗体を精製することが困難であるということである。

対象のヘテロ二量体抗体を生成するために使用することができる多くの機構が存在する。加えて、当業者には理解されるように、これらの異なる機構を組み合わせて高いヘテロ二量体化を確実にすることができる。ヘテロ二量体の生成と精製を容易にするアミノ酸修飾は、総称して「ヘテロ二量体化バリアント」と呼ばれる。以下に議論するように、ヘテロ二量体化バリアントには、「スキュー」バリアント（例えば、以下に議論する「ノブアンドホール」及び「電荷対」バリアント）、並びにホモ二量体からのヘテロ二量体の精製を可能にする「ｐＩバリアント」が含まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第ＵＳ９，６０５，０８４号に一般的に記載されるように、また、具体的には、ヘテロ二量体化バリアントの議論について以下のように、ヘテロ二量体化に有用な機構としては、米国特許第９，６０５，０８４号に記載される「ノブアンドホール」（「ＫＩＨ」）、米国特許第９，６０５，０８４号に記載される「静電ステアリング」又は「電荷対」、米国特許第９，６０５，０８４号に記載されるｐＩバリアント、及び米国特許第９，６０５，０８４号及び以下に概説される一般的な更なるＦｃバリアントが挙げられる。

対象のヘテロ二量体抗体（例えば、二重特異性抗体）の形成及び精製に有用なヘテロ二量体化バリアントについて、以下で更に詳細に議論する。

１．スキューバリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、第１のＦｃドメイン（Ａ）及び／又は第２のＦｃドメイン（Ｂ）における１つ以上のアミノ酸修飾であるスキューバリアントを含み、スキューバリアントは、Ｆｃホモ二量体（第１のＦｃドメインの２つ又は第２のＦｃドメインの２つを含むＦｃ二量体；Ａ－Ａ又はＢ－Ｂ）を上回って第１及び第２のＦｃドメインを含むＦｃ二量体；Ａ－Ｂ）の形成を促す。好適なスキューバリアントは、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図２９に含まれ、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、並びに図３及び９において、参照により本明細書に組み込まれている。

スキューバリアントの１つの特定の種類は、一般に、当該技術分野において「ノブアンドホール」と称され、ＵＳＳＮ６１／５９６，８４６、Ｒｉｄｇｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９（７）：６１７（１９９６）、Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７２７０：２６、米国特許第８，２１６，８０５号（その全てが、全体的に、特に、「ノブアンドホール」変異の開示について、参照により本明細書に組み込まれている）に記載されるように、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しないような立体的影響を作り出すアミノ酸操作を指す。これは、本明細書において、時に「立体バリアント」と称されることがある。これらの図は、「ノブアンドホール」に依存するいくつかの「単量体Ａ－単量体Ｂ」対を特定する。加えて、Ｍｅｒｃｈａｎｔｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブアンドホール」変異をジスルフィド結合と組み合わせ、Ｆｃヘテロ二量体の生成を更に促進することができる。

ヘテロ二量体の生成に使用される別の方法は、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）に記載されているように、時に「静電ステアリング」と呼ばれる。これは、本明細書において、時に「電荷対」と称される。この実施形態では、静電学を使用して、ヘテロ二量体化に向けて形成をスキューさせる。当業者には理解されるように、これらは、ｐＩ、すなわち精製にも影響を及ぼす可能性があり、したがっていくつかの場合ではｐＩバリアントとみなすこともできる。しかしながら、これらはヘテロ二量体化を強制するために生成され、精製手段として使用されなかったので、それらは「スキューバリアント」として分類される。これらには、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ（例えば、これらは「単量体の対応セット」である）、及びＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが含まれるがこれらに限定されない。

いくつかの実施形態では、スキューバリアントは、有利かつ同時に、「ノブアンドホール」機構及び「静電ステアリング」機構の両方に基づくヘテロ二量体化を促進する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、そのようなヘテロ二量体化スキューバリアントの１つ以上のセットを含む。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、一方のセットの対が第１の単量体に組み込まれ、他のセットの対が第２の単量体に組み込まれる。これらのセットは、必ずしも「ノブアンドホール」バリアントとして挙動するわけではなく、一方の単量体の残基と他方の単量体の残基との間の一対一の対応を有することを留意すべきである。すなわち、セットのこれらの対は、その代わりに、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を促進しない２つの単量体間の界面を形成する可能性があり、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合は、予想される５０％（２５％ホモ二量体Ａ／Ａ：５０％ヘテロ二量体Ａ／Ｂ：２５％ホモ二量体Ｂ／Ｂ）ではなく、９０％を超える。例示的なヘテロ二量体化「スキュー」バリアントを図４に示す。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ；Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ；又はＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意に、架橋ジスルフィドを含む、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ）「スキュー」バリアントアミノ酸置換セットを含む。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」アミノ酸置換セットを含む。命名法に関して、「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」の対は、単量体の１つが、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ及びＥ３５７Ｑを含むＦｃドメインを含み、他方の単量体が、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ及びＫ３７０Ｓを含むＦｃドメインを含むことを意味する。上述のように、これらの対の「撚り度」は、開始時のｐＩに依存する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるスキューバリアントは、ヘテロ二量体抗体の第１及び第２のＦｃドメインの片方又は両方に、他のスキューバリアント（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号の図３７、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれるものを参照）、ｐＩバリアント、アイソタイプバリアント、ＦｃＲｎバリアント、除去バリアントなどを含むがこれらに限定されない他の修飾とともに独立して組み込まれる。更に、個々の修飾はまた、独立して、かつ任意に、ヘテロ二量体抗体を対象に含めるか、又は対象から除外することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に概説されるスキューバリアントは、任意のｐＩバリアント（又はＦｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントなどの他のバリアント）を一方又は両方の重鎖単量体に任意にかつ独立して組み込むことができ、本発明のタンパク質に独立してかつ任意に含むか又は除外することができる。

２．ヘテロ二量体のｐＩ（等電点）バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体抗体（例えば、抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体）の分離を有利に可能にする精製バリアントを含む。

ヘテロ二量体抗体の精製を容易にし得るいくつかの基本的な機構が存在する。例えば、各単量体が異なるｐＩを有するように抗体重鎖単量体Ａ及びＢの一方又は両方への修飾は、単量体Ａ－Ａ及びＢ－Ｂタンパク質からのヘテロ二量体Ａ－Ｂ抗体の等電点精製を可能にする。代替的に、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマット、「２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマット及び「２＋１ＣＬＣ」フォーマットなどのいくつかの足場フォーマットは、サイズに基づいて分離を可能にする。上記のように、スキューバリアントを使用してホモ二量体上にヘテロ二量体の形成を「スキュー」することもまた可能である。したがって、ヘテロ二量体化スキューバリアントとｐＩバリアントとの組み合わせは、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体において特定の用途を見出す。

追加的に、以下でより完全に概説されるように、ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、単量体の定常領域及び／又はＦｃドメイン内に含まれるｐＩバリアント、及び／又はドメインリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、Ｆｃ、ＦｃＲｎ及びＫＯバリアントなどの、ｐＩ変化を作り出すこともできる代替機能のための追加の修飾を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される対象のヘテロ二量体抗体は、単量体のｐＩを変更する１つ以上の修飾を有する少なくとも１つの単量体（すなわち、「ｐＩバリアント」）を含む。一般に、当業者には理解されるように、ｐＩバリアントには２つの一般的なカテゴリー：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）がある。本明細書中に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせがなされ得る：一方の単量体は野生型、又は野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであり得、他方がより塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各単量体は、１つがより塩基性に、１つがより酸性へと変化する。

ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、ｐＩ変異は単量体の定常及び／又はＦｃドメイン内に含まれるか、又は荷電リンカー、ドメインリンカー又はｓｃＦｖリンカーのいずれかが使用され得る。すなわち、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」などのｓｃＦｖを利用する抗体フォーマットには、精製目的のために更にｐＩブーストを与える荷電ｓｃＦｖリンカー（正又は負のいずれか）を含むことができる。当業者には理解されるように、本明細書は、単量体の一方又は両方にあるｐＩバリアント、及び／又は荷電ドメインリンカーも提供するが、いくつかの１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、荷電ｓｃＦｖリンカーのみで有用であり、追加のｐＩ調整はない。加えて、代替の機能性のための更なるアミノ酸操作もまた、Ｆｃ、ＦｃＲｎ、及びＫＯバリアントなどのｐＩ変化を付与し得る。

ヘテロ二量体タンパク質の精製を可能にする分離機構としてｐＩを利用する対象のヘテロ二量体抗体では、アミノ酸バリアントが単量体ポリペプチドの一方又は両方に導入される。すなわち、単量体の１つ（単純化のため本明細書では、簡「単量体Ａ」として称される）のｐＩは、単量体Ｂから離れるように操作させることができ、又は単量体ＡのｐＩを増加させ、単量体ＢのｐＩを減少させつつ、単量体ＡとＢの両方の変化を変化させることができる。下記により完全に概説されるように、いずれか又は両方の単量体のｐＩ変化は、荷電残基を除去又は付加することによって（例えば、中性アミノ酸を正又は負に荷電したアミノ酸残基で置換する、例えばグリシンからグルタミン酸）、正又は負から反対の電荷への荷電残基の変更によって（アスパラギン酸からリジンへ）、又は荷電残基の中性残基への変更によって（例えば、電荷の消失、リジンからセリンへ）、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを図３及び４に示す。

したがって、いくつかの実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体は、二量体タンパク質の単量体の両方ではないにしても少なくとも１つの等電点（ｐＩ）を、アミノ酸置換（「ｐＩバリアント」又は「ｐＩ置換」）を単量体の一方又は両方に組み込むことによって変更する定常領域におけるアミノ酸修飾を含む。本明細書中に示されるように、２つのホモ二量体からのヘテロ二量体の分離は、２つの単量体のｐＩが０．１ｐＨ単位とわずかに異なる場合に達成でき、０．２、０．３、０．４、及び０．５以上異なるものが全て本発明において使用される。

当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各単量体又は両方の単量体に含まれるべきｐＩ変異の数は、構成要素の出発ｐＩ、例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、１＋１ＣＬＣ及び２＋１ＣＬＣフォーマットにおいて、関心対象のｓｃＦｖ（１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）及びＦａｂの出発ｐＩに部分的に依存するであろう。すなわち、どの単量体を操作するか、又はどの「方向」（例えば、より正又はより負）かを決定するために、２つの標的抗原のＦｖ配列が計算され、そしてそこから決定がなされる。当技術分野において既知のように、異なるＦｖは、本発明において利用される異なる出発ｐＩを有するであろう。一般に、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各単量体の総ｐＩ差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように０．２～０．５が好ましい。

重鎖の定常領域を使用することによって、ヘテロ二量体を達成するためにｐＩバリアントが使用される場合、抗体を含む二重特異性タンパク質を設計及び精製するためのよりモジュール方式のアプローチが提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化変異（スキュー及びｐＩヘテロ二量体化バリアントを含む）は可変領域に含まれず、そのため各個々の抗体を操作しなければならない。加えて、いくつかの実施形態では、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくｐＩが変化するように、異なるＩｇＧアイソタイプからのｐＩバリアントを移入することによって顕著に低減する。したがって、解決されるべき更なる問題は、高いヒト配列含有量を有する低いｐＩ定常ドメインの解明、例えば、任意の特定位置における非ヒト残基の最小化又は回避である。アイソタイプ置換に代えて、又はこれに加え、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、等配電子置換（例えば、ＡｓｎからＡｓｐ及びＧｌｎからＧｌｕ）を利用することによって、有意に低減する。

以下に議論するように、このｐＩ工学で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長及びＦｃＲｎ連結の増加である。すなわち、米国特許出願公開第２０１２／００２８３０４号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、抗体定常ドメイン（抗体及びＦｃ融合体に見られるものを含む）のｐＩを低下させるとインビボでより長い血清保持をもたらし得る。血清半減期を延長するためのこれらのｐＩバリアントはまた、精製のためのｐＩ変化を促進する。

加えて、ｐＩバリアントは、ホモ二量体が存在するときを排除、最小化、及び区別する能力が顕著であるので、二重特異性抗体の分析及び品質管理プロセスに更なる利益を与える。同様に、ヘテロ二量体抗体産生の再現性を確実に試験する能力は重要である。

一般に、特に使用される実施形態は、スキューバリアントを含むバリアントのセットに依存し、これは、２つの単量体間でｐＩ差異を増加させるｐＩバリアントと組み合わせて、ホモ二量体化形成より優先してヘテロ二量体化形成を促し、ホモ二量体を除去してヘテロ二量体の精製を容易にする。

ｐＩバリアントの例示的な組み合わせは、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図４及び５、及び図３０に示されており、これらの全ては、全体的に、特に、ｐＩバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる。ｐＩバリアントの好ましい組み合わせを、図３及び４に示す。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、全てのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２～４に由来する場合、Ｒ１３３Ｅ及びＲ１３３Ｑもまた使用され得る。

一実施形態では、ｐＩバリアントの好ましい組み合わせは、２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１に対しての場合、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む１つの単量体（負のＦａｂ側）と、（ＧＫＰＧＳ）_４（配列番号７９６）を含む正に荷電したｓｃＦｖリンカーを含む第２の単量体（正のｓｃＦｖ側）とを有する。しかしながら、当業者によって理解されるように、第１の単量体は、位置２０８を含むＣＨ１ドメインを含む。したがって、ＣＨ１ドメインを含まない構築物（例えば、ドメインの１つにＣＨ１ドメインを利用しない抗体の場合）において、好ましい負のｐＩ変異Ｆｃセットは、２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ変異（ヒトＩｇＧ１と比較するときＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む。

したがって、いくつかの実施形態では、一方の単量体は図４からの置換のセットを有し、他方の単量体は荷電リンカー（フォーマットに示されるように、その単量体がｓｃＦｖ又は荷電ドメインリンカーを含むため荷電ｓｃＦｖリンカーのフォーマットのいずれかで、図６に示されているものから選択できる）を有する。

いくつかの実施形態では、修飾は、ＥＵ番号付けに基づき、位置２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９及び２３０を含む、Ｆｃドメインのヒンジで生じる。したがって、ｐＩバリアント、特に置換は、位置２１６～２３０の１つ以上で行うことができ、用途を見出す１、２、３、４又は５個の変異を有する。同様に、全ての可能な組み合わせが、単独で、又は他のドメイン中の他のｐＩバリアントとともに企図されている。

ヒンジドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換は、２２１位の欠失、２２２位の非天然バリン又はトレオニン、２２３位の欠失、２２４位の非天然グルタミン酸、２２５位の欠失、２３５位の欠失、及び２３６位の欠失又は非天然アラニンを含むが、これらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはｐＩ置換のみが行われ、他の例では、これらの置換は他のドメイン内の他のｐＩバリアントに任意の組み合わせで加えられる。

いくつかの実施形態では、ＥＵ番号付けに基づき、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２７４、２９６、３００、３０９、３２０、３２２、３２６、３２７、３３４及び３３９を含むＣＨ２領域内に変異を生じさせることができる。２３３～２３６における変化は、ＩｇＧ２骨格における（３２７Ａとともに）エフェクター機能を増加させるためになされ得ることに留意されたい。同様に、これら１４の位置の全ての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、本明細書で提供される抗ＣＤ２８又は抗Ｂ７Ｈ３抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のＣＨ２のｐＩ置換を有するバリアントＦｃドメインを含み得る。

ＣＨ２ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換は、２７４位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、２９６位の非天然フェニルアラニン、３００位の非天然フェニルアラニン、３０９位の非天然バリン、３２０位の非天然グルタミン酸、３２２位の非天然グルタミン酸、３２６位の非天然グルタミン酸、３２７位の非天然グリシン、３３４位の天然グルタミン酸、３３９位の非天然トレオニン、及びＣＨ２内及び他のドメインとの全ての可能な組み合わせを含むが、これらに限定されない。

この実施形態では、修飾は、ＣＨ３領域の位置３５５、３５９、３６２、３８４、３８９、３９２、３９７、４１８、４１９、４４４及び４４７（ＥＵ番号付け）から独立して、かつ任意選択で選択され得る。ＣＨ３ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、３５５位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、３８４位の非天然セリン、３９２位の非天然アスパラギン又はグルタミン酸、３９７位の非天然メチオニン、４１９位の非天然グルタミン酸、３５９位の非天然グルタミン酸、３６２位の非天然グルタミン酸、３８９位の非天然グルタミン酸、４１８位の非天然グルタミン酸、４４４位の非天然グルタミン酸、及び４４７位の欠失又は非天然アスパラギン酸が含まれるがこれらに限定されない。

３．アイソタイプバリアント
加えて、主題のヘテロ二量体抗体の多くの実施形態は、あるＩｇＧアイソタイプから別のＩｇＧアイソタイプへの特定の位置でのｐＩアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減又は排除する。これらのいくつかは、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図２１に示されている。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重定常領域は、ＩｇＧ２のそれよりも高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することによって、得られる単量体のｐＩは低下（又は上昇）し、追加的により長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は１３７位にグリシン（ｐＩ５．９７）を有し、ＩｇＧ２はグルタミン酸（ｐＩ３．２２）を有し、グルタミン酸を移入すると、得られるタンパク質のｐＩに影響を与える。以下に記載されるように、いくつかのアミノ酸置換は一般に、バリアント抗体のｐＩに顕著な影響を与えるために必要とされる。しかしながら、ＩｇＧ２分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが以下に論じられるように留意されるべきである。

他の実施形態では、非アイソタイプのアミノ酸変化を行って、（例えば、高ｐＩのアミノ酸から低ｐＩのアミノ酸へと変化させることによって）得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低減させるか、又は以下で更に詳細に説明する安定性などのための構造の調整を可能にする。

加えて、重定常ドメイン及び軽定常ドメインの両方をｐＩ操作することによって、ヘテロ二量体の各単量体における顕著な変化を見ることができる。本明細書で論じるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。

４．ｐＩを計算する
本明細書で提供される抗体の各単量体のｐＩは、バリアント重鎖定常ドメインのｐＩ及び全単量体のｐＩに依存し、バリアント重鎖定常ドメイン及び融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図１９のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どの単量体を操作するかは概して、Ｆｖ及び足場の固有のｐＩによって決定される。代替的に、各単量体のｐＩを比較することができる。

５．より良好なインビボ結合のＦｃＲｎも付与するｐＩバリアント
ｐＩバリアントが単量体のｐＩを減少させる場合、ｐＩバリアントはインビボでの血清保持を改善するという更なる利点を有することができる。

まだ検討中ではあるが、エンドソーム内のｐＨ６でＦｃＲｎに結合するとＦｃが隔離されるため、Ｆｃ領域はインビボでより長い半減期を有すると考えられている（参照により全体的に組み込まれる、ＧｈｅｔｉｅａｎｄＷａｒｄ，１９９７ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ．１８（１２）：５９２－５９８）。次いでエンドソーム区画はＦｃを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約７．４のより高いｐＨが、血中へのＦｃの放出を誘導する。マウスにおいて、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａらは、ｐＨ６及びｐＨ７．４でのＦｃＲｎ結合が増加したＦｃ変異は実際に低下した血清濃度及び野生型Ｆｃと同一の半減期を有することを示した（参照により全体的に組み込まれる、Ｄａｌｌ’ Ａｃｑｕａｅｔａｌ．２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０）。ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対するＦｃの親和性の増加は、血中へのＦｃの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのＦｃの半減期を増加させるＦｃ変異は、理想的には、より高いｐＨでのＦｃの放出をなお可能にしながら、より低いｐＨでのＦｃＲｎ結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、６．０～７．４のｐＨ範囲でその荷電状態を変化させる。それ故、Ｆｃ／ＦｃＲｎ複合体中の重要な位置にＨｉｓ残基を見出すことは驚くべきことではない。

最近、より低い等電点を有する可変領域を有する抗体もまたより長い血清半減期を有し得ることが示唆されている（Ｉｇａｗａｅｔａｌ．，２０１０ＰＥＤＳ．２３（５）：３８５－３９２、参照により全てが本明細書に組み込まれる）。しかし、この機構はまだよくわかっていない。更に、可変領域は抗体ごとに異なる。本明細書に記載されるように、ｐＩが低下し半減期が延長された定常領域バリアントは、抗体の薬物動態特性を改善するためのよりモジュール化されたアプローチを提供するであろう。

Ｄ．追加の機能性のための追加のＦｃバリアント
上記に概説されているヘテロ二量体化バリアントに加えて、限定されないが、以下に概説されているように、１つ以上のＦｃγＲ受容体との結合を変化させること、ＦｃＲｎへの変化された結合を含む、様々な理由から行われ得るいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾がある。

したがって、本明細書で提供される抗体（ヘテロ二量体、並びにホモ二量体）は、本明細書で概説されるヘテロ二量体化バリアント（例えば、ｐＩバリアント及び立体バリアント）を伴うか、又は伴わないそのようなアミノ酸修飾を含み得る。バリアントの各セットは独立してかつ任意選択で特定のヘテロ二量体タンパク質に含み得るか又はそれから除外し得る。

１．ＦｃγＲバリアント
ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。ある特定の実施形態では、対象の抗体は、１つ以上のＦｃγＲ受容体（すなわち、「ＦｃγＲバリアント」）への結合を変更する修飾を含む。結合の増加並びに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応）の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）との結合の減少も有益であり得る。主題の抗体で使用されるアミノ酸置換には、米国特許第８，１８８，３２１号（特に図４１）及び同第８，０８４，５８２号、並びに米国特許公開出願第２００６／０２３５２０８号及び同第２００７／０１４８１７０号に列挙されるものが挙げられ、これらは全て、参照によりその全体が、特にそこに開示されているＦｃγ受容体結合に影響するバリアントについて明示的に、本明細書に組み込まれている。使用される特定のバリアントは、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ、及び２９９Ｔを含むが、これらに限定されない。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のＦｃドメインに含まれ得る。

いくつかの実施形態では、主題の抗体は、血清半減期を増加させる１つ以上のＦｃ修飾を含む。ＦｃＲｎ受容体への結合の増加及び血清半減期の増加に使用されるＦｃ置換は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ１２／３４１，７６９に具体的に開示されているように、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６Ｉ又はＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、及び２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むがこれらに限定されない。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のＦｃドメインに含まれ得る。

２．除去バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体（例えば、抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体）は、Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）のうちの１つ以上又は全てへのＦｃドメインの通常の結合を低減又は除去して追加の作用機序を回避する１つ以上の修飾を含む。そのような修飾は、「ＦｃγＲ除去バリアント」又は「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯ又はＫＯ）」バリアントと呼ばれる。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、追加の作用機序を回避するために、１つ以上又は全てのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減又は除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特にＣＤ２８に一価的に結合する二重特異性抗体の使用において、ＡＤＣＣ活性を排除又は顕著に低下させるためにＦｃγＲＩＩＩａ結合を除去することが概して望ましい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Ｆｃドメインの少なくとも１つは、１つ以上のＦｃγ受容体除去バリアントを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の主題の抗体のうち、Ｆｃドメインの両方が、１つ以上のＦｃγ受容体除去バリアントを含む。これらの切除バリアントは、図５に示され、それぞれは、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される切除バリアントを用いる好ましい態様で、独立して任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される除去バリアントは、ＦｃγＲ結合を除去するが、ＦｃＲｎ結合を除去しないことに留意されたい。

当技術分野で知られているように、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインはＦｃγ受容体への結合が最も高く、したがってヘテロ二量体抗体の骨格の定常ドメイン（又はＦｃドメイン）がＩｇＧ１である場合、除去バリアントを使用できる。代替的に、又はＩｇＧ１バックグラウンドの除去バリアントに加えて、グリコシル化位置２９７（一般にＡ又はＳへの）での変異は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を有意に除去することができる。ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４は、Ｆｃγ受容体への結合が自然に低下しているため、これらの骨格は、除去バリアントの有無にかかわらず使用できる。

Ｅ．ヘテロ二量体とＦｃバリアントとの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント（スキューバリアント及び／又はｐＩバリアントを含む）は全て、それらの「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」又は「単量体分割」を保持する限り、任意選択で、かつ独立して組み合わせることができる。加えて、これらのバリアントは全て、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。

ｐＩバリアントの場合、特に使用される実施形態が図に示されている一方、精製を促進するために２つの単量体間のｐＩの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成できる。

加えて、ヘテロ二量体化バリアント、スキュー、及びｐＩのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Ｆｃ除去バリアント、Ｆｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントと、独立してかつ任意選択で組み合わせることができる。

ヘテロ二量体１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、１＋１ＣＬＣ及び２＋１ＣＬＣフォーマット抗体のいくつかの実施形態に含まれるバリアントの例示的な組み合わせが図８に含まれている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、図８に示されるように、バリアントの組み合わせを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ヘテロ二量体１１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、１＋１ＣＬＣ又は２＋１ＣＬＣフォーマット抗体である。

Ｆ．有用な抗体フォーマット
当業者には理解され、以下でより詳細に説明するように、概して図３３及び３４に示すように、本明細書に提供される二重特異性ヘテロ二量体抗体は、いくつかの異なる構成をとることができる。

当業者には理解されるように、本発明のヘテロ二量体フォーマットは、異なる価数を有し得るとともに、二重特異性であり得る。すなわち、本発明のヘテロ二量体抗体は、二価及び二重特異性、又は三価及び二重特異性であり得、第１の抗原は２つの結合ドメインによって結合され、第２の抗原は第２の結合ドメインによって結合される。本明細書に概説されるように、ＣＤ２８が標的抗原の１つである場合、ＣＤ２８は一価的のみに結合することが好ましい。

本発明は、ＣＤ２８抗原結合ドメインをＢ７Ｈ３結合ドメインと組み合わせて利用する。当業者によって理解されるように、図のいずれか（特に図１６～２１を参照されたい）に示されるような抗ＣＤ２８ＣＤＲ、抗ＣＤ２８可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Ｆａｂ並びにｓｃＦｖの任意のコレクションを使用することができる。同様に、抗Ｂ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかを使用することができ、図のいずれか（例えば、図２９～３１）に示されるように、ＣＤＲ、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Ｆａｂ並びにｓｃＦｖのいずれかを、任意選択で、かつ独立して任意の組み合わせで組み合わせて使用することができる。

１．１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット（「ボトルオープナー」）
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体）において特に使用される１つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図３３Ａに示されるような「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」又は「ボトルオープナー」フォーマットである。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、「通常の」重鎖（ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である第１の単量体を含み、ＶＨ１は第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃはまた、第１の可変軽鎖ドメインＶＬ１及び定常軽鎖ドメインＣＬを含む軽鎖を含む。軽鎖は、第１の単量体のＶＨ１－ＣＨ１と相互作用して、Ｆａｂである第１の抗原結合ドメインを形成する。抗体の第２の単量体は、単鎖Ｆｖ（以下に定義される「ｓｃＦｖ」）である第２の結合ドメイン及び第２のＦｃドメインを含む。ｓｃＦｖは、第２の可変重鎖ドメイン（ＶＨ２）及び第２の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２は、荷電可能なｓｃＦｖリンカーを使用してＶＬ２に結合されている（例えば、図６を参照されたい）。ｓｃＦｖは、ドメインリンカーを使用して重鎖に結合される（例えば、図７を参照されたい）。２つの単量体は、以下により詳細に記載されるように、ヘテロ二量体抗体の形成を促進する定常領域（例えば、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン及び／又はヒンジ領域）におけるアミノ酸バリアント（例えば、上述したヘテロ二量体化バリアント）の使用により一緒にされる。この構造は、ボトルオープナーと視覚的に大まかに似ているため、本明細書では「ボトルオープナー」（フォーマットと称されることがある。いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、二価抗体である。

現在の「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットにはいくつかの明確な利点が存在する。当技術分野で知られているように、２つのｓｃＦｖ構築物に依存する抗体類似体は、安定性及び凝集の問題を有することが多く、本発明では、「通常の」重鎖及び軽鎖の対合を加えることによって軽減できる。加えて、２つの重鎖及び２つの軽鎖に依存するフォーマットとは対照的に、重鎖と軽鎖の誤った対合（例えば、重鎖１と軽鎖２の対合など）の問題はない。

１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のいくつかの実施形態では、第１又は第２の抗原結合ドメインのうちの一方がＣＤ２８結合ドメインであり、他方の結合ドメインが腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインである。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－ＦｃがＣＤ２８結合ドメイン及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを含むいくつかの実施形態では、ＣＤ２８に結合するのはｓｃＦｖであり、ＴＡＡに結合するのはＦａｂである。いくつかの実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの例示的な抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体を図３５Ａに示す。

いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント（例えば、図３及び９に示されるアミノ酸置換のセット）を含むバリアントＦｃドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ（ＥＵ番号付け））を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２のバリアントＦｃドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１又は第２のバリアントＦｃドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、バリアントＦｃドメインは、除去バリアント（図５に示されるものを含む）を含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれが、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアント（図４に示されるものを含む）を含む。例示的な実施形態では、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２のＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のｓｃＦｖは、荷電ｓｃＦｖリンカー（図６に示されるものを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれは、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のｓｃＦｖは、（ＧＫＰＧＳ）_４荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン又は第２の結合ドメインのうちの一方はＣＤ２８に結合し、他方の結合ドメインは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する（図３４Ａを参照されたい）。本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＣＤ２８結合ドメインを、主題の１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。

ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ＡＢＤは、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６７０、配列番号６７１及び配列番号６７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを有する。

いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第１の結合ドメイン又は第２の結合ドメインの１つは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。好適なＴＡＡには、本明細書に開示されるＴＡＡのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。本明細書で提供されるＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＢ７Ｈ３結合ドメインを、主題の１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号８７４及び配列番号９３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを有する。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号９４６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号９５０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号９５６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号９６０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号９６４のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号９６８のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、配列番号９７２のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号９７６のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む。

いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、ＣＤ２８に結合する第１の結合ドメインと、Ｂ７Ｈ３に結合する第２の結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。

いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、及びｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ａ）オンブラマブからの配列番号８９及び９３、ｂ）エノブリツズマブからの配列番号９７及び１０１、ｃ）ＢＲＣＡ８４Ｄからの配列番号１０５及び１０９、ｄ）ＢＲＣＡ６９Ｄからの配列番号１１３及び１１７、ｅ）ＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２１及び１２５、ｆ）ｈｕＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２９及び１３３、ｇ）Ｍａｂ－Ｄからの配列番号１３７及び１４１、ｈ）配列番号１４５及び１４９のｈｕｍＡｂ－Ｄ、ｉ）ｍ３０からの配列番号１５３及び１５７、ｊ）Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４からの配列番号１６１及び１６５、ｋ）配列番号１６９及び１７３のＳＰ２６５、ｌ）Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８からの配列番号１７７及び１８１、ｍ）８Ｈ９からの配列番号１８５及び１８９、ｎ）ｍ８５２からの配列番号１９３及び１９７、ｏ）ｍ８５７からの配列番号２０１及び２０５、ｐ）ｍ８５２４からの配列番号２０９及び２１３、ｑ）１－１からの配列番号２１７及び２２１、ｒ）１－２からの配列番号２２５及び２２９、ｓ）１－４からの配列番号２３３及び２３７、ｔ）１－５からの配列番号２４１及び２４５、ｕ）１－７からの配列番号２４９及び２５３、ｖ）２－５からの配列番号２５７及び２６１、ｗ）２－８からの配列番号２６５及び２６９、ｘ）ｃｈＡｂ２からの配列番号２７３及び２７７、ｙ）配列番号２８１及び２８５のｃｈＡｂ３、ｚ）ｃｈＡｂ４からの配列番号２８９及び２９３、ａａ）ｃｈＡｂ１８からの配列番号２９７及び３０１、ｂｂ）ｃｈＡｂ１３からの配列番号３０５及び３０９、ｃｃ）ｃｈＡｂ１２からの配列番号３１３及び３１７、ｄｄ）ｃｈＡｂ１４からの配列番号３２１及び３２５、ｅｅ）ｃｈＡｂ６からの配列番号３２９及び３３３、ｆｆ）ｃｈＡｂ１１からの配列番号３３７及び３４１、ｇｇ）ｃｈＡＢ１６からの配列番号３４５及び３４９、ｈｈ）ｃｈＡｂ１０からの配列番号３５３及び３５７、ｉｉ）ＣｈＡｂ７からの配列番号３６１及び３６５、ｊｊ）ｃｈＡｂ８からの配列番号３６９及び３７３、ｋｋ）ｃｈＡｂ１７からの配列番号３７７及び３８１、ｌｌ）ｃｈＡｂ５からの配列番号３８５及び３８９、ｍｍ）ｈｕＡｂ３ｖ２．５からの配列番号３９３及び３９７、ｎｎ）ｈｕＡｂ３ｖ２．６からの配列番号４０１及び４０５、ｐｐ）ｈｕＡｂ１３ｖ１からの配列番号４０９及び４１３、ｑｑ）ＴＰＰ－５７０６からの配列番号４１７及び４２１、ｒｒ）ＴＰＰ－６６４２からの配列番号４２５及び４２９、ｓｓ）ＴＰＰ－６８５０からの配列番号４３３及び４３７、ｔｔ）ＴＰＰ－３８０３からの配列番号４４１及び４４５、ｕｕ）ＴＲＬ４５４２からの配列番号４４９及び４５３、ｖｖ）ｈ１７０２からの配列番号４５７及び４６１、ｗｗ）ｈ１７０３からの配列番号４６５及び４６９、ｘｘ）ｈｕＡ３からの配列番号４７３及び４７７、ｙｙ）ｈｕＡ９からの配列番号４８１及び４８５、並びにｚｚ）ｍ１７０４からの配列番号４８９及び４９３の対から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを有する。ＵＳＳＮ６３／０９２，２７２の図１７を参照されたい。
図１０は、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体で有用ないくつかの例示的なＦｃドメイン配列を示している。図１０に示される「単量体１」配列は、典型的には、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指し、「単量体２」配列は、「ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指す。加えて、図１２～１５は、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの第１又は第２の単量体に含まれ得る例示的なＣＨ１ヒンジドメイン、ＣＨ１ドメイン、及びヒンジドメインを示している。更に、図１６は、このフォーマットで使用され得る便利なＣＬ配列を示している。

２．２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット（セントラル－ｓｃＦｖフォーマット）
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体）において特に使用される１つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図３３Ｂに示される２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット（「セントラル－ｓｃＦｖフォーマット」とも呼ばれる）である。この抗体フォーマットには、２つのＦａｂ部分、及び単量体のうちの１つのＶＨ－ＣＨ１領域とＣＨ２－ＣＨ３領域との間に挿入されたｓｃＦｖの３つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Ｆａｂ部分はそれぞれ腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合し、「余分な」ｓｃＦｖドメインはＣＤ２８に結合する。いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、三価抗体である。

２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットのいくつかの実施形態では、第１の単量体は、標準的重鎖（すなわち、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）を含み、ＶＨ１は第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである。第２の単量体は、別の第１の可変重鎖ドメイン（ＶＨ１）、ＣＨ１ドメイン（及び任意選択的なヒンジ）、第２のＦｃドメイン、並びにｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン（ＶＬ２）、ｓｃＦｖリンカー及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン（ＶＨ２）を含むｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖは、任意選択的なドメインリンカーを使用して、第２の単量体のＣＨ１ドメインのＣ末端と第２のＦｃドメインのＮ末端の間に共有結合している（ＶＨ１－ＣＨ１－［任意選択的なリンカー］－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２－［任意選択的なリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３、又はｓｃＦｖに対して反対方向の、ＶＨ１－ＣＨ１－［任意選択的なリンカー］－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２－［任意選択的なリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）。任意選択的なリンカーは、例えば、図７に含まれるドメインリンカーを含む、任意の好適なペプチドリンカーであり得る。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン（ＶＬ１）及び定常軽鎖ドメイン（ＣＬ）を含む共通軽鎖を利用する。共通軽鎖は、第１及び第２の単量体のＶＨ１－ＣＨ１と会合して、２つの同一のＦａｂを形成する。いくつかの実施形態では、同一のＦａｂはそれぞれ、腫瘍関連抗原（例えば、Ｂ７Ｈ３）に結合する。本明細書の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれ得る。

いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント（例えば、図３及び９に示されるアミノ酸置換のセット）を含むバリアントＦｃドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ（ＥＵ番号付け））を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２のバリアントＦｃドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１又は第２のバリアントＦｃドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のｓｃＦｖは、荷電ｓｃＦｖリンカー（図６に示されるものを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれは、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のｓｃＦｖは、（ＧＫＰＧＳ）_４荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第２の単量体のｓｃＦｖはＣＤ２８結合であり、第１及び第２の単量体のＶＨ１並びに共通軽鎖のＶＬ１はそれぞれ、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ、例えばＢ７Ｈ３）に結合する結合ドメインを形成する（図３４Ｂを参照されたい）。本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＣＤ２８結合ドメインを、主題の２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ＡＢＤは、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６７０、配列番号６７１及び配列番号６７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを有する。

いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第１及び第２の単量体のＶＨ１並びに共通軽鎖のＶＬ１はそれぞれ、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する結合ドメインを形成する（図３４Ｂを参照されたい）。好適なＴＡＡには、本明細書に開示されるＴＡＡのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。本明細書で提供されるＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＢ７Ｈ３結合ドメインを、主題の２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。いくつかの実施形態では、抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤは、ａ）オンブラマブからの配列番号８９及び９３、ｂ）エノブリツズマブからの配列番号９７及び１０１、ｃ）ＢＲＣＡ８４Ｄからの配列番号１０５及び１０９、ｄ）ＢＲＣＡ６９Ｄからの配列番号１１３及び１１７、ｅ）ＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２１及び１２５、ｆ）ｈｕＰＲＣＡ１５７からの配列番号１２９及び１３３、ｇ）Ｍａｂ－Ｄからの配列番号１３７及び１４１、ｈ）配列番号１４５及び１４９のｈｕｍＡｂ－Ｄ、ｉ）ｍ３０からの配列番号１５３及び１５７、ｊ）Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４からの配列番号１６１及び１６５、ｋ）配列番号１６９及び１７３のＳＰ２６５、ｌ）Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８からの配列番号１７７及び１８１、ｍ）８Ｈ９からの配列番号１８５及び１８９、ｎ）ｍ８５２からの配列番号１９３及び１９７、ｏ）ｍ８５７からの配列番号２０１及び２０５、ｐ）ｍ８５２４からの配列番号２０９及び２１３、ｑ）１－１からの配列番号２１７及び２２１、ｒ）１－２からの配列番号２２５及び２２９、ｓ）１－４からの配列番号２３３及び２３７、ｔ）１－５からの配列番号２４１及び２４５、ｕ）１－７からの配列番号２４９及び２５３、ｖ）２－５からの配列番号２５７及び２６１、ｗ）２－８からの配列番号２６５及び２６９、ｘ）ｃｈＡｂ２からの配列番号２７３及び２７７、ｙ）配列番号２８１及び２８５のｃｈＡｂ３、ｚ）ｃｈＡｂ４からの配列番号２８９及び２９３、ａａ）ｃｈＡｂ１８からの配列番号２９７及び３０１、ｂｂ）ｃｈＡｂ１３からの配列番号３０５及び３０９、ｃｃ）ｃｈＡｂ１２からの配列番号３１３及び３１７、ｄｄ）ｃｈＡｂ１４からの配列番号３２１及び３２５、ｅｅ）ｃｈＡｂ６からの配列番号３２９及び３３３、ｆｆ）ｃｈＡｂ１１からの配列番号３３７及び３４１、ｇｇ）ｃｈＡＢ１６からの配列番号３４５及び３４９、ｈｈ）ｃｈＡｂ１０からの配列番号３５３及び３５７、ｉｉ）ＣｈＡｂ７からの配列番号３６１及び３６５、ｊｊ）ｃｈＡｂ８からの配列番号３６９及び３７３、ｋｋ）ｃｈＡｂ１７からの配列番号３７７及び３８１、ｌｌ）ｃｈＡｂ５からの配列番号３８５及び３８９、ｍｍ）ｈｕＡｂ３ｖ２．５からの配列番号３９３及び３９７、ｎｎ）ｈｕＡｂ３ｖ２．６からの配列番号４０１及び４０５、ｐｐ）ｈｕＡｂ１３ｖ１からの配列番号４０９及び４１３、ｑｑ）ＴＰＰ－５７０６からの配列番号４１７及び４２１、ｒｒ）ＴＰＰ－６６４２からの配列番号４２５及び４２９、ｓｓ）ＴＰＰ－６８５０からの配列番号４３３及び４３７、ｔｔ）ＴＰＰ－３８０３からの配列番号４４１及び４４５、ｕｕ）ＴＲＬ４５４２からの配列番号４４９及び４５３、ｖｖ）ｈ１７０２からの配列番号４５７及び４６１、ｗｗ）ｈ１７０３からの配列番号４６５及び４６９、ｘｘ）ｈｕＡ３からの配列番号４７３及び４７７、ｙｙ）ｈｕＡ９からの配列番号４８１及び４８５、並びにｚｚ）ｍ１７０４からの配列番号４８９及び４９３の対から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを有する。ＵＳＳＮ６３／０９２，２７２の図１７を参照されたい。

図１１は、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで有用ないくつかの例示的なＦｃドメイン配列を示している。図１１に示される「単量体１」配列は、典型的には「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指し、「単量体２」配列は「Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指す。加えて、図１２～１５は、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの第１又は第２の単量体に含めることができる例示的なＣＨ１ヒンジドメイン、ＣＨ１ドメイン、及びヒンジドメインを提供する。更に、図１６は、このフォーマットで使用され得る便利なＣＬ配列を示している。２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの例示的な抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体を図３６に示す。

３．１＋１ＣＬＣフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体）において特に使用される１つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図３３Ｃに示される「１＋１共通軽鎖」又は「１＋１ＣＬＣ」フォーマットである。１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－Ｃ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体「共通軽鎖」であって、ＶＬが、共通の可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、第３の単量体「共通軽鎖」とを含む。そのような実施形態では、ＶＬはＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する第１の結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する第２の結合ドメインを形成する。いくつかの実施形態では、１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、二価抗体である。

いくつかの実施形態では、１＋１ＣＬＣフォーマットの第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント（例えば、図３及び９に示されるアミノ酸置換のセット）を含むバリアントＦｃドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ（ＥＵ番号付け））を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２のバリアントＦｃドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１又は第２のバリアントＦｃドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１又は第２の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアント（図４に示されるものを含む）を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれは、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを更に含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメイン又は第２の結合ドメインのうちの一方はＣＤ２８に結合し、他方の結合ドメインは腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する（図３４Ｃを参照されたい）。本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＣＤ２８結合ドメインを、主題の１＋１ＣＬＣフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかの１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメイン又はそのバリアント及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１又はそのバリアントである。ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットのいくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８ＡＢＤは、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６７０、配列番号６７１及び配列番号６７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを有する。

いくつかの実施形態では１＋１ＣＬＣフォーマット抗体の第１の結合ドメイン又は第２の結合ドメインの１つは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。好適なＴＡＡには、本明細書に開示されるＴＡＡのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。本明細書で提供されるＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＢ７Ｈ３結合ドメインを、主題の１＋１ＣＬＣフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８又はＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかの２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２可変重鎖ドメイン又はそのバリアント、及び１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントを含む。

いくつかの実施形態では、１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＣＤ２８に結合する第１の結合ドメインと、Ｂ７Ｈ３に結合する第２の結合ドメインとを含む。特定の実施形態では、第１の結合ドメインの可変重鎖ドメイン（すなわち、ＣＤ２８結合ドメイン）は、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインの可変重鎖ドメイン（すなわち、Ｂ７Ｈ３結合ドメイン）は、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、１＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、本明細書で提供されるＣＤ２８又はＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかの可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントである。１＋１ＣＬＣフォーマットの例示的な抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体を図３７に示す。

４．２＋１ＣＬＣフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体）において特に使用される別のヘテロ二量体抗体フォーマットは、図３３Ｄに示される「２＋１共通軽鎖」又は「２＋１ＣＬＣ」フォーマットである。２＋１ＣＬＣフォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が、それぞれ第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が、第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、「共通軽鎖」ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体であって、ＶＬが、共通可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが、定常軽鎖ドメインである、第３の単量体とを含む。ＶＬは、第１の単量体のＶＨ１のそれぞれと対になって、それぞれが第１の抗原結合特異性を有する２つの第１の結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する第２の結合ドメインを形成する。第１の単量体のリンカーは、図７に記載されているドメインリンカー又はそれらの組み合わせのいずれか１つを含む、任意の好適なリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＥＰＫＳＣＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ（配列番号１１８２）である。いくつかの実施形態では、２＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、三価抗体である。

いくつかの実施形態では、２＋１ＣＬＣフォーマットの第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント（例えば、図３及び９に示されるアミノ酸置換のセット）を含むバリアントＦｃドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ（ＥＵ番号付け））を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２のバリアントＦｃドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１又は第２のバリアントＦｃドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを更に含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれは、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを更に含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、２つの第１の結合ドメインのそれぞれが腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合し、第２の結合ドメインがＣＤ２８に結合する（図３４Ｄを参照されたい）。本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＣＤ２８結合ドメインを、主題の２＋１ＣＬＣフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。例示的な実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかの１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメイン又はそのバリアント及び可変軽鎖ドメインを含む。例示的な実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１又はそのバリアントである。

いくつかの実施形態では、２つの第１の結合ドメインのそれぞれが腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。ある特定の実施形態では、２つの第１の結合ドメインは同じＴＡＡに結合する。好適なＴＡＡには、本明細書に開示されるＴＡＡのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。本明細書で提供されるＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＢ７Ｈ３結合ドメインを、主題の２＋１ＣＬＣフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

いくつかの実施形態では、２＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、それぞれがＢ７Ｈ３に結合する２つの第１の結合ドメインと、ＣＤ２８に結合する第２の結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインのそれぞれの可変重鎖ドメイン（すなわち、Ｂ７Ｈ３結合ドメイン）は、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。特定の実施形態では、第２の結合ドメインの可変重鎖ドメイン（すなわち、ＣＤ２８結合ドメイン）は、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４可変重鎖ドメイン又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、２＋１ＣＬＣフォーマット抗体は、本明細書で提供されるＣＤ２８又はＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかの可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、可変軽鎖ドメインは、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１可変軽鎖ドメイン又はそのバリアントである。２＋１ＣＬＣフォーマットの例示的な抗Ｂ７Ｈ３×抗ＣＤ２８二重特異性抗体を図３８に示す。

図１３は、２＋１ＣＬＣフォーマットの実施形態で使用される「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」ドメインリンカーの配列を示す。２＋１ＣＬＣフォーマットでは、「ＣＨ１＋ハーフヒンジ」配列は、第１の可変重鎖ドメイン（Ｖ_Ｈ）を二重特異性抗体のＦａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ側の第２のＶ_Ｈドメインに連結するのに使用される。

５．２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット
本明細書で提供される主題の二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体）において特に使用される１つのヘテロ二量体抗体フォーマットは、図３３Ｅに示される２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットである。この抗体フォーマットには、２つのＦａｂ部分、及び重鎖のうちの１つのＣ末端に結合したｓｃＦｖの３つの抗原結合ドメインが含まれる。このフォーマットのいくつかの実施形態では、Ｆａｂ部分はそれぞれ腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、この場合はヒトＢ７Ｈ３に結合し、「余分な」ｓｃＦｖドメインはＣＤ２８に結合する。すなわち、このｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットは、三価抗体である。

これらの実施形態では、第１の鎖又は単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、第２の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖドメインは、第２のＶＨ（ＶＨ２）、第２のＶＬ（ＶＬ２）及びｓｃＦｖリンカーを含む。本明細書の全てのｓｃＦｖドメインに関して、ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２又はＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２のいずれかの配向であり得る。したがって、第２の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２又はＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含み得る。この組成物は、軽鎖ＶＬ１－ＣＬも含む。これらの実施形態では、ＶＨ１－ＶＬ１はそれぞれ第１のＡＢＤを形成し、ＶＨ２－ＶＬ２は第２のＡＢＤを形成する。いくつかの実施形態では、第１のＡＢＤはヒトＢ７Ｈ３を含む腫瘍標的抗原に結合し、第２のＡＢＤはヒトＣＤ２８に結合する。

いくつかの実施形態では、２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット抗体の第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアント（例えば、図３及び９に示されるアミノ酸置換のセット）を含むバリアントＦｃドメインである。特に有用なヘテロ二量体化スキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ（ＥＵ番号付け））を含む。例示的な実施形態では、第１又は第２のバリアントＦｃドメインのうちの一方はヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１又は第２のバリアントＦｃドメインの他方はヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインはヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット抗体のｓｃＦｖは、荷電ｓｃＦｖリンカー（図６に示されるものを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

例示的な実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第２のバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインのそれぞれは、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿／Ｓ２６７Ｋを含み、第１の単量体の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）は、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット抗体のｓｃＦｖは、（ＧＫＰＧＳ）_４荷電ｓｃＦｖリンカーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットの抗体は、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。

いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第２の単量体のｓｃＦｖはＣＤ２８結合であり、第１及び第２の単量体のＶＨ１並びに共通軽鎖のＶＬ１はそれぞれ、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ、例えばＢ７Ｈ３）に結合する結合ドメインを形成する（図２６Ｂを参照されたい）。本明細書で提供されるＣＤ２８結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＣＤ２８結合ドメインを、主題の２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８結合ドメインは、以下のＣＤ２８結合ドメインの１つ又はそのバリアントである：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４Ｌ１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１．７１、ＣＤ２８．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ＴＧＮ１４１２＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、３４１ＶＬ３６［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、２８１ＶＬ４［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＨｕＴＮ２２８［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、ＰＶ１［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｍ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ０Ｌ０、ｈｕ９．３［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１（図１８～２１及び２３、並びに配列表）。

いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の第１及び第２の単量体のＶＨ１並びに共通軽鎖のＶＬ１はそれぞれ、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する結合ドメインを形成する（図２６Ｂを参照されたい）。好適なＴＡＡには、本明細書に開示されるＴＡＡのいずれかが含まれる。例示的な実施形態では、ＴＡＡはＢ７Ｈ３である。本明細書で提供されるＢ７Ｈ３結合ドメインのいずれかを含む任意の好適なＢ７Ｈ３結合ドメインを、主題の２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、以下のＢ７Ｈ３結合ドメイン又はそれらのバリアントのうちの１つである：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、オンブルタマブ、エノブリツズマブ、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ｈｕＰＲＣＡ１５７、ｍＡｂ－Ｄ、ｈｕｍＡｂ－Ｄ、Ｍ３０、Ｍ３０－Ｈ１－Ｌ４、ＳＰ２６５、Ｓ１０－Ｈ５０Ｌ５８、８Ｈ９、ｍ８５２、ｍ８５７、ｍ８５２４、１－１、１－２、１－４、１－５、１－７、２－５、２－８、ｃｈＡｂ２、ｃｈＡｂ３、ｃｈＡｂ４、ｃｈＡｂ１８、ｃｈＡｂ１３、ｃｈＡｂ１２、ｃｈＡｂ１４、ｃｈＡｂ６、ｃｈＡｂ１１、ｃｈＡｂ１６、ｃｈＡｂ１０、ｃｈＡｂ７、ｃｈＡｂ８、ｃｈＡｂ１７、ｃｈＡｂ５、ｈｕＡｂ３ｖ２．５、ｈｕＡｂ３ｖ２．６、ｈｕＡｂ１３ｖ１、ＴＰＰ－５７０６、ＴＰＰ－６６４２、ＴＰＰ－６８５０、ＴＰＰ－３８０３、ＴＲＬ４５４２、ｈ１７０２、ｈ１７０３、ｈｕＡ３、ｈｕＡ９、ｍ１７０４（図２６～３１及び配列表）。

図１０～１１は、２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットで有用ないくつかの例示的なＦｃドメイン配列を示している。図１０に示される「単量体１」配列は、典型的には、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指し、「単量体２」配列は、「Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ」重鎖のＦｃドメインを指す。加えて、図１２～１４は、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」単量体又は「Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ」重鎖のいずれかで使用され得る例示的なＣＨ１（任意せんたくてきにヒンジ又はハーフヒンジドメインを含む）を示している。図１５は、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」単量体又は「Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ」重鎖のいずれかで使用され得る例示的なヒンジドメインを示している。更に、図１６は、このフォーマットで使用され得る有用なＣＬ配列を示している。

６．単一特異性モノクローナル抗体
当業者によって理解されるように、本明細書に概説される新規のＦｖ配列はまた、単一特異性抗体（例えば、「従来のモノクローナル抗体」）又は非ヘテロ二重特異性フォーマットの両方で使用することができる。したがって、本発明は、図からの６つのＣＤＲ及び／又はｖｈ及びｖｌ配列を含み、一般にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４定常領域を有する、モノクローナル（単一特異性）抗体を提供し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐアミノ酸置換を含むＩｇＧ４定常領域を含む）を有する場合、いくつかの実施形態において特に使用される。すなわち、本明細書で「Ｈ＿Ｌ」の名称を有する任意の配列は、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域に連結することができる。

いくつかの実施形態では、単一特異性抗体は、Ｂ７Ｈ３単一特異性抗体である。ある特定の実施形態では、単一特異性抗Ｂ７Ｈ３抗体は、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの６つのＣＤＲを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、３Ｃ４［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１．１、及び４Ｆ１２［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ２Ｌ１．１（図２６～３１）。いくつかの実施形態では、単一特異性Ｂ７Ｈ３抗体は、以下のＢ７Ｈ３抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２＿Ｌ１、２Ｅ４Ａ３．１８９［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１．２２／１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｌ１，６Ａ１［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１、３Ｃ４［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ１Ｌ１．１、及び４Ｆ１２［Ｂ７Ｈ３］＿Ｈ２Ｌ１．１（図２６～３１）。

いくつかの実施形態では、単一特異性抗体は、ＣＤ２８単一特異性抗体である。ある特定の実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２８抗体は、以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかの６つのＣＤＲを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、及び１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１（図１８及び１９）。いくつかの実施形態では、単一特異性抗ＣＤ２８抗体は、以下のＣＤ２８抗原結合ドメインのいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む：１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１Ｌ１、及び１Ａ７［ＣＤ２８］＿Ｈ１．１４＿Ｌ１（図１８及び１９）。

ＶＩ．核酸
別の態様では、本明細書で提供される抗原結合ドメイン並びに抗Ｂ７Ｈ３及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８二重特異性抗体）をコードする核酸組成物が、本明細書で提供される。

当業者には理解されるように、核酸組成物はヘテロ二量体タンパク質の形式及び足場に依存する。したがって、例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、１＋１ＣＬＣ及び２＋１ＣＬＣフォーマットなど、フォーマットが３つのアミノ酸配列を必要とする場合、３つのポリヌクレオチドを発現のために１つ以上の発現ベクターに組み込むことができる。例示的な実施形態では、各ポリヌクレオチドは、異なる発現ベクターに組み込まれる。

当該技術分野で知られているように、本明細書で開示される結合ドメイン及び抗体の構成要素をコードする核酸は、本発明のヘテロ二量体抗体を産生するために使用される宿主細胞に応じて、当該技術分野で知られているように、発現ベクターに組み込むことができる。一般に、核酸は任意の数の制御性エレメント（プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクター又は組み込みベクターであり得る。

次いで、本発明のポリヌクレオチド及び／又は発現ベクターを、多くの実施形態において使用される、哺乳動物、細菌、酵母、昆虫及び／又は真菌細胞を含む当技術分野において周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）で形質転換する。

いくつかの実施形態では、各単量体をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ一般に異なる又は同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内に含まれる。本発明において特に使用される実施形態では、これらのポリヌクレオチドの各々は異なる発現ベクターに含まれる。本明細書及び参照により本明細書に組み込まれるＵＳ６２／０２５，９３１に示されるように、ヘテロ二量体形成を推進するために異なるベクター比を使用することができる。すなわち、驚くべきことに、（ヘテロ二量体抗体を含む３つのポリペプチド有する本明細書の実施形態の多くの場合）タンパク質は、第１の単量体：第２の単量体：軽鎖を１：１：２の比率で含むが、これらは最高の結果が得られる比率ではない。

本明細書に記載の抗体及びＡＢＤは、当該技術分野において周知のように、発現ベクターを含む宿主細胞を培養することによって作製される。一旦製造されると、イオン交換クロマトグラフィー工程を含む従来の抗体精製工程が実施される。本明細書で論じるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。すなわち、各単量体異なるｐＩを有し、かつヘテロ二量体も異なるｐＩを有するようになるように各単量体の等電点（ｐＩ）を変化させるｐＩ置換を含むことによって、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」ヘテロ二量体の等電点精製（例えば、陰イオン交換カラム、陽イオン交換カラム）を促進する。これらの置換はまた、精製後、混入したデュアルｓｃＦｖ－Ｆｃ及びｍＡｂホモ二量体の決定及びモニタリングにも役立つ（例えば、ＩＥＦゲル、ｃＩＥＦ、及び分析用ＩＥＸカラム）。

ＶＩＩ．抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体の生物学的及び生化学的機能性
一般に、本明細書に記載の二重特異性抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ抗体（例えば抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３）は、がん（例えばＢ７Ｈ３関連がん）を有する患者に投与され、有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、がん量、腫瘍のサイズ、転移の存在又は程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイ及びインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。

Ａ．インビボ投与のための抗体組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］）。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量及び濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。

ＶＩＩＩ．治療
一旦作製されると、本発明の組成物は、特に抗ＰＤ１及び抗腫瘍二重特異性抗体などの抗がん療法とともに使用される場合に、一般に免疫応答（例えば、Ｔ細胞の活性化及び増殖）を増強することによりがんを治療することによって、いくつかの腫瘍学用途に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、対象のＴＡＡ（例えば、Ｂ７Ｈ３）を発現する腫瘍の微小環境においてＴ細胞のアゴニスト共刺激を提供することにより、免疫応答（例えば、Ｔ細胞の活性化及び増殖）を増強する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体は、例えば、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）又は抗腫瘍二重特異性抗体を含む抗腫瘍療法とともに投与される。

Ａ．抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ／抗ＴＡＡ二重特異性抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体は、ヒトＣｄ３に結合するものなどのＴ細胞結合二重特異性抗体である抗腫瘍二重特異性抗体とともに投与される。

古典的Ｔ細胞／ＡＰＣ相互作用では、ペプチド－ＭＨＣとのＴＣＲ反応性によって提供される第１のシグナル（シグナル１）、及びＡＰＣ上に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６によるＣＤ２８架橋によって提供される第２のシグナル（シグナル２）があり、これらが一緒になってＴ細胞を完全に活性化する（図３１Ａを参照されたい）。対照的に、ＴＡＡを標的化するＣＤ３二重特異性抗体（すなわち、抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体）による処理では、第１のシグナルのみが提供される。

いかなる特定の作用理論にも束縛されることなく、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体は、ＣＤ２８共刺激によって抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体の抗腫瘍応答を増強できると考えられる（図３１Ｂ並びに実施例４Ｅ及び４Ｆを参照されたい）。したがって、一態様では、本明細書で提供される抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体及び抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体を患者に投与することによって、患者のがんを治療する方法の方法が本明細書で提供される。いくつかの場合では、ＴＴＡは両方の抗体で同じであり、したがって、例えば、抗ＣＤ２８×Ｂ７Ｈ３二重特異性抗体と抗ＣＤ３×Ｂ７Ｈ３抗体との同時投与があり得る。いくつかの場合では、ＴＴＡは異なる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体及び抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体の投与は、患者の腫瘍に対する免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３×抗ＴＡＡ二重特異性抗体及び抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡは、同じ腫瘍上の異なるＴＡＡに結合する。例示的な実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡは、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗Ｂ７Ｈ３抗体である。

Ｂ．抗ＣＤ２８×抗ＴＴＡ／チェックポイント阻害剤
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体は、チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体）とともに投与される。いかなる特定の作用理論にも束縛されることなく、チェックポイント遮断（例えば、ＰＤ－１遮断）は、アゴニスト抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体によるＴＩＬ上のＴ細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であると考えられているが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、ＣＤ２８経路のＣＴＬＡ４阻害を回避するためである。したがって、別の態様では、本明細書で提供される抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤を患者に投与することにより、患者のがんを治療する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８×抗ＴＡＡ二重特異性抗体及びチェックポイント阻害剤の投与は、患者の腫瘍に対する免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、又はＣＴＬＡ４阻害剤である。例示的な実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１又は抗ＣＴＬＡ４抗体である。

Ｃ．投与様式
本明細書で提供される抗体及び化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与又はある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。

Ｄ．治療様式
本発明の方法において、治療は、疾患又は病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。

「肯定的な治療応答」は、疾患若しくは病状の改善、及び／又は疾患又は病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの１つ以上を指し得る：（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、及び（７）疾患又は病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放。

任意の所与の疾患又は病状における肯定的な治療応答は、その疾患又は病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、並びに骨髄穿刺（ＢＭＡ）及び循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。

これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。

本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量をいう。

治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分のいずれの毒性又は有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。

腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化する能力によっても測定することができる。がんを阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。

代替的に、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、又はアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物又は投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。

投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少又は増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性及び投薬量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単一投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。

本発明の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成すべき特定の治療効果、並びに（ｂ）個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。

本発明で使用される二重特異性抗体の効率的な投薬量及び投薬レジメンは、治療される疾患又は病状に依存し、当業者によって決定され得る。

全ての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。

本発明の特定の実施形態を例示の目的で上述のように説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。

本発明を説明するために実施例を以下に提供する。これらの実施例は、本発明を任意の特定の用途又は動作理論に限定することを意味するものではない。本発明で論じられる全ての定常領域位置について、付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、参照により全体が組み込まれる）と同様のＥＵインデックスに従う。抗体の技術分野の当業者は、この規則が免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な付番からなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置への標準的な基準を可能にすることを理解するであろう。したがって、ＥＵインデックスによって定義されるような任意の所与の免疫グロブリンの位置は必ずしもその連続配列に対応しない。

一般的及び具体的な科学技術は、米国特許出願公開第２０１５／０３０７６２９号、同第２０１４／０２８８２７５号、及びＷＯ２０１４／１４５８０６に概説されており、それらは全て、特にその中に概説されている技術に関して、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。

背景
チェックポイント遮断免疫療法は効果的であることが証明されているが、それでも多くの患者は応答を達成できない。アゴニスト抗体によるＴＩＬ上のＴ細胞共刺激受容体の関与は、免疫チェックポイントの負のシグナルを克服し得る追加の正のシグナルを提供し得、またチェックポイント遮断と合った有用な治療様式となり得る。しかしながら、それにもかかわらず、共刺激受容体の全身アゴニズムは、全身毒性をもたらす可能性がある。Ｂ７Ｈ３は、がん細胞及び腫瘍血管細胞で広く過剰発現していることが判明しており、腫瘍標的として有用となり得る。したがって、αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、アゴニストＣＤ２８結合ドメインを腫瘍環境に標的化し、それによって全身毒性の可能性を低減することを目的として設計された。

実施例１：ＣＤ２８結合ドメイン
１Ａ：新規ＣＤ２８結合ドメイン
ＴＧＮ１４１２に関連するスーパーアゴニズムを回避するために考えられたアプローチは、ＴＧＮ１４１２よりも低親和性のＣＤ２８への結合及び／又は異なるＣＤ２８エピトープへの結合を有する新規ＣＤ２８結合ドメインを生成することであった。そのような新規ＣＤ２８結合ドメインを生成する１つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがＣＤ２８に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のＣＤ２８結合ドメインを生成した。

１Ａ（ａ）：ファージ由来クローン１Ａ７
このファージライブラリーは、ＬＣＤＲ３に多様性が導入されたヒト生殖系列ＶＬを利用したことに留意されたい。例示的なファージ由来クローン１Ａ７のアミノ酸配列を図１８に示す。

ファージ由来クローンを、それらの結合特性を調査するために二価ｍＡｂとしてフォーマットした。選択したクローンの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含むプラスミドをギブソンアセンブリによって構築し、ＩｇＧ１定常領域のコード配列を含むｐＴＴ５発現ベクターにサブクローニングした（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ６７Ｋ除去バリアントを使用）。発現のためにＤＮＡをＨＥＫ２９３Ｅにトランスフェクトし、得られた二価ｍＡｂをプロテインＡクロマトグラフィーを使用して上清から精製した。

ＣＤ２８に対するファージ由来二価ｍＡｂの親和性は、ＢｉｏＬａｙｅｒＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）ベースの方法であるオクテットを使用してスクリーニングした。オクテットの実験工程は、一般的に以下を含む。試験物質の親和性を決定するための、固定化（バイオセンサ上へのリガンドの捕捉）、会合（分析物を含むウェルにリガンドコーティングしたバイオセンサの浸漬）、及び解離（緩衝液を含むウェルにバイオセンサを戻すこと）。ＸＥＮＰ２８４２８（クローン１Ａ７に基づく）及び追加のファージ由来コンパレータについて得られた見かけの解離定数（ＫＤ_ａｐｐ）を図２４に示す。

ファージ由来二価ｍＡｂの細胞表面ＣＤ２８への結合を調査した。ヒトＰＢＭＣを、示された濃度のＸＥＮＰ２８４２８又は比較ファージ由来ｍＡｂとともに４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞をＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅＦ（ａｂ’）_２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ、ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，Ｐｅｎｎ）で４℃で１時間染色し、フローサイトメトリーで分析した。データ（図２５）は、先行技術の抗ＣＤ２８ｍＡｂＨｕＴＮ２２８（ＸＥＮＰ２７１８１、配列を図２３に示す）よりもはるかに弱い最大結合であるが、ファージ由来ｍＡｂがヒトＰＢＭＣに結合できたことを示している。

より弱いＣＤ２８結合を考慮して、ＶＨ及び／又はＶＬに置換を導入することにより、１Ａ７を更に親和性操作した。そのような親和性操作されたＶＨ及びＶＬ領域の配列は、配列番号５８５～７５６として示されており（例示的な配列が図１９～２０に示されている）、例示的な親和性操作されたＶＨ／ＶＬ対の配列は、図２１に示されている。ＦＲ及びＣＤＲのコンセンサス配列を図４４に示す。ＣＤ２８に対する親和性操作された例示的な１Ａ７ＶＨ／ＶＬ対の親和性を図２２に示す。特に、ｓｃＦｖに関連するＶＨ及びＶＬドメインの配向は、結合親和性に影響する。追加的に、ｓｃＦｖとは対照的に、（共通軽鎖二重特異性ｍＡｂフォーマットで使用するための）Ｆａｂドメインに関連するＶＨ及びＶＬドメインのフォーマットも、結合親和性に影響する。

１Ｂ：追加のＣＤ２８結合ドメイン
本発明のαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂにおいて使用され得る更なるＣＤ２８結合ドメインのＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲ配列は、配列番号１～８８として示される。

実施例２：Ｂ７Ｈ３結合ドメイン
２Ａ：新規Ｂ７Ｈ３結合ドメイン
新規Ｂ７Ｈ３結合ドメインを生成する１つのキャンペーンにおいて、社内のデノボファージライブラリーがＢ７Ｈ３に対してパニングされた。別のキャンペーンでは、ラットハイブリドーマを使用して追加のＢ７Ｈ３結合ドメインを生成した。

２Ａ（ａ）：ファージ由来クローン２Ｅ４Ａ３．１８９
このファージライブラリーは、一般的な軽鎖二重特異性抗体フォーマットでの使用に好適な結合ドメインを発見することを意図していたことに留意されたい。したがって、いかなる多様性もないことを除いて、実施例１Ａ（ａ）と同じヒト生殖系列ＶＬを利用した。例示的なファージ由来クローン２Ｅ４Ａ３．１８９のアミノ酸配列を図２６に示す。このファージ由来クローンは、共通軽鎖二重特異性抗体フォーマットを可能にするのに役立つが、Ｂ７Ｈ３に対する結合親和性が非常に弱く、親和性操作が必要であった。実施例３Ｂに更に記載されるように、２Ｅ４Ａ３．１８９のＶＨは１Ａ７のＶＬと生産的に対合するが、１Ａ７のＶＨは２Ｅ４Ａ３．１８９のＶＬと生産的に対合しない（１つのアミノ酸の違いにもかかわらず）。したがって、親和性を改善するために、２Ｅ４Ａ３．１８９は、配列番号４９７～５８４及び図２７に示される配列のＶＨのみへの置換を用いて操作され、１Ａ７のＶＬと対になった。ＦＲ及びＣＤＲのコンセンサス配列を図７５に示す。

２Ｂ：ハイブリドーマ由来クローン
Ｂ７Ｈ３結合ドメインは、ラット及びウサギのハイブリドーマから得られ、ストリング含有量の最適化を使用してヒト化された（例えば、２０１０年２月２日発行の米国特許第７，６５７，３８０号を参照されたい）。例示的なヒト化ラットハイブリドーマ由来クローン６Ａ１及び３Ｃ４並びにヒト化ウサギハイブリドーマ由来クローン４Ｆ１２及び３８Ｅ２のアミノ酸配列を、それぞれ図２８～３１に示す。ヒト及びカニクイザルＢ７Ｈ３に対するハイブリドーマクローン（及び親和性操作された２Ｅ４Ａ３．１８９ファージクローン）の結合親和性を、１＋１ｂｓＡｂフォーマットに関連して決定し（一価の結合親和性を得るため）、そのデータを図３２に示す。

２Ｃ：追加のＢ７Ｈ３結合ドメイン
本発明のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂにおいて使用され得る更なるＢ７Ｈ３結合ドメインのＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲ配列は、配列番号８９～９６として示される。

実施例３：αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂの操作
Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂのいくつかのフォーマットが考案され、その例示的なフォーマットは、以下及び図３３に概説されている。いずれの場合も、ＣＤ２８二重特異性抗体はＣＤ２８に対して一価であり、潜在的なスーパーアゴニズムを回避するためにＦｃγＲ結合を除去するように設計されたＦｃバリアント（図５に示すものなど）を組み込むことに留意されたい。

３Ａ：Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット
３Ａ（ａ）：１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット
Ｆａｂドメイン及びｓｃＦｖを利用する１つのフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合した第１の抗原結合特異性を有する単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）を含む第１の単量体と、相補的な第２のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を含む第２の単量体と、第２の抗原結合特異性を有するＦａｂドメインが可変重鎖ドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされた軽鎖（ＬＣ）とを含む、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット（図３４Ａに概略的に示される）である。１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ（実施例１及び２に記載の結合ドメインに基づく）の配列を、図３５に示す。

３Ａ（ｂ）：２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット
別のそのようなフォーマットは、第１のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したｓｃＦｖ（第１の抗原結合特異性を有する）に共有結合したＶＨドメインを含む第１の単量体と、相補的な第２のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したＶＨドメインを含む第２の単量体と、第２の抗原結合特異性を有するＦａｂドメインがＶＨドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたＬＣとを含む、２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット（図３４Ｂに概略的に示される）である。２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ（実施例１及び２に記載の結合ドメインに基づく）の配列を、図３６に示す。

３Ｂ：共通軽鎖フォーマット
実施例１及び２で上述したように、ＣＤ２８及びＢ７Ｈ３結合ドメインを発見するためのファージライブラリーは、同じヒト生殖系列ＶＬを利用したが、ＣＤ２８ライブラリーはＬＣＤＲ３に多様性を含んでいた。クローン１Ａ７の可変軽鎖ドメインは、抗Ｂ７Ｈ３クローン２Ｅ４Ａ３．１８９の可変軽鎖ドメインとは、ＬＣＤＲ３のアミノ酸が１つだけ異なることが判明した。したがって、共通軽鎖構築物におけるクローン１Ａ７及びクローン２Ｅ４Ａ３．１８９の使用の可能性が考慮された。しかしながら、驚くべきことに、２Ｅ４Ａ３．１８９のＶＨは１Ａ７のＶＬと生産的に対合するが、１Ａ７のＶＨはＬＣＤＲ３に１つのアミノ酸の違いしかないにもかかわらず、２Ｅ４Ａ３．１８９のＶＬと生産的に対合することが判明した。更に、上記のように、ファージ由来クローン１Ａ７は、親和性最適化の機会を提供する先行技術の抗ＣＤ２８ｍＡｂＨｕＴＮ２２８よりもはるかに弱い結合を示した。したがって、親和性最適化ライブラリーは、まず１Ａ７及び２Ｅ４Ａ３．１８９の重鎖可変ドメインのみの置換に焦点を当てて作成された。例示的な親和性最適化１Ａ７可変ドメインＨ１．１及びＨ１．１４並びに親和性最適化２Ｅ４Ａ３．１８９可変重鎖ドメインＨ１．３及びＨ１．２２のアミノ酸配列を、それぞれ図１９及び２７に示す。

３Ｂ（ａ）：１＋１共通軽鎖フォーマット
１つの共通軽鎖フォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む、１＋１共通軽鎖（ＣＬＣ）フォーマット（図３４Ｃに概略的に示されている）である。ＶＬはＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。１＋１ＣＬＣフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ（本明細書に記載の結合ドメインに基づく）の配列を、図３７に示す。

３Ｂ（ｂ）：２＋１共通軽鎖フォーマット
別の共通軽鎖フォーマットは、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体と、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体と、ＶＬ－ＣＬを含む第３の単量体とを含む、２＋１ＣＬＣフォーマット（図３４Ｄに概略的に示されている）である。ＶＬは第１及び第２のＶＨ１と対になって、第１の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成し、ＶＬはＶＨ２と対になって、第２の抗原結合特異性を有する結合ドメインを形成する。２＋１ＣＬＣフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ（本明細書に記載の結合ドメインに基づく）の配列を、図３８に示す。

３Ｃ：２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット
Ｆａｂドメイン及びｓｃＦｖを利用する更なるフォーマットは、ｓｃＦｖ（第１の抗原結合特異性を有する）に共有結合した第１のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したＶＨドメインを含む第１の単量体と、相補的な第２のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したＶＨドメインを含む第２の単量体と、第２の抗原特異性を有するＦａｂドメインがＶＨドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたＬＣとを含む、２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット（図３４Ｅに概略的に示される）である。２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットにおける例示的なαＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ｂｓＡｂ（本明細書に記載の結合ドメインに基づく）の配列を、図３９に示す。

実施例４：Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの開発
古典的Ｔ細胞／ＡＰＣ相互作用では、ペプチド－ＭＨＣとのＴＣＲ反応性によって提供される第１のシグナル（シグナル１）、及びＡＰＣ上に発現するＣＤ８０／ＣＤ８６によるＣＤ２８架橋によって提供される第２のシグナル（シグナル２）があり、これらが一緒になってＴ細胞を完全に活性化する（図４０Ａを参照されたい）。対照的に、ＣＤ３二重特異性での処理では、第１のシグナルのみが提供される。固形腫瘍の治療などの一部の設定では、ＣＤ２８共刺激により活性化及び増殖を促進するという考えのもと、ＣＤ２８二重特異性によって提供され得るＣＤ２８シグナルを組み込むことが有用な場合がある（図４０Ｂを参照されたい）。代替的に、シグナル１がネオエピトープとの内因性ＴＣＲ反応性によってすでに提供されている場合、シグナル２だけをＣＤ２８二重特異性抗体とともに提供するだけで、抗腫瘍活性を高めるのに十分となり得る。それにもかかわらず、追加されたＣＤ２８シグナルの任意のチェックポイント媒介抑制を軽減するために、ＣＤ２８シグナルをチェックポイント遮断と合わせることが有用となり得る（図４１）。以下のセクションは、上記に関連して本発明のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体を特徴付けている。このセクションでは、治療特性を最適化する目的で、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂを様々なフォーマット及び様々な結合ドメインで操作した。

４Ａ：Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂ活性の調整
腫瘍関連抗原への一価結合を有する１＋１ＣＤ２８二重特異性フォーマットの活性を、腫瘍関連抗原への二価結合を有する２＋１ＣＤ２８二重特異性フォーマットの活性と比較した。５０，０００個のＣＤ３＋Ｔ細胞を、Ａ５４９又はＳＫＯＶ－３がん細胞とともに１０：１のエフェクター：標的比でインキュベートし、指定されたＢ７Ｈ３×ＣＤ２８抗体の用量滴定で処理し、１μｇ／ｍＬプレート結合ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）でプレート結合した。Ｔ細胞播種から１日後、ＭＳＤアッセイ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ）を用いてサイトカインを測定した。図４２に示されるデータは、両方のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体がＴ細胞によるサイトカイン放出を誘導したことを示している。特に、二価Ｂ７Ｈ３結合を有するＸＥＮＰ３４３３９は、一価Ｂ７Ｈ３結合を有するＸＥＮＰ３４７１７より強力にサイトカイン放出を誘導した。より高い親和性結合を有するＢ７Ｈ３結合ドメインを使用する場合、効力の差はそれほど顕著ではないことに留意されたい（データは示さず）。

別の実験では、活性に対するＣＤ２８結合親和性の影響を調査した。ＭＣＦ７がん細胞（「シグナル１」を提供するために抗ＣＤ３ｓｃＦｖを発現するようにトランスフェクトされた）を、１：１のエフェクター：標的比でエフェクター細胞とともに、また示された濃度のＸＥＮＰ３４３３９、ＸＥＮＰ３５６１２、ＸＥＮＰ３５６１１、及びＸＥＮＰ３４３３６とともにインキュベートした。ｂｓＡｂはそれぞれ、２＋１ＣＬＣフォーマットであった。ＸＥＮＰ３４３３９、ＸＥＮＰ３５６１２、及びＸＥＮＰ３５６１１はそれぞれ、２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２＿１Ａ７＿Ｌ１Ｂ７Ｈ３結合ドメインを含み、一方ＸＥＮＰ３４３３６はより親和性の低い２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．３＿１Ａ７＿Ｌ１Ｂ７Ｈ３結合ドメインを含んでいた。ＸＥＮＰ３４３３９、ＸＥＮＰ３５６１２、ＸＥＮＰ３５６１１、及びＸＥＮＰ３４３３６はそれぞれ、７７ｎＭ、２７０ｎＭ、６１０ｎＭ、及び４４０ｎＭの結合親和性を有するＣＤ２８結合ドメインを含んでいた。図４３に示されるデータは、ＣＤ２８に対する親和性の増加がＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの効力を高めることを示している。

別の一連の実験では、追加のがん細胞の存在下でのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂのパネルの活性を調査した。ＣＤ３＋Ｔ細胞を、ＭＤＡ－ＭＢ－２３３１、ＬｎＣＡＰ、又はＤＵ１４５がん細胞と、１：１のＥ：Ｔ比、例示的なＢ７Ｈ３３×ＣＤ３ｂｓＡｂの一定用量、及びＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの用量滴定でインキュベートした。データは、図４３に示される。上記と一致して、ＣＤ２８に対する親和性の増加は、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの効力を高める（ＸＥＮＰ３４３９８＞ＸＥＮＰ３７８０８）。追加的に、データはまた、Ｂ７Ｈ３に対する親和性の増加が、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの効力を高めることを示している（例えば、ＸＥＮＰ３４３９８＞ＸＥＮＰ３７８１０；ＸＥＮＰ３５１５１及びＸＥＮＰ３５１５３＞ＸＥＮＰ３４７３２；並びにＸＥＮＰ３７８０７＞ＸＥＮＰ３７９８２）。追加的に、データは、２＋１ＣＬＣフォーマットが２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットと比較してＩＬ－２分泌の増強においてより強力であることを示している（ＸＥＮＰ３４３９８＞ＸＥＮＰ３７８０７）。

４Ｂ：ＣＤ２８ｂｓＡｂ薬物動態プロファイルの調整
次に、本発明の様々なＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの薬物動態プロファイルを調査した。

第１の研究では、ＸＥＮＰ３４３９８（２＋１ＣＬＣフォーマットを有する）、ＸＥＮＰ３６７８１（２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットを有する）、及びＸＥＮＰ３４３９５（２＋１セントラルｓｃＦｖフォーマットを有する）の薬物動態を、全てカニクイザルで投与レベルの範囲で試験した。図４５に示されるように、２＋１ＣＬＣフォーマットのＸＥＮＰ３４３９８は、２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットよりも有意に優れた薬物動態を有することが判明し、これは一方で試験された各用量レベル２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットより若干良好であった。フォーマットに加えてこれらの分子間に他の違いが見られたが（例えば、Ｂ７Ｈ３結合ドメインの違い）、データは、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂに関連して２＋１ＣＬＣフォーマットが有利となり得ることを示唆している。

追加のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂを、実施例２に記載されるように様々なＢ７Ｈ３結合ドメイン（及び様々なフォーマット）を用いて操作し、薬物動態プロファイルを別のカニクイザル研究で調査した。図４６Ａ～Ｃは、ＸＥＮＰ３４３９８、ＸＥＮＰ３７８０８、及びＸＥＮＰ３７８１０の比較を示し、これらはそれぞれ２＋１ＣＬＣフォーマットのｂｓＡｂである。ＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８１０は、同じＣＤ２８結合ドメイン（１Ａ７＿Ｈ１．１４＿Ｌ１Ｆａｂ）を有するが、異なる親和性のＢ７Ｈ３結合ドメインを有する（同じファージ由来クローンに基づくが、ＸＥＮＰ３４３９８のバリアントは、ＸＥＮＰ３７８１０のバリアントよりも高い親和性のＢ７Ｈ３結合を有していた）。ＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８０８は、同じＢ７Ｈ３結合ドメイン（２Ｅ４Ａ３．１８９＿Ｈ１．２２＿１Ａ７＿Ｌ１）を有するが、異なる親和性のＣＤ２８結合ドメインを有する（１Ａ７に基づくが、ＸＥＮＰ３４３９８のバリアントは、ＸＥＮＰ３７８０８のバリアントよりも密接な結合親和性を有していた）。図４６Ｄ～Ｆは、ＸＥＮＰ３４７３２、ＸＥＮＰ３５１５１、及びＸＥＮＰ３５１５３の比較を示し、これらはそれぞれ１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットのｂｓＡｂであり、同じＣＤ２８結合ドメイン（１Ａ７＿Ｈ１．１４＿Ｌ１ｓｃＦｖ）を有するが異なるＢ７Ｈ３結合ドメイン（それぞれ、６Ａ１、４Ｆ１２、及び３８Ｅ２）を有する。データは、異なるＢ７Ｈ３結合ドメインを有する３つの分子のそれぞれが、それ以外は同一であるにもかかわらず、異なるＰＫプロファイルを有していたことを示している。特に、ＸＥＮＰ３５１５１（実施例２Ｂに記載されるように、６Ａ１及び３８Ｅ２のいずれよりもはるかに密接な結合親和性を有する４Ｆ１２結合ドメインを有する）は、ＸＥＮＰ３４７３２及びＸＥＮＰ３５１５３（それぞれ６Ａ１及び３８Ｅ２結合ドメインを有する）の両方と比較して、より悪いＰＫプロファイルを示した。これは、少なくとも１＋１フォーマットでは、Ｂ７Ｈ３に対する結合親和性が薬物動態プロファイルに影響を与える可能性があることを示唆している。図４６Ｇ～Ｈは、ＸＥＮＰ３７８０７及びＸＥＮＰ３７９８２の比較を示し、これらはそれぞれ２＋１ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットのｂｓＡｂであり、同じＣＤ２８結合ドメイン（１Ａ７＿Ｈ１．１４＿Ｌ１ｓｃＦｖ）を有するが異なるＢ７Ｈ３結合ドメイン（それぞれ２Ｅ４及び３Ｃ４）を有する。

４Ｃ：選択されたＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの概要
図４７は、本発明のいくつかのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂの特性の要約を示す。この要約表に示されているデータの一部は、開発の初期段階の実験データを示しているため、そのようなデータの一部は実施例の他の場所に示されている実験データと同じではない可能性があることに留意されたい。

実施例５：例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体の追加の特徴付け
例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８ｂｓＡｂＸＥＮＰ３４３３９（又はＸｔｅｎｄ類似体ＸＥＮＰ３４３９８）及びＸＥＮＰ３５６１２（又はＸｔｅｎｄ類似体ＸＥＮＰ３７８０８）を更に特徴付けて、本発明のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体の有用な特性を全般的に実証した。

５Ａ：ＸＥＮＰ３４３３９はＣＤ２８シグナル伝達を回復する
ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８リガンドＣＤ８０及びＣＤ８６についてＣＤ２８と競合する免疫チェックポイント受容体であり、したがって、ＣＴＬＡ－４の存在下では（腫瘍環境で見られるように）ＣＤ２８シグナル伝達が抑制される。本発明のＣＤ２８二重特異性抗体によるＣＤ２８シグナル伝達の回復を、混合リンパ球反応において調査した。１００，０００個のＣＤ３＋Ｔ細胞を、高Ｂ７Ｈ３発現を有する１０，０００個の樹状細胞（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）とともにインキュベートし、１μｇ／ｍＬＣＴＬＡ－４－ＦｃをＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体ＸＥＮＰ３４３３９の用量滴定で処理した。Ｔ細胞播種から３日後、ＭＳＤアッセイを使用してサイトカインを測定した。図４８に示されるデータは、ＸＥＮＰ３４３３９が内因性ＣＤ２８シグナル伝達レベルを可能にする（すなわち、ＣＴＬＡ－４－Ｆｃによる遮断が導入されない）ことを示している。

５Ｂ：ＸＥＮＰ３４３３９はＰＤ－１遮断を生産的に組み合わせる
チェックポイント遮断（例えば、ＰＤ－１遮断）は、アゴニスト抗体によるＴＩＬ上のＴ細胞共刺激受容体の関与と合った有用な治療様式であり得るが、これは、固形腫瘍において幅広い実用性を提供し、ＣＤ２８経路のＣＴＬＡ４阻害を回避するためである。したがって、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３４３８９とＸＥＮＰ１６４３２（ニボルマブの可変領域に基づく二価抗ＰＤ－１ｍＡｂ；配列は図１７に示される）との組み合わせを調査した。１０，０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１がん細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＨＬＡ－Ａ２＊０２０１拘束ＣＭＶｐｐ６５（ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ）ペプチド（ＮＬＶペプチド）で一晩処理した。翌日、ＣＭＶ＋ドナーからの１００，０００個のＣＤ３濃縮細胞を、ＸＥＮＰ１６４３２（ＰＤ－１遮断、１０μｇ／ｍｌ）、ＸＥＮＰ３４３３９（２Ｅ４Ａ３．１８９に基づくＢ７Ｈ３結合ドメイン及び１Ａ７に基づくＣＤ２８結合ドメインを有する２＋１ＣＬＣフォーマットのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８、１μｇ／ｍｌ）、ＸＥＮＰ３４３８９（６Ａ１に基づくＢ７Ｈ３結合ドメイン及び１Ａ７に基づくＣＤ２８結合ドメインを有する２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８、１μｇ／ｍｌ）、及びＢ７Ｈ３×ＣＤ２８とＸＥＮＰ１６４３２との組み合わせとともに添加した。処理から１日後、ＭＳＤアッセイを用いてサイトカインについて細胞上清をアッセイした（そのデータは、２人の異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を用いた実験について図５０に示されている）。データは、ＸＥＮＰ３４３３９単独でのインキュベーションがＴ細胞からのサイトカイン放出を誘導し、ＰＤ－１遮断と相乗的に組み合わされてサイトカイン放出を増強することを示している。特に、ＸＥＮＰ３４３８９（２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット）はＰＤ－１遮断と相乗的に結合しなかった。同様の実験において、２０，０００個のＭＣＦ７がん細胞を１００ｎｇ／ｍＬのＮＬＶペプチドの存在下で播種した。２４時間後、ＣＭＶ＋ＰＢＭＣドナーから分離された２００，０００個のＣＤ３＋Ｔ細胞（１０：１のＥ：Ｔ）及び試験物質（ＰＢＳ対照、ＸＥＮＰ３４３３９のみ、ＰＤ－１ｍＡｂＸＥＮＰ１６４３２のみ、又はＸＥＮＰ３４３３９＋ＸＥＮＰ１６４３２）を添加した。６日後、細胞をフローサイトメトリーで評価した。上記と一致して、データは、図５１において、ＰＤ－１遮断により、ＸＥＮＰ３４３３９によるＮＬＶ－四量体陽性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖が促進されることを示している。

ＸＥＮＰ３４３３９で観察された違いがＢ７Ｈ３結合ドメインの違いによるものか、二重特異性抗体フォーマットの違いによるものかを調査するために、ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３４３８９の構成要素結合ドメインを、オクテットを使用して生物物理学的に特徴付けた。Ｂ７Ｈ３抗原に対する２Ｅ４Ａ３．１８９及び６Ａ１の結合親和性を決定する第１の実験では、ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３４３８９を、Ｂ７Ｈ３抗原に一価的に結合するように再フォーマット化した（それぞれＸＥＮＰ３４７１７及びＸＥＮＰ３４７２８として、その配列は図３７及び３６に示されている）。抗マウスＦｃバイオセンサを使用して、Ｂ７Ｈ３のマウスＦｃ融合体（完全な細胞外Ｖ１Ｃ１－Ｖ２Ｖ２ドメイン又は個々のＶ１Ｃ１若しくはＶ２Ｃ２ドメイン）を捕捉し、複数の濃度のＸＥＮＰ３４７１７又はＸＥＮＰ３４７２８に浸漬した。１：１ラングミュア結合モデルを使用した結合データのグローバルフィッティングによって、動力学的分析を実行した。得られた解離定数（ＫＤ）を図５２に示すが、データは、６Ａ１結合ドメインが２Ｅ４Ａ３．１８９よりもＢ７Ｈ３に対してわずかに密接な結合を提供したことを示している。次に、２＋１ＣＬＣフォーマット及び２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットにおけるＣＤ２８抗原に対するＣＤ２８結合ドメインの結合親和性を調査した。抗ＨＩＳ捕捉（ＨＩＳ１Ｋ）バイオセンサを使用して、ＣＤ２８－Ｆｃ－Ｈｉｓタンパク質を捕捉し、複数の濃度のＸＥＮＰ３４３３９又はＸＥＮＰ３４３８９に浸漬した。１：１ラングミュア結合モデル及び定常状態モデルを使用した結合データのグローバルフィッティングによって、動力学的分析を実行した。得られた解離定数（ＫＤ）を図５３に示す。データは、２＋１ＣＬＣフォーマットが、２＋１Ｆａｂ_２－ｓｃＦｃ－ＦｃフォーマットよりもＣＤ２８抗原へのはるかに密接な結合を可能にしたことを示している。まとめると、データは、ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３４３８９の活性で観察された違いが、二重特異性抗体フォーマットの違いによるものであったことを示唆している。

５Ｃ：ＸＥＮＰ３４３３９は、低いエフェクター対標的比で、ＣＤ３二重特異性に対するがん細胞耐性を克服する。
文献では、前立腺がんなどの炎症を起こしていない非炎症性腫瘍（ｃｏｌｄｔｕｍｏｒ）では、エフェクター：標的比が低いことが報告されている。したがって、１：１のエフェクター：標的での細胞死滅を、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイム細胞分析機器（ＡＣＥＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して評価した。２，５００個のＬＮＣａＰがん細胞をまず播種した。４８時間後、エフェクター：標的が１：１の新たに濃縮されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、示された濃度の抗体（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２単独又はＸＥＮＰ３４３３９と組み合わせたＸＥＮＰ３１６０２、ＸＥＮＰ３１６０２の配列を図５４に示す）とともに添加した。Ｔ細胞播種後５日間、細胞死滅を記録した。図５５に示されるデータは、ＸＥＮＰ３１６０２単独では、がん及びＴ細胞単独のインキュベーションと比較して、細胞死滅を増強するのが困難であったことを示しており、１：１の低いエフェクター対標的比ではＣＤ３二重特異性に対する耐性があることを示している。

特に、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８の追加は、ＣＤ３二重特異性に対するがん細胞の耐性を克服する。この実験はＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を利用したが、本発明のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８二重特異性抗体を、図５６に示されるＣＤ３結合ドメインを利用するものを含む他のＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせることで同様の結果を期待することは理にかなっている。

５Ｄ：ＸＥＮＰ３４３３９はＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性と結合して、Ｂ７Ｈ３及びＰＳＭＡの両方の存在下でのみ活性を高める
１０，０００個のがん細胞（ＬＮＣａＰ［ＰＳＭＡ＋Ｂ７Ｈ３＋］、２２ＲＶ１［ＰＳＭＡ＋Ｂ７Ｈ３＋］、ＳＫＯＶ－３［ＰＳＭＡ－Ｂ７Ｈ３＋］、又はＯＶＣＡＲ－８［ＰＳＭＡ－Ｂ７Ｈ３＋］）をまず播種した。翌日、新たに濃縮されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、エフェクター：標的比１：１で１μｇ／ｍｌのＸＥＮＰ３４３３９とともに例示的なＣＤ３二重特異性（αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２）の用量滴定と組み合わせて添加した。Ｔ細胞播種から１日後、ＭＳＤアッセイを使用してサイトカインを測定し、フローサイトメトリーを使用してＣＤ３＋Ｔ細胞を計数したが、そのデータを図５７～６０に示す。データは、ＣＤ３二重特異性ＸＥＮＰ３１６０２単独では、１：１の低いエフェクター：標的比でＴ細胞活性及び増殖がほとんど又はまったく誘導されなかったことを示している。しかしながら、ＰＳＭＡ＋Ｂ７Ｈ３＋であるＬＮＣａＰ及び２２Ｒｖ１の存在下では、αＢ７Ｈ３×αＣＤ２８ＸＥＮＰ３４３３９の添加は、αＰＳＭＡ×αＣＤ３ＸＥＮＰ３１６０２の活性を増強する。しかしながら、特に、ＰＳＭＡ－Ｂ７Ｈ３＋であるＳＫＯＶ－２及びＯＶＣＡＲ－８の存在下では、ＸＥＮＰ３４３３９８の添加は活性を増強しない。ＣＤ２８二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原及びＣＤ３二重特異性抗体に関連する腫瘍抗原の両方に対するこの要件は、複数の腫瘍関連抗原を共発現する可能性が高い腫瘍細胞に対する免疫応答を選択的に標的とするために有用なＡＮＤゲートを形成する。この相乗的ＡＮＤゲートはまた、腫瘍細胞が低密度ではあるが複数の腫瘍関連抗原を発現し得る、より低い標的密度を有する腫瘍に対する活性を可能にし得る。

５Ｅ：ＸＥＮＰ３４３３９又はＸＥＮＰ３５６１２をＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせることで、インビボでの抗腫瘍活性が高まる
インビボ研究において、－２３日目に、ＮＳＧマウスの右脇腹に、２×１０^６個のｐｐ－６５発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を皮内生着させた。－１日目に、マウスに５×１０^６個のヒトＰＢＭＣを腹腔内生着させた。次いでマウスを、０、８、１４、２１、及び２８日目に、第１の例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ１）（０．５ｍｇ／ｋｇ）のみ、第２の例示的なＢ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性抗体（ＣＤ３ｂｓＡｂ２）（０．５ｍｇ／ｋｇ）単独、又はＸＥＮＰ３４３３９（５．０ｍｇ／ｋｇ）とＣＤ３ｂｓＡｂ１若しくはＣＤ３ｂｓＡｂ２との組み合わせで処理した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図６１～６２に示す（初回投与後の日数）。週に１回採血してリンパ球の増殖を調査したが、そのデータを１４日目のＣＤ４５＋細胞について図６３に示す。データは、ＣＤ３二重特異性にＣＤ２８共刺激を追加すると、インビボでの抗腫瘍活性が増加することを示している。特に、ＣＤ２８共刺激は、リンパ球の増殖を最大６００倍増加させることができる。

別のインビボ研究では、ＭＨＣＩ／ＩＩ－ＤＫＯ（ＮＳＧ－ＤＫＯ）であり、したがってＧＶＨＤ及び別のＣＤ３二重特異性（ＰＳＭＡ×ＣＤ３）に耐性のあるＮＳＧマウスを使用した。－７日目に、ＮＳＧ－ＤＫＯマウスにそれぞれ５×１０^６個の２２ＲＶ１腫瘍細胞を接種した。０日目に、マウスに無作為ドナーからの５×１０^６個のヒトＰＢＭＣを生着させた。次いで、マウスを０、７、１４、及び２１日目に低濃度又は高濃度用量の例示的なＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体ＸＥＮＰ３２２２０（図５４に示す配列）単独又はＸＥＮＰ３４３３９と組み合わせて腹腔内処置した。血液及び血清を毎週採取した。ＣＤ３及びＣＤ２８ｂｓＡｂの両方による処理は、ＣＤ３ｂｓＡｂ単独での処理と比較して、Ｔ細胞の増殖（図６４Ａ～Ｃのリンパ球数及び図６４Ｄ～ＥのＫｉ６７増殖マーカーを発現する特異的Ｔ細胞によって示されるように）並びにＴ細胞活性化（図６５におけるＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞でのＣＤ２５及びＰＤ１発現によって示されるように）を増強した。

別の研究において、宿主に対して反応性のない機能的なヒト免疫系を発達させるために、ジャクソン研究所（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から入手したヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を移植したＮＳＧマウスであるＣＤ３４＋Ｈｕ－ＮＳＧを使用した。－１５日目に、マウスに４×１０^６個のｐｐ６５－ＭＤＡ－ＭＢ２３１細胞を皮内接種した。次いで、０、７、及び１４日目に、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ単独、ＸＥＮＰ３５６１２単独、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂとＸＥＮＰ３５６１２との組み合わせ、又はＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂとＸＥＮＰ３４３３９との組み合わせでマウスを腹腔内処理した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図６６～６７に示す（初回投与後の日数）。２３日目に腫瘍を採取して、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を調査したが、そのデータを図６８に示す。データは、ＸＥＮＰ３５６１２がＣＤ３ｂｓＡｂとよく結合して腫瘍成長を抑制することを示している。特に、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ２８とＢ７Ｈ３×ＣＤ３との組み合わせは、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３単独での処理と比較して、初期の時点（すなわち６日目及び９日目）での抗腫瘍活性の大幅な増強を可能にする。追加的に、単剤としてのＸＥＮＰ３５６１２は、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を有意に拡大し、ＸＥＮＰ３５６１２とＢ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂとの組み合わせは、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂ単独と比較して、腫瘍浸潤リンパ球の増殖を有意に増強する。

５Ｆ：ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３７８０８はスーパーアゴニストではない
ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３７８０８の潜在的なスーパーアゴニスト特性を、Ｓｔｅｂｂｉｎｇｓプロトコル（ＳｔｅｂｂｉｎｇｓＲ．ｅｔａｌ．２００７）に従って風乾によって評価した。試験物質の風乾は、ＳｐｅｅｄＶａｃ（商標）で２時間、室温で乾燥することにより行った。ヒトＰＢＭＣを１０μｇの風乾ＸＥＮＰ３４３３９又はＸＥＮＰ３７８０８で２４時間処理し、活性をスーパーアゴニストＴＧＮ１４１２（ＸＥＮＰ２９１５４、その配列を図６９に示す）又はＰＢＳ対照と比較した。風乾ＴＧＮ１４１２は、非刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＩＬ－２、及びＴＮＦサイトカイン分泌を促進した。比較すると、風乾ＸＥＮＰ３４３３９及びＸＥＮＰ３７８０８で処理されたＰＢＭＣのサイトカインレベルは、ＰＢＳの陰性対照と同様のままであった（データは図７０～７１に示される）。

５Ｇ：ＸＥＮＰ３７８０８は、ヒト及びカニクイザルＰＢＭＣの両方のＣＤ３活性を増強する
カニクイザルが毒物学研究の優れたモデルになるかどうかを調査するために、抗ＣＤ３ｓｃＦｖでトランスフェクトしたＨＥＫ細胞の存在下で、１１人のユニークなヒトドナー又は１２人のユニークなカニクイザルドナーからのＰＢＭＣにＸＥＮＰ３７８０８を投与する実験を１０：１のＥ：Ｔ比で行った（「シグナル１」を提供するため）。１日後又は５日後、ＭＳＤアッセイを使用してＩＬ－２放出を測定した。図７２に示される結果（１人のヒトドナー及び１匹のカニクイザルドナーからのデータ）は、カニクイザルが比較的関連性のある種であることを立証している。追加的に、抗ＣＤ３ｓｃＦｖでトランスフェクトされたがＢ７Ｈ３発現がノックアウトされたＨＥＫ細胞もまた試験した。実施例５Ｄのデータと一致して、これらの結果は、ＸＥＮＰ３７８０８がＢ７Ｈ３の存在下でのみヒトＰＢＭＣのＣＤ３活性を増強することを示している。

５Ｈ：ＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８０８の追加のインビトロ比較
第１の一連の実験では、１，２５０個の２２ＲＶ１－ＮＬＲ（約１７０ＫのＢ７Ｈ３抗原のＭＥＳＦ値を有する）又はＤＵ１４５－ＮＬＲがん細胞（約２７０ＫのＢ７Ｈ３抗原を有する）をウェルごとに播種した。４８時間後、示された量のＢ７Ｈ３×ＣＤ３及び１ｕｇ／ｍＬのＢ７Ｈ３×ＣＤ２８とともにＣＤ３＋Ｔ細胞を１：１のエフェクター対標的比で添加し、細胞数をＩｎｃｕｃｙｔｅで記録した。図７３に示される結果は、Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３二重特異性と組み合わせて、ＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８０８の両方が非常に類似したレベルのＲＴＣＣを誘導することを示している。

追加のセットの実験において、ウェル当たり１０，０００個の標的がん細胞（約２０ＫのＢ７Ｈ３表面密度を有するＯＶＣＡＲ８、約１７０ＫのＢ７Ｈ３抗原密度を有する２２ＲＶ１－ＮＬＲ、又は約２７０ＫのＢ７Ｈ３抗原密度を有するＤＵ１４５－ＮＬＲ）を播種した。翌日、１：１のエフェクター対標的比のＴ細胞を、１μｇ／ｍＬの例示的Ｂ７Ｈ３×ＣＤ３ｂｓＡｂの存在下で、示された量のＢ７Ｈ３×ＣＤ２８ｍＡｂとともに添加した。播種の２４時間後に、ＩＬ－２を評価した。図７４に示される結果は、様々な密度の細胞株におけるＸＥＮＰ３４３９８及びＸＥＮＰ３７８０８のＩＬ－２誘導によって測定される、非常に類似したレベルの機能を示している。

まとめると、これらのデータは、ＸＥＮＰ３７８０８及びＸＥＮＰ３４３９８の両方が非常に類似した活性を示し、同等に有効であることを示している。しかしながら、臨床現場では、それぞれに独自の利点がある可能性がある。

Claims

ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１がそれぞれ第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含み、
前記共通軽鎖は、前記第１の単量体中の各ＶＨ１－ＣＨ１及び前記第２の単量体中のＶＨ２－ＣＨ１と別々に対を形成し、
前記ＶＨ１及び前記ＶＬは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、前記ＶＨ２及び前記ＶＬは、一緒に第２のＡＢＤを形成し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの他方はヒトＢ７Ｈ３に結合する、ヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合し、前記第２のＡＢＤがヒトＢ７Ｈ３に結合する、請求項Ａ１に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがヒトＢ７Ｈ３に結合し、前記第２のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合する、請求項Ａ１に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ１ドメインのアミノ酸配列が、配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択され、前記ＶＬドメインのアミノ酸配列が、配列番号８７４である、請求項３に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ２ドメインのアミノ酸配列が、配列番号５８５、配列番号８７０、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインがそれぞれバリアントＦｃドメインである、請求項１～５のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項６に記載のテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、請求項７に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、それぞれ１つ以上の除去バリアントを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記１つ以上の除去バリアントが、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項９に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１又は第２の単量体のうちの１つが、ｐＩバリアントを更に含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項１１に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第１のＦｃドメインが、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項１～１２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のバリアントＦｃドメインが、それぞれアミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体が、配列番号１０１９のアミノ酸配列を含み、前記第１の単量体が、配列番号１０２０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号１０２１のアミノ酸配列を有する、請求項１～１４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ＶＨ１が第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２が第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖であって、ＶＬが可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが定常軽鎖ドメインである、共通軽鎖と、を含み、
前記第１のＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインは、一緒に第１のＡＢＤを形成し、前記第２のＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインは、一緒に第２のＡＢＤを形成し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの一方は、ヒトＣＤ２８に結合し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの他方は、ヒトＢ７Ｈ３に結合する、ヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ１ドメインのアミノ酸配列が、配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択され、前記ＶＬドメインのアミノ酸配列が、配列番号８７４である、請求項１５に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ２ドメインのアミノ酸配列が、配列番号５８５、配列番号８７０、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択される、請求項１６又は１７に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインが、それぞれバリアントＦｃドメインである、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項１９に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、請求項２０に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、それぞれ１つ以上の除去バリアントを含む、請求項１６～２１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記１つ以上の除去バリアントが、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項２２に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１又は第２の単量体のうちの１つが、ｐＩバリアントを更に含む、請求項１６～２３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項２４に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第２のＦｃドメインが、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項１６～２５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のバリアントＦｃドメインが、それぞれアミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む、請求項１６～２８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－第１のドメインリンカー－ｓｃＦｖ－第２のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、第１の単量体であって、
ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖが、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記ＶＨ１ドメイン及び前記第１のＶＬ１ドメインのそれぞれは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、前記ｓｃＦｖは第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、前記ＶＨ２及び前記ＶＬ２は、第２のＡＢＤを形成し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの他方は腫瘍標的抗原（ＴＴＡ）に結合する、ヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合し、前記第２のＡＢＤがＴＴＡに結合する、請求項２８に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがＴＴＡに結合し、前記第２のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合する、請求項２８に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ２のアミノ酸配列が、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、前記ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される、請求項２８～３２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＴＴＡが、ヒトＢ７Ｈ３である、請求項２８～３３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインが、それぞれバリアントＦｃドメインである、請求項２８～３４のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項３５に記載のテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、請求項３６に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、それぞれ１つ以上の除去バリアントを含む、請求項２８～３７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記１つ以上の除去バリアントが、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項３８に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１又は第２の単量体のうちの１つが、ｐＩバリアントを更に含む、請求項２８～３９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項４０に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第１のＦｃドメインが、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項２８～４１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のバリアントＦｃドメインが、それぞれアミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む、請求項２８～４２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）第１の単量体であって、
ｉ）第１の可変重鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー、及び第１の可変軽鎖ドメインを含むｓｃＦｖと、
ｉｉ）第１のＦｃドメインと、を含み、前記ｓｃＦｖが、ドメインリンカーを使用して前記第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨが第１の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３が第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記ＶＨ１及び前記ＶＬ１は、一緒に第１のＡＢＤを形成し、前記ｓｃＦｖは第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、前記ＶＨ２及びＶＬ２は、一緒に第２のＡＢＤを形成し、前記第１のＡＢＤ及び第２のＡＢＤのうちの一方はＣＤ２８に結合し、前記第１のＡＢＤ及び第２のＡＢＤのうちの他方はＴＴＡに結合する、ヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む、請求項４４に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む、請求項４４に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２のＡＢＤが、ヒトＣＤ２８に結合し、前記ＶＨ２のアミノ酸配列が、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、前記ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される、請求項４４～４６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインが、それぞれバリアントＦｃドメインである、請求項４４～４７のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項４８に記載のテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、請求項４９に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、それぞれ１つ以上の除去バリアントを含む、請求項４４～５０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記１つ以上の除去バリアントが、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項５１に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１又は第２の単量体のうちの１つが、ｐＩバリアントを更に含む、請求項４４～５２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項５３に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第１のＦｃドメインが、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項４４～５４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のバリアントＦｃドメインが、それぞれアミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む、請求項４４～５５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ｓｃＦｖを含む第１の単量体であって、
ＶＨ１が、第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖが、抗ＣＤ２８ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３が、第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３が、第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ１－ＣＬを含む軽鎖であって、ＶＬ１が可変軽鎖ドメインであり、ＣＬが定常軽鎖ドメインである、軽鎖と、を含み、
前記ＶＨ１ドメイン及び前記第１のＶＬ１ドメインのそれぞれは、一緒に第１の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成し、前記ｓｃＦｖは第２のＶＨドメイン（ＶＨ２）、ｓｃＦｖリンカー、及び第２のＶＬドメイン（ＶＬ２）を含み、前記ＶＨ２及び前記ＶＬ２は、一緒に第２のＡＢＤを形成し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの一方はヒトＣＤ２８に結合し、前記第１及び第２のＡＢＤのうちの他方は腫瘍標的抗原（ＴＴＡ）に結合する、ヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合し、前記第２のＡＢＤがＴＴＡに結合する、請求項５７に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＡＢＤがＴＴＡに結合し、前記第２のＡＢＤがヒトＣＤ２８に結合する、請求項５７に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２を含む、請求項５７～５９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２を含む、請求項５７～５９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＶＨ２のアミノ酸配列が、配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、及び配列番号６５１からなる群から選択され、前記ＶＬ２のアミノ酸配列は、配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号ＮＯ：６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択される、請求項５７～６１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記ＴＴＡが、ヒトＢ７Ｈ３である、請求項５７～６２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１のＦｃドメイン及び第２のＦｃドメインが、それぞれバリアントＦｃドメインである、請求項５７～６３のいずれか一項に記載のヘテロ二量化抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、以下のヘテロ二量体化バリアント：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ；Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ；及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖから選択されるヘテロ二量体スキューバリアントのセットを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項６４に記載のテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、ヘテロ二量化スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、請求項６５に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のＦｃドメインが、それぞれ１つ以上の除去バリアントを含む、請求項５７～６６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記１つ以上の除去バリアントが、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項６７に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１又は第２の単量体のうちの１つが、ｐＩバリアントを更に含む、請求項５７～６８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項６９に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第１のＦｃドメインが、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けが、ＥＵ番号付けに従う、請求項５７～７０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
前記第１及び第２のバリアントＦｃドメインが、それぞれアミノ酸バリアント４２８Ｌ／４３４Ｓを含む、請求項５７～７１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
ａ）請求項１～７２のいずれか一項に記載の第１の単量体をコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項１～７２のいずれか一項に記載の第２の単量体をコードする第２の核酸と、
ｃ）請求項１～７２のいずれか一項に記載の軽鎖をコードするａ第３の核酸とをそれぞれ含む、核酸組成物。
ａ）請求項７３に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項７３に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）請求項７３に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターとをそれぞれ含む、発現ベクター組成物。
請求項７４に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
請求項１～７２のいずれか一項に記載の二量体抗体を作製する方法であって、前記二量体抗体が発現される条件下で請求項７５に記載の宿主細胞を培養することと、前記二量体抗体を回収することと、を含む、方法。
がんの治療を必要とする患者のがんを治療する方法であって、請求項１～７２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体を前記患者に投与することを含む、方法。
がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、
ａ）前記ＴＴＡがヒトＢ７Ｈ３である、請求項１～７２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体と、
ｂ）ＣＤ３及びＢ７Ｈ３に結合する二重特異性抗体とを前記患者に投与することを含む、方法。
がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、
ａ）前記ＴＴＡがヒトＢ７Ｈ３である、請求項１～７２のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体と、
ｂ）抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体からなる群から選択されるチェックポイント阻害剤とを前記患者に投与することを含む、方法。
ａ）配列番号８７０、配列番号５８５、配列番号５８６、配列番号５８７、配列番号５８８、配列番号５８９、配列番号５９０、配列番号５９１、配列番号５９２、配列番号５９３、配列番号５９４、配列番号５９５、配列番号５９６、配列番号５９７、配列番号５９８、配列番号５９９、配列番号６００、配列番号６０１、配列番号６０２、配列番号６０３、配列番号６０４、配列番号６０５、配列番号６０６、配列番号６０７、配列番号６０８、配列番号６０９、配列番号６１０、配列番号６１１、配列番号６１２、配列番号６１３、配列番号６１４、配列番号６１５、配列番号６１６、配列番号６１７、配列番号６１８、配列番号６１９、配列番号６２０、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号１１９８、配列番号１１９９、配列番号６２５、配列番号６２６、配列番号６２７、配列番号６２８、配列番号６２９、配列番号６３０、配列番号６３１、配列番号６３２、配列番号６３３、配列番号６３４、配列番号６３５、配列番号６３６、配列番号６３７、配列番号６３８、配列番号６３９、配列番号６４０、配列番号６４１、配列番号６４２、配列番号６４３、配列番号６４４、配列番号６４５、配列番号６４６、配列番号６４７、配列番号６４８、配列番号６４９、配列番号６５０、配列番号６５１、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６７０、配列番号６７１及び配列番号６７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号８７４、配列番号６５２、配列番号６５３、配列番号６５４、配列番号６５５、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、配列番号６６３、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６６８、配列番号６６９、配列番号６７０、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、配列番号６７６、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、配列番号６８０、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、配列番号６８４、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、配列番号６８８、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、配列番号６９４、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、配列番号６９８、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、配列番号７０２、配列番号７０３、配列番号７０４、配列番号７０５、配列番号７０６、配列番号７０７、配列番号７０８、配列番号７０９、配列番号７１０、配列番号７１１、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、配列番号７１７、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、配列番号７２３、配列番号７２４、配列番号７２５、配列番号７２６、配列番号７２７、配列番号７２８、配列番号７２９、配列番号７３０、配列番号７３１、配列番号７３２、配列番号７３３、配列番号７３４、配列番号７３５、配列番号７３６、配列番号７３７、配列番号７３８、配列番号７３９、配列番号７４０、配列番号７４１、配列番号７４２、配列番号７４３、配列番号７４４、配列番号７４５、配列番号７４６、配列番号７４７、配列番号７４８、配列番号７４９、配列番号７５０、配列番号７５１、配列番号７５２、配列番号７５３、配列番号７５４、配列番号７５５、配列番号１２００及び配列番号７５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む、抗ＣＤ２８ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む重鎖と、
ＶＬ－ＣＬを含む軽鎖とを含む抗体である、請求項８０に記載の組成物。
ａ）配列番号５１８、配列番号９２８、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１、配列番号５０２、配列番号５０３、配列番号５０４、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、配列番号５１１、配列番号５１２、配列番号５１３、配列番号５１４、配列番号５１５、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１９、配列番号５２０、配列番号５２１、配列番号５２２、配列番号５２３、配列番号５２４、配列番号５２５、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、配列番号５３１、配列番号５３２、配列番号５３３、配列番号５３４、配列番号５３５、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、配列番号５４１、配列番号５４２、配列番号５４３、配列番号５４４、配列番号５４５、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、配列番号５５１、配列番号５５２、配列番号５５３、配列番号５５４、配列番号５５５、配列番号５５６、配列番号５５７、配列番号５５８、配列番号５５９、配列番号５６０、配列番号５６１、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、配列番号５７１、配列番号５７２、配列番号５７３、配列番号５７４、配列番号５７５、配列番号５７６、配列番号５７７、配列番号５７８、配列番号５７９、配列番号５８０、配列番号５８１、配列番号５８２、配列番号５８３、及び配列番号５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号８７４及び配列番号９３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）配列番号９４６のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号９５０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）配列番号９５６のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号９６０のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）配列番号９６４のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号９６８のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）配列番号９７２のアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメインと、
ｂ）配列番号９７６のアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメインとを含む抗Ｂ７Ｈ３ＡＢＤを含む、組成物。
ａ）－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３に結合したＶＨを含む重鎖と、
ｂ）－ＣＬに結合したＶＬを含む軽鎖とを含む抗体である、請求項８２～８６のいずれか一項に記載の組成物。
ａ）請求項８０又は８２に記載のＶＨをコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項８０又は８２に記載のＶＬをコードする第２の核酸とをそれぞれ含む、核酸組成物。
（ａ）請求項８８に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
（ｂ）請求項８８に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターとを含む、発現ベクター組成物。
請求項８８に記載の核酸組成物、又は請求項８９に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
組成物を作製する方法であって、前記組成物が発現する条件下で請求項９０に記載の宿主細胞を培養することと、前記組成物を回収することとを含む、方法。