CN104698059B - 一种脑胶质瘤肿瘤标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种脑胶质瘤肿瘤标志物及其应用。所述脑胶质瘤肿瘤标志物为双唾液酸化的神经节苷脂，其结构式具体如下任一项或多项所示：NeuAc‑α3‑Gal‑β3‑GalNAc‑β4（NeuAc‑α3）‑Gal‑β4‑Glu‑Cer；Gal‑β3‑GalNAc‑β4（NeuAc‑α8‑NeuAc‑α3）‑Gal‑β4‑Glu‑Cer；GalNAc‑β4（NeuAc‑α8‑NeuAc‑α3）‑Gal‑β4‑Glu‑Cer；NeuAc‑α8‑NeuAc‑α3‑Gal‑β4‑Glu‑Cer；其中，NeuAc代表唾液酸，Gal代表半乳糖，GalNAc代表半乳糖胺，Glu代表葡萄糖，Cer代表N‑脂酰鞘氨醇。本发明能够用于脑胶质瘤肿瘤的明确清楚的表征。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤标志物技术领域，尤其涉及一种脑胶质瘤肿瘤标志物及其应用。
背景技术
脑胶质瘤是发生在人类身上最为常见的肿瘤之一，其恶化程度很高。一般从确诊开始，患者的寿命不超过一年。作为中枢系统疾病中最为常见的肿瘤之一，脑胶质瘤约占成人颅内肿瘤的30%-50%，有容易复发、治疗困难等特点。目前对脑胶质瘤的治疗手段仍然采用手术为主，放疗化疗为辅。由于脑胶质瘤的侵袭性生长，手术时不能完全切除，从而也就决定了化疗是继脑胶质瘤手术之后的辅助治疗中最为重要的一环，但是脑胶质瘤对诸多化疗药物的耐药性，导致脑胶质瘤的临床化疗的治疗效果均不理想。
鞘糖脂是一类广泛存在于哺乳动物生物膜上的一类两亲性分子，参与维持细胞的正常生理功能。近年来的研究报道表明，鞘糖脂可以作为肿瘤的标志物，甚至也和肿瘤的耐药性存在密切的关系。GlcCer以及GCS在肿瘤细胞中的积累能导致肿瘤细胞的耐药，因此他们同P-gp、Bcl-2等一同被认为肿瘤多药耐药的肿瘤细胞标志物。同时，鞘糖脂的合成前体是GlcCer，存在许多肿瘤中，如乳腺癌、卵巢癌和表皮细胞癌。因此，进一步探讨鞘糖脂与脑胶质瘤的关系，对于脑胶质瘤疾病的诊断治疗以及耐药性的研究都有重要的帮助。
发明内容
本发明人经研究发现双唾液酸化的神经节苷脂在脑胶质瘤中呈现特异性高表达现象，而在正常组织和其它肿瘤组织中没有这种特异性高表达现象，因此能够作为脑胶质瘤的肿瘤标记物，本发明基于上述发现完成。
本发明的目的在于提供一种脑胶质瘤肿瘤标志物，其作为脑胶质瘤诊断的标志性物质，能够明确清楚地表征脑胶质瘤疾病的发生。
本发明包括以下内容：
本发明提供一种脑胶质瘤肿瘤标志物，其为双唾液酸化的神经节苷脂。
本发明中，双唾液酸化的神经节苷脂是指分子式中有两个唾液酸的神经节苷脂。
作为本发明的优选，所述双唾液酸化的神经节苷脂的结构式如下任一项或多项所示：
NeuAc-α3-Gal-β3-GalNAc-β4（NeuAc-α3）-Gal-β4-Glu-Cer；
Gal-β3-GalNAc-β4（NeuAc-α8-NeuAc-α3）-Gal-β4-Glu-Cer；
GalNAc-β4（NeuAc-α8-NeuAc-α3）-Gal-β4-Glu-Cer；
NeuAc-α8-NeuAc-α3-Gal-β4-Glu-Cer；
其中，NeuAc代表唾液酸，Gal代表半乳糖，GalNAc代表半乳糖胺，Glu代表葡萄糖，Cer代表N-脂酰鞘氨醇。
上述结构式表示的双唾液酸化的神经节苷脂依次称为GD1a、GD1b、GD2和GD3。
作为本发明的优选，所述双唾液酸化的神经节苷脂的结构和/或组成通过质谱方法确定。
本发明还提供上述的脑胶质瘤肿瘤标志物在制备与其结合的特异性结合物中的应用。
所述特异性结合物，比如可以是抗所述肿瘤标志物的单克隆抗体或者多克隆抗体等。所述单克隆抗体或者多克隆抗体可以是完整的抗体，也可以是具有结合位点的部分抗体片段。
优选地，所述特异性结合物为抗所述脑胶质瘤肿瘤标志物的抗体。也就是说，本发明的脑胶质瘤肿瘤标志物可以作为制备抗所述脑胶质瘤肿瘤标志物的抗体的抗原使用。
本发明的有益效果为：研究发现双唾液酸化的神经节苷脂在脑胶质瘤中呈现特异性高表达现象，而在正常组织和其它肿瘤组织中没有这种特异性高表达现象，因此能够作为脑胶质瘤的肿瘤标志物，通过质谱检测双唾液酸化的神经节苷脂的表达量可以快速、准确及清楚的确定脑胶质瘤的发生。
附图说明
图1为主要神经节苷脂的一级质谱图。
图2为双唾液酸化的神经节苷脂的结构式示意图。
图3为双唾液酸化的神经节苷脂在不同组织中的表达结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，以下实施例仅为本发明的优选实施例，以便于更好地理解本发明，因而不应视为限定本发明的范围。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂商购买得到的。
实施例1
收集临床脑胶质瘤患者的血清样本或者肿瘤组织样本，将组织研碎或者血清混匀置于玻璃试管中，加氯仿：甲醇=1：1（v/v）的混合溶剂2mL，用滴管轻轻捣碎组织，超声1h，超声结束，离心（1500rpm，5min）取上清，重复抽提4次。接着换异丙醇：正己烷：水=55：25：20（v/v/v）2mL提取液提取，超声1h，超声结束，离心取上清，重复抽提4次。合并上述抽提上清液，于旋转真空干燥器中干燥，干燥物在-20℃的低温冰箱放置备用。接着过sephadex A25层析柱分离酸、中性鞘糖脂，用0.8M乙酸钠甲醇溶液洗脱样品，收集洗脱液即得到酸性鞘糖脂组分，同样收集3个柱体积，于旋转真空干燥器中干燥，干燥后-20℃放置备用。将酸性的鞘糖脂进入质谱检测，得到酸性鞘糖脂的检测结果如图1所示，图中包含了所有主要的神经节苷脂，经过进一步的结构分析，可以将神经节苷脂分为GM3、GM2、GM1、GD1、GD2和GD3。其中GD类神经节苷脂是指双唾液酸化的神经节苷脂，其结构如图2所示，相应的在质谱中的荷质比如表1所示。
表1双唾液酸化的神经节苷脂质谱得到的荷质比结果
实施例2
将苏州大学附属第一人民医院获得的5例正常脑组织样本（对照）、6例脑膜瘤组织样本、16例垂体瘤样本以及14例脑胶质瘤样本，分别提取鞘糖脂，并进行酸性鞘糖脂的质谱分析（如实施例1）。将总的神经节苷脂的相对丰度记为M（总），GD1、GD2、GD3三种双唾液酸化的神经节苷脂的相对丰度记作M（GD），那么双唾液酸化的神经节苷脂在组织中的含量即可表示为R=M（GD）/M（总）*100%。将每组样本中的R值进行Student-Newman-Keuls检验进行统计学分析，得到的结果如图3所示，在脑胶质瘤中双唾液酸化的神经节苷脂的水平要明显高于正常对照以及垂体瘤组和脑膜瘤组，这说明把双唾液酸化的神经节苷脂当作脑胶质瘤的肿瘤标志物是可行的。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及详细方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (4)
1.一种脑胶质瘤肿瘤标志物，其为双唾液酸化的神经节苷脂；
所述双唾液酸化的神经节苷脂的结构式如下任一项或多项所示：
NeuAc-α3-Gal-β3-GalNAc-β4(NeuAc-α3)-Gal-β4-Glu-Cer；
Gal-β3-GalNAc-β4(NeuAc-α8-NeuAc-α3)-Gal-β4-Glu-Cer；
GalNAc-β4(NeuAc-α8-NeuAc-α3)-Gal-β4-Glu-Cer；
NeuAc-α8-NeuAc-α3-Gal-β4-Glu-Cer；
其中，NeuAc代表唾液酸，Gal代表半乳糖，GalNAc代表半乳糖胺，Glu代表葡萄糖，Cer代表N-脂酰鞘氨醇。
2.根据权利要求1所述的脑胶质瘤肿瘤标志物，其特征在于，所述双唾液酸化的神经节苷脂的结构和/或组成通过质谱方法确定。
3.如权利要求1-2任一项所述的脑胶质瘤肿瘤标志物在制备与其结合的特异性结合物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述特异性结合物为抗所述脑胶质瘤肿瘤标志物的抗体。
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| 《C18鞘糖脂在脑胶质瘤中的表达及其在耐药中的功能研究》;俞云会;《中国优秀硕士论文全文数据库》;20130315;正文第19页 * |
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