CN114981286A

CN114981286A - 降低从纯化平台获得的组合物中酶水解活性速率的方法

Info

Publication number: CN114981286A
Application number: CN202080033105.0A
Authority: CN
Inventors: M·莱斯; C·迈耶; A·T·莫里斯; B·斯宾塞伯格; Y·伊格佐; F·埃德尔曼; R·福肯斯坦; T·格拉夫; J·顾; J·普拉巴卡尔
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2019-05-03
Filing date: 2020-05-01
Publication date: 2022-08-30
Also published as: JP2024062995A; BR112021021972A2; US20220194980A1; CA3137116A1; SG11202111938YA; WO2020227144A8; EP3962924A1; AU2025201439A1; AU2020268896B2; KR20220002581A; TW202108600A; KR20250057918A; JP2022531317A; AU2020268896A1; AU2020268896A8; IL287689A; MX2021013220A; WO2020227144A1; TWI870403B

Abstract

本公开内容提供了纯化平台，所述纯化平台包括深度过滤步骤和/或疏水相互作用层析(HIC)步骤。本文还公开了使用本文所述的纯化平台的方法和从所述纯化平台获得的组合物诸如药物组合物。

Description

降低从纯化平台获得的组合物中酶水解活性速率的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年1月15日提交的美国临时专利申请号62/961,609和2019年5月3日提交的美国临时专利申请号62/843,261的优先权，这些临时专利申请各自的公开内容借此以其全文引用的方式并入。

技术领域

本公开内容提供了包括深度过滤步骤和/或疏水相互作用层析(HIC)步骤的纯化平台。本文还公开了使用本文所述的纯化平台的方法和从所述纯化平台获得的组合物。

背景技术

从宿主细胞培养物中产生的生物治疗产品(诸如抗体)需要纯化以去除宿主细胞蛋白质和其他可能影响例如产品质量和治疗效果的杂质。当前的纯化方法可能无法去除所有宿主细胞蛋白质和杂质，包括宿主细胞水解酶。因此，与纯化靶标一起残留的宿主细胞蛋白质和杂质可影响纯化靶标本身以及其他添加剂，例如，出于配制目的添加的组分，诸如表面活性剂。因此，需要用于纯化由宿主细胞培养物产生的生物治疗产品以用于药物用途的改进方法。

本文引用的所有参考文献(包括专利申请及公布)全部以其全文引用的方式并入。

发明内容

在一个方面，提供了一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。

在一些实施例中，酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物的酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

在另一方面，提供了一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物中水解酶的水平。在一些实施例中，该一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中一种或多种水解酶的水平的相对降低为至少约20％。

在另一方面，提供了一种用于减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中聚山梨醇酯的降解。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

在一些实施例中，纯化平台用于从样品中纯化靶标，其中样品包含靶标和一种或多种宿主细胞杂质。在一些实施例中，靶标包含多肽。在一些实施例中，宿主细胞杂质是宿主细胞蛋白质。

在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行，或者深度过滤步骤在捕获步骤之后进行。

在一些实施例中，深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理。在一些实施例中，深度过滤器包含底物，该底物包含硅藻土组合物、二氧化硅组合物、纤维素纤维、聚合物纤维、粘性树脂和灰分组合物中的一种或多种。在一些实施例中，深度过滤器的底物的至少一部分包括表面改性。在一些实施例中，表面改性是季胺表面改性、阳离子表面改性和阴离子表面改性中的一种或多种。在一些实施例中，深度过滤器选自由EMPHAZE^TM深度过滤器、X0SP深度过滤器、PDD1深度过滤器、ZETA PLUS^TM 120ZA深度过滤器和ZETA PLUS^TM 120ZB深度过滤器组成的组。

在一些实施例中，捕获步骤包括通过亲和层析进行处理。在一些实施例中，亲和层析选自由蛋白A层析、蛋白G层析、蛋白A/G层析、蛋白L层析、FcXL层析、蛋白XL层析、κ层析和κXL层析组成的组。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中该病毒灭活步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在病毒灭活步骤之后进行。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括在捕获步骤之前进行的另一深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括一个或多个纯化步骤，并且其中该一个或多个纯化步骤在捕获步骤、深度过滤步骤和如果存在的病毒灭活步骤之后进行。在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤包括多肽纯化步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括在该一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行的另一深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中该UFDF步骤在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括在UFDF步骤之前或之后进行的另一深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤。在一些实施例中，HIC纯化步骤在如果存在的该一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行。在一些实施例中，HIC纯化步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在如果存在的UFDF步骤之前进行。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括pH保持步骤，其中该pH保持步骤在如果存在的该一个或多个纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括病毒过滤步骤，其中病毒过滤步骤在pH保持步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

在一些实施例中，HIC纯化步骤包括通过HIC过滤器进行处理。

在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：离子交换层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、疏水电荷诱导层析、陶瓷羟基磷灰石层析和多元层析。在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：DEAE、DMAE、TMAE、QAE、SPSFF、SPXL、QSFF、MEP-Hypercel^TM、Capto MMC和Capto Adhere。

在另一方面，提供了一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台按以下顺序包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；(b)病毒灭活步骤；(c)第二多肽纯化步骤；(d)第三多肽纯化步骤；以及(e)超滤/渗滤(UFDF)步骤，其中该纯化平台进一步包括在以下一项或多项之际进行的深度过滤步骤：(i)在捕获步骤之前；(ii)在捕获步骤之后并且在病毒灭活步骤之前；(iii)在病毒灭活步骤之后并且在第二多肽纯化步骤之前；(iv)在第二多肽纯化步骤之后并且在第三多肽纯化步骤之前；或者(v)在第三多肽纯化步骤之后并且在超滤/渗滤(UFDF)步骤之前；从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。

在一些实施例中，纯化平台进一步按以下顺序包括在第三多肽纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行的pH保持步骤和病毒过滤步骤。在一些实施例中，病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括在以下一项或多项之际进行的疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤：(i)在第三多肽纯化步骤之后并且在pH保持步骤之前；(ii)在pH保持步骤之后并且在病毒过滤步骤之前；或者(iii)在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前。

在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物的酶水解活性速率。

在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物中一种或多种水解酶的水平。

在一些实施例中，组合物包含聚山梨醇酯。在一些实施例中，聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

在一些实施例中，该方法进一步包括样品处理步骤。

在一些实施例中，样品是或来源于细胞培养样品。在一些实施例中，细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中该宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌(E.coli)细胞。在一些实施例中，样品包含宿主细胞或来源于该宿主细胞的组分。在一些实施例中，样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中该一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。

在一些实施例中，水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

在一些实施例中，样品包含靶标，并且其中该靶标是抗体部分。在一些实施例中，抗体部分是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

在一些实施例中，抗体部分选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1TCB抗体。

在一些实施例中，抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

在另一方面，提供了一种从本文所述方法中的任一种获得的药物组合物。

在另一方面，提供了一种包含聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物，其中该组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，并且其中该组合物的保质期超过24个月。

在另一方面，提供了一种包含抗体部分和聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物，其中该组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中与向卫生当局提交的与该配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的保质期相比，该组合物的保质期延长，以及其中与所述文件中指明的保质期相比，保质期延长至少6个月。

在另一方面，提供了一种包含抗体部分的配制的抗体部分组合物，其中该配制的抗体部分组合物具有减少的聚山梨醇酯降解，其中与向卫生当局提交的与该配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的降解相比，该降解减少至少约20％。

在另一方面，提供了一种包含抗体部分和聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物，其中该聚山梨醇酯在液体组合物的储存期间降解每年20％或更少。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物的抗体部分是单克隆抗体。在一些实施例中，配制的抗体部分组合物的抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物的抗体部分选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物的抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物的聚山梨醇酯水解活性速率降低至少约20％。在一些实施例中，聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

在另一方面，提供了一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后；或者在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。在一些实施例中，酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物的酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

在另一方面，提供了一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前；或者在纯化步骤之后，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物中一种或多种水解酶的水平。在一些实施例中，该一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中一种或多种水解酶的水平的相对降低为至少约20％。

在另一方面，提供了一种减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后；或者在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中聚山梨醇酯的降解。在一些实施例中，与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

在一些实施例中，包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器包含二氧化硅助滤剂(filter aid，助滤器)和聚丙烯酸类纤维浆。

在一些实施例中，包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器包括四个层，所述四个层包含水凝胶Q-官能化的非织造材料和九区微孔膜。

在一些实施例中，包含纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩的深度过滤器包括两个层，其中每层包含纤维素过滤器基质，其中该纤维素过滤器基质浸渍有包含硅藻土或珍珠岩中的一种或多种的助滤剂，并且其中每层进一步包含树脂粘结剂。

在一些实施例中，基于进入深度过滤器的溶液的pH来选择深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7至约8.5时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器。在一些实施例中，该方法进一步包括基于进入深度过滤器的溶液的pH来选择深度过滤器。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：深度过滤步骤，该深度过滤步骤包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器进行处理；捕获步骤，该捕获步骤包括通过蛋白A层析进行处理；以及纯化步骤。

在一些实施例中，纯化步骤包括通过HIC进行处理。在一些实施例中，HIC是苯基

快速流动层析。

在一些实施例中，纯化步骤包括通过阳离子交换层析进行处理。在一些实施例中，阳离子交换层析是

50HS。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，该第二深度过滤步骤包括通过包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器进行处理，并且其中该第二深度过滤步骤发生在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前。

在一些实施例中，纯化步骤包括通过多元层析进行处理。在一些实施例中，多元层析是Capto Adhere。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，该第二深度过滤步骤包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器进行处理，并且其中该第二深度过滤步骤发生在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中该病毒灭活步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，该一个或多个深度过滤步骤在病毒灭活步骤之后进行。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中该UFDF步骤在纯化步骤之后进行。

在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括确定组合物的酶水解活性速率。

在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括确定组合物中一种或多种水解酶的水平。

在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括样品处理步骤。

在一些实施例中，样品是或来源于细胞培养样品。在一些实施例中，细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中该宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌(E.coli)细胞。在一些实施例中，样品包含宿主细胞或来源于该宿主细胞的组分。

在一些实施例中，样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中该一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。在一些实施例中，水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。在一些实施例中，样品包含靶标，并且其中该靶标是抗体部分。在一些实施例中，抗体部分是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

在另一方面，提供了一种从本文所述的任何方法获得的药物组合物。

本领域技术人员将认识到，在本申请公开内容的范围和实质内，若干种实施例是可能的。本公开内容通过以下实例进一步说明，所述实例不应被解释为将本公开内容在范围或实质上限制于本文所述的具体程序。

附图说明

图1A示出了纯化平台100的示例性步骤。图1B示出了用于纯化平台的步骤的示例性选项。

图2示出了使用FAMS测定在从纯化平台获得的组合物中测量的游离脂肪酸的量的条形图。

图3示出了使用脂肪酶活性测定在从纯化平台获得的组合物中测量的水解活性的条形图。

图4示出了使用FAMS测定在从纯化平台获得的组合物中测量的游离脂肪酸的量的条形图。

图5示出了法立昔单抗的纯化选项的示意图。

图6A和图6B示出了在用PDD1过滤器过滤之前(图6A)和之后(图6B)在法立昔单抗的FcXL洗脱物中测量的PS20水解活性的条形图。

图7示出了使用FAMS测定在从纯化平台获得的组合物中测量的游离脂肪酸的量的条形图。

图8A至图8B示出了在使用深度过滤器过滤后在蛋白A洗脱物中测量的水解活性的条形图。

图9示出了EMPHAZE^TM深度过滤器澄清后蛋白A洗脱物的CHOP和聚山梨醇酯降解活性的相对水平。

图10示出了从X0SP深度过滤器(pH 5.5.)获得的组合物在不同通量下的聚山梨醇酯降解的比活性。

图11A至图11C示出了在pH 5.5的奥瑞珠单抗(图11A)、在pH 5.5的塞鲁单抗(图11B)和在pH 6.5的托珠单抗(图11C)在不同通量下的聚山梨醇酯降解的比活性。

图12示出了从纯化平台获得的组合物的特定FAMS速率的条形图。

图13示出了从纯化平台获得的组合物的特定FAMS速率的条形图。

图14示出了从纯化平台获得的组合物的特定FAMS速率的条形图。

图15示出了从纯化平台获得的组合物的特定LEAP速率的条形图。

图16示出了纯化工作流程的示意图。

图17示出了使用LEAP测定测量的从纯化平台获得的组合物的平均转化率的条形图。

图18A和图18B示出了使用脂肪酶活性测定测量的从纯化平台获得的组合物的水解活性的条形图。图18A示出了从CF 238获得的结果。图18B示出了从CF 239获得的结果。

图19A示出了使用LEAP测定测量的从纯化平台获得的组合物的平均转化率的条形图。图19B示出了使用脂肪酶活性测定测量的从纯化平台获得的组合物的水解活性的条形图。

具体实施方式

在一些方面，本申请提供了用于从包含靶标的样品中纯化靶标的方法，所述方法包括使样品经受本文所公开的纯化平台，所述纯化平台包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个疏水相互作用层析(HIC)步骤。

本公开内容部分基于以下意外发现，即包括一个或多个深度过滤步骤(诸如对宿主细胞培养液(HCCF)和/或亲和层析洗脱物进行的深度过滤步骤)的纯化平台降低了从其获得的组合物的酶水解活性速率。此外，本公开内容部分基于以下意外发现，即包括一个或多个HIC步骤的纯化平台降低了从其获得的组合物的酶水解活性速率，并且包括深度过滤步骤和HIC步骤的纯化平台可进一步降低从其获得的组合物的酶水解活性速率。

本领域技术人员还将理解，在不脱离本公开内容的范围的情况下，可以对这里描述的实施方式的形式和细节进行改变。此外，虽然已经参考各种实施方式描述了各种优点、方面和目的，但是本公开内容的范围不应受这些优点、方面和目的的限制。

定义

出于解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数，反之亦然。若下文阐述的任何定义与以引用的方式并入本文中的任何文献有冲突，则以阐述的定义为准。

术语“抗体部分”包括全长抗体及其抗原结合片段。在一些实施例中，全长抗体包含两条重链和两条轻链。轻链和重链的可变区负责抗原结合。两条链中的可变区通常包含三个高度可变的环，称为互补决定区(CDR)(轻链(LC)CDR，包括LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，重链(HC)CDR，包括HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3)。本文公开的抗体和抗原结合片段的CDR边界可以通过Kabat、Chothia或Al-Lazikani(Al-Lazikani 1997；Chothia 1985；Chothia 1987；Chothia 1989；Kabat 1987；Kabat 1991)的惯例定义或鉴定。重链或轻链的三个CDR插入称为框架区(FR)的侧翼延伸段之间，所述构架区比CDR更加高度保守，并形成支架以支持高变环。重链和轻链的恒定区不参与抗原结合，但表现出各种效应子功能。抗体根据其重链恒定区的氨基酸序列进行分类。抗体的五种主要类别或同种型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特征分别在于存在α、δ、ε、γ和μ重链。几种主要抗体类别被分为亚类，例如lgG1(γ1重链)、lgG2(γ2重链)、lgG3(γ3重链)、lgG4(γ4重链)、lgA1(α1重链)或lgA2(α2重链)。在一些实施例中，抗体部分为嵌合抗体。在一些实施例中，抗体部分为半合成抗体。在一些实施例中，抗体部分为双抗体。在一些实施例中，抗体部分为人源化抗体。在一些实施例中，抗体部分为多特异性抗体，诸如双特异性抗体。在一些实施例中，抗体部分与融合蛋白连接。在一些实施例中，抗体部分与免疫刺激蛋白(诸如白介素)连接。在一些实施例中，抗体部分与促进穿过血脑屏障进入的蛋白质连接。

如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，包括例如双抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双抗体(ds双抗体)、单链抗体分子(scFv)、scFv二聚体(二价双抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼源化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体或结合至抗原但不包含完整抗体结构的任何其他抗体片段。抗原结合片段能够结合亲本抗体或亲本抗体片段(例如亲本scFv)所结合的相同抗原。在一些实施例中，抗原结合片段可包含移植到来自一种或多种不同人抗体的框架区的来自特定人抗体的一个或多个CDR。

术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及这些抗体的片段，只要它们表现出本发明的生物活性即可(参见美国专利号4,816,567；以及Morrison etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。

如本文所用，术语“多特异性抗体”是指对至少两个不同位点(即，不同抗原上的不同表位或相同抗原上的不同表位)具有结合特异性的单克隆抗体。在某些方面，多特异性抗体具有两种结合特异性(双特异性抗体)。在某些方面，多特异性抗体具有三种或更多种结合特异性。可以将多特异性抗体制备为全长抗体或抗体片段。

关于抗体或抗体部分的术语“半合成”是指抗体或抗体部分具有一种或多种天然存在的序列和一种或多种非天然存在的(即合成的)序列。

“Fv”是包含完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域紧密、非共价结合的二聚体组成。由这两个结构域的折叠产生六个高变环(重链和轻链各产生3个环)，这些环贡献氨基酸残基以实现抗原结合，并且使抗体具有抗原结合特异性。但是，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于完整结合位点。

“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接至单个多肽链中的VH和VL抗体结构域的抗体片段。在一些实施例中，scFv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含多肽连接基，使scFv形成所需的抗原结合结构。有关scFv的综述，参见Pluckthun，The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)。

术语“双抗体”是指通过构建scFv片段(参见前段)而制得的小抗体片段，其中在VH和VL结构域之间通常具有短连接基(诸如约5至约10个残基)，由此实现了V结构域的链间配对而非链内配对，得到二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”scFv片段的异二聚体，其中两个抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双抗体更全面地描述于例如：EP 404,097；WO 93/11161；以及Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。

“人源化”形式的非人类(例如，啮齿类)抗体为包含来源于非人类抗体的最小序列的嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体为人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区(HVR)的残基被来自非人类物种(供体抗体)的高变区的残基替换，所述非人类物种诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物，其具有所需的抗体特异性、亲和力和功能。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人类残基替换。此外，人源化抗体可包含受体抗体或供体抗体中未发现的残基。这些修饰旨在进一步完善抗体性能。总体上，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个可变结构域，并且通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本上所有的FR为人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体还任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，该免疫球蛋白通常为人免疫球蛋白。更多详情参见Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。

在一些实施例中，本文所述的方法包括一个或多个深度过滤步骤。深度过滤步骤是一种包括通过深度过滤器进行处理的层析技术。在一些实施例中，深度过滤器包含能够保留样品的部分诸如细胞组分和碎片的多孔过滤介质，其中过滤发生在例如过滤器材料的深度内。在一些实施例中，深度过滤器包含合成材料、非合成材料或它们的组合。在一些实施例中，深度过滤器包含底物，该底物包含硅藻土组合物、二氧化硅组合物、纤维素纤维、聚合物纤维、粘性树脂和灰分组合物中的一种或多种。在一些实施例中，深度过滤器的底物的至少一部分包括表面改性。在一些实施例中，表面改性是季胺表面改性、阳离子表面改性和阴离子表面改性中的一种或多种。在一些实施例中，深度过滤器选自由EMPHAZE^TM深度过滤器(诸如EMPHAZE^TM AEX深度过滤器)、X0SP深度过滤器、PDD1深度过滤器、ZETA PLUS^TM120ZA深度过滤器和ZETA PLUS^TM 120ZB深度过滤器组成的组。

在一些实施例中，深度过滤器包含纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩。在一些实施例中，深度过滤器包括两个层，其中每层包含纤维素过滤器基质，并且其中该纤维素过滤器基质浸渍有包含硅藻土或珍珠岩中的一种或多种的助滤剂。在一些实施例中，深度过滤器包括两个层，其中每层包含纤维素过滤器基质，其中该纤维素过滤器基质浸渍有包含硅藻土或珍珠岩中的一种或多种的助滤剂，并且其中每层进一步包含树脂粘结剂。在一些实施例中，深度过滤器是PDD1深度过滤器。

在一些实施例中，深度过滤器包含二氧化硅(诸如二氧化硅助滤剂)和聚丙烯酸类纤维。在一些实施例中，深度过滤器包括两层过滤介质，其中第一层包含二氧化硅(诸如二氧化硅助滤剂)，并且第二层包含聚丙烯酸类纤维(诸如聚丙烯酸类纤维浆)。在一些实施例中，深度过滤器是包含合成材料但不包含硅藻土和/或珍珠岩的深度过滤器。在一些实施例中，深度过滤器是X0SP深度过滤器。

在一些实施例中，二氧化硅助滤剂是沉淀二氧化硅助滤剂。在一些实施例中，助滤剂是有助于执行过滤功能的过滤器(诸如层)的一个方面。在一些实施例中，二氧化硅助滤剂是硅胶助滤剂。在一些实施例中，二氧化硅助滤剂具有约50％的在pH 7下电离的硅烷醇。在一些实施例中，二氧化硅助滤剂是硅胶助滤剂，其中二氧化硅助滤剂的约50％的硅烷醇在pH 7下电离。在一些实施例中，二氧化硅助滤剂从二氧化硅(诸如

(Evonik Industries AG))或硅胶(诸如Kieseigel 60(Merck KGaA))沉淀。在一些实施例中，聚丙烯酸类纤维是非织造聚丙烯酸类纤维浆。在一些实施例中，聚丙烯酸类纤维是电纺聚丙烯酸类纳米纤维。在一些实施例中，聚丙烯酸类纤维的原纤化程度与约10mL至约800mL的加拿大标准游离度(CSF)相关。在一些实施例中，深度过滤器的孔径为约0.05μm至约0.2μm，诸如约0.1μm。在一些实施例中，深度过滤器的表面积为约0.1m²至约1.5m²，诸如约0.11m²、约0.55m²或约1.1m²。在一些实施例中，深度过滤器不包含硅藻土和/或珍珠岩。在一些实施例中，深度过滤器包含两层过滤介质，其中第一层包含二氧化硅助滤剂，该二氧化硅助滤剂具有约50％的在pH 7下电离的硅烷醇，并且第二层包含聚丙烯酸类纤维浆，该聚丙烯酸类纤维浆具有与约10mL至约800mL的加拿大标准游离度(CSF)相关的聚丙烯酸类纤维原纤化程度，并且其中深度过滤器不包含硅藻土。

在一些实施例中，深度过滤器包含水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造材料和多区微孔膜。在一些实施例中，深度过滤器包括四个层，所述四个层包含水凝胶Q-官能化的非织造材料和九区微孔膜。在一些实施例中，非织造材料包含聚丙烯。在一些实施例中，深度过滤器是包含合成材料但不包含硅藻土和/或珍珠岩的深度过滤器。在一些实施例中，深度过滤器是EMPHAZE^TM AEX深度过滤器。

在一些实施例中，深度过滤器包括多个组件或层。在一些实施例中，深度过滤器包括多个层，所述多个层包括一个或多个包含阴离子交换(AEX)官能聚合物的层。在一些实施例中，包含AEX官能聚合物的层包含季铵(Q)，诸如Q官能水凝胶。在一些实施例中，包含AEX官能聚合物的层包含与非织造制品缔合的季铵(Q)官能聚合物。在一些实施例中，包含AEX官能聚合物的层包含共价接枝到细纤维聚丙烯非织造支架的季铵(Q)官能水凝胶。在一些实施例中，深度过滤器包括多个层，所述多个层包括包含多区膜的层，该多区膜包括孔径为约0.05μm至约0.3μm(诸如约0.22μm)的九区膜。在一些实施例中，深度过滤器不包含硅藻土。

在一些实施例中，本文所述的方法包括一个或多个疏水相互作用层析(HIC)步骤。HIC步骤是一种包括通过HIC介质(诸如HIC过滤器或HIC柱)进行处理的层析技术。在一些实施例中，HIC介质包含疏水部分，所述疏水部分包含例如甲基、乙基、丙基、辛基或苯基基团。在一些实施例中，将样品施加到在极性缓冲液中的HIC介质。在一些实施例中，用盐浓度逐渐降低、去污剂浓度逐渐增加和/或pH调节的水性缓冲液使用逐步洗脱从HIC介质中洗脱多肽。

在一些实施例中，本文所述的方法能够降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率。在一些实施例中，酶水解活性速率表示一种或多种水解酶(诸如一种或多种不同水解酶)的活性速率。在一些实施例中，酶水解活性速率是组合物中一种或多种酶活性的替代测量。在一些实施例中，酶水解活性速率通过替代底物来测量。在一些实施例中，酶水解活性速率通过测量一种或多种水解酶的水解产物来评估。

如本文所用，术语“包含”、“具有”、“含有”和“包括”以及其他类似形式及其语法等效词旨在在含义上是等效的并且是开放式的，即在这些词中的任一个之后的一个或多个项目并不意味着是这一个或多个项目的穷举列表，或者意味着仅限于所列出的一个或多个项目。例如，“包含”组分(组件)A、B和C的制品可以由(即，仅包含)组分(组件)A、B和C组成，或者不仅可以包含组分(组件)A、B和C，还可以包含一种或多种其他组分(组件)。因此，意在并理解“包含”及其类似形式及其语法等效词包括“基本上由……组成”或“由……组成”的实施例的公开内容。

在提供数值范围的情况下，应当理解，介于该范围的上限和下限之间的每个中间值(以下限单位的十分之一为基准，除非上下文另有明确规定)和所述范围内的任何其它所述的或中间值均包括在本公开内容内，受所述范围内的任何明确排除的限制。若所指定范围包括一个或两个限值，则排除那些所包括限制中的任意一个或两个的范围也包括在本公开内容中。

在本文中提及“约”值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的变化。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。

如本文(包括所附权利要求书)所用，单数形式“一个/种”、“或”和“该/所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。

纯化平台

在本公开内容的一些方面，提供了包括深度过滤步骤和/或疏水相互作用层析(HIC)步骤的纯化平台。在一些实施例中，纯化平台表示用于从包含靶标的样品中纯化靶标至任何程度的工作流程。在一些实施例中，纯化平台的工艺工作流程是从包含靶标的样品中纯化靶标所涉及的步骤的顺序。

出于本文公开内容的示例和解释的目的，图1A中示出了示例性纯化平台100的一部分的顺序工作流程。如图1A所示，纯化平台100包括顺序步骤，包括但不限于捕获步骤105、调节步骤110、一个或多个纯化步骤115(诸如一个或多个多肽纯化步骤)、病毒过滤步骤120和超滤/渗滤(UFDF)步骤125。在一些实施例中，图1A中所示的示例性纯化平台包括一个或多个深度过滤步骤。在一些实施例中，图1A中所示的示例性纯化平台包括在调节步骤110之后并且在一个或多个纯化步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，图1A中所示的示例性纯化平台包括在捕获步骤105之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，图1A中所示的示例性纯化平台包括一个或多个HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后、在病毒过滤步骤的pH保持步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤之后进行。在一些实施例中，图1A中所示的示例性纯化平台包括一个或多个深度过滤步骤和一个或多个HIC步骤。

本领域普通技术人员将容易理解，本文所述的纯化平台指导用于从包含靶标的样品纯化靶标的工作流程、用于执行纯化平台的工作流程的每个步骤的组分(组件)以及其中所用的组分和试剂。在本公开内容的一些情况下，以模块化方式提供纯化平台及其使用方法的描述。这样的公开内容并不意味着限制本申请的范围。本公开内容涵盖由各个组分(组件)和/或其步骤的公开内容所涵盖的纯化平台的任何组合和/或布置。

深度过滤步骤

在一些方面，本公开内容提供了一种包括深度过滤步骤的纯化平台。如本文所述，深度过滤步骤可放置在纯化平台内的一个或多个位置中的任一位置。在一些实施例中，本文所述的纯化平台包括位于工艺工作流程的任何阶段的一个或多个深度过滤步骤，诸如2、3、4或5个深度过滤步骤中的任一个。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个深度过滤步骤，所述深度过滤步骤不以直接顺序进行，即在深度过滤步骤之间不进行纯化平台的一些干预步骤。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个深度过滤步骤，所述深度过滤步骤相同。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个深度过滤步骤，所述深度过滤步骤不同，例如包括使用不同的深度过滤器。

在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个深度过滤步骤，第一深度过滤步骤发生在包括通过蛋白A层析进行处理的捕获步骤之前，并且第二深度过滤步骤发生在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前。

在一些实施例中，深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理。在一些实施例中，深度过滤器是包含合成材料的深度过滤器。深度过滤步骤(包括通过深度过滤器进行处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Yigzaw et al.,Biotechnol Prog,22,2006和Liu et al.,mAbs,2,2010，它们借此以其全文引用的方式并入。本领域普通技术人员将理解，例如，深度过滤步骤所涉及的组分(组件)、条件和试剂。

在一些实施例中，本文所述的方法包括一个或多个深度过滤步骤，每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，其中基于进入深度过滤器的溶液的pH来选择深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器，诸如X0SP深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约6.5或更小，诸如约6.4或更小、6.3或更小、6.2或更小、6.1或更小、6.0或更小、5.9或更小、5.8或更小、5.7或更小、5.6或更小、5.5或更小、5.4或更小、5.3或更小、5.2或更小、5.1或更小或5.0或更小中的任一个时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器，诸如X0SP深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6.0、5.9、5.8、5.7、5.6、5.5、5.4、5.3、5.2、5.1或5.0中的任一个时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器，诸如X0SP深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7至约8.5时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器，诸如EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7或更大，诸如约7.1或更大、7.2或更大、7.3或更大、7.4或更大、7.5或更大、7.6或更大、7.7或更大、7.8或更大、7.9或更大、8.0或更大、8.1或更大、8.2或更大、8.3或更大、8.4或更大或8.5或更大中的任一个时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器，诸如EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4或8.5中的任一个时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器，诸如EMPHAZE^TM深度过滤器。在本文所述方法的一些实施例中，该方法可进一步包括基于进入深度过滤器的溶液的pH来选择深度过滤器。本领域普通技术人员将容易理解，在一些情况下，进入深度过滤器的溶液及其特性可基于使用本文所述的一个或多个纯化平台纯化的靶标，诸如多肽(例如，抗体)。因此，在一些实施例中，靶标的特性(诸如pI)被用作选择用于本文所述的纯化平台的深度过滤器的基础。

在一些实施例中，深度过滤器包含底物，该底物包含硅藻土组合物、二氧化硅组合物、纤维素纤维、聚合物纤维、粘性树脂、合成颗粒、带离子电荷的树脂和灰分组合物中的一种或多种。在一些实施例中，深度过滤器包含硅藻土。在一些实施例中，深度过滤器包含阴离子交换介质。

在一些实施例中，深度过滤器的底物的至少一部分包括表面改性。在一些实施例中，表面改性是季胺表面改性、阳离子表面改性和阴离子表面改性中的一种或多种。

在一些实施例中，深度过滤器选自由EMPHAZE^TM深度过滤器(诸如EMPHAZE^TM AEX深度过滤器)、X0SP深度过滤器、PDD1深度过滤器、ZETA PLUS^TM 120ZA深度过滤器和ZETAPLUS^TM 120ZB深度过滤器组成的组。

HIC步骤

在一些方面，本公开内容提供了一种包括HIC步骤的纯化平台。如本文所述，HIC步骤可放置在纯化平台内的一个或多个位置中的任一位置。在一些实施例中，本文所述的纯化平台包括位于工艺工作流程的任何阶段的一个或多个HIC步骤，诸如2、3、4或5个HIC步骤中的任一个。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个HIC步骤，所述HIC步骤不以直接顺序进行，即在HIC步骤之间不进行纯化平台的一些干预步骤。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个HIC步骤，所述HIC步骤相同。在一些实施例中，其中纯化平台包括多于一个HIC步骤，所述HIC步骤不同，例如包括使用不同的HIC介质。

在一些实施例中，HIC步骤包括通过HIC介质(诸如HIC柱或HIC膜)进行处理。HIC步骤(包括通过HIC介质进行处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu et al.mAbs,2,2010，其借此以引用方式并入。本领域普通技术人员将理解，例如，HIC步骤所涉及的组分(组件)、条件和试剂。

在一些实施例中，HIC介质包含疏水性树脂。在一些实施例中，HIC介质的底物的至少一部分包括表面改性。在一些实施例中，表面改性是苯基或丁基表面改性。

在一些实施例中，HIC步骤是流通(flow-through，流动通过)模式HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤是结合和洗脱模式HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台包括：位于工艺工作流程的任何阶段的一个或多个深度过滤步骤；以及位于工艺工作流程的任何阶段的一个或多个HIC步骤。

捕获步骤

在一些实施例中，纯化平台包括捕获步骤。在一些实施例中，捕获步骤包括通过亲和层析进行处理。

捕获步骤(包括通过例如亲和层析进行处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu et al.mAbs,2,2010，其借此以引用方式并入。

在一些实施例中，亲和层析选自由蛋白A层析、蛋白G层析、蛋白A/G层析、蛋白L层析、蛋白XL层析、FcXL层析、κ层析和κXL层析组成的组。在一些实施例中，捕获步骤包括通过蛋白A层析进行处理。在一些实施例中，捕获步骤包括通过FcXL层析进行处理。

在一些实施例中，蛋白A层析是基于二氧化硅的蛋白A层析。在一些实施例中，蛋白A层析是基于琼脂糖的蛋白A层析。在一些实施例中，蛋白A层析是基于有机聚合物的蛋白A层析。

在一些实施例中，蛋白A层析选自由Prose vA^TM、

vA Ultra、Protein A

快速流动、MabSelect^TM、MabSelect^TM SuRe、

A和MabCapture^TM组成的组。

调节步骤

在一些实施例中，纯化平台包括调节步骤。在一些实施例中，调节步骤在捕获步骤之后进行。

调节步骤(包括调节步骤的处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu etal.mAbs,2,2010，其借此以引用方式并入。

在一些实施例中，调节步骤包括病毒灭活步骤，诸如低pH保持步骤。在一些实施例中，低pH保持步骤在约2.5至约4的pH下进行。在一些实施例中，低pH保持步骤被配置用于病毒灭活。在一些实施例中，低pH保持步骤能够灭活内源性/外来病毒。

一个或多个纯化步骤

在一些实施例中，纯化平台包括一个或多个纯化步骤。在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤在捕获步骤和调节步骤之后进行。在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤包括多肽纯化步骤。在一些实施例中，该一个或多个纯化步骤包括多于一个(诸如2、3、4或5个中的任一个)多肽纯化步骤。

多肽纯化步骤(包括多肽纯化步骤的处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu et al.mAbs,2,2010，其借此以引用方式并入。

在一些实施例中，多肽纯化步骤包括通过选自由以下组成的组的层析进行处理：离子交换层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、疏水电荷诱导层析、陶瓷羟基磷灰石层析和多元层析。

在一些实施例中，多肽纯化步骤包括通过选自由以下组成的组的层析进行处理：二乙氨基乙基(DEAE)、二甲氨基乙基(DMAE)、三甲氨基乙基(TMAE)、季胺、季氨基乙基(QAE)、硫丙芳基(SP)、SP-

(交联的、珠状形式的琼脂糖)快速流动(FF)、SP-

XL、季胺(Q)

FF、巯基乙基吡啶(MEP)-Hypercel^TM、Capto MMC(多元层析)、Capto Adhere、

XS和

50HS。

在一些实施例中，多肽纯化步骤是结合和洗脱多肽纯化步骤。在一些实施例中，多肽纯化步骤是流通式多肽纯化步骤。在一些实施例中，多肽纯化步骤是弱分配层析多肽纯化步骤。在一些实施例中，多肽纯化步骤是过载多肽纯化步骤。

病毒过滤步骤

在一些实施例中，纯化平台包括病毒过滤步骤。在一些实施例中，病毒过滤步骤在一个或多个纯化步骤之后进行。

病毒过滤步骤(包括病毒过滤步骤的处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu et al.mAbs,2,2010和美国申请号20140309403，它们借此以引用方式并入。

在一些实施例中，病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。在一些实施例中，病毒过滤步骤包括pH保持步骤。在一些实施例中，通过病毒过滤器的处理在pH保持步骤之后进行。

UFDF步骤

在一些实施例中，纯化平台包括UFDF步骤。在一些实施例中，UFDF步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤之后进行。

UFDF步骤(包括UFDF步骤的处理所涉及的步骤)是本领域已知的。参见例如Liu etal.mAbs,2,2010，其借此以引用方式并入。

在一些实施例中，UFDF步骤包括通过超滤进行处理。在一些实施例中，UFDF步骤以切向流过滤(TFF)模式进行。在一些实施例中，UFDF步骤包括通过切向流过滤(诸如高性能切向流过滤)进行处理。

如上所述，本申请中公开的纯化平台可包括纯化步骤的任何组合和布置，包括本文所述的那些。例如，在一些实施例中，纯化平台包括捕获步骤；以及深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；以及调节步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；以及一个或多个纯化步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及病毒过滤步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在病毒过滤步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤的pH保持步骤、病毒过滤步骤之后或期间诸如之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在UFDF步骤之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；病毒过滤步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤的pH保持步骤、病毒过滤步骤之后或期间诸如之后并且/或者在UFDF步骤之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，纯化平台包括捕获步骤；以及HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；以及调节步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；以及一个或多个纯化步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及病毒过滤步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在病毒过滤步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；病毒过滤步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

从纯化平台获得的样品、其组分和组合物

在一些方面，本文所述的纯化平台可用于从包含靶标的样品中纯化靶标至任何程度。

在一些实施例中，样品是宿主细胞样品。在一些实施例中，样品是宿主细胞培养液(HCCF)。在一些实施例中，样品包含宿主细胞培养液的一部分。在一些实施例中，样品来源于宿主细胞培养液。在一些实施例中，样品包含宿主细胞。在一些实施例中，样品包含宿主细胞的组分，诸如宿主细胞碎片。在一些实施例中，宿主细胞是细菌细胞。在一些实施例中，宿主细胞是昆虫细胞。在一些实施例中，宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施例中，宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施例中，宿主细胞是大肠杆菌细胞。

在一些实施例中，样品已被处理，诸如经受在使样品经受本文所述的纯化平台之前进行的处理步骤。在一些实施例中，样品包含表面活性剂。

在一些实施例中，样品包含聚山梨醇酯。在一些实施例中，聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

在一些实施例中，样品包含靶标。在一些实施例中，靶标包含多肽。

在一些实施例中，靶标是多肽。在一些实施例中，靶标是多肽复合物。在一些实施例中，靶标是抗体部分。在一些实施例中，抗体部分是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体部分为人源化抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

在一些实施例中，样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质。在一些实施例中，宿主细胞蛋白质是水解酶。在一些实施例中，水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。在一些实施例中，水解酶是多酶蛋白质。在一些实施例中，多酶蛋白质是脂肪酸合成酶。在一些实施例中，脂肪酸合成酶包含硫酯酶亚基。

在一些情况下，本文所述的纯化平台可包括多个纯化步骤。在一些实施例中，术语“组合物”在本文中用于描述纯化平台的任何阶段的任何输入(纯化平台的初始样品输入除外)、中间体或输出。例如，在一些实施例中，术语“组合物”的使用不限于描述纯化平台的最终输出。

在一些实施例中，组合物包含表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含聚山梨醇酯。在一些实施例中，聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

在一些实施例中，组合物包含靶标。在一些实施例中，靶标包含多肽。在一些实施例中，靶标是多肽。在一些实施例中，靶标是多肽复合物。在一些实施例中，靶标是抗体部分。在一些实施例中，抗体部分是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体部分为人源化抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。在一些实施例中，抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

在一些实施例中，组合物包含一种或多种宿主细胞蛋白质。在一些实施例中，宿主细胞蛋白质是水解酶。在一些实施例中，水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

附加步骤

在一些方面，本公开内容提供了本文所述的纯化平台所涉及或与本文所述的纯化平台相关的附加步骤。纯化平台所涉及或与纯化平台相关的附加步骤以及进行这些步骤的方法是已知的。参见例如Liu et al.mAbs,2,2010，其借此以其全文引用的方式并入。

在一些实施例中，纯化平台进一步包括样品处理步骤，诸如样品制备步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括澄清步骤，诸如澄清HCCF。在一些实施例中，纯化平台进一步包括宿主细胞和宿主细胞碎片去除步骤，诸如从纯化平台获得的样品和/或组合物中去除宿主细胞和宿主细胞碎片。在一些实施例中，纯化平台进一步包括离心步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括无菌过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括切向流微过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括絮凝/沉淀步骤。

使用纯化平台的方法

在一些方面，本公开内容描述了使用本文描述的纯化平台的方法。在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受本文所述的纯化平台。

在一些方面，本文提供了降低从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。在一些实施例中，与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物的酶水解活性速率的相对降低为至少约5％，诸如至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％中的任一个。在一些实施例中，酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。

在一些方面，本文提供了降低从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物中水解酶的水平。在一些实施例中，与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中一种或多种水解酶的水平的相对降低为至少约5％，诸如至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％中的任一个。在一些实施例中，该一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。

在一些方面，本文提供了减少从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中聚山梨醇酯的降解。在一些实施例中，与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物中聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％，诸如至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％中的任一个。

在一些方面，本文提供了延长从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物的保质期的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，延长组合物的保质期。在一些实施例中，与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物的保质期的相对延长为至少约1周，诸如至少约2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月或超过24个月中的任一个。在一些实施例中，与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，组合物的保质期为至少约1周，诸如至少约2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月、42个月、48个月或超过48个月中的任一个。在一些实施例中，组合物的保质期为超过6个月、超过9个月、超过12个月、超过18个月、超过24个月、超过30个月、超过36个月、超过42个月、超过48个月或超过48个月。

在一些方面，本文提供了产生具有较少降解的聚山梨醇酯的组合物的方法，该组合物从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，产生具有较少降解的聚山梨醇酯的组合物。

在一些方面，本文提供了减少从本文所述的包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物中靶标的聚集的方法，该方法包括使样品经受纯化平台，从而与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中靶标的聚集。

如本文所述，将从使样品经受包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物的一种或多种属性与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品进行比较。本领域普通技术人员将理解，在一些情况下，此类比较必须在允许有意义的比较的适当条件下进行。例如，当将从包括一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的纯化平台获得的组合物与使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化样品进行比较时，必须考虑可能影响酶水解活性速率的读数的时间因素。将组合物与参比物进行比较时要考虑的其他相关因素包括实验条件、所用的测定、温度条件、pH、时间(timing，时机)、样品、一种或多种缓冲液和一种或多种样品来源。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台包括捕获步骤；以及深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；以及调节步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；以及一个或多个纯化步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及病毒过滤步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在病毒过滤步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤的pH保持步骤、病毒过滤步骤之后或期间诸如之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在UFDF步骤之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；病毒过滤步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括深度过滤步骤。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，深度过滤步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之前进行的深度过滤步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括HIC步骤，诸如选自在该一个或多个纯化步骤之后并且/或者在病毒过滤步骤的pH保持步骤、病毒过滤步骤之后或期间诸如之后并且/或者在UFDF步骤之后进行的一个或多个HIC步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台包括捕获步骤；以及HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；以及调节步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；以及一个或多个纯化步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及病毒过滤步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在病毒过滤步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：捕获步骤；调节步骤；一个或多个纯化步骤；病毒过滤步骤；以及UFDF步骤，其中纯化平台进一步包括HIC步骤。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在捕获步骤之后并且在调节步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在调节步骤之后并且在该一个或多个纯化步骤之前进行。在一些实施例中，如果存在多于一个纯化步骤，则HIC步骤在该一个或多个纯化步骤中的任一个之间或者在该一个或多个纯化步骤之后进行。在一些实施例中，HIC步骤在该一个或多个纯化步骤之后并且在病毒过滤步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前进行。在一些实施例中，HIC步骤在UFDF步骤之后进行。在一些实施例中，纯化平台进一步包括第二HIC步骤，诸如在该一个或多个纯化步骤之后进行的HIC步骤。在一些实施例中，纯化平台进一步包括深度过滤步骤，诸如在捕获步骤之后进行的深度过滤步骤。

出于本文公开内容的示例和解释的目的，图1B中示出了可用于示例性纯化平台200的方面的选项的顺序工作流程。如图1B所示，纯化平台包括：蛋白A层析步骤210；选自HIC 225、阳离子交换层析225或多元层析230的进一步层析步骤；以及选自在蛋白A层析步骤之前对HCCF进行的EMPHAZE^TM深度过滤步骤205、对蛋白A合并物进行的X0SP深度过滤步骤215或对蛋白A合并物进行的EMPHAZE^TM深度过滤步骤220中的任一个的一个或多个深度过滤步骤。

根据图1B，在一些实施例中，纯化平台包括在使EMPHAZE^TM深度过滤合并物经受蛋白A层析210之前对HCCF进行的EMPHAZE^TM深度过滤步骤205。在此类实施例中，蛋白A合并物在下游层析步骤之前经受X0SP深度过滤步骤215或EMPHAZE^TM深度过滤步骤220。在一些实施例中，其中纯化平台包括X0SP深度过滤步骤215，在X0SP深度过滤步骤215之前通过将蛋白A合并物的pH调节至约5至约6.5来调节蛋白A合并物。在一些实施例中，其中纯化平台包括X0SP深度过滤步骤215，X0SP深度过滤合并物进一步经受HIC(诸如苯基

快速流动)或阳离子交换层析(诸如

50HS)。在一些实施例中，其中纯化平台包括EMPHAZE^TM深度过滤步骤220，在EMPHAZE^TM深度过滤步骤220之前通过将蛋白A合并物的pH调节至约7至约8.5来调节蛋白A合并物。在一些实施例中，其中纯化平台包括EMPHAZE^TM深度过滤步骤220，EMPHAZE^TM深度过滤合并物进一步经受多元层析(诸如Capto Adhere)。

根据图1B，在一些实施例中，纯化平台不包括对HCCF进行的EMPHAZE^TM深度过滤步骤205。在此类实施例中，HCCF经受蛋白A层析210，并且蛋白A合并物在下游层析步骤之前经受X0SP深度过滤步骤215或EMPHAZE^TM深度过滤步骤220。在一些实施例中，其中纯化平台包括X0SP深度过滤步骤215，在X0SP深度过滤步骤215之前通过将蛋白A合并物的pH调节至约5至约6.5来调节蛋白A合并物。在一些实施例中，其中纯化平台包括X0SP深度过滤步骤215，X0SP深度过滤合并物进一步经受HIC(诸如苯基

快速流动)或阳离子交换层析(诸如

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器进行处理；(b)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；以及(c)纯化步骤，其中该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理。在一些实施例中，深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，HIC是苯基

快速流动层析。在一些实施例中，阳离子交换层析是

50HS。在一些实施例中，多元层析是Capto Adhere。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)第一深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的第一深度过滤器进行处理；(b)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(c)第二深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的第二深度过滤器进行处理；以及(d)纯化步骤，包括通过多元层析进行处理。在一些实施例中，第一深度过滤器和第二深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，多元层析是Capto Adhere。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7至约8.5时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的第二深度过滤器。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(b)深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器进行处理；以及(c)纯化步骤，包括通过多元层析进行处理。在一些实施例中，深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，多元层析是Capto Adhere。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约7至约8.5时，选择包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的深度过滤器。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)第一深度过滤步骤，包括通过第一深度过滤器进行处理；(b)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；以及(c)第二深度过滤步骤，包括通过第二深度过滤器进行处理。在一些实施例中，第一深度过滤器包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜。在一些实施例中，第一深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，第一深度过滤器包含无机助滤剂、纤维素和树脂体系。在一些实施例中，第一深度过滤器是120ZB深度过滤器。在一些实施例中，第二深度过滤器包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维。在一些实施例中，第二深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，该方法进一步包括调节步骤。在一些实施例中，该方法进一步包括一个或多个纯化步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)第一深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的第一深度过滤器进行处理；(b)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(c)第二深度过滤步骤，包括通过包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的第二深度过滤器进行处理；以及(d)纯化步骤，包括通过阳离子交换层析进行处理。在一些实施例中，第一深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，第二深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，阳离子交换层析是

50HS。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的第二深度过滤器。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)第一深度过滤步骤，包括通过包含水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的第一深度过滤器进行处理；(b)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(c)第二深度过滤步骤，包括通过包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的第二深度过滤器进行处理；以及(d)纯化步骤，包括通过HIC进行处理。在一些实施例中，第一深度过滤器是EMPHAZE^TM深度过滤器。在一些实施例中，第二深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，HIC是苯基

快速流动层析。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的第二深度过滤器。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；以及(b)深度过滤步骤，包括通过深度过滤器进行处理。在一些实施例中，深度过滤器包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维。在一些实施例中，深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，该方法进一步包括调节步骤。在一些实施例中，该方法进一步包括一个或多个纯化步骤。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(b)深度过滤步骤，包括通过包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器进行处理；以及(c)纯化步骤，包括通过阳离子交换层析进行处理。在一些实施例中，深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，阳离子交换层析是

50HS。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器。

在一些实施例中，该方法包括使包含靶标的样品经受纯化平台，该纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，包括通过蛋白A层析进行处理；(b)深度过滤步骤，包括通过包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器进行处理；以及(c)纯化步骤，包括通过HIC进行处理。在一些实施例中，深度过滤器是X0SP深度过滤器。在一些实施例中，HIC是苯基

快速流动层析。在一些实施例中，当进入深度过滤器的溶液为约5至约6.5时，选择包含二氧化硅和聚丙烯酸类纤维的深度过滤器。

附加的方法步骤

在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括附加的方法步骤。在一些实施例中，该方法进一步包括细胞培养步骤。在一些实施例中，该方法进一步包括配制步骤，诸如加工组合物以形成药用组合物或其前体。

在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物的酶水解活性速率。在一些实施例中，该方法进一步包括对从本文所述的纯化平台获得的组合物进行脂肪酶活性测定。在一些实施例中，脂肪酶活性测定包括通过监测底物诸如非荧光底物向水解酶的可检测产物诸如荧光产物的转化来测量一种或多种水解酶的脂肪酶活性。在一些实施例中，底物包含酯键。在一些实施例中，该方法进一步包括确定一种或多种水解酶的产物，例如，如WO2018035025中所述，该文献借此以其全文引用的方式并入。在一些实施例中，该方法进一步包括通过进行脂肪酸质谱(FAMS)测定来确定从本文所述的纯化平台获得的组合物中游离脂肪酸(FFA)的水平。在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物中一种或多种水解酶的水平。在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物的保质期。在一些实施例中，该方法进一步包括确定组合物中靶标的聚集体的水平。

药物组合物

在一些方面，本公开内容提供了从本文所述的纯化平台获得的药物组合物。在一些实施例中，药物组合物从本文所述的方法获得。在一些实施例中，药物组合物是纯化的组合物。在一些实施例中，药物组合物是无菌药物组合物。

在一些实施例中，药物组合物包含抗体部分。在一些实施例中，药物组合物包含抗体部分和聚山梨醇酯。在一些实施例中，药物组合物包含抗体部分、聚山梨醇酯和宿主细胞杂质，诸如宿主细胞蛋白质，例如水解酶。

在一些实施例中，药物组合物包含聚山梨醇酯。在一些实施例中，药物组合物选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有降低的酶水解活性速率。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有降低水平的一种或多种水解酶。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有减少的聚山梨醇酯降解。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有延长的保质期。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有较少降解的聚山梨醇酯。

在一些实施例中，与通过使用没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台纯化相同样品获得的组合物相比，该药物组合物具有减少的靶标聚集。

配制的抗体部分组合物

在一些方面，本公开内容提供了从本文所述的纯化平台获得的配制的抗体部分组合物。在一些实施例中，配制的抗体部分组合物从本文所述的方法获得。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物包含抗体部分。在一些实施例中，配制的抗体部分组合物包含抗体部分和聚山梨醇酯。在一些实施例中，配制的抗体部分组合物包含抗体部分、聚山梨醇酯和宿主细胞杂质，诸如宿主细胞蛋白质，例如水解酶。

在一些实施例中，与参比物诸如从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物相比，本文所述的配制的抗体部分组合物具有延长的保质期。在一些实施例中，保质期通过配制的抗体部分组合物的抗体部分的聚集来评估，诸如测量。在一些实施例中，保质期通过保存配制的抗体部分组合物的抗体部分的一种或多种功能性来评估，诸如测量。在一些实施例中，保质期通过配制的抗体部分组合物的抗体部分的活性(诸如结合活性)来评估，诸如测量。

在一些实施例中，包含抗体部分和聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中该组合物的保质期超过约12个月，诸如超过约13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月、25个月、26个月、27个月、28个月、29个月、30个月、31个月、32个月、33个月、34个月、35个月或36个月中的任一个。在一些实施例中，与参比物诸如从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物相比，配制的抗体部分组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率。在一些实施例中，降低的聚山梨醇酯水解活性速率是降低的相对聚山梨醇酯水解活性速率。

在一些实施例中，包含抗体部分和聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中与向卫生当局提交的与配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的保质期相比，该组合物的保质期延长，并且其中与所述文件中指明的保质期相比，保质期延长至少约2个月，诸如至少约3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月中的任一个。在一些实施例中，与参比物诸如从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物相比，配制的抗体部分组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率。在一些实施例中，降低的聚山梨醇酯水解活性速率是降低的相对聚山梨醇酯水解活性速率。

在一些实施例中，与向卫生当局提交的与配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的降解相比，包含抗体部分和聚山梨醇酯的配制的抗体部分组合物具有减少的聚山梨醇酯降解，其中降解减少至少约5％，诸如至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％中的任一个。在一些实施例中，与参比物诸如从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物相比，配制的抗体部分组合物具有减少的聚山梨醇酯降解。在一些实施例中，减少的聚山梨醇酯降解是减少的聚山梨醇酯相对降解。

在一些实施例中，与参比物相比，配制的抗体部分组合物的聚山梨醇酯水解活性速率降低至少约5％，诸如至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％中的任一个。

在一些实施例中，配制的抗体部分组合物包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中聚山梨醇酯在液体组合物的储存期间降解约每年50％或更少，诸如约每年45％或更少、每年40％或更少、每年35％或更少、每年30％或更少、每年25％或更少、每年20％或更少、每年15％或更少、每年10％或更少或每年5％或更少中的任一个。

在一些实施例中，与参比物诸如从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物相比，本文所述的配制的抗体部分组合物的缩短的聚集体形成为至少约6个月，诸如至少约7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月或24个月中的任一个。在一些实施例中，与参比物相比，本文所述的配制的抗体部分组合物的至少约20％更少(诸如至少约25％更少、30％更少、35％更少、40％更少、45％更少、50％更少、55％更少、65％更少、70％更少、75％更少、80％更少、85％更少、90％更少、95％更少或100％更少中的任一个)的聚集体形成为至少约6个月，诸如至少约7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月或24个月中的任一个，其中参比物是从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物。用于评估例如测量聚集体形成的方法是本领域已知的并且包括例如目视检查、动态光散射、静态光散射和光密度测量。

在一些实施例中，与参比物相比，本文所述的配制的抗体部分组合物保持至少约50％(诸如至少约55％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％中的任一个)的抗体部分活性至少约6个月，诸如至少约7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月或24个月中的任一个，其中参比物是从没有一个或多个深度过滤步骤和/或一个或多个HIC步骤的相同纯化平台获得的配制的抗体部分组合物。

在一些实施例中，抗体部分是单克隆抗体。

在一些实施例中，抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

在一些实施例中，抗体选自由以下组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

在一些实施例中，聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

本文报道的其他方面是配制的抗体组合物，其在储存期间具有低聚山梨醇酯降解。本发明的一个方面是一种包含抗体/蛋白质和聚山梨醇酯的配制的抗体组合物，其中聚山梨醇酯在配制的抗体组合物的储存/保质期期间降解每年20％或更少(在一个实施例中15％或更少，在一个实施例中12％或更少，在一个实施例中10％或更少，在一个实施例中9％或更少，在一个实施例中8％或更少，在一个实施例中7％或更少，在一个实施例中6％或更少，在一个实施例中5％或更少，在一个实施例中4％或更少，在一个实施例中3％或更少，在一个实施例中2％或更少，在一个实施例中1％或更少)。在一个实施例中，聚山梨醇酯在液体组合物的储存期间降解每年10％或更少。

另一方面是包含抗体和聚山梨醇酯的配制的抗体组合物，其中一年后聚山梨醇酯以初始浓度的至少80％(在一个实施例中至少85％，在一个实施例中至少88％，在一个实施例中至少90％，在一个实施例中至少91％，在一个实施例中至少92％，在一个实施例中至少93％，在一个实施例中至少94％，在一个实施例中至少95％，在一个实施例中至少96％，在一个实施例中至少97％，在一个实施例中至少98％，在一个实施例中至少99％)的浓度存在于组合物中，其中初始浓度是配制或开始储存在液体组合物中的抗体时的浓度。

示例性实施例

实施例1.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。

实施例2.根据实施例1所述的方法，其中所述酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。

实施例3.根据实施例1或2所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物的所述酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

实施例4.一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物中水解酶的水平。

实施例5.根据实施例4所述的方法，其中所述一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。

实施例6.根据实施例4或5所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平的相对降低为至少约20％。

实施例7.一种用于减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：(a)捕获步骤；以及(b)深度过滤步骤，从而与使用没有深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中聚山梨醇酯的降解。

实施例8.根据实施例7所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中所述聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

实施例9.根据实施例1-8中任一项所述的方法，其中所述纯化平台用于从所述样品中纯化靶标，其中所述样品包含所述靶标和一种或多种宿主细胞杂质。

实施例10.根据实施例9所述的方法，其中所述靶标包含多肽。

实施例11.根据实施例9或10所述的方法，其中所述宿主细胞杂质是宿主细胞蛋白质。

实施例12.根据实施例1-11中任一项所述的方法，其中所述深度过滤步骤在所述捕获步骤之前进行，或者所述深度过滤步骤在所述捕获步骤之后进行。

实施例13.根据实施例1-12中任一项所述的方法，其中所述深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理。

实施例14.根据实施例13所述的方法，其中所述深度过滤器包含底物，所述底物包含硅藻土组合物、二氧化硅组合物、纤维素纤维、聚合物纤维、粘性树脂和灰分组合物中的一种或多种。

实施例15.根据实施例14所述的方法，其中所述深度过滤器的所述底物的至少一部分包括表面改性。

实施例16.根据实施例15所述的方法，其中所述表面改性是季胺表面改性、阳离子表面改性和阴离子表面改性中的一种或多种。

实施例17.根据实施例14-16中任一项所述的方法，其中所述深度过滤器选自由EMPHAZE^TM深度过滤器、PDD1深度过滤器、ZETA PLUS^TM 120ZA深度过滤器和ZETA PLUS^TM120ZB深度过滤器组成的组。

实施例18.根据实施例1-17中任一项所述的方法，其中所述捕获步骤包括通过亲和层析进行处理。

实施例19.根据实施例18所述的方法，其中所述亲和层析选自由蛋白A层析、蛋白G层析、蛋白A/G层析、蛋白L层析、FcXL层析、蛋白XL层析、κ层析和κXL层析组成的组。

实施例20.根据实施例1-19中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中所述病毒灭活步骤在所述捕获步骤之后进行。

实施例21.根据实施例20所述的方法，其中所述深度过滤步骤在所述病毒灭活步骤之后进行。

实施例22.根据实施例1-21中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述捕获步骤之前进行的另一深度过滤步骤。

实施例23.根据实施例1-22中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括一个或多个纯化步骤，并且其中所述一个或多个纯化步骤在所述捕获步骤、所述深度过滤步骤和如果存在的所述病毒灭活步骤之后进行。

实施例24.根据实施例23所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤包括多肽纯化步骤。

实施例25.根据实施例23或24所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行的另一深度过滤步骤。

实施例26.根据实施例1-25中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中所述UFDF步骤在所述一个或多个纯化步骤之后进行。

实施例27.根据实施例26所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述UFDF步骤之前或之后进行的另一深度过滤步骤。

实施例28.根据实施例1-27中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤。

实施例29.根据实施例28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤在如果存在的所述一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行。

实施例30.根据实施例28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤在所述一个或多个纯化步骤之后并且在如果存在的所述UFDF步骤之前进行。

实施例31.根据实施例26或27所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括pH保持步骤，其中所述pH保持步骤在如果存在的所述一个或多个纯化步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行。

实施例32.根据实施例31所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒过滤步骤，其中所述病毒过滤步骤在所述pH保持步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行。

实施例33.根据实施例32所述的方法，其中所述病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

实施例34.根据实施例28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤包括通过HIC过滤器进行处理。

实施例35.根据实施例23-34中任一项所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：离子交换层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、疏水电荷诱导层析、陶瓷羟基磷灰石层析和多元层析。

实施例36.根据实施例23-35中任一项所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：DEAE、DMAE、TMAE、QAE、SPSFF、SPXL、QSFF、MEP-Hypercel^TM、Capto MMC和Capto Adhere。

实施例37.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台按以下顺序包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；(b)病毒灭活步骤；(c)第二多肽纯化步骤；(d)第三多肽纯化步骤；以及(e)超滤/渗滤(UFDF)步骤，其中该纯化平台进一步包括在以下一项或多项之际进行的深度过滤步骤：(i)在所述捕获步骤之前；(ii)在所述捕获步骤之后并且在所述病毒灭活步骤之前；(iii)在所述病毒灭活步骤之后并且在所述第二多肽纯化步骤之前；(iv)在所述第二多肽纯化步骤之后并且在所述第三多肽纯化步骤之前；或者(v)在所述第三多肽纯化步骤之后并且在所述超滤/渗滤(UFDF)步骤之前；从而与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，降低所述组合物的所述酶水解活性速率。

实施例38.根据实施例37所述的方法，其中所述纯化平台进一步按以下顺序包括在所述第三多肽纯化步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行的pH保持步骤和病毒过滤步骤。

实施例39.根据实施例38所述的方法，其中所述病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

实施例40.根据实施例37-39中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在以下一项或多项之际进行的疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤：(i)在第三多肽纯化步骤之后并且在pH保持步骤之前；(ii)在pH保持步骤之后并且在病毒过滤步骤之前；或者(iii)在病毒过滤步骤之后并且在UFDF步骤之前。

实施例41.根据实施例1-40中任一项所述的方法，进一步包括确定所述组合物的所述酶水解活性速率。

实施例42.根据实施例1-41中任一项所述的方法，进一步包括确定所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平。

实施例43.根据实施例1-42中任一项所述的方法，其中所述组合物包含聚山梨醇酯。

实施例44.根据实施例43所述的方法，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

实施例45.根据实施例1-44中任一项所述的方法，进一步包括样品处理步骤。

实施例46.根据实施例1-45中任一项所述的方法，其中所述样品是或来源于细胞培养样品。

实施例47.根据实施例46所述的方法，其中所述细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌细胞。

实施例48.根据实施例1-47中任一项所述的方法，其中所述样品包含宿主细胞或来源于所述宿主细胞的组分。

实施例49.根据实施例1-48中任一项所述的方法，其中所述样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中所述一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。

实施例50.根据实施例49所述的方法，其中所述水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

实施例51.根据实施例1-50中任一项所述的方法，其中所述样品包含靶标，并且其中所述靶标是抗体部分。

实施例52.根据实施例51所述的方法，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

实施例53.根据实施例51或52所述的方法，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

实施例54.根据实施例51-53中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

实施例55.根据实施例51-54中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

实施例56.一种药物组合物，所述药物组合物通过根据实施例1-55中任一项所述的方法获得。

实施例57.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中所述组合物的保质期超过24个月。

实施例58.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中与向卫生当局提交的与所述配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的保质期相比，所述组合物的所述保质期延长，其中与所述文件中指明的所述保质期相比，所述保质期延长至少6个月。

实施例59.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分，其中所述配制的抗体部分组合物具有减少的聚山梨醇酯降解，其中与向卫生当局提交的与所述配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的所述降解相比，所述降解减少至少约20％。

实施例60.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述聚山梨醇酯在液体组合物的储存期间降解每年20％或更少。

实施例61.根据实施例57-60中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

实施例62.根据实施例57-61中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

实施例63.根据实施例57-62中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

实施例64.根据实施例57-63中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

实施例65.根据实施例57-64中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述聚山梨醇酯水解活性速率降低至少约20％。

实施例66.根据实施例57-65中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

实施例67.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后；或者在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物的酶水解活性速率。

实施例68.根据实施例67所述的方法，其中所述酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。

实施例69.根据实施例67或68所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物的所述酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

实施例70.一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前；或者在纯化步骤之后，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，降低组合物中一种或多种水解酶的水平。

实施例71.根据实施例70所述的方法，其中所述一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。

实施例72.根据实施例70或71所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平的相对降低为至少约20％。

实施例73.一种减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：(a)捕获步骤，该捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及(b)纯化步骤，该纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，其中该纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中该一个或多个深度过滤步骤在以下任一项或多项之际进行：在捕获步骤之前；在捕获步骤之后；或者在捕获步骤之后并且在纯化步骤之前，其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且其中该深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，从而与使用没有该一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化样品相比，减少组合物中聚山梨醇酯的降解。

实施例74.根据实施例73所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中所述聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

实施例75.根据实施例67-74中任一项所述的方法，其中包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器包含二氧化硅助滤剂和聚丙烯酸纤类维浆。

实施例76.根据实施例67-74中任一项所述的方法，其中包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和所述多区微孔膜的所述深度过滤器包括四个层，所述四个层包含水凝胶Q-官能化的非织造材料和九区微孔膜。

实施例77.根据实施例67-74中任一项所述的方法，其中包含纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩的所述深度过滤器包括两个层，其中每层包含纤维素过滤器基质，其中所述纤维素过滤器基质浸渍有包含硅藻土或珍珠岩中的一种或多种的助滤剂，并且其中每层进一步包含树脂粘结剂。

实施例78.根据实施例67-77中任一项所述的方法，其中基于进入所述深度过滤器的溶液的pH来选择所述深度过滤器。

实施例79.根据实施例78所述的方法，其中当进入所述深度过滤器的所述溶液为约5至约6.5时，选择包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器。

实施例80.根据实施例78所述的方法，其中当进入所述深度过滤器的所述溶液为约7至约8.5时，选择包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和所述多区微孔膜的所述深度过滤器。

实施例81.根据实施例67-80中任一项所述的方法，进一步包括基于进入所述深度过滤器的所述溶液的所述pH来选择所述深度过滤器。

实施例82.根据实施例67-81中任一项所述的方法，其中所述纯化平台依次包括：深度过滤步骤，所述深度过滤步骤包括通过包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的所述深度过滤器进行处理；所述捕获步骤，所述捕获步骤包括通过蛋白A层析进行处理；以及所述纯化步骤。

实施例83.根据实施例82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述HIC进行处理。

实施例84.根据实施例83所述的方法，其中所述HIC是苯基

快速流动层析。

实施例85.根据实施例82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述阳离子交换层析进行处理。

实施例86.根据实施例85所述的方法，其中所述阳离子交换层析是

50HS。

实施例87.根据实施例67-86中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，所述第二深度过滤步骤包括通过包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器进行处理，并且其中所述第二深度过滤步骤发生在所述捕获步骤之后并且在所述纯化步骤之前。

实施例88.根据实施例82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述多元层析进行处理。

实施例89.根据实施例88所述的方法，其中所述多元层析是Capto Adhere。

实施例90.根据实施例88或89所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，所述第二深度过滤步骤包括通过包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的所述深度过滤器进行处理，并且其中所述第二深度过滤步骤发生在所述捕获步骤之后并且在所述纯化步骤之前。

实施例91.根据实施例67-90中任一项所述的方法，其中所述纯化平台用于从所述样品中纯化靶标，其中所述样品包含所述靶标和一种或多种宿主细胞杂质。

实施例92.根据实施例91所述的方法，其中所述靶标包含多肽。

实施例93.根据实施例91或92所述的方法，其中所述宿主细胞杂质是宿主细胞蛋白质。

实施例94.根据实施例67-93中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中所述病毒灭活步骤在所述捕获步骤之后进行。

实施例95.根据实施例94所述的方法，其中所述一个或多个深度过滤步骤在所述病毒灭活步骤之后进行。

实施例96.根据实施例67-95中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中所述UFDF步骤在所述纯化步骤之后进行。

实施例97.根据实施例67-96中任一项所述的方法，进一步包括确定所述组合物的所述酶水解活性速率。

实施例98.根据实施例67-97中任一项所述的方法，进一步包括确定所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平。

实施例99.根据实施例67-98中任一项所述的方法，其中所述组合物包含聚山梨醇酯。

实施例100.根据实施例99所述的方法，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

实施例101.根据实施例67-100中任一项所述的方法，进一步包括样品处理步骤。

实施例102.根据实施例67-101中任一项所述的方法，其中所述样品是或来源于细胞培养样品。

实施例103.根据实施例102所述的方法，其中所述细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌细胞。

实施例104.根据实施例67-103中任一项所述的方法，其中所述样品包含宿主细胞或来源于所述宿主细胞的组分。

实施例105.根据实施例67-104中任一项所述的方法，其中所述样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中所述一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。

实施例106.根据实施例105所述的方法，其中所述水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

实施例107.根据实施例67-106中任一项所述的方法，其中所述样品包含靶标，并且其中所述靶标是抗体部分。

实施例108.根据实施例107所述的方法，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

实施例109.根据实施例107或108所述的方法，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

实施例110.根据实施例107-109中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1 BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

实施例111.根据实施例107-110中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

实施例112.一种药物组合物，所述药物组合物通过根据实施例67-111中任一项所述的方法获得。

实例

实例1

本实例展示了使用以下各项从未经调节的本体中纯化抗体曲妥珠单抗的两种纯化平台之间的比较：(1)普通纯化平台；以及(2)包括在调节来自亲和层析的洗脱物之后并且在阳离子交换(CEX)层析之前进行的附加的PDD1深度过滤步骤的相同纯化平台。

普通纯化平台(1)进行两次，并且由以下顺序步骤组成：亲和层析、洗脱物调节、阳离子交换层析、阴离子交换层析和切向流过滤和调节来自阴离子交换层析的所得合并物。纯化过程的合并物名称和合并物描述如下表1所示。

表1.纯化合并物名称和合并物描述。

合并物名称	合并物描述
		调节亲和合并物	已调节pH的亲和合并物
深床过滤合并物	过滤合并物(流通)
		阴离子交换合并物	阴离子交换层析洗脱合并物
调节阴离子交换合并物	已调节pH的阴离子交换合并物
		未经调节的本体	用渗滤缓冲液调节后的切向流过滤合并物

增加了PDD1深度过滤步骤(2)的纯化平台进行两次。通过游离脂肪酸质谱法(FAMS)比较了未经调节的本体水平下的聚山梨醇酯水解活性，其方法学在材料与方法部分中更详细地公开。

对于包括深度过滤步骤的纯化平台，洗脱物在亲和层析之后并且在通过PDD1深度过滤器(Pall PDD1；SUPRAcap^TM-50 SC050PDD1(批号：102992583)；面积：22cm²)过滤之前进行调节。PDD1深度过滤器使用CEX平衡缓冲液平衡。经调节的亲和合并物的过滤是压力控制的。过滤步骤在室温(15℃-30℃)下进行。曲妥珠单抗流过PDD1过滤器。在使用前和过滤后，用CEX平衡缓冲液冲洗PDD1深度过滤器。每次使用后丢弃PDD1深度过滤器。CEX平衡缓冲液的可接受范围为：0.020-0.040MMES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)，0.042-0.048M NaCl，pH 5.50-5.70，并且电导率为5.10-5.70mS/cm。PDD1深度过滤器的操作条件如下表2所示。

表2.PDD1深度过滤器操作条件。

阳离子交换层析(SP

FF层析)以结合和洗脱模式进行。阳离子交换步骤降低了抗体聚集体、抗体变体、CHO HCP杂质、DNA、浸出的蛋白A和其他过程相关杂质的水平。用递增的氯化钠浓度梯度从柱上洗涤抗体电荷变体，并使用分步洗脱来洗脱曲妥珠单抗。所有层析步骤均在环境温度(15℃-30℃)下进行。

在上样到阳离子交换柱上之前，通过用三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)碱将pH调节至5.5±0.3来调节亲和合并物。如果该合并物滴定过度，则用柠檬酸将该合并物调节至指定的pH，然后通过添加高纯水(如果需要)将电导率调节至3.5±1.0mS/cm。阳离子交换柱用平衡缓冲液平衡并用经调节的亲和合并物上样。在上样后，用平衡缓冲液洗涤柱，然后用增加电导率的梯度洗涤，接着再次用平衡缓冲液洗涤。通过用洗脱缓冲液分步洗脱，从柱上洗脱曲妥珠单抗。根据吸光度和体积开始和终止洗脱物的收集。

CEX平衡缓冲液的可接受范围为：0.020-0.040M MES，0.042-0.048M NaCl，pH5.50-5.70，并且电导率为5.10-5.70mS/cm。洗脱缓冲液的可接受范围为：0.020-0.040MMES，0.092-0.098M NaCl，pH 5.50-5.70，并且电导率为10.10-10.80mS/cm。阳离子交换层析的操作条件如下表3所示。

表3.阳离子交换层析操作条件。

^a克曲妥珠单抗/升SP

阳离子交换树脂。

阴离子交换层析(Q

层析)在流通模式下进行，并减少CHO HCP、DNA、蛋白A和潜在的病毒。在采用的上样和洗涤条件下，曲妥珠单抗流过柱。所有层析步骤均在环境温度(15℃-30℃)下进行。

用Tris碱和MES(如果需要的话)将阳离子交换合并物的pH调节至pH 8.0±0.5，用高纯水将电导率调节至5.5-7.8mS/cm。阴离子交换柱用平衡缓冲液平衡，然后用经pH调节的阳离子交换合并物上样。在上样完成后，用平衡缓冲液洗涤柱。合并基于吸光度和体积。用乙酸将阴离子交换合并物的pH调节至6.0±0.1。

平衡缓冲液的可接受范围为：0.015-0.035M Tris，0.025-0.075M NaCl，并且pH7.5-8.5。阳离子交换层析的操作条件如下表4所示。

表4.阴离子交换层析操作条件。

对经调节的阴离子交换合并物进行切向流过滤(TFF)以浓缩和渗滤。为了使未经调节的本体达到30±5mg/mL的蛋白质浓度，通过配备有30kDa聚醚砜(PES)膜的TFF装置对经调节的阴离子交换合并物进行浓缩。随后，通过添加含有组氨酸的溶液来调节缓冲液组合物以满足条件。

在使用前，用渗滤缓冲液平衡超滤膜。将经调节的阴离子交换合并物浓缩至10-50g/L的中间浓度，在TFF单元中用最少8个合并物体积的渗滤缓冲液渗滤。随后，通过添加相应量的调节缓冲液将缓冲液组合物调节至0.02mol/L组氨酸/组氨酸HCl，pH 5.3±0.2。如有必要，通过添加渗滤缓冲液将蛋白质浓度调节至30±5mg/mL。

渗滤缓冲液为0.02mol/L组氨酸/组氨酸-HCl，pH 5.3±0.2。阳离子交换层析的操作条件如下表5所示。

表5.TFF操作条件。

测量了阳离子交换层析上样组合物中宿主细胞蛋白质的量，结果提供于表6中。与普通纯化平台相比，具有PDD1深度过滤器的纯化平台的两个平行测定都观察到宿主细胞蛋白质水平的降低。

表6.测量的阳离子交换层析上样组合物的宿主细胞蛋白质。

测量了用渗滤调节后TFF合并物中宿主细胞蛋白质的量，结果提供于表7中。与普通纯化平台相比，具有PDD1深度过滤器的纯化平台的两个平行测定都观察到宿主细胞蛋白质水平的降低。

表7.用渗滤组合物调节后测量的TFF合并物的宿主细胞蛋白质。

测量了用渗滤调节后TFF合并物中的水解活性，结果提供在图2中。使用FAMS在40℃、0.04％(w/v)SR-PS20、10mM蛋氨酸、100mM Tris pH 8.0、在最终曲妥珠单抗浓度为6g/l下测量水解活性。与普通纯化平台的平行测定相比，用PDD1深度过滤的纯化平台的两个平行测定观察到如通过游离脂肪酸的量间接测量的酶水解活性速率降低(图2)。

材料与方法

蛋白质浓度的测定。通过紫外光谱法使用

50紫外-可见分光光度计(Varian)或NanoDrop^TM OneC(Thermo Scientific)测定蛋白质浓度。将蛋白质样品在它们各自的缓冲液中稀释并测量两次。根据由朗伯-比尔定律推导的以下等式测定浓度：＝(280nm–320nm)/··F，蛋白质浓度[mg/ml]，吸光度，ε消光系数[ml/(mg·cm)]，细胞长度[cm]和F稀释因子。曲妥珠单抗、法立昔单抗和FAP-IL2v的比消光系数为1.48、1.7和1.35ml/(mg·cm)。

脂肪酶活性测定(LEAP测定)。脂肪酶活性测定通过监测非荧光底物(4-MU,ChemImpex Int'l Inc)通过底物酯键的裂解向荧光产物(MU,Sigma-Aldrich)的转化来测量脂肪酶活性。通过使用Amicon Ultra-0.5ml离心过滤装置(10,000Da截留值，MerckMillipore)将待分析的蛋白质合并物样品重新缓冲至150mM Tris-Cl pH 8.0。测定反应混合物含有80μL反应缓冲液(150mM Tris-Cl pH 8.0、0.25％(w/v)Triton X-100和0.125％(w/v)阿拉伯树胶)、10μL 4-MU底物(1mM的DMSO溶液)和10μL蛋白质合并物样品。将蛋白质合并物样品浓度调节至10-30g/L，并在三种不同浓度下测试。每个反应在96孔半面积聚苯乙烯板(黑色带盖和透明平底，Corning Incorporated)中进行三次技术平行测定，并通过在Infinite 200Pro平板读数器(Tecan Life Sciences)中在37℃下将反应板温育两小时，每10分钟监测荧光信号的增加(在355nm处激发，在460nm处发射)。MU产生速率由荧光时间进程的斜率(0.5小时-2小时)导出，并表示反应的原始速率(k_raw[RFU/h])。

另外建立酶空白反应以测量由缓冲液基质引起的底物的任何非酶促裂解。10μL蛋白质合并物样品在反应混合物中被10μL 150mM Tris-Cl pH 8.0替换。自裂解速率(k_self-裂解[RFU/h])由荧光时间进程的斜率(0.5小时-2小时)导出。为了将荧光信号(RFU)转换为MU的μM，每个板添加标准MU三次。向10μL MU(100μM的DMSO溶液)中补充10μL 150mM Tris-Cl pH 8.0和80μL反应缓冲液。通过平均荧光信号(0.5小时-2小时)并将其除以孔中存在的MU最终浓度来计算转换因子a[RFU/μM]。

以[μM MU/h]给出的样品的脂肪酶活性通过从样品的反应速率(k_raw[RFU/h])中减去酶空白的反应速率(k_self-裂解[RFU/h])，并通过将该项除以转化因子a[RFU/μM]将荧光信号转化为μM MU/h来确定。将活性标准化为每孔应用的蛋白质浓度。为了报告以百分比表示的水解活性，将参比样品的脂肪酶活性设定为100％。

游离脂肪酸和质谱(FAMS)测定。为了监测各洗脱级分中PS20降解后游离脂肪酸的含量，首先制备样品用于PS20稳定性研究，随后通过质谱法分析。除非另有说明，否则将蛋白质合并物样品调节至相同的蛋白质浓度(如各实验说明中所示)，含有0.04％(w/v)SR-PS20、10mM L-蛋氨酸和100mM Tris pH 8。L-蛋氨酸作为有效的抗氧化剂添加，以控制实验时间过程中PS20的氧化降解。作为缓冲液对照样品，所施加的蛋白质体积被相同体积的相应洗脱缓冲液体系替换。

将所有反应混合物在Thermomixer(Eppendorf)中在37℃或40℃在600rpm的振荡下温育。在限定的时间点(如各图中所示)后取出样品，并储存在-80℃直至随后的分析。

将50μL样品转移到新的Eppendorf杯中。添加200μL FFA溶剂溶液(500ng/mL D₂₃-月桂酸和500ng/mL ¹³C₁₄-肉豆蔻酸的乙腈溶液)并短暂涡旋。将样品以14.000rpm离心5分钟，然后转移到HPLC小瓶中进行MS分析。在Thermo Scientific^TM Vanquish^TM UHPLC系统上使用ACQUITY

Peptide BEH C18层析柱(1.7μm 2.1x150mm和

)从5μL进样样品中分离脂肪酸。洗脱液A(0.1％氢氧化铵水溶液)和洗脱液B(100％乙腈)用于以下梯度，流速为0.3mL/min，柱温为60℃。初始条件为70％洗脱物B。梯度从0.2分钟线性变化至5.5分钟，洗脱液A增加至100％并保持至6.0。洗脱液B在6.1分钟时设定为70％，并保持至10.0分钟以达到平衡。质谱仪(Triple

6600，AB Sciex)在负电离模式下操作，离子喷雾电压为–4500V。源温度设定为450℃，TOF质量范围为100-1000m/Z。去簇电位为-120V，碰撞能量为-10V。

生成了大量月桂酸、肉豆蔻酸和同位素标记的(D₂₃)-月桂酸和(¹³C₁₄)肉豆蔻酸的XIC。对各峰进行积分并确定月桂酸与D₂₃-月桂酸之间的峰面积比以及肉豆蔻酸与¹³C₁₄-肉豆蔻酸之间的峰面积比。峰面积比用于计算样品中月桂酸和肉豆蔻酸的浓度。测量重复进行两次。为了报告以百分比表示的FFA(月桂酸(LA)和肉豆蔻酸(MA))的量，将参比样品的量设定为100％。

实例2

本实例展示了使用以下各项纯化抗体曲妥珠单抗的三种平台之间的比较：(1)普通纯化平台；(2)在调节来自亲和层析的洗脱物之后并且在阳离子交换(CEX)层析之前进行的增加PDD1深度过滤步骤的普通纯化平台；(3)在调节来自亲和层析的洗脱物之后并且在阳离子交换(CEX)层析之前进行的增加EMPHAZE^TM深度过滤步骤的普通纯化平台。

普通纯化平台(1)由以下组成：亲和层析、洗脱物调节、阳离子交换层析、阴离子交换层析和切向流过滤和调节来自阴离子交换层析的所得合并物。

对于包括深度过滤步骤的纯化平台，洗脱物在亲和层析之后并且在通过深度过滤器过滤之前进行调节。使用的PDD1深度过滤器是Pall PDD1,SUPRAcap^TM-50SC050PDD1(批号：102992583)，面积：22cm²。使用的EMPHAZE^TM深度过滤器是EMPHAZE^TM AEX Hybrid(批号：S210650302)，面积：25cm²。曲妥珠单抗流过深度过滤器。过滤步骤在环境温度(15℃-30℃)下进行。

使用前，使用阳离子交换平衡缓冲液平衡深度过滤器。经调节的亲和合并物的过滤是流速控制的。过滤后不进行漂洗。这允许检查宿主细胞蛋白质(酶)的实际减少。每次使用后丢弃过滤器。CEX平衡缓冲液的可接受范围为：0.020-0.040M MES，0.042-0.048MNaCl，pH 5.50-5.70，并且电导率为5.10-5.70mS/cm。深度过滤器的操作条件如下表8所示。

表8.深度过滤器操作条件。

测量了阳离子交换层析上样组合物中宿主细胞蛋白质的量，结果提供于表9中。根据实例1进行蛋白质浓度测量。与普通纯化平台相比，具有EMPHAZE^TM深度过滤器的纯化平台和具有PDD1深度过滤器的纯化平台都观察到宿主细胞蛋白质水平的降低。

表9.测量的阳离子交换层析上样组合物的宿主细胞蛋白质。

将普通平台的阳离子交换层析上样(亲和层析后，无深度过滤，参比物)的脂肪酶活性与亲和层析后包括附加深度过滤步骤的相应阳离子交换层析上样进行比较(图3)。根据实例1进行脂肪酶活性测定。

将普通平台的阳离子交换层析上样(亲和层析后，无深度过滤，参比物)的水解活性与亲和层析后包括附加深度过滤步骤的相应阳离子交换层析上样进行比较(图4)。根据实例1进行FAMS分析。使用FAMS在40℃、0.04％(w/v)SR-PS20、10mM蛋氨酸、100mM Tris pH8.0和最终曲妥珠单抗浓度为4.8g/l下测量水解活性。与普通纯化平台相比，包括深度过滤器的两种纯化平台都观察到如通过脂肪酶活性测定测量的酶水解活性速率降低(图3)和FAMS测定中FAA的量降低(图4)。

实例3

本实例展示了使用纯化平台纯化抗VEGF/Ang2抗体，使用在灭菌前对HCCF(收获细胞液)进行的深度过滤步骤和在亲和层析(CaptureSelect^TM FcXL)后进行的第二深度过滤步骤。所使用的纯化平台在图5中详述。使用所示的纯化过程进行参比对照，没有附加的HCCF深度过滤步骤(图5)。

如图5所示，HCCF通过三个设计用于除去潜在的宿主细胞蛋白质的不同的深度过滤器过滤。抗体流过过滤器。过滤步骤在环境温度(15℃-30℃)下进行。

使用前，使用EMPHAZE^TM(EMPHAZE^TM AEX Hybrid(批号：S228585702)，面积：25cm²)、VR02(BioCap_VR02(批号：3923452)，面积：25cm²)和120ZB(BioCap_120ZB(批号：3923452)，面积：25cm²)的亲和平衡缓冲液并使用PDD1(SUPRAcap^TM-50SC050PDD1(批号：103119429)，面积：22cm²)的阳离子交换平衡缓冲液平衡三个深度过滤器。HCCF的过滤是压力控制的(进料压力＝0.2MPa；最大进料流速：25mL/分钟)。经调节的亲和合并物的过滤是流速控制的(进料流速＝5.2ml/min；压力控制：0.2MPa)。过滤后，用相同的缓冲液冲洗过滤器以回收产物。每次使用后丢弃过滤器。平衡缓冲液提供于表10中。

表10.深度过滤器平衡缓冲液。

过滤器	平衡缓冲液
		过滤器1(EMPHAZE<sup>TM</sup>)	25mM Tris，25mM NaCl，pH 7.20
过滤器2(VR02)	25mM Tris，25mM NaCl，pH 7.20
		过滤器3(120ZB)	25mM Tris，25mM NaCl，pH 7.20
过滤器4(PDD1)	50mM Tris/乙酸盐，pH 7.20

使用200mL(～90L/m²)注射用水进行PDD1过滤器冲洗。使用200mL(～90L/m²)C1平衡缓冲液进行EMPHAZE^TM过滤器冲洗。过滤后的HCCF体积为1750mL(对于EMPHAZE^TM，～700L/m²)。

CaptureSelect FcXL的操作条件如下表11所示。

表11.CaptureSelect FcXL的操作条件。

在纯化平台的不同点测量宿主细胞蛋白质上样量(参见图5)，结果提供于表12中。

表12.测量的在纯化平台获得的组合物中的宿主细胞蛋白质。星号反映如图5所示的采样点。

如实例1中所述，通过脂肪酶活性测定测量水解活性。与没有附加深度过滤器的普通纯化平台相比，使用任一种测试深度过滤器(EMPHAZE^TM、VR02和120ZB)观察到不同纯化平台的FcXL洗脱物的酶水解活性速率降低(图6A)。与没有附加深度过滤器的普通纯化平台相比，使用任一种测试深度过滤器(EMPHAZE^TM、VR02和120ZB)观察到不同纯化平台的PDD1过滤物的酶水解活性速率降低(图6B)。

进行FAMS测定以比较用于纯化强阳离子交换层析合并物的抗体的两个纯化平台：(1)普通纯化平台；和(2)包括在亲和层析之前进行的附加120ZB深度过滤步骤的相同纯化平台。普通纯化平台由以下顺序步骤组成：亲和层析、洗脱物调节、深度过滤、多元阴离子交换层析、强阳离子交换层析和切向流过滤。FAMS测定根据实例1和以下条件进行：37℃、0.04％(w/v)SR-PS20、10mM蛋氨酸、150mM Tris pH 8.0，最终抗体浓度为50g/l。与普通纯化平台相比，用120ZB深度过滤器的纯化平台观察到如通过游离脂肪酸的量测量的酶水解活性速率降低(图7)。

实例4

此实例展示了用于纯化抗FAP-IL2v的纯化平台的比较，其结合了两种不同的深度过滤器，X0SP或PDD1，用于过滤经调节的亲和层析(蛋白A层析)洗脱物。

如实例1中所述制备和过滤HCCF样品。

将普通平台(无深度过滤)的蛋白A层析洗脱物的脂肪酶活性与包括深度过滤的纯化平台的亲和层析洗脱物进行比较，其中对蛋白A层析洗脱物进行X0SP或PDD1深度过滤步骤。根据实例1进行脂肪酶活性测定。从X0SP深度过滤器获得的级分中脂肪酶活性的结果示于图8A中。从PDD1深度过滤器获得的脂肪酶活性结果示于图8B中。

实例5

本实例展示了用于纯化各种抗体部分的纯化优化实验，进行所述纯化优化实验以寻找使从纯化平台获得的抗体部分组合物中聚山梨醇酯水解降解最小化的选择。本文公开的实验评估包括深度过滤器诸如EMPHAZE^TM作为蛋白A和第二层析柱上样过滤器，以及HIC介质(

苯基膜)作为抛光柱洗脱合并物过滤器或上样过滤器用于后续病毒过滤步骤。

评估了几种深度过滤器(包括EMPHAZE^TM和X0SP)去除或减少导致聚山梨醇酯降解的水解酶的潜力。在普通mAb纯化工艺流程中，在两种处理水平下评估了EMPHAZE^TM过滤器的加入。第一种选择是作为蛋白A层析之前的蛋白A上样过滤器，其中HCCF在上样到蛋白A柱之前进行过滤。如表13中总结的，与普通纯化过程相比，在蛋白A层析之前过滤HCCF时，相对水解活性降低了超过40％。

表13.从纯化平台获得的组合物的相对水解活性。

为了证明使用EMPHAZE^TM实现的聚山梨醇酯降解的减少与单独宿主细胞蛋白的减少无关，在增加的EMPHAZE^TM通量下通过蛋白A纯化HCCF样品，并分析合并物的CHOP和聚山梨酸酯降解活性。如图9所示，CHOP值的降低取决于EMPHAZE^TM过滤通量，而聚山梨醇酯降解速率的显著降低相对恒定。尽管随着EMPHAZE^TM澄清通量的增加，CHOP值持续增加，几乎与对照一样高，但与对照相比，所实现的聚山梨醇酯降解比活性的显著降低保持相对稳定，最高达800L/m²通量。

所评估的第二种选择是在病毒灭活步骤的下游放置EMPHAZE^TM和X0SP深度过滤器，或作为第2柱层析的上样过滤器。为了进行该评估，将来自多个分子的蛋白A合并物中和至pH 5.5或pH 8.0，并通过EMPHAZE^TM或X0SP过滤至300L/m²通量。将过滤后的合并物的聚山梨醇酯水解活性与对照未过滤样品进行比较。如表14所总结的，与未过滤对照合并物相比，EMPHAZE^TM和X0SP过滤器都显示出聚山梨醇酯降解的显著减少。如图10所示，聚山梨醇酯水解活性(在蛋白A合并物的抗Tau mAb纯化中使用脂肪酶活性测定测量)取决于X0SP深度过滤器在pH5.5时的过滤通量。

表14.从纯化平台获得的组合物的水解活性。

HIC膜的使用被评估为减少聚山梨醇酯降解的一种方法。HIC膜可以放置在最后的多肽层析柱步骤(例如阴离子交换层析)之后、在病毒过滤之前进行的pH保持步骤(例如，pH5-6)之后和/或在UFDF步骤之前进行的病毒过滤步骤之后。

本研究中评估的主要HIC膜是

苯基膜。在调节至不同pH值后，将最后的多肽层析合并物通过

膜过滤器过滤。分析过滤后的合并物的相对聚山梨醇酯降解。如图11A至图11C所示，与对照相比，相对聚山梨醇酯活性显著降低。相同的数据还表明活性的降低取决于膜体积通量(图11A至图11C)。具体地，图11A示出了在pH5.5下奥瑞珠单抗在不同通量下聚山梨醇酯降解的比活性。具体地，图11B示出了在pH 5.5下塞鲁单抗在不同通量下聚山梨醇酯降解的比活性。具体地，图11B示出了在pH 6.5下托珠单抗在不同通量下聚山梨醇酯降解的比活性(图11C)。

材料与方法

Resins Pro A

FF、

TMAE和陶瓷羟基磷灰石树脂分别购自GE Healthcare(Uppsala,Sweden)、TOSOH Biosciences(King of Prussia,PA)和Bio-Rad(Hercules,California)。Amicon离心过滤器和X0SP深度过滤器得自Millipore(Bedford,MA)。EMPHAZE^TM AEX深度过滤器得自3M(Meriden,CT)，并且

苯基膜得自Sartorius(Bohemia,NY)。4-甲基伞形酮辛酸酯、Triton^TM X-100和阿拉伯树胶分别得自Research Organcis(Cleveland,OH)和Acros Organics(Bridgewater,NJ)。用于脂肪酶活性测定的超精制(SR)级PS20得自Croda(Newark,NJ)。此处报道的所有单克隆抗体都是在CHO细胞中表达的人源化或人IgG1，并由Roche(South San Francisco或Oceanside,CA)生产。

对于小型EMPHAZE^TM和其他深度过滤器，使用25cm²尺寸的胶囊。过滤器首先用25mMTris、250mM NaCl pH 7.5以8ml/min流速冲洗100L/m2。平衡后，将HCCF(Pro A上样)或中和的蛋白A洗脱合并物过滤至800L/m²。每100L/m²收集级分并通过随后的柱步骤纯化，并测量聚山梨醇酯降解活性。

对于

苯基膜评估，使用3ml尺寸的装置。首先用30ml平衡缓冲液以15L/min的流速冲洗膜。平衡后，最后的层析合并物通过

苯基膜过滤，收集级分并测定相对聚山梨醇酯降解活性。

所有小型层析运行均在0.66cmx20cm层析柱上进行。对于蛋白A纯化，首先在平衡缓冲液中对柱进行预平衡，然后将HCCF上样至10-20g/L树脂。上样后，用>3倍柱体积的平衡缓冲液洗涤柱，并用>4倍柱体积的洗涤缓冲液洗涤柱。用2.5mM HCl pH 2.7或150mM乙酸洗脱结合的蛋白质。收集0.5OD至0.5OD的洗脱级分，中和至pH 5，并测定聚山梨醇酯降解活性。

通过在具有类似于聚山梨醇酯结构的伞形酮基底物中酯键的裂解之后检测脂肪酶的酶活性。在本研究中，通过将10μL 10mM 4-甲基伞形酮辛酸酯的DMSO与80μL反应缓冲液(50mM Tris，pH 8.0，0.4％Triton^TM X-100和0.1％阿拉伯树胶)混合制备反应混合物。荧光激发和发射波长分别设置为355nm和460nm。在37℃下连续监测荧光动力学2-4小时。通过使用线性拟合计算动力学固化的初始反应速率来确定每个样品的脂肪酶活性，并针对仅缓冲液的反应速率进行校正以解释背景水解。通过将反应速率除以样品蛋白质浓度来确定比活性。

蛋白质样品用0.2μm fluorodyne注射过滤器进行无菌过滤，并加标25x调节缓冲液(20mg/mL蛋氨酸，1％w/v SR PS20的10mM醋酸组氨酸溶液，pH 5)。在无菌条件下将加标样品等分到Eppendorf管中，并在25℃下温育长达20天。在每个时间点取等分试样并在-70℃下冷冻直至进行游离脂肪酸的萃取。

通过含有同位素标记的FFA内标的乙腈溶液萃取每个样品中的游离脂肪酸。以14000rpm离心5分钟后，将上清液转移到带有玻璃插入件的HPLC小瓶中并冷冻直至测量。具有Waters ACQUITY

BEH300 C18(1.7um,2.1x150mm)柱的Waters H-class BioUPLC系统与AB Sciex 6600质谱仪组合用于FFA检测。使用5mM乙酸铵和0.1％氢氧化铵水溶液作为缓冲液A，100％乙腈作为缓冲液B，流速为0.3mL/min，柱温为60℃，从5μL进样样品中分离游离脂肪酸，该方法以70％缓冲液B开始0.2min，然后在5.3min内梯度升至100％B，然后在0.1min内恢复到70％B，并在70％B下平衡3.9min。质谱仪在负电离模式下操作，离子喷雾电压为-4500V。源温度设置为450℃，并且TOP质量范围为100-1000m/z。去簇电位为-120V，碰撞能量为-10V。将线性范围内FFA的累积拟合为线性回归，以计算初始水解速率。

通过内部CHO蛋白(CHOP)ELISA测定测量所有过程中样品中的宿主细胞蛋白质，并通过内部qPCR方法对DNA进行定量。

实例6

本实例展示了以下两种用于抗体纯化的纯化平台之间的比较，所述纯化平台包括：(1)使用120ZB10A深度过滤器对HCCF进行深度过滤，然后进行蛋白A层析；或者(2)使用EMPHAZE^TM AEX深度过滤器，然后使用蛋白A层析，对HCCF进行深度过滤。

分别收集来自表达三种不同抗体部分(AM1、AM2和AM3)的三种不同细胞培养物的收获细胞培养液(HCCF)。对于具有120ZB10A深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(1))，将每个HCCF合并物分别进行120ZB10A深度过滤(300L/m²)，然后进行蛋白A层析。收集蛋白A层析后的合并物的等分试样。使用FAMS测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。蛋白A层析后等分试样的测量比FAMS速率示出于图12中。HCCF合并物的等分试样(在深度过滤之前)用于获得对照测量值。

对于具有EMPHAZE^TM AEX深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(2))，将每个HCCF合并物分别进行EMPHAZE^TM AEX深度过滤(300L/m²)，然后进行蛋白A层析。收集蛋白A层析后的合并物的等分试样。使用FAMS测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。蛋白A层析后等分试样的测量比FAMS速率示出于图12中。HCCF合并物的等分试样(在深度过滤之前)用于获得对照测量值。

实例7

本实例展示了以下两种用于抗体纯化的纯化平台之间的比较，所述纯化平台包括：(1)HCCF的蛋白A层析，然后是活性炭(40CR)过滤，然后是使用

50HS的阳离子交换层析；或者(2)HCCF的蛋白A层析，然后是使用X0SP深度过滤器的深度过滤，然后是使用苯基

快速流动的HIC。

分别收集来自表达三种不同抗体部分(AM1、AM2和AM4)的三种不同细胞培养物的收获细胞培养液(HCCF)。对于没有深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(1))，将三个HCCF样品分别进行蛋白A层析。通过用三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)碱调节pH至5.5±0.3来调节蛋白A层析合并物，然后将经调节的合并物分别进行40CR过滤(300L/m²)，然后进行

50 HS层析。收集40CR过滤后的合并物的等分试样和

50HS过滤后的合并物的等分试样。使用FAMS测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。40CR过滤后的合并物的等分试样和

50HS层析后的合并物的等分试样的测量比FAMS速率分别示于图13和图14中。使用蛋白A层析合并物的等分试样(没有40CR过滤)来获得对照测量值。

对于具有X0SP深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(2))，将三个HCCF样品分别进行蛋白A层析。通过用三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)碱调节pH至5.5±0.3来调节蛋白A层析合并物，然后将经调节的合并物分别进行X0SP过滤(300L/m²)，然后使用苯基

快速流动层析进行处理。收集X0SP过滤后的合并物的等分试样和苯基

快速流动层析后的合并物的等分试样。使用FAMS测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。X0SP过滤后的合并物的等分试样和苯基

快速流动层析后的合并物的等分试样的测量比FAMS速率分别示于图13和图14中。使用蛋白A层析合并物的等分试样(没有X0SP深度过滤)来获得对照测量值。

实例8

本实例展示了以下三种用于抗体纯化的纯化平台之间的比较，所述纯化平台包括：(1)HCCF的蛋白A层析，然后是活性炭(40CR)过滤，然后是使用Capto Adhere的多元层析；(2)HCCF的蛋白A层析，然后是使用EMPHAZE^TM深度过滤器的深度过滤，然后是使用CaptoAdhere的多元层析；或者(3)HCCF的蛋白A层析，然后是使用PDD1深度过滤器的深度过滤，然后是使用Capto Adhere的多元层析。

分别收集来自表达三种不同抗体部分(AM1、AM2和AM4)的三种不同细胞培养物的收获细胞培养液(HCCF)。对于没有深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(1))，将三个HCCF样品分别进行蛋白A层析。通过用Tris碱调节pH至8.0±0.5来调节蛋白A层析合并物，然后将经调节的合并物分别进行40CR过滤(300L/m²)，然后进行Capto Adhere层析。收集40CR过滤后的合并物的等分试样。使用LEAP测定测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。40CR过滤后的合并物的等分样品的测量比LEAP速率示出于图15中。使用蛋白A层析合并物的等分试样(没有40CR过滤)来获得对照测量值。

对于具有EMPHAZE^TM深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(2))，将三个HCCF样品分别进行蛋白A层析。通过用Tris碱调节pH至8.0±0.5来调节蛋白A层析合并物，然后将经调节的合并物分别进行EMPHAZE^TM深度过滤(300L/m²)，然后进行Capto Adhere层析。收集EMPHAZE^TM深度过滤后的合并物的等分试样。使用LEAP测定测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。EMPHAZE^TM深度过滤后的合并物的等分样品的测量比LEAP速率示出于图15中。使用蛋白A层析合并物的等分试样(没有EMPHAZE^TM深度过滤)来获得对照测量值。

对于具有PDD1深度过滤步骤的纯化平台(纯化平台(3))，将三个HCCF样品分别进行蛋白A层析。通过用Tris碱调节pH至8.0±0.5来调节蛋白A层析合并物，然后将经调节的合并物分别进行PDD1深度过滤(300L/m²)，然后进行Capto Adhere层析。收集PDD1深度过滤后的合并物的等分试样。使用LEAP测定测量等分试样的聚山梨醇酯水解活性，其方法更详细地公开于实例1的材料与方法部分。PDD1深度过滤后的合并物的等分样品的测量比LEAP速率示出于图15中。使用蛋白A层析合并物的等分试样(没有PDD1深度过滤)来获得对照测量值。

实例9

本实例展示了用于纯化TYRP1 TCB抗体的工作流程(诸如PCT/EP2019/08614中公开的，其以引用方式整体并入本文)的评估和比较，其中工作流程使用不同的pre-C1深度过滤器，然后是使用MerckMillipore

HC Pro X0SP过滤器的pre-C2过滤步骤。所比较的pre-C1深度过滤器是包含化学成分确定的合成材料的深度过滤器(3M^TM EMPHAZE^TMAEX混合纯化器)和收获澄清深度过滤器(ZETA PLUS^TM EXT ZB系列，120ZB)。120ZB和EMPHAZE^TM深度过滤器都是带正电荷的，而X0SP深度过滤器在pH>4.5时是带负电荷的。

实验工作流程和样品名称的分配示出于图16中。简而言之，从生物反应器收集具有约80NTU浊度并含有TYRP1 TCB抗体的无细胞收获液，用作所述实验的上样材料。在蛋白A层析之前，使用120ZB深度过滤器过滤一部份无细胞收获液，并使用EMPHAZE^TM深度过滤器过滤第二部份。然后将两种滤液无菌过滤，并使用来自GE Healthcare的MabSelect SuRe^TM介质进行蛋白A层析。用1M TRIS/HCl(pH 9.0)将来自120ZB深度滤器工作流程和EMPHAZE^TM深度滤器工作流程的洗脱物分别滴定至pH 5.5。对于每个工作流程，将滴定的洗脱物分成等分试样；使用0.2μm无菌过滤器对一份样品进行无菌过滤并保留作为参比物，使用小型MerckMillipore

HC Pro X0SP过滤器(5cm²过滤面积)过滤第二份等分试样(约100mL至约120mL)。从120ZB工作流程中，收集来自X0SP过滤的三种洗脱物级分。从EMPHAZE^TM工作流程中，收集来自X0SP过滤的四种洗脱物级分。随后使用0.2μm无菌过滤器过滤每种X0SP洗脱物级分。

然后根据实例1中提供的方法通过LEAP测定分析每个所得的等分试样。LEAP测定结果的比较表明，两种pre-C1深度过滤器工作流程都很好地降低水解活性，并且X0SP过滤器显著降低了捕获柱输出物的水解活性(图17)。120ZB和EMPHAZE^TM工作流程的比较表明，与120ZB过滤的A蛋白洗脱物相比，EMPHAZE^TM过滤材料的A蛋白洗脱物的水解活性低33％(图17)。

实例10

本实例展示了使用纯化平台对含有TYRP1 TCB抗体的不同的HCCF样品(诸如在PCT/EP2019/08614中公开的，其以引用方式整体并入本文)进行纯化的评估和比较，该纯化平台包括对蛋白A层析洗脱物进行的X0SP深度过滤步骤。

两种不同的HCCF样品(CF 238和CF 239)从产生TYRP1 TCB抗体的细胞的单独培养中制备。使用MabSelect SuRe^TM介质进行蛋白A层析。收集洗脱物(CF 238 MSS洗脱物和CF239 MSS洗脱物)，各自用1M TRIS/HCl(pH 9.0)滴定至pH 5.5，然后进行X0SP深度过滤。具体地，分别将35L CF 238 MSS洗脱物或20L CF239 MSS洗脱物通过X0SP过滤器(分别为1m²或0.55m²)以160L/m²/h的流速过滤。同时，CF 238和CF 239 HCCF样品的等分试样各自均使用不包括蛋白A层析后的X0SP深度过滤步骤的参比纯化平台进行纯化。

如实例1中讨论的那样进行每个所得洗脱物的脂肪酶活性。从用于CF 238和CF239两者的参比物和包括X0SP深度过滤器的纯化平台获得的脂肪酶活性结果示出于图18A(CF 238)和图18B(CF 239)中。如图18A和图18B所示，来自包括X0SP的纯化平台的洗脱物的水解活性显著降低。

实例11

本实例展示了使用四种纯化平台纯化普拉辛珠单抗的比较，所述四种纯化平台结合了不同的深度过滤步骤，用于过滤经调节的亲和层析(蛋白A层析)洗脱物。具体地，四种不同的深度过滤步骤基于以下：(i)PDD1；(ii)X0SP；(iii)PDD1，然后是X0SP；以及(iv)X0SP，然后是PDD1。

用2M Tris将亲和层析洗脱物调节至pH 6.0+/-0.2。用至少220ml相应缓冲液(25mM Tris/乙酸盐)平衡PDD1和XS0P过滤器。两种过滤器均上样<200L/m²。PDD1和XS0P过滤器的流速为11ml/min。在实验期间控制压力。来自深度过滤器的洗脱物在100L/m²和200L/m²后进行分级。

将参比方法(无深度过滤；上样)的蛋白A层析洗脱物中的脂肪酶活性和HCP量与四种纯化平台的每个深度过滤步骤后收集的洗脱物进行比较。根据实例1进行脂肪酶活性测定。从深度过滤器获得的级分中脂肪酶活性的结果示于图19A中。HCP测量的结果示出于图19B中。

Claims

1.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：

(a)捕获步骤；以及

(b)深度过滤步骤，

从而与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，降低所述组合物的所述酶水解活性速率。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物的所述酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

4.一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：

(a)捕获步骤；以及

(b)深度过滤步骤，

从而与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，降低所述组合物中所述水解酶的所述水平。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平的相对降低为至少约20％。

7.一种用于减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台包括：

(a)捕获步骤；以及

(b)深度过滤步骤，

从而与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，减少所述组合物中所述聚山梨醇酯的降解。

8.根据权利要求7所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中所述聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述纯化平台用于从所述样品中纯化靶标，其中所述样品包含所述靶标和一种或多种宿主细胞杂质。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述靶标包含多肽。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述宿主细胞杂质是宿主细胞蛋白质。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述深度过滤步骤在所述捕获步骤之前进行，或者所述深度过滤步骤在所述捕获步骤之后进行。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述深度过滤器包含底物，所述底物包含硅藻土组合物、二氧化硅组合物、纤维素纤维、聚合物纤维、粘性树脂和灰分组合物中的一种或多种。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述深度过滤器的所述底物的至少一部分包含表面改性。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述表面改性是季胺表面改性、阳离子表面改性和阴离子表面改性中的一种或多种。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中所述深度过滤器选自由EMPHAZE^TM深度过滤器、PDD1深度过滤器、ZETA PLUS^TM120ZA深度过滤器和ZETA PLUS^TM120ZB深度过滤器组成的组。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述捕获步骤包括通过亲和层析进行处理。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述亲和层析选自由蛋白A层析、蛋白G层析、蛋白A/G层析、蛋白L层析、FcXL层析、蛋白XL层析、κ层析和κXL层析组成的组。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中所述病毒灭活步骤在所述捕获步骤之后进行。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述深度过滤步骤在所述病毒灭活步骤之后进行。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述捕获步骤之前进行的另一深度过滤步骤。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括一个或多个纯化步骤，并且其中所述一个或多个纯化步骤在所述捕获步骤、所述深度过滤步骤和如果存在的所述病毒灭活步骤之后进行。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤包括多肽纯化步骤。

25.根据权利要求23或24所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行的另一深度过滤步骤。

26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中所述UFDF步骤在所述一个或多个纯化步骤之后进行。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在所述UFDF步骤之前或之后进行的另一深度过滤步骤。

28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤。

29.根据权利要求28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤在如果存在的所述一个或多个纯化步骤之前、之间或之后进行。

30.根据权利要求28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤在所述一个或多个纯化步骤之后并且在如果存在的所述UFDF步骤之前进行。

31.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括pH保持步骤，其中所述pH保持步骤在如果存在的所述一个或多个纯化步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒过滤步骤，其中所述病毒过滤步骤在所述pH保持步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

34.根据权利要求28所述的方法，其中所述HIC纯化步骤包括通过HIC过滤器进行处理。

35.根据权利要求23-34中任一项所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：离子交换层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、疏水电荷诱导层析、陶瓷羟基磷灰石层析和多元层析。

36.根据权利要求23-35中任一项所述的方法，其中所述一个或多个纯化步骤各自独立地包括通过选自由以下项组成的组的层析进行处理：DEAE、DMAE、TMAE、QAE、SPSFF、SPXL、QSFF、MEP-Hypercel^TM、Capto MMC和Capto Adhere。

37.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台按以下顺序包括：

(a)捕获步骤，所述捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；

(b)病毒灭活步骤；

(c)第二多肽纯化步骤；

(d)第三多肽纯化步骤；以及

(e)超滤/渗滤(UFDF)步骤，

其中所述纯化平台进一步包括在以下项中的一项或多项之际进行的深度过滤步骤：

(i)在所述捕获步骤之前；

(ii)在所述捕获步骤之后并且在所述病毒灭活步骤之前；

(iii)在所述病毒灭活步骤之后并且在所述第二多肽纯化步骤之前；

(iv)在所述第二多肽纯化步骤之后并且在所述第三多肽纯化步骤之前；或者

(v)在所述第三多肽纯化步骤之后并且在所述超滤/渗滤(UFDF)步骤之前；

38.根据权利要求37所述的方法，其中所述纯化平台进一步按以下顺序包括在所述第三多肽纯化步骤之后并且在所述UFDF步骤之前进行的pH保持步骤和病毒过滤步骤。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述病毒过滤步骤包括通过病毒过滤器进行处理。

40.根据权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括在以下项中的一项或多项之际进行的疏水相互作用层析(HIC)纯化步骤：

(i)在所述第三多肽纯化步骤之后并且在所述pH保持步骤之前；

(ii)在所述pH保持步骤之后并且在所述病毒过滤步骤之前；或者

(iii)在所述病毒过滤步骤之后并且在所述UFDF步骤之前。

41.根据权利要求1-40中任一项所述的方法，其进一步包括确定所述组合物的所述酶水解活性速率。

42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其进一步包括确定所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平。

43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述组合物包含聚山梨醇酯。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

45.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其进一步包括样品处理步骤。

46.根据权利要求1-45中任一项所述的方法，其中所述样品是或来源于细胞培养样品。

47.根据权利要求46所述的方法，其中所述细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌细胞。

48.根据权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述样品包含宿主细胞或来源于所述宿主细胞的组分。

49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中所述一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

51.根据权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述样品包含靶标，并且其中所述靶标是抗体部分。

52.根据权利要求51所述的方法，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

53.根据权利要求51或52所述的方法，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

54.根据权利要求51-53中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

55.根据权利要求51-54中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

56.一种药物组合物，其通过根据权利要求1-55中任一项所述的方法获得。

57.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中所述组合物的保质期超过24个月。

58.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述组合物具有降低的聚山梨醇酯水解活性速率，其中与向卫生当局提交的与所述配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的保质期相比，所述组合物的所述保质期延长，其中与所述文件中指明的所述保质期相比，所述保质期延长至少6个月。

59.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分，其中所述配制的抗体部分组合物具有减少的聚山梨醇酯降解，其中与向卫生当局提交的与所述配制的抗体部分组合物相关的文件中指明的所述降解相比，所述降解减少至少约20％。

60.一种配制的抗体部分组合物，其包含抗体部分和聚山梨醇酯，其中所述聚山梨醇酯在液体组合物的储存期间降解每年20％或更少。

61.根据权利要求57-60中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

62.根据权利要求57-61中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

63.根据权利要求57-62中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

64.根据权利要求57-63中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

65.根据权利要求57-64中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述聚山梨醇酯水解活性速率降低至少约20％。

66.根据权利要求57-65中任一项所述的配制的抗体部分组合物，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

67.一种降低从纯化平台获得的组合物的酶水解活性速率的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：

(a)捕获步骤，所述捕获步骤包括通过亲和层析进行处理；以及

(b)纯化步骤，所述纯化步骤包括通过选自由HIC、阳离子交换层析和多元层析组成的组的层析进行处理，

其中所述纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，

其中所述一个或多个深度过滤步骤在以下项中的任一项或多项之际进行：在所述捕获步骤之前；在所述捕获步骤之后；或者在所述捕获步骤之后且在所述纯化步骤之前，

其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且

其中所述深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：

(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；

(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及

(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，

从而与使用没有所述一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，降低所述组合物的所述酶水解活性速率。

68.根据权利要求67所述的方法，其中所述酶水解活性速率是酶聚山梨醇酯水解活性速率。

69.根据权利要求67或68所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物的所述酶水解活性速率的相对降低为至少约20％。

70.一种降低从纯化平台获得的组合物中一种或多种水解酶的水平的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：

其中所述纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中所述一个或多个深度过滤步骤在以下项中的任一项或多项之际进行：在所述捕获步骤之前；在所述捕获步骤之后且在所述纯化步骤之前；或者在所述纯化步骤之后，

其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且

其中所述深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：

(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；

(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及

(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，

从而与使用没有所述一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，降低所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平。

71.根据权利要求70所述的方法，其中所述一种或多种水解酶能够水解聚山梨醇酯。

72.根据权利要求70或71所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平的相对降低为至少约20％。

73.一种减少从纯化平台获得的组合物中聚山梨醇酯的降解的方法，所述方法包括使样品经受所述纯化平台，所述纯化平台依次包括：

其中所述纯化平台进一步包括一个或多个深度过滤步骤，其中所述一个或多个深度过滤步骤在以下项中的任一项或多项之际进行：在所述捕获步骤之前；在所述捕获步骤之后；或者在所述捕获步骤之后且在所述纯化步骤之前，

其中每个深度过滤步骤包括通过深度过滤器进行处理，并且

其中所述深度过滤器包含选自由以下项组成的组的材料：

(i)二氧化硅和聚丙烯酸类纤维；

(ii)水凝胶Q(季胺)-官能化的非织造介质和多区微孔膜；以及

(iii)纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩，

从而与使用没有所述一个或多个深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，减少所述组合物中聚山梨醇酯的降解。

74.根据权利要求73所述的方法，其中与使用没有所述深度过滤步骤的相同纯化平台纯化所述样品相比，所述组合物中所述聚山梨醇酯的降解的相对减少为至少约5％。

75.根据权利要求67-74中任一项所述的方法，其中包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器包含二氧化硅助滤剂和聚丙烯酸类纤维浆。

76.根据权利要求67-74中任一项所述的方法，其中包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和所述多区微孔膜的所述深度过滤器包括四个层，所述四个层包含水凝胶Q-官能化的非织造材料和九区微孔膜。

77.根据权利要求67-74中任一项所述的方法，其中包含纤维素纤维、硅藻土和珍珠岩的所述深度过滤器包括两个层，其中每层包含纤维素过滤器基质，其中所述纤维素过滤器基质浸渍有包含硅藻土或珍珠岩中的一种或多种的助滤剂，并且其中每层进一步包含树脂粘结剂。

78.根据权利要求67-77中任一项所述的方法，其中基于进入所述深度过滤器的溶液的pH来选择所述深度过滤器。

79.根据权利要求78所述的方法，其中当进入所述深度过滤器的所述溶液为约5至约6.5时，选择包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器。

80.根据权利要求78所述的方法，其中当进入所述深度过滤器的所述溶液为约7至约8.5时，选择包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和所述多区微孔膜的所述深度过滤器。

81.根据权利要求67-80中任一项所述的方法，其进一步包括基于进入所述深度过滤器的所述溶液的所述pH来选择所述深度过滤器。

82.根据权利要求67-81中任一项所述的方法，其中所述纯化平台依次包括：深度过滤步骤，所述深度过滤步骤包括通过包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的所述深度过滤器进行处理；所述捕获步骤，所述捕获步骤包括通过蛋白A层析进行处理；以及所述纯化步骤。

83.根据权利要求82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述HIC进行处理。

84.根据权利要求83所述的方法，其中所述HIC是苯基

快速流动层析。

85.根据权利要求82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述阳离子交换层析进行处理。

86.根据权利要求85所述的方法，其中所述阳离子交换层析是

50HS。

87.根据权利要求67-86中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，所述第二深度过滤步骤包括通过包含所述二氧化硅和所述聚丙烯酸类纤维的所述深度过滤器进行处理，并且其中所述第二深度过滤步骤发生在所述捕获步骤之后并且在所述纯化步骤之前。

88.根据权利要求82所述的方法，其中所述纯化步骤包括通过所述多元层析进行处理。

89.根据权利要求88所述的方法，其中所述多元层析是Capto Adhere。

90.根据权利要求88或89所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括第二深度过滤步骤，所述第二深度过滤步骤包括通过包含所述水凝胶Q-官能化的非织造介质和多区微孔膜的所述深度过滤器进行处理，并且其中所述第二深度过滤步骤发生在所述捕获步骤之后且在所述纯化步骤之前。

91.根据权利要求67-90中任一项所述的方法，其中所述纯化平台用于从所述样品中纯化靶标，其中所述样品包含所述靶标和一种或多种宿主细胞杂质。

92.根据权利要求91所述的方法，其中所述靶标包含多肽。

93.根据权利要求91或92所述的方法，其中所述宿主细胞杂质是宿主细胞蛋白质。

94.根据权利要求67-93中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括病毒灭活步骤，其中所述病毒灭活步骤在所述捕获步骤之后进行。

95.根据权利要求94所述的方法，其中所述一个或多个深度过滤步骤在所述病毒灭活步骤之后进行。

96.根据权利要求67-95中任一项所述的方法，其中所述纯化平台进一步包括超滤/渗滤(UFDF)步骤，并且其中所述UFDF步骤在所述纯化步骤之后进行。

97.根据权利要求67-96中任一项所述的方法，其进一步包括确定所述组合物的所述酶水解活性速率。

98.根据权利要求67-97中任一项所述的方法，其进一步包括确定所述组合物中一种或多种水解酶的所述水平。

99.根据权利要求67-98中任一项所述的方法，其中所述组合物包含聚山梨醇酯。

100.根据权利要求99所述的方法，其中所述聚山梨醇酯选自由聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80组成的组。

101.根据权利要求67-100中任一项所述的方法，其进一步包括样品处理步骤。

102.根据权利要求67-101中任一项所述的方法，其中所述样品是或来源于细胞培养样品。

103.根据权利要求102所述的方法，其中所述细胞培养样品包含宿主细胞，并且其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或大肠杆菌细胞。

104.根据权利要求67-103中任一项所述的方法，其中所述样品包含宿主细胞或来源于所述宿主细胞的组分。

105.根据权利要求67-104中任一项所述的方法，其中所述样品包含一种或多种宿主细胞蛋白质，并且其中所述一种或多种宿主细胞蛋白质中的一种是水解酶。

106.根据权利要求105所述的方法，其中所述水解酶是脂肪酶、酯酶、硫酯酶、磷脂酶或神经酰胺酶。

107.根据权利要求67-106中任一项所述的方法，其中所述样品包含靶标，并且其中所述靶标是抗体部分。

108.根据权利要求107所述的方法，其中所述抗体部分是单克隆抗体。

109.根据权利要求107或108所述的方法，其中所述抗体部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

110.根据权利要求107-109中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：抗CD20抗体、抗CD40抗体、抗HER2抗体、抗IL6抗体、抗IgE抗体、抗IL13抗体、抗TIGIT抗体、抗PD-L1抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A/ANG2抗体、抗CD79b抗体、抗ST2抗体、抗因子D抗体、抗因子IX抗体、抗因子X抗体、抗abeta抗体、抗tau抗体、抗CEA抗体、抗CEA/CD3抗体、抗CD20/CD3抗体、抗FcRH5/CD3抗体、抗Her2/CD3抗体、抗FGFR1/KLB抗体、FAP-4-1BBL融合蛋白、FAP-IL2v融合蛋白和TYRP1 TCB抗体。

111.根据权利要求107-110中任一项所述的方法，其中所述抗体部分选自由以下项组成的组：奥瑞珠单抗、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、托珠单抗、法立昔单抗、泊洛妥珠单抗、更汀芦单抗、赛必妥单抗、克瑞珠单抗、莫苏尼妥珠单抗、替瑞利尤单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、阿特珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、兰帕珠单抗、来金珠单抗、奥马珠单抗、兰尼单抗、艾美赛珠单抗、塞鲁单抗、普拉辛珠单抗、RO6874281和RO7122290。

112.一种药物组合物，其通过根据权利要求67-111中任一项所述的方法获得。