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CN111356702B - 抗pd-l1抗体及其抗原结合片段 - Google Patents

抗pd-l1抗体及其抗原结合片段 Download PDF

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Abstract

提供了一种人源化得抗PD‑L1抗体和其抗原结合片段，及相应的核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体、包含该表达载体的细胞、包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物，可用于减少肿瘤或抑制肿瘤细胞生长。

Description

抗PD-L1抗体及其抗原结合片段
技术领域
本发明涉及分离的单克隆抗体领域，具体涉及结合PD-Ll的抗体、其抗原结合片段、包含所述PD-Ll抗体CDR区的鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、编码其的核酸、包含其的组合物以及涉及使用这类抗体和抗原结合片段的方法。
背景技术
肿瘤免疫治疗是肿瘤治疗领域的革新性方法，是为了最大限度的提高患者对肿瘤的免疫系统反应，解除肿瘤细胞对T细胞的抑制作用。其中，杀伤性T细胞是发挥杀伤肿瘤细胞的主要作用细胞，然而肿瘤微环境中存在着极其复杂的免疫调节机制，随着肿瘤的发展，杀伤性T细胞的肿瘤杀伤活性被抑制，肿瘤不断生长恶化。T细胞的活化需要两个信号：MHC-抗原肽呈递信号和共刺激信号。同时，在调控T细胞活化的过程中还存在共抑制信号，防止T细胞的过度活化。其中，最关键的信号通路之一即为程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)信号通路。
程序性死亡受体配体1(PD-L1)是程序性死亡受体1(PD-1)的配体。PD-L1也称为分化簇274(CD274)或B7同系物1(B7-H1)，并且是由CD274基因编码的分子量为40kDa的1型跨膜蛋白。PD-L1和PD-1两者都属于免疫球蛋白超家族并且都由两个细胞外Ig结构域(即N末端V结构域和C末端恒定结构域)组成。PD-L1与活化的T细胞、B细胞和髓样细胞上存在的其受体PD-1结合，以调节免疫细胞的活化或抑制。在多种肿瘤中，如黑色素瘤、肺癌、膀胱癌等多种癌细胞上，PD-L1的表达均显著上调。PD-L1通过与T细胞表面的PD-1结合，抑制T细胞的活化、细胞因子的产生和T细胞的增殖(Fife等(2011)Nature Immunology 10：1185-1193)；诱导同源抗原特异性T细胞中的衰竭或无反应性(Hofmeyer等(2011)Journal ofBiomedicine and Biotechnology 2011：1-9)；并诱导效应T细胞的凋亡。PD-L1基因的破坏导致上调的T细胞应答和自身反应性T细胞的产生(Latehman等(2004)PNAS 101：10691-10696)。WO2016061142公开了PD-L1的抗体阻断导致肿瘤浸润型淋巴细胞增加、T细胞受体介导的增殖增加以及癌细胞的免疫逃避减少；WO2016022630证明一类抗PD-L1抗体和其片段在调节T细胞的存在下恢复效应T细胞增殖和/或产生细胞因子的能力。因此通过PD-L1抗体阻断PD-L1/PD-1之间的结合成为了肿瘤免疫治疗领域一个非常有效的方法。
本发明提供了一种全新序列的高亲和力、高选择性、高生物活性的结合PD-L1的抗体及其抗原结合片段。
发明内容
一方面，本发明提供一种分离的结合PD-L1的抗原结合蛋白或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供一种分离的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其能与人PD-L1结合，并表现出优良的特性。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能结合PD-L1并阻断PD-1与PD-L1的结合。在另一实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能阻断分别产生PD-1与PD-L1的细胞之间的相互作用。另一方面，本发明提供了一种使用这类抗体和抗原结合片段的方法，例如使用这类抗体和抗原结合片段治疗癌症和/或传染病、增加T细胞活化或者在受试者中降低肿瘤免疫逃逸、减少肿瘤或抑制肿瘤细胞生长的方法。又一方面，本发明提供编码这类抗原结合蛋白(例如抗体)及其抗原结合片段的多核苷酸、包含该多核苷酸的表达载体、包含该表达载体的重组细胞以及包含这类抗原结合蛋白(例如抗体)及其抗原结合片段的组合物等。
在一方面，本发明提供的分离的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含选自SEQID NOs：12、14-22和/或SEQ ID NOs：27、29-38中的一个或多个CDR区(抗体互补决定区)序列或其突变体序列。
在一些方案中，本发明所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含任选自SEQID NOs：12、17-22和/或SEQ ID NOs：29-34的抗体重链HCDR区序列或其突变序列。
在一些方案中，本发明所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含任选自SEQID NOs：14-16和/或SEQ ID NOs：27、35-38的抗体轻链LCDR区序列或其突变序列。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其片段包含重链HCDR1序列，所述重链HCDR1序列与选自SEQ ID NO：17、18、29或30的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其片段包含重链HCDR2序列，所述重链HCDR2序列与选自SEQ ID NO：12、31或32的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一个实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其片段包含重链HCDR3序列，所述重链HCDR3序列与选自SEQ ID NO：19-22或33-34的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其片段包含轻链LCDR1序列，所述轻链LCDR1序列与选自SEQ ID NO：14、35或36的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其片段包含轻链LCDR2序列，所述轻链LCDR2序列与选自SEQ ID NO：15或27的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其片段包含轻链LCDR3序列，所述轻链LCDR3序列与选自SEQ ID NO：16、37或38的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少81％同源性、至少82％同源性、至少83％同源性、至少84％同源性、至少85％同源性、至少86％同源性、至少87％同源性、至少88％同源性、至少89％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1包含与SEQ ID NO：17、18、29或30的氨基酸序列至少80％同源性的序列，所述重链HCDR2包含与SEQ ID NO：12、31或32的氨基酸序列至少80％同源性的序列和所述重链HCDR3包含与SEQ ID NO：19-22或33-34的氨基酸序列至少80％同源性的序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1包含与SEQ ID NO：14、35或36的氨基酸序列至少80％同源性的序列，所述轻链LCDR2包含与SEQ ID NO：15或27的氨基酸序列至少80％同源性的序列以及所述轻链LCDR3包含与SEQ ID NO：16、37或38的氨基酸序列至少80％同源性的序列。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3选自以下序列或与其具有至少80％同源性的序列：
HCDR1选自：SDYWX1 SEQ ID NO：11
或X3YWMN SEQ ID NO：23
HCDR2选自：YISYTGSTYY NPSLKS SEQ ID NO：12
或MIHPSDSETX4LNQKFKD SEQ ID NO：24
HCDR3选自：GEAWDRRTLDX2 SEQ ID NO：13
或X5MVWX6RX7VMDY SEQ ID NO：25
LCDR1选自：RASQDITNYLN SEQ ID NO：14
或KSSQSLLDSDGX8TYLN SEQ ID NO：26
LCDR2选自：YTSRLHS SEQ ID NO：15
或LVSKLDS SEQ ID NO：27
LCDR3选自：QQVYTLPWT SEQ ID NO：16
或LQX9THFPYT SEQ ID NO：28；
其中X1选自N或S，X2选自Y、C、A或V，X3选自S或F，X4选自R或W，X5选自S或N，X6选自T或S，X7选自Q或H，X8选自E或N，X9选自S或A。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述重链HCDR1序列，其选自SEQ ID NO：17、18、29或30所示的氨基酸序列；所述重链HCDR2序列，其选自SEQ ID NO：12、31或32所示的氨基酸序列；所述重链HCDR3序列，其选自SEQ ID NO：19-22或33-34所示的氨基酸序列。在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3；所述轻链LCDR1序列，其选自SEQ ID NO：14、35或36所示的氨基酸序列；所述轻链LCDR2序列，其选自SEQ ID NO：15或27所示的氨基酸序列；所述轻链LCDR3序列，其选自SEQ ID NO：16、37或38所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1选自SEQ ID NO：17或18所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，所述重链HCDR2选自SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，所述重链HCDR3选自SEQ ID NOs：19-22中任意一个所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别选自SEQ ID NOs：14、15和16所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1选自SEQ ID NO：29或30所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，所述重链HCDR2选自SEQ ID NO：31或32所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，所述重链HCDR3选自SEQ ID NO：33或34所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1选自SEQ ID NO：35或36所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，所述轻链LCDR2选自SEQ ID NO：27所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列，且所述轻链LCDR3选自SEQ ID NO：37或38所示的氨基酸序列或其至少80％同源性的序列。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：17、12和19的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：14、15和16的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：17、12和19的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：14、15和16的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：18、12和20的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：14、15和16的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：18、12和20的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：14、15和16的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：17、12和20的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：14、15和16的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：17、12和20的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：14、15和16的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：17、12和21的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：14、15和16的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：17、12和21的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：14、15和16的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：17、12和22的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：14、15和16的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：17、12和22的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：14、15和16的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：29、31和33的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：35、27和37的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：29、31和33的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：35、27和37的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：30、32和34的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3包含分别与根据SEQ ID NOs：36、27和38的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含分别根据SEQ ID NOs：30、32和34的重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及分别根据SEQ ID NOs：36、27和38的轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与选自由SEQs ID NO：5、7、9、45、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与选自由SEQ ID NOs：6、8、10、46、51和52组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一些方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含以下序列、基本上由以下序列组成或由以下序列组成：选自由SEQ ID NOs：5、7、9、45、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含以下序列、基本上由以下序列组成或由以下序列组成：选自由SEQ ID NOs：6、8、10、46、51和52组成的组的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链可变区；含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区；含有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其包含选自由hu-Chi1-2.3、hu-Chi1-3.3、hu-Chi1-3.4、hu-Chi1-3.5以及hu-Chi1-3.6组成的组的抗体的可变重链和选自由hu-Chi1-2.3、hu-Chi1-3.3、hu-Chi1-3.4、hu-Chi1-3.5以及hu-Chi1-3.6组成的组的抗体的可变轻链。在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其具有与选自由SEQ ID NOs：45、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含轻链可变区，其具有与选自由SEQ ID NOs：46、51和52组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO：45具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性；以及轻链可变区，其与SEQ ID NO：46具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在另一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO：47具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性；以及轻链可变区，其与SEQ ID NO：51具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在另一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO：48具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性；以及轻链可变区，其与SEQ IDNO：52具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在另一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO：49具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性；以及轻链可变区，其与SEQ ID NO：51具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链可变区，其与SEQ ID NO：50具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性；以及轻链可变区，其与SEQ ID NO：51具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性。
在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其包含含有SEQ ID NO：45的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：46的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQID NO：47的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：51的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：52的氨基酸序列的轻链可变区；或含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：51的氨基酸序列的轻链可变区；或或含有SEQ ID NO：50的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO：51的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，本发明提供了嵌合抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含重链，所述重链具有与选自由SEQ ID NO：39、41和43组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链具有与选自由SEQ ID NO：40、42和44组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含完整的重链，其具有与选自由SEQ ID NO：53、57、61和62组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含完整的轻链，其具有与选自由SEQ ID NO：55和59组成的组的氨基酸序列具有至少80％同源性、至少85％同源性、至少90％同源性、至少91％同源性、至少92％同源性、至少93％同源性、至少94％同源性、至少95％同源性、至少96％同源性、至少97％同源性、至少98％同源性或至少99％同源性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含根据SEQ ID NO：53的重链和根据SEQ ID NO：55的轻链。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含根据SEQ ID NO：57的重链和根据SEQ ID NO：59的轻链。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含根据SEQID NO：61的重链和根据SEQ ID NO：55的轻链。在另一个实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体，其中所述抗体包含根据SEQ ID NO：62的重链和根据SEQ ID NO：55的轻链。
在一些实施方案中，本发明提供了人源化抗PD-L1抗体或其片段，优选地，所述人源化抗体为人源化抗体hu-Chi1，所述人源化抗体重链可变区上的重链FR区序列来源于人种系重链，具体来源于人种系重链IGHV4-30-4*01和IGHJ1*01的组合序列。在一些实施方案中，上述人源化抗体hu-Chi1的重链可变区序列有0-10个氨基酸的回复突变，优选为一个或多个选自S35N、Q39R、K43N、G44K、W47Y、I48M、V71R的氨基酸回复突变；更优选一个或多个选自S35N、W47Y和V71R的氨基酸回复突变；最优选为包含S35N、W47Y、V71R的回复突变。在一些实施方案中，所述人源化抗体hu-Chi1重链可变区还包含C102Y的氨基酸突变。在一些实施方案中，所述人源化抗体hu-Chi1轻链可变区上的轻链FR区序列来源于人种系轻链，具体来源于人种系轻链IGKV1-39*01和IGKJ2*02的组合序列。在一些实施方案中，人源化抗体hu-Chi1的轻链可变区序列有0-10个氨基酸的回复突变，优选为一个或多个选自I2F、P8T、G41D、P44V、Y87F和Q100R的氨基酸回复突变；更优选为一个或多个选自I2F、G41D和P44V的氨基酸回复突变；最优选为包含I2F、G41D和P44V的氨基酸回复突变。
在一个实施方案中，本发明提供了与本文提供的任何示例性抗体结合PD-L1上的相同表位的抗PD-L1抗体或其片段。在一个实施方案中，抗体或其片段与本文提供的用于结合PD-L1的任何示例性抗体竞争。可以通过ELISA、流式细胞术、表面等离子体共振(SPR)测定或本领域已知的任何其它方法测量与PD-L1的结合。在本发明的一些实施方案中，所述PD-L1抗体或其片段能结合人PD-L1蛋白，并结合食蟹猴(cynomolgous)PD-L1蛋白。
在一些实施方案中，本发明提供以约15nM至约0.05nM的结合亲和力KD与PD-L1结合的抗PD-L1抗体和其片段。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约10nM至约0.1nM的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约8nM至约0.2nM的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约6nM至约0.3nM的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约15nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约10nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约6nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约4nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约1nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约0.70nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约0.50nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约0.30nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约0.10nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段以约0.05nM或更小的结合亲和力KD与PD-L1结合。在一些实施方案中，通过Biacore测定来测量本文提供的抗PD-L1抗体和片段的结合亲和力KD。
在一些实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约1ng/mL至约1500ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约10ng/mL至约1200ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约20ng/mL至约800ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约50ng/mL至约500ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约50ng/mL至约200ng/mL。在一些实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制PD-L1/PD-1的结合，其中IC50为约1200ng/mL或更小、约1000ng/mL或更小、约800ng/mL或更小、约400ng/mL或更小、约300ng/mL或更小、约250ng/mL或更小、约200ng/mL或更小、约150ng/mL或更小、约100ng/mL或更小、约75ng/mL或更小、约60ng/mL或更小、约50ng/mL或更小、约40ng/mL或更小、约30ng/mL或更小、约20ng/mL或更小、或约10ng/mL或更小。在一些实施方案中，通过ELISA来测量本文提供的抗PD-L1抗体和片段的IC50。
在另一些实施方案中，本文提供了抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用，其中IC50为约1ng/mL至约500ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用，其中IC50为约10ng/mL至约400g/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用，其中IC50为约20ng/mL至约300ng/mL。在另一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用，其中IC50为约50ng/mL至约200ng/mL。在一些实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和其片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用，其中IC50为约500ng/mL或更小、约450ng/mL或更小、约400ng/mL或更小、约350ng/mL或更小、约300ng/mL或更小、约250ng/mL或更小、约200ng/mL或更小、约150ng/mL或更小、约100ng/mL或更小、或约50ng/mL或更小。在一些实施方案中，通过FACS来测量本文提供的抗PD-L1抗体和其片段的IC50。
在一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体是嵌合抗体，其具有根据SEQ ID NO：5的氨基酸序列的重链可变区和根据SEQ ID NO：6的氨基酸序列的轻链可变区；或具有根据SEQID NO：7的氨基酸序列的重链可变区和根据SEQ ID NO：8的氨基酸序列的轻链可变区；或具有根据SEQID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和根据SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗PD-L1抗体具有如通过ELISA或FACS所测量的下述PD-L1结合EC50：约200ng/mL或更小、或约150ng/mL或更小、或约100ng/mL或更小、或约80ng/mL或更小、或约60ng/mL或更小、或约50ng/mL或更小。
在一些实施方案中，本发明所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体或抗体片段。根据本发明提供的抗PD-L1嵌合抗体或其片段，其进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区。所述人源化抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的恒定区。因此，在另一些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段为人源化抗体或抗体片段。
在一个实施方案中，抗PD-L1抗体或其片段是单克隆抗体、scFv、Fab片段、Fv片段、F(ab)′片段、F(ab′)2片段、双特异性抗体、免疫缀合物或其组合。
在一方面，提供了分离的抗PD-L1抗体或其片段，其中所述抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤选自由本文称为Chi1、Chi2-1以及Chi2-2的杂交瘤组成的组。因此，本发明还包括杂交瘤Chi1、Chi2-1以及Chi2-2，以及产生本文公开的抗体的任何杂交瘤。本发明还提供了编码本文提供的抗体和其片段的分离的多核苷酸，例如编码人源化抗体hu-Chi1-3.4重链的核苷酸序列如SEQ ID NO：54所示，编码轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO：56所示；编码人源化抗体hu-Chi1-2.3重链的核苷酸序列如SEQ ID NO：58所示，编码轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO：60所示。在另一方面，本发明提供了包含分离的多核苷酸的表达载体，例如pMD-19T载体以及pcDNA3.1载体等。在一个具体实施例中，本发明提供了包含编码人源化抗PD-L1抗体的核苷酸序列的表达载体，例如编码hu-Chi1-2.3重链和轻链核苷酸序列的表达载体。本发明还提供了包含所述表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞可以是真核细胞或原核细胞，例如所述宿主细胞包括但不限于哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞和细菌等，可优选选自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、ExpiCHO细胞、CHO-S细胞以及CHO-DG44细胞、毕赤酵母和大肠杆菌等。在一个实施方案中，本发明提供了生产所述人源化抗PD-L1抗体或其片段的方法，所述方法包括对包含所述表达载体的宿主细胞进行培养。
在一个实施方案中，本发明提供了抗PD-L1抗体免疫缀合物。因此，本发明提供了结合PD-L1并与治疗剂连接或缀合的抗体或其片段。可以与抗PD-L1抗体连接或缀合的治疗剂可以包括但不限于细胞毒性药物、放射性同位素、信号通路抑制剂、免疫调节剂或抗体。在一个实施方案中，本文提供的抗体或其片段是免疫缀合物，所述免疫缀合物包含抗PD-L1抗体或其片段，并且还包含选自包括另外的治疗剂、细胞毒性剂、免疫粘附分子和显像剂的组中的试剂。在一些实施方案中，显像剂选自由放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素组成的组。在一些实施方案中，显像剂是选自由以下组成的组中的放射性标记：3H、14C、35S、62Cu、64Cu、89Zr、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho和153Sm。在一些实施方案中，治疗剂或细胞毒性剂选自包括以下的组：化学治疗刑、免疫抑制剂、免疫刺激剂、抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环霉素、毒素和细胞凋亡剂。在一些实施方案中，抗原结合蛋白直接与试剂缀合。在其它实施方案中，抗原结合蛋白通过接头与试剂缀合。合适的接头包括但不限于文献报道的氨基酸和多肽接头。接头可以是可裂解的或不可裂解的。
在一个实施方案中，本发明提供对PD-L1和至少一种其它抗原或表位具有特异性的双特异性或多特异性抗体。可以使用本文提供的结合测定或本领域已知的任何其它结合测定来测试本文提供的抗PD-L1抗体和其片段与PD-L1的结合。
在一方面，本发明提供了包含本文提供的一种或多种抗PD-L1抗体或其片段和药学上可接受的载体的组合物。在一些实施方案中，本发明的药物组合物还包括药学上可接受的稳定剂、缓冲剂或赋形剂。
在一方面，本发明提供了用于在受试者中调节免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文提供的抗PD-L1抗体或其片段。在一个实施方案中，本发明提供了用于增加T细胞活化的方法，所述方法包括使T细胞与本文提供的抗PD-L1抗体或其片段接触。在一个实施方案中，本发明提供了用于在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文提供的抗PD-L1抗体或其片段。在一个实施方案中，本发明提供了用于在有需要的受试者中增强抗肿瘤应答的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的抗PD-L1抗体或其片段。在另一个实施方案中，本发明提供了用于在有需要的受试者中降低肿瘤免疫逃逸、减少肿瘤或抑制肿瘤细胞的生长的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的抗PD-L1抗体或其片段。在另一个实施方案中，本发明提供了用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的抗PD-L1抗体或其片段。在另一个实施方案中，所述癌症选自由以下组成的组：淋巴瘤、白血病、黑色素瘤、神经胶质瘤、乳腺癌、肺癌、肠癌、骨癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、唾液腺癌、甲状腺癌、胸腺癌、上皮癌、头或颈癌、胃癌(gastric cancer)、胰腺癌或其组合。
在一些实施方案中，本发明提供了用于在有需要的受试者中治疗传染病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的抗PD-L1抗体或其片段。在另一个实施方案中，所述传染病选自由以下组成的组：念珠菌病、念珠菌血症、曲霉菌病、链球菌性肺炎、链球菌性皮肤和口咽病状、革兰氏阴性脓毒症、结核病、单核细胞增多症、流行性感冒、由呼吸道合胞病毒引起的呼吸道疾病、疟疾、血吸虫病和锥虫病。
在一些实施方案中，本文提供的抗体和其片段可用于治疗由T辅助型2(Th2)T细胞介导的疾病，例如像哮喘、过敏反应或移植物抗宿主病。
在一些实施方案中，本文提供的抗体和其片段可用于在有需要的受试者中刺激免疫应答。例如，在一些实施方案中，抗PD-L1抗体和其片段可以与目标抗原一起施用，以便用于引发对所述抗原的免疫应答。目标抗原可以是与病原体(诸如病毒或细菌)相关联的抗原。因此，在一些实施方案中，本发明提供了包含抗PD-L1抗体和抗原的疫苗，其中所述疫苗引发抗原特异性免疫应答。
在一些实施方案中，本文公开的抗体和其片段可以与一种或多种另外的治疗剂组合施用至有需要的受试者。在一些实施方案中，可以在向受试者施用另外的治疗剂之前、期间和/或之后将抗体和其片段施用至受试者。在一个实施方案中，另外的治疗剂是化学治疗剂、放射治疗剂、细胞因子、抗体或其片段或指示待治疗的疾病的任何其它另外的治疗剂。在一些实施方案中，当一起施用时，无论是同时施用还是依序施用，抗PD-L1抗体和另外的治疗剂均显示出治疗性协同作用。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体和另外的治疗剂以单独的制剂施用。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体和另外的治疗剂以相同的制剂施用。在一个实施方案中，本文提供的抗PD-L1抗体和片段增强一种或多种另外的治疗剂的免疫调节作用。在另一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂增强抗PD-L1抗体或其片段的作用。
本发明提供分离的抗体和其抗原结合片段，以及编码所述抗体和片段的核酸，以及包含所述分离的抗体、片段或核酸的组合物。术语“分离的”是指已经从其天然环境中分离的目标化合物(例如，抗体或核酸)。本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含分离的抗体或其片段，或编码所述抗体或片段的核酸，并且还包含一种或多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括，例如，赋形剂、稀释剂、包封材料、填充剂、缓冲剂或其它试剂。
如本发明所述，术语“抗体”是指具有至少一个抗原结合结构域的抗原结合蛋白。本发明的抗体和其片段可以是整个抗体或其任何片段。因此，本发明的抗体和抗原结合片段包括单克隆抗体或其片段和抗体变体或其片段，以及免疫缀合物。抗体片段的实例包括Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、分离的CDR区、单链Fv分子(scFv)和本领域已知的其它抗体片段。抗体和其片段还可以包括重组多肽、融合蛋白和双特异性抗体。本文公开的抗PD-L1抗体和其片段可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体种类。在一个实施方案中，本文公开的抗PD-L1抗体和其片段是IgG1或IgG4同种型。本发明的PD-L1抗体和其片段可以衍生自任何物种，其包括但不限于小鼠、大鼠、兔、灵长类动物、美洲驼和人。抗PD-L1抗体和其片段可以是嵌合抗体、人源化抗体或完整的人抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是由源自小鼠的杂交瘤细胞系产生的抗体。因此，在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是鼠类抗体。在另一些实施方案中，抗PD-L1抗体是嵌合抗体。在另一些实施方案中，嵌合抗体是小鼠-人嵌合抗体。在另一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在另一些实施方案中，抗体衍生自鼠类抗体并且是人源化的。
“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1结构域及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。
“Fab’片段”含有一条轻链和包含VH结构域和CH1结构域以及CHI结构域和CH2结构域之间区域的一条重链的部分，由此可在两个Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)2分子。
“F(ab’)2片段”含有两条轻链和两条包含CH1结构域和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，F(ab’)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab’片段组成。
“Fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺少恒定区。
“单链Fv抗体”(或“scFv抗体”)是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般而言，Fv多肽另外在VH和VL结构域之间包含多肽接头，该接头使得scFv能形成用于抗原结合的所需结构。对于scFv的综述，可参见Pluckthun(1994)THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES(单克隆抗体药理学)，第113卷，Rosenburg和Moore主编，Springer-Verlag，NewYork，第269-315页。还参见国际专利申请公开号WO88/01649和美国专利第4,946,778号和第5,260,203号。以引用的方式将上述文献的内容并入本文作为参考。
“双抗体”也称为“双特异性抗体”，为具有两个抗原结合位点的小抗体片段。所述片段包含在相同的多肽链中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL或VL-VH)。通过使用短至不能在同一链的两个结构域之间配对的接头，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域配对并形成两个抗原结合位点。
“嵌合抗体”是下述抗体：所述抗体具有衍生自一种物种的重链可变区的至少一部分和轻链可变区的至少一部分；以及衍生自另一物种的恒定区的至少一部分。例如，在一个实施方案中，嵌合抗体可以包含鼠类可变区和人恒定区。
“人源化抗体”是下述抗体：所述抗体含有衍生自非人抗体的互补决定区(CDR)；和衍生自人抗体的框架区以及恒定区。例如，本文提供的抗PD-L1抗体可以包含衍生自一种或多种鼠类抗体的CDR以及人框架区和恒定区。因此，在一个实施方案中，本文提供的人源化抗体与衍生出所述抗体的CDR的鼠类抗体结合PD-L1上的相同表位。本文提供了示例性人源化抗体。包含本文提供的重链CDR和轻链CDR的另外的抗PD-L1抗体或其变体可以使用任何人框架序列产生，并且也包括在本发明中。在一个实施方案中，适用于在本发明中使用的框架序列包括在结构上与本文提供的框架序列类似的那些框架序列。可以在框架区中进行另外修饰以改进本文提供的抗体的特性。此类另外的框架修饰可以包括化学修饰；点突变以降低免疫原性或去除T细胞表位；或使突变回复为原始种系序列中的残基。在一些实施方案中，此类修饰包括对应于本文示例的突变的那些修饰，包括对种系序列的回复突变。例如，在一个实施方案中，本文提供的人源化抗体的VH和/或VL的人框架区中的一个或多个氨基酸被回复突变为亲本鼠类抗体中对应的氨基酸。例如，对于人源化hu-Chi的VH和VL，上述模板人抗体的框架氨基酸的几个位点被回复突变为小鼠Chi抗体中对应的氨基酸序列。在一个实施方案中，人源化抗体hu-Chi1重链可变区位置35和/或39和/或43和/或44和/或48和/或71处的氨基酸回复突变为在小鼠Chi1重链可变区所述位置处发现的对应的氨基酸。在另一个实施方案中，轻链可变区的位置2和/或8和/或41和/或44和/或87和/或100处的氨基酸被回复突变为在小鼠Chi1轻链可变区中的所述位置处发现的对应的氨基酸。S35N、Q39R、K43N、G44K、W47Y、I48M、V71R的氨基酸回复突变为相应小鼠Chi抗体中对应的氨基酸。在一个实施方案中，人源化的hu-Chi1-3.4抗体包含重链可变区，其中在位置47处的氨基酸从Trp(W)突变为Try(Y)，在位置35处的氨基酸从Ser(S)突变为Asn(N)，并且在位置71处的氨基酸从Val(V)突变为Arg(R)；以及轻链可变区，其中在位置2处的氨基酸从Ile(I)突变为Phe(F)，在位置41处的氨基酸从Gly(G)突变为Asp(D)，在位置44处的氨基酸从Pro(P)突变为Val(V)。另外的或另选的回复突变可以在本文提供的人源化抗体的框架区中进行以改进抗体的特性。本发明还包括下述人源化抗体，所述人源化抗体结合PD-L1并且包含对应于本文所述的相对于任何合适的框架序列的示例性修饰的框架修饰，以及以其它方式改进抗体特性的其它框架修饰，例如在人源化抗体hu-Chi1重链可变区的位置102处的氨基酸从Cys(C)突变为Try(Y)、Ala(A)或Val(V)。
术语“人PD-L1”、“hPD-L1”和“hu-PD-L1”等在本文中可互换使用，并且是指人PD-L1和人PD-L1的变体或同种型。“特异于”意指抗体和其片段以比任何其它靶标更大的亲和力结合PD-L1。如本文所用，术语“EC50”是指有效浓度，抗体的50％最大应答。如本文所用，术语“IC50”是指抑制浓度，抗体的50％最大应答。EC50和IC50两者均可以通过ELISA或FACS分析或本领域已知的任何其它方法进行测量。
本文公开的在CDR或轻链可变区或重链可变区具有一个或多个氨基酸取代、插入、缺失或其组合的抗PD-L1抗体保留了不具有氨基酸取代、插入或缺失的对应的抗PD-L1抗体的生物活性。因此，本文提供的变体抗PD-L1抗体保留与PD-L1的结合。如本文所用，同源性百分比是指两个参考序列共有的相同氨基酸序列的数目除以氨基酸位置的总数，乘以100。在一些实施方案中，所述CDR或轻链可变区或重链可变区氨基酸序列的变体，其中所述变体包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸取代、插入或缺失或其组合。在另一个实施方案中，氨基酸取代为保守取代。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的响应于增强、刺激或引发免疫应答的疾病或病状的方法。如本文所用，术语“治疗(treatment或treating)”是指治疗性治疗以及防范性或预防性措施。需要治疗的受试者包括那些已经患有疾病或病状的受试者，以及可能患疾病或病状并且其目的是预防、延迟或减弱疾病或病状的受试者。如本文所用，术语“受试者”表示哺乳动物，诸如啮齿动物、猫科动物、犬科动物和灵长类动物。优选地，根据本发明的受试者是人。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指向受试者提供治疗性和/或预防性益处所必需的化合物或组合物的量。
本文中的术语“突变序列”和“突变体序列”可互换使用，表示通过取代、缺失或插入等方式发生改变后的序列，并且所述“突变序列”和“突变体序列”与突变前的序列相比可具有60％以上的同源性、例如70％以上的同源性、进一步例如80％以上的同源性。
除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。除非另外特别说明，否则词语“一个(a)”或“一个(an)”意指“至少一个”。除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。短语“至少一个”的含义等同于短语“一个或多个”的含义。此外，术语“包括/包含/含有(including)”以及其它形式诸如“包括/包含/含有(includes)”和“包括/包含/含有(included)”的使用不是限制性的。此外，除非另外特别说明，否则术语诸如“要素”或“组分”包括包含一个单元的元素或组分以及包含多于一个单元的元素和组分。
本文所用术语“约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，在本领域每一次实行中“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，特别对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。除非另外说明，否则当具体值在本申请和权利要求中出现时，“约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可接受误差范围内。
尽管为了清楚理解的目的，已经通过举例说明和实施例相当详细地描述了前述发明，但是根据本发明的教义，本领域的普通技术人员将显而易见的是，可另外对本发明进行某些改变和修改而不背离所附权利要求的精神和范围。以下实施例仅以说明方式提供，而并不起限制作用。本领域的技术人员将容易地识别多种非关键性参数，所述参数可发生改变或修改以产生基本上类似的结果。
附图说明
图1：通过ELISA检测在一定浓度范围内嵌合抗PD-L1抗体与PD-L1的结合；
图2：通过ELISA检测在一定抗体浓度范围内嵌合抗PD-L1抗体对PD-1/PD-L1结合的阻断作用；
图3：通过FACS检测在一定抗体浓度范围内嵌合抗PD-L1抗体对PD-1/PD-L1结合的阻断作用；
图4：通过细胞活性检测在一定抗体浓度范围内嵌合抗PD-L1抗体对PD-1/PD-L1结合的阻断作用；
图5：通过细胞活性检测在一定抗体浓度范围内人源化抗PD-L1抗体对PD-1/PD-L1结合的阻断作用。
具体实施方式
实施例1PD-L1抗原及检测蛋白制备
以UniProt Programmed Cell Death 1 Ligand 1(PD-L1)同种型1(SEQ ID NO：1)的人PD-L1全长基因(义翘神州生物技术有限公司，HG10084-M)，作为本发明PD-L1的模板，获得编码本发明抗原及检测用蛋白的基因序列，可选择PD-L1胞外区(Extra CellularDomain，ECD)与抗体重链Fc片段(如小鼠IgG2a)重组连接形成PD-L1-mFc，或者与His Tag重组连接形成PD-L1-his，用于小鼠的免疫或后期筛选检测。编码含小鼠抗体重链Fc标签的PD-L1胞外区重组蛋白(hPD-L1(ECD)-mFc，SEQ ID NO：2)与组氨酸标签的PD-L1胞外区重组蛋白(hPD-L1-His，SEQ ID NO：3)、以及含小鼠抗体重链Fc标签的PD-1胞外区重组蛋白(hPD-1-mFc，SEQ ID NO：4)的cDNA通过PCR获得，并且分别被亚克隆到表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，V-790)中。将上述构建的载体转染进Exi-CHO细胞(ThermoFisher A29133)，进行瞬时表达。转染时传代细胞至细胞密度为6*106个细胞/ml，按转染试剂∶DNA＝3∶1的比例制备转染复合物，室温孵育5min，缓慢加入到细胞中，20-24h后按比例添加ExpiCHOEnhancer及ExpiCHO Feed。在ExpiCHO细胞中瞬时表达7天-14天后，用NTA柱(GEhealthcare)纯化hPD-L1-HisTag蛋白，用ProteinA柱(GE healthcare)纯化hPD-L1-mFc和hPD1-mFc重组蛋白。或将表达片段构建于CHO-S(Thermo Fisher，A1155701)或CHO-DG44(Thermo Fisher，A1100001)等细胞稳定表达，并进行纯化。
实施例2抗人PD-L1单克隆抗体杂交瘤的制备
将表达纯化的hPD-L1(ECD)-mFc重组蛋白(按照100μg/只小鼠)与等体积的完全弗氏佐剂(首免)或不完全弗氏佐剂(加强免疫)充分混合并乳化，每2周皮下免疫BALB/c小鼠，持续8周。选择血清中抗体滴度高并且滴度趋于平台期的小鼠进行脾细胞融合。融合前3天，通过腹腔注射不含佐剂的hPD-L1(ECD)-mFc抗原(50μg/只小鼠)来冲刺免疫小鼠。采用优化的PEG介导的融合步骤将脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0细胞进行融合得到杂交瘤细胞。将来自免疫小鼠的脾细胞(1×108个细胞)与SP2/0骨髓瘤细胞(2×107个细胞)融合。融合后，将细胞用HAT完全培养基重悬，以0.1ml/孔分配到96孔板中，并且在37℃、5％CO2的培养箱中进行培养。融合后的第5天，用新鲜的HAT完全培养基进行对半换液，37℃、5％CO2继续培养。融合后第7天～8天，根据细胞生长密度进行全换液，采用的培养基为HT完全培养基，200μl/孔，37℃、5％CO2继续培养。融合后第14天左右，根据细胞生长密度，使用PD-L1结合的ELISA方法检测(检测方法1.1)。并将检测的阳性孔细胞进行PD-L1/PD-1结合的阻断的ELISA检测(检测方法1.2)，挑选能够结合PD-L1并能阻断与PD-1结合的孔，并根据细胞密度及时扩大至24孔板中。移入24孔板的细胞株经过复测后进行保种和第一次亚克隆。第一次亚克隆筛选为阳性的进行保种，并进行第二次亚克隆。第二次亚克隆为阳性的进行保种和蛋白表达。
检测方法1.1结合PD-L1的ELISA检测
通过ELISA方法，使用PD-L1-his蛋白进行杂交瘤抗体的PD-L1结合筛选和分析。将PD-L1抗原(100μL，2μg/ml)包被在高吸附96孔板(Costar，9018)中，4℃，过夜。充分洗去未吸附抗原后，使用封闭缓冲液(含2％牛血清白蛋白的PBS)封闭非特异性结合位点。用洗涤缓冲液(具有0.05％(v/v)吐温20的PBS)洗涤平板三次后，添加100μL/孔的待测样品，室温下孵育1小时。洗涤平板，加入偶联辣根过氧化物酶(HRP)的二抗继续孵育60分钟。洗涤平板后，添加100μL/孔底物TMB溶液(eBioscience，00-4201-56)并将所述平板在室温下温育2min。添加100μL/孔的终止溶液(2NH2SO4)以停止反应。产生比色信号并且使用酶标仪(Thermo Fisher，MK3)在450nm处读取所述比色信号，扣除背景之后比空白血清读值高2倍即为阳性孔。
检测方法1.2PD-L1/PD-1结合的阻断的ELISA检测
在高吸附96孔板中包被PD-L1抗原(100μL，2μg/ml)，4℃，过夜。充分洗去未吸附抗原后，使用封闭缓冲液(含2％牛血清白蛋白的PBS)封闭非特异性结合位点。用洗涤缓冲液(具有0.05％吐温20的PBS)洗涤平板三次后，添加100μL/孔的待测样品，同时向每个孔添加100μl生物素标记的PD-1-mFc(0.1μg/ml)，并在37℃下孵育2h。将所述平板洗涤3次后，加入按照1∶500稀释的二抗Avidin HRP(eBioscience E07418-1632)，100μl/孔，并在室温孵育1小时。洗涤所述平板后，添加100μL/孔的底物溶液TMB(eBioscience，00-4201-56)，并将所述平板在室温下温育3min。产生比色信号并且使用酶标仪(Thermo Fisher，MK3)在450nm处读取所述比色信号，选取读值较低的孔。
实施例3抗人PD-L1抗体的cDNA获取和嵌合抗体构建
使用TRIzol从上述具有结合和阻断功能的杂交瘤细胞中分离总RNA作为模板，按照说明书使用superscript II逆转录酶(Life Technology，18064-14)合成第一链cDNA。然后使用简并小鼠IgG引物通过PCR反应扩增抗体的可变区序列。
将PCR混合物在含有0.5μg/ml溴化乙锭的1％琼脂糖/Tris-硼酸盐凝胶中进行电泳分离。从凝胶上切下具有预期大小(重链和轻链大约500bp)的DNA片段并且对其进行纯化。将纯化的PCR产物克隆到pMD-19T载体(Takara，6013)中，并且转化到DH5α感受态大肠杆菌细胞(Takara，9057)中。从LB固体培养平板上挑取2个菌落进行DNA测序。得到抗体的重链可变区序列和轻链可变区序列(Chi1可变区如SEQ ID NOs：5-6所示，Chi2可变区如SEQ IDNOs：7-10所示)。这些抗体显示出特定的功能，诸如高亲和力结合PD-L1，并且能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
嵌合抗体1(Chi1)、嵌合抗体2(Chi2)的构建和表达：将小鼠VL区基因合成片段通过双酶切反应连接到编码人κ链恒定区的核苷酸序列来构建Chi1、Chi2-1、Chi2-2嵌合轻链(分别为SEQ ID NOs：40、42和44)的编码序列。将小鼠VH区的基因合成片段通过双酶切反应连接到编码人IgG1恒定区的核苷酸序列来构建Chi1、Chi2-1、Chi2-2嵌合重链(SEQ IDNOs：39、41和43)的编码序列。
将上述嵌合抗体的编码序列的DNA载体转染Expi CHO细胞(50mL体系，6×106个细胞/mL，DNA 1μg/ml)进行瞬时表达，培养7天。然后用ProteinA柱(GEhealthcare)纯化上清液中的嵌合抗体。
实施例4抗人PD-L1嵌合抗体活性评价
通过以下ELISA、Biacore和流式细胞仪法测量嵌合抗体与PD-L1的结合，并在细胞水平上验证上述嵌合抗体能否阻断PD-1与PD-L1的结合。
4.1抗PD-L1嵌合抗体的亲和力
采用Biacore测定PD-L1嵌合抗体对PD-L1抗原的亲和力，使用抗人抗体捕获试剂盒(GE，BR-1008-39)，按照说明书中所述的方法将抗人捕获抗体共价偶联于CM5生物芯片(GE，BR-1000-12)上，用以捕获本发明的PD-L1抗体。然后于芯片表面流经一系列浓度的人PD-L1抗原(hPD-L1-his，Sino biological 10084-H08H-200)或食蟹猴PD-L1抗原(Cyno-PD-L1-his，Sino biological 90251-C08H-200)，利用Biacore仪器(GE，BiacoreT200)实时检测反应信号从而获得结合和解离曲线，通过软件拟合得到亲和力数值。在实验中的每个循环解离完成后，使用再生溶液将生物芯片再生，继而进行下一次捕获，循环往复完成不同抗体对PD-L1亲和力的测定。最后使用GE BIAevaluation软件以1∶1(Langmuir)结合模型分析所得数据，以此法测定ka(kon)、kd(koff)和KD值。通过KD＝kd/ka计算平衡解离常数KD。下表是嵌合抗体对人PD-L1抗原、食蟹猴PD-L1抗原的亲和力数据。
表1：抗PD-L1抗体与PD-L1的亲和力数据
Figure GPA0000289208030000141
Figure GPA0000289208030000151
ND：未测试
*：WO2016022630中公开的一种人源化的PD-L1抗体
4.2抗人PD-L1嵌合抗体结合PD-L1的活性
通过ELISA方法，具体操作参照实施例2中的检测方法1.1，使用hPD-L1-mFc代替PD-L1-his蛋白进行嵌合抗体的PD-L1结合分析。最后，酶标仪在450nm处读取的比色信号使用GraphPad Prism5分析数据，并计算EC50，见表2，嵌合抗体1(Chi1)和嵌合抗体2-1(Chi2-1)与对照抗体相比具有相当的PD-L1结合活性，其中嵌合抗体1略优。
表2：嵌合抗体Chi1和Chi2的抗原结合数据
PD-L1结合 Chi1 Chi2-1 Tecentriq
EC50(ng/ml) 107.3 145.2 142.3
4.3抗人PD-L1嵌合抗体阻断PD-L1/PD-1的结合活性
基于ELASA方法，检测嵌合抗体是否能够阻断PD-1与PD-L1的结合。具体操作参照实施例1中的检测方法1.2，最后酶标仪在450nm处读取的比色信号使用GraphPad Prism5分析数据，并计算IC50，见表3，嵌合抗体1、嵌合抗体2-1与对照抗体相比具有相当的阻断PD-1与PD-L1结合的活性，并且嵌合抗体1、嵌合抗体2-1活性略优。
表3：嵌合抗体Chi1和Chi2阻断PD-1结合的IC50数据
PD-L1阻断 Chi1 Chi2-1 Chi2-2 Tecentriq
IC50(ng/ml) 514.5 462.1 1436 553.2
4.4抗PD-L1嵌合抗体基于细胞的结合分析
通过分析与稳定表达PD-L1的U2OS细胞系(PD-L1-U2OS)的结合实验，分析抗PD-L1嵌合抗体与天然表达的PD-L1的结合能力。将2×105个PD-L1-U2OS细胞加入到96孔培养板的各孔中，将梯度稀释的抗PD-L1抗体添加到细胞悬浮液中，同时加入生物素标记的PD-1蛋白与其竞争结合PD-L1。于4℃下孵育120分钟后，将细胞用PBS洗涤3次，加入亲和素-FITC(eBioscience，11-4317-87)4℃下孵育60分钟。然后通过使用流式细胞术(BD，Accuri C6)分析检测荧光信号。通过染色的平均荧光强度(MFI)来测量抗PD-L1抗体与PD-1对PD-L1的竞争结合。使用GraphPad Prism5分析数据，计算的IC50在表4中示出，嵌合抗体1、嵌合抗体2-1与对照抗体相比具有相当的阻断PD-1与细胞表面PD-L1结合的活性，并且嵌合抗体1、嵌合抗体2-1活性略优。
表4：嵌合抗体Chi1和Chi2阻断PD-1结合的IC50数据
U2OS PD-L1阻断 Chi1 Chi2-1 Chi2-2 Tecentriq
IC50(ng/ml) 195.3 248.3 2167 342.1
4.5抗PD-L1嵌合抗体阻断细胞/细胞相互作用的分析
在该检测体系中，分别使用了经过改造的稳定表达PD-1的Jurkat细胞(DiscoverX，93-1104C19)和稳定表达PD-L1的U2OS细胞(DiscoverX，93-1066C3)。当U2OS细胞表面的PD-L1与Jurkat表面的PD-1结合后，经过改造的Jurkat细胞会诱导下游通路并与检测底物反应产生化学发光信号。因此，当体系中存在抗PD-L1抗体，并且能够阻断PD-1与PD-L1的结合时，会没有化学信号或较弱的化学信号产生。区别于前述实例中使用重组蛋白作为筛选，该检测方法中PD-L1和PD-1均以天然的构象表达于细胞表面。实验中，取处于指数生长期状态良好的配体细胞(U2OS PD-L1细胞，9.6×105个细胞/ml)，使用自动分液器加入384孔板，12.5μL/孔；每孔中加入梯度稀释的抗体；同时，取处于指数生长期状态良好的受体细胞(Jurkat PD-1细胞)，6.4×105个/ml，使用自动分液器接种于384孔板上，12.5μL/孔，混匀，室温孵育120min后，每孔加入2.5μL Bioassay Reagent 1(DiscoverX，93-0933)，混匀室温避光孵育15min。然后每孔加入10μL Bioassay Reagent 2(DiscoverX，93-0933)，混匀室温避光孵育60min。酶标仪读取化学发光信号。使用GraphPad Prism5分析数据，并计算IC50值。表5的结果表明，嵌合抗体Chi1与对照抗体相比，具有相当的阻断U2OS表面PD-L1与Jurkat表面PD-1结合的活性，其中Chi1的阻断活性较优。
表5：嵌合抗体Chi1阻断细胞/细胞结合的IC50数据
Figure GPA0000289208030000161
实施例5抗人PD-L1杂交瘤单克隆抗体的人源化
根据上述嵌合抗体的活性，选择最优的Chi1进行人源化。通过搜索对比IMGT人类抗体重轻链可变区种系基因数据库(http：//www.imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi)，挑选与Chi1同源性高的重轻链可变区种系基因(Germlinesequence)作为模板，将鼠源抗体的CDR区通过CDR移植的方法移植到相应的人源模板中，形成次序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的可变区序列(其中氨基酸残基由Kabat编号系统确定并注释)。鼠源抗体Chi1的重链人源化模板为IGHV4-30-4*01和IGHJ1*01的组合；轻链人源化模板为IGKV1-39*01和IGKJ2*02的组合，CDR直接移植后的序列为SEQ ID NOs：45和46。直接人源化后的抗体的亲和力一般会有很大程度下降，需要进一步设计回复突变以恢复亲和力和功能，即将上述人源模板抗体的框架氨基酸的几个位点回复突变为小鼠Chi1抗体中对应的框架区中的氨基酸序列。对于人源化Chi1抗体的重链可变区，将35位(按照Kabat编号，下同)的Ser(S)突变回Asn(N)，47位的Trp(W)突变回Tyr(Y)，以及71位的Val(V)突变回Arg(R)；对于人源化Chi1抗体的轻链可变区，将第2位的I1e(I)突变回Phe(F)，将第41位的Gly(G)突变为Asp(D)，以及将第44位的Pro(P)突变成Val(V)。编码人源化hu-Chi1抗体的VH和VL的序列分别为SEQ ID NO：47和51，并与人抗体恒定区连接构建成完整的抗体形式，分别为SEQ ID NOs：53和55。
将上述编码人源化hu-Chi1-3.4抗体的轻链和重链的DNA序列(SEQ ID NOs：54和56)。克隆到表达载体pcDNA3.1(Invitrogen，V-790)中。将上述DNA载体转染进入Expi CHO细胞(50mL体系，5×106/mL细胞，DNA 1μg/ml)中，进行瞬时表达，培养7天。然后用ProteinA柱(GE healthcare)纯化上清液中的人源化抗体。
表6：Chi1抗体的人源化回复突变位点
Figure GPA0000289208030000162
Grafted：表示将鼠源CDR直接移植到人FR中。
抗体编号规则按照Kabat命名法，如W47Y表示将47位的W突变为Y。
根据表6对人源化PD-L1抗体进行编号，如表7所示。
表7：人源化PD-L1抗体编号
Figure GPA0000289208030000163
Figure GPA0000289208030000171
实施例6人源化抗PD-L1抗体活性评价
6.1抗PD-L1人源化抗体的亲和力
Biacore测定抗PD-L1人源化抗体对PD-L1抗原的亲和力，具体步骤参照实施例4.1，下表8是人源化hu-Chi1、hu-Chi1-3.3、hu-Chi1-3.4以及嵌合抗体Chi1的亲和力数据，表明在回复突变过程中人源化的PD-L1抗体较好的维持了对PD-L1的亲和力。
表8：人源化Chi1抗体的亲和力数据
抗PD-L1抗体 重链可变区 轻链可变区 K<sub>D</sub>(人源化)
hu-Chi1 VH.1 VL.1 3.14E-09
hu-Chi1-3.3 Chi1_VL.1C Chi1_VH.1C 8.15E-10
hu-Chi1-3.4 Chi1_VL.1C Chi1_VH.1D 7.99E-10
Chi1 VH VL 6.74E-10
6.2抗PD-L1人源化抗体阻断细胞/细胞相互作用的分析
通过细胞/细胞相互作用分析抗PD-L1人源化抗体的阻断作用，具体步骤参照实施例4.5。表9的结果表明，人源化抗体与母本嵌合抗体有相当的阻断作用活性。
表9：人源化抗体与嵌合抗体阻断细胞相互作用的IC50数据比较
Figure GPA0000289208030000172
序列表
<110> 正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司
正大天晴药业集团股份有限公司
<120> 抗PD-L1抗体及其抗原结合片段
<160> 62
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 290
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 2
<211> 568
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Ala Lys
225 230 235 240
Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr
245 250 255
Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
260 265 270
Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
275 280 285
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser
290 295 300
Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys
305 310 315 320
Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu
325 330 335
Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala
340 345 350
Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile
355 360 365
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val
370 375 380
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
385 390 395 400
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
405 410 415
Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln
420 425 430
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
435 440 445
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val
450 455 460
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr
465 470 475 480
Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu
485 490 495
Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr
500 505 510
Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr
515 520 525
Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr
530 535 540
Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
545 550 555 560
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
565
<210> 3
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg His His
225 230 235 240
His His His His
<210> 4
<211> 500
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Ala Lys Thr Thr Ala Pro
165 170 175
Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser
180 185 190
Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
195 200 205
Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro
210 215 220
Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His
245 250 255
Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro
260 265 270
Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu
275 280 285
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu
290 295 300
Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
305 310 315 320
Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu
325 330 335
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr
340 345 350
Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser
355 360 365
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro
370 375 380
Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln
385 390 395 400
Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val
405 410 415
Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val
420 425 430
Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu
435 440 445
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg
450 455 460
Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val
465 470 475 480
Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
485 490 495
Thr Pro Gly Lys
500
<210> 5
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi1 VH(Mus musculus)
<400> 5
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ala Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Arg Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi1 VL(Mus musculus)
<400> 6
Asp Phe Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Ala Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Val Tyr Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi2-1 VH(Mus musculus)
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Phe Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asn Met Val Trp Ser Arg Gln Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi2-1 VL(Mus musculus)
<400> 8
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Gly Arg Val Glu Ala Ala Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi2-2 VH(Mus musculus)
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val His
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Met Val Trp Thr Arg His Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 112
<212> PRT
<213> 小鼠 Chi2-2 VL(Mus musculus)
<400> 10
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Glu Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Gly Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 11
Ser Asp Tyr Trp Xaa
1 5
<210> 12
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR2(Mus musculus)
<400> 12
Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 13
Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Xaa
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR1(Mus musculus)
<400> 14
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR2(Mus musculus)
<400> 15
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR3(Mus musculus)
<400> 16
Gln Gln Val Tyr Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 17
Ser Asp Tyr Trp Asn
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 18
Ser Asp Tyr Trp Ser
1 5
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 19
Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 20
Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 21
Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Ala
1 5 10
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 22
Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 23
Xaa Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR2(Mus musculus)
<400> 24
Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Xaa Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 25
Xaa Met Val Trp Xaa Arg Xaa Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR1(Mus musculus)
<400> 26
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Xaa Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR2(Mus musculus)
<400> 27
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR3(Mus musculus)
<400> 28
Leu Gln Xaa Thr His Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 29
Phe Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR1(Mus musculus)
<400> 30
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR2(Mus musculus)
<400> 31
Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 32
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR2(Mus musculus)
<400> 32
Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 33
Asn Met Val Trp Ser Arg Gln Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠 HCDR3(Mus musculus)
<400> 34
Ser Met Val Trp Thr Arg His Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR1(Mus musculus)
<400> 35
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 36
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR1(Mus musculus)
<400> 36
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Glu Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR3(Mus musculus)
<400> 37
Leu Gln Ser Thr His Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠 LCDR3(Mus musculus)
<400> 38
Leu Gln Ala Thr His Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 39
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi1嵌合抗体重链序列
<400> 39
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Ala Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Arg Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi1嵌合抗体轻链序列
<400> 40
Asp Phe Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Ala Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Val Tyr Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 41
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi2-1嵌合抗体重链序列
<400> 41
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Phe Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Asn Met Val Trp Ser Arg Gln Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 42
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi2-1嵌合抗体轻链序列
<400> 42
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Gly Arg Val Glu Ala Ala Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 43
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi2-2嵌合抗体重链序列
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Asn Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val His
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Val Arg Ser Met Val Trp Thr Arg His Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 44
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> Chi2-2嵌合抗体轻链序列
<400> 44
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Glu Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Glu Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Gly Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 45
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链可变区 Chi1 hVH-CDR graft
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化轻链可变区 Chi1 hVL-CDR graft
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链可变区-回复突变 Chi1 hVH.1D
<400> 47
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 48
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链可变区-回复突变 Chi1 hVH.1C
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Cys Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链可变区-回复突变 Chi1 hVH.1E
<400> 49
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链可变区-回复突变 Chi1 hVH.1F
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Glu Ala Trp Asp Arg Arg Thr Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化轻链可变区-回复突变 Chi1 hVL.1C
<400> 51
Asp Phe Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化轻链可变区-回复突变 Chi1 hVL.1B
<400> 52
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链序列 Chi1 hVH.1 D -IgG1
<400> 53
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35 40 45
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50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
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405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 54
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> variation
<223> 人源化重链编码基因序列 Chi1 hVH.1D-IgG1-DNA
<400> 54
atgggctgga gctgcatcat cctgttcctg gtggctaccg gagtgcactc ccaggtgcag 60
ctgcaggaga gcggaccagg actggtgaag ccttcccaga ccctgagcct gacctgtaca 120
gtgagcggct actctatcac atccgactat tggaattgga tcagacagca tccaggcaag 180
ggcctggagt acatcggcta catctcttat accggctcca catactataa ccccagcctg 240
aagtctcgcg tgaccatcag ccgggacaca tctaagaatc agttttctct gaagctgtcc 300
agcgtgaccg ccgctgatac agccgtgtac tattgcgcta ggggagaggc ttgggacagg 360
cggaccctgg attattgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccacaaag 420
ggcccttccg tgttcccact ggctccctct tccaagtcta catccggagg aaccgccgct 480
ctgggatgcc tggtgaagga ttatttccca gagcccgtga ccgtgtcttg gaactccggc 540
gccctgacaa gcggagtgca tacctttcct gctgtgctgc agagctctgg cctgtattct 600
ctgtccagcg tggtgacagt gccatcttcc agcctgggca cccagacata catctgcaac 660
gtgaatcaca agcctagcaa taccaaggtg gacaagaagg tggagccaaa gtcttgtgat 720
aagacccata catgcccccc ttgtcctgct ccagagctgc tgggaggacc atccgtgttc 780
ctgtttccac ccaagcccaa ggacaccctg atgatctccc gcacaccaga ggtgacctgc 840
gtggtggtgg acgtgagcca cgaggatccc gaggtgaagt ttaactggta cgtggatggc 900
gtggaggtgc ataatgctaa gaccaagcca agagaggagc agtataacag cacataccgc 960
gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020
aaggtgtcta ataaggccct gcccgctcct atcgagaaga caatctccaa ggccaagggc 1080
cagcctaggg agccacaggt gtataccctg cctccatctc gggacgagct gacaaagaac 1140
caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccca gcgatatcgc tgtggagtgg 1200
gagtctaatg gccagcctga gaacaattat aagaccacac cccctgtgct ggacagcgat 1260
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agcctgtctc ccggcaagtg a 1401
<210> 55
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化轻链序列 Chi1 hVL.1C-kappa
<400> 55
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile
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Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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210
<210> 56
<211> 696
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> variation
<223> 人源化轻链编码基因序列 Chi1 hVL.1C-kappa-DNA
<400> 56
atgggctggt cttgcatcat cctgttcctg gtggccaccg gcgtgcactc cgacttccag 60
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<210> 57
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链序列 Chi1 hVH.1 C -IgG1
<400> 57
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
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Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
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305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 58
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> variation
<223> 人源化重链编码基因序列 Chi1 hVH.1C-IgG1-DNA
<400> 58
atgggctgga gctgcatcat cctgttcctg gtggctaccg gagtgcactc ccaggtgcag 60
ctgcaggaga gcggaccagg actggtgaag ccttcccaga ccctgagcct gacctgtaca 120
gtgagcggct actctatcac atccgactat tggaattgga tcagacagca tccaggcaag 180
ggcctggagt acatcggcta catctcttat accggctcca catactataa ccccagcctg 240
aagtctcgcg tgaccatcag ccgggacaca tctaagaatc agttttctct gaagctgtcc 300
agcgtgaccg ccgctgatac agccgtgtac tattgcgcta ggggagaggc ttgggacagg 360
cggaccctgg attgttgggg ccagggcacc ctggtgacag tgtcttccgc ttccacaaag 420
ggcccttccg tgttcccact ggctccctct tccaagtcta catccggagg aaccgccgct 480
ctgggatgcc tggtgaagga ttatttccca gagcccgtga ccgtgtcttg gaactccggc 540
gccctgacaa gcggagtgca tacctttcct gctgtgctgc agagctctgg cctgtattct 600
ctgtccagcg tggtgacagt gccatcttcc agcctgggca cccagacata catctgcaac 660
gtgaatcaca agcctagcaa taccaaggtg gacaagaagg tggagccaaa gtcttgtgat 720
aagacccata catgcccccc ttgtcctgct ccagagctgc tgggaggacc atccgtgttc 780
ctgtttccac ccaagcccaa ggacaccctg atgatctccc gcacaccaga ggtgacctgc 840
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gtgtttagct gctctgtgat gcatgaggct ctgcacaatc attacaccca gaagtccctg 1380
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<210> 59
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<223> 人源化轻链序列 Chi1 hVL.1B-kappa
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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210
<210> 60
<211> 696
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> variation
<223> 人源化轻链编码基因序列 Chi1 hVL.1B-kappa-DNA
<400> 60
atgggctggt cttgcatcat cctgttcctg gtggccaccg gcgtgcactc cgacatccag 60
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cagctgaagt ctggcaccgc ttccgtggtg tgcctgctga acaatttcta ccccagagag 480
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<220>
<221> VARIANT
<223> 人源化重链序列 Chi1 hVH.1 E -IgG1
<400> 61
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
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370 375 380
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Lys
<210> 62
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys

Claims (38)

1.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含以下序列：
(a)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和19所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列；或
(b)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:18、12和20所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列；或
(c)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和20所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列；或
(d)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和21所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列；或
(e)重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和22所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和19所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:18、12和20所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和20所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和21所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段包含重链HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述重链HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:17、12和22所示的氨基酸序列；以及轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述轻链LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列。
7.如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的或人源化的抗体或其抗原结合片段。
8.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(b)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(c)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:51具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(d)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:52具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(e)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:51具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(f)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:50具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:51具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(g)重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:51具有至少80％同源性的氨基酸序列。
9.如权利要求8所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)如SEQ ID NO:5所示的重链可变区和如SEQ ID NO:6所示的轻链可变区；或
(b)如SEQ ID NO:45所示的重链可变区和如SEQ ID NO:46所示的轻链可变区；或
(c)如SEQ ID NO:47所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区；或
(d)如SEQ ID NO:48所示的重链可变区和如SEQ ID NO:52所示的轻链可变区；或
(e)如SEQ ID NO:49所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区；或
(f)如SEQ ID NO:50所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区；或
(g)如SEQ ID NO:48所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区。
10.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:45所示的重链可变区和如SEQ ID NO:46所示的轻链可变区。
11.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:47所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区。
12.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:48所示的重链可变区和如SEQ ID NO:52所示的轻链可变区。
13.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:49所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区。
14.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:50所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区。
15.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:48所示的重链可变区和如SEQ ID NO:51所示的轻链可变区。
16.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:39具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:40具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(b)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:53具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:55具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(c)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:57具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:59具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(d)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:61具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:55具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(e)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:62具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:55具有至少80％同源性的氨基酸序列；或
(f)重链，所述重链包含与SEQ ID NO:57具有至少80％同源性的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:55具有至少80％同源性的氨基酸序列。
17.如权利要求16所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)如SEQ ID NO:39所示的重链和如SEQ ID NO:40所示的轻链；或
(b)如SEQ ID NO:53所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链；或
(c)如SEQ ID NO:57所示的重链和如SEQ ID NO:59所示的轻链；或
(d)如SEQ ID NO:61所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链；或
(e)如SEQ ID NO:62所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链；或
(f)如SEQ ID NO:57所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链。
18.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:53所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链。
19.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:57所示的重链和如SEQ ID NO:59所示的轻链。
20.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:61所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链。
21.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:62所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链。
22.一种分离的结合PD-L1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO:57所示的重链和如SEQ ID NO:55所示的轻链。
23.如权利要求1-15中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自单克隆抗体、scFv、Fab片段、Fv片段、F(ab)'片段、F(ab')2片段、双特异性抗体、免疫缀合物或其组合。
24.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与治疗剂连接或缀合。
25.如权利要求24所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述治疗剂是细胞毒性药物、放射性同位素、免疫调节剂或抗体。
26.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段对PD-L1具有10nM至0.1nM的亲和力。
27.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制PD-L1与PD-1的结合，其抑制PD-L1与PD-1结合的IC50为20ng/mL至800ng/mL。
28.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用。
29.如权利要求1-22中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制在表面上分别表达PD-L1和PD-1蛋白的细胞之间的相互作用的IC50为10ng/mL至400ng/mL。
30.一种组合物，其包含根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
31.一种分离的多核苷酸，其编码根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
32.一种表达载体，其包含根据权利要求31所述的分离的多核苷酸。
33.一种宿主细胞，其包含根据权利要求32所述的表达载体。
34.根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于制备促进T细胞活化的药物的用途。
35.根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于制备在受试者中减少肿瘤或抑制肿瘤细胞生长的药物的用途。
36.根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于制备在有需要的受试者中治疗癌症的药物的用途。
37.根据权利要求36所述的用途，其中，所述癌症选自由以下组成的组：淋巴瘤、白血病、黑色素瘤、神经胶质瘤、乳腺癌、肺癌、肠癌、骨癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、肝癌、胃癌、睾丸癌、唾液腺癌、甲状腺癌、胸腺癌、上皮癌、头或颈癌、胰腺癌或其组合。
38.根据权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于制备在有需要的受试者中治疗传染病的药物的用途，其中，所述传染病选自由以下组成的组：念珠菌病、曲霉菌病、链球菌性肺炎、链球菌性皮肤和口咽病状、革兰氏阴性脓毒症、结核病、单核细胞增多症、流行性感冒、疟疾、血吸虫病和锥虫病。
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