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MX2008015771A - Metodos para el tratamiento de padecimientos autoinmunes usando anticuerpos monoclonales con toxicidad reducida. - Google Patents

Metodos para el tratamiento de padecimientos autoinmunes usando anticuerpos monoclonales con toxicidad reducida.

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MX2008015771A
MX2008015771A MX2008015771A MX2008015771A MX2008015771A MX 2008015771 A MX2008015771 A MX 2008015771A MX 2008015771 A MX2008015771 A MX 2008015771A MX 2008015771 A MX2008015771 A MX 2008015771A MX 2008015771 A MX2008015771 A MX 2008015771A
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MX
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antibody
day
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MX2008015771A
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Ronald Wilder
Scott Koenig
Ezio Bonvini
Leslie S Johnson
Stanley Pillemer
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Macrogenics Inc
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Abstract

La presente invención proporciona métodos de tratamiento, que hacen más lenta la progresión de, o mejoran los síntomas de los padecimientos inmunológicos mediados por las células T, particularmente padecimientos autoinmunes (por ejemplo, diabetes autoinmune (es decir, diabetes tipo 1 o diabetes mellitus dependiente de la insulina (IDDM) y esclerosis múltiple) a través del uso de anticuerpos CD3 anti-humanos. Los anticuerpos de la invención se usan preferiblemente en regímenes de dosificación de dosis bajas, regímenes de dosificación crónica o regímenes que involucran la redosificación después de un cierto periodo de tiempo. Los métodos de la invención proporcionan la administración de anticuerpos que se enlazan específicamente a la subunidad épsilon dentro del complejo CD3 humano. Tales anticuerpos modulan la interacción receptor/aloantígeno de las células T y así, regulan la citotoxicidad mediada por las células T, asociada con los padecimientos autoinmunes. Además, los métodos de la invención proporcionan el uso de anticuerpos CD3 anti-humanos modificados tal que exhiban la función efectora reducida o eliminada y la activación de las células T, cuando se comparan a los anticuerpos CD3 anti-humanos no modificados.

Description

MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE PADECIMIENTOS AUTOINMUNES USANDO ANTICUERPOS MONOCLONALES CON TOXICIDAD REDUCIDA 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de, o que mejoran los síntomas de los padecimientos inmunológicos mediados por las células T, particularmente padecimientos autoinmunes (por ejemplo, diabetes autoinmune (es decir, diabetes tipo 1 o diabetes mellitus dependiente de la insulina ( IDDM) ) y esclerosis múltiple) a través del uso de anticuerpos CD3 anti-humanos . Los anticuerpos de la invención se usan preferiblemente en regímenes de dosificación de dosis baja, regímenes de dosificación crónica o regímenes que involucran la redosificación después de un cierto período de tiempo. Los métodos de la invención proporcionan la administración de anticuerpos que se enlazan específicamente a la subunidad épsilon dentro del complejo CD3 humano. Tales anticuerpos modular la interacción receptor/aloantígeno de células T y así, regulan la citotoxicidad mediada por las células T, asociada con los desórdenes autoinmunes. Adicionalmente, los métodos de la invención proporcionan el uso de anticuerpos CD3 anti-humanos modificados tal que exhiban una función efectora reducida o eliminada y la activación de las células T, cuando se comparan a los anticuerpos CD3 anti-humanos, no modificados . 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 2.1 Padecimientos Autoinmunes Los padecimientos autoinmunes son causados cuando el sistema inmune del cuerpo, el cual normalmente defiende al cuerpo contra bacterias, virus y otros agentes infecciosos, ataca "su propio" tejido, células y órganos. La movilización del sistema inmune contra tales auto-objetivos se denomina autoinmunidad . Aunque está presente alguna autoinmunidad en cada individuo, los sistemas de control rígido suprimen las células auto-reconocedoras del sistema inmune al grado que la autoinmunidad es normalmente asintomática . Los estados de padecimientos surgen cuando hay alguna interrupción en el sistema de control, que permite a las células autoinmunes escapar de la supresión, o cuando hay algún cambio en el tejido objetivo tal que el mismo ya no se reconoce como propio. Los mecanismos que causan estos cambios no son bien entendidos, pero se ha teorizado que son el resultado de una estimulación inmune aberrante en individuos genéticamente predispuestos . Los padecimientos autoinmunes pueden ser específicos de los órganos o sistémicos y se provocan por diferentes mecanismos patógenos. La autoinmunización específica de los órganos se caracteriza por la tolerancia y supresión dentro del compartimento de las células T, expresión aberrante de antígenos de complejo de mayor histocompatibilidad (MHC) , mimetismo antigénico y variaciones alélicas en genes MHC. Los padecimientos autoinmunes sistémicos usualmente involucran la activación de células B policlonales y anormalidades de células T inmuno-reguladoras, receptores de células T y genes MHC. Los ejemplos de padecimientos autoinmunes, específicos de los órganos, son diabetes, psoriasis cutánea, colitis ulcerativa, hipertiroidismo, insuficiencia adrenal autoinmune, anemia hemolítica, esclerosis múltiple y carditis reumática. Los padecimientos autoinmunes sistémicos, representativos, incluyen lupus sistémico eritematoso, artritis reumatoide, artritis psoriásica, polimiositis del síndrome de Sjogren, dermatomiositis y escleroderma . También, aunque no se tenga un desorden autoinmune, los receptores de trasplantes de órganos frecuentemente experimentan síntomas similares y requieren terapias similares para pacientes autoinmunes. Los ataques del sistema en el (los) órgano (s) trasplantado (s) pueden llevar a falla en los órganos o complicaciones sistémicas más serias, por ejemplo, padecimiento inj erto-vs . -huésped (GVHD) en receptores de trasplante de médula ósea. Existe una clara necesidad de estrategias mejoradas para tratar padecimientos autoinmunes y/o para modular la respuesta inmune. Actualmente, los desórdenes del sistema inmune se tratan con agentes inmunosupresores tales como cortisona, derivados de aspirina, hidroxicloroquina, metotrexato, azatioprina, ciclofosfamida, y varios agentes biológicos tales como anticuerpos anti-TNF, y/o combinaciones de los anteriormente citados. Los tratamientos son variablemente exitosos, dependiendo del paciente y desorden individual. Sin embargo, surge un dilema en el uso de tales terapias inmunosupresoras generales en que entre mayor sea la supresión inmune, y por consiguiente mayor sea el potencial para un tratamiento exitoso del padecimiento autoinmune, más riesgo corre el paciente de desarrollar infecciones oportunistas. Además, debido a la naturaleza comprometida del sistema inmune del paciente, incluso una infección menor puede volverse rápidamente de seria consideración. 2.1.1 Diabetes La diabetes típicamente se clasifica como uno de dos tipos: diabetes tipo 1 ó tipo 2. La diabetes tipo 2 es un padecimiento no autoinmune que típicamente se diagnóstica en adultos. La misma es un padecimiento progresivo que se desarrolla cuando el cuerpo no produce suficiente insulina o falla en usar eficientemente la insulina que produce (un fenómeno conocido como resistencia a la insulina) . Los pacientes diagnosticados con diabetes tipo 2 típicamente son mayores de 45 años, con sobrepeso (IMC (índice de masa corporal) de 25 o superior) u obsesos (IMC de 30 ó superior) , físicamente inactivos, tienen hipertensión (presión sanguínea de 140/90 mm Hg ó superior en adultos), y tienen colesterol HDL de 35 mg/dL ó más bajo y/o nivel de triglicéridos de 250 mg/dL . La diabetes tipo 1, también conocida como diabetes juvenil o diabetes dependiente mellitus de insulina, es un padecimiento autoinmune que típicamente se diagnóstica , en niños (aunque la diabetes tipo 1 de Aparición en Adultos puede estar presente en adultos) . La diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM) afecta 15 millones de personas en los Estados Unidos con un estimado adicional de 12 millones de personas que actualmente son asintomáticas , y por consiguiente, no tienen conocimiento de que tienen este padecimiento. Los factores de riesgo para desarrollar diabetes tipo 1, incluyen factores genéticos supuestos, exposición a virus de la niñez u otros factores ambientales, y/o la presencia de otros desórdenes autoinmunes. Aunque los factores genéticos asociados con la diabetes tipo 1, no se entienden por completo, los riesgos para el desarrollo del padecimiento se han vinculado tanto a la historia familiar como a la etnicidad. Por ejemplo, un niño que tiene un padre o hermano con diabetes tipo 1 tiene un riesgo más alto de desarrollar diabetes tipo 1 que un niño de padres no diabéticos o con hermanos no diabéticos. Además, los factores genéticos asociados con el riesgo de desarrollar diabetes tipo 1 parecen estar vinculados con un tipo HLA particular: HLA-DR3 y DR4 están asociados con un riesgo más alto en caucásicos; HLA-DR7 está asociado con un riesgo más alto en gente de ascendencia africana; y HLA-DR9 está asociado con un riesgo más alto en gente de ascendencia japonesa. También se teoriza que factores desconocidos, incluyendo virus de la niñez o exposición a algún otro factor ambiental (por ejemplo, exposición a ciertos alimentos o sustancias químicas) , potencian o activan un factor genético heredado y causan el inicio de la diabetes tipo 1. Los virus que se han asociado con la diabetes tipo 1, incluyen el virus coxsackie B, enterovirus, adenovirus, rubéola, citomegalovirus , y virus de Epstein-Barr . Por último, la presencia de otros desórdenes autoinmunes, tales como padecimiento tiroideo y padecimiento celiaco, aumenta el riesgo de desarrollar diabetes tipo 1. La Diabetes Tipo 1 es causada por una respuesta autoinmune en la cual las células ß productoras de insulina del páncreas (también conocidas como células de los islotes) gradualmente se destruyen. La etapa más temprana del padecimiento, llamada insulitis, se caracteriza por la infiltración de leucocitos en el páncreas y está asociada tanto con la inflamación pancreática como con la liberación de anticuerpos citotóxicos anti-células ß. Cuando el padecimiento avanza, el tejido dañado también puede atraer linfocitos, provocando aún más daño a las células ß. También, la subsecuente activación general de linfocitos, por ejemplo en respuesta a una infección viral, alergia alimenticia, sustancias químicas, o estrés, puede dar como resultado que se destruyan aún más células de los islotes. Las etapas tempranas del padecimiento frecuentemente se pasan por alto o se diagnostican erróneamente ya que los síntomas clínicos de la diabetes típicamente se manifiestan sólo después de que se ha destruido el 80% de las células ß. Una vez que los síntomas ocurren, el diabético tipo 1 normalmente depende de la insulina de por vida. La desregulación de niveles de glucosa en la sangre, asociados con la diabetes, puede llevar a ceguera, falla en los ríñones, daño en los nervios y es un factor principal de contribución en la etiología de apoplejía, cardiopatía isquémica y otros desórdenes de los vasos sanguíneos . 2.1.2 Esclerosis Múltiple La esclerosis múltiple (MS) es un padecimiento inflamatorio crónico, que frecuentemente provoca la discapacidad del sistema nervioso central (SNC) . La MS se tipifica patológicamente por múltiples focos inflamatorios, placas de desmielinización, gliosis, y patología axonal dentro del cerebro y médula espinal . Aunque los eventos causales que precipitan el padecimiento son desconocidos, líneas convergentes de evidencia sugieren que el padecimiento es causado por una alteración en la función inmune. Esta alteración permite que las células del sistema inmune ataquen la mielina, el recubrimiento aislante que rodea los axones localizados en el SNC (es decir, el cerebro y médula espinal) . Cuando se observan microscópicamente, las placas consisten de células inflamatorias, células astrogliales , edema, y fragmentos destruidos de mielina. Cuando la mielina se daña, los impulsos eléctricos no pueden viajar rápidamente a lo largo de las rutas de fibras nerviosas en el cerebro y médula espinal. La interrupción de la conductividad eléctrica da como resultado fatiga y alteraciones en la visión, fuerza, coordinación, equilibrio, sensibilidad, y la función de la vejiga e intestinos. Por consiguiente, los síntomas típicos incluyen uno o más de debilidad o parálisis en una o más extremidades, temblor en una o más extremidades, espasticidad muscular, atrofia muscular, movimiento disfuncional, entumecimiento o sensación anormal en cualquier área, hormigueo, dolor facial, dolor en las extremidades, pérdida de visión en uno o ambos ojos, visión doble, molestia en los ojos, movimientos oculares rápidos, incontrolables, coordinación reducida, pérdida de equilibrio, capacidad reducida para controlar movimientos pequeños o intrincados, anormalidades al caminar o trotar, espasmos musculares, mareo, vértigo, titubeo urinario, urgencia urinaria, frecuencia urinaria incrementada, incontinencia, memoria reducida, espontaneidad reducida, sentido común reducido, pérdida de la capacidad de pensar abstractamente, pérdida de la capacidad de generalizar, depresión, campo de atención reducido, pronunciación inarticulada, dificultad al hablar o en la comprensión del habla, fatiga, constipación, pérdida de la audición, y/o reflejo positivo de Babinski . Los síntomas recurren periódicamente, duran de días a meses, luego se reducen o desaparecen. Con cada recurrencia, los síntomas pueden variar o ser completamente diferentes cuando se afectan nuevas áreas. Los estudios de la historia natural de la MS sugieren que existen diferentes patrones de actividad del padecimiento. Algunos pacientes tienen ataques escasos, algunos tienen ataques frecuentes, y otros empeoran gradual pero constantemente sin experimentar ataques. Los pacientes que tienen ataques escasos y se incapacitan mínimamente diez años después de ser diagnosticados con MS, se dice que tienen MS benigna. Este grupo constituye aproximadamente sólo el 10-15% de la población total de pacientes con MS, aunque existe alguna evidencia que sugiere que este proceso puede ser más común de lo que se aprecia actualmente. Los pacientes que tienen ataques con recuperación total o parcial y que por otro lado están estables entre ataques, se define que tienen MS reincidente-remitente. Aproximadamente el 80-90% de los pacientes con MS inicialmente experimentan un proceso reincidente-remitente. De estos, aproximadamente el 50% tendrá dificultad al caminar 15 años después de la aparición y el 80% al final (después de aproximadamente 25 años) experimentará progresión gradual de discapacidad con o sin ataques. Los pacientes que primero experimentan exacerbaciones y después experimentan progresión gradual de discapacidad, tienen MS progresiva secundaria. Aproximadamente el 10-15% de los pacientes con MS no experimentan un ataque inicial. Aquellos pacientes que empeoran gradualmente después de la aparición del primer síntoma tienen MS progresiva primaria. Unos cuantos pacientes con MS progresiva primaria más adelante experimentarán una exacerbación. Estos pacientes tienen MS progresiva-reincidente . Aún no existe cura para la MS . Muchos pacientes están bien sin terapia alguna, especialmente dado que muchas medicaciones tienen serios efectos secundarios y algunas conllevan riesgos significativos. Sin embargo, hoy en día se han aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos tres formas de interferón beta (AVONEX® (interferón beta- la) , BETASERON® (interferón beta- Ib) , y REBIF® (interferón beta-la) ) , para el tratamiento de MS reincidente-remitente. Se ha mostrado que el interferón beta reduce el número de exacerbaciones y puede hacer más lenta la progresión de la discapacidad física. Cuando ocurren los ataques, los mismos tienden a ser más cortos y menos severos. La FDA también ha aprobado una forma sintética de copolímero I de proteína básica de mielina, COPAXONE® (acetato de glatiramer) , para el tratamiento de MS reincidente-remitente. El copolímero I tiene pocos efectos secundarios, y los estudios indican que el agente puede reducir la relación de reincidencia a casi un tercio. Un tratamiento inmunosupresor, NOVATRONE® (mitoxantrona) , también se aprueba por la FDA para el tratamiento de MS avanzada y crónica. 2.2 Funcionalidad de Células T en Diabetes y otros Desordenes Autoinmunes Se cree que la destrucción de las células ß en la diabetes, de mielina en la esclerosis múltiple, o de las células objetivo de otros desórdenes autoinmunes está mediada principalmente por los linfocitos T (CTLs - también conocidos como células T CD8+) que específicamente reconocen péptidos derivados de células objetivo, antigénicos. Los CTLs, así como otros tipos de células T, reconocen estos péptidos antigénicos a través de su receptor de células T específicas (TcR) . A diferencia de los anticuerpos que reconocen proteínas solubles completamente extrañas como antígeno, el TcR en cambio interactúa con pequeños antígenos peptídicos solamente en un complejo con proteínas de complejo de mayor histocompatibilidad (MHC) . La mayoría de las células del cuerpo expresan moléculas MHC de varias clases en su superficie y, dependiendo de la clase de MHC expresado, presentarán ya sea antígenos solubles, aquéllos dispersados dentro de los sistemas linfático y/o circulatorio, o fragmentos de sus proteínas citoplásmicas . Las moléculas MHC (llamadas antígenos leucocitarios humanos o HLA en humanos) y TcRs son extremadamente polimórficos , cada variación clonal reconoce y se enlaza a una sola secuencia peptídica, o conjunto de análogos peptídicos similares. A parte de las células específicas al sistema inmune, es decir, las células B y células T, las células del cuerpo expresan múltiples variantes de la molécula MHC, cada variante se enlaza a una diferente secuencia de péptidos. En contraste, durante la maduración, las células B y T pierden la capacidad de expresar múltiples variantes de MHC y TcR, respectivamente. Las células T maduras, por lo tanto, expresarán solamente una de las posibles variantes del TcR y por consiguiente reconocerán/enlazarán un solo complejo de MHC/antígeno .
El enlace de un TcR a un complejo de MHC/antígeno suscita una cascada de señal intracelular dentro de las células T, llamada activación, la cual da como resultado la proliferación clonal de las células T y las respuestas de las células T de clase específica. Por ejemplo, en los CTLs la respuesta a la activación también incluye la liberación de enzimas citotóxicas que dan como resultado la apoptosis/destrucción de la célula objetivo. 2.3 Modulación de la Activación de las Células T mediante Anticuerpos Monoclonales El descubrimiento de que los padecimientos autoinmunes son al menos parcialmente causados por la acción de células T aberrantes, ha llevado a la investigación de terapias que ya sea eliminen los clones de células T problemáticas (aquéllos que expresan TcRs contra los auto-antígenos o antígenos propios) o que selectivamente reduzcan la actividad/activación de las células T indeseadas. La activación de las células T debida a un enlace TcR, sin embargo, es un fenómeno inesperadamente complejo debido a la participación de una variedad de moléculas de superficie celular, expresadas en la población de células T de respuesta (Billadeau et al., 2002, J. Clin. Invest. 109:161-168; eiss, 1990, J. Clin. Invest . 86:1015-1022; Leo et al., 1987, PNAS 84:1374-1378; Weiss et al., 1984, PNAS 81:4169-4173; Hoffman et al., 1985, J.
Immunol . 135 : 5-8) . Las terapias objetivo dirigidas contra la activación general de las células T, fueron problemáticas en que el TcR está compuesto de un heterodímero enlazado a disulfuro, que contiene dos cadenas de glicoproteína de membrana integral, distribuidas clonalmente, a y ß, ó ? y d. La mayoría de la investigación en la modulación de la activación de las células T se hizo en conexión con una supresión inmune mejorada en los receptores de trasplante de órganos. Uno de los primeros métodos clínicamente exitosos para reducir selectivamente la activación de las células T fue el uso de anticuerpos monoclonales . La Patente Norteamericana No. 4,658,019, describe un nuevo hibridoma (designado OKT3 , Acceso ATCC No. CRL-8001) el cual produce un anticuerpo monoclonal murino contra un antígeno encontrado esencialmente en todas las células T periféricas, humanas, normales. El enlace del OKT3 a las células T in vivo produce una inmunosupresion reversible, pronunciada. Se encontró que el OKT3 reconoce un epitope en la subunidad e dentro del complejo CD3 humano (Salmerón et al., 1991, J. Immunol. 147:3047-3052; Transy et al., 1989, Eur. J. Immunol . 19:947-950; ver también, la Patente Norteamericana No. 4,658,019). El complejo CD3 (también conocido como T3) está comprendido de proteínas invariantes de bajo peso molecular, las cuales no se asocian covalentemente con el TcR (Samelson et al., 1985, Cell 43:223-231). Se cree que las estructuras de CD3 representan moléculas accesorio o complementarias que pueden ser los elementos transductores de señales de activación iniciadas en el enlace del TcR -ß a su ligando. El 0KT3 posee potentes propiedades de activación y supresión de las células T (Van Seventer, 1987, J. Immunol. 139:2545-2550; Weiss, 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:593-619). La reticulación mediada por el receptor Fe del mAb anti-CD3 unido al TcR, da como resultado la expresión y proliferación del marcador de activación de las células T (Weiss et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:593-619). De manera similar, la administración in vivo del OKT3 da como resultado tanto la activación de las células T como la supresión de respuestas inmunes (Ellenhorn et al., 1990, Transplantation 50:608-12; Chatenoud, 1990, Transplantation 49:697). La administración daría repetida de OKT3 da como resultado una inmunosupresión profunda, y proporciona un tratamiento efectivo del rechazo después de un trasplante renal (Thistlethwaite, 1984, Transplantation 38:695). El uso de mAbs terapéuticos, incluyendo, por ejemplo, el 0KT3 , se limita por los problemas de los efectos secundarios de la "primera dosis", que van desde síntomas parecidos a una gripa moderada hasta toxicidad severa. Se cree que los efectos secundarios de la primera dosis son causados por una producción de citocinas estimulada por la activación de las células T. Se ha mostrado que las propiedades de activación de los anticuerpos monoclonales Anti-CD3, son el resultado de una reticulación del TcR mediada por los anticuerpos unidos a las células T (a través de su dominio variable) y a las células que portan el FcyR a través de su dominio Fe) (Palacios et al., 1985, Eur. J. Immunol . 15:645-651; Ceuppens et al., 1985, J. Immunol. 134:1498-1502; Kan et al., 1986, Cell Immunol. 98: 181-185) . Por ejemplo, se encontró que el uso de OKT3 acciona la activación de las células T unidas al mAb y las células que portan el FcyR antes de lograr una supresión inmune, dando como resultado una liberación sistémica masiva de citocinas (Abramowicz, 1989, Transplantation 47:P606; Chatenoud, 1989, N. Eng. J. Med. 25: 1420-1421). Los efectos secundarios reportados de la terapia de 0KT3 incluyen síntomas parecidos a la gripa, insuficiencia respiratoria, síntomas neurológicos, y necrosis tubular aguda que pueden ir después de la primera y algunas veces la segunda inyección del mAb (Abramowicz, 1989, Transplantation 47:P606; Chatenoud, 1989, N. Eng. J. Med. 25:1420-1421; Toussaint, 1989, Transplantation 48:524; Thistlethwaite, 1988, Am. J. Kid. Dis. 11: 112; Goldman, 1990, Transplantation 50: 148). Los datos obtenidos usando modelos experimentales en chimpancés y ratones, han sugerido que evitando o neutralizando la activación celular inducida por mAbs anti-CD3 , se reduce la toxicidad de estos agentes (Parleviet, 1990, Transplantation 50:889; Rao, 1991, Transplantation 52:691; Alegre, 1990, Eur. J. Imraunol . 20:707; Alegre, 1990, Transplant Proc . 22: 1920.; Alegre, 1991, Transplantation. 52:674; Alegre, 1991, J. Immun. 146: 1184-1191; Ferran, 1990, Transplantation 50:642) . Resultados previos reportados en ratones que utilizan fragmentos F(ab')2 de 145-2C11, un CD3 anti-ratón de hámster que comparte muchas propiedades con el 0KT3, han sugerido que, en la ausencia del enlace FcyR y la activación celular, el mAbs anti-CD3 mantiene al menos algunas propiedades inmunosupresoras in vivo (Hirsch, 1991, Transplant Proc. 23:270; Hirsch, 1991, J. Immunol . 147:2088) . Además, la administración de anticuerpos anti-CD3 con enlace reducido al FcyR en pacientes humanos da como resultado en general solamente efectos secundarios leves y no los efectos severos de primera clase, asociados con la administración de 0KT3 (Herold et al., 2005, Diabetes 54:1763). 2.4 Anticuerpos Monoclonales Inmunosupresores que Exhiben Activación Reducida de Células T La Patente Norteamericana No. 6,491,916, Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2005/0064514 y Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2005/0037000 describe la modificación de las regiones Fe de inmunoglobulinas tal que las moléculas variantes exhiben enlace mejorado o reducido a varios receptores Fe en comparación con las inmunoglobulinas con dominios Fe de tipo natural. En particular las patentes/solicitudes describen modificaciones a las regiones Fe de los anticuerpos IgG tal que la afinidad para el FcyR se mejora selectivamente o se reduce. Al adaptar la afinidad para activar o suprimir los receptores Fe, la respuesta inmune específica suscitada por el mAb terapéutico puede ser controlada más selectivamente. Por ejemplo, se han identificado mutaciones en la porción CH2 de un IgG4 de OKT3 humanizado (P234A y L235A) que reducen significativamente el enlace del mAb al FCYRI y II humano y murino, y conducen a un fenotipo de activación marcadamente reducida in vitro (Alegre et al., 1992, 8th International Congress of Immunology 23-28; Alegre et al., 1994, Transplantation 57:1537-1543; Xu et al., 2000, Cell Immunol . 200:16-26). Lo que es más importante, este mAb variante conserva la capacidad de inducir la modulación e inmunosupresión del TcR (Xu et al., 2000, Cell Immunol. 200:16-26). Se ha encontrado que otras modificaciones al dominio Fe de anticuerpos anti-CD3, tales como mutaciones para volver aglicosilado al anticuerpo u otras mutaciones de los residuos del dominio Fe, para reducir el enlace a FcyR, reducen la toxicidad al mismo tiempo que conservan la actividad inmunosupresora (ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana 6,491,916; Patente Norteamericana 5,834,597 Keymeulen et al., 2005, N. Eng. J. Med. 325:2598, todas las cuales se incorporan como referencia en la presente en su totalidad) . 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de y mejoran los síntomas de los padecimientos inmunológicos mediados por las células T, particularmente los padecimientos autoinmunes, en sujetos diagnosticados con tales padecimientos (y/o en sujetos predispuestos a desarrollar tales padecimientos o desórdenes) , administrando a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un anticuerpo anti-CD3. En particular, los métodos de la invención proporcionan la administración de anticuerpos que enlazan específicamente la subunidad épsilon dentro del complejo CD3 humano. Por ejemplo, tales anticuerpos pueden ser o pueden derivarse de (por ejemplo, versiones humanizadas o quimerizadas de) uno de los anticuerpos Leu-4, 500A2, CLB-T3/3, M291, YTH 12.5 ó BMA030, o competir con uno de Leu-4, 500A2, CLB-T3/3, M291, YTH 12.5 ó BMA030 para enlazarse (por ejemplo, en un ELISA o ensayo de inmunoprecipitacion) . En una modalidad preferida, el anticuerpo tiene la especificidad de enlace del anticuerpo OKT3 monoclonal murino (ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 4,658,019 y 6,113,901, las cuales se incorporan como referencia en la presente en su totalidad) , por ejemplo, se enlaza al mismo epitope que OKT3 y/o compite para enlazarse (es decir, en un ELISA o ensayo de inmunoprecipitacion) con OKT3 , tal como una versión humanizada del anticuerpo OKT3 , por ejemplo, OKT3-7 (ver los anticuerpos descritos en la Patente Norteamericana No. 6,491,916, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) . En modalidades preferidas, el anticuerpo anti-CD3 de , la invención ha disminuido (tal como, pero no limitado a, menos del 50%, menos de 40%, menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5% ó menos de 1%, en comparación a enlazarse mediante un anticuerpo que tiene un dominio Fe de tipo natural, glicosilado) o, más preferiblemente, un enlace no detectable a uno o más de cualquier FcyR (por ejemplo, FcyRI, FcyRII ó FCYRIII) a través de su dominio Fe cuando se determina mediante los ensayos rutinarios en la técnica. Además o alternativamente, el anticuerpo anti-CD3 de la invención ha disminuido (tal como, pero no limitado a, menos de 50%, menos de 40%, menos de 30%, menos de 20%, menos de 10%, menos de 5% ó menos de 1%, en comparación a enlazarse mediante un anticuerpo que tiene un dominio Fe de tipo natural, glicosilado) o, más preferiblemente, sin enlace detectable a ningún receptor complementario, tal como, Clq, como se determina en ensayos utilizados rutinariamente. En modalidades particulares, el anticuerpo es aglicosilado . En otras modalidades, el anticuerpo carece de dominio Fe (por ejemplo, es un fragmento Fab, F(ab')2 ó anticuerpo de una sola cadena) . En otras modalidades, el anticuerpo tiene un dominio Fe que tiene una o más modificaciones de aminoácidos que reducen o anulan el enlace del dominio Fe a uno o más de un FCYR. En ciertas modalidades, el dominio Fe tiene una modificación de aminoácidos (es decir, inserción, sustitución, eliminación) en uno o más de los residuos 234, 235, 236 ó 237. En modalidades preferidas, el dominio Fe tiene una alanina en la posición 234 de la región Fe (CH2) y o una alanina en la posición 235 de la región Fe (CH2) , en particular tiene alanina en 234 y 235, tal como 0??3?1 (ala-ala) . En otras modalidades, el dominio Fe tiene un glutamato en la posición 235. La invención particularmente proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de y/o que mejoran los síntomas de padecimientos autoinmunes tales como Diabetes Tipo I, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis reumatoide, lupus (particularmente, cutáneo) , padecimiento de inflamación del colón (IBD) , padecimiento de Crohn, colitis ulcerativa, efectos del trasplante de órganos, padecimiento de injerto vs. huésped (GVHD) , etc. Particularmente, los métodos de la invención son ventajosos en sujetos con padecimiento en etapa temprana para hacer más lento o reducir el daño de la autoinmunidad y mantener un alto nivel de función y/o reducir la necesidad de otra terapia; por ejemplo, en el tratamiento o profilaxis de la diabetes Tipo I, los métodos de la invención pueden reducir la necesidad de administración de insulina exógena en el sujeto. Además, los métodos de la invención reducen ventajosamente la incidencia de o dan como resultado la no incidencia del síndrome de liberación de citocina previamente asociado con la administración de anticuerpos terapéuticos, y, en particular, anticuerpos anti-CD3. El síndrome de liberación de citocina se manifiesta, por ejemplo, por dolor de cabeza, nausea, vómito, fiebre, mialgias, artralgias, y estremecimiento y puede ser causado por niveles incrementados de suero, IL-2, IL-6, IL-10, TNFa, e IFNy. Los métodos también reducen la incidencia y severidad de otros efectos adversos, tales como, pero no limitados a, activación de EBV, inmunogenicidad (producción de anticuerpos anti-idiotipo, particularmente anticuerpos IgE anti-idiotipo) , linfopenia, trombocitopenia o neutropenia. En modalidades preferidas, los anticuerpos CD3 anti- humanos se administran a muy bajas dosificaciones o durante períodos más cortos de tiempo que los regímenes de dosificación previos. En particular, la invención contempla regímenes de dosificación en los cuales menos de 9,000 µg/m , y preferiblemente, menos de 8,000 µg/m , menos de 7,500 µg/m2 , menos de 7,000 /xg/m2 , ó menos de 6,000 µg/m2 de anticuerpo CD3 anti-humano, total, se administra en la duración de la dosificación, particularmente de ???3?1 (ala-ala) , o de otro anticuerpo CD3 anti -humano, tal como ChAglyCD3 (TRX4™) ó HUM291 (visilizumab; NUVION™) . En ciertas modalidades, los anticuerpos de la invención se administran al sujeto en necesidad del mismo utilizando un modo diferente a la administración intravenosa que proporciona el equivalente farmacológico a las cantidades anteriores de ???3?1 (ala-ala) cuando se administra intravenosamente. La invención además contempla métodos en los cuales se administra al paciente crónicamente dosis bajas del anticuerpo CD3 anti -humano y métodos en los cuales se administra al paciente una o más rondas del régimen de tratamiento de anticuerpo CD3 anti-humano aproximadamente 6 meses, 9 meses, 12 meses, 18 meses, 2 años, 3 años ó 5 años después del tratamiento inicial, opcionalmente dependiendo de los parámetros clínicos o se administra otra ronda de tratamiento con anticuerpo CD3 antihumano aproximadamente cada 6 meses, 9 meses, 12 meses, 18 meses, 2 años,. 3 años ó 5 años, opcionalmente dependiendo de los parámetros clínicos. La invención particularmente proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de o que mejoran los síntomas de padecimientos y desórdenes autoinmunes, por ejemplo, diabetes tipo 1, mediante la administración de anticuerpos CD3 anti-humanos que tienen toxicidad reducida; por ejemplo que tienen enlace reducido a FcyRs. Particularmente, los métodos de la invención son ventajosos en sujetos con padecimiento en etapa temprana con el fin de hacer más lento o reducir el daño de la autoinmunidad y mantener un alto nivel de función. En ciertas modalidades, los métodos de la invención también pueden reducir la necesidad de terapia adicional para el padecimiento o desorden autoinmune; por ejemplo, en el tratamiento o manejo de la diabetes Tipo I, los métodos de la invención pueden reducir o eliminar la necesidad de administración de insulina exógena en el sujeto. Además, los métodos de la invención reducen ventajosamente la incidencia de o dan como resultado la no incidencia del síndrome de liberación de citocina, previamente asociado con la administración de anticuerpos CD3 anti-humanos tales como 0KT3. El síndrome de liberación de citocina se manifiesta por ejemplo, por dolor de cabeza, nausea, vómito, fiebre, mialgias, artralgias y estremecimiento y puede ser causado por niveles incrementados en suero de, por ejemplo, IL-2, IL-6, IL-10, TNFOÍ, e IFNy. Los métodos también reducen la incidencia y severidad de otros efectos adversos, tales como, pero no limitados a, activación de EBV, inmunogenicidad (producción de anticuerpos anti-idiotipo, particularmente anticuerpos IgE anti-idiotipo) , linfopenia, trombocitopenia o neutropenia. En otras modalidades, la invención proporciona métodos para prevenir o retardar el inicio de un padecimiento o desorden autoinmune en un sujeto predispuesto a desarrollar dicho padecimiento o desorden, aunque el sujeto todavía tenga que experimentar síntomas de o ser diagnosticado con dicho padecimiento o desorden de acuerdo al criterio aceptado en la técnica (por ejemplo, en la diabetes Tipo I, un diagnóstico de acuerdo al criterio establecido por la Asociación Americana de Diabetes: ver, por ejemplo, Mayfield et al., et al., 2006, Am. Fam. Physician 58:1355-1362, incorporado en la presente como referencia en su totalidad) . En otras modalidades, la administración de un anticuerpo de la invención previene la aparición y/o desarrollo del desorden, previene la aparición de síntomas del desorden, y/o retrasa el diagnóstico positivo de dicho desorden por 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 10 meses, 12 meses, 15, meses, 18 meses, 21 meses, ó 24 meses en relación a un sujeto con parámetros clínicos similares que no recibe tratamiento. De acuerdo con la invención, el anticuerpo CD3 antihumano se administra para reducir efectos adversos, tales como la liberación de citocina asociada con la administración de anticuerpos, la activación de EBV (como se evidencia por ¡los padecimientos linfoproliferativos inducidos por EBV, ¡por ejemplo, mononucleosis) o linfopenia (definida como <1000 linfocitos/^L en suero) , asociada con la administración de anticuerpos CD3 anti -humanos, y también reduce el número! de dosis y duración de la administración. Cuando se utiliza eri la presente, "curso de tratamiento" o "ronda de tratamiento" significa la administración de anticuerpos CD3 anti-humanos cada día, cada tercer día o cada 3 ó 4 días durante un período de tiempo, por ejemplo 1 a 30 días. En modalidades particulares, la invención proporciona un régimen j de tratamiento de administración de una dosis del anticuerpo ¡CD3 anti -humano durante 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días ó 14 días. En modalidades preferidas, la administración se lleva a cabo en días consecutivos aunque puede llevarse a cabo en días alternados o en un programa que alterne un cierto número1 de días consecutivos en los cuales el anticuerpo CD3 anti -humano se administre con un cierto número de días consecutivos en los cuales no se administra el anticuerpo. En ciertas modalidades, la dosis administrada es la misma cada día del régimen. Sin embargo, en modalidades preferidas la dosis administrada asciende durante los primeros pocos días del régimen (por ejemplo, asciende durante de los primeros cuatro días del régimen) para reducir o eliminar la incidencia del síndrome de liberación de citocina. En modalidades específicas, la dosis administrada es de aproximadamente 5-50 ^g/kg/día, de manera preferible, 20-30 /g/kg/día, de manera más preferible aproximadamente 22-28 ^g/kg/día o aproximadamente 25-26 /zg/kg/día. En otras modalidades específicas, la dosis en el día 1 del régimen es de 1-3 /g/kg/día, de manera preferible aproximadamente de 1.6 O/kg/día y asciende a la dosis diaria el día 3, 4, 5, 6 ó 7. Por ejemplo, el día 1, se administra una dosis al sujeto de aproximadamente 1.6 ^g/kg/día, el día 2 aproximadamente 3.2 Mg/kg/día, el día 3 aproximadamente 6.5 µg/kg/día, el día 4 aproximadamente 13 ig/kg/día y en los días subsecuentes del régimen 26 µg/kg/día. En otro ejemplo de acuerdo con esta modalidad, el día 1, se puede administrar al sujeto una dosis de aproximadamente 1.42 /¿g/kg/día, el día 2 aproximadamente 5.7 g/kg/día, el día 3 aproximadamente 11 µg/kg/día, el día 4 aproximadamente 22.6 µg/kg/día y en los días subsecuentes del régimen 45.4 µg/kg/día. En modalidades específicas, la dosis administrada se basa en el área superficial. Por ejemplo la dosis administrada es de 5-1200 9/p?2/??3, preferiblemente, 51-826 /xg/m2/día. En ciertas modalidades, la dosis del día 1 del régimen es de 5-100 ^g/m2/día y asciende a la dosis diaria que es aproximadamente 2, 4, 5, 8, 10, 12, 15 ó 20 veces la dosis del primer día, por ejemplo una dosificación que se recita inmediatamente antes, al día 3, 4, 5, 6 ó 7. Para los primeros 2, 3, 4 ó 5 días, la dosis puede incrementar a 1.5 veces, 2 veces 3 veces o 4 veces en cada día subsecuente. Por ejemplo, el día 1, al sujeto se administra una dosis de aproximadamente 51 /g/m2/día, el día 2 aproximadamente 103 9/?t?2/??3, el día 3 aproximadamente 207 g/m2/día, el día 4 aproximadamente 413 ^g/m2/día y en los días subsecuentes del régimen (por ejemplo, días 5-14) 826 µg/m2/día. En otra modalidad, el día, se administra al sujeto una dosis de aproximadamente 227 µ /?2/??&, el día 2 aproximadamente 459 µg/m2/día, el día 3 y los días subsecuentes, aproximadamente 919 µg/m2/día. En otra modalidad, el día 1, se administra al sujeto una dosis de aproximadamente 284 /día, el día 2 aproximadamente 574 µ9/p?2/??3, el día 3 y los días subsecuentes, aproximadamente En modalidades específicas, para reducir la posibilidad de liberación de citocinas y otros efectos adversos, las primeras 1, 2, 3 ó 4 dosis o todas las dosis en el régimen se administran más lentamente, en relación a una inyección de bolos, por administración intravenosa. Por ejemplo, puede administrarse una dosis de 51 durante aproximadamente 5 minutos , aproximadamente 15 minutos , aproximadamente 30 minutos , aproximadamente 45 minutos , aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 4 horas , aproximadamente 6 horas , aproximadamente 8 horas, aproximadamente 10 horas , aproximadamente 12 horas, aproximadamente 14 horas , aproximadamente 16 horas, aproximadamente 18 horas , aproximadamente 20 horas, y aproximadamente 22 horas. En ciertas modalidades, la dosis se administra mediante infusión lenta durante un período de, por ejemplo, 20 a 24 horas. En modalidades específicas, la dosis se infunde mediante una bomba, preferiblemente incrementado la concentración de anticuerpo administrado conforme la infusión avanza. Alternativamente, la dosis diaria total puede dividirse en dos o más porciones iguales y administrarse como infusiones de bolos durante el día a intervalos de 6, 8, 10 ó 12 horas. Por ejemplo, puede administrarse una dosis de 13 xg/kg/día en cuatro dosis de 3-4 µ^/1^ a intervalos de 6 horas para reducir el nivel de liberación de citocina causada por la administración del anticuerpo. í_n otras modalidades, una fracción establecida de las dosis para el régimen de 51 µg/m2/día a 826 ug/m2/día, descrito anteriormente, se administra en dosis ascendentes. En ciertas modalidades, la fracción es de 1/10, 1/4, 1/3, 1/2, 2/3 ó 3/4 de las dosis diarias del (los) régimen(es) descrito (s) anteriormente. De acuerdo con esto, por ejemplo, cuando la fracción es de 1/10, las dosis diarias serán de 5.1 g/m2 el día 1, 10.3 ug/m2 el día 2, 20.7 ug/m2 el día 3, 41.3 µg/m2 el día 4 y 82.6 ug/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/4, las dosis serán de 12.75 g/m2 el día 1, 25.5 µg/m el día 2, 51 ug/m2 el día 3, 103 ug/m2 el día 4, y 207 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/3, las dosis serán de 17 µg/m2 el día 1, 34.3 µg/m2 el día 2, 69 µg/m2 el día 3, 137.6 µg/m2 el día 4, y 275.3 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/2, las dosis serán de 25.5 µg/m el día 1, 51 µg/m el día 2, 103 g/m2 el día 3, 207 µg/m2 el día 4, y 413 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 2/3, las dosis serán de 34 µg/m2 el día 1, 69 µg/m2 el día 2, 137.6 µg/m2 el día 3, 275.3 µg/m2 el día 4, y 550.1 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 3/4, las dosis serán de 38.3 µg/m2 el día 1, 77.3 µg/m2 el día 2, 155.3 µ9/??2 el día 3, 309.8 µ?/p?2 el día 4, y 620 µ9/?? los días 5 a 14. En otras modalidades, el régimen es idéntico a uno de los descritos anteriormente aunque sólo durante los días 1 a 4, días 1 a 5, ó días 1 a 6. Por ejemplo, en una modalidad particular, las dosis serán de 17 ^g/m2 el día 1, 34.3 tg/m2 el día 2, 69 g/m2 el día 3, 137.6 µg/m2 el día 4, y 275.3 ^g/m2 en los días 5 y 6. En otras modalidades, las dosis en el régimen se administran durante un cierto número de días consecutivos, seguido por un cierto número de días sin ninguna dosis administrada, seguido de nuevo por dosis administradas en un cierto número de días consecutivos y así sucesivamente hasta que, por ejemplo, 14 (ó, por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20) dosis se administran en total. Por ejemplo, las dosis del día 1, día 2, día 3 y día 4 de uno de los regímenes descritos anteriormente puede administrarse durante cuatro días consecutivos y luego tres días sin ninguna dosis y luego se administran las dosis del día 5, 6, 7, seguido por otros tres días sin dosis, y luego las dosis del día 9, 10, 11, 12, con tres días de descanso, y finalmente las dosis del día 13 y 14. En ciertas modalidades, el anticuerpo administrado de acuerdo a estos regímenes es el 0??3?1 (ala-ala) . En otras modalidades el anticuerpo no es el 0??3?1 (ala-ala) y se administra para lograr uno o más parámetros farmacocinéticos obtenidos por la administración del ???3?1 (ala-ala) , preferiblemente, administración intravenosa de ???3?1 (ala-ala) , tal como la titulación en suero del anticuerpo administrado en 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 2 semanas, 3 semanas ó 1 mes después del último día del régimen de dosificación (es decir, se administra para lograr una dosis "farmacológicamente equivalente"). En ciertas modalidades, el anticuerpo CD3 anti-humano se administra para lograr un cierto nivel de recubrimiento y modulación combinados de los complejos receptores de células T en las células T, cuando se determina por los métodos bien conocidos en la técnica, ver, por ejemplo, el Ejemplo 11 de la publicación de solicitud de patente norteamericana 2003/0108548, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. En modalidades específicas, el régimen de dosificación logra un recubrimiento y modulación combinados del receptor de células T de al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ó del 100% con, en modalidades específicas, poco o ningún anticuerpo CD3 anti-humano libre, detectable (por ejemplo, menos de 200 ng/mL del fármaco detectado en la sangre del paciente mediante métodos estándar conocidos en la técnica) . En modalidades específicas, el anticuerpo CD3 antihumano no se administra mediante dosis diarias durante un número de días, sino que más bien se administra mediante infusión de una manera ininterrumpida durante 4 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas ó 36 horas. La infusión puede ser constante o puede comenzarse a una dosificación más baja, por ejemplo, durante las primeras 1, 2, 3, 5, 6 u 8 horas de la infusión y luego incrementarse a una dosificación más alta después de esto. Durante el transcurso de la infusión, el paciente recibe una dosis igual a la cantidad administrada, por ejemplo, en los regímenes de 5 a 20 días como se establece anteriormente. Por ejemplo, una dosis de aproximadamente 150 /¿g/m2 , 200 µg/m , 250 g/m2 , 500 µg/m2 , 750 g/m2 , 1000 µg/m2 , 1500 ^g/m2 , 2000 µg/m2 , 3000 g/m2 , 4000 µg/m2 , 5000 µg/m2 , 6000 µg/m2 , 7000 µg/m2 , 8000 g/m2 , ó 9000 µg/m . En particular, la velocidad y duración de la infusión se designa para minimizar el nivel de anticuerpo CD3 anti -humano libre en el sujeto después de la administración. En ciertas modalidades, el nivel de anticuerpo CD3 anti-humano libre no deberá exceder 200 ng/ml de anticuerpo libre. Además, la infusión se designa para lograr un recubrimiento y modulación combinados del receptor de células T, de al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ó del 100%. En otras modalidades, el anticuerpo CD3 anti-humano, se administra crónicamente para tratar, manejar, mantener, prevenir, o hacer más lenta la progresión de o retardar la aparición del padecimiento o desorden autoinmune. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se administra una dosis baja del anticuerpo CD3 anti -humano una vez al mes, dos veces al mes, tres veces por mes, una vez a la semana o incluso más frecuentemente ya sea como una alternativa al régimen de dosificación de 6 a 14 días, discutido anteriormente o después de la administración de tal régimen para mejorar o mantener su efecto terapéutico. Tal dosis baja puede ser cualquiera de 1 µg/m^ a 100 µ / 2 , de manera preferible, aproximadamente de 5 µg/m2 , 10 -g/m , 15 µg/m , 20 µg/m2 , 25 µ / 2 , 30 µg/ 2 , 35 µg/m , 40 µg/m , 45 µ /m2 ó 50 µg/m2. En ciertas modalidades, el anticuerpo CD3 anti -humano se administra crónicamente subsecuente a la administración de un régimen de dosificación de 1 a 30 días como se describe anteriormente, por ejemplo, para mantener el efecto terapéutico del régimen. En otras modalidades, se puede re-dosificar al sujeto en algún momento subsecuente a la administración del régimen de dosificación del anticuerpo CD3 anti -humano, preferiblemente, en base a uno o más parámetros fisiológicos, aunque puede hacerse como algo normal . Tal redosificación puede administrarse y/o evaluarse la necesidad de tal redosificación 6 meses, 9 meses, 1 año, 15 meses, 18 meses, 2 años, 30 meses ó 3 años después de la administración de un régimen de dosificación y puede incluirse administrar un curso de tratamiento cada 6 meses, 9 meses, 1 año, 15 meses, 18 meses, 2 años, 30 meses ó 3 años.
En modalidades específicas, se administra a los sujetos una ronda subsecuente de tratamiento de anticuerpo CD3 antihumano, basada en una o una combinación de la relación de células CD4/CD8, conteo de células CD8 , inversión CD4/CD3, relación de células CD4/CD25, relación de células CD4/FoxP3, relación de células CD4/CD40, relación de células CD4/IL-10, y/o relación de células CD4/TGF- . Otros parámetros para determinar si se administra una ronda subsecuente de tratamiento, incluyen una aparición o empeoramiento de indicadores de diagnóstico para el padecimiento o desorden autoinmune que se describe en la presente y/o conocido en la técnica. Por ejemplo, con respecto a la diabetes Tipo I, una aparición o un incremento en los anticuerpos de las células anti-islotes, tales como GADAs, anticuerpos IA-2, anticuerpo ICA o anticuerpo anti-insulina o una aparición o incremento en los niveles de las células T específicas para los antígenos de las células de los islotes. Además los ejemplos con respecto a la diabetes Tipo I, incluyen dosis subsecuentes cuando el número de células ß o actividad o función de las células ß disminuye al 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90%, en comparación con el número o actividad o función de células ß durante la administración de la ronda precedente de tratamiento. La función de las células ß puede determinarse mediante cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, la respuesta del péptido C al MMTT, OGTT, IGTT, o sujeción de glucosa de fase dos, o la prueba de Liberación de Insulina de Primera Fase (FPIR) , como se describe en la presente o como se conoce en la técnica. Otros parámetros que pueden utilizarse para determinar si se redosifica durante el tratamiento o manejo de la diabetes Tipo I, incluyen los niveles de HA1 ó HAlc, la necesidad de administración de insulina exógena o incremento en la dosificación de insulina exógena a más de 0.2 U/kg/día, 0.5 U/kg/dia, 1 U/kg/día, 2 U/kg/día, 5 U/kg/día, ó 10 U/kg/día. En otras modalidades, las dosis adicionales pueden administrase en base a la aparición de o incremento en el número (tal como un incremento a, en promedio, 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15, ó 20), duración y/o severidad de episodios hipoglicémicos o de episodios de cetoacidosis en una base diaria, semanal o mensual. En modalidades preferidas, los anticuerpos CD3 antihumanos se administran parenteralmente, por ejemplo, intravenosamente, intramuscularmente o subcutáneamente, o de forma alternativa, se administran oralmente. Los anticuerpos CD3 anti -humanos también pueden administrase como una formulación de liberación sostenida. Adicionalmente , en ciertas modalidades, la invención proporciona métodos y regímenes para administrar anticuerpos CD3 anti-humanos que reducen la severidad y/o incidencia de efectos adversos tales como, pero no limitados a, liberación de citocinas, apoptosis, activación de EBV, reacción inmune contra el anticuerpo CD3 anti-humano, linfopenia, anemia, neutropenia, trombocitopenia o infección secundaria. En modalidades preferidas de la invención, con respecto a tratar, hacer más lenta la progresión de, retardar la aparición de o prevenir la diabetes tipo 1 o padecimiento, el sujeto ha mantenido al menos 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30% ó 20% de la función de células ß antes del comienzo del tratamiento y, en algunas modalidades, la función de las células ß mejora durante el pre-tratamiento a niveles de al menos 5%, 10%, 20%, 30% ó 40%. En ciertas modalidades, la predisposición al desarrollo de diabetes Tipo I, se manifiesta como un nivel de glucosa con problemas de ayuno, es decir, al menos una determinación de un nivel de glucosa de 100-125 mg/dL después del ayuno (ocho horas sin alimento) , o es una tolerancia deteriorada a la glucosa en respuesta a una prueba oral de tolerancia a la glucosa de 75 gramos (OGTT) , es decir, al menos una determinación de un nivel de glucosa de 2 horas de 140-199 mg/dL en respuesta a una OGTT 75. En otras modalidades, los sujetos son positivos para uno o más auto-anticuerpos reactivos con los antígenos de las células de los islotes, tales como, los anticuerpos GAD, tales como GAD 65 y/o GAD 67, IA-2 o anticuerpos anti-insulina . En otras modalidades, la predisposición a desarrollar diabetes tipo 1 es tener un pariente en primer o segundo grado quien es un diabético tipo 1 diagnosticado. En ciertas modalidades, la predisposición es el diagnóstico positivo en el paciente o en un pariente en primer o segundo grado de acuerdo al criterio aceptado de la técnica de al menos algún otro desorden autoinmune que incluye, pero no está limitado a, padecimiento de tiroides, diabetes tipo 1, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, adenopatía endocrina múltiple, y enfermedad celiaca. En algunas modalidades, el desorden autoinmune es un padecimiento autoinmune relacionado con MHC DR3- y/o DR4. Con respecto al tratamiento de la diabetes tipo 1 en un paciente diagnosticado, y la prevención/retraso de síntomas de la misma en un individuo predispuesto, se administra el anticuerpo CD3 anti -humano con toxicidad reducida para lograr, o mantener un nivel de hemoglobina glicosilada (HA1 ó HAlc) menor de 8%, menor de 7.5%, menor de 7%, menor de 6.5%, menor de 6%, menor de 5.5% ó 5% o menor. Al inicio del tratamiento, los pacientes preferiblemente, tienen un nivel de HA1 ó HAlc menor de 8%, menor de 7.5%, menor de 7%, menor de 6.5%, menor de 6%, o, más preferiblemente, de 4%-6% (preferiblemente, medido en la ausencia de otro tratamiento para diabetes, tal como la administración de insulina exógena) .
En ciertas modalidades, se administra una o más moléculas de enlace CD3 . (por ejemplo, uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos) para prevenir una reducción de la masa de células ß asociada con la diabetes autoinmune. En algunas modalidades, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo con la invención, el nivel de masa de células ß del paciente, disminuye a menos de 1%, menos de 5%, menos de 10%, menos de 20%, menos de 30%, menos de 40%, menos de 50%, menos de 60%, o menos de 70% de los niveles de pretratamiento de al menos 3 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 1 año, al menos 18 meses, al menos 2 años, al menos 3 años, al menos 5 años, al menos 7 años o al menos 10 años después del tratamiento inicial. En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención, el nivel de masa de células ß del paciente, se mantiene al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, al menos 50%, al menos 40%, o al menos 30% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 30 meses, al menos 3 años, al menos 5 años, o al menos 10 años después de la primera ronda de tratamiento. En otra modalidad de la invención, con respecto al tratamiento de diabetes tipo 1, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos 50% de los niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento o después de la primera ronda de tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml o menor de 200 células/ml en el mismo período de tiempo. En otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene a al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos a 50% de los niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de plaquetas del paciente no es menor a 100,000,000 plaquetas/ml , menor a 75,000,000 plaquetas/ml, menor a 50,000,000 plaquetas/ml, menor a 25,000,000 plaquetas/ml, menor a 1,000,000 plaquetas/ml, menor a 750,000 plaquetas/ml, menor a 500,000 plaquetas/ml, menor a 250,000 plaquétas/ml , menor a 150,000 plaquetas/ml o menor a 100,000 plaquetas/ml. La administración de los anticuerpos anti-CD3 previene el daño a las células de los islotes, retardando así el inicio del padecimiento o, una vez que el padecimiento se encuentra diagnocticable , progresión del padecimiento, reduciendo y/o retardando la necesidad de administración de insulina. Además, la invención proporciona métodos de tratamiento tal que una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo anti-CD3 (preferiblemente, sin ningún tratamiento que intervenga con los anticuerpos anti-CD3) , da como resultado un nivel de HA1 ó HAlc que es 7% o menor, 6.5% o menor, 6% o menor, 5.5% o menor, o 5% o menor 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o de la primera ronda de tratamiento. Específicamente, en tales métodos de la invención una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo anti-CD3 (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , disminuye el nivel promedio de HAl ó HAlc en el paciente a aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25%, aproximadamente 30%, aproximadamente 35%, aproximadamente 40%, aproximadamente 45%, aproximadamente 50%, aproximadamente 55%, aproximadamente 60%, aproximadamente 65% o aproximadamente 70% en comparación con los niveles de pre-tratamiento a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa del tratamiento o primera ronda de tratamiento. Además, después del tratamiento con un anticuerpo CD3 de acuerdo a la invención en una sola ronda de tratamiento o una ronda de tratamiento repetida cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti -humanos) , el nivel promedio de HAl ó HAlc en el paciente sólo incrementa a aproximadamente 0.5%, aproximadamente 1%, aproximadamente 2.5%, aproximadamente 5%, aproximadamente 10%, aproximadamente 15%, aproximadamente 20%, aproximadamente 25%, aproximadamente 30%, aproximadamente 35%, aproximadamente 40%, aproximadamente 45%, ó aproximadamente 50% en comparación con los niveles de pre-tratamiento a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o la primera ronda de tratamiento. En otras modalidades, después de una sola ronda de tratamiento o rondas de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 antihumanos) , el nivel promedio de HA1 ó HAlc en el paciente es mayor a aproximadamente 10%, aproximadamente 20%, aproximadamente 30%, aproximadamente 40%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70% o mayor de aproximadamente 100% menor que los niveles en un paciente que inició un tratamiento convencional con parámetros clínicos similares y al que se administró tratamiento convencional después la misma cantidad de tiempo, los cuales niveles se determinaron a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses, después de la ronda previa de tratamiento o la primera ronda de tratamiento. En otra modalidad, el anticuerpo CD3 anti-humano se administra para lograr, o mantener la respuesta del péptido C en un sujeto quien se ha diagnosticado con diabetes autoinmune, o que tiene una predisposición a la misma, cuando se determina mediante una prueba de tolerancia a alimentos mezclados (MMTT) , prueba de tolerancia a glucosa oral (OGTT) , prueba de tolerancia intravenosa (IGTT) o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases. En modalidades preferidas, los pacientes tienen una respuesta del péptido C al MMTT, OGTT, IGTT, o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases (preferiblemente MMTT) que da como resultado un área bajo la curva (AUC) de al menos 80 pmol/ml/240 min. , preferiblemente, al menos 90 pmol/ml/240 min., más preferiblemente al menos 100 pmol/ml/240 min., o aún al menos 110 pmol/ml/240 min. Además, la invención proporciona métodos de tratamiento tales que después de una sola ronda de tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , el nivel de respuesta del péptido C en el paciente es de al menos 99%, al menos 98%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 65% ó al menos 60% de la respuesta de pre-tratamiento cuando se determina a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o la primera ronda de tratamiento. Específicamente, en tales métodos de la invención, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, ó cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , el nivel promedio de respuesta de péptido C a un MMTT, OGTT, IGTT, o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases en el paciente, disminuye a menos de 1%, menos de 5%, menos de 10%, menos de 20%, menos de 30%, menos de 40%, menos de 50% de los niveles de pre-tratamiento cuando se determina a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o la primera ronda de tratamiento. Además, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, ó cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , el nivel promedio de respuesta del péptido C a un MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases en el paciente es al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 70%, ó 100% mayor que los niveles en un paciente que comenzó una terapia convencional para diabetes con parámetros clínicos similares y al cual se administró terapia convencional para diabetes durante el período de 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses ó 18 meses o quien no recibe ninguna terapia, dicha respuesta de péptido se determina a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo.
En modalidades específicas, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses, con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento con anticuerpos CD3 anti -humanos) , los pacientes diagnosticados con diabetes autoinmune, o que tienen una predisposición a la misma, tienen una respuesta de péptido C al M TT, OGTT, IGTT, o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases (preferiblemente, MMTT) que da como resultado una AUC de al menos 40 pmol/ml/240 min. , 50 pmol/ml/240 min, 60 pmol/ml/240 min, 70 pmol/ml/240 min, 80 pmol/ml/240 min. , preferiblemente, al menos 90 pmol/ml/240 min. , más preferiblemente al menos 100 pmol/ml/240 min., o aún al menos 110 pmol/ml/240 min, dicha respuesta se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o después de la ronda previa de tratamiento. La determinación de la respuesta del péptido C es una medida de la función de las células ß que es conocida para un experto en la técnica. En otras modalidades, la función de las células ß o función de las células ß residuales se determina mediante Liberación de Insulina de Primera Fase (FPIR) . En modalidades preferidas, los pacientes antes del tratamiento con anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, tienen una FPIR de al menos 300 pmol/1, al menos 350 pmol/1, al menos 400 pmol/1, al menos 450 pmol/1, al menos 500 pmol/1, preferiblemente, al menos 550 pmol/1, más preferiblemente al menos 600 pmol/1, ó aún al menos 700 pmol/1. Además, la invención proporciona métodos de tratamiento tales que después de una sola ronda de tratamiento o una ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con un anticuerpo CD3 antihumano) , la FPIR es de al menos 99%, al menos 98%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 65%, o al menos 60% de la respuesta de pre-tratamiento, dicha FPIR se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo o tratamiento inicial. Específicamente, en tales métodos de la invención, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , la FPIR promedio en el paciente disminuye a menos de 1%, menos de 5%, menos de 10%, menos de 20%, menos de 30%, menos de 40%, menos de 50% de los niveles de pre-tratamiento, dicha FPIR se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Además, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, ó cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti -humanos) , la FPIR promedio en los pacientes es al menos 10%, 20%, 30%, 40%, 70% ó 100% mayor a los niveles en un paciente que comenzó una terapia convencional para diabetes con parámetros clínicos similares y al cual se administró terapia convencional para diabetes durante el período de 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses ó 18 meses, dicha FPIR se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo o ronda inicial de tratamiento. En modalidades específicas, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , los pacientes tienen una FPIR de al menos 300 pmol/ml, al menos 400 pmol/ml, preferiblemente, al menos 500 pmol/ml, más preferiblemente al menos 600 pmol/ml, ó aún al menos 700 pmol/ml, dicha FPIR se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o ronda inicial de tratamiento. En otras modalidades específicas de la invención con respecto al tratamiento de la diabetes tipo 1, al comienzo del tratamiento, el sujeto no requiere la administración de insulina o requiere menos de 1 U/kg/día, preferiblemente menos de 0.5 U/kg/día, aún más preferiblemente menos de 0.25 U/kg/día, y aún más preferiblemente menos de 0.1 U/kg/día. En ciertas modalidades, un solo tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , previene el requerimiento de administración de insulina o retrasa la necesidad de administrar insulina por al menos 6 meses, al menos 1 año, al menos 18 meses, al menos 2 años, al menos 30 meses, al menos 3 años, al menos 5 años, al menos 7 años o al menos 10 años (en promedio para una población de pacientes con diabetes tipo 1) . En otras modalidades, un solo tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti -humanos) , da como resultado ya sea una disminución (por ejemplo, del 10%, 20%, 30%, 40% ó 50%) en la cantidad de insulina requerida en promedio por día, o ningún cambio en la cantidad promedio de insulina requerida por día, o un incremento menor del 1%, menor del 5%, menor del 10%, menor del 20% o menor del 30% de insulina administrada, en promedio, por día en comparación con la dosis promedio del pre-tratamiento de insulina por día. En ciertas modalidades, una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 antihumanos) , da como resultado una dosis diaria promedio de insulina que es 10%, 20%, 50%, 75%, 90%, 99% menor a la dosis diaria promedio de insulina requerida para un paciente similarmente situado (es decir, parámetros químicos similares al comienzo del período mensual o anual) que no ha recibido el tratamiento de anticuerpo CD3 anti-humano. En otras modalidades, con respecto al tratamiento de un sujeto diagnosticado con diabetes autoinmune, o que tiene una predisposición a la misma, los métodos de la invención dan como resultado una reducción en los episodios hipoglicémicos de l, 2, 3, 4, 5, 6 ó más episodios en un período de un día, dos días, 5 días, 10 días ó 15 días, en comparación con pacientes similarmente situados que no han sido administrados con el anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a la invención. En modalidades específicas, el sujeto ha recibido células de islotes trasplantadas y se la administró una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva del anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención. En una modalidad específica, el sujeto que ha recibido células de islotes trasplantadas es un adulto. En otras modalidades específicas, el sujeto que ha recibido las células de islotes trasplantadas es menor de 21 años de edad o es menor de 18 años de edad. Con respecto al tratamiento de esclerosis múltiple, se administra el anticuerpo anti-CD3 para lograr o mantener una puntuación de discapacidad de acuerdo a la Escala de Discapacidad Ampliada Kurtzke (EDSS) de 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, ó 9.0. Además, la invención proporciona métodos tales que después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años o cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti -humanos) , la puntuación EDSS es la misma, no más de un medio paso, no más de un paso, no más de un y medio pasos, no más de dos pasos, no más de dos y medio pasos, no más de tres pasos, no más de tres y medio pasos, no más de cuatro pasos, no más de cuatro y medio pasos, no más de cinco pasos, no más de cinco y medio pasos, no más de seis pasos, no más de seis y medio pasos, no más de siete pasos, no más de siete y medio pasos, no más de ocho pasos, o no más de ocho y medio pasos mayor que la puntuación EDSS del pretratamiento, dicha puntuación se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Específicamente, en tales métodos de la invención, después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años o cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti -humanos) , la puntuación EDSS promedio del paciente incrementa no más de un medio paso, un paso, uno y medio pasos, dos pasos, dos y medio pasos, tres pasos, tres y medio pasos, cuatro pasos, cuatro y medio pasos, cinco pasos, cinco y medio pasos, seis pasos, seis y medio pasos, siete pasos, siete y medio pasos, ocho pasos, u ocho y medio pasos en relación a la puntuación del pre-tratamiento, dicha puntuación se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Además, después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años o cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , la puntuación EDSS promedio en el paciente es de al menos medio paso, un paso, uno y medio pasos, dos pasos, dos y medio pasos, tres pasos, tres y medio pasos, cuatro pasos, cuatro y medio pasos, cinco pasos, cinco y medio pasos, seis pasos, seis y medio pasos, siete pasos, siete y medio pasos, ocho pasos, u ocho y medio menor que la puntuación en un paciente que comenzó una terapia convencional para esclerosis múltiple con parámetros clínicos similares y al que se administró terapia convencional para esclerosis múltiple durante el período de 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, 2 años, 2.5 años, ó 3 años, dicha puntuación se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. En modalidades específicas, 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, 2 años, 2.5 años ó 3 años después del tratamiento (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , los pacientes tienen una puntuación EDSS de al menos 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, ó 9.0. En modalidades específicas de la invención, los pacientes diagnosticados con esclerosis múltiple (por ejemplo, de acuerdo al criterio McDonald) , y antes de la administración del anticuerpo anti-CD3 de la invención, tienen una puntuación EDSS de al menos 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 ó 9.5. En otras modalidades con respecto al tratamiento de esclerosis múltiple, el anticuerpo anti-CD3 se administra para lograr una reducción en la frecuencia, duración y/o severidad de ataques de MS en relación al mismo paciente antes de la terapia. Además, la invención proporciona métodos de tratamiento tales que después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años ó cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , la frecuencia, duración y/o severidad de los ataques de MS se reducen al 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90% en relación a los niveles de pretratamiento, dichas determinaciones se hacen 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Específicamente, en tales métodos de la invención, después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años ó cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , la frecuencia, severidad y/o duración de los ataques de MS del paciente se incrementan a no más del 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90% en relación a las condiciones de pretratamiento, dichas determinaciones se hacen a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Además, después de un solo tratamiento o tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años ó cada 3 años con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , la frecuencia, severidad y/o duración promedio de los ataques de MS se reducen en relación a un paciente que comenzó una terapia convencional para esclerosis múltiple con parámetros clínicos similares y al que se administró terapia convencional para esclerosis múltiple durante el período de 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, cada 2 años, cada 2.5 años ó cada 3 años, dicha determinación se hace a 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. En otras modalidades con respecto al tratamiento de psoriasis, el anticuerpo anti-CD3 se administra para lograr una reducción en la puntuación del Área de Psoriasis e índice de Severidad (PASI) del sujeto de al menos 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% en relación a las condiciones de pretratamiento, dichas determinaciones se hacen 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. Alternativamente, los métodos de la invención mejoran la puntuación de evaluación global de un sujeto al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95% en relación a las condiciones de pretratamiento, dichas determinaciones se hacen 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. En otras modalidades con respecto al tratamiento de artritis reumatoide, el anticuerpo anti-CD3 se administra para lograr una mejora en la condición del sujeto que se evalúa mediante cualquier escala de severidad de artritis, conocida en la técnica (por ejemplo, escala de severidad de artritis reumatoide (RASS) ) de al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95, ó al menos 100% en relación a las condiciones de pretratamiento, dichas determinaciones de hacen 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. En ciertas modalidades, el diagnóstico de un desorden autoinmune o manifestación de una predisposición de un desorden autoinmune se basa en la detección de linfocitos T citotóxicos ("CTLs") que reconocen antígenos específicos del donador (es decir, CTLs auto-reactivos) en la sangre periférica del sujeto y/o tejido objetivo del desorden inmune. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-CD3 de la invención se administra para lograr una reducción de al menos 10%, al menos 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% en número absoluto, o proporción, de los CTLs auto-reactivos del sujeto, como se determina mediante un ensayo de inmunomanchado (por ejemplo, ELISPOT) en relación a la condición de pretratamiento, dichas determinaciones se hacen 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después del tratamiento previo. En modalidades preferidas, el paciente es menor de 21 años de edad, 18 años de edad, menor de 15 años de edad, menor de 12 años de edad, menor de 9 años de edad, o menor de 5 años de edad o de infante a 3 años de edad, de 2 a 5 años edad, de 5 a 9 años edad, de 9 a 12 años edad, de 12 a 20 años edad. En otras modalidades, el paciente es un adulto. La invención también proporciona métodos de terapia de combinación. Los métodos de la invención se pueden llevar a cabo en combinación con cualquier tratamiento estándar para la indicación particular, tales como tratamientos estándar inmunosupresores y/o anti-inflamatorios, administrados para el tratamiento o mejora de padecimientos autoinmunes. Por ejemplo, con respecto al tratamiento de la diabetes Tipo 1, la terapia de anticuerpos CD3 anti-humanos de la invención puede administrarse junto con otras terapias para la diabetes, tales como, pero no limitadas a, la administración de insulina, exenatida, pramlintida o una combinación de las mismas. Con respecto al tratamiento de esclerosis múltiple, la terapia de anticuerpos CD3 anti-humanos de la invención puede administrarse con otras terapias conocidas en la técnica para el tratamiento de esclerosis múltiple, tales como, pero no limitadas, administración de interferón beta (por ejemplo, AVONEX®, BETASERON®, REBIF®) , inmunosupresor (por ejemplo, mitoxantrona) , copolímero 1 de la proteína básica de mielina (por ejemplo, COPAXONE®) , o una combinación de los mismos. Los anticuerpos CD3 de la invención además pueden administrarse con otras terapias tales como anticuerpos anti-IL-2, antagonistas de citocina, y terapias de esteroides (por ejemplo, pero no limitadas a, glucocorticoides, dexametasona, cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona , triamcinolona, azulfidina, etc.), anti-inflamatorios no esteroidales (NSAIDS) , tales como, pero no limitados a aspirina, ibuprofeno, diclofenaco, etodolaco, fenoprofeno, indometacina, cetoloraco, oxaprozin, nabumetona, sulindac, tolmentin, naproxeno, o cetoprofeno, inmunosupresores, tales como, metotrexato o ciclosporina, e inhibidores de TNF-OÍ, tales como, pero no limitados a, etanercept e infliximab. En ciertas modalidades de la invención, los sujetos que se han vuelto resistentes a tratamientos convencionales se tratan utilizando los métodos de la invención. En ciertas modalidades, el anticuerpo CD3 anti-humano se administra en combinación con uno o más antígenos de células de los islotes, tales como GAD, IA-2 u otros antígenos los cuales se unen mediante autoantígenos encontrados en pacientes con diabetes tipo 1. La invención, en otras modalidades, proporciona métodos para producir anticuerpos CD3 anti -humanos, particularmente anticuerpo derivados de 0KT3 , tales como, pero no limitados a, 0??3?1 (ala-ala) humanizado, en células de CHO. En modalidades particulares, la invención proporciona métodos para producir anticuerpos CD3 anti -humanos que comprenden (a) cultivar células de CHO que se han transfectado con el vector de expresión pMGX1303, ó progenie del mismo, en un medio bajo condiciones adecuadas para la expresión de dicho anticuerpo CD3 anti-humano; y (b) recuperar dicho anticuerpo CD3 antihumano de dicho medio. ?..1 TERMINOLOGÍA Cuando se usa en la presente, el término "alrededor de" o "aproximadamente", cuando se utiliza en conjunción con un número, se refiere a cualquier número dentro de, 1, 5 ó 10% del número de referencia o dentro del error experimental típico de los métodos utilizados para la medición. Cuando se utiliza en la presente, el término "análogo" en el contexto de los polipéptidos, se refiere a un polipéptido que posee una función similar o idéntica a un segundo polipéptido pero que no necesariamente comprende una secuencia de aminoácidos similar o idéntica del segundo polipéptido, o posee una estructura similar o idéntica del segundo polipéptido. Un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos similar se refiere a un segundo polipéptido que satisface al menos uno de los siguientes: (a) un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% ó al menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un segundo polipéptido; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que se hibridiza bajo condiciones severas a una secuencia de nucleótidos que codifica un segundo polipéptido de al menos 5 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 10 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 15 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 20 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 25 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 40 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 50 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 60 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 70 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 80 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 90 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 100 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 125 residuos de aminoácidos contiguos, o al menos 150 residuos de aminoácidos contiguos; y (c) un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que es al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% ó al menos 99% idéntica a la secuencia de nucleótidos que codifica un segundo polipéptido. Un polipéptido con estructura similar a un segundo polipéptido se refiere a polipéptido que tiene una estructura secundaria, terciaria o cuaternaria similar al segundo polipéptido. La estructura de un polipéptido se puede determinar mediante métodos conocidos para aquellos expertos en la técnica, que incluyen pero no están limitados a, secuenciación de péptidos, cristalografía de rayos X, resonancia magnética nuclear, dicroísmo circular, y microscopía cristalográfica de electrones. Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos o de dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean para propósitos de comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir espacios en la secuencia de una primera secuencia de aminoácidos o de ácido 'nucleico para una alineación óptima con una segunda secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico) . Los residuos de aminoácidos o nucleótidos en las correspondientes posiciones de aminoácidos o posiciones de nucleótidos se comparan entonces. Cuando se ocupa una posición en la primera secuencia por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la correspondiente posición en la segunda secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, % de identidad = número de posiciones traslapadas idénticas/número total de posiciones x 100%) . En una modalidad, las dos secuencias son de la misma longitud. La determinación de porcentaje de identidad entre dos secuencias también puede lograrse utilizando un algoritmo matemático. Un ejemplo no limitativo, preferido, de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias es el algoritmo de Karlin y Altschul, 1990, Proc . Nati. Acad. Sci . U.S.A. 87:2264-2268, modificado como en Karlin y Altschul, 1993, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5877. Tal algoritmo se incorpora en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol . 215:403. Las búsquedas nucleotidos en BLAST se pueden realizar con e] ajuste de parámetros del programa de nucleotidos NBLAST, por ejemplo, para puntuación (score)=100, longitud de palabra (wordlenght ) =12 para obtener secuencias de nucleotidos homologas a una molécula de ácido nucleico de la presente invención. Se pueden realizar búsquedas de proteínas en BLAST con el ajuste de parámetros del programa XBLAST, por ejemplo, a puntuación-50 , longitud de palabra=3 para obtener secuencias de aminoácidos homologas a una molécula de proteína de la presente invención. Para obtener alineaciones espaciadas o con espacios para propósitos de comparación, se puede utilizar Gapped BLAST que se describe en Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Alternativamente, se puede utilizar PSI -BLAST para realizar una búsqueda reiterada la cual detecte relaciones distantes entre moléculas {Id.). Al utilizar los programas BLAST, Gapped BLAST, y PSI-Blast, se pueden utilizar los parámetros predeterminados de los respectivos programas (por ejemplo, de XBLAST y NBLAST) (ver, por ejemplo, el sitio web NCBI) . Otro ejemplo preferido, no limitativo, de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de secuencias es el algoritmo de Myers y Miller, 1988, CABIOS 4:11-17. Tal algoritmo se incorpora en el programa ALIGN (versión 2.0) que es parte del paquete de software para alineación de secuencias GCG. Al utilizar el programa ALIGN para comparar secuencias de aminoácidos, se puede utilizar una tabla de residuos de peso PAM120, una penalidad de longitud de espacios de 12, y una penalidad de espacios de 4. El porcentaje de identidad entre dos secuencias se puede determinar usando técnicas similares a las descritas anteriormente, con o sin dejar espacios. Calculando el porcentaje de identidad, típicamente se cuantifican sólo coincidencias exactas. Cuando se utiliza en la presente, el término "análogo" en el contexto de un análogo no proteínico, se refiere a una segunda molécula orgánica o inorgánica la cual posee una función similar o idéntica a una primera molécula orgánica o inorgánica y que es estructuralmente similar a la primera molécula orgánica o inorgánica. Cuando se utilizan en la presente, los términos "antagonista"" y "antagonistas" se refieren a cualquier proteína, polipéptido, péptido, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, molécula grande, o molécula pequeña (menor de 10 kD) que bloquea, inhibida, reduce o neutraliza la función, actividad y/o expresión de otra molécula. En varias modalidades, un antagonista reduce la función, actividad y/o expresión de otra molécula al menos al 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 99% en relación a un control tal como solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . Cuando se utilizan en la presente, los términos "anticuerpo" y "anticuerpos" se refieren a anticuerpos monoclonales , anticuerpos multiespecíficos , anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, Fvs de una sola cadena (scFv) , anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), Fvs enlazados a disulfuro (sdFv) , y anticuerpos anti-idiotípicos (anti-Id) (incluyendo, or ejemplo, anticuerpos anti-Id para los anticuerpos de la invención) , y fragmentos que se enlazan a epitopes de cualquiera de los anteriores. En particular, los anticuerpos incluyen moléculas de inmunoglobulina y fragmentos inmunológicamente activos de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de enlace de antígeno. Las moléculas de inmunoglobulina pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY) , clase (por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) o subclase. Cuando se utiliza en la presente, el término "péptido C" se refiere a un péptido de 31 aminoácidos escindido de proinsulina cuando el mismo se convierte en insulina. La proinsulina consiste de una cadena A, un péptido conector (péptido C) , y una cadena B. Después de que la proinsulina se escinde, el péptido C permanece en los gránulos secretorios de las células beta en el páncreas con insulina y se co-secreta con insulina en respuesta a la estimulación de glucosa. El péptido C por consiguiente se libera del páncreas en cantidades equimolares con insulina y puede utilizarse como un marcador de producción de insulina endógena. Cuando se utiliza en la presente, el término "derivado" en el contexto de los polipéptidos se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos la cual se ha alterado mediante la introducción de sustituciones, eliminaciones, o adiciones de residuos de aminoácidos. El término "derivado" cuando se utiliza en la presente también se refiere a un polipéptido que se ha modificado, es decir, mediante la adhesión covalente de cualquier tipo de molécula al polipéptido. Por ejemplo, pero no a manera de limitación, un anticuerpo puede modificarse, por ejemplo, mediante glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación mediante grupos de protección/bloqueo conocidos, escisión proteolítica, enlace a un ligando celular u otra proteína, etc. Un polipéptido derivado puede producirse mediante modificaciones químicas utilizando técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica, que incluyen, pero no están limitadas a escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc. Además, un polipéptido derivado puede contener uno o más aminoácidos no clásicos. Un derivado de polipéptido posee una función similar o idéntica a la del polipéptido del cual se derivó el mismo . Cuando se utilizan en la presente, los términos "desorden" y "padecimiento" se usan intercambiablemente para referirse a una condición en un sujeto. En particular, el término "padecimiento autoinmune" se usa intercambiablemente con el término "desorden autoinmune" para referirse a una condición en un sujeto caracterizada por daño celular, de tejido y/u órganos causado por una reacción inmunológica del sujeto en sus propias células, tejidos y/u órganos. Cuando se utiliza en la presente, el término "epitopes" se refiere a fragmentos de un polipéptido o proteína que tienen actividad antigénica o inmunogénica en un animal, preferiblemente en un mamífero, y más preferiblemente en un humano. Un epitope que tiene actividad inmunogénica es un fragmento de un polipéptido o proteína que suscita una respuesta de anticuerpos en un animal. Un epitope que tiene actividad antigénica es un fragmento de un polipéptido o proteína al cual un anticuerpo se enlaza inmunoespecíficamente cuando se determina mediante cualquier método bien conocido para un experto en la técnica, por ejemplo mediante inmunoensayos . Los epitopes antigénicos no necesitan ser obligatoriamente inmunogénicos . Cuando se utiliza en la presente, el término "región Fe" se utiliza para definir una región terminal C de una cadena pesada de IgG. Aunque las delimitaciones pueden variar ligeramente, se define que la región Fe de cadena pesada de IgG humana, se estira o extiende desde Cys226 hasta el carboxi terminal . La región Fe de una IgG comprende dos dominios constantes, CH2 y CH3. El dominio CH2 de una región Fe de IgG humana usualmente se extiende desde los aminoácidos 231 hasta el aminoácido 341. El dominio CH3 de una región Fe de IgG humana usualmente se extiende desde los aminoácidos 342 a 447. La región Fe y una IgG comprenden dos dominios constantes, CH2 y CH3. El dominio CH2 de una región Fe de IgG humana (también mencionada como dominio "CY2") usualmente se extiende desde el aminoácido 231-340. El dominio CH2 es único en que el mismo no se une estrechamente con otro dominio. Más bien, dos cadenas de carbohidrato ramificadas, enlazadas a N, se interponen entre los dos dominios CH2 de una IgG natural intacta. En toda la presente especificación, la numeración de los residuos en una cadena pesada de IgG es la del índice EU tal como en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991), incorporada expresamente en la presente como referencia. El "índice EU como en Kabat" se refiere a la numeración del anticuerpo EU de IgGl humana. La "región de articulación" generalmente se define como que se extiende desde Glu216 hasta Pro230 de la IgGl humana. Las regiones de articulación de otros isotipos de IgG pueden alinearse con la secuencia IgGl colocando los primeros y últimos residuos de cisteína que forman los enlaces S-S de cadena inter-pesada en las mismas posiciones. Cuando se utiliza en la presente, el término "fragmento" se refiere a un péptido o polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de al menos 5 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 10 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 15 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 20 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 25 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 40 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 50 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 60 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 70 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 80 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 90 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 100 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 125 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 150 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 175 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 200 residuos de aminoácidos contiguos, o al menos 250 residuos de aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de otro polipéptido. En una modalidad específica, un fragmento de un polipéptido conserva al menos una función del polipéptido. Cuando se utiliza en la presente, el término "fragmento funcional" se refiere a un péptido o polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de al menos 5 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 10 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 15 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 20 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 25 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 40 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 50 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 60 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 70 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 80 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 90 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 100 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 125 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 150 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 175 residuos de aminoácidos contiguos, al menos 200 residuos de aminoácidos contiguos, o al menos 250 residuos de aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos del segundo polipéptido diferente, en donde dicho péptido o polipéptido conserva al menos una función del segundo polipéptido diferente . Cuando se utiliza en la presente, el término "proteína de fusión" se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de una primera proteína o fragmento funcional, análogo o derivado de los mismos, y una secuencia de aminoácidos de una proteína heteróloga (es decir, una segunda proteína o fragmento funcional, análogo o derivado de los mismos diferente a la primera proteína o fragmento funcional, análogo o derivado de los mismos) . En modalidades particulares, una proteína de fusión comprende una molécula de enlace CD3 y una proteína heteróloga, polipéptido, o péptido.
Cuando se utiliza en la presente, el término "célula hospedera" se refiere a la célula particular del sujeto, transfectada con una molécula de ácido nucleico y la progenie o progenie potencial de tal célula. La progenie de tal célula puede no ser idéntica a la célula madre transfectada con la molécula de ácido nucleico debido a mutaciones o influencias ambientales que pueden ocurrir en las generaciones sucesivas o integración de la molécula de ácido nucleico en el genoma de la célula hospedera. Cuando se utiliza en la presente, el término "se hibridiza bajo condiciones severas", describe condiciones para hibridación y lavado bajo las cuales las secuencias de nucleótidos al menos 60% (65%, 70%, preferiblemente 75%, 80% u 85%, y más preferiblemente 90% ó 95%) idénticas entre sí, típicamente permanecen hibridadas entre sí. Tales condiciones severas son conocidas para aquellos expertos en la técnica y se pueden encontrar en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. En un ejemplo no limitativo las condiciones severas de hibridación son hibridación en cloruro de sodio/citrato de sodio 6X (SSC) a aproximadamente 45°C, seguido por uno o más lavados en 0.1XSSC, SDS al 0.2% a aproximadamente 68 °C. En un ejemplo preferido, no limitativo, las condiciones severas de hibridación son hibridación en 6XSSC a aproximadamente 45°C, seguido por uno o más lavados en SSC 0.2 X, SDS al 0.1% a 50-65°C (es decir, uno o más lavados a 50°C, 55°C, 60°C ó 65°C) .
Se entiende que los ácidos nucleicos de la invención no incluyen moléculas de ácido nucleico que se hibridan bajo estas condiciones solamente a una secuencia de nucleótidos que consiste sólo de nucleótidos A ó T. Cuando se utiliza en la presente, el término "episodio hipoglicémico" se refiere a un nivel de glucosa sanguínea en un sujeto menor de 60 mg/dL que da como resultado síntomas típicos de hipoglucemia tales como sudor, nausea, visión borrosa (por ejemplo, manchas en la visión) , estado tembloroso, labios y/o lengua adormecida, irritabilidad, desmayos, piel fría y húmeda o pegajosa, confusión, nerviosismo, debilidad y/o ritmo cardiaco rápido. Cuando se utiliza en la presente, el término "agente inmunomodulador" y variaciones del mismo, se refiere a un agente que modula el sistema inmune del huésped. En ciertas modalidades, un agente inmunomodulador es un agente inmunosupresor . En otras ciertas modalidades, un agente inmunomodulador es un agente inmunoestimulante . Los agentes inmunomoduladores incluyen, pero no están limitados a, moléculas pequeñas, péptidos, polipéptidos , proteínas de fusión, anticuerpos, moléculas inorgánicas, agentes miméticos, y moléculas orgánicas. Cuando se utiliza en la presente, el término wse enlaza inmunoespecíficamente a un antígeno" y términos análogos se refieren a péptidos, polipéptidos, proteínas de fusión y anticuerpos o fragmentos de los mismos que se enlazan específicamente a un antígeno o un fragmento y que se no enlazan específicamente a otros antígenos. Un péptido o polipéptido que se enlaza inmunoespecíficamente a un antígeno puede enlazarse a otros péptidos o polipéptidos con afinidad más baja cuando se determina mediante, por ejemplo, inmunoensayos , BIAcore, u otros ensayos conocidos en la técnica. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan inmunoespecíficamente a un antígeno pueden reaccionar de manera cruzada con antígenos relacionados. Preferiblemente, los anticuerpos o fragmentos que se enlazan inmunoespecíficamente a un antígeno no reaccionan de manera cruzada con otros antígenos. Cuando se utiliza en la presente, el término "se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3" y términos análogos, se refiere a péptidos, polipéptidos, proteínas de fusión y anticuerpos o fragmentos de los mismos que se enlazan específicamente a un polipéptido CD3 ó un fragmento del mismo y que no se enlazan específicamente a otros polipéptidos. Un péptido o polipéptido que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 puede enlazarse a otros péptidos o polipéptidos con afinidad más baja como se determina mediante, por ejemplo, inmunoensayos, BIAcore, u otros ensayos conocidos en la técnica. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 pueden reaccionar de manera cruzada con antígenos relacionados. Preferiblemente, los anticuerpos o fragmentos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 ó fragmento del mismo no reaccionan de manera cruzada con otros antígenos. Los anticuerpos o fragmentos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 se pueden identificar, por ejemplo, mediante inmunoensayos , BIAcore, u otras técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica. Un anticuerpo o fragmento del mismo se enlaza específicamente a un polipéptido CD3 cuando el mismo se enlaza a un polipéptido CD3 con afinidad más alta que a cualquier antígeno contrae-reactivo cuando se determina utilizando técnicas experimentales, tales como radioinmunoensayos (RIA) y ensayos inmunosorbentes enlazados a enzimas (ELISAs) . Ver, por ejemplo, Paul, ed. , 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York en las páginas 332-336 para una discusión con respecto a la especificidad del anticuerpo. Cuando se utiliza en la presente, el término "en combinación" , se refiere al uso de más de un agente profiláctico y/o terapéutico. El uso del término "en combinación" no restringe el orden en el cual se administran los agentes profilácticos y/o terapéuticos a un sujeto con un padecimiento o desorden. Un agente profiláctico o agente terapéutico se puede administrar antes de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ó 12 semanas antes) , concomítantemente con, o subsecuente a (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ó 12 semanas después) la administración de un segundo agente profiláctico o terapéutico (diferente del primer agente profiláctico o terapéutico) a un sujeto con un padecimiento o desorden. Cuando se utiliza en la presente, el término "aislado" en el contexto de un péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo, se refiere a un péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo el cual está sustancialmente libre de material celular o proteínas contaminantes de la célula o tejido fuente a partir del cual el mismo se deriva, o sustancialmente libre de precursores químicos u otras sustancias químicas cuando se sintetizan químicamente. El lenguaje "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo, en la cual el péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo se separa de componentes celulares de las células a partir de las cuales se aisla o producen recombinantemente . Por consiguiente, un péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo que está sustancialmente libre de material celular, incluye preparaciones de péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo que tiene menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, ó 5% (en peso seco) de proteína heteróloga (también mencionada en la presente como una "proteína contaminante"). Cuando el péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo se produce recombinantemente, el mismo de manera preferible también está sustancialmente libre de medio de cultivo, es decir, el medio de cultivo representa menos de aproximadamente 20%, 10%, ó 5% del volumen de la preparación de proteína. Cuando el péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo se produce mediante síntesis química, el mismo de manera preferible está sustancialmente libre de precursores químicos u' otras sustancias químicas, es decir, el mismo se separa de precursores químicos u otras sustancias químicas las cuales se involucran en la síntesis del péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo. De acuerdo con esto tales preparaciones de péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo tienen menos de aproximadamente 30%, 20%, 10%, 5% (en peso seco) de precursores químicos o compuestos diferentes al péptido, polipéptido, proteína de fusión o anticuerpo de interés. En una modalidad preferida, se aisla una molécula de enlace CD3. En otra modalidad preferida, se aisla un anticuerpo CD3 anti-humano . Cuando se utiliza en la presente, el término "aislado" en el contexto de moléculas de ácido nucleico, se refiere a una molécula de ácido nucleico la cual se separa de otras moléculas de ácido nucleico las cuales están presentes en la fuente natural de la molécula de ácido nucleico. Además, una molécula de ácido nucleico "aislada" , tal como una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas recombinantes , o sustancialmente libre de precursores químicos u otras sustancias químicas cuando se sintetiza químicamente y puede estar libre de ADNc u otras moléculas de ADN genómico, por ejemplo, se han aislado de otros clones en una ger.oteca de ácido nucleico. En una modalidad preferida, se aisla una molécula de ácido nucleico que codifica una molécula de enlace de CD3. En otra modalidad preferida, se aisla una molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo CD3 anti-humano . Cuando se utilizan en la presente, los términos "sin reacción" y "resistente" , describen pacientes tratados con un agente profiláctico o terapéutico actualmente disponible para un desorden autoinmune el cual no es clínicamente adecuado para aliviar uno o más síntomas asociados con el desorden autoinmune. Típicamente, tales pacientes padecen de padecimiento severo, persistentemente activo, y requieren terapia adicional para mejorar los síntomas asociados con su desorden autoinmune . Cuando se utiliza en la presente, el término "inicio" de padecimiento con referencia a la diabetes Tipo 1, se refiere a un paciente que cumple los criterios establecidos para el diagnóstico de diabetes Tipo 1 de la Asociación Americana de Diabetes (ver, Mayfield et al., 2006, Am. Fam. Physician 58:1355-1362) . Cuando se utilizan en la presente, los términos "ácidos nucleicos" y "secuencias de nucleótidos" incluyen moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o ADN genómico) , moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm) , combinaciones de moléculas de ADN y ARN o moléculas híbridas de ADN/RNA, y análogos de moléculas de ADN o ARN. Tales análogos se pueden generar utilizando, por ejemplo, análogos de nucleótidos, los cuales incluyen, pero no están limitados a, inosina o bases tritiladas. Tales análogos también pueden comprender moléculas de ADN o ARN que comprenden estructuras modificadas que dan atributos benéficos a las moléculas tales como, por ejemplo, resistencia a la nucleasa o una capacidad mayor para atravesar membranas celulares. Los ácidos nucleico o secuencias de nucleótidos pueden ser de una sola hebra, de doble hebra, pueden contener tanto porciones de una sola hebra como de doble hebra, y pueden contener porciones de triple hebra, aunque preferiblemente es ADN de doble hebra. Cuando se utilizan en la presente, los términos "agente profiláctico" y "agentes profilácticos" se refieren a moléculas de enlace de CD3 las cuales se pueden utilizar en la prevención, tratamiento, manejo o mejora de uno o más síntomas de un padecimiento autoinmune. En ciertas modalidades, el término "agente profiláctico" se refiere a anticuerpos CD3 anti-humanos (por ejemplo, 0KT3 y variantes y derivados del mismo) . Cuando se utiliza en la presente, el término "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a aquella cantidad de una molécula de enlace de CD3 suficiente para prevenir el desarrollo, recurrencia o inicio de uno o más síntomas de un desorden. En ciertas modalidades, el término "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a la cantidad de un anticuerpo CD3 anti -humano suficiente para prevenir el desarrollo, recurrencia o inicio de uno o más síntomas de un desorden. Cuando se utilizan en la presente, los términos "prevenir" , "que previene" y "prevención" , se refieren a la prevención de la recurrencia o inicio de uno o más síntomas de un desorden autoinmune o inflamatorio en un sujeto que da como resultado la administración de un agente profiláctico o terapéutico. Guando se utiliza en la presente, el término "protocolo" incluye programas de dosificación y regímenes de dosificación. Los protocolos en la presente son métodos de uso e incluyen protocolos profilácticos y terapéuticos. Un "régimen de dosificación" o "curso de tratamiento" puede incluir la administración de varias dosis de un agente terapéutico o profiláctico durante 1 a 20 días. Cuando se utiliza en la presente, la frase "efectos secundarios" abarca efectos indeseados y adversos de un agente profiláctico o terapéutico. Los efectos adversos siempre son indeseados, aunque los efectos indeseados no necesariamente son adversos . Cuando se utilizan en la presente, los términos "sujeto" y "paciente" se usan intercambiablemente. Cuando se utilizan en la presente, los términos "sujeto" y "sujetos" se refieren a un animal, preferiblemente un mamífero incluyendo un no primate (por ejemplo, una vaca, cerdo, caballo, gato, perro, rata, y ratón) y un primate (por ejemplo, un mono o un humano), y más preferiblemente un humano.
Cuando se utiliza en la presente, el término "sinérgico" se refiere a una combinación de agentes profilácticos o terapéuticos, la cual es más efectiva que los efectos aditivos de los agentes en la combinación cuando se administran individualmente. Un efecto sinérgico de una combinación de agentes profilácticos o terapéuticos, puede permitir el uso de dosificaciones más bajas de uno o más de los agentes y/o administración menos frecuente de dichos agentes a un sujeto con un desorden autoinmune. La capacidad de utilizar dosificaciones más bajas de agentes profilácticos o terapéuticos y/o de administrar dichos agentes menos frecuentemente, reduce la toxicidad asociada con la administración de dichos agentes a un sujeto sin reducir la eficacia de dichos agentes en la prevención o tratamiento de desórdenes autoinmunes . Además, un efecto sinérgico puede dar como resultado la eficacia mejorada de los agentes en la prevención o tratamiento de desórdenes autoinmunes. Finalmente, el efecto sinérgico de una combinación de agentes profilácticos o terapéuticos puede evitar o reducir efectos secundarios adversos o indeseados asociados con una terapia de un solo agente. Cuando se utilizan en la presente, los términos "agente terapéutico" y "agentes terapéuticos" se refieren a las moléculas de enlace de CD3 las cuales se pueden usar en la prevención, tratamiento, manejo o mejora de uno o más síntomas de un padecimiento autoinmune o inflamatorio. En ciertas modalidades, el término "agente terapéutico" se refiere a anticuerpos CD3 anti-humanos (por ejemplo, 0KT3 y variantes o derivados el mismo) . Cuando se utiliza en la presente, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a aquella cantidad de un agente terapéutico suficiente para dar como resultado la mejora de uno o más síntomas de un desorden. Con respecto a la diabetes, una cantidad terapéuticamente efectiva preferiblemente se refiere a la cantidad de agente terapéutico que reduce los requerimientos de insulina diaria promedio de un sujeto al menos al 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%. Cuando se utilizan en la presente, los términos "tratar", "tratamiento" y "que tratan", se refieren a la mejora de uno o más síntomas asociados con un padecimiento autoinmune o inflamatorio que es el resultado de la administración de una o más moléculas de enlace de CD3. En particular, tales términos se refieren a la mejora de uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmüne que es el resultado de la administración de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . 4. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS FIGS. 1A y IB. Secuencias de regiones variables de 0KT3 humanizado. La FIG. iA y FIG. IB muestran las alineaciones de la cadena ligera de OKT3 (FIG. 1A) (SEC. ID. NO.: 1) y la cadena pesada (FIG. IB) (SEC. ID. NO. : 5) secuencia de aminoácidos de dominio variable (fila 1) , la secuencia de dominio variable de los anticuerpos humanos elegidos como estructura aceptadora de cadena ligera y pesada (fila 2) (SEC. ID. NOs . : 2 y 6, respectivamente) y las secuencias de dominio variable de OKT3 humanizado (filas 3-5) (SEC. ID. NO.: 3, SEC. ID. NO.: 4, SEC. ID. NO.: 7, SEC. ID. NO.: 8 y SEC. ID. NO.: 9) . La elecciones CDR se subrayan con una sola línea. Las filas 3-5 muestran solamente las diferentes de la secuencia aceptadora humana, las diferencias que no son de CDR se muestran con doble subrayado. Los guiones indican espacios introducidos en las secuencias para maximizar la alineación. La numeración es como en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) , la cual se incorpora como referencia en la presente . FIGS. 2A-2D. FIGS. 2A y 2B, secuencias de nucleótidos y aminoácidos respectivamente, de la cadena ligera de ???3?1 humanizado (SEC. ID. NOs.: 10 y 11, respectivamente). FIGS. 2C y 2D, secuencias de nucleótidos y aminoácidos, respectivamente, de la cadena pesada de 0??3?1 (ala-ala) humanizado (SEC. ID. NOs . : 12 y 13, respectivamente). FIG. 3. Representación esquemática del vector de expresión pMGX1303 de mamífero, que contiene regiones codificantes para 0KT3 humanizado y capaces de promover la expresión del anticuerpo humanizado en células de CHO. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de y mejora de los síntomas de padecimientos o desórdenes autoinmunes utilizando proteínas, particularmente, anticuerpos, dirigidos contra el complejo CD3 asociado con el receptor de células T humanas o TcR. En modalidades particulares, el anticuerpo se enlaza a la subunidad épsilon del complejo CD3. Los métodos de la invención pueden usarse con cualquier anticuerpo CD3 anti-humano presentado aquí o conocido en la técnica, por ejemplo 0KT3, ChAglyCD3 (TRX4™) , HUM291 (visilizumab; Nuvion™) , UCHT1, Leu4 , 500A2, CLB-T3/3, BMA030 y YTH 12.5, y variaciones o derivados de los mismos. En una modalidad de la invención el anticuerpo es 0KT3 , preferiblemente versiones humanizadas de OKT3 ó un anticuerpo que compita para enlazarse, por ejemplo, cuando se determina mediante ensayo de inmunoprecipitación o ELISA, con OKT3. En otra modalidad, el anticuerpo es 0KT3 humanizado, el cual se ha modificado en uno o más residuos de aminoácidos para exhibir activación reducida de células T y/o enlace de FcR cuando se compara con un anticuerpo de 0KT3 humanizado, tal como teniendo una alanina en, por ejemplo, el residuo número 234 del dominio Fe, y una alanina en, por ejemplo, residuo número 235 del dominio Fe. Preferiblemente, los anticuerpos CD3 anti-humanos se administran a dosificaciones más bajas o durante períodos más cortos de tiempo que los regímenes de dosificación previos. En particular, la invención contempla regímenes de dosificación en los cuales menos de 9,000 µg/m2 , preferiblemente, menos de 8,000 µ?/p?2, menos de 7,500 µg/m2, menos de 7,000 ^g/m2 , o menos de 6,000 µg/m2 de anticuerpo CD3 anti-humano total en la duración de la dosificación, particularmente de 0??3?1 (ala-ala) administrado intravenosamente, o la cantidad equivalente farmacológica de otro anticuerpo CD3 anti-humano de esta dosis de 0??3?1 (ala-ala) administrado intravenosamente y/o cualquier anticuerpo CD3 anti-humano administrado mediante una vía de administración diferente a la intravenosa, así como métodos de dosificación crónica y métodos de redosificación o dosificación repetida. Los mAbs anti-CD3 son potentes agentes inmunosupresores dirigidos contra un complejo de proteína invariable asociado con el TcR humano (Van Wauwe, 1980, J. Immunol . 124:2708). Se cree que los complejos CD3 son estructuras accesorio o complementarias que transducen las señales de activación iniciadas al enlazarse el TcR a su ligando. El enlace del OKT3 del anticuerpo CD3 anti-humano al TcR media el bloque de TcR e inhibe el reconocimiento del aloantígeno y la citotoxicidad mediada por células (Landegren et al., 1982, J. Exp. Med. 155:1579; van Seventer et al., 1987, J. Immunol. 139:2545; Weiss et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:593). Sin embargo, la administración de algunos anticuerpos dirigidos a células inmunes, incluyendo el OKT3 y otros anticuerpos CD3 antihumanos, pueden inducir la activación de las células T, incluyendo la liberación sistemática de varias citocinas, incluyendo IL-2, IL-6, TNF- e IFN-? (Abramowicz, 1989, Transplantation, 47:606-608; Chatenoud, 1989, New Eng. J. Med. 320:1420-1421). Esta producción de citocinas se ha correlacionado con los efectos secundarios adversos, observados después de la primera inyección de mAbs (Van Wauwe, 1980, J. Immunol. 124:2708; Chatenoud, 1989, New Eng. J. Med. 320:1420-1421; Thistlethwaite , 1988, Am J Kidney Dis., 11:112-9) , y puede aumentar la producción de anticuerpos anti-isotípicos y anti-idiotípicos que se presentan en algunos pacientes después de una o dos semanas de tratamiento. Esta respuesta inmune puede neutralizar el anticuerpo específico, así como otros anticuerpos de la misma clase (isotipo) , y excluir tratamientos subsecuentes (Thistlethwaite, 1988, Am J Kidney Dis. 11:112-9). Varias piezas de evidencia sugieren fuertemente que estos efectos secundarios son una consecuencia de la reticulación entre los linfocitos T y las células que portan el receptor Fe (FcR) a través de la porción Fe de los anticuerpos, incluyendo por ejemplo, el 0KT3 , que da como resultado la activación de ambos tipos de células (Debets, 1990, J. Immunol . 144:1304; Krutman, 1990, J. Immunol . 145:1337); 1) los mAbs anti-CD3 no estimulan la proliferación de células T in vitro, a menos que el anticuerpo se inmovilice para plastificarse o unirse a las células que presentan el antígeno FcR+, incluidas en el cultivo (van Lier, 1989, Immunol. 68:45); 2) la reticulación de OKT3 a través de FcRs I y II, mejora la proliferación en respuesta a IL-2, in vitro (van Lier, 1987, J. Immunol. 139:2873); 3) proliferación de células T de murino inducidas por 145-2C11, un anticuerpo monoclonal de hámster dirigido contra el complejo CD3 murino, podría bloquearse mediante el anticuerpo anti-FcR, 2.4G2; 4) la inyección en el ratón de fragmentos F(ab')2 de 145-2C11 induce una inmunosupresión significativa sin disparar la activación completa de las células T (Hirsch, 1990, Transplantation, 49:1117-23) y fue menos tóxica en ratones que el anticuerpo completo (Alegre, 1990, Transplant Proc . 22:1920-1); y 5) la administración de una variante de conmutación 0KT3 de IgA que muestra una activación reducida de las células T mediada por FcR en comparación con el IgG2a de 0KT3 , da como resultado menos efectos secundarios en chimpancés in vivo (Parleviet, 1990, Brief Conrounications 50:889-892). La administración de ciertos anticuerpos CD3 antihumanos también se ha asociado con la activación transitoria de retrovirus, específicamente la activación de infección latente del Virus Epstein-Barr (EBV) . También se ha encontrado que el tratamiento de anticuerpo anti-CD3 es lítico para las células T activadas y apoptótico para algunas poblaciones de células T. Las razones para estos efectos son poco claras, aunque las mismas pueden ser dosis relacionadas y probablemente son el resultado de la modulación del complejo TcR que da como resultado una señal subóptima. Por consiguiente la mejora de la terapia de mAb anti-CD3 se puede obtener modificando molecularmente el anticuerpo para reducir su afinidad a los FcRs . El Ab mutado obtenido podría llevar a una activación celular más baja y toxicidad reducida in vivo, pero mantener las propiedades inmunosupresoras originales del anticuerpo. 5.1 Anticuerpos que se Enlazan Inmunoespecíficamente a Polipéptidos CP3 Se deberá reconocer que los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , son conocidos en la técnica. Los ejemplos de anticuerpos conocidos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 incluyen, pero no están limitados a OKT3 , HuM291, ChAglyCD3 , UCHT1, Leu4, 500A2, CLB-T3/3, BMA030, YTH 12.5 y anticuerpo CD3 de ratas {Ver Herold et al., 2005, Diabetes 54:1763-1769; Carpenter et al., 2005, Biol . Blood Marrow Transplant 11:465-471; Keymeulen et al., 2005, '. Engl . J. Med. 352:26422644; Schwin er et al., 1992, J. Immunol . 148: 1322-1328; Tsoukas et al., 1985, J. Immunol. 135:1719-1723; Patente Norteamericana No. 6,491,916; Brams et al., 1989, Immunol., 66:348-353; van Lier et al., 1989, Immunol. 68:45-50; Walker et al., 1987, Eur. J. Immunol. 17:1611-1618; Routledge et al., 1991, Eur. J. Immunol. 21:2717-2725, respectivamente). La presente invención proporciona métodos de tratamiento, prevención, que hacen más lenta la progresión de y mejora de los síntomas de desórdenes autoinmunes usando anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , expresados por una célula inmune tal como una célula T, en donde dichos anticuerpos modulan una actividad o función de dicha célula T. En una modalidad específica, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 directa o indirectamente modulan la actividad de los linfocitos, preferiblemente células T de sangre periférica. En particular, la presente invención proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , expresados por una célula T, y dichos anticuerpos modulan la actividad de las células T de sangre periférica. En una modalidad específica, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inhiben la activación de las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% e inhiben la proliferación de células T por al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% en un ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inhiben el reconocimiento de aloantígenos mediante las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% en un ensayo in vivo o in vi tro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inhiben la citotoxicidad mediada por las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%,· al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% en un ensayo in vivo o in vi tro descrito e la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En otra modalidad, los métodos de la invención emplean anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, y no inducen o han reducido (en comparación con los anticuerpos no modificados, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal de OKT3 murino) la expresión y/o liberación de citocinas en un en un ensayo in vivo o in vi tro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En una modalidad específica, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , no inducen un incremento en la concentración de citocinas tales como, por ejemplo, IFN-?, IL-2, IL-4, IL-6, IL-9, IL-12, y IL-15 en el suero de un sujeto administrado con tal anticuerpo. En una modalidad alternativa, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inducen la expresión y/o liberación de citocinas en un ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica pero a niveles menores a los inducidos por los anticuerpos anti-CD3 no modificados, tales como, el anticuerpo monoclonal de 0KT3 murino. Las concentraciones en suero de una citocina, se pueden medir mediante cualquier "técnica bien conocida para un experto en la técnica tal como, por ejemplo, ELISA. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inducen una anergia en las células T en un ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En una modalidad alternativa, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , no inducen la anergia de las células T en un ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, suscitan un estado de apatía al antígeno específico durante al menos 30 minutos al menos 1 hora, al menos 2 horas, al menos 6 horas, al menos 12 horas, al menos 24 horas, al menos 2 días, al menos 5 días, al menos 7 días, al menos 10 días o más en un ensayo in vivo o 'in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica.
En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , inhiben la activación de las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% e inhiben la proliferación de las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% en un ensayo in vivo o in vit.ro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica. En aún otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , logran el recubrimiento o modulación de las células T por al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 98% e inhiben la proliferación de las células T al menos al 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, al menos 99%, y preferiblemente al 100% en un ensayo in vivo o in vitro descrito en la presente o bien conocido para un experto en la técnica . En otra modalidad, el dominio Fe de un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , no se enlaza detectablemente a uno o más de los receptores Fe ( "FcR" ) FcRI, FcRII, y/o FcRIII expresado por una célula inmune tal como una célula T, monocito, y macrófago. Los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a •un polipéptido CD3 incluyen, ' pero no están limitados a, anticuerpos monoclonales , anticuerpos multiespecíficos , anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, Fvs de una sola cadena (scFv) , anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos F(ab')2/ Fvs enlazados a disulfuro (sdFv) , y anticuerpos anti-idiotípicos (anti-Id) (que incluyen, por ejemplo, anticuerpos anti-Id para los anticuerpos de la invención) , y fragmentos que se enlazan a epitopes de cualquiera de los anteriores. En particular, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 incluyen moléculas de inmunoglobulina y porciones inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de enlace de antígeno que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3. Las moléculas de inmunoglobulina de la invención puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY) , clase (por ejemplo, IgGlf IgG2, IgG3, IgG , IgAx e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina . En una modalidad específica, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíticamente a un polipéptido CD3, y median la actividad de las células T comprenden un dominio Fe o un fragmento del mismo (por ejemplo, CH2 , CH3 , y/o regiones de articulación de un dominio Fe) . En una modalidad preferida, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 y median la actividad de las células T comprenden un dominio Fe o fragmento del mismo que no se enlaza detectablemente a un FcR (por ejemplo, uno o más de un FcRI, FcRII ó FcRIII) expresado por una célula inmune o tiene enlace reducido al FcR en comparación con un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural . Los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , pueden ser de cualquier origen animal incluyen aves y mamíferos (por ejemplo, humano, murino, asno, oveja, conejo, cabra, cobayo, camello, caballo, o pollo) . Preferiblemente, los anticuerpos de la invención son anticuerpos monoclonales humanos, humanizados o quiméricos. Los anticuerpos humanos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , incluyen anticuerpos que tienen la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y anticuerpos aislados de genotecas de inmunoglobulina humana o .de ratones que expresan anticuerpos de genes humanos. Los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipeptido CD3 , pueden ser monoespecíficos , biespecíficos , triespecífieos o de mayor multiespecificidad. Los anticuerpos multiespecíficos pueden ser específicos para diferentes epitopes de un polipéptido CD3 o pueden ser específicos tanto para un polipéptido CD3 así como para un epitope heterólogo, tal como un polipéptido heterólogo o material de soporte .sólido. Ver, por ejemplo, las publicaciones PCT WO 93/17715, WO 92/08802, WO 91/00360, y WO 92/05793; Tutt, et al., J. Immunol . 147:60-69(1991); Patentes Norteamericanas Nos. 4,474,893, 4,714,681, 4,925,648, 5,573,920, y 5,601,819; y Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992). La presente invención proporciona anticuerpos que tienen una alta afinidad de enlace para un polipéptido CD3. En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , tiene una constante de relación de asociación o relación kon (anticuerpo (Ab) + antígeno (Ag ) kon ? Ab-Ag) de al menos 105 MT'V1, al menos 5 X 105 al menos 106 MT'V1, al menos 5 X 106 MTV1, al menos 107 MT^s"1, al menos 5 X 107 MT^s"1, o al menos 108 MT^s"1. En una modalidad preferida, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , tiene una kon de al menos 2 X 105 MT^s"1, al menos 5 X 105 MT^s"1. al menos 106 MT_1s-1, al menos 5 X 106 MT^s"1, al menos 107 MT^s'1, al menos 5 X 107 MT~xs~x, ó al menos 108 MT^s"1. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , tiene una relación k0ff (anticuerpo (Ab) + antígeno (Ag)Koff pAb-Ag) menor de lO^s"1, menor de 5 X lO^s"1, menor de 10"2s~x, menor de 10~2s~x, menor de 10~3s~x, menor de 5 X 10"3s"x, menor de 10~4s~x, menor de 5 X 10~4s~x, menor de 10"ss"1, menor de 5 X 10"5s~x, menor de 10~6s~x, menor de 5 X 10~6s~x, menor de 10~7s~x, menor de 5 X 10~7s~x, menor de 10~8s~x, menor de 5 X 10~8s~x, menor de 10~9s"x, menor de 5 X 10~9s~x, ó menor de 10"10s"1. En una modalidad preferida, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , tiene una kon menor de 5 X 10~4s~x, menor de 10~5s~x, menor de 5 X 10~5s"x, menor de 10"6s"1, menor de 5 X 10" 6s~x, menor de 10~7s~x, menor de 5 X 10~7s~x, de menos 10~8s"x, menor de 5 X 10~8s"x, menor de 10~9s~x, menor de 5 X ó menor de 10"10s"x. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, tiene una constante de afinidad o Ka (kon/koff) de al menos 102 M~x, al menos 5 X 102 M" , al menos 103 M"x, al menos 5 X 103 NT1, al menos 104 M"1, al menos 5 X 104 NT1, al menos 105 "x, al menos 5 X 105 "1, al menos 106 M"1, al menos 5 X 106 M"1, al menos 107 M"1, al menos 5 X 107 M"1, al menos 108 M"1, al menos 5 X 108 M"x, al menos 109 NT1, al menos 5 X 109 M"1, al menos 1010 M*1, al menos 5 X 1010 M"1, al menos 1011 "1, al menos 5 X 1011 M"1, al menos 1012 M"1, al menos 5 X 1012 M"1, al menos 1013 M"1, al menos 5 X 1013 M"1, al menos 1014 NT1, al menos 5 X 1014 NT1, al menos 1015 M"1, al menos 5 X 1015 M"1. En aún otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , tiene una constante de disociación o Ka (k0n/koff) de menos de 10~2 , menor de 5 X 10"2 M, menor de 10"3 M, menor de 5 X 10~3 M, menor de 10~4 M, menor de 5 X 10~4 M, menor de 1CT5 M, menor de 5 X 10"5 M, menor de 10"6 M, menor de 5 X 10"6 M, menor de 10"7 M, menor de 5 X 10~7 M, menor de 10"8 M, menor de 5 X 10"8 M, menor de 10~9 M, menor de 5 X 10"9 M, menor de 10"10 M, menor de 5 X 10"10 M, menor de 10"11 M, menor de 5 X 10"11 M, menor de 10"12 M, menor de 5 X 10"12 M, menor de 10"13 M, menor de 5 X 10"13 M, menor de 10"14 M, menor de 5 X 10"14 M, menor de 10~15 M, o menor de 5 X 10"15 M. En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, es un OKT3 humanizado o un fragmento que se enlaza al antígeno del mismo por ejemplo, (una o más regiones determinantes de complementariedad (CDRs) de OKT3 humanizado) . El OKT3 tiene la secuencia de aminoácidos descrita, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,658,019, 6,113,901 y 6,491,916 (cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad) , o la secuencia de aminoácidos del anticuerpo monoclonal producido por la línea celular depositada con la Colección de Cultivo Tipo Americano (ATCC®) , 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110-2209 el 28 de Julio de 1993 como el Número de Acceso CRL-8001 (la cual se incorpora en la presente como referencia) . También se •reportan varias versiones humanizadas de OKT3 en la Patente Norteamericana No. 6,491,916. En una modalidad alternativa, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, no es OKT3, un, derivado de OKT3 , por ejemplo 0KT3 humanizado, un fragmento que se enlaza a antígenos de 0KT3 , o, más preferiblemente, no es una versión humanizada o quimérica del mismo. En una modalidad específica, la presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden un dominio pesado variable ("VH") que tiene una secuencia de aminoácidos del dominio VH de un OKT3 humanizado (por ejemplo, SEC. ID. NO.: 5, SEC. ID. NO.: 7, SEC . ID. NO.: 8, SEC. ID. NO.: 9; FIG. IB). En una modalidad preferida, el anticuerpo de 0KT3 humanizado comprende una cadena pesada con la secuencia de aminoácidos de 1?0??3?1 (ala-ala) provisto en •la FIG. 2D (SEC. ID. NO. : 13) o codificado por la secuencia de nucleótidos de 1????3?1 (ala-ala) provisto en la FIG. 2C (SEC.
ID. NO. : 12) . En una modalidad específica, la presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden un dominio ligero variable ("VL") que tiene una secuencia de aminoácidos del dominio VL para un OKT3 humanizado (por e emplo, SEC. ID. NO. : 1, SEC. ID. NO. : 3, ó SEC. ID. NO.: 4, FIG. 1A) . En una modalidad preferida, el anticuerpo de 0KT3 humanizado comprende una cadena ligera con la secuencia de aminoácidos de 1?0??3?1 provisto en la FIG. 2B (SEC. ID. NO.: 11) o codificado por la secuencia de nucleótidos de 1???3?1 provisto en la FIG. 2A (SEC. ID. NO.: 10) . La presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden un dominio VH descrito en la presente, o un dominio VH de un anticuerpo descrito en la presente, combinado con un dominio VL descrito en la presente, u otro dominio VL. La presente invención proporciona además anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, dichos anticuerpos comprenden un dominio VL descrito en la presente, o un dominio VL de un anticuerpo descrito en la presente, combinado con un dominio VH descrito en la presente, u otro dominio VH.
En una modalidad, una molécula de ácido nucleico aislada codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dicho anticuerpo comprende un dominio VH que tiene la secuencia de aminoácidos del dominio VH de un OKT3 humanizado (por ejemplo, SEC. ID. NO.: 5; SEC . ID. NO.: 7, SEC. ID. NO.: 8; SEC. ID. NO.: 9, FIG. IB). En una modalidad preferida, una molécula de ácido nucleico aislada codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dicho anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de hOKT3yl (ala-ala) , descrita en la FIG. 2D (SEC. ID. NO.: 13). En una modalidad, una molécula de ácido nucleico aislada codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dicho anticuerpo comprende un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácidos del dominio VL de un 0KT3 humanizado por ejemplo, SEC. ID. NO. : 1; SEC. ID. NO.: 3, ó 4 (FIG. 1A) . En una modalidad preferida, una molécula de ácido nucleico aislada codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, dicho anticuerpo comprende una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de 1????3?1 descrita en la FIG. 2B (SEC. ID. NO. : 11) .
En otra modalidad, una molécula de ácido nucleico codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dicho anticuerpo comprende un dominio VH .que tiene la secuencia de aminoácidos del dominio VH de un 0KT3 humanizado, por ejemplo, la SEC. ID. NO. : 7, SEC. ID. NO.: 8, ó SEC. ID. NO.: 9 (FIG. IB) y un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácidos del dominio VL de un OKT3 humanizado, por ejemplo, la SEC. ID. NO. : 3 ó SEC. ID. NO. : 4 (FIG. 1A) . En otra modalidad, una molécula de ácido nucleico aislada codifica un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dicho anticuerpo .comprende una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de un OKT3 humanizado, por ejemplo la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de ????3?1 descrita en la FIG. 2D (SEC. ID. NO.: 13), y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de un OKT3 humanizado, por ejemplo la secuencia de aminoácidos de ?????3?1 descrita en la FIG. 2B (SEC. ID. NO. : 11) . . En una modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden una o más CDRs VH descritos en la FIG. IB. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden más de una de las CDRs VH descritas en la FIG. IB. En una modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden una o más de las CDRs VL descritas en la FIG. 1A. En otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden más de una de las CDRs VL descritas en la FIG. 1A. Én otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden una o más de las CDRs VH descritas en la FIG. IB y una o más CDRs VL descritas en la FIG. 1A. En aún otra modalidad, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden más de una de las CDRs VH descritas en la FIG. IB y más de una de las CDRs VL descritas en la FIG. 1A. La presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden derivados de los dominios VH, CDRs VH, dominios VL, ó CDRs VL, descritos en la presente, o disponibles para un experto ordinario en la técnica, que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3. Las técnicas estándar conocidas para aquellos expertos en la técnica, se pueden utilizar para introducir mutaciones en la secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo de la invención, incluyendo, por ejemplo, mutagénesis específica puntual o dirigida al sitio y mutagénesis mediada por PCR las cuales dan como resultado sustituciones de aminoácidos.
Preferiblemente, los derivados incluyen menos de 25 sustituciones de aminoácidos, menos de 20 sustituciones de aminoácidos, menos de 15 sustituciones de aminoácidos, menos de 10 sustituciones de aminoácidos, menos de 5 sustituciones de aminoácidos, menos de 4 sustituciones de aminoácidos, menos de 3 sustituciones de aminoácidos, o menos de 2 sustituciones de aminoácidos en relación a la molécula original. Una "sustitución de aminoácidos conservativa" es una en la cual el residuo de aminoácido se reemplaza con un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral con una carga similar. Se han definido en la técnica familias de residuos 1 de aminoácidos que tienen cadenas laterales con cargas similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales ácidas (por ejemplo ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína) , cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano) , cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina) . Alternativamente, se pueden introducir mutaciones al azar a lo largo de toda o parte de la secuencia de codificación, tal como mediante mutagénesis de saturación, y los mutantes resultantes se pueden seleccionar para actividad biológica para identificar los mutantes que conservan la actividad. Después de la mutagénesis, el anticuerpo codificado se puede expresar y se puede determinar la actividad del anticuerpo. En una modalidad específica, la presente invención proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden la secuencia de aminoácidos de un 0KT3 humanizado con o más sustituciones de residuos de aminoácidos en el dominio ligero variable (VL) y/o dominio pesado variable (VH) . La presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden la secuencia de aminoácidos de los dominios variables de cadenas pesada y ligera de murino (SEC. ID. NOs . : 5 y 1, respectivamente) con una o más sustituciones de residuos de aminoácidos en una o más CDRs VL y/o una o más CDRs VH. El anticuerpo generado introduciendo sustituciones en el dominio VH, CDRS VH, dominio VL y/o CDRs VL de OKT3 humanizado se pueden probar in vi tro e in vivo, por ejemplo, por su capacidad de enlazarse a un polipéptido CD3, o por su capacidad de inhibir la activación de las células T, o por su capacidad de inhibir la proliferación de las células T, o por su capacidad de inducir la lisis de las células T, o por su capacidad de prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmune. En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 comprende una secuencia de nucleótidos que se híbrida a la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo monoclonal producido por la línea celular depositada con el ATCC® como el Número de Acceso CRL-8001 bajo condiciones severas, por ejemplo, hibridación al ADN unido al filtro en cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.1% 0.2 x a aproximadamente 50-65°C, bajo condiciones altamente severas, por ejemplo, hibridación a ácido nucleico unido al filtro en SSC 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.2% 0. lx a aproximadamente 68 °C, o bajo condiciones severas de hibridación las cuales son conocidas para aquellos expertos en la técnica (ver, por ejemplo, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocole in Molecular Biology, Vol . I, Green Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., New York en las páginas 6.3.1-6.3.6 y 2.10.3).
En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 comprende una secuencia de nucleótidos que se híbrida a la secuencia de nucleótidos que codifica el 0KT3 humanizado bajo condiciones severas, por ejemplo, hibridación al ADN unido al filtro en cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) 6x a aproximadamente 45 °C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.1% 0.2x a aproximadamente 50-65°C, bajo condiciones altamente severas, por ejemplo, hibridación a ácido nucleico unido al filtro en SSC 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.2% 0. lx a aproximadamente 68°C, o bajo condiciones severas de hibridación las cuales son conocidas para aquellos expertos en la técnica (ver, por ejemplo, Ausubel, F.M. et al., eds . , 1989, Current Protocole in Molecular Biology, Vol . I, Green Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., New York en las páginas 6.3.1-6.3.6 y 2.10.3) . En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 comprende una secuencia de aminoácidos de un dominio VH o una secuencia de aminoácidos un dominio VL codificado por una secuencia de nucleótidos que se híbrida a la secuencia de nucleótidos que codifica los dominios VH o VL de OKT3 humanizado bajo condiciones severas, por ejemplo, hibridación al ADN unido al filtro en cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.1% 0.2x a aproximadamente 50-65°C, bajo condiciones altamente severas, por ejemplo, hibridación a ácido nucleico unido al filtro en SSC 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.2% 0. lx a aproximadamente 68°C, o bajo condiciones severas de hibridación las cuales son conocidas para aquellos expertos en la técnica (ver, por ejemplo, Ausubel, F.M. et al., eds . , 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol . I, Green Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., New York en las páginas 6.3.1-6.3.6 y 2.10.3) . En otra modalidad, un anticuerpo qué se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprende una secuencia de aminoácidos de una CDR VH o una secuencia de aminoácidos de una CDR VL codificada por una secuencia de nucleótidos que se híbrida a la secuencia de nucleótidos que codifica cualquiera de CDRs VH ó CDRs VL del anticuerpo monoclonal producido por la línea celular depositada con el ATCC® como el Número de Acceso CRL-8001 bajo condiciones severas, por ejemplo, hibridación al ADN unido al filtro en cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.1% 0.2x a aproximadamente 50-65°C, bajo condiciones altamente severas, por ejemplo, hibridación a ácido nucleico unido al filtro en SSC 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.2% 0. lx a aproximadamente 68°C, o bajo condiciones severas de hibridación las cuales son conocidas para aquellos expertos en la técnica. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 comprende una secuencia de aminoácidos de una CDR VH o una secuencia de aminoácidos de una CDR VL codificada por secuencias de nucleótidos que se hibridan a la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo monoclonal producido por la línea celular depositada con el ATCC® según el Número de Acceso CRL-8001 bajo condiciones severas, por ejemplo, hibridación al ADN unido al filtro en cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.1% 0.2x a aproximadamente 50-65°C, bajo condiciones altamente severas, por ejemplo, hibridación a ácido ucleico unido al filtro en SSC 6x a aproximadamente 45°C seguido por uno o más lavados en SSC/SDS al 0.2% 0. lx a aproximadamente 68 °C, o bajo condiciones severas de hibridación las cuales son conocidas para aquellos expertos en la técnica. En una modalidad específica, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos del anticuerpo monoclonal producido por la línea celular depositada con el ATCC® según el Número de Acceso CRL-8001. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 35%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos del 0KT3 humanizado. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprende una secuencia de aminoácidos de un dominio VH que es al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos (J0%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 99% idéntica al dominio VH del 0KT3 humanizado. En otra modalidad, un anticuerpo que se enlaza inmunoespecíficamente a un . polipéptido CD3 comprende una secuencia de aminoácidos de un dominio VL que es al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 99% idéntica al dominio VL del OKT3 humanizado. La presente invención abarca anticuerpos que compiten con un anticuerpo descrito en la presente para enlazarse a un polipéptido CD3. En una modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con anticuerpos anti-CD3 conocidos en la técnica, derivados de los mismos o fragmentos que se enlazan a antígenos de los mismos. Por ejemplo, los anticuerpos provistos por la invención compiten con OKT3 o un derivado del mismo, por ejemplo OKT3 humanizado, o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para "enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con ChAglyCD3 o un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con HuM291 o un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la "presente invención abarca anticuerpos que compiten con UCHTl o un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con Leu4 o un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con YHT 12.5 ó un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con 500A2 ó un derivado del mismo o un fragmento que .se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con CLB-T3/3 ó un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. En otra modalidad específica, la presente invención abarca anticuerpos que compiten con BMA030 ó un derivado del mismo o un fragmento que se enlaza a un antígeno del mismo para enlazarse al polipéptido CD3. La presente invención también abarca dominios VH que compiten con el dominio VH de los anticuerpos descritos en la presente, o con los dominios VH de otros anticuerpos CD3 antihumanos conocidos en la técnica, o derivados o variantes de los mismos para enlazarse a un polipéptido CD3. En una modalidad específica, la presente invención abarca dominios VH que compiten con el dominio VH de 0KT3 ó un derivado del mismo, por ejemplo, 0KT3 humanizado, para enlazarse al polipéptido CD3. La presente invención también abarca dominios VL que compiten con el dominio VL de los anticuerpos descritos en la presente, o con los dominios VL de otros anticuerpos CD3 anti-humanos conocidos en la técnica, o derivados o variantes de los mismos para enlazarse a un polipéptido CD3. En una modalidad específica, la presente invención abarca dominios VL que compiten con el dominio VL de 0KT3 ó un derivado del mismo, por ejemplo, 0KT3 humanizado, para enlazarse al polipéptido CD3. Los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , incluyen derivados que se modifican, es decir, por la adhesión covalente de cualquier tipo de molécula al anticuerpo tal como la adhesión covalente. Por ejemplo, pero no a manera de limitación, los derivados de anticuerpos incluyen anticuerpos que se han modificado, por ejemplo, mediante glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación mediante grupos protectores/bloqueadores conocidos, escisión proteolítica, enlace a un ligando celular u otra proteína, etc. Cualquiera de numerosas modificaciones químicas puede llevarse a cabo mediante técnicas conocidas, que incluyen, pero no están limitadas a, escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc.
Adicionalmente , el derivado puede contener uno o más aminoácidos no clásicos. La presente invención también proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden una región de estructura conocida para aquellos expertos en la técnica. Preferiblemente, la región de fragmento de un anticuerpo de la invención es humana. La presente invención también abarca anticuerpos, y métodos de uso de los mismos, que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden la secuencia de aminoácidos de OKT3 o un derivado del mismo, por ejemplo OKT3 humanizado, con mutaciones (por ejemplo, una o más sustituciones de aminoácidos) en regiones de estructura. En ciertas modalidades, los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , comprenden la secuencia de aminoácidos de 0KT3 ó un derivado del mismo, por ejemplo 0KT3 humanizado, con una o más sustituciones de residuos de aminoácidos en las regiones de estructura de los dominios VH y/o VL. La presente invención también abarca los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , dichos anticuerpos comprenden la secuencia de aminoácidos de 0KT3 ó un derivado del mismo, por ejemplo OKT3 humanizado, con mutaciones (por ejemplo, una o más sustituciones de residuos de aminoácidos) en las regiones de estructura y variables. La presente invención también proporciona proteínas de fusión que comprenden un anticuerpo que se enlaza inmuno specíficamente a un polipéptido CD3 y un polipéptido heterólogo. Preferiblemente, el polipéptido heterólogo al que se fusiona el anticuerpo es útil para dirigir el anticuerpo a las células T. Los anticuerpos de la invención incluyen derivados que de otra manera se modifican, es decir, mediante la adhesión covalente de cualquier tipo de molécula al anticuerpo tal que la adhesión covalente no evite que el anticuerpo se enlace al antígeno y/o genere una respuesta anti-idiotípica. Por ejemplo, pero no a manera de limitación, los derivados de anticuerpos incluyen anticuerpos que se han modificado, por ejemplo, mediante glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación mediante grupos protectores/bloqueadores conocidos, escisión proteolítica, enlace a un ligando celular u otra proteína, etc. Cualquiera de las numerosas modificaciones químicas puede llevarse a cabo mediante técnicas conocidas, que incluyen, pero no están limitadas a, escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc. Adicionalmente, el derivado puede contener uno o más aminoácidos no clásicos. 5.1.1 Polipéptidos y Anticuerpos con Regiones Fe variantes El uso de anticuerpos monoclonales terapéuticos se limita -por problemas de los efectos secundarios de la "primera dosis". Los efectos secundarios de la primera dosis, van desde síntomas parecidos a una gripa leve hasta toxicidad severa, pueden ser leves a severos, e incluyen síntomas, tales como, fiebre alta, resfriados/escalofríos, dolor de cabeza, tremor, nausea/vómito, diarrea, dolor abdominal, malestar, dolores y complicaciones de músculos/articulaciones, y debilidad generalizada. Se cree que los efectos de la primera dosis son causados por la producción de linfocina y liberación de citocina estimuladas por la región Fe y un anticuerpo que1 se enlaza a, y activa un FcyR en una célula que contiene FcyR. El FcR reconoce las inmunoglobulinas de uno o más isotipos a través del dominio de reconocimiento en la cadena a del receptor Fe. Los receptores Fe se definen por su especificidad a los subtipos de inmunoglobulina . Por ejemplo, los receptores Fe para IgG se mencionan como FcyR. Las diferentes células accesorio que portan receptores Fe para anticuerpos de diferente isotipo, y el isotipo del anticuerpo determina cuáles células accesorio se comprometerán en una respuesta dada (revisado por Ravetch J.V. et al. 1991, Annu.
Rev. Immunol . 9: 457-92; Gerber J.S. et al . 2001 Microbes and Infection, 3: 131-139; Billadeau D.D. et al . 2002, The Journal of Clinical Investigation, 2(109): 161-1681; Ravetch J.V. et al., 2000, Science, 290: 84-89; Ravetch J.V. et al., 2001, Annu. Rev. Immunol . 19:275-90; Ravetch J.V. 1994, Cell 78: 553-60) . La invención por consiguiente abarca moléculas de enlace de CD3 que reducen o eliminan al menos un síntoma asociado con los efectos secundarios de la primera dosis reduciendo o eliminando el enlace del Fe a uno o más FCYR. Tales proteínas de enlace de CD3 comprenden una región Fe variante que tiene una o más modificaciones de aminoácidos, en relación a una región Fe de tipo natural . La modificación disminuye o elimina el enlace del Fe a uno o más FcyRs, en relación a una región Fe de tipo natural, comparable. La modificación típicamente es una sustitución de aminoácidos. Sin embargo, la modificación puede ser una inserción y/o eliminación de aminoácidos. Típicamente, la modificación ocurre en CH2 y/o la región de articulación. Alternativamente, el enlace del Fe a uno o más FcyRs se puede reducir o eliminar alterando o eliminando uno o más grupos de glicosilo en el dominio Fe. La glicosilación Fe se puede alterar o eliminar mediante métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la glicosilación de Fe se puede alterar produciendo el Fe en una célula que sea deficiente en fucosilación (por ejemplo, células nulas fuc6) , o eliminar mediante enzimas de desglicosilación o una modificación de aminoácidos que altere o elimine un sitio de glicosilación (por ejemplo, el sitio de glicosilación N-X-S/T en las posiciones 297-299 en el dominio CH2) . El enlace del FCYR se puede medir utilizando métodos estándar conocidos en la técnica y ejemplificados en la presente. Los anticuerpos de la invención por consiguiente son particularmente útiles debido a que los mismos han reducido o no la toxicidad in vivo causada por la producción de linfocinas o liberación de citocinas. Las afinidades y propiedades de enlace de las moléculas de la invención para un FcR inicialmente se determinan utilizando ensayos in vi tro (ensayos basados bioquímica o inmunológicamente) conocidos en la técnica para determinar las interacciones Fc-FcR, es decir, el enlace específico de una región Fe a un FcR que incluye pero no está limitado a ensayo ELISA, ensayo de resonancia en un plasmón de superficie, ensayos de inmunoprecipitación (Ver la Sección 5.4). Preferiblemente, las propiedades de enlace de las moléculas de la invención, también se caracterizan por ensayos funcionales in vitro para determinar una o más funciones de las células efectoras mediadoras del FcyR (Ver la Sección 5.4) . En modalidades más preferidas, las moléculas de la invención tienen propiedades similares de enlace en modelos in vivo (tales como aquéllas descritas y descubiertas en la presente) a aquéllas en ensayos basados in vi tro. Sin embargo, la presente invención no excluye moléculas de la invención que no exhiban el fenotipo deseado en ensayos basados in vitro aunque exhiban el fenotipo deseado in vivo. 5.1.1.1 Receptores Fcy Cada miembro de esta familia es una glicoproteína de membrana integral, que posee dominios extracelulares relacionados con un conjunto C2 de dominios relacionados con la inmunoglobulina, un dominio de cobertura de una sola membrana y un dominio intracitoplásmico de longitud variable. Existen tres FcyRs conocidos, designados FCYRI(CD64), FCYRII (CD32) , y FCYRIII (CD16) , los cuales exhiben una extensa homología aunque son codificados por distintos genes. Las señales tanto activadoras como inhibidoras se transducen a 'través de los FcyRs después de la ligación. Estas funciones diamétricamente opuestas resultan de diferencias estructurales entre las diferentes isoformas del receptor. En general, el enlace de un dominio Fe complementario al FcyRI, FcyRIIA y FCYRIIIA resulta en la activación de substratos corriente abajo " (por ejemplo, PI3K) y conducen a la liberación de mediadores proinflamatorios . En contraste, el enlace de un dominio Fe complementario a FcyRIIB da como resultado la fosforilación de FcyRIIB y asociación con el dominio SH2 de polifosfato 5 ' -fosfatasa de inosital (SHIP) . La SHIP hidroliza mensajeros de fosfoinositol liberados como una consecuencia de activación de tirosina quinasa mediada por FCYRI, previniendo consecuentemente el influjo de Ca++ intracelular . Por consiguiente la reticulación de FCYRIIB suprime la respuesta de activación a la ligación de FcyR e inhibe la receptividad celular . Los métodos para medir la producción de linfocinas y liberación de citocinas son conocidos y rutinarios en la técnica y se abarcan en la presente. Por ejemplo, la liberación de citocinas se puede medir midiendo la secreción de citocinas que incluyen pero no están limitadas a TNF- , GM-CSF, IFN-?. Ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,491,916; Isaacs et al., 2001, Rheumatology, 40: 724-738; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. La producción de linfocina puede medirse midiendo la secreción de linfocinas que incluyen pero no están limitadas a Interleucina-2 (IL-2) , Interleucina-4 (IL-4) , Interleucina-6 (IL-6) , Interleucina- 12 (IL-12) , Interleucina-16 (IL-16) , PDGF, TGF-a, TGF-ß, TNF-a, TNF-ß, GCSF, GM-CSF, MCSF, IFN-a, IFN-ß, TFN-?, IGF-I, IGF-II. Por ejemplo, ver, Isaacs et al., 2001, Rheumatology, 40: 724-738; Soubrane et al., 1993, Blood, 81(1): 15-19; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Cuando se utiliza en la presente, el término "región Fe" se usa para definir una región terminal C de una cadena pesada IgG. Aunque las delimitaciones pueden variar ligeramente, la región Fe de cadena pesada de IgG humana se define que se extienden desde Cys226 hasta el carboxi terminal. La región Fe de una IgG comprende dos dominios constantes, CH2 y CH3. El dominio CH2 de una región Fe de IgG humana usualmente se extiende desde los aminoácidos 231 al aminoácido 341. El dominio CH3 de una región Fe de IgG humana usualmente se extiende desde los aminoácidos 342 a 447. El dominio CH2, de una región Fe de IgG humana (también mencionada como dominio "0?2") usualmente se extiende desde el aminoácido 231-340. El dominio CH2 es único en que no coincide estrechamente con otro dominio. Más bien, se interponen dos cadenas de carbohidrato ramificadas enlazadas a N, entre los dos dominios CH2 de una IgG natural intacta. En las modalidades preferidas, la invención abarca moléculas que comprenden una región Fe variante, en donde dicha región Fe variante comprende al menos una modificación de aminoácidos en relación a la región Fe de tipo natural, la cual región Fe variante no enlaza ningún FcyR, como se determina mediante ensayos estándar conocidos en la técnica y descritos en la presente, en relación a una molécula comparable que comprende la región Fe de tipo natural. En una modalidad específica, una o más modificaciones de aminoácidos las cuales anulan el enlace a todos los FCYRS, comprenden regiones Fe las cuales tienen una fenilalanina en la posición 233; ó una arginina en la posición 238; ó una alanina en la posición 265; ó un ácido glutámico en la posición 265; ó una alanina en la posición 270; ó una asparagina en la posición 270; ó una alanina en la posición 297; ó una glutamina en la posición 297; ó una fenilalanina en la posición 298; ó una asparagina en la posición 298; ó ningún aminoácido en la posición 299 diferente a la serina o treonina; ó una alanina en la posición 265 y en la posición 297; ó una alanina en la posición 265; y una glutamina en la posición 297; ó un ácido glutámico en la posición 265 y una alanina en la posición 297; ó un ácido glutámico en la posición 265 y una glutamina en la posición 297; ó una alanina en la posición 234 y una alanina en la posición 235. En otra modalidad, una o más modificaciones de aminoácidos las cuales anulan el enlace a todos los FcyRs, comprenden combinaciones de las modificaciones listadas en la presente o combinaciones de las modificaciones listadas en la presente con cualquiera que pueda conferir enlace nulo al FcyRIIIA, FCYRIIIB, y FCYRIIA cuando se determina mediante los métodos descritos en la presente o conocidos para un experto en la técnica.
La invención abarca métodos para reducir o eliminar al menos 'un síntoma asociado con el efecto secundario de la primera dosis en un paciente, que comprenden administrar una cantidad efectiva de uno o más anticuerpos de la invención. Los métodos de la invención reducen al menos un síntoma asociado con el síndrome de liberación de citocinas, que incluye pero no está limitado a fiebre alta, resfriados/escalofríos, dolor de cabeza, tremor, nausea/vómito, diarrea, dolor abdominal, malestar, dolores y complicaciones en músculos/articulaciones, y debilidad generalizada . La presente invención proporciona anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , los cuales tienen una vida media prolongada in vivo. En particular, la presente invención proporciona, anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , los cuales tienen una vida media en un animal, preferiblemente un mamífero y más preferiblemente un humano, mayor de 3 días, mayor de 7 días, mayor de 10 días, preferiblemente mayor de 15 días, mayor de 25 días, mayor de 30 días, mayor de 35 días, mayor de 40 días, mayor de 45 días, mayor de 2 meses, mayor de 3 meses, mayor de 4 meses, ó mayor de 5 meses. Para prolongar la circulación en suero de los anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de una sola cadena y fragmentos Fab) in vivo, por ejemplo, se pueden adherir moléculas poliméricas inertes tales como polietilenglicol (PEG) de alto peso molecular a los anticuerpos con o sin un enlazador multifuncional ya sea a través de conjugación de punto específico del PEG al N terminal o C terminal de los anticuerpos o mediante grupos de épsilon-amino presentes en residuos de lisina. Se utilizará derivación polimérica lineal o ramificada que da como resultado la pérdida mínima de actividad biológica. El grado de conjugación se puede monitorear estrechamente mediante SDS-PAGE y espectrometría de masas para asegurar la conjugación apropiada de moléculas de PEG a los anticuerpos. El PEG sin reaccionar se puede separar de los conjugados de anticuerpo-PEG mediante exclusión por tamaño o mediante cromatografía de intercambio de iones. Los anticuerpos derivados de PEG se pueden probar para la actividad enlazadora así como para la eficacia in vivo utilizando métodos bien conocidos para aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, mediante inmunoensayos descritos en la presente. También se pueden generar anticuerpos que tengan una vida media incrementada in vivo introduciendo una o más modificaciones de aminoácidos (es decir, sustituciones, inserciones o eliminaciones) en un dominio constante de IgG, o fragmento enlazador de FcRn del mismo (preferiblemente un Fe o fragmento de articulación-dominio Fe) . Ver, por ejemplo, Publicación Internacional No. WO 98/23289; Publicación Internacional No. WO 97/34631; y Patente Norteamericana No. 6,277,375, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. 5.1.2 Conjugados de Anticuerpo La presente invención abarca anticuerpos o fragmentos de enlace de antígenos que se enlazan inmunoespecíficamente a; un polipéptido CD3 recombinantemente fusionado o químicamente conjugado (incluyendo conjugaciones tanto covalentes como no covalentes) a un polipéptido heterólogo (o un fragmento del mismo, preferiblemente al menos 5, al menos 10, al menos 20, al menos 30, al menos 40, al menos 50, al menos 60, al menos 70, al menos 80, al menos 90 ó al menos 100 aminoácidos contiguos del polipéptido) para generar proteínas de fusión. La fusión no necesariamente requiere ser directa, aunque puede ocurrir a través de secuencias enlazadoras. Por ejemplo, pueden utilizarse anticuerpos para dirigir polipéptidos heterólogos a tipos de células particulares (por ejemplo, células T) , ya sea in vitro o in vivo, fusionando o conjugando los anticuerpos a anticuerpos específicos para receptores de superficie celular particular tales como, por ejemplo, CD4 y CD8. La presente invención también abarca anticuerpos o fragmentos de enlace de antígenos de los mismos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 fusionado a secuencias marcadoras, tales como un péptido para facilitar la purificación. En modalidades preferidas, la secuencia de aminoácidos marcadora es un péptido de hexa-histidina, tal como la etiqueta provista en un vector pQE (QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311) , entre otros, muchos de los cuales están disponibles comercialmente . Como se describe en Gentz et al, 1989, Proc . Nati. Acad. Sci . USA 86:821-824, por ejemplo, la hexa-histidina proporciona una purificación conveniente de la proteína de fusión. Otras etiquetas de péptidos útiles para la purificación incluyen, pero no están limitadas a, la etiqueta "HA" de hemaglutinina, la cual corresponde a un epitope derivado de la proteína hemaglutinina de influenza (Wilson et al., 1984, Cell 37:767) y la etiqueta "flag" . La presente invención además abarca anticuerpos o fragmentos de enlace al antígeno de los mismos, que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 conjugado a un agente el cual tiene un beneficio terapéutico potencial. Un anticuerpo o fragmento de enlace de antígeno del mismo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , puede conjugarse a una porción terapéutica tal como una citotoxina, por ejemplo, un agente citostático o citocidal, un agente el cual tiene un beneficio terapéutico potencial, o un ion de metal radioactivo, por ejemplo, alfa-emisores. Una citotoxina .o agente citotóxico incluye cualquier agente que sea dañino para las células. Los ejemplos de una citotoxina o agente citotóxico incluyen, pero no están limitados a, paclitaxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina, vinblastina, colchina, doxorubicina, daunorubicina , dihidroxi-antracin-diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-deshidrotestosterona, glucocorticoides , procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, y puromicina y análogos u homólogos de los mismos. Los agentes que tienen un beneficio terapéutico potencial incluyen, pero no están limitados a, antimetabolitos (por ejemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluororacil-decarbazina) , agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, tioepa-clorambucil , melfalan, carmustina (BSNU) y lomustina (CCNU) , ciclotosfamida, busulfan, dibromomanitol , estreptozotocina, mitomicina C> y cisdiclorodiamina de platino (II) (DDP) cisplatina) , antraciclinas (por ejemplo, daunorubicina (anteriormente daunomicina) y doxorubicina) , antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina) , bleomicina, mitramicina, y antramicina (AMC) ) , y agentes anti-mitóticos (por ejemplo, vincristiná y vinblastina) .
Además, un anticuerpo o un fragmento de enlace de antígeno del mismo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , puede conjugarse a un agente terapéutico o porción de fármaco que modifica una respuesta biológica dada. Los agentes que tienen un beneficio terapéutico potencial o porciones de fármaco, no se interpretaran como limitados a agentes terapéuticos químicos, clásicos. Por ejemplo, la porción de fármaco puede ser una proteína o polipéptido que posea una actividad biológica deseada. Tales proteínas pueden incluir, por ejemplo, una toxina tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, o toxina de difteria; una proteína tal como factor de necrosis tumoral, interferón a ("IFN-a") , interferón ß ("IFN-ß") , factor de crecimiento de nervios ("NFG"), factor de crecimiento derivado de plaquetas ("PDGF"), activador de plasminógeno de tejido ("TPA"), un agente apoptótico, por ejemplo, TNF- , TNF-ß, AIM I (ver, Publicación Internacional No. WO 97/33899), AIM II (ver, Publicación Internacional No. WO 97/34911), Ligando Fas (Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6:1567-1574), y VEGF (ver, Publicación Internacional No. WO 99/23105), un agente trombótico o un agente anti-angiogénico, por ejemplo, angiostatina o endostatina; o, un modificador de respuesta biológica tal .corno, por ejemplo, una linfocina (por ejemplo, interleucina-1 ("IL-1"), IL-2 IL-6, IL-10, factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos ("GM-CSF")/ y factor estimulante de colonias de granulocitos ("G-CSF")), o un factor de crecimiento (por ejemplo, hormona del crecimiento ( "GH" ) ) . Las técnicas para conjugar tales porciones terapéuticas con anticuerpos, son bien conocidas, ver, por ejemplo, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cáncer Therapy" , en Monoclonal Antibodies And Cáncer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", en Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cáncer Therapy: A Review" , en Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cáncer Therapy" , en Monoclonal Antibodies For Cáncer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985); y Thorpe et al., 1982, Immunol . Rev. 62: 119-58. Un anticuerpo o un fragmento de enlace de antígeno del mismo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, se puede conjugar a un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpos que se describe en Segal eñ la Patente Norteamericana No. 4,676,980, la cual se incorporá en la presente como referencia en su totalidad. Los anticuerpos o fragmentos de enlace de antígeno de los mismos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , pueden adherirse a soportes sólidos, los cuales son particularmente útiles par la purificación de células inmunes CD3+ tales como las células T. Tales soportes sólidos incluyen, pero no están limitados a, vidrio, celulosa, poliacrilamida , nilón, poliestireno, cloruro polivinílico o polipropileno . 5.2 Métodos Profilácticos y Terapéuticos La presente invención está dirigida a terapias las cuales involucran administrar moléculas de enlace de CD3, particularmente anticuerpos CD3 anti-humanos , a un sujeto, preferiblemente un sujeto humano, para prevenir, tratar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune. En particular, la presente invención está dirigida a terapias que involucran administrar moléculas de enlace de CD3 , particularmente anticuerpos CD3 anti-humanos, más particularmente formas humanas o humanizadas de anticuerpos CD3 anti-humanos, tales como 0??3?1 (ala-ala), ChAglyCD3 , y visilizumab que tienen dominios Fe que no se enlazan o tienen un enlace significativamente reducido a los receptores Fe, a un sujeto, preferiblemente un sujeto humano, para prevenir, tratar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune, por ejemplo diabetes tipo 1. Los métodos descritos en la presente generalmente son métodos mejorados de administración que permiten la administración de dosificaciones más bajas y/o durante períodos más cortos de tiempo que todavía logran eficacia clínica y evitan la toxicidad. En particular, la invención contempla regímenes de dosificación en los cuales menos de 9,000 g/m2 , preferiblemente, menos de 8,000 µg/m2 , menos de 7,500 µg/m2 , menos de 7,000 µg/m2 , ó menos de 6,000 µg/m2 de anticuerpo CD3 anti -humano total en la duración de la dosificación, particularmente de ???3?1 (ala-ala) , o la cantidad equivalente farmacológica de otro anticuerpo CD3 anti-humano, tal como ChAglyCD3 (TRX4™) ó HUM291 (visilizumab; NUVION™) , u 0??3?1 (ala-ala) administrado intravenosamente. La invención contempla además métodos en los cuales se administra crónicamente al paciente una o más rondas adicionales del régimen de tratamiento de . anticuerpo CD3 anti-humano aproximadamente 6 meses, 9 meses, 12 meses, 18 meses, 2 años, .3 años ó 5 años después del tratamiento inicial, dependiendo o no de ciertos parámetros clónicos, o se administra otra ronda de tratamiento con anticuerpo CD3 anti-humano aproximadamente cada 6 meses, 9 meses, 12 meses, 18 meses, 2 años, 3 años ó 5 años, dependiendo o no de ciertos parámetros clínicos.
Los ejemplos de desórdenes autoinmunes que pueden tratarse administrando las moléculas de la invención incluyen, pero no están limitados a, alopecia areata, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolípidos , enfermedad autoinmune de Addison, padecimientos autoinmunes de la glándula adrenal, anemia hemolítica autoinmune, hepatitis autoinmune, ooforitis y orquitis autoinmune, trombocitopenia autoinmune, enfermedad de Behcet, penfigoide hulloso, cardiomiopatía, dermatitis por gluten celiaco, síndrome de disfunción inmune por fatiga crónica (CFIDS) , polineuropatía desmielinizante , inflamatoria, crónica, síndrome de Churg-Strauss , penfigoide cicatricial, síndrome CREST, enfermedad por aglutinina fría, enfermedad de Crohn, lupus discoideo, crioglobulinemia mixta esencial, fibromiositis-fibromialgia, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, fibrosis pulmonar idiopática, trombocitopenia purpura idiopática (ITP) , enfermedad del intestino irritable (IBD) , neuropatía a IgA, artritis juvenil, liquen plano, lupus eritematoso, enfermedad de Meniere, enfermedad de los tejidos conectivos mixtos, esclerosis múltiple, diabetes mellitus tipo 1 ó inmüno-mediada, miastenia grave, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarLeritis nodosa, policrondritis , síndromes poliglandulares , polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis , agammaglobulinémia primaria, cirrosis biliar primaria, psoriasis, artritis psoriásica, fenómeno de Raynauld, síndrome de Reiter, Artritis reumatoide, sarcoidosis, escleroderma, síndrome de SjSgren, síndrome de la persona rígida, lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso, artritis takayasu, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, colitis ulcerativa, uveítis, vasculitides tales como vasculitis por dermatitis herpetiforme , vitíligo, y granulomatosis de Wegener. Algunos desórdenes autoinmunes también están asociados con una condición inflamatoria. Por consiguiente existe coincidencia entre lo que se considera un desorden autoinmune y un padecimiento inflamatorio. Por lo tanto, algunos desórdenes autoinmunes también pueden caracterizarse como desórdenes inflamatorios. Los ejemplos de desórdenes inflamatorios los cuales se pueden prevenir, tratar o manejar de acuerdo con los métodos de la invención incluyen, pero no están limitados a, asma, encefalitis, padecimiento de inflamación del colon, padecimiento pulmonar obstructivo crónico (COPD) , desórdenes alérgicos, fibrosis pulmonar, espondiloartropatía indistinguible, artropatía indistinguible, artritis, osteolisis inflamatoria, e inflamación crónica resultante de infecciones virales y bacterianas crónicas. Los ejemplos de los tipos de psoriasis las cuales se pueden tratar de acuerdo con las composiciones y métodos de la invención incluyen, pero no están limitados a, psoriasis en placas, psoriasis pustulosa, psoriasis eritrodérmica, psoriasis gotosa y psoriasis inversa. 5.2.1 Diabetes La diabetes mellitus mediada por el sistema inmune o diabetes tipo 1 es causada por una respuesta autoinmune en la cual las células ß que producen insulina del páncreas gradualmente se destruyen. Se cree que la destrucción de las células ß se media en gran medida por las CLTs (células T CD8+) . La etapa temprana del padecimiento, llamado insulitis, se caracteriza por la infiltración de leucocitos en el páncreas y está asociado tanto con la inflamación pancreática como con la liberación de anticuerpos citotóxicos anti-células ß. Las etapas tempranas del padecimiento frecuentemente se pasan por alto o diagnostican erróneamente como síntomas clínicos de diabetes, típicamente se manifiestan sólo después de que aproximadamente el 80% de las células ß se han destruido. Aún con terapia inmunosupresora, las poblaciones de células ß no se recuperan a un grado significativo; por lo tanto, una vez que ocurren los síntomas clínicos, el diabético tipo 1 normalmente depende de la insulina de por vida. Actualmente la insulina es la única terapia estándar para tratar síntomas de diabetes tipo 1. Aunque fármacos inmunosupresores tales como metotrexato y ciclosporina mostraron ser una promesa clínica temprana en el tratamiento de la diabetes tipo 1, por ejemplo, mantenimiento de la función de las células ß, así como con todos los inmunosupresores generales, su uso prolongado estuvo asociado con una serie de efectos secundarios severos. El uso de la invención en el contexto de la diabetes por lo tanto abarca métodos para mantener/proteger los niveles y la funcionalidad de las células ß que existen en el momento del tratamiento. En una modalidad específica, la terapia de anticuerpos CD3 anti-humanos no se usa para el tratamiento de diabetes aguda sino más bien para prevenir la progresión del padecimiento en individuos recién diagnosticados, incluyendo niños diagnosticados con diabetes juvenil (ver Herold et al., 2005, Diabetes 54:1763-1769). En una modalidad específica, se usa terapia de CD3 anti -humana solamente en pacientes que tienen la función de células ß residuales cuando se determina mediante los métodos descritos en la presente o conocidos para un experto en la técnica. En otra modalidad, se usa terapia de anticuerpos CD3 anti-humanos para mantener la función de las células ß trasplantadas en receptores de trasplante de páncreas . En modalidades alternativas, la invención abarca la administración de anticuerpos CD3 anti-humanos a individuos predispuestos a desarrollar diabetes tipo 1, pero que no cumplen con los criterios de diagnóstico que se establecen por la Asociación Americana de Diabetes o la Inmunología de la Sociedad de Diabetes para prevenir o retardar el inicio de la diabetes tipo 1 y/o para prevenir o retrasar la necesidad de administración de insulina a tales pacientes. En ciertas modalidades, los factores de alto riesgo para la identificación de sujetos predispuestos de acuerdo con esta modalidad, son que tienen parientes en primer y segundo grado con diabetes tipo 1 diagnosticada, un nivel de glucosa por problemas de ayuno (es decir, al menos una determinación de un nivel de glucosa de 100-125 mg/dl después del ayuno (8 horas sin alimento)), una tolerancia deteriorada a la glucosa en respuesta a una OGTT de 75 g (es decir, al menos una determinación de un nivel de glucosa de 2 horas de 140-199 mg/dl en respuesta a una OGTT de 75 g) , un tipo HLA de DR7 en un caucásico, un tipo HLA de DR4 en una persona de ascendencia africana, un tipo HLA de DR9 en una persona de ascendencia japonesa, exposición a virus de la niñez (por ejemplo, virus coxsackie B, enterovirus, adenovirus, rubéola, citomegalovirus , virus Epstein-Barr) , un diagnóstico positivo de acuerdo a criterios aceptados en la técnica de al menos otro desorden autoinmune (por ejemplo, padecimiento tiroideo, padecimiento celiaco) , y/o la detección de auto-anticuerpos, particularmente ICAs, en el suero u otros tejidos. En ciertas modalidades, el sujeto identificado como predispuesto a desarrollar diabetes tipo 1 de acuerdo a los métodos de la invención, tiene al menos uno de los factores de riesgo descritos en la presente y/o que se conocen en la técnica., La invención también abarca la identificación de sujetos predispuestos al desarrollo de diabetes tipo 1, en donde dicho sujeto presenta una combinación de dos o más, tres o más, cuatro o más, o más de cinco de los factores de riesgo descritos en la presente o conocidos en la técnica. Los autoanticuerpos en suero asociados con la diabetes tipo 1 o con una predisposición para el desarrollo de diabetes tipo 1 son autoanticuerpos de células de las isletas de Langerhans (por ejemplo, autoanticuerpos anti - ICA512 ) , autoanticuerpos de ácido glutámico decarbamilasa (por ejemplo, autoanticuerpos anti-GAD65) , y/o autoanticuerpos anti-insulina. De acuerdo con esto, en un ejemplo específico de acuerdo con esta modalidad, la invención abarca el tratamiento de un individuo con autoanticuerpos detectables asociados tcon una predisposición al desarrollo de diabetes tipo 1 ó asociados con diabetes tipo 1 en etapa temprana (por ejemplo, autoanticuerpos anti-IA2, anti-ICA512, anti-GAD o antiinsulina) , en donde dicho individuo no ha sido diagnosticado con diabetes tipo 1 y/o es un pariente en primer o segundo grado de un diabético tipo 1. En ciertas modalidades, la presencia de los autoanticuerpos se detecta mediante ELISA, radioensayo (ver, por ejemplo, Yu et al., 1996, J. Clin. Endocrinol . Metab. 81:4264-4267), o mediante cualquier otro método de detección inmunoespecífica de anticuerpos, descrito en la presente o que son conocidos para un experto en la técnica. La función de las células ß antes de, durante, y después de la terapia, puede evaluarse mediante los métodos descritos en la presente o mediante cualquier método conocido para un experto en la técnica. Por ejemplo, el grupo de investigación de Ensayo de Control y Complicaciones de la Diabetes (DCCT) ha .establecido el monitoreo del porcentaje de hemoglobina glicosilada (HA1 y HAlc) como el estándar para la evaluación del control de glucosa en sangre (DCCT, 1993, N. Engl . J. Med. 329:977-986). Alternativamente, puede utilizarse la caracterización de necesidades de insulina diaria, niveles/respuesta del péptido C, episodios hipoglicémicos, y/o FPIR como marcadores de la función de las células ß o para establecer un índice terapéutico (Ver Keymeulen et al., 2005, N. Engl. J. Med. 352:2598-2608; Herold et al., 2005, Diabetes 54: 1763-1769; Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2004/0038867 Al; y Greenbaum et al., 2001, Diabetes 50:470-476, respectivamente). Por ejemplo, la FPIR se calcula como la suma de los valores de insulina en 1 y 3 minutos post-IGTT, los cuales se realizan de acuerdo a los protocolos del Estudio de Registro de Anticuerpos de Células de Islotes del Usuario (ver, por ejemplo, Bingley et al., 1996, Diabetes 45:1720-1728 y McCulloch et al., 1993, Diabetes Care 16 : 911-915) . 5.2.2 Esclerosis Múltiple El diagnóstico de MS típicamente requiere múltiples evaluaciones neurológicas con el fin de excluir otras causas más comunes de los síntomas presentados. Desde 2001, el Panel Internacional en Diagnóstico de MS ha recomendado criterios de diagnóstico revisados para una determinación de esclerosis múltiple que incluyen avances en la tecnología MRI (por ejemplo, diagnóstico por imágenes mejorado de lesiones) y otros métodos de diagnóstico paraclínicos . Los criterios actualizados han sido llamados los criterios McDonald llamado así por el autor principal del reporte, y representan mejoras por encima de los criterios de diagnóstico previos, es decir, los criterios Poser y Schumacher (ver, McDonald et al., 2001, Ann. Neurol. 50:121-127). Los estudios de la historia natural de la MS sugieren que existen diferentes patrones de actividad del padecimiento aunque se reconocen cuatro variedades principales: MS Reincidente/Remitente (RRMS) , MS Progresiva Secundaria (SPMS) , MS Progresiva Reincidente (PRMS) , y MS Progresiva Primaria (PPMS) (ver, por ejemplo, Lublin et al., 1996, Neurology 46:907-911). La distinción entre las variedades depende de la frecuencia y severidad de los ataques, y de la progresión de los mismos. La RRMS se caracteriza por una recuperación total o parcial entre ataques, se definen con una estabilidad general de condición de línea base que tiene MS reincidente-remitente. En algunos casos, la RRMS incluye MS "benigna", caracterizada por ataques escasos y mínima discapacidad diez años después del diagnóstico de MS . Los pacientes que experimentan RRMS constituyen aproximadamente el 80-90% de los enfermos de MS . De estos, aproximadamente el 50% tendrá dificultad al caminar 15 años después de la aparición y 80% al final (después de 25 años) experimentarán progresión gradual de discapacidad con o sin ataques. Los pacientes que primero experimentan exacerbaciones y que después experimentan progresión gradual de discapacidad tienen SPMS. Aproximadamente el 10-15% de pacientes con MS no experimentan un ataque inicial. Aquellos pacientes que gradualmente empeoran después de la aparición del primer síntoma tienen PPMS . Unos cuantos pacientes con MS progresiva primaria más tarde experimentarán una exacerbación; estos pacientes tienen PRMS . Las pruebas clínicas para el diagnóstico y/o monitoreo de la progresión de MS incluyen, por ejemplo, escaneo por imágenes de resonancia magnética (MRI) para detectar lesiones 0 monitorear el tamaño de las lesiones, punción lumbar para detectar la evidencia de inflamación, una prueba potencial evocada (ojos, oídos, piel) para medir la velocidad a la cual pasan los mensajes del cerebro a los nervios en respuesta a un estímulo (visual, auditivo, o dolor, respectivamente), el uso de la escala de estado de discapacidad expandida Kurtzke (EDSS) para evaluar la severidad de los síntomas, urinalisis para medir el nivel de material similar a la proteína básica de mielina, presente en una muestra de orina, que mide la atrofia en el cerebro o médula espinal, y que detecta agujeros negros (áreas en el cerebro que emiten señales muy bajas en un escaneo MRI) . De acuerdo con esto, la invención abarca el uso de un anticuerpo anti-CD3 de la invención para el tratamiento de esclerosis múltiple en pacientes que exhiben una o más indicaciones de tener el padecimiento, o en donde se ha establecido un diagnóstico de acuerdo a los criterios McDonald. Mientras que no esté bajo un mecanismo particular de acción, la administración del anticuerpo anti-CD3, y en particular, el hOKT3yl ala-ala, lleva al tratamiento de desórdenes autoinmunes, incluyendo por ejemplo, diabetes tipo 1 y MS, mediante la inducción de tolerancia inmunológica . Múltiples estudios han identificado varios posibles mecanismos mediante los cuales el ????3?1 ala-ala puede inducir tolerancia incluyendo la inducción de anergia de células T, un proceso mediante el cual las células T se vuelven inactivas y fallan en reaccionar a sus propios antígenos; activación de poblaciones TReg, sub-poblaciones recientemente identificadas de células T que se expanden mediante hOKT3Yl-ala-ala in vivo y ejercen efectos inhibidores dominantes en células T auto-reactivas; y producción mejorada de citocinas de tipo Th2 inmuno-reguladoras tales como IL-10 y TGF(3, las cuales contribuyen a la supresión mediada por Tre? in vivo (ver, por ejemplo, Kohm et al., 2005, Int. Rev. Immunol . 24:361-392, Filippi et al., 2005, Int. Rev. Immunol. 24:341-360, y Chen et al., 2004, Cell. Mol. Immunol. 1:328-335). 5.2.3 Psoriasis La psoriasis es un padecimiento hiperproliferativo, inflamatorio, crónico, de la piel que afecta aproximadamente al 1-2% de la población general con hombres y mujeres afectados en igual número. (Nevitt, G.J. et al., 1996, British J. of Dermatology 135:533-537). Cada año se reportan aproximadamente 150,000 nuevos casos de psoriasis y aproximadamente 400 muertes por psoriasis (Stem, R.S., 1995, Dermatol . Chn. 13:717-722) . El tipo más común de psoriasis es el síndrome crónico en placas. La condición es crónica para muchos enfermos y consiste de períodos de remisión y reincidencia durante el transcurso del padecimiento (Ashcroft, D.M., et al., 2000, J. of Clin. Pharm. And Therap. 25:1-10). La psoriasis se caracteriza por placas endurecidas de descamación eritematosa, más comúnmente localizadas en el cuero cabelludo o los aspectos extensores de los codos y rodillas, aunque puede ocurrir en cualquier sitio de la piel. Las opciones existentes de tratamiento actualmente disponibles para la psoriasis incluyen agentes tópicos, fototerapia y agentes sistémicos. Los tratamientos tópicos son terapia de primera línea para pacientes con psoriasis en placas, leve a moderada. El tratamiento sistémico generalmente se prescribe para casos severos de psoriasis cuando la terapia tópica es impráctica o infectiva. La fototerapia se puede administrar ya sea sola o en combinación con agentes tópicos o sistémicos. Desafortunadamente, cada una de estas opciones de tratamiento está asociada con efectos secundarios severos. La mayoría de los agentes tópicos disponibles para el tratamiento de psoriasis, están asociados con irritación de la piel, toxicidad y posible carcinogenicidad (Ashcroft, D.M., et al., 2000, . of Clin. Pharm, and Therap. 25:1-10). La fototerapia, ya sea de banda ancha (UVB) u onda larga (UVA) , está asociada con riesgos a corto plazo tales como vesiculación, nausea, eritema, dolor de cabeza y dolor en la piel así como riesgos a largo plazo de queratosis actínica, envejecimiento prematuro de la piel, pigmentación irregular y carcinoma de células escamosas el cual se reporta en una cuarta parte de los pacientes (Stern, R.S., 1994, Cáncer 73:2759-2764). Los agentes sistémicos también están asociados con efectos secundarios adversos, y la mayoría están restringidos para pacientes gestantes. En particular, el metotrexato, el cual se considera la 'norma de oro' para el tratamiento de psoriasis severa, conlleva un riesgo de hepatotoxicidad con el uso a largo plazo. Además, se recomienda que los pacientes tengan una biopsia lineal realizada en o cerca del comienzo de cada tratamiento y después de cada dosis acumulativa de 1.0-1.5 mg de MTX (Roenigk, H.H. et al., 1988, J. of the Am. Acad. Of Dermatology) . Cuando se proporciona información a los pacientes sobre los posibles efectos adversos de las terapias actualmente disponibles para la psoriasis, muchos frecuentemente optan por vivir con la condición en vez de recibir tratamiento (Greaves M. ., 1995, New England J. of Medicine 332:581-588). Por consiguiente, permanece la necesidad de mejores métodos para tratar la psoriasis que las terapias actualmente disponibles. El uso de la invención en el contexto de la psoriasis por lo tanto abarca métodos para tratar las fases agudas del padecimiento así como para prevenir la recurrencia de los síntomas de la psoriasis. La respuesta a la terapia anti-CD3 en el contexto de la psoriasis, puede evaluarse mediante los métodos descritos en la presente o mediante cualquier método conocido para un experto ordinario en la técnica. Los métodos comunes utilizados para monitorear los síntomas de la psoriasis incluyen, pero no están limitados a, el índice de Severidad y Área de Psoriasis (PAST) , Evaluación Global del Médico (PGA) y Puntuación de Psoriasis NPF (NPF-PS) (Ver Ashcroft et al., 1999, Br. J. Dermatol . 141: 185-191; van der Kerkhof et al., 1997, Br. J. Dermatol. 137:661-662 y Krueger et al., 1999, National Psoriasis Foundation Psoriasis Forum 5:1-5., respectivamente) . 5.2.4 Artritis Reumatoide La artritis reumatoide (RA) es un desorden autoinmune donde el sistema inmune del cuerpo identifica inapropiadamente como extrañas las membranas sinoviales que secretan el fluido lubricante en las articulaciones. Dando como resultado inflamación, y el cartílago y tejidos en y alrededor de las articulaciones se dañan o destruyen. En varios casos, esta inflamación se extiende a otros tejidos de articulaciones y cartílago circundante, donde la misma puede deteriorar o destruir el hueso y cartílago y llevar a deformidades en las articulaciones. El cuerpo reemplaza el tejido dañado con tejido cicatrizado o conectivo, causando que los espacios normales dentro de las articulaciones se vuelvan estrechos y los huesos se fusionan conjuntamente. La artritis reumatoide , crea rigidez, hinchazón, fatiga, anemia, pérdida de peso, fiebre, y frecuentemente, dolor paralizante. Algunos síntomas comunes de artritis reumatoide incluyen rigidez en articulaciones al levantarse que dura una hora o más tiempo; hinchazón en un dedo específico o en las articulaciones de las muñecas; hinchazón en el tejido blando alrededor de las articulaciones; e hinchazón en ambos lados de la articulación. La hinchazón puede ocurrir con o sin dolor, y puede empeorarse progresivamente o permanecer igual durante años antes de que progrese. Además de la artritis reumatoide, otros tipos de artritis asociadas con inflamación autoinmune incluyen los siguientes: artritis psoriásica, síndrome de Reiter y artritis por espondilitis anquilosante. La artritis reumatoide se presenta en articulaciones en ambos lados del cuerpo (tales como ambas manos, muñecas o rodillas) . Esta simetría ayuda a distinguir la artritis reumatoide de otros tipos de artritis. Además de afectar las articulaciones, la artritis reumatoide ocasionalmente puede afectar la piel, los ojos, pulmones, corazón, sangre o nervios. La artritis reumatoide afecta aproximadamente al 1% de la población mundial y potencialmente puede provocar discapacidad. Existen aproximadamente 2.9 millones de incidencias de artritis reumatoide en los Estados Unidos. Las mujeres se ven afectadas dos a tres veces más que los' hombres.
La edad típica en que la artritis reumatoide ocurre está entre 25 y 50. La artritis reumatoide juvenil afecta a 71,000 jóvenes norteamericanos (de dieciocho años o menos) , afectando seis veces más a las chicas que a los chicos. Actualmente la terapia disponible para la artritis se enfoca en reducir la inflamación de las articulaciones con medicaciones anti- inflamatorias o inmunosupresoras . La primera línea de tratamiento de cualquier artritis usualmente son los anti-inflamatorios, tales como aspirina, ibuprofeno e inhibidores Cox-2 tales como celecoxib y rofecoxib. Los "fármacos de segunda línea" incluyen, oro, metotrexato y esteroides. Aunque estos son tratamientos bien establecidos para la artritis, muy pocos pacientes remiten en estas líneas de tratamiento solo. Avances recientes en la comprensión de la patogénesis de la artritis reumatoide, han llevado al uso de metotrexato en combinación con anticuerpos para citocinas o receptores solubles recombinantes. Sin embargo, sólo aproximadamente el 50% de los pacientes tratados con una combinación de metotrexato y agentes anti-TNF-a tales como receptores solubles recombinantes para TNF-a, muestra una mejora clínicamente significativa. Muchos pacientes siguen siendo resistentes a pesar del tratamiento. No obstante permanecen cuestiones de dificultad con el tratamiento para pacientes con artritis reumatoide. Muchos tratamientos actuales tienen una alta incidencia de efectos secundarios o no pueden prevenir completamente la progresión del padecimiento . El uso de la invención en el contexto de la RA por lo tanto abarca métodos para tratar las fases agudas del padecimiento así como para prevenir la recurrencia de los síntomas de RA. La respuesta a los métodos terapéuticos de la invención en el contexto de la RA, pueden evaluarse mediante los métodos descritos en la presente o mediante cualquier método conocido para un experto ordinario en la técnica. Por ejemplo, mucha, aunque no toda, la gente con artritis reumatoide tiene anticuerpos de factor reumatoide en su sangre; sin embargo, la presencia del factor reumatoide en sí mismo no es definitivo para un diagnóstico positivo de RA como otras condiciones que son conocidas las cuales causan que se produzca el factor reumatoide. Por lo tanto, el diagnóstico y evaluación de la artritis reumatoide está basado más comúnmente en una combinación de factores, que incluyen, pero no están limitados a: la localización específica y simetría de articulaciones dolorosas, la presencia de rigidez en las articulaciones en la mañana, la presencia de protuberancias y nodulos bajo la piel (nodulos reumatoidés) , los resultados de pruebas con rayos X que sugieren artritis reumatoide. La invención abarca cualquier método para evaluar la severidad de la condición aceptada en la técnica. Los métodos comunes de evaluación están basados en las respuestas subjetivas del sujeto a los formularios sobre dolor (por ejemplo, el Formulario de Evaluación de la Salud (HAQ) con Discapacidad, Severidad de Dolor y Sub-escalas del Estado de Salud) ; sin embargo, tales evaluaciones subjetivas frecuentemente son confundidas por el funcionamiento fisiológico del sujeto. De acuerdo con esto, se han desarrollado escalas objetivo que permiten una evaluación cuantitativa de la severidad de la artritis reumatoide por el médico tratante, por ejemplo, la Escala de Sevéridad de Artritis Reumatoide ("RASS", ver, por ejemplo, Bardwell et al., 2002, Rheumatology 41:38-45, incorporada en la presente como referencia en su totalidad) . 5.2.5 Trasplante de Tejido El trasplante de tejido entre individuos genéticamente no idénticos da como resultado el rechazo inmunológico del tejido a través de los mecanismos dependientes de las células T. Para prevenir el rechazo alogénico, la inmunosupresión se logra con agentes que generalmente interfieren con la función de las células T modulando la transducción de la señal TcR (ver, por ejemplo, Borel, J. F., 1989, Pharmacol . Rev. 42:260-372; Morns, P. J. , 1991, Curr . Opin. Immunol . 3:748-751; Sigal et al., 1992, Ann. Rev. Immunol. 10:519-560; y L'Azou et al., 1999, Arch. Toxicol. 73:337-345). Además, puesto que el efecto de los agentes inmunosupresores es de corta duración, los receptores de trasplantes normalmente requieren tratamiento para toda la vida de agentes inmunosupresores para evitar el rechazo del trasplante. Los receptores de trasplantes que reciben tratamiento inmunosupresor a largo plazo tienen un alto riesgo de desarrollar infecciones y tumores. Por ejemplo, los pacientes que reciben inmunoterapia están en riesgo más alto de desarrollar linfornas, tumores en la piel y tumores en el cerebro (ver, por ejemplo, Fellstrom et al., 1993, Immunol . Rev. 134:83-98). Como una alternativa a los agentes inmunosupresores generales actualmente utilizados para la prevención del rechazo alogénico, se han utilizado exitosamente anticuerpos monoclonales , incluyendo el OKT3 , para bloquear específicamente los receptores involucrados en la activación de la estimulación de las células T. El uso de la invención en el contexto de trasplante de tejido por lo tanto abarca métodos para tratar las fases agudas del rechazo así como para prevenir la recurrencia de los síntomas del rechazo. La respuesta a los métodos terapéuticos de la invención en el contexto del tejido, pueden evaluarse mediante los métodos descritos en la presente o mediante cualquier método conocido para un experto ordinario en la técnica; sin embargo, actualmente no existe ningún método general, diferente para detectar una frecuencia cada vez mayor de CTL que reconozca los antígenos donadores (descritos infra) , para monitorear si un trasplante está siendo rechazado por un receptor. Aunque la función de algunos trasplantes puede monitorearse directamente (es decir riñon o hígado) , frecuentemente la primera señal explícita de rechazo es una falla fisiológica completa del tejido, a la cual apunta el tejido normalmente está más allá del rescate. 5.2.6 Diagnóstico, Predicción y Evaluación de Desórdenes Autoinmunes Los pacientes con desórdenes autoinmunes generalmente tienen una frecuencia cada vez mayor de CTL que reconoce los autoantígenos . En el contexto del trasplante de tejidos, los pacientes exhibirán una frecuencia cada vez mayor de CTL que reconocen los antígenos específicos de los donadores. Tales CTL auto-reactivos o reactivos a los donadores, pueden detectarse en la sangre periférica o tejidos objetivo. Por ejemplo, en el paciente diabético, el CTL auto-reactivo puede detectarse en tejidos de células de los islotes del páncreas; en el paciente psoriásico, el CTL auto-reactivo puede detectarse en tejidos epidérmicos o dérmicos; en el paciente artrítico, el CTL auto-reactivo puede detectarse en tejidos de células sinoviales y en el receptor de trasplante de órganos, el CTL reactivo al donador puede detectarse en el injerto trasplantado. Puesto que se cree que la generación de CTL auto-reactivo o reactivo al donador precede al desarrollo de autoanticuerpos/anticuerpos donadores y otros indicios de los síntomas clínicos de desórdenes inmunes, la detección del CTL específico puede en algunos casos permitir un diagnóstico más perceptivo y específico del desorden. Los ensayos también pueden utilizarse para cuantificar el número absoluto y la proporción de CTL auto-reactivo presente en una muestra, tal como una muestra de sangre periférica, tanto en sujetos pre-clínicos como en pacientes que han recibido terapia. En algunas modalidades, tanto la severidad como el curso del desorden autoinmune o alogénico puede predecirse y seguirse utilizando tales ensayos. Por ejemplo, el HLA-A 0201 de la molécula clase I HC humana se puede utilizar en combinación con un autoantígeno diabético, por ejemplo IA-2, para detectar el CTL auto-reactivo presente en una muestra de sangre periférica de un sujeto pre-diabético o paciente diabético que actualmente recibe terapia usando los métodos de la invención. Los compuestos de la invención también se pueden usar in vivo en combinación con, por ejemplo, técnicas de diagnóstico por imágenes u otros métodos de detección in vivo para detectar CTLs etiquetados mediante el enlace con compuestos o formulaciones de la invención. Los CTLs específicos de antígenos se pueden detectar usando una amplia variedad de ensayos, incluyendo ensayos de inmunomanchado (por ejemplo, ELISPOT) , ensayos con tetrámero clase 7 MHC, u otros ensayos, que se describen en la presente o que son conocidos para una persona experta en la técnica. El período de tiempo durante el cual pueda evaluarse cualquier biomarcador de progresión del desorden o efectividad terapéutica puede ser el período de tiempo de una sola dosis o un período de tiempo de tratamiento prolongado, por ejemplo, horas, días, semanas o meses. 5.2.7 Métodos Terapéuticos y Profilácticos Las composiciones y métodos de la invención son particularmente útiles para la prevención, tratamiento o mejora de padecimientos mediados por las células T tales como desórdenes autoinmunes caracterizados por la infiltración aumentada por las células T de linfocitos en tejidos afectados, o desórdenes autoinmunes caracterizados por la activación incrementada de las células T y/o presentación y/o reconocimiento de antígenos anormales. Las composiciones y métodos también son útiles para la prevención, tratamiento o mejora de padecimientos inflamatorios caracterizados por la activación incrementada de células T y/o presentación de antígenos anormales. En modalidades específicas, la invención proporciona métodos para tratar, prevenir, manejar o mejorar los síntomas de un padecimiento autoinmune, particularmente la Diabetes Tipo I, esclerosis múltiple, colitis ulcerativa, psoriasis, artritis reumatoide, lupus (particularmente cutáneo) , artritis psoriásica, enfermedad de inflamación del colon (IBD) , efectos del trasplante de órganos, padecimiento de injerto vs . huésped (GVHD) . Preferiblemente, los regímenes de tratamiento descritos en la presente se administran a pacientes en etapas tempranas del padecimiento autoinmune, que exhiben daño moderado del tejido resultante de la reacción inmune y que requieren intervención médica mínima, por ejemplo, bajas dosis de terapia estándar, para manejar el padecimiento. Los regímenes de tratamiento descritos en la presente mantienen un alto nivel de funcionamiento y previenen, hacen más lento o reducen el daño adicional a los tejidos. Por consiguiente, los métodos de la invención pueden reducir la necesidad de terapia adicional para tratar, manejar o mejorar el padecimiento o desorden, y/o los síntomas del mismo. En ciertas modalidades, se administran composiciones farmacéuticas que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos) una o más veces, preferiblemente en un régimen de dosificación administrado en múltiples dosis durante un período de 2 á 20 días, para tratar, manejar o mejorar los síntomas de un desorden de diabetes autoinmune, para prevenir o hacer más lenta la disminución en la función de las células ß, asociáda con la diabetes autoinmune, o para retardar o prevenir el inicio de un desorden de diabetes autoinmune, en un sujeto con una predisposición al desarrollo de la diabetes Tipo 1 como se describe en la presente. En aún otra modalidad, se administran una o más composiciones que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos anti-CD3) una o más veces para prevenir la disminución de la función de las células ß asociada con la diabetes en un sujeto que ha tenido un aloinjerto que comprende tejido de células de los islotes del páncreas. De acuerdo con estas modalidades, pueden evaluarse los cambios en la función de las células ß de un sujeto mediante la caracterización de los requerimientos diarios de insulina, niveles de HAlc, función/niveles del péptido C, frecuencia de episodios hipoglicémicos o FPIR que son conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, el curso de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo á los métodos de la invención, se repite en intervalos de 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, 24 meses, 30 meses, ó 36 meses. En modalidades específicas la eficacia 1 del tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de la invención, se determina como se describe en la presente o como se conoce en la técnica en 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, 24 meses, 30 meses, ó 36 meses subsecuentes al tratamiento previo. En otra modalidad, se administra a un sujeto una o más dosis unitarias de aproximadamente 0. 5-50 Mg/kg, aproximadamente 0.5 -40 M9/kg, aproximadamente 0.5-30 /¿g/kg, aproximadamente 0.5 -20 Mg/kg, aproximadamente 0.5-15 Mg/kg, aproximadamente 0.5 -10 ^g/kg, aproximadamente 0.5-5 g/kg, aproximadamente 1- 5 Mg/kg, aproximadamente 1-10 g/kg, aproximadamente 20-40 /¿g/kg, aproximadamente 20-30 Mg/kg, aproximadamente 22-28 g/kg o aproximadamente 25-26 µ /'k de uno o más anticuerpos anti-CD3 para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune, particularmente la diabetes. En otra modalidad, se administra a un sujeto una o más dosis unitarias de 200 ^g/kg, 178 g/kg, 180 g/kg, 128 g/kg, 100 µ /k , 95 /zg/kg, 90 µ /k , 85 µg/kg, 80 µg/ . , 75 Mg/kg, 70 Mg/kg, 65 Mg/kg, 60 µ / . l 55 Mg/kg, 50 /zg/kg, 45 Mg/kg, 40 µ /kgt 35 µg/ . , 30 µg/kg, 26 µ9/):?? 25 µ / .g, 20 Mg/kg, 15 Mg/kg, 13 µg/kgl 10 Mg/kg, 6.5 Mg/kg, 5 µg/kgl 3.2 g/kg, 3 µg/ .gt 2.5 /¿g/kg, 2 ^g/kg, 1.6 µg/kg, 1.5 g/kg, 1 g/kg, 0.5 Mg/kg, 0.25 µ / l 0.1 g/kg, ó 0.05 µg/ g de uno o más anticuerpos anti-CD3 para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune, particularmente la diabetes . En una modalidad, se administra a un sujeto una o más dosis de 200 µ?/kg o menos, 175 µg/kg o menos, 150 g/kg o menos, 128 g/kg o menos, 100 ^g/kg o menos, 95 g/kg o menos, 90 jug/kg o menos, 85 g/kg o menos, 80 µg/'k.g o menos, 75 g/kg o menos, 70 ^g/kg o menos, 65 ^g/kg o menos, 60 /ig/kg o menos, 55 Mg/kg o menos, 50 µg/'k.g o menos, 45 µ /k.g o menos, 40 g/kg o menos, 35 µg/ .g o menos, 30 g/kg o menos, 25 µ /kg o menos, 20 /ig/kg o menos, 15 /xg/kg o menos, 10 g/kg o menos, 5 /¿g/kg o menos, 2.5 /g/kg o menos, 2 Mg/kg o menos, 1.5 ig/kg o menos, 1 µg/kg o menos, 0.5 µg/kg o menos, 0.25 g/kg o menos, 0.1 Mg/kg o menos, ó 0.05 g/kg o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3 de la invención para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune, tal como pero no limitado a la diabetes. En modalidades particulares, se administra a un sujeto una o más dosis de aproximadamente 5 - 1200 µg/m2 , preferiblemente, 51 - 826 µg/m2. En otra modalidad, se administra a un sujeto una o más dosis unitarias de 1200 µg/m2 , 1150 µ?/??2 , 1100 µg/m2 , 1050 µg/ 2 , 1000 µg/m2 , 950 µg/m2 , 900 µg/m2 , 850 µ /m2 , 800 µg/m2 , 750 µg/ 2 , 700 µg/m2 , 650 µg/m2 , 600 µg/m2 , 550 µg/m2 , 500 µ |x&2 , 450 µg/m2 , 400 µg/m2 , 350 g/m2 , 300 µg/m2 , 250 g/m2 , 200 g/m2 , 150 ^g/m2 , 100 ^g/m2, 50 µg|m2 , 40 g/m2 , ,30 µg/m2 , 20 µg/m2 , 15 g/m2 , 10 µg/m2, ó 5 µg/m2 de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos para prevenir, tratar, hacer más lenta la progresión de, retardar el inicio de o mejorar uno o más síntomas de un padecimiento o desorden autoinmune. En otra modalidad, se administra al sujeto un régimen de tratamiento que comprende una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos , en donde el curso de tratamiento se administra durante 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días ó 14 días. En una modalidad, el régimen de tratamiento comprende administrar dosis de la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos cada día, cada 2° día, cada 3er día ó cada 4o día. En ciertas modalidades, el régimen de tratamiento comprende administrar dosis de la , cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos el lunes, martes, miércoles, jueves de una semana dada y no administrar dosis de la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos el viernes, sábado, y domingo de la misma semana hasta que se hayan administrado 14 dosis, 13 dosis, 12 dosis, 11 dosis, 10 dosis, 9 dosis, u 8 dosis. En ciertas modalidades la dosis administrada es la misma cada día del régimen. En ciertas modalidades, se administra a un sujeto un régimen de tratamiento que comprende una o más dosis de cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 ant i -humanos , en donde la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva es 200 Mg/kg/día, 175 Mg/kg/día 150 g/kg/día, 125 Mg/kg/día, 100 Mg/kg/día, 95 /¿g/kg/día, 90 Mg/kg/día, 85 Mg/kg/día, 80 Mg/kg/día, 75 ¿ig/kg/día, 70 Mg/kg/día, 65 Mg/kg/día, 60 Mg/kg/día, 55 Mg/kg/día, 50 Mg/kg/día, 45 Mg/kg/día, 40 Mg/kg/día, 35 Mg/kg/día, 30 Mg/kg/día, 26 Mg/kg/día, 25 Mg/kg/día, 20 /ug/kg/día, 15 Mg/kg/día, 13 Mg/kg/día, 10 Mg/kg/día, 6.5 µg/kg/día, 5 Mg/kg/día, 3.2 Mg/kg/día, 3 Mg/kg/día, 2.5 g/kg/día, 2 Mg/kg/día, 1.6 Mg/kg/día, 1.5 Mg/kg/día, 1 g/kg/día, 0.5 Mg/kg/día, 0.25 Mg/kg/día, 0. 1 Mg/kg/día, ó 0.05 µg/kg/día ; y/o en donde la cantidad profilácticat o terapéuticamente efectiva es 1200 ^g/m2/día, 1150 ^g/m2/día, 1100 Mg/m2/día, 1050 M /m2/día, 1000 Mg/m2/día, 950 Mg/™2/día, 900 M /m2/d£ , 850 ^g/m2/día, 800 g/m2/día, 750 M /m2/día, 700 Mg/m /día, 650 Mg/™2/día, 600 Mg/m2/día, 550 /m2/día, 500 Mg/™2/día, 450 Mg/m /día, 400 M /m2/día, 350 Mg/m2/d£a, 300 µg/m2/día, 250 µg/m2/día, 200 Mg/m2/día, 150 M /^2/día, 100 µg/m /día, 50 g/m2/día, 40 g/m2/día, 30 µg/m2/día, 20 Mg/m2/día, 10 Mg/m2/día, ó 5 Mg/m2 día. En otra modalidad, la dosis intravenosa es de 1200 Mg/™2 ° menos, 1150 M /m2 ° menos, 1100 M /m2 ° menos, 1050 Mg/m2 ° menos, 1000 Mg/m2 ° menos, 950 Mg/m2 ° menos, 900 M /m2 ° menos, 850 Mg/m2 ° menos, 800 µ9/t?2 o menos, 750 µ?/?t?2 o menos, 700 µ9/p?2 o menos, 650 ^g/m2 o menos, 600 ^g/m2 o menos, 550 µg/m2 o menos, 500 µ?/p? o menos, 450 ^g/m2 o menos, 400 ^g/m2 o menos, 350 ^g/m2 o menos, 300 µg/m2 o menos, 250 µg/m2 o menos, 200 µg/m2 o menos, 150 g/m2 o menos, 100 µg/m2 o menos, 50 µg/m2 o menos, 40 g/m2 o menos, 30 µg/m2 o menos, 20 µg/m o menos, 15 g m2 o menos, 10 o menos, ó 5 µg/m o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3, se administra durante aproximadamente 24 horas, aproximadamente 22 horas, aproximadamente 20 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 16 horas , aproximadamente 14 horas, aproximadamente 12 horas , aproximadamente 10 horas, aproximadamente 8 horas , aproximadamente 6 horas, aproximadamente 4 horas , aproximadamente 2 horas , aproximadamente 1.5 horas , aproximadamente 1 hora, aproximadamente 50 minutos , . aproximadamente 40 minutos , aproximadamente 30 minutos , , aproximadamente 20 minutos , aproximadamente 10 minutos , ¦ aproximadamente 5 minutos , aproximadamente 2 minutos , aproximadamente 1 minuto, aproximadamente 30 segundos, o aproximadamente 10 segundos para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1. La dosificación total en la duración del régimen preferiblemente es un total de menos de 9000 µg/m2 , 8000 µ9/p?2, 7000 µg/m , 6000 g/m2 , y puede ser menor de 5000 g/m2 , "4000 g/m2 , 3000 µg/m2 , 2000 µg/m2 , ó 1000 µg/m2. En modalidades específicas, la dosificación total administrada en el régimen es de 100 /xg/m2 a 200 µg/m2 , 100 g/m2 a 500 µg/m2 , 100 g/m2 a 1000 ^g/m2 , ó 500 µg/m2 a 1000 µg/m . En modalidades preferidas, la dosis aumenta en la primera cuarta, primera mitad o primeros 2/3 de las dosis (por ejemplo, durante los primeros 2, 3, 4, 5, ó 6 días de un régimen de 10, 12, 14, 16, 18 ó 20 días de una dosis por día) del régimen de tratamiento hasta que se logre la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva diaria de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . En ciertas modalidades, se administra a un sujeto un régimen de tratamiento que comprende una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos, en donde la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva se incrementa a, por ejemplo, 0.01 ^g/kg, 0.02 g/kg, 0.04 Mg/kg, 0.05 µg/kg 0.06 µg/kg, 0.08 g/kg/ 0.1 µg/kg, 0.2 g/kg, 0.25 g/kg, 0.5 µg/kg, 0.75 µg/kg, 1 µg/kg, 1.5 µg/kg, 2 µg/kg, 4 µg/kg, 5 µg/kg, 10 g/kg, 15 g/kg, 20 µg/kg, 25 µg/kg, 30 µg/kg, 35 µg/kg, 40 µg/kg, 45 g/kg, 50 µg/kg, 55 µg/kg, 60 µ?/kg, 65 µg/kg, 70 µg/kg, 75 µg/kg, 80 g/kg, 85 µg/kg, 90 µg/kg, 95 g/kg, 100 µg/kg, ó 125 µg/kg cada día; o se incrementa a, por ejemplo, 1 µg/m2 , 5 µg/m2 , 10 g/m2 , 15 ^g/m2 , 20 µg/m2, 30 µg/m2 , 40 µg/m , 50 µg/m2 , 60 µg/m2 , 70 ^g/m2 , 80 µg/m2 , 90 ^g/m2 , 100 µg/m2 , 150 /¿g/m2 , 200 ^g/m2 , 250 ^g/m2 , 300 Mg/m2 , 350 µg/m , 400 g/m , 450 µg/m , 500 ^g/m2 , 550 ^g/m2 , 600 µg/m2 , ó 650 g/m2 , cada día que progresa el tratamiento. En ciertas modalidades, se administra a un sujeto un régimen de tratamiento que comprende una o más dosis de cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos, en donde la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva se incrementa a un factor de 1.25, un factor de 1.5, un factor de 2 , un factor de 2.25, un factor de 2.5, ó un factor de 5 hasta que se alcance la cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva, diaria, de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . En una modalidad específica, se administra intramuscularmente a un sujeto uno o más dosis de 200 µg/kg o menos, preferiblemente 175 g/kg o menos, 150 g/kg o menos, 125 µg/kg o menos, 100 g/kg o menos, 95 g/kg o menos, 90 µg/kg o menos, 85 µg/kg o menos, 80 µg/kg o menos, 75 µg/kg o menos, 70 µg/kg o menos, 65 g/kg o menos, 60 µg/kg o menos, 55 µg/kg o menos, 50 µg/kg o menos, 45 µg/kg o menos, 40 µg/kg p menos, 35 µg/kg o menos, 30 µg/kg o menos, 25 µg/kg o menos, 20 µg/kg o menos, 15 µg/kg o menos, 10 µg/kg o menos, 5 µ^/kg o menos, 2.5 g/kg o menos, 2 µg/kg o menos, 1.5 µg/kg o menos, 1 µg/kg o menos, 0.5 g/kg o menos, ó 0.5 µg/kg o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3 para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune. En otra modalidad, se administra subcutáneamente a un sujeto una o más dosis de 200 g/kg o menos, preferiblemente 175 /xg/kg o menos, 150 g/kg o menos, 125 g/kg o menos, 100 M /kg o menos, 95 ^g/kg o menos, 90 g/kg o menos, 85 ^g/kg o menos, 80 ^g/kg o menos, 75 µg/kg o menos, 70 ^g/kg o menos, 65 /xg/kg o menos, 60 /xg/kg o menos, 55 µg/kg o menos, 50 /xg/kg o menos, 45 /ig/kg o menos, 40 /xg/kg o menos, 35 /xg/kg o menos, 30 /xg/kg o menos, 25 µg/kg o menos, 20 Mg/kg o menos, 15 /xg/kg o menos, 10 g/kg o menos, 5 g/kg o menos, 2.5 g/kg o menos, 2 g/kg o menos, 1.5 g/kg o menos, 1 /¿g/kg o menos, 0.5 /g/kg o menos, ó 0.5 Mg/kg o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3 para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune . En otra modalidad, se administra intravenosamente a un sujeto una o más dosis de 100 g/kg o menos, preferiblemente 95 jug/kg o menos, 90 µg/kg o menos, 85 g/kg o menos, 80 ^g/ g o menos, 75 ^g/kg o menos, 70 ^g/kg o menos, 65 g/kg o menos, 60 g/kg o menos, 55 Mg/kg o menos, 50 /xg/kg o menos, 45 ^g/kg o menos, 40 g/kg o menos, 35 ^g/kg o menos, 30 /g/kg o menos, 25 9/^ o menos, 20 g/kg o menos, 15 g/kg o menos, 10 µ<3/^ o menos, 5 g/kg o menos, 2.5 Mg/kg o menos, 2 g/kg o menos, 1.5 Mg/kg o menos, 1 g/kg o menos, 0.5 ^g/kg o menos, ó 0.5 /xg/kg o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3 para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune. En otra modalidad, la dosis intravenosa de 100 ug/kg o menos, 95 ug/kg o menos, 90 ug/kg o menos, 85 ug/kg o menos, 80 ug/kg o menos, 75 µg/kg o menos, 70 ug/kg o menos, 65 ug/kg o menos, 60 µg/kg o menos, 55 ug/kg o menos, 50 g/kg o menos, 45 g/kg o menos, 40 ug/kg o menos, 35 g/kg o menos, 30 µg/kg o menos, 25 ug/kg o menos, 20 µg/kg o menos, 15 ug/kg o menos, 10 ug/kg o menos, 5 ug/kg o menos, 2.5 g/kg o menos, 2 ug/kg o menos, 1.5 Mg/kg o menos, 1 ug/kg o menos, 0.5 Mg/kg o menos, ó 0.5 g/kg o menos de uno o más anticuerpos anti-CD3, se administra durante aproximadamente 6 horas, aproximadamente 4 horas, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 1.5 horas, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 50 minutos, aproximadamente 40 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 10 minutos, aproximadamente 5 minutos, aproximadamente 2 minutos, aproximadamente 1 minuto, aproximadamente 30 segundos o aproximadamente 10 segundos para prevenir, tratar o mejorar uno o más síntomas de un desorden autoinmune. En modalidades específicas en los cuales se administran dosis cada vez mayores durante los primeros días del régimen de dosificación, la dosis del día 1 del régimen es de 5 - 100 ug/m2/día, preferiblemente 51 g/m2/día y asciende a la dosis diaria que se recita anteriormente enseguida por el día 3, 4, , 6 ó 7. Por ejemplo, el día 1, se administra al sujeto una dosis de aproximadamente 51 ^g/m2/día, el día 2 aproximadamente 103 ^g/m2/día, el día 3 aproximadamente 207 ^g/m2/día, el día 4 aproximadamente 413 g/m /día, y los días subsecuentes del régimen (por ejemplo, días 5-14) 826 g/m /día. En otra modalidad, el día 1, se administra al sujeto una dosis de aproximadamente 227 /m2 /Aía. , el día 2 aproximadamente 459 ^g/m /día, el día 3 y los días subsecuentes, aproximadamente 919 /¿g/m2/día. En otra modalidad, en el día 1, se administra al sujeto una dosis de aproximadamente 284 µg/m2/día, el día 2 aproximadamente 574 9/m2/día, el día 3 y los días subsecuentes, aproximadamente 1148 ^g/m2/día. En otras modalidades, la dosis inicial es 1/4, a 1/2, igual a la dosis diaria al final del régimen aunque se administra en porciones a intervalos de 6, 8, 10 en 12 horas. Por ejemplo, se administra una dosis de 13 ^g/kg/día en cuatro dosis de 3-4 g/kg en intervalos de 6 horas para reducir el nivel de liberación de citocina causado por la administración del anticuerpo. En modalidades específicas, para reducir la posibilidad de liberación de citocinas otros efectos adversos, las primeras 1, 2, 3, ó 4 dosis o todas las dosis en el régimen, se administran más lentamente mediante administración intravenosa. Por ejemplo, una dosis de 51 µg/m2 /día puede administrarse durante aproximadamente 5 minutos , aproximadamente 15 minutos, aproximadamente 30 minutos , aproximadamente 45 minutos , aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 4 horas , aproximadamente 8 horas, aproximadamente 10 horas , aproximadamente 12 horas , aproximadamente 14 horas , aproximadamente 16 horas, aproximadamente 18 horas, aproximadamente 20 horas, y aproximadamente 22 horas . En ciertas modalidades, la dosis se administra mediante infusión lenta durante un periodo de, por ejemplo, 20 a 24 horas. En modalidades específicas, la dosis se infunde o administra en una bomba, preferiblemente incrementando la concentración del anticuerpo administrado cuando la infusión progresa o avanza. En otras modalidades, una fracción establecida de las dosis para el régimen de 51 µg/m2/día a 826 ^g/m2/día, descrito anteriormente, se administra en dosis ascendentes. En ciertas modalidades, la fracción es de 1/10, ¾, 1/3, ¾, 2/3 ó 3/4 de las dosis diarias de los regímenes descritos anteriormente. De acuerdo con esto, cuando la fracción es de 1/10, las dosis diarias serán de 5.1 /g/m2 el día 1, 10.3 µg/m2 el día 2, 20.7 g/m2 el día 3, 41.3 µg/m el día 4 y 82.6 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/4, las dosis serán de 12.75 µg/m el día 1, 25.5 µg/m el día 2, 51 µg/m2 el día 3, 103 Mg/m2 el día 4, y 207 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/3, las dosis serán de 17 ^g/m2 el día 1, 34.3 Mg/m2 el día 2, 69 /g/m2 el día 3, 137.6 µg/m2 el día 4, y 275.3 Mg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 1/2/. las dosis serán de 25.5 µg/m2 el día 1, 51 µg/m2 el día 2, 103 g/m el día 3, 207 µg/m el día 4, y 413 µg/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 2/3, las dosis serán de 34 µg/m2 el día 1, 69 µg/m2 el día 2, 137.6 µg/m el día 3, 275.3 µg/m2 el día 4, y 550.1 µg'/m2 los días 5 a 14. Cuando la fracción es de 3/4, las dosis serán de 38.3 µg/m2 el día 1, 77.3 µg/m2 el día 2, 155.3 µg/m2 el día 3, 309.8 µg/m2 el día 4, y 620 µg/m2 los días 5 a 14. En otras modalidades, el régimen es idéntico a uno de aquéllos descritos anteriormente aunque sólo durante los días 1 a 4, días 1 a 5, ó días 1 a 6. Por ejemplo, en una modalidad particular, las dosis serán de 17 µg/m2 el día 1, 34.3 g/m2 el día 2, 69 µg/m el día 3, 137.6 µg/m2 el día 4, y 275.3 µg/m2 en los días 5 y 6. En modalidades específicas, el anticuerpo CD3 antihumano no se administra mediante dosis diarias durante un número de días, sino que más bien se administra mediante infusión de una manera ininterrumpida durante 4 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 15 horas, 18 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas ó 36 horas. La infusión puede , ser constante o puede comenzar a una dosificación más baja, por ejemplo, durante las primeras 1, 2, 3, 5, 6 u 8 horas de la infusión y luego incrementarse a una dosificación más alta después de esto. Durante el transcurso de la infusión, el paciente recibe una dosis igual a la cantidad administrada en los regímenes de 5 a 20 días como se establece anteriormente. Por ejemplo, una dosis de aproximadamente 150 µg/m2, 200 >g/m2 , 250 g/m2 , 500 ^g/m2 , 750 µ?/??1 , 1000 µg/m2 , 1500 g/m2 , 2000 µg/m2 , 3000 µg/m2 , 4000 µg/m2 , 5000 g/m2 , 6000 µg/m2 , 7000 µg/m , 8000 µg/m2 , ó 9000 g/m2 : En particular, se designa la velocidad y duración de la infusión para minimizar el nivel de anticuerpo CD3 anti -humano libre en el sujeto después de la administración. En ciertas modalidades, el nivel de anticuerpo CD3 anti-humano libre no deberá exceder 200 ng/ml de anticuerpo libre. Además, la infusión se diseña para lograr un recubrimiento y modulación combinados del receptor de células T, de al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ó del 100% . En ciertas modalidades, el anticuerpo administrado de acuerdo a estos regímenes es el ???3?1 (ala-ala) . En otras modalidades el anticuerpo no es el 0??3?1 (ala-ala) y se administra para lograr uno o más parámetros farmacocinéticos obtenidos por la administración del ???3?1 (ala-ala) , por ejemplo, mediante administración intravenosa, tal como la titulación en suero del anticuerpo administrado en 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 2 semanas, 3 semanas ó 1 mes después del último día del régimen de dosificación. En ciertas modalidades, el anticuerpo CD3 anti -humano se administra para lograr un cierto nivel de recubrimiento y modulación combinados de los complejos de receptores de células T en las células T, cuando se determina por los métodos bien conocidos en la técnica, ver, por ejemplo, el Ejemplo 11 de la publicación de solicitud de patente norteamericana 2003/0108548, la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. En modalidades específicas, el régimen de dosificación logra un recubrimiento y modulación combinados del receptor de células T de al menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ó del 100% con, en modalidades específicas, poco o ningún anticuerpo CD3 anti-humano libre, detectado (por ejemplo, menos de 200 ng/mL del fármaco detectado en la sangre del paciente) . En otras modalidades, el anticuerpo CD3 anti-humano se administra crónicamente para tratar, prevenir, o hacer más lenta o retardar el inicio o progresión, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se administra una dosis baja del anticuerpo CD3 anti-humano una vez al mes, dos veces al mes, tres veces por mes, una vez a la semana o incluso más frecuentemente ya sea como una alternativa al régimen de dosificación de 6 a 14 días, discutido anteriormente o después de la administración de tal régimen para mejorar o para mantener su efecto terapéutico. Tal dosis baja puede ser cualquiera de 1 /¿g/m2 a 100 µg/m2 , de manera preferible, aproximadamente de 5 µg/m2, 10 µg/m2 , 15 ^g/m2 , 20 g/m2 , 25 ^g/m2 , 30 µg/m2 , 35 /xg/m , 40 µg/m2 , 45 g/m ó 50 ^g/m2. En otras modalidades, se puede re-dosificar al sujeto en algún momento subsecuente a la administración del régimen de dosificación del anticuerpo CD3 anti-humano, preferiblemente, en base a uno o más parámetros fisiológicos, aunque puede hacerse como algo normal. Tal redosificación puede administrarse y/o evaluarse la necesidad de tal redosificación 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 9 meses, 1 año, 15 meses, 18 meses, 2 años, 30 meses ó 3 años después de ¡ la administración de un régimen de dosificación y puede incluirse administrar un curso de tratamiento cada 6 meses, 9 meses, 1 año, 15 meses, 18 meses, 2 años, 30 meses ó 3 años indefinidamente. En modalidades específicas, se administra a los sujetos una ronda subsecuente de tratamiento de anticuerpo CD3 antihumano basado en mediciones de una o una combinación dé lo siguiente: la relación de células CD4/CD8, conteo de células CD8, inversión CD4/CD3, relación de células CD4/CD25, relación de células CD4/FoxP3, relación de células CD4/CD40, relación de células CD4/IL-10, y/o relación de células CD4/TGF-p. Con respecto al tratamiento de manejo de la diabetes Tipo I', otros parámetros para determinar si se administra una ronda subsecuente de tratamiento incluyen una aparición o un incremento en los anticuerpos de las células anti-islotes, tales como GADAs, anticuerpos IA-2 ó anticuerpos anti-insulina o una aparición o incremento en los niveles de las células T específicas para los antígenos de las células de los islotes. Pueden administrarse dosis subsecuentes si el número de las células ß o actividad o función de las células ß disminuye al 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, ó 90%, en comparación con el número o actividad o función de las células ß durante la administración de la ronda precedente de tratamiento. La función de las células ß puede determinarse mediante cualquier método conocido en la técnica, por ejemplo, la respuesta del péptido C al MMTT, OGTT, IGTT, o sujeción de glucosa de dos fases, o la prueba de Liberación de Insulina de Primera Fase (FPIR) , como se discute anteriormente. Otros parámetros que pueden utilizarse para determinar si se redosifica, incluyen los niveles de HA1 ó HAlc, la necesidad de administración de insulina exógena o incremento en la dosificación de insulina exógena a más de 0.1 U/kg/día, 0.2 U/kg/día, 0.5 U/kg/día, 0.6 U/kg/día, 1 U/kg/día ó 2 U/kg/día. Por ejemplo, se puede administrar a un sujeto una ronda subsecuente de tratamiento cuando la respuesta del péptido C o FPIR del paciente a MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases disminuye a más de 1%, más de 5%, más de 10%, más de 20%, más de 30%, más de 40%, más de 50% de los niveles de pre-tratamiento. En modalidades particulares, los sujetos se re-dosifican si tienen una respuesta de péptido C al MMTT, OGTT, IGTT, o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases (preferiblemente, MMTT) que da como resultado una AUC de menos de 40 pmol/ml/240 min. , menor de 50 pmol/ml/240 min, menor de 60 pmol/ml/240 min, menor de 70 pmol/ml/240 min, menor de 80 pmol/ml/240 min. , o menor de 90 pmol/ml/240 min. En modalidades específicas, los sujetos pueden re-dosificarse si tienen una FPIR de menos de 300 pmol/ml, menor de 400 pmol/ml, menor de 500 pmol/ml, menor de 600 pmol/ml, o menor de 700 pmol/ml. También por ejemplo, un sujeto puede re-dosificarse cuando los niveles HA1 ó HA1C del sujeto incrementan al menos 5%, al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, o al menos 90% en comparación con niveles de pre-tratamiento o cuando los niveles absolutos son mayores de 8%, mayores de 7.5%, o mayores de 7%. En otras modalidades, las dosis adicionales pueden administrarse en base a la aparición de o incremento en número (tal como un incremento a, en promedio, 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15, ó 20), duración y/o severidad de episodios hipoglicemicos o de episodios de cetoacidosis en una base diaria, semanal, o mensual. En una modalidad específica, la terapia de CD3 anti-humano se usa en pacientes con diabetes tipo 1 que tienen al menos 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 85%, al menos 80%, al menos 75%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 60%, al menos 50% de función residual de células ß en comparación con un individuo sin indicadores de diabetes o predisposición a diabetes en la misma población (es decir, edad, sexo, raza, y estado de salud general) y se determina mediante los métodos descritos en la presente o conocidos para un experto ordinario en la técnica. En otra modalidad, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente disminuye al menos a 1%, menos de 5%, menos de 10%, menos de 20%, menos de 30%, menos de 40% o menos de 50% de los niveles de pretratamiento . En aún otrá modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente se mantiene al menos a 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, ó al menos 50% de los niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al ménos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene al menos al 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos 50% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml o menor de 200 células/ml en el mismo período de tiempo. En otra modalidad de la invención, después del curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene al menos al 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos -50% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de plaquetas del paciente no es menor de 100,000,000 plaquetas/ml, menor de 75,000,000 plaquetas/ml, menor de 50,000,000 plaquetas/ml, menor de 25,000,000 plaquetas/ml, menor de 1,000,000 plaquetas/ml, menor de 750,000 plaquetas/ml, menor de 500,000 plaquetas/ml, menor de 250,000 plaquetas/ml, menor de 150,000 plaquetas/ml o menor de 100,000 plaquetas/ml . En ciertas modalidades, una o más composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos) se administran a un sujeto que tiene diabetes tipo 1, para prevenir o hacer más lenta la reducción de masa de células ß, asociada con la diabetes autoinmune. En algunos modalidades, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de masa de células ß del paciente, disminuye a menos del 1%, menos de 5%, menos de 10%, menos de 20%, menos de 30%, menos de 40%, menos de 50%, menos de 60%, o menos de 70%, de los niveles de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente se mantiene al menos al 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, al menos 50%, al menos 40%, o al menos 30% de los niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene al menos al 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos 50% de los niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml o menor de 200 células/ml durante el mismo período de tiempo. En otra modalidad de la invención, después del curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a la invención, el nivel de función de las células ß del paciente, se mantiene al menos al 99%, al menos 95%, al menos 90%, al menos 80%, al menos 70%, al menos 60%, o al menos 50% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de plaquetas del paciente no es menor de 100,000,000 plaquetas/ml, menor de 75,000,000 plaquetas/ml, menor de 50,000,000 plaquetas/ml, menor de 25,000,000 plaquetas/ml, menor de 1,000,000 plaquetas/ml, menor de 750,000 plaquetas/ml, menor de 500,000 plaquetas/ml, menor de 250,000 plaquetas/ml, menor de 150,000 plaquetas/ml o menor de 100,000 plaquetas/ml. En los métodos de la invención, la terapia de CD3 antihumano se administra en pacientes que no requieren insulina diaria, o que tienen requerimientos promedio de insulina de menos de 0.05 U/kg/d£a, menores de 0.1 U/kg/día, menores de 0.2 U/kg/día, menores de 0.4 U/kg/día, menores de 0.6 U/kg/día, menores de 0.8 U/kg/día, menores de 1 U/kg/día, menores de 2 U/kg/día, menores de 5 U/kg/día, menores de 10 U/kg/día o menores de 50 U/kg/día. En otra modalidad, a un paciente con un desorden de diabetes autoinmune se administra un régimen de dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos para evitar o retrasar la necesidad de administrar insulina, o incrementar la dosis de insulina administrada durante más de 6 meses, 1 año, 18 meses, 24 meses, 30 meses, 36 meses, 5 años, 7 años ó 10. En otras modalidades, en pacientes que requieren insulina exógena, los métodos de la invención logran una reducción en requerimiento de insulina diaria de al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, o al menos 90% de los niveles de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención en pacientes que requieren insulina exógena, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a la invención, la reducción de requerimientos de insulina diaria en un paciente de al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, o al menos 90% de niveles de pretratamiento, se mantiene durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del curso de tratamiento. En aún otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, la reducción de requerimientos de insulina diaria de un paciente de al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% de niveles de pretratamiento, se mantiene durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, ó al menos 30 meses despüés del curso de tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml, menor de 200 células/ml durante el mismo período de tiempo. En otras modalidades, en pacientes que requieren insulina exógena, los métodos de la invención dan como resultado un incremento en el requerimiento de insulina diaria de no más de 1%, no más de 5%, no más de 10%, no más de 15%, no más de 20%, no más de 25%, no más de 30%, no más de 40%, no más de 45%, no más de 50%, no más de 55%, no más de 60%, no más de 65%, no más de 70%, o no más de 75% en comparación con los niveles de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención en pacientes que requieren insulina exógena, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el incremento en los requerimientos de insulina diaria de un paciente de no más de 1%, no más de 5%, no más de 10%, no más de 15%, no más de 20%, no más de 25%, no más de 30%, no más de 40%, no más de 45%, no más de 50%, no más de 55%, no más de 60%, no más de 65%, no más de 70%, o no más de 75% de niveles de pretratamiento, se mantiene durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después de un curso de tratamiento. En aún otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, el incremento en los requerimiento de insulina diaria de un paciente de no más de 1%, no más de 5%, no más de 10%, no más de 15%, no más de 20%, no más de 25%, no más de 30%, no más de 40%, no más de 45%, no más de 50%, no más de 55%, no más de 60%, no más de 65%, no más de 70%, o no más de 75% de niveles de pretratamiento, se mantiene durante al menos 4 meses, al menos 6 meses,, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del curso de tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml o menor de 200 células/ml durante el mismo período de tiempo. En aún otra modalidad, se administra a un sujeto humano que tiene diabetes tipo 1, o un humano identificado por tener una predisposición a desarrollar diabetes tipo 1, un curso de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos para conservar la respuesta del péptido C del sujeto o FPIR a M TT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases durante aproximadamente 2 semanas , aproximadamente 1 mes, aproximadamente 2 meses, aproximadamente 4 meses, aproximadamente 5 meses , aproximadamente 6 meses , aproximadamente 7 meses, aproximadamente 8 meses , aproximadamente 9 meses, aproximadamente 10 meses , aproximadamente 11 meses, aproximadamente 12 meses , aproximadamente 15 meses, aproximadamente 18 meses , aproximadamente 21 meses o aproximadamente 24 meses después del tratamiento. En modalidades preferidas, los pacientes inicialmente tienen una respuesta del péptido C al FPIR a MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases (preferiblemente MMTT) que da como resultado un área bajo la curva (AUC) de al menos 80 pmol/ml/240 min., preferiblemente, preferiblemente de al menos 90 pmol/ml/240 min., más preferiblemente al menos 100 pmol/ml/240 min., o aún al menos de 110 pmol/ml/240 min. En modalidades preferidas, los pacientes antes del tratamiento con anticuerpo CD3 antihumano de acuerdo a la invención tienen una FPIR de al menos 300 pmol/1, al menos 350 pmol/1, al menos 400 pmol/1, al menos 450 pmol/1, al menos 500 pmol/1, al menos 550 pmol/1, al menos 600 pmol/1, ó aún al menos 700 pmol/1. En otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, la respuesta del péptido C o FPIR del paciente a MMTT, OGTT, IGTT, o proceso de sujeción de glucosa de dos fases disminuye a menos del 1%, menos del 5%, menos del 10%, menos del 20%, menos del 30%, menos del 40%, menos del 50% de los niveles de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, la respuesta del péptido C o FPIR del paciente a MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases, se mantiene al menos a 99%, al menos a 95%, al menos a 90%, al menos a 80%, al menos a 70%, al menos a 60%, o al menos a 50% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del curso de tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de un curso de tratamiento con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo a la invención, la respuesta del péptido C o FPIR del paciente a MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases, se mantiene al menos a 99%, al menos a 95%, al menos a 90%, al menos a 80%, al menos a 70%, al menos a 60%, o al menos a 50% de niveles de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, o al menos 30 meses después del final del tratamiento y el conteo medio de linfocitos del paciente no es menor de 800 células/ml, menor de 750 células/ml, menor de 700 células/ml, menor de 650 células/ml, menor de 600 células/ml, menor de 550 células/ml, menor de 500 células/ml, menor de 400 células/ml, menor de 300 células/ml o menor de 200 células/ml durante el mismo período de tiempo. En modalidades particulares, la invención proporciona métodos de tratamiento tal que una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo anti-CD3 (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos anti-CD3) , da como resultado un nivel de HA1 ó HAlc que es 7% o menor, 6.5% o menor, 6% o menor, 5.5% o menor, o 5% o menor de 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o de la primera ronda de tratamiento. En modalidades específicas, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , los pacientes tienen una respuesta de péptido C al MMTT, OGTT, IGTT o procedimiento de de sujeción de glucosa de dos fases (preferiblemente, MMTT) que da como resultado una AUC de al menos 40 pmol/ml/240 min. , 50 pmol/ml/240 min, 60 pmol/ml/240 min, 70 pmol/ml/240 min, 80 pmol/ml/240 min, 90 pmol/ml/240 min, más preferiblemente al menos 100 pmol/ml/240 min, ó aún al menos 110 pmol/ml/240 min, dicha respuesta se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratamiento o después de la ronda previa de tratamiento. En modalidades específicas, después de una sola ronda de tratamiento o ronda de tratamiento cada 6 meses, cada 9 meses, cada 12 meses, cada 15 meses, cada 18 meses, o cada 24 meses con un anticuerpo CD3 anti -humano de acuerdo a los métodos de la invención (preferiblemente, sin ningún tratamiento intermedio con anticuerpos CD3 anti-humanos) , los pacientes tienen una FPIR de al menos 300 pmol/1, al menos 400 pmol/1, al menos 500 pmol/1, al menos 600 pmol/1, ó aún al menos 700 pmol/1, dicha FPIR se determina 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses, ó 24 meses después de la ronda previa de tratam ento o ronda inicial de tratamiento. En otra modalidad, con respecto al tratamiento de MS, se administran composiciones farmacéuticas que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos anti-CD3) una o más veces para prevenir o reducir un incremento, o hacer más lento o reducir un incremento en la puntuación EDSS asociada con MS en un sujeto. En aún otra modalidad, se administran una o más composiciones farmacéuticas que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos anti-CD3) una o más veces para prevenir un incremento en la frecuencia, severidad y/o duración de ataques asociados con MS en un sujeto. En todavía otras modalidades, se administran una o más composiciones farmacéuticas que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo, uno o más anticuerpos anti-CD3) una o más veces para prevenir un incremento en el número y/o volumen total de lesiones, cuando se detectan mediante, por ejemplo, MRI , asociados con MS en un sujeto. De acuerdo con estas modalidades, la puntuación EDSS de un sujeto y/o una determinación de la frecuencia, duración y/o severidad de ataques pueden evaluarse por un médico calificado de acuerdo a los métodos comúnmente aceptados y bien conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, el sujeto tiene MS benigna. En otras modalidades, el sujeto tiene RRMS, SPMS, PRMS, o PPMS. En ciertas modalidades, se administra una o más composiciones farmacéuticas que comprenden una o más moléculas de enlace de CD3 (por ejemplo uno o más anticuerpos anti-CD3) una o más veces para reducir la incidencia, severidad y/o duración de un síntoma asociado con MS en un sujeto, en donde dichos síntomas se describen en la presente o son conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, los síntomas asociados con S incluyen, pero no están limitados a fatiga, alteraciones de la visión, alteraciones de la fuerza, alteraciones de la coordinación, alteraciones del equilibrio, alteraciones de la función de la vejiga/intestinos, debilidad o parálisis en una o más extremidades, temblor en una o más extremidades, espasticidad muscular, atrofia muscular, movimiento disfuncional, entumecimiento o sensación anormal en cualquier área, hormigueo, dolor facial, dolor en extremidades, pérdida de visión en uno o ambos ojos, visión doble, malestar en los ojos, movimientos oculares incontrolables y rápidos, coordinación disminuida, pérdida de equilibrio, capacidad disminuida para controlar movimientos pequeños o intrincados, anormalidades al caminar o trotar, espasmos musculares, mareo, vértigo, titubeo urinario, urgencia urinaria, frecuencia urinaria incrementada, incontinencia, memoria reducida, espontaneidad reducida, sentido común reducido, pérdida de la capacidad de pensar abstractamente, pérdida de la capacidad de generalizar, depresión, campo de atención reducido, pronunciación inarticulada, dificultad al hablar o en la comprensión del habla, fatiga, constipación, pérdida de la audición, y/o reflejo positivo de Babinski . En una modalidad específica se usa terapia anti-CD3 para el tratamiento de MS en pacientes que tienen una puntuación de discapacidad de acuerdo a la Escala de Discapacidad Ampliada de Kurtzke (EDSS) de 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0 ó 9.5, cuando se determina mediante los métodos descritos o conocidos para un experto ordinario en la técnica., En otra modalidad, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención, la puntuación EDSS del paciente incrementa a no más de un medio paso, no más de un paso, no más de uno y medio pasos, no más de dos pasos, no más de dos y medio pasos, no más de tres pasos, no más de tres y medio pasos, no más de cuatro pasos, no más de cuatro y medio pasos, no más de cinco pasos, no más de cinco y medio pasos, no más de seis pasos, no más de seis y medio pasos, no más de siete pasos, no más de siete y medio pasos, no más de ocho pasos, o no más de ocho y medio pasos en relación a la puntuación del pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación EDSS del paciente se mantiene o incrementa a no más de un medio paso, no más de un paso, no más de un y medio pasos, no más de dos pasos, no más de dos y medio pasos, no más dé tres pasos, no más de tres y medio pasos, no más de cuatro pasos, no más de cuatro y medio pasos, no más de cinco pasos, nó más de cinco y medio pasos, no más de seis pasos, no más de seis y medio pasos, no más de siete pasos, no más de siete y medio pasos, no más de ocho pasos, o no más de ocho y medio pasos en relación a la puntuación del pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación EDSS del paciente se mantiene o incrementa a no más de un medio paso, no más de un paso, no más de un y medio pasos, no más de dos pasos, no más de dos y medio pasos, no más de tres pasos, no más de tres y medio pasos, no más de cuatro pasos, no más de cuatro y medio pasos, no más de cinco pasos, no más de cinco y medio pasos, no más de seis pasos, no más de seis y medio pasos, no más de siete pasos, no más de siete y medio pasos, no más de ocho pasos, o no más de ocho y medio pasos en relación a la puntuación del pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reduce el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 células/ml, menos de 750. células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 500 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación EDSS del paciente se mantiene o incrementa a no más de un medio paso, no más de un paso, no más de un y medio pasos, no más de dos pasos, no más de dos y medio pasos, no más de tres pasos, no más de tres y medio pasos, no más de cuatro pasos, no más de cuatro y medio pasos, no más de cinco pasos, no más de cinco y medio pasos, no más de seis pasos, no más de seis y medio pasos, no más de siete pasos, no más de siete y medio pasos, no más de ocho pasos, o no más de ocho y medio pasos en relación a la puntuación del pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos ,18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reduce el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml, menos de 75,000,000 plaquetas/ml, menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml , menos de 150,000 plaquetas/ml ó 100,000 plaquetas/ml o menos. En otras modalidades, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la incidencia promedio, frecuencia, severidad o duración de los síntomas y/o ataques asociados con MS en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento . En aún otra modalidad, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la incidencia promedio, frecuencia, severidad o duración de los síntomas y/o ataques asociados con MS en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la incidencia promedio, frecuencia, severidad o duración de los síntomas y/o ataques asociados con MS en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, %, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 células/ml, menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 500 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml o 200 células/ml o menos.
En otra modalidad de la invención, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la frecuencia promedio, severidad o duración de los síntomas y/o ataques asociados con MS en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml , menos de 75,000,000 plaquetas/ml , menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml , menos de 500,000 plaquetas/ml , menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml ó 100,000 plaquetas/ml o menos. En otra modalidad específica, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número y/o volumen total de lesiones asociadas con MS cuando se determinan mediante MRI en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% de la condición de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número y/o volumen total de lesiones asociadas con MS cuando se determinan mediante MRI en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número y/o volumen total de lesiones asociadas con MS cuando se determinan mediante MRI en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos .6 meses, al menos 9 meses, al ! menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 céiulas/ml, menos de menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 800 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número y/o volumen total de lesiones asociadas con MS cuando se determinan mediante MRI en un paciente, incrementan a no más del 2%, 5%,. 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% ó 75% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al' menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml , menos de 75,000,000 plaquetas/ml , menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml , menos de 1,000,000 plaquetas/ml , menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml ó 100,000 plaquetas/ml o menos. En otra modalidad específica, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación del índice de Severidad y Área de Psoriasis (PASI) de un paciente que tiene psoriasis, disminuye al menos a 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% en relación a la condición de pretratamiento. En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación del índice de Severidad y Área de Psoriasis (PASI) de un paciente que tiene psoriasis, disminuye al menos a 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento.
En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación del índice de Severidad y Área de Psoriasis (PASI) de un paciente diagnosticado con psoriasis, disminuye al menos a 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ói al menos 85% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, aí menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 célulás/ml, menos de menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 800 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación del índice de Severidad y Área de Psoriasis (PASI) de un paciente diagnosticado con psoriasis, disminuye al menos a 20%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, ó al menos 85% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml , menos de 75,000,000 plaquetas/ml, menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml ó 100,000 plaquetas/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación de evaluación global de un paciente diagnosticado con psoriasis mejora al menos a 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95% en relación a la condición de pretratamiento. En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación de evaluación global de un paciente diagnosticado con psoriasis mejora al menos a 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación de evaluación global de un paciente diagnosticado con psoriasis mejora al menos a 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 células/ml, menos de menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 800 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos.
En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la puntuación de evaluación global de un paciente diagnosticado con psoriasis mejora al menos a 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, ó al menos 95% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml , menos de 75,000,000 plaquetas/ml, menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml o 100,000 plaquetas/ml o menos. En otra modalidad específica, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la condición del sujeto cuando se evalúa mediante cualquier escala de severidad de artritis, conocida en la técnica (por ejemplo, RASS) , mejora al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la condición del sujeto cuando se evalúa mediante cualquier escala de severidad de artritis, conocida en la técnica (por ejemplo, RASS) , mejora al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la condición del sujeto cuando se evalúa mediante cualquier escala de severidad de artritis, conocida en la técnica (por ejemplo, RASS) , mejora al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 células/ml, menos de menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 800 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención la condición del sujeto cuando se evalúa mediante cualquier escala de severidad de artritis, conocida en la técnica (por ejemplo, RASS) , mejora al menos 25%, al menos 35%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, ó al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml , menos de 75,000,000 plaquetas/ml , menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml o 100,000 plaquetas/ml o menos. En otra modalidad específica, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número absoluto, o proporción, de los GTLS auto-reactivos del sujeto, cuando se determinan mediante ensayo por inmunomanchado (por ejemplo, ELISPOT) , disminuye al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento . En aún otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número absoluto, o proporción, de los CTLS auto-reactivos del sujeto, cuando se determinan mediante ensayo por inmunomanchado (por ejemplo, ELISPÓT) , disminuye al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número absoluto, o proporción, de los CTLS auto-reactivos del sujeto, cuando se determinan mediante ensayo por inmunomanchado (por ejemplo, ELISPOT) , disminuye al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de linfocitos del paciente a menos de 800 células/ml, menos de menos de 750 células/ml, menos de 700 células/ml, menos de 650 células/ml, menos de 600 células/ml, menos de 550 células/ml, menos de 800 células/ml, menos de 400 células/ml, menos de 300 células/ml ó 200 células/ml o menos. En otra modalidad de la invención, después de uno o más cursos de tratamiento con un anticuerpo anti-CD3 de acuerdo a la invención el número absoluto, o proporción, de los CTLS auto-reactivos del sujeto, cuando se determinan mediante ensayo por inmunomanchado (por ejemplo, ELISPOT) , disminuye al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 100% en relación a la condición de pretratamiento durante al menos 4 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses, al menos 12 meses, al menos 15 meses, al menos 18 meses, al menos 24 meses, al menos 2.5 años o al menos 3 años después del final del tratamiento y no reducen el conteo medio de plaquetas del paciente a menos de 100,000,000 plaquetas/ml, menos de 75,000,000 plaquetas/ml, menos de 50,000,000 plaquetas/ml, menos de 25,000,000 plaquetas/ml, menos de 1,000,000 plaquetas/ml, menos de 750,000 plaquetas/ml, menos de 500,000 plaquetas/ml, menos de 250,000 plaquetas/ml, menos de 150,000 plaquetas/ml ó 100,000 plaquetas/ml o menos. En modalidades preferidas, los anticuerpos CD3 antihumanos se administran parenteralmente , por ejemplo, intravenosamente, intramuscularmente o subcutáneamente, o, de manera alternativa, se administran oralmente. Los anticuerpos CD3 anti-humanos también pueden administrarse como una formulación de liberación sostenida. En una modalidad específica, se evalúa el conteo medio absoluto de linfocitos en un sujeto con un desorden autoinmune, antes y/o después de la administración de una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos para determinar si una o más dosis subsecuentes de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos, deberá administrarse a dicho sujeto. En otra modalidad, se evalúa el conteo medio absoluto de linfocitos en un sujeto con un desorden autoinmune antes y/o después de la administración de una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos para determinar si una o más dosis subsecuentes de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos, deberá administrarse a dicho sujeto. Preferiblemente, ¦una dosis subsecuente de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos no se administra a dicho sujeto si el conteo de linfocitos es menor de 800' células/mm3, menor de 750 células/mm3 , menor de 700 células/mm3 , menor de 650 células/mm3 , menor de 600 células/mm3, menor de 500 células/mm3, menor de 400 células/mm3 o menor de 300 células/mm3. En otra modalidad, el conteo medio absoluto de linfocitos en un sujeto con un desorden autoinmune se determina antes de la administración de una primera dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti -humanos y el conteo medio absoluto de linfocitos se monitorea antes de la administración de una o más dosis subsecuentes de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos. Preferiblemente, el conteo medio absoluto de linfocitos en un sujeto es de al menos 900 células/mm3, al preferiblemente menos 950 células/mm3, al menos 1000 células/mm3 , al menos 1050 células/mm3 , al menos 1100 células/mm3, al menos 1200 células/mm3, o al menos 1250 células/mm3 antes de la administración de una primera dosis de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . En otra modalidad, el conteo medio absoluto de linfocitos de aproximadamente 700 células/ml a aproximadamente 1200 células/ml, aproximadamente 700 células/ml a aproximadamente 1100 células/ml, aproximadamente 700 células/ml a aproximadamente 1000 células/ml, aproximadamente 700 células/ml a aproximadamente 900 células/ml, aproximadamente 750 células/ml a aproximadamente 1200 células/ml, aproximadamente 750 células/ml a aproximadamente 1100 células/ml, aproximadamente 750 células/ml a aproximadamente 1000 células/ml, aproximadamente 750 ,células/ml a aproximadamente 900 células/ml, aproximadamente 800 células/ml a aproximadamente 1200 células/ml, aproximadamente 800 células/ml a aproximadamente 1100 células/ml, aproximadamente 800 células/ml a aproximadamente 1000 células/ml, aproximadamente 900 células/ml a aproximadamente 1200 células/ml, aproximadamente 900 células/ml a aproximadamente 1100 células/ml, aproximadamente 900 células/ml a aproximadamente 1000 células/ml, .aproximadamente 1000 células/ml a aproximadamente 1200 células/ml, se mantiene en un sujeto que tiene el desorden de diabetes tipo 1 administrando una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . En otra modalidad, el conteo medio absoluto de linfocitos de aproximadamente 700 células/ml a por debajo 1000 células/ml, se mantiene en un sujeto que tiene un desorden autoinmune administrando una o más dosis de .una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos. En una modalidad específica, la administración de una o más dosis o un régimen de dosificación de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti -humanos en relación a otros agentes inmunosupresores , no induce o1 reduce uno o más de los siguientes efectos indeseados o adversos: anormalidades en los signos vitales (fiebre, taquicardia, bradicardia, hipertensión, hipotensión) , eventos hematológicos (anemia, linfopenia, leucopenia, trombocitopenia) , dolor de cabeza, escalofríos, mareo, nausea, astenia, dolor de espalda, dolor de pecho (presión de pecho) , diarrea, mialgia, dolor, prurito, psoriasis, rinitis, sudoración, reacción en el sitio de inyección, vasodilatación, un riesgo incrementado de infección oportunista, activación del Virus Epstein Barr, apoptosis de las células T y un riesgo incrementado de desarrollar ciertos tipos de cáncer. En otra modalidad específica, la administración de una o más dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos en relación a otros agentes inmunosupresores, no induce o reduce uno o más de los siguientes efectos indeseados o adversos: anormalidades en los signos vitales (fiebre, taquicardia, bradicardia, hipertensión, hipotensión) , eventos hematológicos (anemia, linfopenia, leucopenia, trombocitopenia) , dolor de cabeza, escalofríos, mareo, nausea, astenia, dolor de espalda, dolor de pecho (presión de pecho) , diarrea, mialgia, dolor, prurito, psoriasis, rinitis, sudoración, reacción en el sitio de inyección, vasodilatación, un riesgo incrementado de infección oportunista, activación del Virus Epstein Barr, apoptosis de las células T y un riesgo incrementado de desarrollar ciertos tipos de cáncer. De acuerdo con la invención, la dosis o régimen de dosificación que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 para el tratamiento de un desorden autoinmune, puede repetirse en 1 mes, 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses ó 24 meses o más tiempo después de la dosis o régimen de dosificación inicial o previa que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3. La dosis o régimen de dosificación repetida puede administrarse como algo normal, cuando los síntomas asociados con dicho desorden autoinmune, recurren después de una mejora siguiente a la dosis o régimen de dosificación inicial o previa, o cuando los síntomas asociados con dicho desorden autoinmune no mejoran después de la dosis o régimen de dosificación inicial de anticuerpos anti-CD3 de acuerdo a los métodos de la invención. Con respecto a la diabetes, una dosis o régimen de dosificación repetida que •comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3, puede administrarse a un sujeto cuando, por ejemplo, el uso de insulina diaria promedio en 1 mes, 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses ó 24 meses o más tiempo después del tratamiento inicial o previo con anticuerpos anti-CD3, no disminuye al menos 5%, al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% ó al menos 90% en comparación con los niveles de pretratamiento . Alternativamente, con respecto a la diabetes, una dosis o régimen ; de dosificación repetida que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3, puede administrarse a un sujeto cuando, por ejemplo, los niveles de HA 1 ó HA 1C de un sujeto en 1 mes, 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses ó 24 meses o más tiempo después del tratamiento inicial o previo con anticuerpos anti-CD3, no disminuye al menos 5%, al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% ó al menos 90% en comparación con los niveles de pretratamiento. En otra modalidad, con respecto a la diabetes, una dosis o régimen de dosificación repetida que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3, puede administrarse a un sujeto cuando, por ejemplo, la respuesta del péptido C de un sujeto en 1 mes, 2 meses, 4 meses, 6 meses, 8 meses, 12 meses, 15 meses, 18 meses ó 24 meses o más tiempo después del tratamiento inicial o previo con anticuerpos anti-CD3, disminuye a más de 5%, más de 10%, más de 20%, más de 30%, más de 40%, más de 50%, más de 60%, más de 70%, más de 80% ó más de 90% en comparación con los niveles de pretratamiento . 5.2.8 Terapia Combinatoria La presente invención proporciona composiciones que comprenden uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos diferentes a los anticuerpos CD3 anti-humanos, y métodos para prevenir, tratar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de o mejorar uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmune, por ejemplo, un desorden autoinmune inflamatorio, en un sujeto en necesidad del mismo que comprende administrar a dicho sujeto una o más de dichas composiciones. Los agentes terapéuticos o profilácticos incluyen, pero no están limitados a, péptidos, polipéptidos , proteínas de fusión, moléculas de ácido nucleico, moléculas pequeñas, agentes miméticos, fármacos sintéticos, moléculas inorgánicas, y moléculas orgánicas. Cualquier agente el cual sea conocido por ser útil, o el cual se ha utilizado o que actualmente está siendo utilizado para la prevención, tratamiento o mejora de uno o "más síntomas asociados con un desorden autoinmune, particularmente la diabetes tipo 1, se pueden utilizar en combinación con un anticuerpo CD3 anti-humano de acuerdo con la invención, se describe en la presente. Los ejemplos de tales agentes incluyen, pero no están limitados a fragmentos de anticuerpos, análogos ó derivados de GLP-1, antagonistas GLP-1 (por ejemplo, exendin-4; exentatida) , análogos o derivados de amilina, insulina, agentes dermatológicos para salpullidos e hinchazones (por ejemplo, fototerapia (es decir, radiación ultravioleta B) , fotoquimioterapia (por ejemplo, PUVA) y agentes tópicos tales como emolientes, ácido salicílico, brea de carbón, esteroides tópicos, corticosteroides tópicos, análogos tópicos de vitamina D3 (por ejemplo, calcipotrieno) , tazaroteno, y retinoides tópicos) , agentes anti-inflamatorios (por ejemplo, corticosteroides (por ejemplo, prednisona e hidrocortisona) , glucocorticoides , esteroides, fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, diclofenaco, y inhibidores COX-2) , antagonistas beta, agentes anticolinérgicos y metil-xantinas) , agentes inmunomoduladores (por ejemplo, moléculas orgánicas pequeñas, moduladores del receptor de células T, moduladores del receptor de citocina, agentes reductores de células T, antagonistas de citocina, antagonistas de monocina, inhibidores de linfocitos, o agentes anti-cancerígenos) , inyecciones de oro, sulfasalazina, penicilamina, agentes anti- 'angiogénicos (por ejemplo, angiostatina, antagonistas de TNF-a (por ejemplo, anticuerpos anti-TNF ) , y endostatina) , dapsona, psoralens (por ejemplo, metoxalena y trioxsalen) , agentes anti -malaria (por ejemplo, hidroxicloroquina) , agentes anti-virales, y antibióticos (por ejemplo, eritomicina y penicilina) . Cualquier agente inmunomodulador bien conocido para un experto en la técnica, también puede utilizarse en los métodos y composiciones de la invención. Los agentes 'inmunomoduladores pueden afectar uno o más o todos los aspectos de la respuesta inmune en un sujeto. Los aspectos de la respuesta inmune incluyen, pero no están limitados a, la respuesta inflamatoria, la cascada complementaria, diferenciación proliferación, y/o función efectora de leucocitos y linfocitos, conteos de monocitos y/o basófilos, y la comunicación celular entre las células del sistema inmune. En ciertas modalidades de la invención, un agente inmunomodulador modula un aspecto de la respuesta inmune. En otras modalidades, un agente inmunomodulador modula más de un aspecto de la respuesta inmune. En una modalidad preferida de la invención, la administración de un agente inmunomodulador a un sujeto inhibe o reduce uno o más aspectos de las capacidades de respuesta inmune del sujeto. En una modalidad específica de la invención, el agente inmunomodulador inhibe o suprime la respuesta inmune en un sujeto. De acuerdo con la invención, un agente inmunomodulador no es un anticuerpo CD3 anti -humano. En ciertas modalidades, un agente inmunomodulador no es un agente anti-inflamatorio. En otras modalidades, un agente inmunomodulador no es una molécula de enlace de CD3. En aún otras modalidades, un agente inmunomodulador no es 0KT3 o un derivado del mismo. Puede seleccionarse un agente inmunomodulador para interferir con las interacciones entre células de sub-conjuntos auxiliares T (TH1 ó TH2) y células ß para inhibir la formación de anticuerpos neutralizantes. Un agente inmunomodulador puede seleccionarse para inhibir la interacción entre las células TH1 y CTLs para reducir el caso de aniquilación mediada por CTL. Un agente inmunomodulador puede seleccionarse para alterar (por ejemplo, inhibir o suprimir) la proliferación, diferenciación, actividad y/o función de las células T CD4+ y/o CD8+. Por ejemplo, se pueden utilizar ¦ anticuerpo específicos para las células T como agentes inmunomoduladores para reducir, o alterar la proliferación, diferenciación, actividad y/o función de las célulaa T CD4+ y/o CD8+. En modalidades específicas, la molécula de enlace de CD3 anti-humana se co-administra con un antagonista de citocina. En otras modalidades, la molécula de enlace de CD3 anti-humana se co-administra con un anticuerpo anti-IL-2, tal como, por ejemplo, daclizumab, basiliximab ó MT204 (Micromet) u otro inhibidor IL-2, tal como pero no limitado a rapamicina, ciclosporina, o tacrolimús. En otras modalidades, la molécula de enlace de CD3 anti-humana se administra en conjunción un antígeno dirigido por anticuerpos de células anti-islotes tales como, pero no limitados a GAD (tal como GAD 65), insulina, IA-2, ICA512 u otro ¦ antígeno contra los cuales se encuentran los autoanticuerpos en pacientes con diabetes tipo 1. Tal co-administración puede llevar a la tolerancia a los antígenos de células de los islotes. En una modalidad preferida, proteínas, polipéptidos o péptidos (incluyendo los anticuerpos) que se utilizan como agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores se derivan de la misma especie que el receptor de las proteínas, polipéptidos o péptidos para reducir la probabilidad de una respuesta inmune a aquellas proteínas, polipéptidos o péptidos. En otra modalidad preferida, cuando el sujeto es un humano, las proteínas, polipéptidos, o péptidos que se utilizan como agentes inmunpmoduladores son humanos o humanizados. De acuerdo con la invención, uno o más agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores se administran a un sujeto con un padecimiento inflamatorio o autoinmune antes de, subsecuente a, o concomítantemente con los agentes terapéuticos y/o profilácticos de la invención. Preferiblemente, uno o más agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores se administran a un sujeto con un padecimiento inflamatorio o autoinmune para reducir o inhibir uno o más síntomas del padecimiento o aspectos de la respuesta inmune cuando sea necesario. Cualquier técnica bien conocida para un experto en la técnica se puede utilizar para medir uno o más aspectos de la respuesta inmune en un sujeto particular, y por medio de la cual determinar cuando es necesario administrar un agente inmunomodulador a dicho sujeto. En una modalidad preferida, un conteo absoluto de linfocitos de aproximadamente 500 células/mm3, preferiblemente 600 células/mm3, más 700 células/mm3, y más preferiblemente 800 células/mm3 se mantiene en un sujeto. En otra modalidad preferida, no se administra a un sujeto con un desorden autoinmune o inflamatorio un agente inmunomodulador si su conteo absoluto de linfocitos es de 500 células/mm3 o menos, 550 células/mm3 o menos, 600 células/mm3 o menos, 650 células/mm3 o menos, 700 células/mm3 o menos, 750 células/mm3 o menos, u 800 células/mm3 o menos. En una modalidad preferida, se administra uno o más agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores a un sujeto con un padecimiento inflamatorio o autoinmune para reducir o inhibir temporalmente uno o más aspectos del padecimiento o de la respuesta inmune. Tal inhibición o reducción temporal de uno o más aspectos del padecimiento o del sistema inmune pueden durar por horas, días, semanas, o meses. Preferiblemente, la inhibición o reducción temporal en uno o más aspectos del padecimiento o de la respuesta inmune durante unas cuantas horas (por ejemplo, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 14 horas, 16 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas, ó 48 horas) , unos cuantos días (por ejemplo, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, ó 14 días) , unas cuantas semanas (por ejemplo, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas ó 6 semanas) . La reducción o inhibición temporal de uno o más aspectos del padecimiento o de la respuesta inmune, mejora las capacidades profilácticas y/o terapéuticas de un anticuerpo anti-CD3. De acuerdo con la invención, se administra uno o más agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores a un sujeto con diabetes tipo 1, o una predisposición a la misma, antes de, subsecuente a, o concomítantemente con los agentes terapéuticos y/o profilácticos de la invención. Tales métodos pueden emplearse para tratar, prevenir, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1. En modalidades específicas, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, retardar, el inicio de, hacer más lenta la progresión de, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de insulina. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1, dicho método que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de GLP1 ó análogo de GLP1. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, retardar el inicio, hacer más lenta la progresión de, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1, dicho método que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de exendin-4 ó análogo del mismo. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de amilina o un análogo de la misma. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, retardar el inicio de, hacer más lenta la progresión de, o mejorar uno o más síntomas de la diabetes tipo 1, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva del 0KT3 humanizado del anticuerpo CD3 anti -humano y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de insulina. Las moléculas de ácido nucleico que codifican proteínas, polipéptidos , o péptidos con actividad profiláctica, terapéutica o inmunomoduladora o proteínas, polipéptidos, o péptidos con actividad profiláctica, terapéutica o inmunomoduladora, se pueden administrar a un sujeto con un desorden autoinmune de acuerdo con los métodos de la invención. Además, las moléculas de ácido nucleico que codifican derivados, análogos, fragmentos o variantes de proteínas, polipéptidos, o péptidos con actividad profiláctica, terapéutica o inmunomoduladora, o derivados, análogos, fragmentos o variantes de proteínas, polipéptidos, o péptidos con actividad profiláctica, terapéutica o inmunonioduladora, se pueden administrar a un sujeto de acuerdo con los métodos de la invención. Preferiblemente, tales derivados, análogos, variantes y fragmentos conservan la actividad profiláctica, terapéutica o inmunomoduladora de la proteína, polipéptido o péptido de tipo natural, de longitud completa . Lias proteínas, polipéptidos , o péptidos que se pueden utilizar como agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores se pueden producir mediante cualquier técnica bien conocida en el arte o descrita en la presente. Ver, por ejemplo, Capítulo 16 Ausubel et al. (eds.), 1999, Short Protocols in Molecular Biology, Fourth Edition, John iley & Sons, NY, la cual describe métodos para producir proteínas, polipéptidos, o péptidos, y la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Los anticuerpos que se pueden utilizar como agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores se pueden producir por ejemplo, mediante los métodos descritos en la Patente Norteamericana No. 6,245,527 y en Harlow y Lañe Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. Preferiblemente, los agentes que están disponibles comercialmente y conocidos por funcionar como agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores , se utilizan en las composiciones y métodos de la invención. La actividad profiláctica, terapéutica o inmunomoduladora de un agente se puede determinar in vi tro y/o in vivo mediante cualquier técnica bien conocida para un experto en el . arte, incluyendo, por ejemplo, ensayos de CTL, ensayos de proliferación, e inmunoensayos (por ejemplo ELISAs) para la expresión de proteínas particulares tales como moléculas co-estimuladoras y citocinas. La combinación de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos diferentes a los anticuerpos CD3 anti-humanos, produce un mejor efecto profiláctico o terapéutico en un sujeto que cualquier tratamiento solo. En ciertas modalidades, la combinación de un anticuerpo CD3 anti -humano y un agente profiláctico o terapéutico diferente a un anticuerpo CD3 anti-humano, logra un 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ó 98% mejor efecto profiláctico o terapéutico en un sujeto con el desorden autoinmune, o predisposición al mismo, que cualquier tratamiento solo. En modalidades particulares, la combinación de uno más anticuerpos anti-CD3 y un agente profiláctico o terapéutico diferente a un anticuerpo anti-CD3 logra un 20%, preferiblemente un 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ó 98% mayor reducción en la inflamación de un órgano, tejido o articulación particular con un desorden inflamatorio o un desorden autoinmune el cual está asociado con inflamación que cualquier tratamiento solo. En otras modalidades, la combinación de uno o más anticuerpos anti-CD3 y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos diferentes a los anticuerpos anti-CD3, tiene un efecto más que aditivo o efecto sinérgico en un sujeto con un desorden autoinmune o inflamatorio. Las terapias de combinación de la invención permiten dosificaciones más bajas de anticuerpos CD3 anti-humanos y/o administración menos frecuente de anticuerpos CD3 anti-humanos a un sujeto con un desorden autoinmune para lograr un efecto profiláctico o terapéutico. Las terapias de combinación de la invención permiten dosificaciones más bajas de los agentes profilácticos o terapéuticos utilizados en conjunción con anticuerpos CD3 anti-humanos y/o administración menos frecuente de tales agentes profilácticos o terapéuticos para lograr un efecto profiláctico o terapéutico. Los agentes profilácticos o terapéuticos de las terapias de combinación de la presente invención, se pueden administrar concomitantemente, concurrentemente o secuencialmente . Los agentes profilácticos o terapéuticos de las terapias de combinación de la presente invención, también se pueden administrar cíclicamente. La terapia en ciclos involucra la administración de un primer agente profiláctico o terapéutico durante un período de tiempo, seguido por la administración de un segundo agente profiláctico o terapéutico durante un período de tiempo y repitiendo esta administración secuencial, es decir, el ciclo, con el fin de reducir el desarrollo de resistencia a uno de los agentes, para evitar o reducir los efectos secundarios de uno de los agentes, y/o mejorar la eficacia del tratamiento. 5.2.8.1 Métodos de Uso de Terapia de Combinación En una modalidad específica, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, o mejorar uno o más síntomas asociados con un desorden autoi.nmune o inflamatorio en un sujeto, dicho método comprende administrar a dicho sujeto uno o más anticuerpos anti-CD3 y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos diferentes a los anticuerpos anti-CD3. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar, o mejorar uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmune o inflamatorio en un sujeto, dicho método comprende administrar a dicho sujeto uno o más anticuerpos anti-CD3 y uno o más agentes profilácticos o terapéuticos diferentes a los anticuerpos anti-CD3, en donde al menos uno de los anticuerpos anti-CD3 es un 0KT3 humanizado. La presente invención proporciona métodos para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmune o inflamatorio en un sujeto, dichos métodos comprenden administrar a dicho sujeto uno o más anticuerpos anti-CD3 y uno o más agentes profilácticos, terapéuticos o inmunomoduladores. Preferiblemente, los agentes inmunomoduladores no se administran a un sujeto con un desorden autoinmune o inflamatorio cuyo conteo absoluto de linfocitos es menor de 500 células/mm3, menor de 550 células/mm3 , menor de 600 células/mm3 , menor de 650 células/mm3, menor de 700 células/mm3, menor de 750 células/mm3, menor de 800 células/mm3, menor de 850 células/mm3 o menor de 900 células/mm3. Por consiguiente, en una modalidad preferida, antes de o subsecuente a la administración de una o más dosificaciones de uno o más agentes inmunomoduladores a un sujeto con un desorden autoinmune o inflamatorio, el conteo absoluto de linfocitos de dicho sujeto se determina mediante técnicas bien conocidas para un experto en el arte, incluyendo, por ejemplo, citometría de flujo o conteos con azul de tripano. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la diabetes, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de insulina. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la diabetes, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de GLP 1 ó análogo de GLP 1. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la diabetes, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de exendin-4 ó análogo del mismo. En una modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la diabetes, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de amilina o un análogo de la misma. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la diabetes, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva del 0KT3 humanizado de anticuerpo anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de insulina. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con la psoriasis, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de metotrexato. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para prevenir, tratar, manejar o mejorar uno o más síntomas asociados con psoriasis en un sujeto, dicho método comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva del 0KT3 humanizado del anticuerpo anti-CD3 y una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de metotrexato. 5.3 Composiciones Farmacéuticas La presente invención proporciona composiciones para el tratamiento, profilaxis, y mejora de uno o más síntomas asociados con un desorden autoinmune. En una modalidad específica, una composición comprende uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos . En otra modalidad, una composición comprende una o más moléculas de ácido nucleico que codifican las cadenas pesada y ligera de uno o más anticuerpos CD3 antihumanos .
En una modalidad específica, la composición comprende un anticuerpo CD3 anti-humano, en, donde dicho anticuerpo CD3 anti-humano es un anticuerpo monoclonal, humano o humanizado, preferiblemente modificado para reducir el enlace del dominio Fe a los receptores Fe y, por lo tanto, reducen la toxicidad del anticuerpo. En aún otra modalidad preferida, una composición comprende 0KT3 humanizado, un análogo, derivado, fragmento del mismo que se enlaza inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3, preferiblemente 0??3?1 (ala-ala), aunque también puede incluir ChAglyCD3 (TRX4™) , ó HUM291 (visilizumab; NUVION™) . En una modalidad preferida, una composición de la invención es una composición farmacéutica. Tales composiciones comprenden una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos , y: un portador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad específica, el término "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o estatal, o listada en la Farmacopea Norteamericana u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en humanos. El término "portador" se refiere a un diluyente, adyuvante (por ejemplo, adyuvante de Freund (completo o incompleto) ) , excipiente o vehículo con el cual se administra la sustancia terapéutica. Tales portadores farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo aquéllos de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, tal como aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. El agua es un portador preferido cuando se administra intravenosamente la composición farmacéutica. También se pueden emplear soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, yeso, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, lecha descremada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares (Ver, por ejemplo, Handbook of Pharmaceutical Excipients, Arthur H. Kibbe (ed., 2000, la cual se incorpora como referencia en su totalidad) , Am. Pharmaceutical Association, Washington, DC. La composición, si se desea, también puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes amortiguadores de pH. Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsión, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida, y similares. La formulación oral puede incluir portadores estándar tales como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Los ejemplos de portadores farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E.W. Martin. Tales composiciones contendrán una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de un agente profiláctico o terapéutico preferiblemente en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de portador para proporcionar la forma de administración apropiada al paciente. La formulación deberá ser conveniente al modo de administración. En una modalidad preferida, las composiciones farmacéuticas son estériles y en forma adecuada para la administración a un sujeto, preferiblemente un sujeto animal, más preferiblemente un sujeto mamífero, y más preferiblemente un sujeto humano. En una modalidad específica, puede ser deseable administrar las composiciones farmacéuticas de la invención localmente al área en necesidad de tratamiento; esto se puede lograr mediante, por ejemplo, y no a manera de limitación, infusión local, mediante inyección, o por medio de un implante, dicho implante es de un material poroso, no poroso o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas sialásticas, o fibras. Preferiblemente, al administrar un anticuerpo CD3 anti-humano, se debe tener cuidado al utilizar materiales en los cuales no se absorba el anticuerpo CD3 antihumano .
En otra modalidad, la composición se puede suministrar en una ampolla, en particular un liposoma (ver, Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat et al., en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cáncer, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; ver en general ibid.). En aún otra modalidad, la composición se puede suministrar en un sistema de liberación controlada o liberación sostenida. En una modalidad, puede usarse una bomba para lograr una liberación controlada o sostenida (ver Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit . Ref . Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl . J. ed. 321:574). En otra modalidad, se pueden utilizar materiales poliméricos para lograr la liberación controlada o sostenida de los anticuerpos de la invención o fragmentos de los mismos (ver, por ejemplo, Medical Applications of Controlled Reléase, Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Ratón, Florida (1974) ; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger y Peppas, 1983, J., Macromol . Sci . Rev. Macromol. Chem. 23:61; ver también Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al,, 1989, Ann. Neurol . 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg . 71:105); Patente Norteamericana No. 5,679,377; Patente Norteamericana No. ,916,597; Patente Norteamericana No. 5,912,015; Patente Norteamericana No. 5,989,463; Patente Norteamericana No. 5,128,326; Publicación PCT No. WO 99/15154; y Publicación PCT No. WO 99/20253. Los ejemplos de polímeros utilizados en formulaciones de liberación sostenida incluyen, pero no están limitados a, poli (2-hidroxi-etil-metacrilato) , poli(metil-metacrilato) , poli (ácido acrílico) , poli (acetato etilen-co-vinílico) , poli (ácido metacrílico) , poliglicólidos (PLG) , polianhídridos, poli (N-vinil -pirrolidona) , poli (alcohol vinílico) , poliacrilamida, poli (etilenglicol) , poliláctidas (PLA) , poli (láctida-co-glicólidos) (PLGA) , y poliortoésteres . En una modalidad preferida, el polímero usado en una formulación de liberación sostenida es inerte, libre de impurezas lixiviadas, estable en almacenamiento, estéril, y biodegradable . En aún otra modalidad, un sistema de liberación controlada o sostenida se puede colocar cerca del objetivo terapéutico, es decir, los pulmones, requiriendo así sólo una fracción de la dosis sistémica (ver, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Reléase, supra, vol . 2, pp. 115-138 (1984) ) . Los sistemas de liberación controlada se discuten en la revisión de Langer (1990, Science 249: 1527-1533). Se puede utilizar cualquier técnica conocida para un experto en el arte para producir formulaciones de liberación sostenida que comprendan uno o más anticuerpos, de la invención o fragmentos de los mismos. Ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4,526,938; Publicación PCT WO 91/05548; Publicación PCT WO 96/20698; Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-189; Song et al., 1995, PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al., 1997, Pro. Int ¦ 1. Symp. Control. Reí. Bioact . ater. 24:853-854; y Lam et al., 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Reí. Bioact. Mater. 24:759-760, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. Una composición farmacéutica de la invención se formula para ser compatible con su vía pretendida de administración. Los ejemplos de vías de administración incluyen, pero no están limitados a, administración parenteral, por ejemplo, intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (por ejemplo, inhalación) , intranasal, transdérmica (tópica) , transmucosal , y rectal. En una modalidad específica, la composición se formula de acuerdo con procedimientos rutinarios como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, oral, intranasal o tópica a seres humanos. En una modalidad preferida, una composición farmacéutica se formula de acuerdo con procedimientos rutinarios para administración subcutánea a seres humanos. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa son soluciones en amortiguador acuoso, isotónico, estéril. Cuando sea necesario, la composición también puede incluir un agente solubilizante y un agente anestésico local como lignocaina para aliviar el dolor en el sitio de la inyección. Si las composiciones de la invención se van a administrar tópicamente, las composiciones se pueden formular en la forma de, por ejemplo, un ungüento, crema, parche transdérmico, loción, gel, champú, aerosol, solución, emulsión, u otra forma bien conocida para un experto en la técnica. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia, PA (1985) . Para formas de dosificación tópica, no aplicables con atomizador, típicamente se emplean formas viscosas a semi-sólidas o sólidas que comprenden un portador o uno o más excipientes compatibles con aplicación tópica y que tienen una viscosidad dinámica preferiblemente mayor que el agua. Las formulaciones adecuadas incluyen, sin limitación, soluciones, suspensiones, emulsiones, cremas, ungüentos, polvos, linimentos, bálsamos, y similares, los cuales, si se desea, se esterilizan o mezclan con agentes auxiliares (por ejemplo, conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, amortiguadores, o sales) para influenciar varias propiedades, tales como, por ejemplo, la presión osmótica. Otras formas adecuadas de dosificación tópica, incluyen preparaciones en aerosol, que se aplican con aspersión, en donde el ingredientes activo, preferiblemente en combinación con un portador inerte, sólido o líquido, se envasa u ofrece en una mezcla con una sustancia volátil presurizada (por ejemplo, un propulsante gaseoso, tal como freón) , o en un frasco de aplicación con apretón. Si se desea también se pueden agregar hidratantes o humectantes a las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación. Los ejemplos de tales ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica. Si las composiciones de la invención se van a administrar intranasalmente, las composiciones se pueden formular en una forma en aerosol, rociador, vaporización o en la forma de gotas. En particular, los agentes profilácticos o terapéuticos para su uso de acuerdo a la presente invención, se pueden suministrar convenientemente en la forma de una presentación en aerosol de envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsante adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la dosis unitaria puede determinarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para su uso en un inhalador o insuflador, pueden formularse conteniendo una mezcla en polvo del compuesto y un polvo base ¡ adecuado tal como lactosa o almidón. Si las composiciones de la invención se van a administrar oralmente, las composiciones se pueden formular oralmente en la forma de, por ejemplo, tabletas, cápsulas, cápsulas planas, gelcaps (cápsulas de gel) , soluciones, suspensiones y similares. Las tabletas o cápsulas se pueden preparar por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hiroxipropil-metilcelulosa) ; agentes de relleno (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o fosfato hidrogenado de calcio) ; lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice) ; desintegradores (por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón sódico) ; o agentes humectantes (por ejemplo, lauril-sulfato de sodio) . Las tabletas se pueden recubrir mediante los métodos bien «conocidos en la técnica. Las' preparaciones líquidas para administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o las mismas pueden ofrecerse como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de usarse. Tales preparacipnes líquidas pueden prepararse por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas) ; agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o acacia) ; vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, ésteres aceitosos, alcohol etílico o aceites vegetables fraccionados) ; y conservadores (por ejemplo, metil- o propil-p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico) . Las preparaciones también pueden contener sales amortiguadoras, agentes saborizantes , colorantes y edulcorantes cuando sea apropiado. Las preparaciones para administración oral pueden formularse adecuadamente para la liberación lenta, liberación controlada o liberación sostenida de un agente (s) profiláctico (s) o terapéutico (s) . Las composiciones de la invención pueden formularse para administración parenteral mediante inyección, por ejemplo, mediante inyección de bolos o infusión continúa. Las formulaciones para inyección pueden ofrecerse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampolletas o en contenedores de dosis múltiples, con un conservador agregado. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en la forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril, libre de pirógenos, antes de usarse. En modalidades específicas, la invención proporciona formas de dosificación que permiten la administración de los anticuerpos CD3 anti -humanos continuamente durante un período de horas o días (por ejemplo, asociada con una bomba u otro dispositivo para tal suministro), por ejemplo, durante un período de 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas, 4 días, 5 días, 7 días, 10 días ó 14 días. En otras modalidades específicas, la invención proporciona formas de dosificación que permiten la administración de una dosis continua, cada vez mayor, por ejemplo, que incrementa de 51 g/m2/día a 826 ^g/m2/día durante un período de 24 horas, 30 horas, 36 horas, 4 días, 5 días, 7 días, 10 días ó 14 días. Las composiciones de la invención también pueden formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contengan bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Además de las formulaciones descritas previamente, las composiciones de la invención también pueden formularse como una preparación de depósito o acumulación. Tales formulaciones de acción prolongada pueden administrarse mediante implante (por ejemplo subcutánea o intramuscularmente) o mediante inyección intramuscular. Por consiguiente, por ejemplo, las composiciones pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o en resinas de intercambio iónico, o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble. Las composiciones de la invención se pueden formular como formas neutrales o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquéllas formadas con aniones tales como aquéllas derivadas de ácido clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y aquéllos formados con cationes tales como aquéllos derivados de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino-etanol , histidina, procaína, etc. Generalmente, los ingredientes de las composiciones de la invención se suministran ya sea por separado o mezcladas conjuntamente en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o concentrado libre de agua en un contenedor herméticamente sellado tal como una ampolleta o sobrecitos que indiquen la cantidad de agente activo. Cuando la composición se va a administrar mediante infusión, la misma puede proporcionarse con una botella para infusión que contenga agua estéril grado farmacéutico o solución salina. Cuando la composición se administra por medio de inyección, se puede proporcionar una ampolleta de agua estéril para inyección o solución salina de modo que los ingredientes puedan mezclarse antes de la administración. En particular, la invención establece que uno o más anticuerpos CD3 anti-humanos o composiciones farmacéuticas de la invención, se envasen en un contenedor' herméticamente sellado tal como una ampolleta o sobrecito que indique la cantidad del agente. En una modalidad, uno o más de los anticuerpos CD3 anti -humanos , o composiciones farmacéuticas de la invención se suministran como un polvo liofilizado estéril o concentrado libre de agua en un contenedor herméticamente sellado y se puede reconstituir, por ejemplo, con agua o solución salina a la concentración apropiada para su administración a un sujeto. Preferiblemente, uno o más de los anticuerpos CD3 anti-humanos , o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra como un polvo estéril, liofilizado, seco, en un contenedor herméticamente sellado a una dosificación unitaria de al menos 5 mg, más preferiblemente al menos 10 mg, al menos 15 mg, al menos 25 mg, al menos 35 mg, al menos 45 mg, al menos 50 mg, ' al menos 75 mg, o al menos 100 mg. Los agentes profilácticos o terapéuticos, liofilizados , o composiciones farmacéuticas de la invención, se deberán almacenar a entre 2 y 8°C en su contenedor original y los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención deberán administrarse dentro de 1 semana, preferiblemente dentro de 5 días, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas, dentro de 6 horas, dentro de 5 horas, dentro de 3 horas, o dentro de 1 hora después de reconstituirse. En una modalidad alternativa, uno o más de los anticuerpos CD3 antihumanos, o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra en . forma líquida en un contenedor herméticamente sellado que indique la cantidad y concentración del agente. Preferiblemente, la forma líquida de la composición administrada se suministra en un contenedor herméticamente sellado de al menos 0.25 mg/ml, más preferiblemente al menos 0.5 mg/ml , al menos 1 mg/ml , al menos 2.5 mg/ml , al menos 5 mg/1 al menos 8 mg/ml, al menos 10 mg/ml al menos 15 mg/kg, al menos 25 mg/ml, al menos 50 mg/ml, al menos 75 mg/ml o al menos 100 mg/ml. La forma líquida deberá almacenarse a entre 2°C y 8°C en su contenedor original. En una modalidad preferida, la invención establece que la composición de la invención se empaque en un contenedor herméticamente sellado tal como una ampolleta o sobrecito que indique la cantidad del anticuerpo CD3 anti -humano. Las composiciones, si se desea, pueden ofrecerse en un empaque o dispositivo dosificador que puede contener una o más formas de dosificación unitaria que contenga el ingrediente activo. El empaque por ejemplo puede comprender una hoja de metal o plástico, tal como un empaque de blíster o ampollas. Generalmente, los ingredientes de las composiciones de la invención se derivan de un sujeto que es del mismo origen de especie o reactividad de especies que un recipiente de tales composiciones. Por consiguiente, en una modalidad preferida, se administran anticuerpos humanos o humanizados a un paciente humano para terapia o profilaxis. La cantidad de la composición de la invención la cual será efectiva en el tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas asociados con un desorden de diabetes autoinmune, se puede determinar mediante técnicas clínicas estándar. La dosis precisa a emplearse en la formulación dependerá de la vía de administración, y de la seriedad de la condición, y deberá decidirse de acuerdo al criterio del médico y cada una de las circunstancias del paciente. Pueden extrapolarse dosis efectivas a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba con modelo animal o in vitro. 5.4 Caracterización de la Utilidad Terapéutica o Profiláctica Anti-CD3 Las moléculas de enlace de CD3 pueden caracterizarse de una variedad de maneras. En particular, las moléculas de enlace de CD3 pueden analizarse por la capacidad de enlazarse inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3. Tal ensayo puede realizarse en solución (por ejemplo, Houghten, 1992, Bio/Techniques 13:412-421), en, perlas (Lam, 1991, Nature 354:82-84), en microplaquetas (Fodor, 1993, Nature 364:555-556), en bacterias (Patente Norteamericana No. 5,223,409), en esporas (Patentes Norteamericanas Nos. 5,571,698; 5,403,484; y 5,223,409), en plásmidos (Culi et al., 1992, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 89:1865-1869) o en fago (Scott y Smith, 1990, Science 249:386-390; Devlin, 1990, Science 249:404-406; Cwirla et al., 1990, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87:6378-6382; y Felici, 1991, J. Mol. Biol . 222:301-310) (cada una de estas referencias se incorpora en la presente en su totalidad como referencia) . Las moléculas que se han identificado por enlazarse inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , se pueden analizar entonces por su especificidad y afinidad para un polipéptido CD3. Las moléculas de enlace de CD3 pueden analizarse por su enlace inmunoespecífico a un polipéptido CD3 y reactividad cruzada con otros polipéptido y mediante cualquier método conocido en la técnica. Los inmunoensayos que se pueden utilizar para analizar el enlace inmunoespecífico y reactividad cruzada incluyen, pero no están limitados a, sistemas de ensayo competitivos y no competitivos que utilizan técnicas tales como transferencias de Western, radioinmunoensayos, ELISA (ensayo de inmunoabsorción enzimática) , inmunoensayos de "intercalación" ensayos de inmunoprecipitación, reacciones de precipitina, reacciones de precipitina con difusión de gel, ensayos de inmunodifusión, ensayos de aglutinación, ensayos de complemento-fijación, ensayos inmuno-radiométricos, inmunoensayos fluorescentes, inmunoensayos de proteína A, por nombrar sólo unos pocos. Tales ensayos son rutinarios y bien conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol . 1, John Wiley & Sons, Inc., New York, la cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad) . Más adelante se describen de manera breve inmunoensayos ejemplares (aunque no se pretende a manera de limitación) . Los protocolos de inmunoprecipitación generalmente comprenden lisar una población de células en un amortiguador de lisis tal como amortiguador RIPA (1% de NP-40 ó Tritón X-100, 1% de desoxicolato sódico, 0.1% de SDS, NaCl 0.15 M, fosfato sódico 0.01 M a pH 7.2, 1% de Trasilol) suplementado con inhibidores de proteína fosfatasa y/o proteasa (por ejemplo, EDTA, PMSF, aprotinina, vanadato sódico) , agregando la molécula de enlace de CD3 de interés al lisado celular, incubando durante un período de tiempo (por ejemplo, 1 a 4 horas) a 40°C, agregando perlas de sefarosa de proteína A y/o proteína G al lisado celular, incubando durante aproximadamente una hora o más a 40°C, lavando las perlas en amortiguador de lisis y resuspendiendo las perlas en amortiguador de SDS/muestra. La capacidad de la molécula de enlace de CD3 de interés para inmunoprecipitar un antígeno particular, puede analizarse mediante, por ejemplo, análisis de transferencia de Western. Un experto en la técnica podría conocer bien los parámetros que se pueden modificar para incrementar el enlace de la molécula de enlace de CD3 a un polipéptido CD3 y disminuir el fondo (por ejemplo, pre-aclarando el lisado celular con perlas de sefarosa) . Para una discusión adicional con respecto a los protocolos de inmunoprecipitación ver, por ejemplo, Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol . 1, John Wiley & Sons, Inc., New York en 10.16.1. El análisis de transferencia de Western comprende preparar muestras de proteína, electroforesis de las muestras de proteína en un gel de poliacrilamida (por ejemplo, 8%-20% de SDS-PAGE dependiendo del peso molecular del antígeno) , transferir la muestra de proteína del gel de poliacrilamida a una membrana tal como nitrocelulosa, PVDF o nilón, bloquear la membrana en solución bloqueadora (por ejemplo, PBS con 3% de BSA o leche descremada) , lavar la membrana en amortiguador de lavado (por ejemplo, PBS-Tween 20) , bloquear la membrana con la molécula de enlace de CD3 de interés (por ejemplo un anticuerpo de interés) diluida en amortiguador blogueador, lavar la membrana en amortiguador de lavado, bloquear la membrana con un anticuerpo (el cual reconoce la molécula de enlace . de CD3) conjugado con un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) o molécula radioactiva (por ejemplo, 32P ó 125I) diluida en amortiguador de bloqueo, lavar la membrana en amortiguador de lavado, y detectar la presencia del polipéptido CD3. Un experto en la técnica podría conocer bien los parámetros que se pueden modificar para incrementar la señal detectada y para reducir el ruido de fondo. Para una discusión adicional con respecto a los protocolos de transferencia de Western, ver, por ejemplo, Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol . 1, John Wiley & Sons, Inc., New York en 10.8.1.
Los ELISAs comprenden preparar polipéptido CD3, revestir los pc--os de una placa de microtitulación de 96 pozos con el polipéptido CD3 , agregar la molécula de enlace de CD3 de interés, conjugada con un compuesto detectable tal como un substrato enzimático (por ejemplo, peroxidasa de rábano o fosfatasa alcalina) al pozo e incubar durante un período de tiempo, y detectar la presencia del polipéptido CD3. En los ELISAs la molécula de enlace de CD3 de interés no tiene que conjugarse con un compuesto detectable; más bien, puede agregarse al pozo un anticuerpo (el cual reconoce la molécula de enlace de CD3 de interés) conjugado con un compuesto detectable. Además, en vez de revestir el pozo con el polipéptido CD3 , la molécula de enlace de CD3 puede revestirse en el-, pozo. En este caso, un anticuerpo conjugado a un compuesto detectable puede agregarse después de la adición del polipéptido CD3 al pozo revestido. Un experto en la técnica podría conocer bien los parámetros que se pueden modificar para incrementar la señal detectada así como otras variaciones de los ELISAs conocidos en la técnica. Para una discusión adicional con respecto a los ELISAs, ver, por ejemplo, Ausubel et al, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York en 11.2.1. La afinidad de enlace de una molécula de enlace de CD3 a un polipéptido CD3 y la relación de corte de una interacción molécula de enlace de CD3 -polipéptido CD3 se puede determinar mediante ensayos de enlace competitivo. Un ejemplo de un ensayo de enlace competitivo es un radioinmunoensayo que comprende la incubación de polipéptido CD3 etiquetado (por ejemplo, 3H ó 125I) con la molécula de enlace de CD3 de interés en la presencia de cantidades cada vez mayores de polipéptido CD3 no etiquetado, y la detección de la molécula de enlace de CD3 unida al polipéptido CD3 etiquetado. La afinidad de una molécula de enlace de CD3 para un polipéptido CD3 y las relaciones de corte o separación de enlace pueden determinarse a partir de los datos mediante análisis de graficado scatchard. La competición con una segunda molécula de enlace de CD3 también se puede determinar utilizando radioinmunoensayos . En este caso, un polipéptido CD3 se incuba con una molécula de enlace de CD3 conjugada con un compuesto etiquetado (por ejemplo, 3H ó 125I) en la presencia de cantidades cada vez mayores de una segunda molécula de enlace de CD3 no etiquetada. En una modalidad preferida, se utiliza análisis cinético BIAcore para determinar las relaciones de enlace y las relaciones de corte o separación de las moléculas de enlace de CD3 a un polipéptido CD3. El análisis cinético BIAcore comprende analizar el enlace y disociación de un polipéptido CD3 a partir de microplaquetas con las moléculas de enlace de CD3 inmovilizadas en su superficie. Las moléculas de enlace de CD3, en particular los anticuerpos CD3 anti-humanos, y. composiciones de la invención también pueden analizarse por, su capacidad de modular la activación de las células T. La activación de las células T se puede determinar midiendo, por ejemplo, cambios en el nivel de expresión de los marcadores de activación de citocinas y/o células T. Las técnicas conocidas para aquellos expertos en la técnica, que incluyen, pero no están limitadas a, inmunoprecipitación seguida por análisis de transferencia de Western, ELISAs, citometría de flujo, análisis de manchado Northern, y RT-PCR se pueden utilizar para medir los marcadores de activación de citocinas de expresión y células T. En una modalidad preferida, una molécula de enlace de CD3 o composición de la invención se prueba por su capacidad para inducir la expresión de IFN-? y/o IL-2. Los anticuerpos anti-CD3, y composiciones de la invención también se pueden analizar por su capacidad para inducir la señalización de células T. La capacidad de un anticuerpo CD3 anti-humano o una composición de la invención, que induce la señalización de las células T, se puede analizar, por ejemplo, mediante ensayos de cinasa y ensayos de desplazamiento electroforético (EMSAs) . Los anticuerpos anti-CD3, y composiciones de la invención se pueden analizar in vitro o in vivo por su capacidad de modular la proliferación de células T. Por ejemplo, la capacidad de un anticuerpo anti-CD3 o una composición de la invención para modular la proliferación de las células T, se puede analizar mediante, por ejemplo, incorporación de 3H-timidina, conteos celulares con azul de tripano, clasificación celular activada con fluorescencia (FACS) .
Los anticuerpos CD3 anti-huraanos , y composiciones de la .invención, se pueden analizar in vitro o in vivo por su capacidad de inducir citólisis. Por ejemplo, la capacidad de un anticuerpo anti-CD3 o una composición de la invención para inducir la citólisis, se puede analizar mediante, por ejemplo, ensayos de liberación con 51Cr. Los anticuerpos anti-CD3, y composiciones de la invención se pueden analizar in vitro o in vivo por su capacidad de mediar la depleción de células T de sangre periférica. Por ejemplo, la capacidad de un anticuerpo anti-CD3 o una composición de la invención para mediar la depleción de células T de sangre periférica, se puede analizar, por ejemplo, midiendo los conteos de células T utilizando análisis de citometría de flujo. Los anticuerpos anti-CD3, y composiciones de la invención se pueden analizar in vivo por su capacidad para mediar los conteos de linfocitos en sangre periférica. Por .ejemplo, la capacidad de un anticuerpo anti-CD3 o una composición de la invención para mediar los conteos de linfocitos en sangre periférica, se pueden analizar, por ejemplo, obteniendo una muestra de sangre periférica de un sujeto, separando los linfocitos de otros componentes de sangre periférica tal como plasma utilizando, por ejemplo, un gradiente Ficoll, y contando los linfocitos utilizando azul de tripano. 5.4.1 Caracterización de Moléculas de Inmunoglobulina con Regiones Fe Variantes En modalidades preferidas, la caracterización de moléculas que comprenden regiones Fe variantes con afinidades de FcyR alteradas (por ejemplo, enlace de FcyR nulo), se hace con uno o más ensayos de base bioquímica, preferiblemente de una manera de alto rendimiento. Uno o más de los ensayos bioquímicos puede ser cualquier ensayo conocido en la técnica para identificar la interacción Fc-FcyR, es decir, el enlace específico de un región Fe a un FcyR, que incluye pero no está limitado a, un ensayo ELISA, ensayos de resonancia de plasmón de superficie, ensayo de inmunoprecipitación, cromatografía de afinidad y diálisis de equilibrio. Los ensayos de base funcional pueden ser cualquier ensayo conocido en la técnica por caracterizar una o más funciones de las células efectoras mediadas por FcyR. La comparación de anticuerpos con regiones Fe alteradas de la invención para controlar los anticuerpos proporciona una medida del grado de disminución o eliminación de la interacción Fc-FcyR. Los ejemplos no limitantes de funciones de células efectoras, que se pueden utilizar de acuerdo con los métodos de la invención, incluyen pero no están limitados a, citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC) , fagocitosis dependiente de anticuerpos, fagocitosis, opsonización, opsonofagocitosis , enlace celular, formación de rosetas, enlace de Clq, y citotoxicidad mediada por células dependientes complementarias. En modalidades preferidas, la caracterización de moléculas que comprenden regiones Fe variantes con afinidades de FcyR alteradas (por ejemplo, enlace de FcR nulo) , se hace con uno o más ensayos de base bioquímica o en paralelo con uno o más ensayos de base funcional, preferiblemente de una manera de alto rendimiento. En algunas modalidades, la caracterización de moléculas "que comprenden regiones Fe variantes con afinidades de FcyR alteradas (por ejemplo, enlace de FcyR nulo) comprende: caracterizar el enlace de la molécula que comprende la región Fe variante a un FcyR (uno o más) , usar un ensayo bioquímico para determinar la interacción Fc-FcyR, preferiblemente, un ensayo a base de ELISA seguido por la comparación de los resultados del mismo ensayo obtenido con un control es decir, anticuerpo no modificado. Una vez que la molécula que "comprende una región Fe variante se ha caracterizado por su interacción con uno o más FcyRs y que se determinó que tiene enlace nulo a uno o más FcyRs, mediante al menos un ensayo de base bioquímica, por ejemplo, un ensayo ELISA, la molécula se puede diseñar en una inmunoglobulina completa, utilizando métodos de tecnología de ADN recombinante , conocidos en la técnica, y la inmunoglobulina que comprende la región Fe variante expresada en células de mamífero para su caracterización bioquímica adicional. La inmunoglobulina en la cual una región Fe variante de la invención, se introduce (por ejemplo, reemplazando la región Fe de la inmunoglobulina) puede ser cualquier inmunoglobulina que incluye, pero no está limitada a, anticuerpos policlonales , anticuerpos monoclonales , anticuerpos biespecíficos , anticuerpos multi-específieos, anticuerpos humanizados, y anticuerpos quiméricos. En modalidades preferidas, una región Fe se introduce en una inmunoglobulina específica para el complejo CD3 asociado con TCR humano. Las regiones Fe variantes, preferiblemente en el contexto de una inmunoglobulina, se pueden caracterizar además .utilizando uno o más ensayos bioquímicos y/o uno o más ensayos funcionales, preferiblemente de una manera de alto rendimiento. En algunas modalidades alternas, las regiones Fe variantes no se introducen en una inmunoglobulina y se caracterizan además utilizando uno o más ensayos de base bioquímica y/o uno o más ensayos funcionales, preferiblemente de una manera de alto rendimiento. Uno o más de los ensayos bioquímicos pueden ser cualquier ensayo conocido en la técnica para identificar interacciones Fc-FcyR, que incluyen, pero no están limitados a, un ensayo ELISA, y ensayo a base de resonancia de plasmón de superficie para determinar los parámetros cinéticos de la interacción FC-FCYR, por ejemplo, ensayo BIAcore. Uno o más de los ensayos funcionales puede ser cualquier ensayo conocido en la técnica por caracterizar una o más funciones de células efectoras mediadas por FcyR que son conocidos para un experto en la técnica o descritos en la presente. En modalidades específicas, las inmunoglobulinas que comprenden las regiones Fe variantes, se analizan en un ensayo ELISA para su enlace a uno o más FcyRs, por ejemplo, FCYRIIIA, FcyRIIA, FcyRIIA; seguido por uno o más ensayos ADCC. En algunas modalidades, las inmunoglobulinas que comprenden las regiones Fe variantes, se analizan además utilizando un ensayo a base de resonancia de plasmón de superficie, por ejemplo, BIAcore. Para una discusión ' detallada adicional de la caracterización de inmunoglobulinas que comprenden las regiones Fe variantes, ver la Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 2005/0064514 Al y Publicación de Solicitud de Patente Norteamericana No. 20050037000 Al. La inmunoglobulina que comprende las regiones Fe variantes se pueden analizar en cualquier punto utilizando ensayo a base de resonancia a base de plasmón de superficie, por ejemplo, BIAcore, para definir los parámetros cinéticos de la interacción Fc-FcyR, utilizando métodos conocidos para aquellos expertos en la técnica.
En modalidades más preferidas, la inmunoglobulina que comprende las regiones Fe variantes, se caracteriza además en un modelo animal por su interacción con un FCYR. Los modelos animales preferidos para su uso en los métodos de la invención son, por ejemplo, ratones transgénicos que expresan FcyRs humanos, por ejemplo, cualquier modelo de ratón descrito en la Patente Norteamericana No. 5,877,397, la cual se incorpora en "la presente como referencia en su totalidad. Los ratones transgénicos para su uso en los métodos de la invención incluyen, pero no están limitados a, ratones FCYRIIIA, mutantes con alelo nulo, desnudos o sin pelo, que portan el FCYRIIIA humano; ratones FCYRIIIA, mutantes con alelo nulo, desnudos, que portan el FCYRIIA humano; ratones FCYRIIIA, mutantes con alelo nulo, desnudos, que portan el FCYRIIB humano y ratones FCYRIIIA, mutantes con alelo nulo, desnudos, 'que portan el FcyRIIB humano y FcyRIIA. 5.4.2 Caracterización In Vitro e In Vivo Varios aspectos de las composiciones farmacéuticas de los anticuerpos anti-CD3 de la invención preferiblemente se analizan in vitro, en un sistema de cultivo celular, y en un organismo de modelo animal, tal como un sistema de modelo animal roedor, para la actividad terapéutica deseada antes de usarse en humanos. Por ejemplo, los ensayos que se pueden "utilizar para . determinar si se indica administración de una composición farmacéutica específica, incluyen ensayos de cultivo celular en los cuales se cultiva una muestra de tejido del paciente, y se expone a o de otra manera se pone en contacto con una composición farmacéutica, y se observa el efecto de tal composición en la muestra de tejido. La muestra de tejido se puede obtener mediante una biopsia del paciente. Esta prueba permite la identificación de la bacteria terapéuticamente más efectiva dirigida al tumor y las moléculas terapéuticas terapéuticamente más efectivas) para cada paciente individual. En varias modalidades específicas, se pueden llevar a cabo ensayos in vitro con células representativas de los tipos celulares involucrados en un desorden autoinmune o inflamatorio (por ejemplo, células T) , para determinar si una composición farmacéutica de 1 la invencr-.?? tiene un efecto deseado en los tipos celulares. De acuerdo con la invención, no necesitan realizarse ensayos clínicos con sujetos humanos para demostrar la eficacia profiláctica y/o terapéutica de anticuerpos anti-CD3. Los estudios con modelo animal e in vitro utilizando anticuerpos anti-CD3, se pueden extrapolar a humanos y son suficientes para demostrar la utilidad profiláctica y/o terapéutica de dichos anticuerpos anti-CD3. Los anticuerpos anti-CD3 se pueden analizar en sistemas adecuados de modelo animal antes de usarse en humanos . Tales sistemas de modelo animal incluyen, pero no están limitados a, ratas, ratones, vacas, monos, cerdos, perros, conejos, etc. Puede usarse cualquier sistema de animal bien conocido en la técnica. En una modalidad específica de la invención, las moléculas de enlace de CD3 se analizan en un sistema de modelo de ratón. Tales sistemas de modelo se utilizan ampliamente y son bien conocidos para un experto en la técnica. Las moléculas de enlace de CD3 se pueden administrar repetidamente. Varios aspectos del procedimiento pueden variar. Dichos aspectos incluyen el régimen temporal para administrar moléculas de enlace de CD3 , y si tales agentes se administran por separado o como una mezcla. La actividad anti- inflamatoria de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención se pueden determinar utilizando varios modelos animales experimentales de artritis inflamatoria, conocidos en la técnica y descritos en Crofford L.J. y Wilder R.L., "Arthritis and Autoimmunity in Animáis", in Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCarty et al. (eds.), Capítulo 30 (Lee y Febiger, 1993) . También se pueden utilizar modelos animales experimentales y espontáneos de artritis inflamatoria y padecimientos reumáticos autoinmunes para evaluar la actividad anti-inflamatoria de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención. Los siguientes son algunos ensayos provistos como ejemplos y no como limitación. Los principales modelos animales par artritis o padecimiento inflamatorio, conocidos en la técnica y utilizados ampliamente incluyen modelos de rata con artritis, inducida por adyuvante, modelos de rata y ratón con artritis inducida por colágeno, y modelos de rata, conejo y hámster con artritis inducida con antígenos, todos descritos en Crofford L.J. y Wilder R.L., "Arthritis and Autoimmunity in Animáis", in Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCarty et al. , (eds.), Capítulo 30 (Lee y Febiger, 1993) , incorporadas en la presente como referencia en su totalidad. Una artritis inducida por colágeno (CIA) es un modelo animal para el padecimiento autoinmune humano, artritis reumatoide (RA) (Trenthorn et al., 1977, J. Exp . Med. 146:857). Este padecimiento se puede inducir en muchas "especies mediante la administración de colágeno heterólogo tipo II (Courtenay et al., 1980, Nature 283:665; y Cathcart et at, 1986, Lab. Invest. 54:26). Con respecto a modelos animales de artritis ver, además, por ejemplo Holmdahl, R., 1999, Curr. Biol. I5:R528-530. Adicionalmente , también se pueden utilizar modelos animales para el padecimiento de inflamación del colon para evaluar la eficacia de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención (Kim et al., 1992, ? •Scand. J. Gastroentrol . 27:529-537; Strober, 1985, Dig. Dis. Sci. 30(12 Suppl) : 3S-10S . La colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn son padecimientos de inflamación del colon humano que se puede inducir en animales. Los polisacáridos sulfatados que incluyen, pero no están limitados a amilopectina, musgo perlado o carragen (musgo de Islandia) , sulfato de amilopectina, y sulfato de dextirina o irritantes químicos que incluyen pero no están limitados a ácido trinitrobencensulfónico (TNBS) y ácido acético, se pueden administrar a animales oralmente para inducir padecimientos de inflamación del colon. También se pueden utilizar modelos animales para asma para evaluar la eficacia de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención. Un ejemplo de tal modelo es el modelo de transferencia adoptiva marina en el cual la provocación aeroalergenos del ratón receptor de THl ó TH2, da como resultado la migración de células efectoras TH a las vías respiratorias y está asociado con una respuesta inflamatoria intensa, de las mucosas de los pulmones, neutrófila (THl) o eosinófila (TH2) (Cohn et al., 1997, J. Exp. Med. 1861737-1747) . También se pueden utilizar modelos animales para desórdenes autoinmunes para evaluar la eficacia de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención. Se han desarrollado modelos animales para desórdenes autoinmunes tales como la diabetes tipo 1, autoinmunidad tiroidea, lupus eritematoso sistémico, y glomerulonefritis (Bluestone et al., 2004, PNAS 101:14622-14626; Flanders et al., 1999, Autoimmunity 29:235-246; Krogh et al., 1999, Biochimie 81:511-515; Foster, 1999, Semin. Nephrol . 19 : 12-24) . La eficacia de anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención, también puede analizarse en tales modelos de desórdenes autoinmunes como un modelo de encefalomielitis alérgica experimental (EAE) . La EAE es un padecimiento autoinmune experimental del sistema nervioso central (SNC) (Zamvil et al, 1990, Ann. Rev, Immunol . 8:579) y es un modelo de padecimiento para la condición autoinmune humana, esclerosis múltiple (MS) . La EAE es un ejemplo de de acuerdo a mediado por células que se media a través de las células T. La EAE se induce fácilmente en especies de mamíferos mediante inmunizaciones de proteína básica de mielina (MBP) purificada del SNC o un proteolípido encefalitogénico (PLP) . Los ratones SJL/J son una cepa susceptible de ratones (H-2u) y, en la inducción de EAE, estos ratones desarrollan un padecimiento paralítico agudo y es identificable un infiltrado celular agudo dentro del SNC. La EAE se desarrolla espontáneamente en ratones (TgMBP+) transgénicos con receptor de células T (TcR) de péptido específico BP1-17 de un antecedente deficiente de RAG-1 (Lafaille et al., 1994, Cell 78:399). Además, se puede utilizar cualquier ensayo conocido para aquellos expertos en la técnica para evaluar los anticuerpos anti-CD3 o las composiciones farmacéuticas descritas en la presente para padecimientos autoinmunes y/o inflamatorios. La toxicidad y/o eficacia de los anticuerpos anti-CD3 o composiciones farmacéuticas de la invención, se puede determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población) . La relación de dosis entre los efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se prefieren anticuerpos anti-CD3 que exhiban grandes índicos terapéuticos. Aunque pueden utilizarse anticuerpos anti-CD3 que exhiben efectos secundarios tóxicos, se deberá tener cuidado al diseñar un sistema de suministre que dirija tales agentes al sitio del tejido afectado con el fin de minimizar el daño potencial a células no infectadas y, así, reducir los efectos secundarios.
Los datos obtenidos de ensayos de cultivo celular y estudios en animales se pueden utilizar para formular un rango de dosificación de anticuerpos CD3 anti -humanos para su uso en humanos. La dosificación de tales agentes se encuentra preferiblemente dentro del rango de concentraciones circulantes que incluyen la ED50 con poco o nada de toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para cualquier agente utilizado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente efectiva se puede estimar inicialmente a partir de los ensayos de cultivo celular. Puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un rango de concentración circulante en plasma que incluya la IC50 (es decir, la concentración del compuesto de prueba que logra una inhibición media-máxima de los síntomas) como se determina en el cultivo celular. Tal información se puede utilizar para determinar con más exactitud dosis útiles en humanes. Los niveles en plasma, pueden medirse por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución. La eficacia en la prevención o tratamiento de un de desorden autoinmune se puede demostrar, por ejemplo, detectando la capacidad de un anticuerpo CD3 anti-humano o composición de la invención para reducir uno o más síntomas del desorden autoinmune, para reducir los conteos absolutos medios de linfocitos, para disminuir la activación de las células T, para disminuir la proliferación de las células T, para reducir la producción de citocinas, o para modular uno o más perfiles particulares de citocina. La eficacia en el tratamiento de la diabetes puede demostrarse, por ejemplo detectando la capacidad de un anticuerpo CD3 anti -humano o i composición de la invención para reducir uno o más síntomas de diabetes, para conservar la respuesta del péptido C a MMTT, para reducir el nivel HA1 ó HAlc, para reducir el requerimiento diario de insulina, o para disminuir la activación de las células T en tejido de islotes del páncreas. 1.a eficacia en la prevención o tratamiento de un desorden inflamatorio puede demostrarse, por ejemplo, detectando, la capacidad de un anticuerpo anti-CD3 para reducir uno o más síntomas del desorden inflamatorio, para disminuir la activación de las células T, para disminuir la proliferación de las células T, para modular uno o más perfiles de citocina, para reducir la producción de citocinas, para reducir la inflamación de una articulación, órgano o tejido o para mejorar la calidad de vida.
Pueden evaluarse los cambios en la actividad del padecimiento inflamatorio a : través de conteos de las articulaciones blandas e inflamadas, las puntuaciones globales del paciente y el médico para la actividad del dolor y padecimiento, y la ESRICRP. La progresión del daño estructural de las articulaciones puede evaluarse mediante puntuación cuantitativa de rayos X de manos, muñecas, y pies (método Sharp) . Los cambios en el estatus funcional en humanos con desórdenes inflamatorios pueden evaluarse utilizando el Formulario de Evaluación del Estado de Salud (HAQ) , y los cambios de la calidad de vida, se evalúan con el SF-36. 5.5 Métodos para el Monitoreo de Conteos de Linfocitos y Porcentaje de Enlace El efecto de una o más dosis de uno o más anticuerpos CD3 anti -humanos o composición en los conteos de linfocitos de sangre periférica, se pueden monitorear/evaluar utilizando técnicas estándar conocidas para un experto en el arte. Los conteos de linfocitos de sangre periférica en un mamífero, se pueden determinar, por ejemplo, obteniendo una muestra de sangre periférica de dicho mamífero, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica tales como plasma utilizando, por ejemplo, centrifugación de gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) , y contando los linfocitos utilizando azul de tripano. Los conteos de células T de sangre periférica en mamíferos se pueden determinar, por ejemplo, separando los linfocitos de otros componentes' de la sangre periférica tales como plasma empleando por ejemplo, un uso de centrifugación de gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) , etiquetando las células T con un anticuerpo dirigido a un antígeno de células T ' tal I como CD2, CD3 , CD , y CD8 , el cual se conjuga con FITC o ficoeritrina, y midiendo el número de células T mediante FACS. Además, el efecto en un subcon unto particular de células T (por ejemplo, CD2\ CD4\ CD8+, CD4+R0+, CD8+R0+, CD4+RA+, o CD8+RA+) , se puede determinar utilizando técnicas estándar conocidas para un experto en el arte como FACS . El porcentaje de polipéptidos CD3 expresado por los linfocitos de sangre periférica, unidos mediante anticuerpos CD3 anti-humanos antes o después, o ambos antes y después de la administración de una o más dosis de anticuerpos anti-CD3, se puede evaluar utilizando técnicas estándar conocidas para un experto en la técnica. El porcentaje de polipéptidos CD3 expresado por las células T de sangre periférica, unidos mediante los anticuerpos anti-CD3, se puede determinar por ejemplo, obteniendo una muestra de sangre periférica de un mamífero, separando los linfocitos de otros componentes de la sangre periférica tal como plasma utilizando, por ejemplo, centrifugación de gradiente Ficoll-Hypaque (Pharmacia) , y etiquetando las células T con 1 un anticuerpo de molécula de enlace de CD3 anti-CD3 diferente al de la invención, conjugado con FITC y un anticuerpo dirigido a un antígeno de células T tal como CD3 , CD4 ó CD8 el cual se conjuga con ficoeritrina, y determinando el número de células T etiquetadas con anticuerpo de molécula de enlace anti-CD3 en relación al número de células T etiquetadas con un anticuerpo dirigido a un antígeno de células T utilizando FACS. 5.6 Métodos para la Producción de Anticuerpos Los anticuerpos que se enlazan inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3 , se pueden producir mediante cualquier método conocido en la técnica para la síntesis de anticuerpos, en particular, mediante síntesis química o preferiblemente, mediante técnicas de expresión recombinante . Los anticuerpos policlonales que se enlazan inmunoespecíficamente a un antígeno, se pueden producir mediante varios procedimientos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, un antígeno humano se puede administrar a varios animales huésped incluyendo, pero no limitados a, conejos, ratones, ratas, etc., para 1 inducir la producción de anticuerpos policlonales que contengan suero, específicos para el antígeno humano. Pueden utilizarse varios adyuvantes para incrementar la respuesta inmunológica, dependiendo de las especies huésped, que incluyen pero no están limitadas a, Freund (completo e incompleto), geles minerales tales como hidróxido de aluminio, sustancias de superficie activa tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones aceitosas, hemocianinas de lapas californianas , dinitrofenol , y adyuvantes humanos potencialmente útiles tales como BCG (bacilo Calmette-Guerin) y corynebacterium parvum.
Tales adyuvantes son bien conocidos en la técnica. Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar utilizando una amplia variedad de técnicas conocidas en el arte que incluyen el uso tecnologías de hibridoma, recombinantes , y despliegue de fagos, o una combinación de las mismas. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales se pueden producir utilizando técnicas de hibridoma que incluyen aquéllas conocidas en el arte y enseñadas, por ejemplo, en Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N. Y. , 1981) (dichas referencias se incorporan como referencia en su totalidad) . El término "anticuerpo monoclonal" cuando se utiliza en la presente no se limita anticuerpos producidos a través de la tecnología de hibridoma. El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo que se- deriva de un solo clon, incluyendo cualquier clon eucariota, procariota, o fago, y no al método mediante el cual el mismo se produce. Los métodos para producir y seleccionar anticuerpos específicos utilizando la tecnología de hibridoma, son rutinarios y bien conocidos en la técnica. Brevemente, los ratones se pueden inmunizar con un antígeno CD3 y una vez que se detecta una respuesta inmune, por ejemplo, se detectan anticuerpos específicos para un antígeno CD3 (preferiblemente, antígeno e CD3) en el suero de ratón, el bazo del ratón se cosecha y se aislan los esplenocitos . Los esplenocitos se fusionan entonces mediante técnicas bien conocidas a cualquier célula . de mieloma adecuado, por ejemplo células de la línea celular SP20 disponibles del ATCC. Los hibridomas se seleccionan y clonan mediante dilución limitada. Los clones del hibridoma se analizan entonces mediante métodos conocidos "en la técnica para células que secreten anticuerpos capaces de enlazar un polipéptido de la invención. El fluido de ascitis, el cual generalmente contiene altos niveles de anticuerpos, se puede generar inmunizando ratones con clones de hibridoma positivo . De acuerdo con esto, la presente invención proporciona métodos para generar anticuerpos cultivando una célula de hibridoma que secrete un anticuerpo de la invención en donde, preferiblemente, el hibridoma se genera fusionando esplenocitos aislados de un ratón inmunizado con un antígeno CD3 con células de mieloma 1 y luego seleccionando los hibridomas que resulten de la fusión para clones de hibridoma que secreten un anticuerpo capaz de enlazarse a un antígeno CD3 (preferiblemente, antígeno e· CD3) . Los fragmentos de anticuerpos que reconocen antígenos CD3 específicos (preferiblemente, antígeno e CD3) pueden generarse mediante cualquier técnica conocida para aquellos expertos en el arte. Por ejemplo, pueden producirse fragmentos Fab y F(ab')2 de la invención mediante la escisión proteolítica de moléculas de inmunoglobulina, utilizando enzimas tales como papaína (para producir fragmentos Fab) o pepsina (para producir fragmentos F(ab')2) - Los fragmentos de F(ab')2 contienen la región variable, la región constante de cadena libera y el dominio CH1 de la cadena pesada. Además, los anticuerpos de la presente invención también se pueden generar utilizando varios métodos de despliegue de fagos, conocidos en la técnica. En métodos de despliegue de fagos, se muestran dominios de anticuerpos funcionales en la superficie de las partículas de fagos las cuales portan las secuencias de polinucleótidos que codifican las mismas. En particular, las secuencias de ADN que codifican dominios VH y VL, se amplifican a partir de genotecas de ADNc animal (por ejemplo, genotecas de ADNc humano o murino de tejidos afectados) . El ADN que codifica los dominios VH y VL se recombinan conjuntamente con un enlazador scFv mediante PCR y se clonan en un vector fagemido. El vector se trata con electroforesis en E. coli y la E. coli se infecta con fago auxiliar. El fago utilizado en estos métodos típicamente es un fato filamentoso que incluye fd y M13 y los dominios VH y VI usualmente se fusionan de manera recombinante ya sea al gen III o gen VIII del fago. El fago que expresa un dominio de enlace de antígeno que se enlaza a un antígeno particular, se puede seleccionar o identificar con antígeno, por ejemplo, utilizando antígeno etiquetado o antígeno unido o capturado en una superficie sólida o perla. Los ejemplos de métodos de despliegue de fagos que se pueden utilizar para hacer los anticuerpo de la invención, incluyen aquéllos descritos en Brinkman et al., 1995, J. Immunol . Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; Solicitud PCT No. PCT/GB91/01 134; Publicación internacional Nos. WO 90/02809, O 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, y WO 97/13844; y Patentes Norteamericanas Nos. 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 and 5,969,108; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. Como se describe en las referencias anteriores, después de la selección de fagos, el anticuerpo que codifica regiones del fago, se puede aislar y utilizar para generar anticuerpos completos, incluyendo anticuerpos humanos, o cualquier otro ? fragmento de enlace de antígeno deseado, y expresado en cualquier huésped deseado, incluyendo células de mamíferos, células de insectos, células de plantas, levadura, y bacterias, por ejemplo, descritas más adelante. También se pueden emplear técnicas para producir recombinantemente •fragmentos de Fab, Fab' y Fa(ab')2 utilizando métodos conocidos en la técnica, tales como aquéllos descritos en la publicación PCT WO 92/22324; Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12 (6) : 864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34; y Better et al., 1988, Science 240:1041-1043 (dichas referencias se incorporan como referencia en su totalidad) . Para generar anticuerpos completos, se pueden utilizar cebadores PCR que incluyen secuencias de nucleótidos de VH ó VL, un sitio de restricción, y una secuencia flanqueadora para proteger el sitio de restricción para amplificar las secuencias VH o VL en los clones scFv. Utilizando técnicas de clonación conocidas para aquellos expertos en la técnica, los dominios VH amplificados por PCR se pueden clonar en vectores que expresen una región constante VH, por ejemplo, la región constante gamma 4 humana, y los dominios VL amplificados por PCR, se pueden clonar en vectores que expresen una región constante VL, por ejemplo, regiones constantes kappa o lamba, humanas. Preferiblemente, los vectores para expresar los dominios VH o VL comprenden un promotor EF- la, una señal de secreción, un sitio de clonación para el dominio variable, dominios constantes, y un marcador de selección tal como neomicina. Los dominios VH y VL también pueden clonarse en un vector que exprese las regiones constantes necesarias. Los vectores de conversión de cadena pesada y los vectores de conversión de cadena ligera se co-transfectan entonces en líneas celulares para generar líneas celulares estables o transitorias que expresen anticuerpos de longitud completa, por ejemplo, IgG, utilizando técnicas conocidas para aquellos expertos en el arte. Para algunos usos, incluyendo el uso in vivo de anticuerpos en humanos y ensayos de detección in vitro, puede ser preferible utilizar anticuerpos humanos o quiméricos. Son particularmente deseables anticuerpos completamente humanos para el tratamiento terapéutico de sujetos humanos. Se pueden hacer anticuerpos humanos mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica, que incluyen métodos de despliegue de fagos, descritos anteriormente utilizando genotecas de anticuerpos derivados de secuencias de intnunoglobulina humana. Ver también las Patentes Norteamericanas Nos. 4,444,887 y 4,716,111; y Publicación International Nos. O 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, y WO 91/10741; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.
También se pueden producir anticuerpos humanos utilizando ratones transgénicos los cuales son incapaces de expresar inmunoglobulinas endógenas funcionales, pero las cuales pueden expresar genes de inmunoglobulina humana. Por ejemplo, los complejos de genes de inmunoglobulina humana de cadena pesada y ligera, pueden introducirse aleatoriamente o •mediante recombinación homologa en células madre de embriones de ratón. Alternativamente, la región variable humana, región constante, y región de diversidad pueden introducirse en las células madre de embriones de ratón además de los genes humanos de cadena pesada y ligera. Los genes de inmunoglobulina de ratón de cadena pesada y ligera, pueden volverse no funcionales separada o simultáneamente con la introducción de sitios de inmunoglobulina humana mediante •recombinación homologa. En particular, la eliminación homocigosa de la región JH evita la producción de anticuerpos endógenos. Las células madre embrionarias modificados se expanden y microinyectan en blastocitos para producir ratones quiméricos. Los ratones quiméricos se reproducen entonces para producir una progenie homocigosa la cual expresa anticuerpos humanos. Los ratones transgénicos se inmunizan del modo normal con un antígeno seleccionado, por ejemplo, la totalidad o una porción de un polipéptido de la invención. Se pueden obtener anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno de los ratones inmunizados, transgénicos , utilizando tecnología convencional de hibridoma. Los transgenes de i munoglobulina humana albergados por los ratones transgénicos se reestructuran durante la diferenciación de las células B, y subsecuentemente padecen un intercambio de clase y mutación somática. Por consiguiente, utilizando tal técnica, es posible producir anticuerpos de IgG, IgA, IgM e IgE terapéuticamente útiles. Para una reseña de esta tecnología para producir anticuerpos humanos, ver Lonberg y Huszar (1995, Int. Rev. Immunol . 13:65-93). Para una discusión detallada de esta tecnología para producir anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos y protocolos para producir tales anticuerpos, ver, por ejemplo, la Publicación PCT Nos. WO 98/24893, WO 96/34096, y WO 96/33735; y Patentes Norteamericanas Nos. 5,413,923, 5,625,126, 5.633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318, y 5,939,598, las cuales se incorporan como referencia en la presente en su totalidad. Además, compañías tales como Abgenix, Inc. (Freemont, CA) y Genpharm (San José, CA) pueden ocuparse de proporcionar anticuerpos humanos dirigidos contra un antígeno seleccionado utilizando tecnología similar a la descrita anteriormente. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la cual diferentes porciones del anticuerpo se derivan de diferentes moléculas de inmunoglobulina . Los métodos para producir anticuerpos quiméricos son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Morrison, 1985, Science 229: 1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol . Methods 125: 191-202; y Patentes Norteamericanas Nos. 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397, y 6,331,415, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo o su variante o fragmento del mismo el cual es capaz de enlazarse a un antígeno predeterminado y el cual comprende una región de estructura que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y una CDR que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina no humana. Un anticuerpo humanizado sustancialmente comprende todos o al menos uno y típicamente "dos, dominios variables (es decir, y todas o sustancialmente todas las regiones CDR corresponden a aquéllas de una inmunoglobulina no humana (es decir, anticuerpos donadores) y todas o sustancialmente todas las regiones de estructura son aquéllas de una secuencia de consenso de inmunoglobulina humana. Preferiblemente, un anticuerpo humanizado también comprende al menos una porción de una región constante (Fe) de inmunoglobulina, típicamente aquélla de una inmunoglobulina humana. Ordinariamente, el anticuerpo contendrá tanto la cadena ligera así como al menos el dominio variable de una cadena pesada. El anticuerpo también puede incluir las regiones CH1, de articulación, CH2 , CH3 , y CH4 de la cadena pesada. El anticuerpo humanizado se puede seleccionar de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo, incluyendo IgGl, IgG2 , IgG3 e IgG4. Usualmente el dominio constante es un dominio constante de fijación complementaria cuando se desee que el anticuerpo humanizado exhiba actividad citotóxica, y la clase típicamente es IgGl. Cuando tal actividad citotóxica no es deseable, el dominio constante puede ser de la clase IgG2. Los ejemplos de dominios constantes VL y VH que se pueden utilizar en ciertas modalidades de la invención incluyen, pero no están limitadas a, C-kappa y C-gamma-1 (nGlm) descritas en Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224, y aquéllos descritos en la Patente Norteamericana No. 5,824,307. El anticuerpo humanizado puede comprender secuencias de más de una clase o isotipo, y la selección dominios constantes particulares para optimizar las funciones efectoras deseadas, está dentro de la experiencia ordinaria en la técnica. Las regiones de estructura y CDR de un anticuerpo humanizado no necesitan corresponder de manera precisa; a las secuencias parentales, por ejemplo, se puede mutagenizar a la CDR del donador o la estructura de consenso mediante la sustitución, inserción o i eliminación de al menos un residuo de modo que la CDR o residuo de estructura en ese sitio no corresponda al anticuerpo de consenso o de importación. Tales mutaciones, sin embargo, no serán extensivas. Usualmente, al menos 75% de los residuos de anticuerpo humanizado corresponderán a aquéllos de las secuencias FR y CDR parentales, más frecuentemente el 90%, y más preferiblemente más del 95%. El anticuerpo humanizado se puede producir utilizando una variedad de técnicas conocidas •en el arte, que incluyen pero no están limitadas a, injerto con CDR (Patente Europea No. EP 239,400; Publicación Internacional No. WO 91/09967; y Patente Norteamericana Nos. 5,225,539, 5,530,101 y 5,585,089), revestido o recubrimiento de superficie (Patente Europea Nos. EP 592,106 y EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunolpgy 28 (4/5) : 489-498 ; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7 (6) : 805-814 ; y Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973), estructuración de cadena (Patente Norteamericana No. 5,565,332), y las técnicas descritas in, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 6,407,213, Patente Norteamericana No. 5,766,886, ;WO 9317105, Tan et al., J. Immunol . 169: 1119 25 (2002), ; Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods 20 (3) :267 79 (2000), Baca et al., J. Biol . Chem. 272(16): 10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9 (10) :895 904 (1996), Couto et al., Cáncer Res. 55 (23 Supp) : 5973s-5977s (1995), Couto et al., Cáncer Res. 55 (8) : 1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150 (2) :409-10 (1994), y Pedersen et al., J. Mol. Biol . 235 (3) : 959-73 (1994). Ver también la Publicación de Patente Norteamericana No. US 2005/0042664 Al (24 de Feb, 2005), la cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad. Frecuentemente, los residuos de estructura en las regiones de estructura se sustituirán con el correspondiente residuo del anticuerpo donador de CDR para alterar, preferiblemente mejorar, el enlace de antígeno. Estas sustituciones de estructura se identifican mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante el modelado de las interacciones de la CDR y residuos de estructura para identificar residuos de estructura importantes para el enlace de antígeno y comparación de secuencias para identificar residuos inusuales de estructura en posiciones particulares. (Ver, por ejemplo Queen et al., Patente Norteamericana No. 5,585,089; y Riechmann et al., 1988, Nature 332:323, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad) . Los anticuerpos de un , solo dominio, por ejemplo, anticuerpos que carecen de las cadenas ligeras, se pueden producir mediante métodos bien conocidos en la técnica. Ver Riechmann et al., 1999, J. Immuno. 231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol . 1 (3) :253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74 (4 ) : 277302 ; Patente Norteamericana No. .6,005,079; y Publicación Internacional Nos. WO 94/04678, WO 94/25591, y WO 01/44301, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. 5.7 Polinucléotidos que Codifican Anticuerpos La invención proporciona polinucléotidos que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo que se enlaza ., inmunoespecíficamente a un polipéptido CD3. La invención también abarca polinucléotidos que se hibridan bajo .condiciones de hibridación de alta severidad, severidad intermedio o inferior, por ejemplo, como se define supra, para polinucléotidos que codifican un anticuerpo de la invención. Los polinucléotidos pueden obtenerse, y la secuencia de nucleótidos de los polinucléotidos se determina, mediante cualquier método en la técnica. La secuencia de nucleótidos de anticuerpos inmunoespecíficos para un polipéptido CD3 se puede obtener por ejemplo, de la literatura o una base de datos tal como GenBank. Puesto que la secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, el OKT3 humanizado es conocida, las secuencias de nucleótidos que codifican estos anticuerpos se puede determinar utilizando métodos bien conocidos en la técnica, es decir, codones de nucleótidos conocidos por codificar aminoácidos particulares, se ensamblan de tal manera que generen un ácido nucleico que codifique el anticuerpo. Tal polinucleótido que codifica el anticuerpo puede ensamblarse de oligonucleótidos químicamente sintetizados (por ejemplo como se describe en Kutmeier et al., 1994, BioTechniques 17:242), la cual, brevemente, involucra la síntesis de superponer oligonucleótidos que contengan porciones de la secuencia que codifica el anticuerpo, la hibridación y ligación de aquellos oligonucleótidos, y luego la amplificación de los oligonucleótidos mediante PCR. Alternativamente, un polinucleótido que codifica un anticuerpo puede generarse de ácido nucleico de una fuente adecuada. Si un clon que contiene un ácido nucleico que codifica un anticuerpo particular no está disponible, pero se conoce la secuencia de la molécula del anticuerpo, un ácido nucleico que codifica la inmuioglobulina puede sintetizarse químicamente u obtenerse de una fuente adecuada {por ejemplo, una genoteca de ADNc del anticuerpo, o una genoteca de ADNc generada de, o ácido nucleico, preferiblemente ARN poli A+, aislado de, cualquier tejido o células que expresen el anticuerpo, tales como células de hibridoma seleccionadas para expresar un anticuerpo de la invención) mediante amplificación de PCR utilizando cebadores sintéticos hibridizables a los extremos 3' y 5' de la secuencia o mediante clonación utilizando una sonda de oligonucleótidos específica para la secuencia de genes particular para identificar, por ejemplo, un clon de ADNc de una genoteca de ADNc que codifica el i anticuerpo. Los ácidos nucleicos amplificados generados mediante PCR ?µ??e? clonarse entonces en vectores de clonación replicables utilizando cualquier método bien conocido en la técnica. Una vez que se determina la secuencia de nucleótidos del anticuerpo, la secuencia de nucleótidos del anticuerpo puede manipularse utilizando métodos bien conocidos en la técnica para la manipulación de secuencias de nucleótidos, por ejemplo, técnicas de ADN recombinante, mutagénesis específica puntual, PCR, etc. (ver, por ejemplo, las técnicas descritas en Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY y Ausubel et al., eds . , 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad) , para generar anticuerpos que tengan una secuencia de aminoácidos diferente, por ejemplo, para crear sustituciones, eliminaciones, y/o inserciones de aminoácidos. En una modalidad específica, se inserta una o más de las CDRs dentro de las regiones de estructura utilizando técnicas rutinarias de ADN recombinante,. Las regiones de estructura pueden ser de origen natural o regiones de estructura de consenso, y preferiblemente regiones de estructura humanas (ver, por ejemplo, Chothia et al., 1998, J. Mol. Biol . 278: 457-479 para un listado de regiones de estructura humanas) . Preferiblemente, el polinucleotido generado mediante la combinación de las regiones de estructura y CDRs codifica un anticuerpo que se enlaza específicamente a un polipéptido CD3. Preferiblemente, como se discute supra, pueden hacerse una o más sustituciones de aminoácidos dentro de las regiones de estructura, y, preferiblemente, las sustituciones de aminoácidos mejoran el enlace del anticuerpo a su antígeno. Adicionalmente, tales métodos pueden utilizarse para hacer sustituciones o eliminaciones de aminoácidos de uno o más residuos de cisteína de región variable que participan en un enlace de disulfuro intra-cadena para generar moléculas de anticuerpo que carecen de una o más uniones de disulfuro intra-cadena. Otras alteraciones al polinucleotido se abarcan por la presente invención y dentro de la experiencia de la técnica. 5.8 EXPRESIÓN RECOMBINANTE DE MOLÉCULAS DE LA INVENCIÓN Una vez que se ha obtenido una secuencia de ácido nucleico que codifica las moléculas de la invención (es decir, anticuerpos) , el vector para la producción de las moléculas puede producirse mediante tecnología de ADN recombinante utilizando técnicas bien conocidas en el arte. Se pueden utilizar métodos que son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica, para construir vectores de expresión que contengan las secuencias de codificación para las moléculas de ¦la invención y señales de control de transcripción y traducción. Estos métodos incluyen, por ejemplo, técnicas de ADN recombinante in vi tro, técnicas sintéticas, y recombinación genética in vivo. {Ver, por ejemplo, las técnicas descritas en Sambroók et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, ' 2d Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY y Ausubel et al. eds . , 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & •Sons, NY. Un vector de expresión que comprende la secuencia de nucleótidos de una molécula identifica mediante los métodos de la invención (es decir, un anticuerpo) se puede transferir a una célula hospedera mediante técnicas convencionales (por ejemplo, electroporación, transfección liposómica, y precipitación de fosfato de calcio) y las células transfretadas luego se cultivan mediante técnicas convencionales para producir las moléculas de la invención. En modalidades específicas, la expresión de las moléculas de la invención se regula por medio de un promotor constitutivo, inducible o de tejido específico. En modalidades específicas el vector de expresión es pMGX1303 (FIG. 3) .
.Las células hospederas utilizadas para expresar las moléculas identificadas por los métodos de la invención, pueden ser ya sea células bacterianas tales como Escherichia coli, o, preferiblemente, células eucariotas, especialmente para la expresión de una molécula de inmunoglobulina recombinante completa. En particular, las células de mamíferos tales como células de ovario 1 de hámster chino (CHO) , en conjunción con un vector tal como el principal elemento promotor de gen temprano intermedio de citomegalovirus humano es un sistema de expresión efectivo para las inmunoglobulinas (Foecking et al., 1998, Gene 45: 101; Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2) . Puede utilizarse una variedad de sistemas de vector de expresión hospederos para expresar las moléculas identificadas por los métodos de la invención. Tales sistemas de expresión hospederos representan vehículos mediante los cuales pueden producirse las secuencias de codificación de las moléculas de la invención y subsecuentemente purificarse, aunque también representan células las cuales pueden, cuando se transforman o transfectan con las secuencias de codificación de nucleótidos, expresar las moléculas de la invención in si tu. Estas incluyen, pero no están limitadas a, microorganismos tales como bacterias (por ejemplo E. coli y B. subtilis) transformadas con vectores de expresión de ADN de bacteriófago recombinante, ADN plásmido o ADN cósmido que contienen secuencias de codificación para las moléculas identificadas por los métodos de la invención; levadura (por ejemplo, Saccharomyces Pichia) transformada con vectores de expresión de levadura recombinante que contiene secuencias que codifican las moléculas identificadas por los métodos de la invención; •sistemas de células de insectos infectadas con vectores de expresión de virus recombinantes (por ejemplo, baculovirus) que contienen las secuencias : que codifican las moléculas identificadas por los métodos de la invención; sistemas de células de plantas infectadas con vectores de expresión de virus recombinantes (por ejemplo, virus del mosaico de la coliflor (CaMV) y virus del , mosaico del tabaco (TMV) o transformadas con vectores de expresión de plásmidos recombinantes (por ejemplo, plásmido Ti) que contienen secuencias que codifican las moléculas identificadas por los métodos de la invención; o sistemas de células de mamíferos (por ejemplo, COS, CHO, BHK, 293, 293T, células 3T3 , células de linfocitos (ver U.S. 5,807,715), células Per C.6 (células retínales humanas desarrollas por Crucell) , que albergan constructos de expresión recombinantes que contienen promotores derivados del genoma de células de mamífero (por ejemplo, promotor de metalotioneina) o de virus de mamíferos (por ejemplo, el promotor de adenovirus tardío; el promotor 7.5K del virus vaccinia) . En sistemas bacterianos, ventajosamente se puede seleccionar un cierto número, de vectores de expresión dependiendo del uso pretendido para la molécula que se expresa. Por ejemplo, cuando va a producirse una gran cantidad de tal proteína, para la generación de composiciones farmacéuticas de un anticuerpo, pueden ser deseables vectores que dirijan la expresión de altos niveles de productos de proteína de fusión que se purifiquen fácilmente. Tales vectores incluyen, pero no están limitados al vector de expresión pUR278 de E. coli (Ruther et al., 1983, EMBO J. 2:1791), en el cual la secuencia que codifica el anticuerpo puede ligarse individualmente en el vector en configuración con la región de codificación lac Z de modo que se produzca una proteína de fusión; vectores pIN (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol . Chem. 24:5503-5509); y similares. También pueden utilizarse vectores pGEX para expresar polipéptido extraños como proteínas de fusión con glutationa S-transíerasa (GST) . En general, tales proteínas de fusión son solubles y se pueden purificar fácilmente de células lisadas mediante adsorción y enlace a una matriz de perlas de glutationa-agarosa seguido por elución en la presencia de gluta-tiona. Los vectores pGEX se diseñan para incluir trombina o sitios de escisión de proteasa de factor Xa de modo que el producto de gen objetivo clonado se pueda liberar de la porción GST. En un sistema de insecto, se utiliza virus de poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV) como un vector para expresar genes extraños. El virus crece en células •de Spodoptera frugiperda. La secuencia de codificación de anticuerpos puede clonarse individualmente en regiones no esenciales (por ejemplo, el gen de polihedrina) del virus y se coloca bajo el control de un promotor AcNPV (por ejemplo, el promotor de polihedrina) . En células hospederas de mamíferos, puede utilizarse un cierto número de sistemas de expresión a base de virus. En casos donde se utiliza un adenovirus como un vector de •expresión, la secuencia que codifica el anticuerpo de interés puede ligarse a un complejo de control de transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor tardío y secuencia líder tripartita. Este gen quimérico puede insertarse entonces en el genoma del adenovirus mediante recombinación in vi tro o in vivo. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, región El ó E3) dará como resultado un virus •recombinante que es viable y capaz de expresar la molécula de inmunoglobulina en huéspedes infectados (por ejemplo, ver Logan ü Shenk, 1984, Proc . Nati. Acad. Sci. USA 81:355-359).
También pueden requerirse señales de inicio específicas para la traducción eficiente de secuencias que codifican anticuerpos insertados. Estas señales incluyen el codón de inicio ATG y secuencias adyacentes. Además, el codón de inicio debe estar sincronizado con el marco de lectura de la secuencia de codificación deseada par asegurar la traducción del inserto entero. Estas señales de control de traducción exógenas y codones de inicio pueden ser de una variedad de orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de expresión puede mejorarse mediante la inclusión de elementos intensificadores de transcripción apropiados, terminadores de transcripción, etc. (ver Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544). Además, se puede elegir una cepa de célula hospedera la cual modula la expresión de las secuencias insertadas, o modifica y procesa el producto genético del modo específico deseado. Tales modificaciones (por ejemplo, glicosilación) y procesamiento (por ejemplo, escisión) de productos proteínicos puede ser importante para la función de la proteína. Diferentes células hospederas tienen mecanismos característicos y específicos para el procedimiento y modificación post-traducción de proteínas y productos genéticos. Se pueden elegir líneas celulares apropiadas o sistemas hospederos para asegurar la modificación y procesamiento correctos de la proteína extraña expresada. Para este fin, pueden utilizarse células hospederas eucariotas las cuales poseen la maquinaría celular para el apropiado procesamiento del transcripto primario, glicosilación, y fosforilación del producto genético. Tales células hospederas de mamífero incluyen pero no están limitadas a CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 293T, 3T3, WI38, BT483, Hs578T, HTB2 , BT20 y T47D, CRL7030 y Hs578Bst. Para la producción de alto rendimiento a largo plazo de proteínas recombinantes, se prefiere expresión estable. Por ejemplo, pueden diseñarse las líneas celulares que expresan establemente un anticuerpo de la invención. En vez de utilizar vectores de expresión que contengan orígenes virales de replicación, las células hospederas pueden transformarse con ADN controlado por medio de elementos de control apropiados de expresión (por ejemplo, promotor, intensificador, secuencias, terminadores de transcripción, sitios de poliadenilación, etc.), y un marcador seleccionable. Después de la introducción del ADN extraño, pueden dejarse crecer las células diseñadas durante 1-2 días en medio enriquecido, y luego se cambian a un medio selectivo. El marcador seleccionable en el plásmido recombinante confiere resistencia a la sección y permite a las células integrar establemente el plásmido en sus cromosomas y crecer para formar focos los cuales a su vez pueden ser clonados y expandidos en líneas celulares. Este método puede usarse ventajosamente para diseñar líneas células que expresen los anticuerpos de la invención. Tales líneas células diseñadas pueden ser particularmente útiles en la selección y evaluación de compuestos que interactúen directa o indirectamente con los anticuerpos de la invención. Puede utilizarse un cierto número de sistemas de selección, que incluyen pero no están limitados a timidina quinasa del virus herpes simple (Wigler et al., 1977, Cell 11: 223) , hipoxantina-guanina fosforibosiltransferasa (Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 48: 202), y adenina fosforibosiltransferasa (Lowy et al., 1980, Cell 22: 817), se pueden emplear genes en células tk, hgprt ó aprt , respectivamente. También, se puede utilizar resistencia anti-metabolitos como la base de selección para los siguientes genes: dhfr, que confiere resistencia al metotrexato (Wigler et al, 1980, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77:357; O 'Haré et al., 1981, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 78: 1527); gpt, que confiere resistencia al ácido micofenólico (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 78: 2072); neo, que confiere resistencia a la aminoglicósida G-418 Clinical Pharmacy 12: 488-505; Wu y Wu, 1991, 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmarol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; y Morgan y Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; Mayo, 1993, TIB TECH 11 (5) : 155-215) . Los métodos comúnmente conocidos en la técnica de tecnología de ADN recombinante que se pueden utilizar, se describen en Ausubel et al. (eds.), 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY; Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY; y en los Capítulos 12 y 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY. ; Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol . 150:1; e hygro, que confiere resistencia a la higromicina (Santerre et al., 1984, Gene 3Q: 147) . Los niveles de expresión de un anticuerpo de la invención se pueden incrementar amplificación de vector (para una revisión, ver Bebbington y .Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes 'in mammalian cells in DNA cloning, Vol . 3 (Academic Press, New York, 1987) . Cuando un marcador en el sistema de vector que expresa un anticuerpo es amplificable, el incremento en el nivel del inhibidor presente' en el cultivo de células hospederas, incrementará el número de copias del gen marcador. Puesto que la región amplificada está asociada con la secuencia de nucleótidos del anticuerpo, también se incrementará la producción del anticuerpo (Crouse et al., "1983, Mol. Cell. Biol. 3:257).
La célula hospedera se puede co-transfectar con dos vectores de expresión de la invención, el primer vector que codifica un polipéptido derivado de cadena pesada y el segundo vector que codifica un polipéptido derivado de cadena ligera. Los dos vectores pueden contener marcadores seleccionables idénticos que hagan posible una expresión igual de polipéptidos de cadena pesada y ligera. Alternativamente, puede usarse un solo vector que codifique ambos polipéptidos de cadena pesada y ligera. En tales situaciones la cadena ligera deberá colocarse antes que la cadena pesada para evitar un exceso de cadena pesada libre, tóxica (Proudfoot, 1986, Nature 322:52; Kohler, 1980, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77:2197). Las secuencias de codificación para las cadenas pesada y ligera pueden comprender ADNc o ADN genómico. Una vez que se ha expresado recombinantemente una molécula de la invención (es decir, anticuerpos) , la misma se puede purificar mediante cualquier método conocido en la técnica para la purificación de polipéptido o anticuerpos, por ejemplo, mediante cromatografía (por ejemplo, intercambio "iónico, afinidad, particularmente por afinidad para el antígeno específico después de la Proteína A, y cromatografía de coíumna por clasificación de tamaños) , centrifugación, solubilidad diferencial, o mediante cualquier otra técnica estándar para la purificación de polipéptido o anticuerpos. 6. EJEMPLOS 6.1 Terapia de Anticuerpos Monoclonales Anti-CP3 para Pacientes Tipo 1 Pacientes : Se reclutaron cuarenta pacientes con diabetes Tipo 1 para su participación de acuerdo a los siguientes criterios: entre 7 y 20 años de edad, dentro de 6 semanas de diagnóstico de acuerdo a los criterios de la Asociación Americana de Diabetes, y conformación de la presencia de autoanticuerpos anti-GAD65, an i-ICA512, y/o anti-insulina . Los pacientes permanecieron bajo el cuidado de su médico personales durante el transcurso del estudio. Los pacientes elegibles se asignaron al azar a un grupo de control y un grupo de tratamiento con anticuerpos CD3 antihumanos. Después de la ordenación aleatoria, se extrajeron muestras de sangre para establecer niveles HAlc de línea base, .una respuesta del péptido C del pretratamiento a una MMTT se establece y un se realiza una FPIR o IGTT de pretratamiento. Los pacientes en ambos grupos se hospitalizaron para recibir ya sea un curso de tratamiento de 6 días del hOKT3yl (ala-ala) del anticuerpo monoclonal CD3 anti-humano, o placebo. El anticuerpo se administra intravenosamente en la siguiente dosificación: 17 g/m2 el día 1, 34.3 g/m2 el día 2, 69 ^g/m2 el día 3, 137.6 µg/m2 el día 4, y 275.3 g/m2 los días 5 y 6. Alternativamente, el anticuerpo puede administrarse intravenosamente en la siguiente dosificación: 1.6 //g/kg/d£a el día 1; 3.2 µg/kg/día el día 2; 6.5 ^g/kg/día el día 3; 13 MO/kg/día el día 4; y 26 g/kg/día los días 5 a 14. En estudios de escalamiento de dosis, el tratamiento puede ser, por ejemplo, 1.42 g/kg/día el día 1; 5.7 g/kg/día el día 2 ; 11 xg/kg/día el día 3; 26 g/kg/día el día 4; y 45.4 µg/kg/día los días 5 a 14. En estudios subsecuentes, la terapia se altera para incrementar la dosificación y/o disminuir el curso de tiempo del tratamiento. Por ejemplo, en estudios subsecuentes se puede administrar a los pacientes un tratamiento de 4 días: 6.4 µg/kg/día el día 1; 13 µg/kg/día el día 2; y 26 los días 3 y 4; durante los estudios de escalamiento dé dosis adicionales, el tratamiento puede ser de 8 µg/kg/día el día 1; 16 µg/kg/día el día 2; y 32 g/kg/día los días 3 y 4. ; Durante los estudios iniciales la dosificación del anticuerpo en los primeros tres días de tratamiento, se administra a través de infusión IV lenta durante 20 horas para monitorear reacciones adversas. Los estudios subsecuentes disminuirán el tiempo de administración y/o dividirán la dosificación en 2 a 4 partes iguales para administrase como inyecciones de bolos igualmente distribuidas durante el transcurso de 12 horas. Los pacientes en el grupo control se sometieron a pruebas metabólicas e inmunológicas pero no recibieron anticuerpos monoclonales . Los pacientes se monitorearon durante todo el estudio para efectos inmunosupresores del ????3?1 (ala-ala) del anticuerpo monoclonal CD3 anti -humano . Los pacientes se monitorearon durante 18 meses después del tratamiento. La función de las células ß se determina cada 6 meses en el caso de tolerancia dañada a la glucosa y cada 12 meses en el caso de tolerancia normal a la glucosa. Se les permitió a los pacientes tener una dieta normal, y permanecer bajo el cuidado de su médico personal en toda la duración del estudio. Los ensayos inmunológicos se repitieron en intervalos de 6 meses. Se dará terapia de insulina a los pacientes como se indica por su médico personal . Se analizará la función de las células ß de acuerdo a los cambios de los niveles del péptido C que se miden mediante radioinmunoensayo . Después de extraer muestras para el péptido "C y glucosa de línea base, se les da a los pacientes alimento mixto. Los niveles del péptido C se miden en muestras extraídas después de 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, y 240 min. La respuesta del péptido C a la prueba de tolerancia de alimentos mixtos (MMTT) , se expresa como el área total bajo la curva de respuesta (AUC) . Se considera que ha ocurrido un cambio en la respuesta si la respuesta difiere por más de 7.5 por ciento de la respuesta al ingreso del estudio. Las respuestas del péptido C de los pacientes a MMTT continuamente se monitorean 6 meses, 9 meses, 12 meses, 15 meses y 18 meses después del tratamiento. Alternativamente, la función de las células ß se evalúa mediante FPIR a IGTT. Se miden los niveles de insulina en suero mediante una modificación de un método de radioinmunoensayo de doble anticuerpo utilizando insulina etiquetada con tirosina A14 monoyodada (Amersham Pharmacia) . La FPIR se calcula como la suma de niveles de insulina en 1 y 3 minutos después de una carga de glucosa (0.5 g/kg) . Los niveles de hemoglobina glicosilada se miden mediante una prueba de inhibición por aglutinación de látex. Monitoreo Inmunológico : El nivel de autoanticuerpos contra GAD65, IA2/ICA512, e insulina se miden con ensayos de radioenlace que son conocidos en la técnica (por ejemplo, oo et a\, 2000, J. Immunol Methods 244:91-103). La genotipificación de HLA-DQA y HLA-DQB se realiza mediante secuenciacion directa de polimorfismos de exón 2 después de la amplificación por PCR. El nivel de citocinas en suero después de la administración del anticuerpo monoclonal se mide mediante ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) . La producción de anticuerpos anti-idiotipo se monitorea mediante ensayo ELISA utilizando una hOKT3yl (ala-ala) unido a la placa o mediante citometría de flujo para medir el bloqueo del enlace de hOKT3yl (ala-ala) -FITG a CD3.
Análisis Estadístico: Los análisis de datos se •realizarán en la función de cédulas beta residuales, nivel de autoanticuerpos, nivel de citocinas, y nivel de hemoglobina glicosilada. El análisis ??2 se realizará para probar el efecto del tratamiento del fármaco antes y después de la administración del fármaco. La comparación entre el grupo de control y el grupo de tratamiento se realizará con la prueba U de Mann-Whitney. 6.2 Terapia de Anticuerpos Monoclonales Anti-CD3 en Sujetos Predispuestos a la Diabetes Tipo 1 Pacientes : La selección de sujetos con predisposición a desarrollar diabetes tipo 1, se basa en un pariente en primer o segundo grado con un diabético Tipo 1 diagnóstico; un nivel de glucosa deteriorado de ayuno; una respuesta de glucosa deteriorada a OGTT; la presencia de autoanticuerpos en suero contra GAD65, contra IA2/ICA512, y/o contra insulina; o producto deteriorada de insulina después de la MTT, OGTT, IGTT o procedimiento de sujeción de glucosa de dos fases, como "se determina por la respuesta; del péptido C o FPIR. Los pacientes que han sido diagnosticados por un médico con diabetes tipo 1 de acuerdo a los criterios establecidos por la Asociación Americana de Diabetes, o que de otra manera cumplen dichos criterios, se excluyen de este estudio. Los pacientes seleccionados para el estudio se colocan al azar en dos grupos de igual tamaño. Los protocolos de tratamiento y monitoreo clínico son como se describe en la sección 6.1. Adicionalmente , la terapia de anticuerpos puede ajustarse en relación a la función de células ß residuales, es decir, pacientes con más función de células ß dañadas como se determina por la respuesta del péptido C o FPIR, recibirán una dosis total más alta de anticuerpo monoclonal anti-CD3. Por ejemplo, dados dos pacientes con respuestas del péptido C de 40 y 110 pmol/ml/240 min, al paciente con respuesta deteriorada se dará la más elevada de las dos dosificaciones probadas, por ejemplo, 1.42 jug/kg/día el día 1; 5.7 /¿g/kg/día el día 2; 11 µg/kg/día el día 3; 26 µg/kg/día el día 4; y 45.4 /¿g/kg/día los días 5 a 14. Los pacientes se monitorean durante 18 meses después del tratamiento. La función de las células ß se determinada cada 6 meses en el caso de tolerancia deteriorada a la glucosa y cada 12 meses en el caso de tolerancia normal a la glucosa. Se permite a los pacientes tener una dieta normal, y permanecer bajo el cuidado de su médico personal en toda la duración del estudio. Los ensayos inmunológicos se repiten en intervalos de 6 meses. Se dará terapia de insulina a los pacientes como se indica por su médico personal . 6.3 Terapia de Anticuerpo Monoclonal Anti-CD3 en Esclerosis Múltiple Pacientes : Se incluyen en este estudio pacientes con esclerosis múltiple reincidente-remitente o progresiva secundaria, confirmada de acuerdo a los criterios de Poser y/o McDonald. Los criterios de selección primaria dos también incluyen al menos dos exacerbaciones documentadas en los últimos dos años, edad de 18 o mayor, y puntuación EDSS básica entre 0 y 5. Los pacientes seleccionados se asignan al azar en un grupo de tratamiento y un grupo de control como se plantea en la sección 6.1. Todos los pacientes permanecen bajo el cuidado de su médico personal durante el transcurso del estudio y reciben monitoreo neurologico equivalente en puntos de tiempo equivalentes. ionitoreo de MS : Se programa exámenes neurológicos antes del tratamiento para establecer valores básicos, y subsecuentemente cada tres meses durante un total de 36 meses. La evaluación clínica de paciente se realiza por dos neurólogos para monitorear incrementos en la frecuencia, duración y/o severidad de ataques, y/o para monitorear incrementos en la puntuación EDSS. Adicionalmente, se realizan escaneos con MRI mejorada con gadolinio para obtener una medición básica del número y/o volumen de lesiones cerebrales o espinales y se repiten cada tres meses durante un total de 36 meses. Los pacientes permanecen bajo el cuidado de médicos personales durante el transcurso del estudio. Los pacientes con reincidencia se tratan con Avonex y se re-examinan en intervalos mensuales durante un período de al menos 6 meses. Un incremento de un punto en la EDSS que persista durante al menos dos exámenes neurologicos programados, indica la progresión de la discapacidad. La eficacia del tratamiento .se evalúa de acuerdo al momento de la primera reincidencia, relación de reincidencia, y la acumulación de discapacidad física permanente. La comparación se hará entre el grupo de tratamiento y el grupo de control. El grado y número de lesiones activas en MRI también se registrarán y compararán. 7. EQUIVALENTES Aquéllos expertos en la técnica reconocerán, o serán capaces de constatar utilizando no más que experimentación rutinaria, se describen en la presente muchos equivalentes a las modalidades específicas de la invención. Se pretende que tales equivalentes sean abarcados por las siguientes reivindicaciones . Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente mencionadas en esta especificación, se incorporan en la presente como referencia en la especificación al mismo grado que si cada publicación, patente o solicitud de patente individual fuera específica e individualmente indicada se incorporara en la presente como referencia.

Claims (54)

  1. REIVINDICACIONES 1 . - Un método de tratamiento, que hace más lenta la progresión de, o que mejora uno o más síntomas de un padecimiento autoinmune en un paciente diagnosticado con dicho padecimiento, dicho método caracterizado porque comprende administrar a dicho paciente un curso de tratamiento con una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 antihumano que tiene al menos 50% de enlace reducido al menos a un FcyR en relación a un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocinas en relación a una administración equivalente de OKT3 murino, en donde menos de 9000 µg/m2 , o el equivalente farmacológico de menos de 9000 µ?/??2 de ???3?1 (ala-ala) administrado intravenosamente, se administra en dicho curso de tratamiento.
  2. 2. - Un método de prevención o que hace más lenta la aparición de un padecimiento autoinmune en un paciente predispuesto al mismo pero sin estar diagnosticado con dicho padecimiento, dicho método caracterizado porque comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 ánti-humano que tiene al menos 50% de enlace reducido al menos a un FCYR en relación a un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocinas en relación a una administración equivalente de 0KT3 murino, en dónde menos de 9000 µ9/p?2 , o el equivalente farmacológico de menos de 9000 µ9/p?2 de ???3?1 (ala-ala) administrado intravenosamente, se administra en dicho tratamiento.
  3. 3.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo CD3 anti-humano tiene al menos 50% de 'enlace reducido con respecto a cada FcyR en relación a un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural.
  4. 4. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo no se enlaza detectablemente a ningún FCYR.
  5. 5. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo tiene al menos 50% de enlace reducido con respecto al Clq.
  6. 6. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo no se enlaza detectablemente a Clq.
  7. 7. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo anti-CD3 es quimérico o humanizado.
  8. 8. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo es una versión humanizada o quimerizada de OKT3 , Leu-4, 500A2, CLB-T3/3, M291, YTH 12.5 ó BMA030.
  9. 9.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo se aglicosila.
  10. 10. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo tiene un dominio Fe que tiene una modificación de aminoácidos, en donde dicho dominio Fe modificado no se enlaza a ningún FCYR.
  11. 11. - El método de la reivindicación 10, caracterizado porque dicho anticuerpo es 0??3?1 ala-ala humanizado.
  12. 12. - El método de la reivindicación 10, caracterizado porque dicho anticuerpo es ChAglyCD3 ó visilizumab.
  13. 13.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho tratamiento comprende la administración de dosis de dicho anticuerpo en al menos 4 días consecutivos.
  14. 14. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho curso de tratamiento comprende la administración de dosis de dicho anticuerpo en no más de 14 días consecutivos.
  15. 15. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque en dicho curso de tratamiento dicho anticuerpo se administra en días, 4 días consecutivos, seguido por 3 días consecutivos en los cuales no se administra el anticuerpo, seguido por 4 días consecutivos en los cuales se administra el anticuerpo, y así sucesivamente hasta que se administra el número total de dosis.
  16. 16. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho tratamiento comprende un régimen de dosificación que comprende dosis de cantidades cada vez mayores de dicho anticuerpo en al menos los 3 días iniciales de dicho curso de tratamiento.
  17. 17. - El método de la reivindicación 16, caracterizado porque dicha dosis incrementa 2 veces cada día en al menos los 3 días iniciales de dicho curso de tratamiento.
  18. 18. - El método de la reivindicación 16, caracterizado porque dicho régimen de dosificación es de 5 días o menos.
  19. 19. - El método de la reivindicación 16, caracterizado porque dicha dosis del día 1 es de aproximadamente 51 µg/m2 , la dosis del día 2 es de aproximadamente 103 µg/m2, la dosis del día 3 es de aproximadamente , 207 g/m2 , la dosis del día 4 es de aproximadamente 413 µg/m2 , y la dosis de los días subsecuentes es de aproximadamente 826 µg/m2 , o el equivalente farmacológico de administración intravenosa de estas cantidades de ???3?1 (ala-ala) .
  20. 20. - El método de la reivindicación 19, caracterizado porque dicho régimen de dosificación es de 6 días o menos.
  21. 21. - El método de la reivindicación 16, caracterizado porque la dosis del día 1 es de aproximadamente 17 µg/m2, la dosis del día 2 es de aproximadamente 34.3 µg/m2 , la dosis del día 3 es de aproximadamente 69 g/m2 , la dosis del día 4 es de aproximadamente 137 µg/m2 , y la dosis de los días subsecuentes es de aproximadamente 275 ^g/m2 o el equivalente farmacológico de administración intravenosa de estas cantidades de 0??3?1 (ala-ala) .
  22. 22. - El método de la reivindicación 21, caracterizado porque dicho régimen de dosificación es de 6 días o menos.
  23. 23. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho curso de tratamiento logra un recubrimiento y modulación combinados del receptor de células T de al menos el 50%.
  24. 24.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo se administra intravenosamente.
  25. 25.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo se administra en una infusión durante un período de al menos 18 horas.
  26. 26.- El método de la reivindicación 25, caracterizado porque dicha administra da como resultado niveles de anticuerpo CD3 anti-humano libre que no exceden 200 ng/ml.
  27. 27. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque comprende además re-dosificar a dicho paciente con una segunda ronda de dicho curso de tratamiento al menos 2 años •después de la administración inicial de dicho curso tratamiento .
  28. 28. - El método de la reivindicación 27, caracterizado porque dicha segunda ronda de dicho curso de tratamiento se administra al menos 3 años después de la administración inicial de dicho curso de tratamiento.
  29. 29.- El método de la reivindicación 27, caracterizado porque el paciente se re-dosifica cada dos años.
  30. 30.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicha administración es en combinación con la administración de un inmunosupresor .
  31. 31.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho padecimiento autoinmune es la diabetes Tipo 1.
  32. 32.- Él método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho padecimiento autoinmune es esclerosis múltiple.
  33. 33. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho paciente se re-dosifica si la dosis diaria promedio de insulina se ha incrementado al 50% o más, al menos 2 años después de la administración inicial de dicho curso de tratamiento .
  34. 34. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho paciente se redosifica si se detectan autoanticuerpos contra uno o más antígenos de células de los islotes en dicho paciente al menos 2 años después de la administración inicial de dicho curso de tratamiento.
  35. 35. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho paciente se redosifica si se detectan células T específicas del antígeno de lás células de los islotes en dicho paciente al menos 2 años después de la administración inicial de dicho tratamiento.
  36. 36. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho paciente se redosifica si la masa de células ß disminuye al 50% o más en dicho paciente al menos 2 años después de la administración inicial de dicho curso de tratamiento .
  37. 37. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho paciente se redosifica si la incidencia de episodios de hipoglucemia o cetoacidosis, incrementa a l o más incidentes por día en dicho paciente al menos 2 años después de la administración inicial de dicho curso de tratamiento.
  38. 38. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado un incremento en la dosis diaria promedio de insulina de no más de 0.2 U/kg/día seis meses después de dicho tratamiento.
  39. 39. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado un HAlc de menos de 7.5% un año después de dicho tratamiento.
  40. 40.- El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado una respuesta del péptido C a MMTT doce meses después de dicho tratamiento que es al menos el 90% de la respuesta del péptido C a MMTT en dicho paciente antes de dicho tratamiento. I
  41. 41. - El método de la reivindicación 32, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado un incremento en el número total o área total de lesiones que se determina por medio de MRI por no más de , 10% doce meses después del tratamiento.
  42. 42. - El método de la reivindicación 32, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado ningún incremento en el número total o área total de lesiones en relación a los niveles de pre-tratamiento que se determinan mediante MRI a doce meses después del tratamiento.
  43. 43. - El método de la reivindicación 32, caracterizado porque dicho tratamiento da como resultado ningún incremento en la puntuación EDSS durante los doce meses siguientes al tratamiento.
  44. 44.- El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho anticuerpo se administra intramuscular o subcutáneamente .
  45. 45. - El método de la reivindicación 31, caracterizado porque dicha administración es en combinación con la administración de insulina.
  46. 46. - El método de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicha administración no da como resultado padecimientos linfoproliferativos inducidos por EBV o conteos de linfocitos menores de 1000 linfocitos/µ? en suero.
  47. 47.- Un método de tratamiento, que hace más lenta la progresión de, o que mejora uno o más síntomas de un padecimiento autoinmune en un paciente diagnosticado con dicho padecimiento autoinmune, dicho método caracterizado porque comprende administrar crónicamente a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 antihumano que tiene al menos 50% de enlace reducido con respecto al menos a un FCYR que en un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocinas en relación a una administración equivalente de OKT3 murino .
  48. 48. - Un método de prevención o que hace más lenta la aparición de un padecimiento autoinmune en un paciente predispuesto al mismo pero sin estar diagnosticado con dicho padecimiento autoinmune, dicho método caracterizado porque comprende administrar crónicamente a dicho una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 anti-humano que tiene al menos 50% de enlace reducido a al menos un FcyR que un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocina en relación a una administración equivalente de OKT3 murino.
  49. 49. - El método de la reivindicación 47 ó 48, caracterizado porque dicho padecimiento autoinmune es la diabetes Tipo 1.
  50. 50. - El método de la reivindicación 47 ó 48, caracterizado porque dicho padecimiento autoinmune es esclerosis múltiple.
  51. 51. - El método de la reivindicación 47 ó 48, caracterizado porque a dicho paciente se ha administración un curso de tratamiento de 6 a 20 días con dichos anticuerpos CD3 anti -humanos antes de dicha administración crónica.
  52. 52. - El método de la reivindicación 1, 2, 47 ó 48, caracterizado porque dicho padecimiento autoinmune es psoriasis, artritis reumatoide, lupus, padecimiento de inflamación del colón (IBD) , colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, efectos de trasplante de órganos, o padecimiento de injerto vs. huésped (GVHD) .
  53. 53. - Un método de tratamiento, que hace más lenta la progresión de, o que mejora uno o más síntomas de esclerosis múltiple en un paciente diagnosticado con esclerosis múltiple, dicho método caracterizado porque comprende administrar a "dicho paciente un curso de tratamiento con una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 anti -humano que tiene al menos 50% de enlace reducido al menos a un FcyR en relación a un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocinas en relación a una administración equivalente de OKT3 murino.
  54. 54. - Un método de prevención o que hace más lenta la aparición de esclerosis múltiple en un paciente predispuesto a la misma pero sin estar diagnosticado con esclerosis múltiple, dicho método caracterizado porque comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo CD3 anti -humano que ¡tiene al menos 50% de enlace reducido al menos a un FCYR en relación a un anticuerpo con un dominio Fe de tipo natural, en donde dicha administración da como resultado síntomas reducidos de liberación de citocinas en relación a una administración equivalente de OKT3 murino.
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