EA005416B1

EA005416B1 - Унифицированная дозированная лекарственная форма

Info

Publication number: EA005416B1
Application number: EA200101008A
Authority: EA
Inventors: Уильям Эрнест Пулмен; Джон Стивен Уайтейкер
Original assignee: ЛИЛЛИ АЙКОС эЛ-эЛ-Си
Priority date: 1999-04-30
Filing date: 2000-04-26
Publication date: 2005-02-24
Also published as: KR20010020779A; FR2795646A1; CN1292264A; BR0003046A; HK1041204A1; HRP20010778A2; DK1173181T3; NZ504163A; JP2002543116A; LV12560A; EA200101008A1; LV12560B; NL1015027A1; AU2004201988A1; SI20361A; CH692478A5; SE0001518L; ITMI20000922A0; KR20020008396A; CN1384746A

Abstract

Данное изобретение относится к высокоизбирательным ингибиторам фермента фосфодиэстеразы (ФДЭ) и их применению в промышленных фармацевтических изделиях. В частности, данное изобретение относится к сильным ингибиторам циклический гуанозин-3',5'-монофосфат-специфической фосфодиэстеразы типа 5 (ФДЭ5), которые при включении в фармацевтический продукт в унифицированной (стандартной) дозе приблизительно 1-20 мг применимы для лечения сексуальной дисфункции.

Description

Данное изобретение относится к высокоизбирательному ингибитору фермента фосфодиэстеразы (ФДЭ) и к его применению в фармацевтической унифицированной (стандартной) дозированной лекарственной форме. В частности, данное изобретение относится к сильному ингибитору циклический гуанозин-3',5'-монофосфат-специфической фосфодиэстеразы типа 5 (ФДЭ5), который при включении в фармацевтический продукт применим для лечения сексуальной дисфункции. Описанная здесь унифицированная дозированная лекарственная форма характеризуется избирательным ингибированием ФДЭ5 и, следовательно, обеспечивает пользу в терапевтических областях, где желательным является ингибирование ФДЭ5, с минимизацией или элиминацией вредных побочных эффектов, возникающих из ингибирования других фосфодиэстеразных ферментов.

Предпосылки изобретения

Биохимические, физиологические и клинические эффекты ингибиторов циклический гуанозин-3',5'монофосфат-специфической фосфодиэстеразы (цГМФ-специфической ФДЭ) предполагают их применимость в многочисленных патологических состояниях, в которых является желательным модулирование функции гладких мышц, почечной, гемостатической, воспалительной и/или эндокринной функции. цГМФ-специфическая фосфодиэстераза типа 5 (ФДЭ5) является основным гидролизующим цГМФ ферментом в гладкой мышце сосудов, и сообщалась ее экспрессия в пещеристом теле полового члена (ТаЬег с1 а1., 1. Иго1., 149, р. 285А (1993)). Таким образом, ФДЭ5 является привлекательной мишенью в лечении сексуальной дисфункции (Миггау, ΩΝ&Ρ 6(3), рр. 150-56 (1993)).

Фармацевтический продукт, который обеспечивает ингибитор ФДЭ5, является в настоящее время доступным и продается под товарным названием ВИАГРА®. Активным ингредиентом ВИАГРЫ® является силденафил. Этот продукт продается в виде промышленного изделия, включающего в себя таблетки силденафила 25, 50 и 100 мг и листовку-вкладыш в упаковке, содержащую информацию о лекарственном средстве. Листовка-вкладыш указывает, что силденафил является более сильным ингибитором ФДЭ5, чем другие известные фосфодиэстеразы (более, чем в 80 раз, в отношении ингибирования ФДЭ1, более, чем в 1000 раз, в отношении ингибирования ФДЭ2, ФДЭ3 и ФДЭ4). Сообщалось, что 1С₅₀ для силденафила против ФДЭ5 равна 3 нМ (Эгидк οί 1Ие Ри1иге, 22(2), рр. 138-143 (1997)) и 3,9 нМ (Воо1е1 е! а1., Ιηΐ. 1. οί 1тро!епсе, 8, рр. 47-52 (1996)). Описано, что силденафил имеет в 4000 раз большую селективность в отношении ФДЭ5 в сравнении с ФДЭ3 и только в 10 раз большую селективность в отношении ФДЭ5 в сравнении с ФДЭ6. Теоретически предполагается, что его относительное отсутствие селективности в отношении ФДЭ6 является основой для отклонений от нормы, связанных с цветовым зрением (различением цветов).

Хотя силденафил имел значительный коммерческий успех, он потерпел крах вследствие его значительных вредных побочных действий, в том числе внезапных приливов крови к лицу (коэффициент встречаемости 10%). Вредные побочные действия ограничивают применение силденафила в случае пациентов, страдающих от отклонений от нормы зрения, гипертензии и, что наиболее важно, применение индивидуумами, которые используют органические нитраты (^е1бк е! а1., Атег. 1. οί Сагбю1оду, 83(5А), рр. 21 (С)-28(С) (1999)).

Применение силденафила пациентами, принимающими органические нитраты, вызывает клинически значимое падение кровяного давления, которое могло бы создавать опасность для пациента. Поэтому этикетка на упаковке для силденафила дает строгие противопоказания против его применения в комбинации с органическими нитратами (например, нитроглицерином, изосорбидмононитратом, изосорбиднитратом, эритритилтетранитратом) и другими донорами оксида азота в любой форме, либо регулярно, либо периодически, так как силденафил потенциирует гипотензивные эффекты нитратов. См. С.К Соп!1 е! а1., Атег. 1. οί Сагбю1о§у, 83 (5А), рр. 29С-34С (1999). Таким образом, даже при доступности силденафила остается потребность в идентификации улучшенных фармацевтических продуктов, которые применимы в лечении сексуальной дисфункции.

Патент США № 5 859 006 Эаидап описывает некоторые тетрациклические производные, которые являются сильными ингибиторами цГМФ-специфической ФДЭ, или ФДЭ5. Сообщается, что 1С₅₀ соединений, описанных в патенте США № 5 859 006, находится в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ. Пероральная доза для таких соединений равна 0,58 мг в день для среднего взрослого пациента (70 кг). Так, сообщаются унифицированные (стандартные) дозированные лекарственные формы (таблетки или капсулы) в виде 0,2-400 мг активного соединения. Не описаны значимые вредные побочные действия, присущие соединениям, описанным в патенте США № 5 859 006.

Заявители обнаружили, что одно такое тетрациклическое производное, (6Р, 12аК)-2,3,6,7,12,12агексагидро-2-метил-6-(3,4-метилендиоксифенил)-пиразино[2',1':6,1]пиридо[3,4-Ь]индол-1,4-дион, альтернативно называемое (6В-транс)-6-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метилпиразино-[1',2':1,6]пиридо[3,4-Ь]индол-1,4-дионом, и называемое здесь Соединением (I), может быть введено в унифицированной дозе (дозе для одного приема), которая обеспечивает эффективное лечение без по

-1005416 бочных действий, связанных с продаваемым в настоящее время ингибитором ФДЭ5, силденафилом. До данного изобретения такие побочные действия считали присущими ингибированию ФДЭ5.

Важным является то, что клинические исследования заявителей обнаружили также, что может быть обеспечен эффективный продукт, имеющий пониженную тенденцию к вызыванию внезапных приливов крови к лицу у чувствительных индивидуумов. Наиболее неожиданным было то, что этот продукт может также вводиться с клинически незначимыми побочными эффектами, связанными с комбинированными действиями ингибитора ФДЭ5 и органического нитрата. Таким образом, противопоказание, которое когда-то считалось необходимым для продукта, содержащего ингибитор ФДЭ5, является необязательным при введении соединения (I) в виде унифицированной (стандартной) дозы от приблизительно 1 до приблизительно 20 мг, как описано здесь. Таким образом, данное изобретение обеспечивает эффективную терапию для сексуальной дисфункции у индивидуумов, которые прежде были не поддающимися лечению или страдали от неприемлемых побочных действий, в том числе индивидуумов, имеющих сердечнососудистое заболевание, например, индивидуумов, нуждающихся в терапии нитратами, перенесших инфаркт миокарда за более, чем три месяца, перед началом терапии сексуальной дисфункции, и страдающих от застойной сердечной недостаточности класса 1, или индивидуумов, страдающих от нарушений, связанных со зрением.

Данное изобретение обеспечивает соединение (I) в унифицированной (стандартной) дозированной лекарственной форме. То есть, данное изобретение обеспечивает фармацевтическую унифицированную дозированную лекарственную форму, пригодную для перорального введения, содержащую приблизительно 1-20 мг соединения (I).

Сущность изобретения

Данное изобретение обеспечивает фармацевтическую дозированную лекарственную форму для фармацевтического применения для человека, содержащую от приблизительно 1 до приблизительно 20 мг (6Я 12аР)-2.3.6.7.12,12а-гексагидро-2-метил-6-(3,4-метилендиоксифенил)пиразино[2',1':6,1 ]пиридо [3,4-Ь]индол-1,4-диона в унифицированной дозированной лекарственной форме, пригодной для перорального введения.

Далее, данное изобретение обеспечивает способ лечения состояний, при которых желательным является ингибирование ФДЭ5, предусматривающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, пероральной дозированной лекарственной формы, содержащей приблизительно 1-20 мг избирательного ингибитора ФДЭ5, по необходимости, до общей дозы 20 мг в день. Далее, данное изобретение обеспечивает применение пероральной дозированной лекарственной формы, содержащей избирательный ингибитор ФДЭ5, в дозе приблизительно 1-20 мг, для лечения сексуальной дисфункции.

Конкретные состояния, которые могут лечиться данным изобретением, включают в себя, но не ограничиваются ими, мужскую эректильную дисфункцию и женскую сексуальную дисфункцию, в частности, нарушение возбуждения у женщин, также известное как нарушение сексуального возбуждения у женщин.

В частности, данное изобретение относится к фармацевтической унифицированной дозированной лекарственной композиции, содержащей приблизительно 1-20 мг соединения, имеющего структурную формулу:

причем указанная унифицированная дозированная лекарственная форма пригодна для перорального введения, и к способу лечения сексуальной дисфункции с использованием этой фармацевтической содержащей унифицированную (стандартную) дозу композиции.

Подробное описание

Для задач данного изобретения, раскрытого и описанного здесь, следующие термины и аббревиатуры определены следующим образом.

Термин «контейнер» обозначает любую емкость и крышку для нее, пригодную для хранения, транспортировки, расфасовки фармацевтического продукта и/или манипулирования фармацевтическим продуктом.

Термин «1С₅₀» является мерой силы соединения в ингибировании конкретного фермента ФДЭ (например, ФДЭ1с, ФДЭ5 или ФДЭ6). 1С₅₀ представляет собой концентрацию соединения, которая приводит к 50% ингибированию фермента в эксперименте по типу единственная доза-ответ. Определение величины 1С₅₀ для соединения легко проводить по известной ίη νίίτο методологии, описанной в Υ. Сйеид с1 а1., Вюсйет. Рйагтасо1., 22, рр. 3099-3108 (1973).

Термин «листовка-вкладыш упаковки» обозначает информацию, сопровождающую этот продукт, которая обеспечивает описание того, как следует вводить продукт, вместе с данными о безопасности и

-2005416 эффективности, необходимыми для врача, фармацевта и пациента, чтобы принять информированное решение в отношении применения данного продукта. Эта листовка-вкладыш обычно рассматривается как «этикетка» для фармацевтического продукта.

Термин «пероральная дозированная лекарственная форма» используется в общем смысле для ссылки на вводимые перорально фармацевтические продукты. Пероральные дозированные лекарственные формы, признаваемые специалистами в данной области, включают в себя жидкие готовые лекарственные формы, таблетки, капсулы и желатиновые капсулы.

Термин «нарушения (аномалии) зрения» обозначает отклоняющееся от нормы зрение, характеризующееся сине-зеленым зрением, которое, как считают, обусловлено ингибированием ФДЭ6.

Термин «покраснение» обозначает эпизодическую красноту лица и шеи, приписываемую расширению сосудов, вызываемому приемом внутрь лекарственного средства, обычно сопровождающуюся ощущением тепла на лице и шее и иногда сопровождающуюся потоотделением.

Термин «свободное лекарственное средство» обозначает твердые частицы лекарственного средства, не заключенные в мелко измельченном виде в полимерный соосажденный продукт (копреципитат).

Заявляемая теперь дозированная лекарственная форма предпочтительно упакована в виде промышленного изделия для фармацевтического применения человеком, содержащего листовку-вкладыш, контейнер и дозированную лекарственную форму, содержащую приблизительно 1-20 мг соединения (I).

Листовка-вкладыш обеспечивает описание того, как вводить фармацевтический продукт, вместе с данными о безопасности и эффективности, необходимыми для врача, фармацевта и пациента, чтобы принять информированное решение в отношении применения этого продукта. Эта листовка-вкладыш обычно рассматривается как «этикетка» для фармацевтического продукта. Листовка-вкладыш, включенная в это промышленное изделие, указывает, что соединение (I) применимо в лечении состояний, при которых желательным является ингибирование ФДЭ5. Листовка-вкладыш обеспечивает также инструкции для введения одной или нескольких унифицированных дозированных лекарственных форм приблизительно 1-20 мг, по необходимости, до максимальной общей дозы 20 мг в день. Предпочтительно, эту дозу вводят при приблизительно 5-20 мг/день, более предпочтительно приблизительно 5-15 мг/день.

Наиболее предпочтительно дозу 10 мг вводят один раз в день.

Предпочтительные подлежащие лечению состояния включают в себя сексуальную дисфункцию (в том числе мужскую эректильную дисфункцию и женскую сексуальную дисфункцию и более предпочтительно нарушение возбуждения у женщин (БАЭ)). Предпочтительным подлежащим лечению состоянием является мужская эректильная дисфункция.

Важным является то, что листовка-вкладыш подтверждает применение продукта для лечения сексуальной дисфункции у пациентов, страдающих от заболевания сетчатки, например, диабетической ретинопатии или пигментного ретинита, или у пациентов, которые используют органические нитраты. Таким образом, эта листовка-вкладыш не содержит противопоказаний, связанных с этими состояниями, и, в частности, противопоказаний введения этой дозированной формы с органическим нитратом. Более предпочтительно, листовка-вкладыш не содержит также никаких предостережений или предупреждений, связанных как с заболеваниями сетчатки, в частности, пигментным ретинитом, так и с индивидуумами, склонными к отклонениям от нормы (аномалиям) зрения. Предпочтительно, эта листовка-вкладыш сообщает также коэффициент встречаемости приливов крови к лицу и шее (покраснений) ниже 2%, предпочтительно ниже 1% и наиболее предпочтительно ниже 0,5% пациентов, которым вводят эту дозированную лекарственную форму. Коэффициент встречаемости покраснения демонстрирует явное усовершенствование над прежними фармацевтическими продуктами, содержащими ингибитор ФДЭ5.

Контейнер, используемый в промышленном изделии, является общепринятым в фармацевтической практике. Обычно этот контейнер является вытяжной прозрачной упаковкой, пакетом из фольги, стеклянным или пластиковым флаконом и сопутствующими колпачком или крышкой, или другим подобным изделием, пригодным для применения пациентом или фармацевтом. Предпочтительно, контейнер имеет размер, подходящий для вмещения 1-1000 твердых дозированных форм, предпочтительно 1-500 твердых дозированных форм и, наиболее предпочтительно 5-30 твердых дозированных форм.

Пероральные дозированные лекарственные формы, общепринятые для специалистов в данной области, включают в себя например, такие формы, как жидкие композиции, таблетки, капсулы и желатиновые капсулы. Предпочтительно эти дозированные лекарственные формы являются твердыми дозированными лекарственными формами, в частности, таблетками, содержащими приблизительно 1-20 мг соединения (I). Любые фармацевтически приемлемые наполнители для перорального применения пригодны для приготовления таких дозированных лекарственных форм. Подходящие фармацевтические дозированные лекарственные формы включают в себя соосажденные формы, описанные, например, в патенте США № 5 985 326 (Вийет), включенном здесь в качестве ссылки. В предпочтительных вариантах унифицированная дозированная лекарственная форма данного изобретения является твердым веществом, не содержащим соосажденной формы соединения (I), и предпочтительнее содержит твердое соединение (I) в виде свободного лекарственного средства.

Предпочтительно, эти таблетки содержат фармацевтические наполнители, обычно признанные как безопасные, такие как лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, карбонат кальция, стеарат

-3005416 магния, стеариновая кислота, тальк и коллоидальный диоксид кремния, и их готовят стандартными фармацевтическими способами изготовления, описанными в Вет1ид!ои'к Рйагтасеи!1са1 8с1еисек, 18^4Ь Еб., Маск РиЫщЫид Со., Еак!ои, РА (1990). Такие способы включают в себя, например, мокрую грануляцию с последующим высушиванием, размалыванием и прессованием в таблетки с пленочным покрытием или без него; сухую грануляцию с последующим размалыванием, прессованием в таблетки с пленочным покрытием или без него; сухое смешивание с последующим прессованием в таблетки с пленочным покрытием или без него; отлитые формованием в формах таблетки; мокрую грануляцию с высушиванием и заполнением желатиновых капсул; сухую смесь, помещенную в желатиновые капсулы; или суспензию или раствор, помещенные в желатиновые капсулы. Обычно, твердые дозированные формы имеют идентификационные знаки, которые нанесены непрокрашиванием на ранее окрашенные участки или тиснением на поверхности.

Данное изобретение основывается на детальных экспериментах и клинических испытаниях и неожиданных наблюдениях, что побочные действия, которые ранее считали признаком ингибирования ФДЭ5, могут быть уменьшены до клинически незначимых уровней посредством выбора соединения и унифицированной дозы для одного приема. Это неожиданное наблюдение позволило разработать унифицированную дозированную форму, которая включает в себя соединение (I) в унифицированных дозированных лекарственных формах приблизительно 1-20 мг, которая при пероральном введении минимизирует нежелательные побочные эффекты, ранее считавшиеся неизбежными. Эти побочные эффекты включают в себя покраснение лица, отклонения от нормы зрения и значимое снижение кровяного давления при введении соединения (I) одного или в комбинации с органическим нитратом. Минимальное действие соединения (I), вводимого в виде унифицированных дозированных форм приблизительно 1-20 мг, на ФДЭ6 позволяет также вводить избирательный ингибитор ФДЭ5 пациентам, страдающим от заболевания сетчатки, такого как диабетическая ретинопатия или пигментный ретинит.

Соединение (I) имеет следующую структурную формулу:

Было продемонстрировано в клинических исследованиях на человеке, что соединение структурной формулы (I) проявляет минимальное действие на систолическое кровяное давление при введении с органическими нитратами. В противоположность этому, силденафил демонстрирует в 4 раза более высокое уменьшение систолического кровяного давления над плацебо, что приводит к противопоказаниям в листовке-вкладыше ВИАГРЫ® и к предостережениям в отношении определенных пациентов.

Нижеследующее иллюстрирует величины Ε₅₀ ФДЭ5 и ФДЭ6 для соединения структурной формулы (I), определенные описанными здесь процедурами.________________________________________

Соединение	Ю50 ФДЭ5 (нМ)	Ю50 ФДЭ6 (нМ)	ФДЭ6/ФДЭ5
1	2,5	3400	1300

Соединение структурной формулы (I) дополнительно демонстрирует Κ.'₅₀ против ФДЭ1с 10000 и отношение ФДЭ1с/ФДЭ5 4000.

Препараты

Препарат ФДЭ5 человека

Рекомбинантное получение ФДЭ5 человека проводили по существу, как описано в примере 7 патента США № 5 702 936, включенного здесь в качестве ссылки, за исключением того, что использовали дрожжевой трансформирующий вектор, происходящий из основной плазмиды ΑΌΗ2, описанный в V. Рпсе е! а1., Ме!йобк ίη Εηζνιηοίοβν, 1985, радек 308-318 (1990), в который были включены промоторная и терминаторная последовательности ΑΌΗ2 дрожжей, а не промоторная и терминаторная последовательности ΑΌΗ1, и хозяин 8ассйаготусек сегеуыае был протеаза-недостаточным штаммом В12-54, депонированным 31 августа 1998 г. Американской Коллекцией Типовых Культур, Маиаккак, νίΓβίηίη под номером доступа АТСС 74465. Трансформированные клетки-хозяева выращивали в среде 2Х 8С-1еи, рН 6,2, с микроэлементами и витаминами. Спустя 24 ч среду УЕР, содержащую глицерин, добавляли до конечной концентрации 2Х УЕР/3% глицерин. Спустя приблизительно 24 ч клетки собирали, промывали и хранили при -70°С. Осадки клеток (29 г) оттаивали на льду с равным объемом лизисного буфера (25 мМ ТрисС1, рН 8, 5 мМ МдС1₂, 0,25 мМ дитиотреитол, 1 мМ бензамидин и 10 мкМ ΖηδΟ₄). Клетки лизировали в микрофлюидизаторе с Ν₂ при 20000 фунтах на кв. дюйм (138 МПа). Лизат центрифугировали и фильтровали через одноразовые фильтры 0,45 мкм. Фильтрат наносили на колонку 150 мл О 8ерйагоке Бак! Е1о\у (Рйагтас1а). Колонку промывали 1,5 объемами буфера А (20 мМ Бис-Трис-пропан, рН 6,8, 1 мМ МдС1₂, 0,25 мМ дитиотреитол, 10 мкМ ΖηδΟ₄) и элюировали ступенчатым градиентом 125 мМ №1С1 в буфере А с последующим линейным градиентом 125-1000 мМ №1С1 в буфере А.

-4005416

Активные фракции из линейного градиента наносили на керамическую гидроксиапатитную колонку 180 мл в буфере В (20 мМ Бис-Трис-пропан (рН 6,8), 1 мМ МдС1₂, 0,25 мМ дитиотреитол, 10 мкМ Ζη§Ο₄ и 250 мМ КС1). После нанесения колонку промывали 2 объемами буфера В и элюировали линейным градиентом 0-125 мМ фосфата калия в буфере В. Активные фракции объединяли, осаждали 60% сульфатом аммония и ресуспендировали в буфере С (20 мМ Бис-Трис-пропан, рН 6,8, 125 мМ ЫаС1, 0,5 мМ дитиотреитол и 10 мкМ ΖηδΟ₄). Этот пул наносили на колонку 8ерйасгу1 8-300 НК 140 мл и элюировали буфером С. Активные фракции разбавляли 50% глицерином и хранили при -20°С. Полученные препараты имели чистоту около 85% согласно электрофорезу в ДСН-ПААГ.

Анализ на ФДЭ-активность

Активность ФДЭ5 может быть измерена в стандартных для данной области анализах. Например, удельная активность любой ФДЭ может быть определена следующим образом. Анализы ФДЭ с использованием способа разделения при помощи активированного угля выполняли по существу, как описано в Ьоидйпеу е! а1., (1996), Тйе 1оита1 о£ Вю1одюа1 СйетКйу, 271:796-806. В этом анализе активность ФДЭ5 превращает [³²Р]цГМФ в [³²Р]5'ГМФ пропорционально количеству присутствующей активности ФДЭ5. Затем [³²Р]5'ГМФ количественно превращают в свободный [³²Р]фосфат и немеченый аденозин действием 5'-нуклеотидазы яда змеи. Таким образом, количество высвобождающегося [³²Р]фосфата пропорционально активности фермента. Анализ проводят при 30°С в реакционной смеси 100 мкл, содержащей (конечная концентрация) 40 мМ Трис-С1 (рН 8,0), 1 мкМ Ζη8Ο4, 5 мМ МдС12 и 0,1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина. ФДЭ5 присутствует в количествах, которые дают <30% общий гидролиз субстрата (условия линейного анализа). Реакционную смесь инициируют добавлением субстрата (1 мМ [³²Р]цГМФ) и смесь инкубируют в течение 12 мин. Затем добавляют семьдесят пять (75) мкг яда Сго(а1ик а(гох и инкубирование продолжают в течение еще 3 мин (всего 15 мин). Реакцию останавливают добавлением 200 мл активированного угля (суспензии 25 мг/мл в 0,1 М МаН2РО₄, рН 4). После центрифугирования (750 х д в течение 3 мин) для осаждения активированного угля берут пробу супернатанта для определения радиоактивности в сцинтилляционном счетчике и рассчитывают удельную активность ФДЭ5. Препараты имели удельные активности около 3 мкмоль цГМФ, гидролизованного в минуту на миллиграмм белка. Препарат бычьей ФДЭ6

Бычья ФДЭ6 была предоставлена доктором N. Унтаих, ΙΝ8ΕΚΜ И338, 8!гакЬоигд. Бычьи сетчатки получали, как описано Унтаих е! а1., РЕВ8 Ьейегк, 12(6), рр. 325-328 (1971) и см. также А. 8йагатаууа е! а1., Ехр. Еуе Кек., 25, рр. 163-169 (1977). Вкратце, если нет других указаний, все операции проводили на холоде и в тусклом красном свете. Глаза хранили на холоде и в темноте до четырех часов после забивания животных.

Получение наружного сегмента бычьей сетчатки (КО8) проводили в основном согласно процедурам, описанным 8сй1сй1 е! а1., 1. Бю1. Сйет., 224:529 (1969). В типичном эксперименте 35 бычьих сетчаток растирали в ступке с 35 мл 0,066 М фосфатного буфера, рН 7,0, доведенного до 40% сахарозой, с последующей гомогенизацией в гомогенизаторе Поттера (20 двойных ходов поршня). Суспензию центрифугировали при 25000 х д в течение 20 мин. Осадок гомогенизировали в 7,5 мл 0,006 М фосфатного буфера (40% по сахарозе) и осторожно наслаивали под 7,5 мл фосфатного буфера (не содержащего сахарозы). Центрифугирование проводили в бакетном роторе (со свободно качающимися пробирками) при 45000 х д в течение 20 мин и получали осадок, который является черным в нижней части и имеет также красную полосу на межфазной поверхности 0,066 М фосфат-40% сахароза/0,066 М фосфат (неочищенный КО8). Этот красный материал на межфазной поверхности удаляли, разбавляли фосфатным буфером, откручивали до осадка и перераспределяли в забуференной 40% сахарозе, как описано выше. Эту процедуру повторяли 2 или 3 раза, пока не переставал образовываться осадок. Очищенный КО 8 промывали в фосфатном буфере и наконец откручивали до осадка при 25000 х д в течение 20 мин. Затем все материалы хранили в замороженном виде до использования.

Гипотонические экстракты готовили суспендированием выделенного КО8 в 10 мМ Трис-С1 рН 7,5, 1 мМ ЭДТА и 1 мМ дитиоэритрите с последующим центрифугированием при 100000 д в течение 30 мин.

Сообщалось, что этот препарат имел удельную активность около 35 нмоль цГМФ, гидролизованного в минуту на миллиграмм белка.

Препарат ФДЭ1с из клеток 8робор!ега £ид1регба (8£9)

Клеточные осадки (5 г) оттаивали на льду с 20 мл лизисного буфера (50 мМ МОР8 рН 7,4, 10 мкМ Ζη8Ο₄, 0,1 мМ СаС1₂, 1 мМ ДТТ, 2 мМ бензамидин-НС1, 5 мкг/мл каждого из пепстатина, лейпептина и апротенина). Клетки лизировали пропусканием через Ргепсй ргеккше-элемент (8ЬМ-Аттсо) при поддержании температур ниже 10°С. Полученный гомогенат клеток центрифугировали при 36000 об/мин при 4°С в течение 45 мин в ультрацентрифуге Бекмана с использованием ротора типа ΤΙ45. Супернатант выбрасывали, а полученный осадок ресуспендировали с 40 мл буфера для солюбилизации (лизисный буфер, содержащий 1М №С1, 0,1 М МдС1₂, 1 мМ СаС1₂, 20 мкг/мл кальмодулина и 1% сульфобетаин 8В12 (Ζ3-12) обработкой ультразвуком с использованием устройства настройки У1ЬгаСе11 с микронаконечником в течение 3 х 30 с.) Это выполняли в смеси измельченного льда с солью для охлаждения. После обработки ультразвуком смесь медленно смешивали в течение 30 мин при 4°С для завершения солю

-5005416 билизации мембраносвязанных белков. Эту смесь центрифугировали в ультрацентрифуге Бекмана с использованием ротора типа ΤΙ45 при 36000 об/мин в течение 45 мин. Супернатант разбавляли лизисным буфером, содержащим 10 мкг/мл ингибитора I и II калпаина. Осажденный белок центрифугировали в течение 20 мин при 9000 об/мин в роторе Бекмана 1Ά-10. Затем извлеченный супернатант подвергали хроматографии на МнпеЦс В1ие АР-агарозе.

Для хроматографии на колонке МипеЦс В1ие АР-агарозы смолу сначала защищали нанесением 10 колоночных объемов 1% поливинилпирролидина (т.е. М\У 40000) для блокирования сайтов неспецифического связывания. Рыхло связанный РУР-40 удаляли промыванием 10 колоночными объемами 2 М №С1 и 10 мМ цитратом натрия рН 3,4. Непосредственно перед добавлением солюбилизированной пробы ФДЭ1с3 колонку уравновешивали 5 колоночными объемами колоночного буфера А (50 мМ МОР8 рН 7,4, 10 мкМ ΖηδΟ₄, 5 мМ МдС1₂, 0,1 мМ СаС1₂, 1 мМ ДТТ, 2 мМ бензамидин-НС1).

Солюбилизированную пробу наносили на колонку при скорости тока 2 мл/мин с рециркуляцией, так что всю пробу наносили 4-5 раз на протяжении 12 ч. После завершения нанесения колонку промывали 10 колоночными объемами колоночного буфера А, затем 5 колоночными объемами колоночного буфера В (колоночный буфер А, содержащий 20 мМ 5'-АМФ) и затем 5 колоночными объемами колоночного буфера С (50 мМ МОР8 рН 7,4, 10 мкМ ΖηδΟ₄, 0,1 мМ СаС1₂, 1 мМ дитиотреитол и 2 мМ бензамидин-НС1). Фермент элюировали в виде трех последовательных пулов. Первый пул состоял из фермента из промывки 5 колоночными объемами колоночного буфера С, содержащего 1 мМ цАМФ. Второй пул состоял из фермента из промывки 10 колоночными объемами колоночного буфера С, содержащего 1 М №1С1. Конечный пул фермента состоял из промывки 5 колоночными объемами колоночного буфера С, содержащего 1 М ЫаС1 и 20 мМ цАМФ.

Активные пулы фермента собирали и циклические нуклеотиды удаляли посредством общепринятой гель-фильтрационной хроматографии или хроматографии на гидроксиапатитных смолах. После удаления циклических нуклеотидов пулы фермента диализовали против диализного буфера, содержащего 25 мМ МОР8 рН 7,4, 10 мкМ ΖηδΟ₄, 500 мМ ЫаС1, 1 мМ СаС1₂, 1 мМ дитиотреитол, 1 мМ бензамидин-НС1, с последующим диализом против диализного буфера, содержащего 50% глицерин. Фермент быстро замораживали при помощи сухого льда и хранили при -70°С.

Полученные препараты имели чистоту около >90% согласно электрофорезу в ДСН-ПААГ. Эти препараты имели удельные активности около 0,1-1,0 мкмоль цАМФ, гидролизованного в минуту на миллиграмм белка.

Определения 1С₅₀

Представляющим интерес параметром в оценке силы конкурентного ингибитора фермента ФДЭ5 и/или ФДЭ1с и ФДЭ6 является константа ингибирования, т.е. К₁. Этот параметр может быть аппроксимирован определением 1С₅₀, которая представляет собой концентрацию ингибитора, которая приводит к 50% ингибированию фермента, в эксперименте типа единственная доза-ответ при следующих условиях.

Концентрация ингибитора является всегда гораздо более высокой, чем концентрация фермента, так что концентрацию свободного ингибитора (которая неизвестна) аппроксимируют посредством общей концентрации ингибитора (которая известна).

Выбирают подходящий диапазон концентраций ингибитора (т.е. концентрации ингибитора по меньшей мере в несколько раз большие и в несколько раз меньшие, чем К₁, присутствуют в этом эксперименте). Обычно концентрации ингибитора находятся в диапазоне от 10 нМ до 10 мкМ.

Концентрации фермента и субстрата выбирают таким образом, что менее 20% субстрата потребляется в отсутствие ингибитора (обеспечивая, например, максимальный гидролиз субстрата от 10 до 15%), так что активность фермента является приблизительно постоянной на протяжении анализа.

Концентрация субстрата составляет менее 1/10 константы Михаэлиса (К_т). При этих условиях 1С₅₀будет близко приближаться к К₁. Это вытекает из уравнения Сйепд-РгикоГБ касающегося этих двух параметров: 1С₅₀=К₁(1+8/К_т), с (1+8/К_т) приблизительно 1 при низких величинах 8/К_т.

Величину 1С₅₀ оценивают приближенно из точек данных посредством применения этих данных к подходящей модели взаимодействия фермента и ингибитора. Когда известно, что это взаимодействие включает в себя простую конкуренцию ингибитора с субстратом, может быть использована двухпараметрическая модель:

Υ=Α/(1+χ/Β) где Υ обозначает активность фермента, измеренную при концентрации ингибитора х, А обозначает активность фермента в отсутствие ингибитора, а В обозначает 1С₅₀ (см. Υ. Сйепд е1 а1., Вюсйет. Рйагтасой, 22:3099-3108 (1973)).

Действия ингибиторов данного изобретения на ферментативную активность препаратов ФДЭ5 и ФДЭ6, описанных выше, оценивали в любом из двух анализов, которые отличались один от другого главным образом на основе масштаба и дали по существу одни и те же результаты в отношении величин 1С₅₀. Оба анализа включали в себя модификацию процедуры \Уе11к е1 а1., Вюсйип. Вюрйук. Ас!а, 384:430 (1975). Первый из анализов выполняли в общем объеме 200 мкл, содержащем 50 мМ Трис рН 7,5, 3 мМ ацетат магния, 1 мМ ЭДТА, 50 мкг/мл нуклеотидазы яда змеи и 50 нМ [³Н]-цАМФ (Атегкйат). Соединения данного изобретения растворяли в ДМСО, присутствующем в конечной концентрации 2% в этом

-6005416 анализе. Реакционные смеси анализа инкубировали в течение 30 мин при 30°С и реакцию останавливали добавлением 800 мкл 10 мМ Трис рН 7,5, 10 мМ ЭДТА, 10 мМ теофиллина, 0,1 мМ аденозина и 0,1 мМ гуанозина. Смеси наносили на колонки 0,5 мл ОЛЕ 8ерйабех и элюировали 2 мл 0,1 М формиата (рН 7,4). Элюированную радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетом в Орбрйаке Н|8аГе 3.

Второй микропланшетный анализ ФДЭ проводили с использованием планшетов для мультискрининга и вакуумного фильтрующего устройства. Реакционная смесь анализа (100 мкл) содержала 50 мМ Трис рН 7,5, 5 мМ ацетат магния, 1 мМ ЭДТА и 250 мкг/мл нуклеотидазы яда змеи. Другие компоненты этой реакционной смеси были такие же, как описанные выше. В конце инкубирования общий объем реакционных смесей наносили на микроколоночный планшет ОЛЕ 8ерйабех посредством фильтрования. Свободную радиоактивность элюировали 200 мкл воды, из которых аликвоты по 50 мкл анализировали сцинтилляционным счетом, как описано выше.

Следующие примеры представлены для дополнительной иллюстрации заявленного изобретения. Объем данного изобретения не должен рассматриваться как состоящий только из следующих примеров.

Пример 1.

Соединение (I) получали, как описано в патенте США 5 859 006, и готовили в виде таблеток с использованием мокрой грануляции. Повидон растворяли в воде с получением 10% раствора. Активное соединение, микрокристаллическую целлюлозу, натрийкроскармелозу и лаурилсульфат натрия добавляли в миксер с высоким сдвигающим усилием и смешивали в течение 2 мин. Порошки гранулировали мокрой грануляцией с раствором повидона и дополнительным количеством воды, необходимым для завершения грануляции. Полученную смесь сушили в сушилке с псевдоожиженным слоем с входящим воздухом при 70°С ± 5°С, пока потеря при сушке на становилась менее 2,5%. Гранулы пропускали через Сотб с подходящим сетчатым экраном (или ситом) и добавляли в подходящий миксер. Экстрагранулярные натрий-кроскармелозу и лаурилсульфат натрия и коллоидальный безводный диоксид кремния пропускали через подходящее сито (например, 500 микрон) и добавляли в миксер и смешивали в течение 5 мин. Добавляли стеарат магния и смешивали в течение 2 мин. Смесь прессовали до целевого отношения компрессия/вес 250 мг с использованием круглой (9 мм) обычной вогнутой пресс-формы.

Центральную часть таблеток покрывали водной суспензией Орабгу ОУ-8-7322 с использованием Ассе1асо1а (или подобной ванны для покрытия) с применением входящего воздуха при 50-70°С, пока вес таблетки не увеличивался приблизительно на 8 мг. Орабгу ОУ-8-7322 содержит метилгидроксипропилцеллюлозу ΡΙι.Ειιγ. диоксид титана Рй.Еиг., Триацетин И8Р. Орабгу увеличивает вес каждой таблетки до приблизительно 258 мг. Количество пленочного покрытия, нанесенного на таблетку, может быть меньше указанного в зависимости от эффективности процесса.

Таблетки помещают в вытяжные прозрачные упаковки и сопровождают листовкой-вкладышем, описывающей безопасность и эффективность данного соединения.__________________

Компонент	Составы (мг на таблетку)
Избирательный ингибитор ФДЭ5¹'	1	5
Фталат гидроксипропилметилцеллюлозы	1	5
Микрокристаллическая целлюлоза	221,87	213,87
Натрий-кроскармелоза	5,00	5,00
Лаурилсульфат натрия	2,50	2,50
Повидон КЗО	9,38	9,38
Очищенная вода, ΙΙ3Ρ (вода для промывания)	ц.з.	Ц.5.
Натрий-кроскармелоза	5,0	5,0
Лаурилсульфат натрия	2,50	2,50
Коллоидальный безводный диоксид кремния	0,50	0,50
Стеарат магния	1,25	1,25
Общая центральная часть (подобщая)	250,00	250,00
(Пленочное покрытие Орабгу ΟΥ-8-7322)	около 8 мг	около 8 мг

^υ соединение (I)

Пример 2.

Следующий состав используют в получении законченной дозированной формы, содержащей 10 мг соединения (I).

-7005416

Моногидрат лактозы (высушенный распылением)

4,00

Г идроксипропилцеллюлоза

Натрий-кроскармелоза

9,00

Гидроксипропилцеллюлоза (ЕЕ)

Лаурилсульфат натрия

35,00

Наружные порошки

Микрокристаллическая целлюлоза (гранулярная-102)

Натрий-кроскармелоза

Стеарат магния (растительный)

Всего

37,50

250 мг

Пленочное покрытие (приблизительно)

11,25

Очищенную воду, И8Р, используют в приготовлении таблеток. Воду удаляют во время процессинга

Очищенную воду, И8Р, используют в приготовлении таблеток. Воду удаляют во время процессинга и минимальные количества остаются в законченном продукте.

Таблетки получают с использованием способа мокрой грануляции. Постадийное описание этого способа является следующим. Лекарственное средство и наполнители, подлежащие грануляции, для надежности просеивают. Избирательный ингибитор ФДЭ5 смешивают в сухом виде с моногидратом лактозы (высушенным распылением), гидроксипропилцеллюлозой, натрийкроскармелозой и моногидратом лактозы. Полученную порошкообразную смесь гранулируют с водным раствором гидроксипропилцеллюлозы и лаурилсульфата натрия с использованием гранулятора Ро\\те_\ или другого подходящего гранулятора с высоким сдвигающим усилием. Может быть добавлено дополнительное количество воды для достижения желательной конечной точки. Затем используют мельницу для разбивания комков мокрого гранулята и облегчения высушивания. Мокрый гранулят сушат с использованием сушилки с псевдоожиженным слоем или в сушильном шкафу. Как только материал высушен, его сортируют по размеру для элиминации любых крупных агломератов. Микрокристаллическую целлюлозу, натрийкроскармелозу и стеарат магния для надежности просеивают и добавляют к сухим отсортированным по размеру гранулам. Эти наполнители и сухой гранулят смешивают до однородности с использованием барабанного смесителя, ленточно-винтовой мешалки или другого подходящего оборудования. Процесс смешивания может быть разделен на две фазы. Микрокристаллическую целлюлозу, натрийкроскармелозу и высушенный гранулят добавляют в смеситель и смешивают во время первой фазы, с последующим добавлением стеарата магния к этому грануляту и проведения второй фазы смешивания.

Затем смешанный гранулят прессуют в таблетки с использованием ротационного компрессора. Центральные части таблеток покрывают пленкой с использованием водной суспензии подходящей окрашенной смеси в ванне для нанесения покрытия (например, Асе11а Со(а). Покрытые таблетки могут быть слегка опудрены тальком для улучшения свойств манипулирования таблетками.

Таблетки помещают в пластиковые контейнеры (30 таблеток/контейнер) и сопровождают листовкой-вкладышем, описывающей безопасность и эффективность данного соединения.

Пример 3.

Следующий состав используют в получении законченной дозированной формы, содержащей 5 мг соединения (I).

-8005416

Г идроксипропилцеллюлоза	2,00
Натрий-кроскармелоза	4,50
Гидроксипропилцеллюлоза (ЕЕ)	0,875
Лаурилсульфат натрия	0,35
Наружные порошки
Микрокристаллическая целлюлоза (гранулярная-102)	18,75
Натрий-кроскармелоза	3,50
Стеарат магния (растительный)	0,63
Всего	125 мг
Пленочное покрытие (приблизительно)	6,875

Дозированную лекарственную форму примера 3 готовят способом, идентичным получению дозированной лекарственной формы примера 2.

Пример 4.

Капсула с раствором
Ингредиент	мг/капсула	процент(%)
Избирательный ингибитор ΦΑ35^υ	10	2
ПЭГ400 ΝΕ	490	98
Вес заполненных капсул	500	100

Желатиновые капсулы точно заполняют накачиванием точного заполняющего объема предварительно растворенной композиции лекарственного средства в частично заделанную полость капсулы. Сразу же после введения заполнителя в виде композиции лекарственного раствора капсулу полностью заделывают нагреванием (тепловой сваркой).

Капсулы помещают в пластиковые контейнеры и сопровождают листовкой-вкладышем.

Пример 5.

Данное исследование было рандомизированным, двояко-слепым, плацебо-контролируемым, имеющим двухфакторную перекрестную схему клиническим исследованием взаимодействия фармакологических лекарственных средств, которое оценивало гемодинамические эффекты совместного введения избирательного ингибитора ФДЭ5 (т.е. соединения (I)) и кратковременно действующих нитратов на здоровых волонтеров мужчин. В этом исследовании субъекты получали либо соединение (I) в дозе 10 мг, либо плацебо, один раз в день в течение семи дней. На шестой или седьмой день эти субъекты получали подъязычно нитроглицерин (0,4 мг) в супинированном положении (лежа на спине) на ортостатическом (наклоняющемся) столе. Нитроглицерин вводили через 3 ч после введения соединения (I) и все субъекты держали таблетку нитроглицерина под их языком до полного растворения. Субъектов наклоняли до 70°С головой вверх каждые 5 мин в течение в целом 30 мин с измерением кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Не было прерываний исследования среди двадцати двух здоровых субъектовмужчин (в возрасте 19-60 лет), которые были включены в это исследование.

В предварительном анализе этого исследования соединение (I) хорошо переносилось и не было серьезных вредных побочных действий. Не было изменений, вызываемых соединением (I), в лабораторных оценках безопасности или в ЭКГ с 12 отведениями. Наиболее обычными побочными явлениями были головная боль, диспепсия и боль в спине. Соединение (I) продемонстрировало минимальное (если оно вообще было) действие на среднее систолическое кровяное давление и среднее максимальное индуцированное нитроглицерином уменьшение систолического кровяного давления.

-9005416

Пример 6.

В двух рандомизированных, двояко-слепых контролируемых плацебо исследованиях соединение (I) вводили пациентам, нуждающимся в этом, в диапазоне доз, как при ежедневном введении, так и при терапии «по потребности», для половых сношений и полового акта в домашней обстановке. Дозы от 5 до 20 мг соединения (I) были эффективными и демонстрировали менее 1% приливов крови к лицу и шее и не было сообщений об отклонениях от нормы зрения. Было обнаружено, что доза 10 мг соединения (I) была полностью эффективной и показала минимальные побочные действия.

Повышенную эректильную функцию определяли по Международному индексу эректильной функции (ПЕБ) (Кокеп с1 а1., Иго1оду, 49, рр. 822-830 (1997)), дневникам сексуальных попыток и вопросу полного удовлетворения. Соединение (I) значимо улучшало процент успешных попыток полового акта, в том числе способности получать и сохранять эрекцию как при режиме введения «по потребности», так и при режиме ежедневного введения дозы лекарственного средства.

Пример 7.

Третье клиническое исследование было рандомизированным, двояко-слепым, контролируемым плацебо исследованием соединения (I), вводимого «по потребности» пациентам с мужской эректильной дисфункцией. Соединение (I) вводили на протяжении периода восьми недель в лечении мужской эректильной дисфункции (ЭД). Эректильную дисфункцию (ЭД) определяют как стойкую неспособность получать и/или сохранять эрекцию, адекватную для достижения удовлетворительной сексуальной активности. Введение «по потребности» определяют как дробное (прерывистое) введение соединения (I) перед ожидаемой сексуальной активностью.

Популяция исследования состояла из 212 мужчин в возрасте по меньшей мере 18 лет с легкойтяжелой эректильной дисфункцией. Соединение (I) вводили перорально в виде таблеток или соосажденных продуктов, полученных в соответствии с патентом США № 5 985 326 (ВиБег). Соединение (I) вводили в дозах 2 мг, 5 мг, 10 мг и 25 мг «по потребности» и не более, чем один раз каждые 24 ч.

Лечение нитратами, азоловыми противогрибковыми средствами (например, кетоконазолом или итраконазолом), варфарином, эритромицином или антиандрогенами не разрешалось ни в одном случае во время этого исследования. Не разрешались также другие одобренные или экспериментальные лекарственные средства, лечения или приспособления, используемые для лечения ЭД. Сорок одному субъекту вводили плацебо.

Двумя первичными переменными эффективности были способность субъекта проникать в его партнера и его способность сохранять эрекцию во время полового акта, измеряемые по Международному индексу эректильной функции (ПЕБ). Анкета (опросник) ЛЕБ содержит пятнадцать вопросов и является краткой, достоверной мерой эректильной дисфункции (см. КС. Кокеп е1 а1., Иго1оду, 49, рр. 822-830 (1997)).

Вторичными переменными эффективности были балльные оценки согласно ПЕБ для эректильной функции, оргазменной функции, сексуального желания, удовлетворения половым актом и общего удовлетворения; способности пациента достигать эрекции, способности введения его полового члена во влагалище его партнера, завершения полового акта эякуляцией, удовлетворения степенью твердости его эрекции и общего удовлетворения, причем все эти показатели измерялись при помощи дневника показателей полового акта (8ЕР); и вопроса общей оценки, задаваемого в конце периода лечения. 8ЕР представляет собой дневник-инструмент пациента, документирующий каждое сексуальное сношение на протяжении хода данного исследования.

Аспект безопасности данного исследования включал в себя всех зарегистрированных для участия в исследовании субъектов и его оценивали с использованием оценки всех сообщенных побочных явлений и изменений в клинических лабораторных показателях, жизненно важных признаках, результатах физического обследования и результатах электрокардиограмм.

В конечной точке исследования, процент пациентов, которые оценивали их способность проникновения (вопрос 3 ПЕБ) как «почти всегда или всегда», был следующим: 17,5% в группе плацебо, 38,1% в группе 2 мг, 48,8% в группе 5 мг, 51,2% в группе 10 мг и 83,7% в группе 25 мг. Сравнения выявили статистически значимые различия в изменении способности проникновения между плацебо и всеми уровнями доз соединения (I).

В конечной точке % пациентов, которые оценивали их способность сохранять эрекцию (вопрос 4 ПЕБ) во время полового акта как «почти всегда или всегда», был следующим: 10,0% в группе плацебо, 19,5% в группе 2 мг, 32,6% в группе 5 мг, 39,0% в группе 10 мг и 69,0% в группе 25 мг. Сравнение выявило статистически значимые различия в изменении способности проникновения между плацебо и тремя более высокими уровнями доз соединения (I).

Это исследование включало в себя также оценку безопасности. Возникающее в ходе лечения побочное действие определяют как состояние, не присутствующее при базовой линии, которое появляется после базовой линии, или состояние, присутствующее при базовой линии, которое увеличивается по тяжести после базовой линии. Наиболее обычными сообщенными возникающими при лечении побочными событиями были головная боль, диспепсия и боль в спине. Встречаемость возникающих в результате лечения побочных явлений, по-видимому, связана с дозой.

-10005416

В целом, данное исследование продемонстрировало, что все четыре дозы соединения (I), а именно, 2, 5, 10 и 25 мг, принимаемые «по потребности», производили значимое улучшение, относительно плацебо, в сексуальной функции мужчин с эректильной дисфункцией, согласно оценкам с использованием ПЕР, согласно дневникам пациентов, оценивающим частоту успешного полового акта и удовлетворение половым актом, и согласно общей оценке.

Объединенные результаты из клинических исследований показали, что введение соединения (I) эф фективно лечит мужскую эректильную дисфункцию, как иллюстрируется в следующей таблице. _____ΙΙΕΡ-область эректильной функции (изменение от базовой линии (фона))_____ Доза на один прием Соединения 1)η Среднее ± 8Р Р

η обозначает число субъектов, 8Р обозначает стандартное отклонение.

Однако на основании объединенных клинических исследований наблюдалось также, что процент возникающих при лечении побочных явлений увеличивался с увеличением дозы для одного приема соединения (I), как показано в следующей таблице._____________________________________

Возникающие при лечении побочные явления (%)

Доза для одного приема Соединения (I) (мг)

Побочное явление	Плацебо	2	5	10	25	50	100
Головная боль	10	12	10	23	29	34	46
Диспепсия	6	3	14	13	19	20	25
Боль в спине	5	3	3	15	18	24	22
Миалгия	3	0	3	9	16	20	29
Ринит	3	7	3	4	4	0	2
Конъюнктивит	1	0	1	1	0	2	5
Отек век	0	0	0	1	1	2	3
Покраснение	0	0	0	<1	0	3	7
Отклонения	0	0	0	0	0	0	0
зрения

Приведенная выше таблица показывает увеличение побочных явлений при стандартных дозах для одного приема 25 мг-100 мг. Таким образом, даже хотя эффективность в лечении ЭД наблюдалась при дозах 25-100 мг, следует учитывать побочные явления, наблюдаемые от доз 25 мг до доз 100 мг.

Согласно данному изобретению, стандартная доза для одного приема приблизительно 1-20 мг, предпочтительно приблизительно 2-20 мг, более предпочтительно приблизительно 5-20 мг и наиболее предпочтительно приблизительно 5-15 мг соединения (I), вводимая максимально до 20 мг на период 24 ч, как эффективно лечит ЭД, так и минимизирует или элиминирует появление вредных побочных эффектов. Важно, что не сообщались отклонения от нормы зрения и по существу элиминировалось покраснение лица и шеи. Неожиданно, кроме лечения ЭД, с дозой соединения (I) приблизительно 1-20 мг, с минимальными вредными побочными эффектами, индивидуумы, подвергающиеся терапии нитратами, могут также лечиться по поводу ЭД с использованием способа и композиции данного изобретения.

Принципы, предпочтительные варианты и способы применения данного изобретения были описаны в предыдущем описании. Однако, данное изобретение подразумевает защиту здесь, заключающуюся в том, что оно не должно рассматриваться как ограничиваемое конкретными описанными формами, так как они должны рассматриваться как иллюстративные, а не как ограничительные. Вариации и изменения могут быть произведены специалистами в данной области без отхода от идеи данного изобретения.

Claims

1. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма, пригодная для перорального введения и содержащая от приблизительно 1 мг до приблизительно 20 мг, до максимальной дозы 20 мг в день соединения, имеющего структурную формулу

-11005416

дозированная лекарственная форма по п.1, содержащая дозированная лекарственная форма по п.1, содержащая дозированная лекарственная форма по п.1, содержащая дозированная лекарственная форма по п.2, содержащая дозированная лекарственная форма по п.3, содержащая дозированная лекарственная форма по п.3, содержащая дозированная лекарственная форма по п.3, содержащая

2. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 2-20 мг соединения.

3. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 5-20 мг соединения.

4. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 1-5 мг соединения.

5. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 2,5 мг соединения.

6. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 5 мг соединения.

7. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 10 мг соединения.

8. Фармацевтическая унифицированная приблизительно 20 мг соединения.

9. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по любому из пп.1-8, где унифицированная доза находится в форме, выбранной из группы, состоящей из жидкости, таблетки, капсулы и желатиновой капсулы.

10. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по любому из пп.1-8, где унифицированная доза находится в форме таблетки.

11. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по любому из пп.1-8, пригодная для использования в лечении состояния, в котором желательным является ингибирование ФДЭ5.

12. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по состояние является сексуальной дисфункцией.

13. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по сексуальная дисфункция является мужской эректильной дисфункцией.

14. Фармацевтическая унифицированная дозированная лекарственная форма по сексуальная дисфункция является нарушением возбуждения у женщин.

15. Способ лечения сексуальной дисфункции у пациента, нуждающегося в лечении, предусматривающий введение одной или нескольких унифицированных доз, содержащих от приблизительно 1 мг до приблизительно 20 мг, до максимальной дозы 20 мг в день, соединения, имеющего структурную форму-

п.11, где указанное

п.12, где указанная

п.12, где указанная лу о

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 2-20 мг указанного соединения.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 5-20 мг указанного соединения.

18. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 1-5 мг указанного соединения.

19. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 2,5 мг указанного соединения.

20. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 5 мг указанного соединения.

21. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит 10 мг указанного соединения.

22. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит 20 мг указанного соединения.

-12005416

23. Способ по п.15, отличающийся тем, что унифицированная доза содержит приблизительно 10 мг указанного соединения и вводится один раз в день.

24. Способ по любому из пп.15-23, отличающийся тем, что унифицированная доза находится в форме, выбранной из группы, состоящей из жидкости, таблетки, капсулы и желатиновой капсулы.

25. Способ по любому из пп.15-23, отличающийся тем, что унифицированная доза находится в форме таблетки.

26. Способ по любому из пп.15-25, отличающийся тем, что сексуальная дисфункция является мужской эректильной дисфункцией.

27. Способ по любому из пп.15-25, отличающийся тем, что сексуальная дисфункция является нарушением возбуждения у женщин.

28. Применение унифицированной дозы, содержащей от приблизительно 1 мг до приблизительно 20 мг соединения, имеющего структурную формулу для приготовления лекарственного средства для введения до максимальной общей дозы 20 мг указанного соединения в день в способе лечения сексуальной дисфункции у пациента, нуждающегося в лечении.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ