CN119421899A

CN119421899A - 抗独特型抗体及其用途

Info

Publication number: CN119421899A
Application number: CN202380041658.4A
Authority: CN
Inventors: 萨韦里奥·阿尔贝蒂
Original assignee: Mediterranean Treatment Co ltd
Current assignee: Mediterranean Treatment Co ltd
Priority date: 2022-05-30
Filing date: 2023-05-29
Publication date: 2025-02-11
Also published as: EP4532559A1; WO2023232745A1

Abstract

本发明涉及抗独特型抗体或其抗原结合片段，其特异性结合抗Trop‑2抗体的独特型区域或抗Trop‑2抗体的抗体片段。在进一步的实施方案中，本文要求保护一种检测包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的方法。在进一步的实施方案中，描述了一种通过使用根据本发明的抗Id Ab来抑制CAR T/NK细胞疗法的毒性的方法。

Description

抗独特型抗体及其用途

背景技术

可获得使用表达重组受体的工程化细胞进行过继细胞疗法的方法，所述重组受体例如含有胞外抗体抗原结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)。

CAR-T或CAR-NK细胞疗法是一种有前景的T/NK细胞治疗工程实践。这基于靶向特定肿瘤相关抗原并将抗体抗原识别与免疫效应细胞的细胞毒性活性直接联系起来的人工CAR。免疫细胞从患者的外周血中分离(称为白细胞分离法的程序)，在体外进行工程改造以表达特定的CAR，并且一旦注回患者体内，它们就会触发针对相应靶抗原和表达该抗原的细胞的免疫反应。

人体防御系统可以识别分子是自身或非自身分子，包括细菌、病毒和异常癌细胞。癌细胞的识别基于其抗原性和通过表达被识别为非自身的抗原而获得的免疫原性。然而，癌细胞可以破坏免疫系统的优势，导致抗肿瘤免疫力不足以及肿瘤存活和进展。

CAR的产生彻底改变了治疗某些癌症的基于T细胞的免疫疗法。CAR-T通过免疫球蛋白抗原结合区识别靶抗原，因此绕过了MHC(主要组织相容性复合体)呈递的需要。

CAR通常包含抗体片段，例如scFv或Fab片段，其掺入融合蛋白中，该融合蛋白还包含其他成分，例如CD3-ζ或CD28跨膜结构域和选择性T细胞活化部分，包括CD3-ζ、CD28、OX40、4-IBB、Lek和/或ICOS的内结构域(Sadelain,Brentjens等人,2013)。

CAR构建体也已用于指导自然杀伤(NK)细胞的活性(Hermanson和Kaufman 2015)。NK细胞是在没有MHC和抗体的情况下识别靶细胞的免疫细胞。因此，它们可以引发快速的免疫反应(Klingemann 2014)，这使得它们对于破坏大多缺乏I类MHC的细胞非常重要。

不引起任何炎症的癌细胞往往被免疫系统视为自身细胞，并且不能有效刺激T细胞反应。NK细胞产生几种细胞因子，包括肿瘤坏死因子α、干扰素γ和IL-10(Jiang,Zhang等人,2014)。NK细胞的激活导致免疫效应细胞逐渐形成，例如树突状细胞、巨噬细胞和中性粒细胞，从而促进抗原特异性T细胞和B细胞反应。

NK细胞不需要HLA匹配；因此，它们可用作同种异体效应细胞(Hermanson和Kaufman 2015)。NK细胞与T细胞不同，由于缺乏靶向要杀死的细胞的内源性抗原特异性，NK细胞很容易被CAR重新定向。细胞靶向scFv或Fab可以通过跨膜结构域连接到一个或多个细胞内信号传导结构域，以实现淋巴细胞激活。与CAR-NK细胞一起使用的信号传导结构域包括CD3-ζ、CD28、4-IBB、DAPIO和OX40。NK细胞系，例如NK-92、NKG、YT、NK-YS、HANK-I、YTS和NKL也已用于此目的。

CAR-T/NK疗法的主要担忧是与大量活化T细胞介导的强烈抗肿瘤反应有关的“细胞因子风暴”的危险(Sadelain,Brentjens等人,2013)。这种细胞因子风暴会导致发热、低血压、缺氧、神经功能障碍和多器官衰竭。

因此，存在对改进的CAR构建体的设计和CAR策略的根本需求，以得到更好的疗效并降低全身毒性，并实施并行方法以降低“细胞因子风暴”或其他全身毒性的风险。

预防这些严重反应可能有助于减轻对非肿瘤细胞的靶向毒性，其中表达靶抗原的正常组织会受到CAR-T或CAR-NK疗法引起的毒性的影响。例如，在接受过CEA靶向T细胞的所有三名转移性结直肠癌癌症患者中均诱发了严重的短暂性炎症性结肠炎(Parkhurst,Yang等人,2011)。

因此，迫切需要控制和管理CAR-T和CAR-NK细胞毒性，特别是当其达到危及生命的水平时。人们尝试了不同的策略来实施强有力的方法以控制CAR-T和CAR-NK细胞毒性。

预防这些脱靶效应的最古老策略之一是基于在CAR-T细胞中引入自杀基因，这正用于癌症免疫疗法(Jones,Lamb等人,2014)。不同的遗传编码分子允许通过控制代谢途径、二聚化诱导来诱导基因修饰的T细胞的选择性死亡。如此设计导致不可逆地消除导致不受控制的毒性的细胞并防止对正常组织的损害。目前已验证的两个自杀基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和诱导型胱天蛋白酶-9(iCasp9)(Jones,Lamb等人,2014)。

其他策略包括调节自杀基因的激活，以消除CAR-T细胞同时保留一部分仍具有抗肿瘤活性的细胞，以及引入抑制性CAR以保护正常细胞(Minagawa,Al-Obaidi等人,2019)。

FDA最近批准了托珠单抗，其是一种抗白细胞介素-6受体拮抗剂，用于治疗CAR T细胞诱导的细胞因子释放综合征，并在难治性病例中联合施用糖皮质激素(Santomasso,Nastoupil等人,2021)。

然而，这些方法并不令人满意。它们主要基于引入额外的基因。许多被引入CAR-T细胞并由CAR-T细胞产生的这些新分子通常会诱导宿主的免疫反应，从而损害CAR-T/NK细胞。

1971年，Niels Kaj Jerne模拟了在早期个体发育过程中免疫系统功能发育如何形成。在胸腺中，产生针对内源性分子的抗体(Ab)的淋巴细胞受到抑制，导致只有“抗非自身”抗原才能存活/被选择，这些抗原通过随机突变和克隆选择过程识别。这种机制决定了自身耐受性和广泛的抗体多样性。免疫球蛋白基因通过V(D)J重组形成，该重组连接了可变基因(V)、多样性基因(D)和连接基因(J)种系基因。这导致每个个体产生不同的、独特的抗体模式范围，这取决于抗原呈递细胞上的不同组织相容性抗原以及取决于涉及V基因的随机突变。

T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白的可变区包含具有独特氨基酸结构的互补决定区(CDR)，其决定抗原特异性。每个CDR形成的结构称为独特位(Kieber-Emmons,Monzavi-Karbassi等人,2012)。单个抗体分子上独特位的集合决定了该抗体的独特型(Id)(Jerne，2004)(图1)。

用抗独特型(抗-Id)抗体进行免疫接种为抗癌免疫疗法方法提供动力。根据网络假设，独特型-抗独特型相互作用通过诱导类似于名义抗原(Ag)诱导的反应的特异性免疫反应来调节宿主对给定抗原的免疫反应。此外，基于Id的免疫疗法不依赖于原始Ag或其片段的疫苗接种，排除了与传统抗原疫苗相关的并行不合需要的副作用的可能性。此外，抗Id疫苗诱导的肿瘤免疫反应的精细特异性的可预测性高于抗原疫苗。

本发明的作者设计并展示了在没有任何额外基因修饰下实施完全特异性CAR-T/NK细胞阻断方法的优势。这是通过开发和利用抗Trop-2抗Id抗体实现的，如下所述。

发明描述

本公开内容涉及抗独特型抗体(抗Id Ab)，所述抗独特型抗体结合或识别抗Trop-2抗体部分，特别是存在于重组受体(包括CAR)中的抗Trop-2抗体部分。

本公开内容还涉及抗Id Ab用于特异性识别、检测或选择表达所述重组受体的细胞的用途，所述细胞例如抗Trop-2 CAR T细胞或抗Trop-2CAR NK细胞。

本公开内容还涉及抗Id Ab用于特异性耗竭所述细胞的用途。

附图说明

图1：在存在抗Trop-2 CAR-T细胞的情况下，根据本发明的抗Id Ab引起的效应的示意图。独特型决定簇由对每种抗原具有特异性的重链和轻链可变区的氨基酸序列的构象产生。抗Id Ab可识别抗体可变区中的抗原决定簇，该抗体在CAR T细胞的胞外部分表达。

图2：用抗活化的Trop-2 CAR转导的Jurkat细胞的流式细胞术分析。横轴：荧光染色。纵轴：与细胞大小相关的细胞前向散射。每个点代表单个细胞的读数。(A)未染色细胞的对照图。(B)抗FLAG-Alexa488抗体与添加到CAR构建体中的合成标记Flag结合。(C)抗Hu2G10独特型(1D4-1抗Id Ab)，然后是山羊-抗-小鼠Alexa488荧光抗体以显示结合。椭圆形包含阳性CAR表达细胞。

图3：ELISA测定显示抗Id Ab对CAR可变区的亲和力。用1D4-1抗Id Ab包被ELISA板的孔，并与系列稀释的Hu2G10 mAb一起孵育。使用HRP偶联的山羊-抗-人kappa多克隆抗体检测结合。图中绘制了每个测试抗体浓度(X轴)处的吸光度值(Y轴)。背景是指执行了所有指示程序但未应用Hu2G10的样品孔。

发明详述

除非本文另有定义，否则使用的所有技术和科学术语具有与基因治疗、生物化学、遗传学和分子生物学领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。

除非另有说明，本发明的实践将采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些技术属于本领域的技术范围。此类技术在文献中进行了充分解释。参见，例如Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第三版(Sambrook等人，2001，纽约冷泉港：冷泉港实验室出版社)。

本文提供了结合或识别抗体及其抗原结合片段包括抗体片段(例如scFv)和含有其的嵌合分子(例如嵌合抗原受体)的试剂。还提供了含有这种试剂的组合物和制品，包括那些包含所述试剂所结合的表面(例如固体表面，例如板或珠)的组合物和制品。此外，本文提供的实施方案中还包括使用所述试剂、组合物和制品的用途和方法，包括用于检测、使用、操作和/或刺激含有或疑似含有所述抗体或嵌合分子的细胞或疗法，例如用于检测、刺激或使用CAR表达的细胞。

Trop-2是癌细胞和转移扩散的标志，被选为CAR工程的靶标，作为在施用治疗后控制CAR-T和CAR-NK活性和潜在副作用的极其特异性的手段。本领域已知的Trop-2靶向分析和治疗方法依赖于抗Trop-2mAb，其识别位于球状区和茎区之间的单个免疫显性表位，该表位在所有表达Trop-2的细胞中均可接近和识别。

在一些实施方案中，本文提供了结合或识别抗Trop-2靶抗体或其抗原结合片段的抗Id Ab或其抗原结合片段。

在一个实施方案中，所述抗Trop-2抗体是WO2010089782中描述的2G10 mAb。

在一个实施方案中，所述抗Trop-2抗体是WO2016087651中描述的人源化2G10mAb。

在一个实施方案中，所述靶标是活化的Trop-2，即在肿瘤细胞中具有特异性和差异性表达的加工形式的Trop-2，其中所述加工形式的Trop-2在R87和T88之间被蛋白水解切割。

使用包含Trop-2分子的整个胞外部分(SEQ ID NO:1，对应于SEQ IDNO:2的氨基酸31-274)和单个结构域(SEQ ID NO:3，球状结构域：SEQ IDNO:1的氨基酸31-145；SEQ IDNO:4“茎”：SEQ ID NO:2的氨基酸146-274)的免疫原生成抗活化的Trop-2的抗体，其中所述活化的Trop-2是在R87和T88之间蛋白水解切割的Trop-2分子。这些在人293转化肾上皮细胞和MCF-7乳腺腺癌、鼠L纤维肉瘤和NS-0骨髓瘤、昆虫Sf9和酵母细胞中以其天然折叠形式产生。使用PCR扩增将Trop-2编码序列与用于纯化或增强免疫原性的标记融合来生成用于生产的表达载体。将PCR片段亚克隆在上述载体中并在相应的宿主中表达。通过亲和层析纯化Trop-2蛋白。按照本领域已知的最佳程序，用上述免疫原对BALB/c小鼠进行多个免疫周期。根据本领域已知的方法，将免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0或NS-0骨髓瘤细胞融合并获得相应的杂交瘤。筛选由此获得的杂交瘤产生的抗体，以确定其对肿瘤细胞表达的加工的Trop-2具有的特异性和差异性反应性。已选择mAb 1A9和1B4，因为它们识别并以高亲和力仅结合肿瘤特异性加工形式的Trop-2(活化的Trop-2，其中所述活化的Trop-2是在R87和T88之间蛋白水解切割的Trop-2分子)的能力，而不是正常组织中发现的未加工的Trop-2。KM12SM/wtTrop-2和KM12SM/载体转染子上的1A9、1B4和T16 mAb之间的流式细胞术交叉竞争实验表明，1A9和1B4阻断了彼此的结合，从而表明它们识别了相同的表位。相反，1A9和1B4与T16之间没有竞争，这表明本文所述的程序使得有效地获得了针对与免疫优势表位不同的表位的mAb。

在一个实施方案中，所述抗活化的Trop-2抗体是1A9，其由保藏在以下国际保藏单位(IDA)的杂交瘤分泌：意大利热那亚，IRCCS OspedalePoliclinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定保藏编号为PD21006。

在一个实施方案中，所述抗活化的Trop-2抗体是1B4，其由保藏在以下国际保藏单位(IDA)的杂交瘤分泌：意大利热那亚，IRCCS OspedalePoliclinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定保藏编号为PD21005。

C57BL/6已用人源化2G10抗体免疫，然后用鼠2G10抗体刺激。杂交瘤已获得，优选的杂交瘤是1D4-1抗Id Ab。

在优选实施方案中，所述1D4-1抗Id Ab由杂交瘤分泌，所述杂交瘤保藏在以下国际保藏单位(IDA)：意大利热那亚，IRCCS OspedalePoliclinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定保藏编号为PD21004。

在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或抗原结合片段特异性结合包含在或包括在CAR的胞外部分的抗原结合结构域内的抗Trop-2靶抗体或抗原结合片段。

在任何此类实施方案的一些中，scFv在CAR的胞外部分内或包括在CAR的胞外部分中。在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或抗原结合片段结合包含在或包括在CAR的胞外部分中的scFv。在任何此类实施方案的一些中，所述CAR还包含通过间隔子连接到抗原结合结构域的跨膜结构域。在任何此类实施方案的一些中，所述间隔子是免疫球蛋白间隔子。在任何此类实施方案的一些中，所述间隔子包含氨基酸基序GlyGlyGlyGlySer，更优选地，所述基序重复4次。在任何此类实施方案的一些中，所述跨膜结构域包含CD28的跨膜部分。在任何此类实施方案的一些中，所述CD28的跨膜部分是人CD28。在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或其抗原结合片段不与CAR的间隔结构域中的表位结合。

在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或其抗原结合片段不与Fc结构域中的表位结合。在任何此类实施方案的一些中，所述Fc结构域是人IgG1Fc结构域。

在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或其抗原结合片段是包含抗Trop-2靶抗体或其抗原结合片段的CAR的激动剂。在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或其抗原结合片段在可溶形式下是CAR的激动剂。在任何此类实施方案的一些中，所述抗IdAb或其抗原结合片段在固定到支持物或固定相上时是CAR的激动剂。在任何此类实施方案的一些中，所述支持物或固定相是板或珠子。

在任何此类实施方案的一些中，抗Id Ab对抗Trop-2靶抗体或其抗原结合片段的结合亲和力(Kd)是或约是或小于或约是100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或0.1nM或0.01nM或0.001nM。

在任何此类实施方案的一些中，抗Id Ab或其抗原结合片段是完整抗体或全长抗体。

在一些实施方案中，本文还提供一种缀合物，其包含本文提供的任何实施方案中的抗Id Ab或其抗原结合片段和异源分子或部分。在任何此类实施方案的一些中，所述异源分子或部分是标记。在任何此类实施方案的一些中，所述标记选自荧光染料、荧光蛋白、放射性同位素、发色团、金属离子、金颗粒、银颗粒、磁性颗粒、多肽、酶、链霉亲和素、生物素、发光化合物和寡核苷酸。在任何此类实施方案的一些中，所述异源分子或部分是蛋白质、肽、核酸或小分子，其任选地是或包含毒素或Strep-Tag。

在一些实施方案中，本文还提供了一种组合物，其包含此类实施方案中的任一种的抗Id Ab或其抗原结合片段或此类实施方案中的任一种的缀合物。

在任何此类实施方案的一些中，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。

在任何此类实施方案的一些中，所述组合物还包含在癌症治疗中具有活性的化合物。

在一些实施方案中，本文还提供了一种试剂盒，其包含一种或多种此类实施方案中的任一种的抗Id Ab或其抗原结合片段、此类实施方案中的任一种的缀合物，以及任选的使用说明。

在一些实施方案中，本文还提供了一种检测包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的方法，其包括：

(a)使表达包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的细胞与特异性结合靶抗体或其抗原结合片段的此类实施方案中的任一种的抗Id Ab或其抗原结合片段或此类实施方案中的任一种的缀合物接触；和

(b)检测与所述抗Id Ab或其抗原结合片段结合的细胞。

在任何此类实施方案的一些中，所述抗Id Ab或其抗原结合片段被直接或间接标记以用于检测。

在一些实施方案中，本文还提供了一种从细胞群中选择细胞的方法，包括：

(a)使表达包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的细胞群或与靶抗体或其抗原结合片段结合的细胞与此类实施方案中的任一种的抗Id Ab或其抗原结合片段或此类实施方案中的任一种的缀合物接触，所述缀合物特异性结合靶抗体或其抗原结合片段；和

(b)选择与所述抗Id Ab或其抗原结合片段结合的细胞。在任何此类实施方案的一些中，通过基于亲和力的分离来选择与所述抗Id Ab或其抗原结合片段结合的细胞。

在任何此类实施方案的一些中，所述基于亲和力的分离是基于免疫亲和的分离。在任何此类实施方案的一些中，所述基于亲和力的分离是通过流式细胞术进行的。在任何此类实施方案的一些中，所述基于亲和力的分离是通过磁激活细胞分选进行的。在任何此类实施方案的一些中，所述基于亲和力的分离包括亲和层析。在任何此类实施方案的一些中，所述抗独特型抗体或其抗原结合片段可逆地结合或固定到支持物或固定相上。

在一些实施方案中，本文还提供了一种耗竭细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用组合物，所述组合物包含此类实施方案中的任一种的抗Id Ab或其抗原结合片段，或此类实施方案中的任一种的缀合物，其特异性结合所述靶抗体或其抗原结合片段，其中所述受试者已施用表达包含所述靶抗体或其抗原结合片段的CAR的细胞。在任何此类实施方案的一些中，所述耗竭通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)发生。

在一个实施方案中，本文要求保护包含抗Id Ab的药物组合物，优选地，所述抗IdAb是1D4-1 Ab。

在一个实施方案中，所述药物组合物还包含多个抗Trop-2 CAR工程化细胞。

在一个实施方案中，本文要求保护所述药物组合物用于治疗受试者的疾病的方法。在一个实施方案中，所述疾病是肿瘤。

在一个实施方案中，所述抗Id Ab抑制基于抗Trop-2 CAR细胞的疗法的强度。

本发明的作者令人惊讶地证明了根据本发明的抗Id Ab抑制抗Trop-2CAR-T/NK细胞的毒性。

以下是说明实施本发明的方法的实施例。这些实施例不应被视为限制性的。

实施例

实施例1：

用抗活化的Trop-2 CAR转导Jurkat细胞，其中所述VH具有如SEQID NO:5所示的蛋白序列、如SEQ ID NO:6所示的DNA序列，并且VL具有如SEQ ID NO:7所示的蛋白序列、如SEQID NO:8所示的DNA序列。在用抗FLAG-Alexa488抗体(图2B)或抗Hu2G10独特型(1D4-1抗IdAb)染色后，然后用山羊抗鼠Alexa488荧光抗体染色(图2C)，然后通过FACS分析细胞。未染色的细胞也作为对照分析(图2A)。CAR元件显示荧光染色。即CAR在膜水平上表达并能够与1D4-1抗Id Ab结合。

SEQ ID NO:5

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSSSYISWLRQAPGQRLEWIAWIYAGTGGTSYNQKFTGKATLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARHNPRYYAMDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:6

CAAGTGCAGCTCGTCCAGTCTGGAGCTGAAGTCAAAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAAGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGCTTCACCTTCAGCAGTAGCTATATCAGTTGGTTGAGGCAGGCCCCTGGACAGAGACTTGAGTGGATTGCATGGATTTATGCTGGAACTGGCGGAACTAGCTATAATCAGAAGTTCACAGGCAAGGCCACACTGACTGTAGACACATCCGCCAGCACAGCCTACATGGAACTCAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCAAGACATAACCCTCGTTACTATGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGAACCACAGTCACCGTCTCCTCA

SEQ ID NO:7

DTQMTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNTLRPGVPSRFSGSGYGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQSDNLPYTFGGGTKVEIKR

SEQ ID NO:8

GACACCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCTCCCTGTCCGCCAGCGTGGGAGATAGAGTCACCATCACATGCATCACCAGCACTGATATTGATGATGATATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATTTCAGAAGGCAATACTCTGCGCCCTGGAGTCCCATCCCGATTCTCCGGCAGTGGCTATGGAACAGATTTTACCTTTACAATTAGCTCCCTGCAGCCAGAAGATATTGCAACCTACTACTGTTTGCAAAGTGATAACCTGCCCTACACCTTCGGAGGGGGGACCAAAGTCGAAATCAAACGG

实施例2：

在4℃下用100μl/孔的PBS中的1μg/ml 1D4-1 Ab(批号9/26/14)将ELISA板的孔包被过夜。用SuperBlock(Thermo Fisher Scientific)封闭后，应用在掺有2％人血清的SuperBlock中稀释至1μg/ml的Hu2G10，并在含有2％血清的SuperBlock中连续稀释3倍。使用SuperBlock中的HRP偶联山羊抗人kappa多克隆抗体检测结合。计算每个测试抗体浓度(X轴)下的吸光度值(Y轴)。背景是在执行所有指示程序但未应用Hu2G10的样品孔中计算的。

参考文献

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Claims

1.抗独特型抗体(抗Id Ab)或其抗原结合片段，其中所述抗Id Ab或其抗原结合片段特异性结合抗Trop-2抗体的独特型区域或抗Trop-2抗体的抗体片段。

2.根据权利要求1所述的抗Id Ab，其是分离的单克隆1D4-1抗Id Ab，所述单克隆1D4-1抗Id Ab由保藏在以下国际保藏单位(IDA)的杂交瘤细胞系产生：意大利热那亚，IRCCSOspedale Policlinico San Martino，Interlab细胞系保藏中心，并指定保藏编号为PD21004。

3.根据权利要求1所述的抗Id Ab，其中所述抗Trop-2抗体或抗体片段特异性识别活化的Trop-2，其中所述活化的Trop-2是在R87和T88之间蛋白水解切割的Trop-2分子。

4.根据权利要求1所述的抗Id Ab，其结合包含在或包括在CAR的胞外部分的抗原结合结构域内的抗Trop2靶抗体或抗原结合片段。

5.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的抗Id Ab。

6.根据权利要求5所述的组合物，其还包含一种或多种在癌症治疗中有效的其他化合物。

7.根据权利要求5或6所述的组合物，其还包含多个抗Trop-2 CAR工程化细胞。

8.一种检测包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的方法，所述方法包括：

(a)使表达包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的细胞与根据权利要求1-4中任一项所述的抗Id Ab或其抗原结合片段或它们中任一项的缀合物接触，所述缀合物特异性结合靶抗体或其抗原结合片段；和

(b)检测与所述抗Id Ab或其抗原结合片段结合的细胞。

9.一种选择表达CAR的细胞的方法，所述方法包括：

(a)使表达包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的细胞群或与靶抗体或其抗原结合片段结合的细胞与根据权利要求1-4中任一项所述的抗Id Ab或其抗原结合片段或特异性结合靶抗体或其抗原结合片段的缀合物接触；和

(b)选择与所述抗Id Ab或其抗原结合片段结合的细胞。

10.根据权利要求8所述的检测包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的方法，其中，在所述靶抗体或抗原结合片段中，VH具有如SEQ ID NO:5所示的蛋白序列、如SEQ ID NO:6所示的DNA序列，VL具有如SEQ ID NO:7所示的蛋白序列、如SEQ ID NO:8所示的DNA序列。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗Id A是1D4-1。

12.根据权利要求9所述的选择表达CAR的细胞的方法，其中，在所述靶抗体或抗原结合片段中，VH具有如SEQ ID NO:5所示的蛋白序列、如SEQ ID NO:6所示的DNA序列，VL具有如SEQ ID NO:7所示的蛋白序列、如SEQ ID NO:8所示的DNA序列。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗Id A是1D4-1。

14.根据权利要求6或7所述的组合物，其用于治疗受试者的疾病的方法。

15.根据权利要求14所述使用的组合物，其中所述疾病是表达TROP-2的实体肿瘤。

16.根据权利要求14所述使用的组合物，其中所述组合物的使用包括在施用所述组合物之前或与施用所述组合物组合施用表达包含靶抗体或其抗原结合片段的CAR的多个细胞。