JP2002533389A - ｍＲＮＡ安定性に影響する化合物およびそのための使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 １種または２種以上のｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの分解を誘導する化合物が、医薬として用いるために、例えば一般的に１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含み、延長されたかまたは不適切な発現において代表的に所望でない効果、例えば癌細胞成長または所望でない炎症応答を生じるｍＲＮＡの増大されたかまたは延長された安定性と関連する病因を有する疾患および医学的症状の予防または治療において用いるために提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、生物学的に活性な化合物並びに疾患の治療および予防におけるこの
使用に関する。特に、本発明は、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含
むｍＲＮＡの安定性に影響する化合物に関する。

【０００２】 近年、ＲＮＡ半減期の調節が、遺伝子発現の厳密な制御において臨界的に重要
な役割を有すること、およびｍＲＮＡ分解が、高度に制御されたプロセスである
ことが、ますます明らかになっている。ＲＮＡ不安定性は、転写速度の変化に対
するｍＲＮＡ転写レベルの迅速な上方調節または下方調節を可能にする。多くの
臨界的に重要な細胞因子、例えば転写因子、例えばｃ−ｍｙｃまたはホスト免疫
応答に関連する遺伝子産物、例えばサイトカインは、これらの通常の機能を遂行
するために、一時的にのみ存在することが求められる。これらの因子をコードす
るｍＲＮＡの一時的な安定化は、これらのメッセージの蓄積および翻訳が、所要
に応じて所望の細胞因子を発現するのを可能にし、一方非安定化正常条件の下で
は、これらのｍＲＮＡの迅速な変化速度は、細胞因子の発現を効率的に制限し、
「スイッチオフ」する。しかし、ｍＲＮＡ安定性の異常な調節は、所望でない細
胞変形、例えば腫瘍変形に至る細胞因子の所望でない確立または不適切および組
織損傷炎症応答に至り得る。

【０００３】 ｍＲＮＡ安定性を制御する機構が、理解からは程遠い一方、配列領域は、多く
のｍＲＮＡにおいて同定されており、これは、これらを含むｍＲＮＡに不安定性
を付与すると考えられる。これらの配列領域を、本明細書中では「ｍＲＮＡ不安
定配列(instability sequence)」と呼ぶ。例えば、代表的なｍＲＮＡ不安定領域
は、ＡＲＥ（ＡＵに富む要素）であり、これは、多くの前初期遺伝子および炎症
サイトカイン、例えばＩＬ−１βおよびＴＮＦαをコードする遺伝子を含むある
遺伝子の３’ＵＴＲ（３’非翻訳領域）において見出される。

【０００４】 Kastelic et al. (CYTOKINE, Vol. 8, No. 10（１０月）, 1996: pp 751-761)
は、ラジシコール(radicicol)類似体Ａが、ＩＦＮ−γおよびＬＰＳにより活性
化されたＴＨＰ−１細胞に加えられた場合、ＩＬ−１βの分泌を阻害したのみな
らず、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α ｍＲＮＡの５〜８時間における
検出不能なレベルへの極めて迅速な分解を誘導したという発見およびこのｍＲＮ
Ａ分解は、これらのサイトカインをコードするＲＮＡの３’非翻訳領域に存在す
るＡＵに富む領域により媒介されると考えられるという発見を報告した。

【０００５】 以前、新規なラジシコール類似体（ラジシコール類似体Ａを含む）、この製造
方法およびこの薬理学的使用が、ラジシコール、Ｏ−メチルラジシコールおよび
関連化合物ゼアレレノン(zearelenone)およびゼアレレノンのある類似体を含む
既知の化合物と共に、欧州特許出願ＥＰ ０６０６０４４ Ａに記載された。ラ
ジシコール類似体および既知の化合物は、ＥＰ ０６０６０４４ Ａにおいて、
過剰のサイトカイン放出、特にＩＬ−１β放出に関連するかまたはこれを含む病
因を有する疾患、例えば慢性関節リウマチ、変形性関節症、細菌性ショック、乾
癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病および喘息の治療に有用であ
ると記載されている。

【０００６】 本発明者等はここで、ｍＲＮＡの分解を誘導するラジシコール類似体Ａに加え
て他の化合物があることおよびこのような化合物は、このようなｍＲＮＡの増大
したかまたは延長された安定性および発現を伴う疾患および医学的症状を治療す
るために用いることができることを見出した。さらに、本発明者等は、ラジシコ
ール類似体Ａを、一般的に、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α ｍＲＮＡ
に加えて、ｍＲＮＡの分解を誘導するために用いることができることを見出した
。

【０００７】 従って、本発明は、医薬として用いるための、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ
不安定配列を含むｍＲＮＡの分解を誘導するラジシコール類似体Ａではない化合
物を提供する。

【０００８】 他の観点において、本発明は、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有
するｍＲＮＡの増大した安定性に関連する病因を有する疾患または医学的症状を
予防または治療する方法において、該疾患または医学的症状が過剰のサイトカイ
ン放出、特にＩＬ−１β放出に関連する病因を有するもの、例えば慢性関節リウ
マチ、変形性関節症、細菌性ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患
、クローン病および喘息であるとき、ヒトまたは動物患者に、ｍＲＮＡの分解を
誘導する有効量のラジシコール類似体Ａではない化合物を投与することを含む、
前記方法を提供する。

【０００９】 尚他の観点において、本発明は、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を
有するｍＲＮＡの分解を誘導するラジシコール類似体Ａではない化合物の使用に
おいて、疾患または医学的症状が過剰のサイトカイン放出に関連する病因を有す
るもの、特にＩＬ−１β放出、例えば慢性関節リウマチ、変形性関節症、細菌性
ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病および喘息であ
るとき、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの増大した
安定性に関連する病因を有する疾患または医学的症状の治療または予防における
使用のための医薬の製造のための、前記化合物の使用を提供する。

【００１０】 本発明はまた、患者中のｍＲＮＡの分解を誘導する方法において、ｍＲＮＡ分
解を患者に対して誘導するラジシコール類似体Ａではない化合物の有効量を投与
し、ここでｍＲＮＡが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αをコードするｍ
ＲＮＡであるときに、ｍＲＮＡがｍＲＮＡ不安定配列を含む、前記方法を提供す
る。 さらに、本発明は、ｍＲＮＡが、ＩＬ−１β、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αをコ
ードするｍＲＮＡであるときに、患者のｍＲＮＡ分解配列を含むｍＲＮＡの分解
の誘導における使用のための、医薬の製造においてｍＲＮＡ分解を誘導するラジ
シコール類似体Ａではない化合物の使用を提供する。

【００１１】 本発明はさらに、癌および／または悪性疾患の治療のための医薬の製造のため
のラジシコール類似体の使用を提供する。 本発明はまた、癌および／または悪性疾患の予防または治療方法において、患
者に有効量のラジシコール類似体を投与することを含む、前記方法を提供する。 ｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの分解を誘導するすべての化合物は、本発
明において用いるのに潜在的に関連する。ｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの
分解を誘導する化合物は、以下で、本発明において用いる化合物と呼ぶ。このよ
うな化合物は、ラジシコール類似体、特に、例えばＥＰ ０６０６０４４に記載
された、ラジシコール類似体Ａまたはラジシコールを含む。

【００１２】 本発明者等の係属中の英国特許出願第９８２８７０９．７号には、ｍＲＮＡを
不安定化する化合物の同定のためのレポーター遺伝子アッセイが記載されている
。このアッセイにおいて、試験化合物は、化合物の不存在において検出可能なシ
グナルを有するタンパク質を発現することができ、ここでタンパク質をコードし
、発現系から転写されるｍＲＮＡが少なくとも１つのｍＲＮＡ不安定配列のコピ
ーを含むＤＮＡ発現系と接触する。検出可能なシグナルは、試験化合物の存在下
で測定され、得られた結果は、対照と比較される。ｍＲＮＡを不安定化する化合
物は、レポーター遺伝子アッセイにおいて得られた検出可能なシグナルの規模の
低下に至る、検出可能なシグナルをコードするｍＲＮＡの分解を誘導する。

【００１３】 本発明において用いるのに好ましい化合物は、前に記載し、前述の英国特許出
願第９８２８７０９．７号に一層詳細に記載し、以下の例に記載するレポーター
遺伝子アッセイを用いてｍＲＮＡ不安定性の誘導物質として同定することができ
る化合物を含む。本発明において用いるための化合物の特定の例は、ラジシコー
ルおよびラジシコール類似体を含む。

【００１４】 式Ｉ

【化２】 で表される化合物であるラジシコールは、長年、天然の化合物、例えば微生物モ
ノスポリウム・ボノルデン(Monosporium bonorden)の代謝物として知られており
、最初は抗生特性を有するものとして記載された(Delmotte, Nature 171, 344 (
1953))。

【００１５】 本発明において用いるための化合物を含むラジシコール類似体の特定の群は、
式ＩＩ

【化３】 式中、 Ｒ_１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低
級アルキル−ＣＯＯ−であり； Ｒ_２は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−Ｃ
ＯＯ−であり； Ｒ_３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル
−ＣＯＯ−であり； −ａ−ｂ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−またはシスまたはトランス−ＣＲ_７＝Ｃ
Ｒ_８−であり、ここでＲ_７およびＲ_８は、同一であるかまたは異なっており、Ｈ
、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−ＣＯＯ−で
あり、または −ａ−ｂ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−であり、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｏと共に
、エポキシド架橋を形成し； ｃは、＞ＣＨ−ＯＨ−、＞Ｃ＝Ｏまたは＞ＣＨ_２であり； −ｄ−ｅ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−またはシスまたはトランス−ＣＲ_７＝
ＣＲ_８−であり、ここでＲ_７およびＲ_８は、同一であるかまたは異なっており、
Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−ＣＯＯ−
であり、 −ｆ−ｇ−は、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−、シスまたはトランス−ＣＨ＝ＣＨ−また
は−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−である、 で表される化合物およびこの薬学的に許容し得る塩およびこの生理学的に加水分
解可能なおよび生理学的に許容可能なエステルである。

【００１６】 式ＩＩにおいてアステアリスク（^＊）でマークした炭素原子は、不斉炭素原子
である。ａ、ｂ、ｃまたはｄにおける炭素原子はまた、これらの位置において存
在する特定の置換基に依存して不斉炭素原子であってもよい。これらの位置にお
ける不斉炭素原子は、ＲまたはＳ形態を有していてもよいか、またはラジシコー
ル類似体は、この光学異性体の任意の混合物を含んでいてもよい。好ましい異性
体は、以下に特定的に記載するものを含む。 本明細書において用いるハロゲンまたはハロは、他に指示しなければＦ、Ｃｌ
、ＢｒまたはＩ、好ましくはＣｌを意味する。

【００１７】 式ＩＩの化合物の特定の従属群は、−ａ−ｂ−または−ｄ−ｅ−の一方が−Ｃ
ＨＲ_７−ＣＨＲ_８−であり、他方がシスまたはトランス−ＣＲ_７＝ＣＲ_８−であ
るものであり、ここで、Ｒ_７およびＲ_８は、同一であるかまたは異なっており、
Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−ＣＯＯ−
であり、ｃは、＞ＣＨ−ＯＨ−または＞Ｃ＝Ｏであり、ここで、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ _３ および−ｆ−ｇ−は、前に定義した通りである。 式ＩＩのラジシコール類似体の種々の置換基および部分についての特定の意味
は、以下の通りである：

【００１８】 好ましくは、Ｒ_１およびＲ_３は、同一であるかまたは異なっており、Ｈ、−Ｏ
Ｈ、ＭｅＯ−またはＭｅ−ＣＯＯ−である。好ましくは、Ｒ_２は、−ＯＨ、Ｍｅ
Ｏ−またはＭｅＣＯＯ−である。最も好ましくは、Ｒ_１は、ＨまたはＭｅＯであ
り；Ｒ_２は、ＭｅＯであり、Ｒ_３は、ＯＨまたはＭｅＯである。 好ましくは、−ａ−ｂ−は、シスまたはトランス−ＣＲ_７’＝ＣＲ_８’−であ
り、ここでＲ_７’およびＲ_８’は、同一であるかまたは異なっており、Ｈ、ＯＨ
、ＭｅＯ−またはＭｅ−ＣＯＯ−である。一層好ましくは、−ａ−ｂ−は、シス
または特にトランス−ＣＨ＝ＣＨ−である。

【００１９】 好ましくは、−ｄ−ｅ−は、−ＣＨＲ_７’−ＣＨＲ_８’−であり、ここで、Ｒ _７ ’およびＲ_８’は、前に定義した通りである。一層好ましくは、−ｄ−ｅ−は
、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−または特に−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−であり、ここで、ＯＨ
基は、遊離または保護された形態であってもよい。 最も好ましくは、−ｆ−ｇ−は、トランス−ＣＨ＝ＣＨ−である。 好ましくは、本発明の化合物の不斉炭素原子はすべて、Ｓ形態を有する。

【００２０】 本発明において用いるための式ＩＩの特定のラジシコール類似体は、式ＩＩ（
ここで、Ｒ_１は、Ｈまたはメトキシであり、Ｒ_２は、メトキシであり、Ｒ_３は、
ＯＨであり、−ａ−ｂ−は、シスまたはトランス−ＣＨ＝ＣＨ−であり、ｃはＣ
ＨＯＨまたはＣ＝Ｏであり、−ｄ−ｅ−は、−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−であり、−
ｆ−ｇ−は、−ＣＨ＝ＣＨ−である）の、遊離形態または塩基性塩形態または生
理学的に加水分解可能および許容し得るエステルの形態である、類似体である。

【００２１】 本発明において用いるための特定のラジシコール類似体は、ラジシコールおよ
びＯ−低級アルキルラジシコール、即ち式Ｉ’

【化４】 式中、ＲはＨまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル、例えばメチルである、 で表される化合物、およびこの薬学的に許容し得る塩およびこの生理学的に加水
分解可能および許容し得るエステルを含む。

【００２２】 本明細書中での記載の目的で、ラジシコール類似体は、特徴的なラジシコール
の二環式環構造、即ち式Ｉ”

【化５】 式中、Ｘ基は個別にＨまたは置換基であり、１４員環ラクラム環はさらに、１つ
または２つ以上、例えば２つのエチレン系不飽和結合を含んでいてもよく、ラク
タム環のＸ置換基の少なくとも１つは、オキシ（＝Ｏ）または（隣接するＸ置換
基と共に）エポキシド置換基を含んでいてもよい、 で表される構造を有する化合物およびこの薬学的に許容し得る塩および生理学的
に加水分解可能および許容し得るエステルである。

【００２３】 −ＯＨ置換基を含むラジシコール類似体はまた、薬学的に許容し得るエステル
の形態で存在することができ、この使用は、本発明の範囲内に包含される。薬学
的に許容し得るエステルは、好ましくは、プロドラッグエステル誘導体であり、
これは、ソルボリシスにより、または生理学的条件下で遊離ラジシコール類似体
に転換可能である。好ましい薬学的に許容し得るプロドラッグエステルは、カル
ボン酸、炭酸モノエステルまたはカルバミン酸から誘導されたもの、有利には随
意に置換された低級アルカン酸またはアリールカルボン酸から誘導されたエステ
ルである。

【００２４】 ラジシコール類似体はまた、薬学的に許容し得る塩の形態で存在することがで
き、この使用は、本発明の範囲内に包含される。薬学的に許容し得る塩は、従来
の酸、例えば鉱酸、例えば塩酸、硫酸またはリン酸、あるいは有機酸、例えば脂
肪族または芳香族カルボン酸またはスルホン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コ
ハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、
マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、パモイック(pamoi
c)酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、スルフ
ァニル酸またはシクロヘキシルスルファミン酸；またアミノ酸、例えばアルギニ
ンおよびリシンとの酸付加塩を表す。酸性基、例えば酸性−ＯＨ基を有する化合
物、薬学的に許容し得る塩はまた、金属またはアンモニウム塩、例えばアルカリ
金属またはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウムま
たはカルシウム塩を表す。

【００２５】 ＥＰ ０６０６０４４ Ａには、以下でラジシコール類似体Ａと呼ぶ式ＩＩＩ

【化６】 で表されるラジシコール類似体の単離および特徴づけが記載されており、これは
第１に、１９９１年１１月６日にARS Patent Culture Collection, US Dept. of
Agriculture, Northern Regional Research Centre, Peoria, Illinois, USAに
ブダペスト条約の規定の下に寄託ＮＲＲＬ １８９１９として寄託されたピクニ
ジア(pycnidia)不完全菌類（Ｆ／８７−２５０９０４）の菌株から単離された天
然の生成物として同定された。

【００２６】 ラジシコール類似体Ａは、本発明において用いるのに特に好ましいラジシコー
ル類似体である。ラジシコール類似体Ａはまた、本発明において用いるための他
のラジシコール類似体の合成のための有用な出発物質として作用する。あるいは
また、ＥＰ ０６０６０４４ Ａには、容易に入手できる出発物質から出発する
ラジシコール誘導体の新規な合成が記載されている。

【００２７】 新規なラジシコール類似体、この製造方法およびこの薬学的使用は、ラジシコー
ル、Ｏ−メチルラジシコールおよび関連化合物ゼアレレノンおよびゼアレレノン
のある類似体を含む既知の化合物と共に、欧州特許出願ＥＰ ０６０６０４４
Ａに記載されている。ラジシコール類似体および既知の化合物は、ＥＰ ０６０
６０４４ Ａにおいて、過剰のサイトカイン放出、特にＩＬ−１β放出に関連す
るかまたはこれを含む病因を有する疾患、例えば慢性関節リウマチ、変形性関節
症、細菌性ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病およ
び喘息の治療に有用であると記載されている。

【００２８】 ラジシコール類似体Ａの菌株Ｆ／８７−２５０９０４からの単離、ラジシコー
ル類似体Ａからの半合成ラジシコール類似体の合成およびラジシコール類似体の
新規な合成に関連するＥＰ ０６０６０４４の開示を、特定的に本出願の教示中
に参照として加入する。 驚くことに、ここで、ラジシコール、ラジシコール類似体、ゼアレレノンおよ
びゼアレレノン類似体（以下で集合的にラジシコール類似体と呼ぶ）、例えばＥ
Ｐ ０６０６０４４ Ａに記載されているものは、ある形態の癌および悪性疾患
の治療に有用であることが見出された。

【００２９】 本発明において用いるのに特に好ましいラジシコール類似体は、式ＩＩ（式中
、−ａ−ｂ−はトランス−ＣＨ＝ＣＨ−である）で表される化合物、例えば式Ｉ
Ｖ、ＶおよびＶＩ

【化７】 で表される化合物を含む。

【００３０】 本発明において用いるのに特に好ましいラジシコール類似体は、式ＩＩ（式中
、−ａ−ｂ−はトランス−ＣＨ＝ＣＨ−である）で表される化合物、例えば式Ｉ
ＩＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ

【化８】 で表される化合物を含む。

【００３１】 本発明は、一般的に、１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を含み、延長
されたかまたは不適切な発現において、代表的に所望でない効果、例えば癌細胞
の成長または所望でない炎症応答を生じるｍＲＮＡの増大されたかまたは延長さ
れた安定性に関連する病因を有する疾患および医学的症状の予防または治療にお
いて用いることができる。

【００３２】 ｍＲＮＡ不安定配列は、サイトカイン、ケモカインのための遺伝子、核転写因
子、プロトオンコジーン、前初期遺伝子、細胞サイクル制御遺伝子、オキシゲナ
ーゼ並びにアポトーシスに関連するかまたはこれを制御する遺伝子を含む多数の
一時的に発現された遺伝子のＵＴＲ、特に３’ＵＴＲにおいて同定された。ｍＲ
ＮＡ不安定配列を含む天然のＲＮＡ配列は、あるいはまたアデニレート／ウリジ
レート（ＡＵ）に富む要素、またはＡＲＥと呼ばれる。ｍＲＮＡ不安定配列を含
む一時的に発現された遺伝子は、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｍｙ
ｃ、ｃ−ｊｕｎ、ｋｒｏｘ−２０、ｎｕｒ−７７、ｚｉｆ２６８、β−ＩＦＮ、
ｕＰＡ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ１、ｓｙｎ１、β_２−ＡＲ、
Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｐ−糖タンパク質（ＭＤＲ）、
ＭＲＰ、Ｐγｈ１（ｐｆ ｍｄｒ）、ＣＯＸ ＩＩ、メタロプロテナーゼ（ＭＭ
Ｐ）、ｂｃｌ−２およびＭＩＰ−２αをコードする遺伝子を含む。

【００３３】 以下の刊行物は、ｍＲＮＡ不安定配列およびＡＲＥ、これらが含む配列モチー
フおよびｍＲＮＡ不安定化に対する（最小）配列要求並びに多くのｍＲＮＡ不安
定配列およびこれらを含む遺伝子の同定の広範囲な討議を含む：

【外１】

【００３４】 前述の刊行物に記載されたように、ｍＲＮＡ不安定配列はしばしば、例えばＡ
ＵＵＵＡ、ＵＡＵＵＵＡＵ、ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）およびＡＵＵ
ＵＡＵＵＵＡから成る群から選択された配列モチーフの１つまたは２つ以上のコ
ピーを含む。このような配列モチーフは、代表的には終止コドンとポリＡシグナ
ルとの間の遺伝子中にあり、適切な側面配列と関連してもよく、例えば５’ＵＴ
Ｒ中に存在する他の配列およびコード領域中に存在する不安定モチーフと組み合
わせて相互作用してもよい。

【００３５】 本発明は、ｍＲＮＡ不安定配列を含む、前に述べたかまたは列挙した刊行物中
に記載されたすべての遺伝子と関連する疾患および医学的症状について用いるこ
とができる。 本発明を用いることにより治療するかまたは防止することができる疾患および
医学的症状の例には、以下のものが含まれる：例えば結腸、胸、肺等の癌、急性
および慢性炎症、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患および移植拒絶。

【００３６】 本発明において用いるための化合物は、有用な薬理学的特性を有する。特に、
本発明において用いる化合物は、ｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの分解の誘
導物質として有用な特性を有する。ｍＲＮＡの分解の誘導物質として本発明にお
いて用いられる化合物の活性を、以下に例において記載するかまたは本発明者等
の係属中の英国特許出願第９８２８７０９．７号中に一層詳細に記載したレポー
ター遺伝子アッセイにより例示することができる。

【００３７】 ｍＲＮＡ不安定配列を含むｍＲＮＡの分解の誘導物質としてのこれらの活性の
観点において、ラジシコール類似体は、ｍＲＮＡ不安定配列を含み、癌および悪
性疾患の開始、進行または持続に関連するタンパク質をコードするｍＲＮＡの不
適切な構築および発現を伴う癌または悪性疾患の予防および治療に有用である。
ｍＲＮＡ不安定化配列を含むｍＲＮＡを有する癌関連遺伝子の例は、種々の腫瘍
遺伝子および転写因子、例えばｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｆｏｓ、Ｓｐｌ、ｂｃｌ−２お
よび同様の遺伝子を含む。このような腫瘍遺伝子の不適切または延長された発現
は、癌、例えば結腸癌、乳癌、肺癌等のある形態の開始に関連する。ｍＲＮＡ不
安定配列を含むｍＲＮＡを有する癌関連遺伝子の他の例は、腫瘍成長および転移
侵入に必要な組織再モデル化に関連する、メタロプロテナーゼ酵素についての遺
伝子、例えばＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、コラゲナーゼ等；細胞サイクル関連遺伝
子、例えばｐ４５／ＳＫＩＰ２等およびいくつかの癌細胞の先天性または後天性
多剤耐性に関連する多剤耐性遺伝子、例えばｍｄｒ−１、ＭＲＰ等である。

【００３８】 ラジシコール類似体での治療は、このような遺伝子のｍＲＮＡの分解に有利に
至り、遺伝子発現の下方調節または「スイッチオフ」を生じる。従って、例えば
、ラジシコール類似体は、腫瘍遺伝子媒介癌および悪性疾患を治療および防止す
るために、一般的に腫瘍成長および転移侵入を治療および防止するために、並び
に多剤耐性を防止または逆転させてこれにより従来の、例えば細胞毒性、抗癌剤
での癌および腫瘍治療を促進するために用いることができる。 ラジシコール類似体は、細胞中または実質的に以下に記載するインビボアッセ
イまたは適切な細胞系および条件を用いるこのようなアッセイの変法において、
これらの抗癌剤としての活性について試験することができる。

【００３９】 ラジシコール類似体は、例えば、ＥＧＦ依存性上皮細胞の有用な標準的給源と
して認識されている（Carpenter, G., およびZendegni, J. Anal. Biochem. 153
, 279-282 (1985)参照）ＥＧＦ依存性細胞系、例えば類表皮ＢＡＬＢ／ｃマウス
角化細胞細胞系（Weissmann, B.A., およびAaronson, S.A., Cell 32, 599 (198
3)参照）またはＡ４３１細胞系の細胞成長の阻害を示す。既知の試験方法におい
て（Meyer et al., Int. J. Cancer 43, 851 (1989)参照）、ラジシコール類似
体の阻害活性は、短く、以下のように決定されている：ＢＡＬＢ／ＭＫ細胞（１
０ ０００／マイクロタイタープレートウェル）を、９６ウェルマイクロタイタ
ープレートに移送する。試験化合物（ＤＭＳＯに溶解した）を、一連の濃度（希
釈系列）で、ＤＭＳＯの最終濃度が１％（ｖ／ｖ）を超えないように加える。添
加後、プレートを３日間インキュベートし、この間試験化合物を含まない対照培
養は、少なくとも３つの細胞分割サイクルを経ることができる。ＭＫ細胞の成長
は、メチレンブルー染色により測定される：インキュベーションの後、細胞を、
グルタルアルデヒドで固定し、水で洗浄し、０．０５％のメチレンブルーで染色
する。洗浄工程の後、染色を３％ＨＣｌで溶出し、マイクロタイタープレートの
ウェルあたりの光学密度を、タイターテック(Titertek)マルチスキャン(multisk
an)を用いて６６５ｎｍにおいて測定する。ＩＣ_５０値を、コンピューターによ
り補助されたシステムにより、以下の式： ＩＣ_５０＝［（ＯＤ_ｔｅｓｔ−ＯＤ_{ｓｔａｒｔ}）／（ＯＤ_{ｃｏｎｔｒｏｌ}−ＯＤ _{ｓｔａｒｔ} ）］×１００ を用いて決定する。

【００４０】 該実験におけるＩＣ_５０値は、阻害剤を含まない対照を用いて得られたものよ
り５０％低い細胞計数に至る当該試験化合物の濃度として与えられる。ラジシコ
ール類似体は、マイクロモル範囲の阻害活性、例えば約０．１〜１０ｍＭ、特に
０．４〜４ｍＭのＩＣ_５０において阻害活性を示す。

【００４１】 ラジシコール類似体は、例えば以下に示す試験により示されるように、インビ
ボにおいても腫瘍細胞の成長の阻害を示す：試験は、ヒト類表皮癌腫Ａ４３１（
ATCC No. CRL 1555; American Type Culture Collection, Rockville, Maryland
, USA; Santon, J.B., et al., Cancer Research 46, 4701-4705 (1986)およびO
zawa, S., et al., Int J. Cancer 40, 706-710 (1987)参照）の成長の阻害に基
づき、これを、雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス(Bomholtgard, Denmark)中に移植す
る。当該癌腫は、ＥＧＦ−受容体発現の程度と相関する成長を示す。実験におい
て、インビボで培養された約１ｃｍ^３の容積を有する腫瘍を、実験動物から無菌
条件の下で外科的に除去した。腫瘍を細かくし、１０容量（ｗ／ｖ）のリン酸緩
衝生理的食塩水中に懸濁させる。懸濁液を、動物の左側中に皮下注射する（リン
酸緩衝生理的食塩水中で０．２ｍｌ／マウス）。あるいはまた、インビトロ培養
からの１×１０^６個の細胞を、０．２ｍｌのリン酸緩衝生理的食塩水中に注入す
ることができる。試験化合物での処理を、腫瘍が４〜５ｍｍの直径に達した際、
移植後５または７日において開始する。当該試験化合物を、１５日間連続で１日
１回投与する（異なる動物群において異なる用量で）。腫瘍成長を、互いに垂直
である３つの軸に沿って腫瘍の直径を測定することにより決定する。腫瘍容積を
、既知の式ｐ×Ｌ×Ｄ^２／６を用いて計算する（Evans, B.D., et al., Brit. J
. Cancer 45, 466-468 (1982)参照）。結果を、処理／対照百分率（Ｔ／Ｃ×１
００＝Ｔ／Ｃ％）として示す。３〜５０ｍｇ／ｋｇの活性成分の用量において、
腫瘍成長の明らかな阻害が、例えば１０より小さいＴ／Ｃ％値で見出され、これ
は、腫瘍成長の強力な阻害を示す。

【００４２】 本発明において用いるラジシコール類似体を、単独でおよび他の薬理学的に活
性な化合物と組み合わせて、例えばポリアミン合成の酵素の阻害剤、プロテイン
キナーゼＣの阻害剤、他のチロシンキナーゼの阻害剤、サイトカイン、負の成長
レギュレーター、例えばＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−β、アロマターゼ阻害剤、抗
エストロゲンおよび／または細胞分裂停止剤と共に、用いることができる。

【００４３】 特徴的に、ラジシコール類似体を用いて腫瘍および他の悪性細胞の多剤耐性を
防止するかまたは逆転させる際に、これらを、細胞分裂停止剤または細胞毒性剤
と組み合わせて用いる。インビトロでの抗腫瘍性／細胞毒性薬剤物質に対する癌
細胞の感受性の回復における有用性を評価するための適切な細胞に基づくアッセ
イは、以下の通りである。

【００４４】 例えば、ダウノルビシン（ＤＲ）；ビンクリスチン（ＶＣ）；アドリアマイシ
ン（ＡＭ）；エトポシド（ＥＴ）；テノポシド（ＴＥ）；コルヒチン（ＣＣ）；
およびタキソールから成る群から選択された１種または２種以上の癌治療薬剤物
質（ＣＴＤＳ）に耐性の肺のヒト小細胞癌腫からの癌細胞系列（ＣＣＬ）は、Tw
entyman et al., Br. J. Cancer, 54, 253 (1986)により記載された方法に従っ
て開発される。

【００４５】 耐性亜系（ＣＣＬ−Ｒ）の感受性を、例えばＤＲ耐性系（ＣＣＬ−ＤＲＲ）の
場合にＣＣＬ−ＤＲＳとＣＣＬ−ＤＲＲ系との成長を最初から成長媒体中に含有
されたＤＲの存在において比較することにより、連続的ＣＴＤＳ暴露の間に細胞
成長の阻害をアッセイすることにより、親の感受性系（ＣＣＬ−Ｓ）と比較する
。このために、細胞増殖を、電子的細胞カウンターを用いた細胞計数により測定
し、計数は、指数関数的成長相の終了近くに実施する。ＣＣＬ−Ｒ系を、ＩＣ_{８ ０} （薬剤濃度、例えば最終的細胞数を非ＣＴＤＳ（例えばＤＲ）処理対照につい
てのものの２０％に減少させるのに必要なＤＲ濃度）が、親ＣＣＬ−Ｓ系のもの
よりも＞８０Ｘ、好ましくは＞１００Ｘ大きいものについて選択する。

【００４６】 次に、試験ラジシコール類似体の存在または不存在における、選択されたＣＣ
Ｌ−Ｒ系のＣＴＤＳ（例えばＤＲ）に対する感受性を、前述のように細胞計数を
増殖の基準として用いて実施する。このために、細胞を、変化する濃度のＣＴＤ
Ｓと試験ラジシコール類似体との両方の存在下で、最初から培養する。スクリー
ニングのために、これら自体増殖の顕著な減少を生じない後者の濃度を、選択す
る。適切な濃度を、ＣＴＤＳの不存在下で変化する濃度のラジシコール類似体の
存在下で、ＣＣＬ−ＳおよびＣＣＬ−Ｒを培養することにより確立する。ラジシ
コール類似体を、０．０１〜５０μｇ／ｍｌ、特に０．１〜１０μｇ／ｍｌ、例
えば０．０１、０．０２、０．０５、０．１、０．２、０．５、１．０、２．０
、５．０、１０．０および５０μｇ／ｍｌの濃度において、ルーチンに試験する
。試験ラジシコール類似体の不存在下で細胞増殖を５０％だけ阻害するのに必要
なＣＴＤＳ（例えばＤＲ）（ＩＣ_５０−ＣＳ）の、試験ラジシコール類似体の存
在下において得られたもの（ＩＣ_５０＋ＣＳ）と比較した比率を、ラジシコール
類似体により誘導されたＣＴＤＳに対するＣＣＬ−Ｒ系の増大した感受性の基準
として採用する。用いるＣＣＬ−Ｒ系の感受性を、このＣＴＤＳに対する感受性
を前に確立したものと交差チェックすることにより、確実にする。

【００４７】 インビボ手順を含む抗腫瘍性／細胞毒性薬剤物質に対する癌細胞の感受性の回
復における有用性を評価するための追加の手順は、ＥＰ ０２９６１２２ Ｂに
記載されており、この関連する開示を、本出願の教示中に、参照として加入する
。 本発明において用いる化合物を、単独で、および他の薬理学的活性化合物と組
み合わせて、例えば化合物を、ポリアミン合成の酵素の阻害剤、プロテインキナ
ーゼＣの阻害剤、他のチロシンキナーゼの阻害剤、サイトカイン、負の成長レギ
ュレーター、例えばＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−β、アロマターゼ阻害剤、抗エス
トロゲンおよび／または細胞分裂停止剤と共に用いることができる癌治療におい
て用いることができる。

【００４８】 本発明において活性成分として用いる化合物を含み、特に前述の疾患の治療に
おいて用いることができる適切な薬学的組成物は、腸内、例えば鼻腔内、頬内、
直腸内または特に経口投与、および非経口投与、例えば温血動物、特にヒトへの
静脈内、筋肉内または皮下投与のための組成物を含む。組成物は、活性成分を単
独で、または好ましくは薬学的に許容し得る担体と共に含む。活性成分の投与量
は、治療される疾患、並びに種、年齢、体重および個別の症状、個別の薬物動態
的症状、並びに投与の様式に依存する。

【００４９】 薬学的組成物は、約１％〜約９５％の活性成分、好ましくは約２０％〜約９０
％の活性成分を含む単一投与形態での投与の形態および好ましくは約５％〜約２
０％の活性成分を含む単一投与形態ではない投与の形態を含むことができる。単
位投与形態は、例えば、糖衣錠、錠剤、アンプル、ビン、座剤またはカプセルで
ある。投与の他の形態は、例えば、軟膏、クリーム、ペースト、フォーム、チン
キ剤、リップスティック、点滴薬、スプレー、分散体等である。例は、約０．０
５ｇ〜約１．０ｇの活性成分を含むカプセルである。

【００５０】 薬学的組成物は、それ自体知られている方法、例えば従来の混合、造粒、調合
、溶解または凍結乾燥手順により調製する。

【００５１】 活性成分の溶液、およびまた懸濁液または分散体、特に等張水性溶液、分散体
または懸濁液を好ましく用い、このような溶液、懸濁液または分散体を使用前に
構成するために、例えば凍結乾燥した組成物の場合において、活性成分を、単独
でまたは担体、例えばマンニトールと共に含むことができる。薬学的組成物を滅
菌することができ、および／またはこれは、賦形剤、例えば保存剤、安定剤、湿
潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節するための塩および／また
は緩衝液を含むことができ、およびそれ自体知られている方法、例えば従来の溶
解または凍結乾燥手順により製造される。前述の溶液または懸濁液は、粘度上昇
物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニ
ルピロリドンまたはゼラチンを含むことができる。

【００５２】 油中の懸濁液は、油成分として、注入目的で一般的な植物油、合成油または半
合成油を含む。このようなものとして、特に、酸成分として、８〜２２個、特に
１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えばラウリル酸、トリデシル酸
、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸
、アラキドン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライ
ジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸またはリノール酸を、所望により、抗酸化剤、
例えばビタミンＥ、β−カロテンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒ
ドロキシトルエンと共に含む液体脂肪酸エステルを挙げることができる。該脂肪
酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有し、１価または多価、
例えば１価、２価または３価のアルコール、例えばメタノール、エタノール、プ
ロパノール、ブタノールまたはペンタノールあるいはこの異性体であるが、特に
グリコールおよびグリセロールである。従って、脂肪酸エステルの以下の例が挙
げられる：オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプ
ロピル、「ラブラフィル(Labrafil)Ｍ ２３７５」（ポリオキシエチレングリセ
ロールトリオレエート、Gattefosse, Paris）、「ラブラフィルＭ １９４４
ＣＳ」（アプリコット穀粒油のアルコール分解により製造され、グリセリドおよ
びポリエチレングリコールエステルから成る不飽和ポリグリコール化グリセリド
、Gattefosse, France）、「ラブラゾール(Labrasol)」（ＴＣＭのアルコール分
解により製造され、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る
飽和ポリグリコール化グリセリド、Gattefosse, France）および／または「ミグ
リオール(Miglyol)８１２」（Ｃ_８〜Ｃ_１２の鎖長を有する飽和脂肪酸のトリグ
リセリド、Huis AG, Germany）、しかし特に植物油、例えば綿実油、アーモンド
油、オリーブ油、ひまし油、ごま油、大豆油および一層特に落花生油。

【００５３】 注入組成物は、無菌条件下で通常の方法により製造される；また、同一のこと
が、組成物の、例えばアンプルまたはビン中への導入および容器の密封に該当す
る。 経口投与用の薬学的組成物を、例えば、活性成分を１種または２種以上の固体
担体と、所望により得られた混合物を粉砕し、混合物または顆粒を所望により加
工し、所要に応じて追加の賦形剤を加えて、錠剤または糖衣錠核を形成すること
により、得ることができる。

【００５４】 適切な担体は、特に、充填剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、
マンニトールまたはソルビトール、セルロース調製物および／またはリン酸カル
シウム、例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、並びにまた結
合剤、例えばデンプン、例えばコーンスターチ、小麦デンプン、米デンプンまた
はトウモロコシデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリ
ドン、および／または所望により崩壊剤、例えば前述のデンプン、またカルボキ
シメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドンあるいはアルギン酸またはこの塩
、例えばアルギン酸ナトリウムである。追加の賦形剤は、特に、流動調整剤およ
び潤滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはこの塩、例えばステアリ
ン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレン
グリコールまたはこの誘導体である。

【００５５】 糖衣錠核に、適切な、随意に腸溶性である被覆剤を提供することができ、ここ
で、特に、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコ
ールおよび／または二酸化チタン、あるいは適切な有機溶媒または溶媒混合物中
のコーティング溶液、あるいは腸溶性被覆剤を製造するために、適切なセルロー
ス調製物、例えばアセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチ
ルセルロースフタレートの溶液を含むことができる濃糖溶液を用いる。着色剤ま
たは顔料を、例えば識別する目的または活性成分の異なる用量を示すために、錠
剤または糖衣錠被覆剤に加えることができる。

【００５６】 経口投与可能な薬学的組成物はまた、ゼラチンから成る乾燥充填カプセル、ま
たゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールから成る柔軟
密封カプセルを含む。乾燥充填カプセルは、活性成分を、顆粒の形態で、例えば
充填剤、例えばコーンスターチ、結合剤および／またはグリダント(glidant)、
例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および随意に安定剤との混合物
で含むことができる。柔軟カプセルにおいて、活性成分を、好ましくは、適切な
液体賦形剤、例えば脂肪酸、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールあ
るいはエチレングリコールまたはプロピレングリコールの脂肪酸エステル中に溶
解または懸濁し、またこれに、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エス
テル型の安定剤および洗浄剤を加えることができる。

【００５７】 投与のための他の経口形態は、例えば懸濁形態であり、約５％〜２０％、好ま
しくは約１０％の濃度の、または例えば５または１０ｍｌの基準で投与する際に
適切な単一形態を提供する同様の濃度の活性成分を含む、一般的な方法で調製さ
れる、例えばシロップである。また適切なものは、例えば、セーキ、例えばミル
クの調製のための粉末または液体濃縮物である。このような濃縮物はまた、単一
投与量で包装することができる。

【００５８】 適切な直腸内に投与可能な薬学的組成物は、例えば、活性成分と座剤ベースと
の組み合わせから成る座剤である。適切な座剤ベースは、例えば、天然または合
成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級ア
ルカノールである。

【００５９】 非経口投与のために、特に水溶性形態、例えば水溶性塩、または粘度上昇物質
、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／または
デキストランおよび所望により安定剤を含む水性注射懸濁液の形態の活性成分の
適切な水溶液がある。随意に賦形剤と組み合わされた活性成分はまた、凍結乾燥
物(lyophilisate)の形態であることができ、非経口投与の前に、適切な溶媒を加
えることにより、溶液とすることができる。

【００６０】 本発明において用いるための化合物を、単独で、または薬学的組成物の形態で
、好ましくは前述の疾患に対して有効な量で、温血動物、例えばこのような治療
を要するヒトに予防的または治療的に投与することができ、化合物は特に、薬学
的組成物の形態で用いられる。このような治療において、体重が約７０ｋｇの個
体に、約０．１ｇ〜約５ｇ、好ましくは約０．５ｇ〜約２ｇの式ＩＩの化合物を
毎日の用量として投与する。

【００６１】 以下の例は、本発明を例示するためのものであり、添付した図面に言及する。

【００６２】例 例１：ｍＲＮＡを不安定化する化合物についてのレポーター遺伝子アッセイ Ａ．ｐＧＬ２ ｎｅｏ３０の構成 ＴＨＰ−１細胞中への安定な統合のためのベクターを得るために、ｐＭＣＩｎ
ｅｏ(Stratagene)から得られたｎｅｏ耐性遺伝子（アミノグリコシド３’ホスホ
トランスフェラーゼを発現する）のＸｈｏＩ−ＳａｌＩフラグメントを、ｐＣＬ
−２対照(Promega)のＳａｌＩ部位中にサブクローン化した。この得られたプラ
スミドを、ｐＧＬ２＿Ｎｅｏと呼んだ。２つの相補的な合成オリゴヌクレオチド
（図１参照）をアニーリングすることにより得られた３０ｂｐフラグメント（Ｉ
Ｌ−１β３’ＵＴＲ配列に基づく３つのタンデムＡＵＵＵＡモチーフを含む）を
、ｐＣＬ２＿Ｎｅｏ中に、ＰｆｌＭ１制限部位を用いてサブクローン化した。こ
の結果、ルシフェラーゼ発現ベクターｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０が得られた（図２）
。図１は、ｐＧＬ２＿ＮｅｏのＰｆｌＭＩ部位中につなぐのに用いる３つのタン
デムＡＵＵＵＡモチーフを含むＩＬ−１β３’ＵＴＲ配列を示す。

【００６３】Ｂ．安定細胞系のトランスフェクションおよび選択 得られたベクターｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０およびｐＧＬ２＿Ｎｅｏを、ＴＨＰ−
１細胞中に、エレクトロポレーションによりトランスフェクトした。１．３ｍＭ
のＫＨ_２ＰＯ_４、７．３６ｍＭのＮａ_２ＨＰＯ_４、２．４４ｍＭのＫＣｌ、１２
４ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのグルコース、９．６μＭのＭｇＣｌ_２および１６μ
ＭのＣａＣｌ_２、ｐＨ７．２中の１０^７個の細胞／ｍｌを、バイオラッドジーン
パルサー(Bio-Rad Gene Pulser)（２５０Ｖ、６９０μＦおよび不定の抵抗）中
の２０μｇのＤＮＡで、０．４ｃｍのキュベットを用いてトランスフェクトした
。細胞をその後、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのＬ−Ｇｌｎ（Ｌ−グルタミン）、５０
μＭの２−メルカプトエタノールおよび６００μｇ／ｍｌのＧ４１８（ジェネテ
ィシン(geneticin)）を含むＲＰＭＩ培地中で培養した。ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０
およびｐＧＬ２＿ＮｅｏのＴＨＰ−１細胞中へのトランスフェクションの後、安
定な細胞系を、Ｇ４１８耐性についての選択により得、ルシフェラーゼ活性につ
いてアッセイした。各トランスフェクションの１つの細胞系を、さらなる分析の
ために選択した；ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０細胞系を、クローン番号６３と呼び、ｐ
ＧＬ２＿Ｎｅｏ細胞系を、クローン番号５３と呼ぶ。外因性ルシフェラーゼ活性
は、通常のＴＨＰ−１細胞においては検出できなかった。 組織培養およびルシフェラーゼ活性測定を、以下のようにして実施した。

【００６４】Ｃ．組織培養 トランスフェクトしたヒト単球白血病細胞系、クローン番号５３および６３を
、１１０Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍ
ＭのＬ−Ｇｌｎおよび２ｇ／ｌのＮａＨＣＯ_３を補足したＲＰＭＩ培地中で成長
させた。熱処理ＦＢＳ（５％）を、使用前に加えた。細胞を、５×１０^５／ｍｌ
の密度に成長させ、１００Ｕ／ｍｌ（最終濃度）のγＩＦＮでの分化を誘導した
。３時間後、１０μｌのＬＰＳ（５μｇ／ｍｌの最終濃度）を加えた。この時点
を、時間０とした。示したように、ＬＰＳの添加後、化合物を、種々の時間にお
いて加えた。

【００６５】Ｄ．ルシフェラーゼ活性測定 系を９６ウェルプレートの使用に適合させるために、細胞を、フェノールレッ
ド（ＡＭＩＭＥＤ）を欠くＲＰＭＩ培地中のパッカード(Packard)平坦底白色ポ
リスチレンマイクロプレート（Ｃａｔ．Ｎｏ．６００５１８０）中で成長させた
。細胞を、５×１０^４／ウェルで蒔いた。細胞の処理後、ルシフェラーゼを、パ
ッカードルクライト (Packard Luc Lite) システム（Ｃａｔ．Ｎｏ．６０１６９
１ １）を用いて、製造者の指示に従って２０５μｌの最終容積に計量した。要
するに、５×１０^５細胞／ｍｌの細胞懸濁に、γＩＦＮ（１０００Ｕ／ｍｌベー
リンガーマンハイム(Boehringer Mannheim)Ｎｏ．１０５０４９４）を最終濃度
１００Ｕ／ｍｌに、および０．２５％（ｖ／ｖ）のルクライトエンハンサー(Luc
Lite Enhancer)を加えた。３時間のインキュベーションの後、ＬＰＳ（５０μ
ｇ／ｍｌのＳＩＧＭＡ Ｌ−８２７４）を加えて、５μｇ／ｍｌの最終濃度を得
た。次に、細胞を、５×１０^４／１００μｌ／ウェルにおいて平坦底白色ポリス
チレンマイクロプレート(Packard, Cat. No. 6005180)中に蒔き、１６時間イン
キュベートした。次に、５μｌの化合物溶液または対照ビヒクルを加え、細胞を
、示したようにさらにインキュベートした。１００μｌのルシフェラーゼ基質溶
液を加え、プレートを、トップシール(Top-Seal)−Ａプレスオン接着密封フィル
ム(Packard, Cat. No. 6005185)で覆い、その後２２℃でパッカードトップカウ
ントシンチレーションカウンター(Packard Top Count Scintillation Counter)
でルミネセンスを測定した。ルシフェラーゼシグナルは、少なくとも９０分間安
定であった。

【００６６】例２：ラジシコール類似体Ａの効果 ＴＨＰ−１細胞系、クローン番号６３（ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０を含む）および
クローン番号５３（ｐＧＬ２−対照を含む）を成長させ、分化させ、通常のＴＨ
Ｐ−１細胞と同一のγＩＦＮおよびＬＰＳで刺激した。ラジシコール類似体Ａを
、ＬＰＳの添加の１６時間後に加え、次に抽出物を、８時間後に示したように採
取した。ルシフェラーゼ活性は、平均で５０％＋／−１７％だけ１μＭラジシコ
ール類似体Ａにより阻害され、若干の場合において阻害は９３％程度に大きく、
一方５×１０^−６Ｍまでのラジシコール類似体Ａは、対照のクローン番号５３に
対して効果を有しなかった、図３（黒色棒はクローン番号５３を示し、白色棒は
クローン番号６３を示す）。

【００６７】例３：レポーター遺伝子アッセイの多くのラジシコール類似体への適用 多くのラジシコール類似体を、これらの活性について、実質的に前の例に記載
したようにレポーター遺伝子アッセイにおいて試験した。得られた結果を、以下
の表に示す。

【００６８】

【表１】 表

【表２】

【００６９】例４： 各々例えば５０ｍｇのラジシコール類似体Ａまたは薬学的に許容し得る塩
を含む錠剤を、以下のようにして製造した：組成物（１００００個の錠剤） 活性成分 ５００．０ｇ ラクトース ５００．０ｇ ジャガイモデンプン ３５２．０ｇ ゼラチン ８．０ｇ タルク ６０．０ｇ ステアリン酸マグネシウム １０．０ｇ 二酸化ケイ素（高度に分散した） ２０．０ｇ エタノール 十分量

【００７０】 活性成分を、ラクトースおよび２９２ｇのジャガイモデンプンと混合し、混合
物を、ゼラチンのエタノール性溶液で湿潤させ、ふるいにより顆粒化した。乾燥
後、残りのジャガイモデンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルクおよび二酸
化ケイ素を混合し、混合物を圧縮して、各々重量が１４５．０ｍｇであり、５０
．０ｍｇの活性成分を含む錠剤を形成した；所望により、錠剤に、用量の一層精
密な適合のための破壊刻み目を設けることができる。

【００７１】例５： 各々１００ｍｇのラジシコール類似体Ａまたは薬学的に許容し得る塩を含
むフィルムで被覆した錠剤を、以下のようにして製造した：組成（１０００個のフィルムで被覆した錠剤について） 活性成分 １００．０ｇ ラクトース １００．０ｇ コーンスターチ ７０．０ｇ タルク ６０．０ｇ ステアリン酸カルシウム １．５ｇ ヒドロキシプロピルメチルセルロース ２．３６ｇ シェラック ０．６４ｇ 水 十分量 塩化メチレン 十分量

【００７２】 活性成分、ラクトースおよび４０ｇのコーンスターチを混合し、１５ｇのコー
ンスターチおよび水（加熱した）から調製したペーストで湿潤させ、粉砕した。
顆粒を乾燥し、残りのコーンスターチ、タルクおよびステアリン酸カルシウムを
加え、顆粒と混合した。混合物を圧縮して、錠剤（重量：２８０ｍｇ）を形成し
、これを次にヒドロキシプロピルメチルセルロースの溶液および塩化メチレン中
のシェラックでフィルム被覆し；フィルム被覆した錠剤の最終的な重量は２８３
ｍｇであった。

【００７３】例６： １００ｍｇの活性成分、例えばラジシコール類似体Ａまたは薬学的に許容
し得る塩を含む硬質ゼラチンカプセルを、例えば以下のようにして製造した：組成（１０００個のカプセルについて） 活性成分 １００．０ｇ ラクトース ２５０．０ｇ 微晶質セルロース ３０．０ｇ ラウリル硫酸ナトリウム ２．０ｇ ステアリン酸マグネシウム ８．０ｇ

【００７４】 ラウリル硫酸ナトリウムを、凍結乾燥した活性成分に０．２ｍｍのメッシュサ
イズのふるいを通して加えた。２種の成分を、十分に混合した。次に、先ず、ラ
クトースを、０．６ｍｍのメッシュサイズのふるいを通して加え、次に微晶質セ
ルロースを、０．９ｍｍのメッシュサイズのふるいを通して加えた。次に混合物
を、再び１０分間十分に混合した。最後に、ステアリン酸マグネシウムを、０．
８ｍｍのメッシュサイズのふるいを通して加えた。さらに３分間混合した後、大
きさ０の硬質ゼラチンカプセルに、各々３９０ｍｇの得られた配合物を充填した
。軟質ゼラチンカプセルを、同様の成分および方法を用いて製造することができ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 例１のレポーター遺伝子アッセイにおけるｍＲＮＡ不安定配列と
して用いられる３０ｂｐフラグメントを示す図である。

【図２】 ｐＧＬ２＿Ｎｅｏ３０およびｐＧＬ２−対照についてのプラスミ
ド図を示す図である。

【図３】 種々の濃度のラジシコール類似体Ａ（ＳＤＺ２１６−７３２）で
処理したクローン５３（黒色棒）および６３（白色棒）からのルシフェラーゼ活
性のグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/06 Ａ６１Ｐ 17/06 19/02 19/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 31/00 31/00 35/00 35/00 // Ｃ０７Ｄ 313/00 Ｃ０７Ｄ 313/00 493/04 １１１ 493/04 １１１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 シェヌヴァル， ドミニク カナダ、ブリティッシュ コロンビア ブ イ３ジェイ ３ビー６、コキトラム、リー ガン アベニュー 1323 (72)発明者 ルエツ， ステファン スイス連邦 シーエイチー4125 リーヘ ン、ウンホルツガッス ４ Ｆターム(参考） 4C062 JJ70 4C071 AA01 AA07 BB01 CC12 EE02 FF18 GG01 HH08 HH09 LL01 4C084 AA17 NA14 ZA45 ZA59 ZA68 ZA89 ZA96 ZB15 ZB26 ZB35 4C086 AA01 AA02 BA01 CA01 MA01 MA04 NA14 ZA45 ZA59 ZA68 ZA89 ZA96 ZB15 ZB26 ZB35

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 医薬として用いる１つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列
   を含む、ｍＲＮＡの分解を誘導する化合物であって、ラジシコール類似体Ａでは
   ない、前記化合物。
2. 【請求項２】 １つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡ
   の増大した安定性に関連する病因を有する疾患または医学的症状を予防または治
   療する方法において、該疾患または医学的症状が過剰のサイトカイン放出に関連
   する病因を有するもの、特にＩＬ−１β放出、例えば慢性関節リウマチ、変形性
   関節症、細菌性ショック、乾癬、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病
   および喘息であるとき、ヒトまたは動物患者に、ｍＲＮＡの分解を誘導する有効
   量のラジシコール類似体Ａではない化合物を投与することを含む、前記方法。
3. 【請求項３】 １つまたは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡ
   の分解を誘導するラジシコール類似体Ａではない化合物の使用において、疾患ま
   たは医学的症状が過剰のサイトカイン放出に関連する病因を有するもの、特にＩ
   Ｌ−１β放出、例えば慢性関節リウマチ、変形性関節症、細菌性ショック、乾癬
   、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、クローン病および喘息であるとき、１つま
   たは２つ以上のｍＲＮＡ不安定配列を有するｍＲＮＡの増大した安定性に関連す
   る病因を有する疾患または医学的症状の治療または予防における使用のための医
   薬の製造のための、前記化合物の使用。
4. 【請求項４】 患者にｍＲＮＡの分解を誘導する方法において、患者に対し
   てｍＲＮＡ分解を誘導するラジシコール類似体Ａではない化合物の有効量を投与
   し、ここでｍＲＮＡがＩＬ−１β、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αをコードするｍＲ
   ＮＡであるとき、ｍＲＮＡがｍＲＮＡ不安定配列を含む、前記方法。
5. 【請求項５】 ｍＲＮＡがＩＬ−１β、ＩＬ−６またはＴＮＦ−αをコード
   するｍＲＮＡであるとき、患者のｍＲＮＡ分解配列を含むｍＲＮＡの分解の誘導
   における使用のための、医薬の製造においてｍＲＮＡ分解を誘導するラジシコー
   ル類似体Ａではない化合物の使用。
6. 【請求項６】 癌および／または悪性疾患の治療のための医薬の製造のため
   のラジシコール類似体の使用。
7. 【請求項７】 癌および／または悪性疾患の予防または治療方法において、
   患者に有効量のラジシコール類似体を投与することを含む、前記方法。
8. 【請求項８】 化合物またはラジシコール類似体が、式ＩＩ 【化１】 式中、 Ｒ_１は、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低
   級アルキル−ＣＯＯ−であり； Ｒ_２は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−Ｃ
   ＯＯ−であり； Ｒ_３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル
   −ＣＯＯ−であり； −ａ−ｂ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−またはシスまたはトランス−ＣＲ_７＝Ｃ
   Ｒ_８−であり、ここでＲ_７およびＲ_８は、同一であるかまたは異なっており、Ｈ
   、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−ＣＯＯ−で
   あり、または −ａ−ｂ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−であり、Ｒ_７およびＲ_８は、Ｏと共に
   、エポキシド架橋を形成し； ｃは、＞ＣＨ−ＯＨ−、＞Ｃ＝Ｏまたは＞ＣＨ_２であり； −ｄ−ｅ−は、−ＣＨＲ_７−ＣＨＲ_８−またはシスまたはトランス−ＣＲ_７＝
   ＣＲ_８−であり、ここでＲ_７およびＲ_８は、同一であるかまたは異なっており、
   Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_４低級アルコキシまたはＣ_１〜Ｃ_４低級アルキル−ＣＯＯ−
   であり、 −ｆ−ｇ−は、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−またはシスまたはトランス−ＣＨ＝ＣＨ−
   である、 で表される化合物またはこの薬学的に許容し得る塩またはこの生理学的に加水分
   解可能なおよび生理学的に許容可能なエステルである、請求項３、５または６に
   記載の使用または請求項２、４または７に記載の方法。
9. 【請求項９】 腫瘍遺伝子媒介性癌および悪性疾患の治療または防止、一般
   的に腫瘍成長および転移侵入の治療または防止、あるいは多剤耐性を防止するか
   、または逆転するための請求項６または８に記載の使用または請求項７または８
   に記載の方法。
10. 【請求項１０】 明細書および例を特に参照して実質的に前記したすべての
    新規な化合物、方法および使用。