MX2008012058A

MX2008012058A - Plantas resistes al estres.

Info

Publication number: MX2008012058A
Application number: MX2008012058A
Authority: MX
Inventors: Block Marc De; Michael Metzlaff; Veronique Gossele
Original assignee: Bayer Bioscience Nv
Priority date: 2006-03-21
Filing date: 2007-03-16
Publication date: 2008-10-03
Also published as: US20090320154A1; KR20090007718A; AU2007229005B2; US8450562B2; US8158856B2; EP1999263A1; US20130283482A1; AU2007229005A1; CA2646476A1; EP1999263B1; US20120204292A1; WO2007107326A1

Abstract

Se logra tolerancia al estrés en plantas y células vegetales, usando secuencias de nucleótidos que codifican para enzimas implicadas en la vía de síntesis silvestre de NAD y/o la vía de síntesis de novo de NAD de hongos o levaduras diferentes de Saccharomyces cereviseae, por ejemplo, para sobreexpresión en plantas.

Description

PLANTAS RESISTENTES AL ESTRES Se proveen métodos para incrementar la resistencia al estrés en plantas y células vegetales, por los cuales enzimas implicadas en la vía de síntesis silvestre de NAD y/o la vía de síntesis de novo de NAD, que se originan de hongos o levaduras diferentes de Saccharomyces cereviseae, son expresadas en plantas.

TECNICA ANTECEDENTE La tolerancia de las plantas a condiciones de crecimiento adversas, que incluyen sequía, altas intensidades de luz, altas temperaturas, limitaciones de nutrientes, condiciones de crecimiento en salinidad, y similares, es una propiedad muy deseada para las plantas de cultivo, en vista de la búsqueda interminable para incrementar finalmente el rendimiento real de estas plantas. Se han descrito varias formas de lograr ese propósito de mejoramiento, que se conoce comúnmente como la resistencia al estrés o tolerancia de las plantas al estrés. Puesto que diferentes condiciones de estrés abióticas resultan con frecuencia en la generación de especies de oxígeno reactivas ("ROS") nocivas, tales como superóxidos o peróxidos de hidrógeno, los intentos iniciales por mejorar la resistencia al estrés en las plantas se enfocaron en la prevención de la generación de las ROS o la remoción de las mismas. Ejemplos de estos procedimientos, son sobreexpresion de enzimas depuradoras de ROS, tales como catalasas, peroxidasas, superóxido dismutasas etc., o incluso aumento de la cantidad de moléculas depuradoras de ROS, tales como ácido ascórbico, glutatión, etc. Estos procedimientos y otros intentos por diseñar plantas tolerantes al estrés se revisan, por ejemplo, en Wang et al. 2003, Planta 218: 1 -14. La tolerancia al estrés en plantas y células vegetales puede lograrse también reduciendo la actividad o el nivel de las poli-ADP-ribosa polimerasas (ParP) o poli(ADP-ribosa) glucohidrolasas (ParG) endógenas, como se describe en los documentos WO00/04173 y PCT/EP2004/003995, respectivamente. Se piensa que de esta manera, la depleción fatal de NAD y ATP en células vegetales sujetas a condiciones de estrés, que resulta en muerte traumática de las células, puede evitarse o posponerse suficientemente para que las células bajo estrés sobrevivan y se aclimaten a las condiciones de estrés. Uchimiya et al. (2002) describen el aislamiento de un gen de arroz denotado como YK1 , asi como el uso de un gen YK1 quimérico para incrementar la tolerancia de plantas de arroz transgénicas que albergan ese gen al añublo del arroz y varias condiciones de estrés abióticas tales como NaCI, UV-C, subemergencia y peróxido de hidrógeno (Uchimiya et al., 2002, Molecular breeding 9: 25-31 ). Uchimiya et al. publicaron además el resumen de un rótulo que describe que la sobreexpresion de un gen de reductasa dependiente de NAD (YK1 ) en células de arroz, promovió también el nivel de NAD(P)(H) a través de la sobrerregulación de las actividades de NAD sintetasa, y concluyeron que esta modificación generó a su vez un cúmulo de sustancias de redox necesarias para la resistencia al estrés por ROS (Uchimiya et al. 2003 Keystone symposium on Plant biology: Functions and control of cell death, Snowbird Utah abril 10-15, 2003). La NAD sintetasa de levaduras ha sido bien caracterizada, y es la última enzima en la vía de síntesis de novo de NAD y la vía de síntesis silvestre de NAD. En la vía de síntesis de novo, el quinolato es el precursor para la síntesis de NAD, y se genera como un producto de la degradación de triptófano. En la vía de síntesis silvestre, la nicotinamida (que es un producto de degradación de NAD, generado a través de la acción de varias enzimas tales como PARP, desacetilasas dependientes de NAD u otras NAD glucohidrolasas), es la molécula precursora. En un primer paso, la nicotinamida es desamidada hasta ácido nicotínico por una nicotinamidasa. El ácido nicotínico es convertido a 1 -pirofosfato de 5-fosforribosilo por la enzima nicotinato fosforribosil transferasa, para dar mononucleótido de ácido nicotínico. Este compuesto es compartido entre la vía de síntesis de novo y la vía de síntesis silvestre. Por lo tanto, más conversión de este compuesto por la NAD+ pírofosforilasa y la NAD sintetasa se logra como en la vía de síntesis de novo. En levaduras, la sobreexpresión de PNC1 (que codifica para nicotinamidasa) se ha correlacionado con extensión de la duración de vida por restricción de calorías y estrés de baja intensidad (Anderson et al. , 2003 Nature 423: p181 -185; Gallo et al., 2004, Molecular and Cellular Biology 24: 1301 -1312). El documento WO2004/016726 describe métodos y composiciones para modular la duración de vida de células eucarióticas y procarióticas, y para proteger a las células contra ciertas condiciones de estrés. Un método comprende modular el flujo de la vía silvestre de NAD+ en la célula, por ejemplo, modulando el nivel o la actividad de una o más proteínas seleccionadas del grupo que consiste de PNC1 , NMA1 , NPT1 y NMA2. Poco se sabe acerca de las enzimas respectivas de las vías de biosíntesis de NAD en plantas. Hunt et al. , 2004 describen el uso de la información genómica disponible de Arabidopsis, para identificar los homólogos de estas enzimas en plantas (Hunt et al., 2004, New Phytologist 163(1 ): 31 -44). Las secuencias de ADN identificadas tienen los siguientes números de acceso: para nicotinamídasa: At5g23220; At5g23230 y At3g16190; para nicotinato fosforribosíltransferasa: At4g36940, At2g23420, para ácido nicotinico mononucleótido adeniltransferasa: At5g55810 y para NAD sintetasa: At1 g55090 (todas estas secuencias de nucleótidos se incorporan en la presente como referencia). El documento PCT/EP 2005/010168 describe métodos para incrementar la resistencia al estrés en plantas y células vegetales, por los cuales enzimas implicadas en la vía de síntesis silvestre de NAD y/o la vía de síntesis de novo de NAD, son expresadas en plantas. Métodos alternativos para incrementar la tolerancia al estrés en plantas se requieren aún, y las modalidades descritas más adelante, incluyendo las reivindicaciones, proveen dichos métodos y medios.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En una modalidad de la invención, se provee un método para obtener una planta con tolerancia incrementada al estrés, que comprende introducir un gen quimérico en una célula de una planta para obtener células transgénicas, por el cual el gen quimérico comprende los siguientes fragmentos de ADN enlazados operablemente: i. Un promotor expresable en plantas; ii. Una región de ADN que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotínamida adenín dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotínamida adenín dinucleótido síntetasa; iii. Una región del extremo 3' implicada en la terminación de la transcripción y poliadenilación, seguido de regenerar las células transgénicas para obtener una población de plantas transgénicas; y seleccionar una planta de la población de plantas transgénicas que exhiba resistencia incrementada al estrés, o seleccionar una planta que exhiba un nivel reducido de especies de oxigeno reactivas o mantenga un alto nivel de NADH bajo condiciones de estrés, en comparación con una planta no transgénica similar, en donde dicho método se caracteriza porque la secuencia de aminoácidos de la enzima funcional en plantas codificada por la región de ADN comprende una de las siguientes: la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_444840 {Candida glabrata), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_456073 (Kluyveromyces lactis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_986013 (Eremothecium gossypii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_888958 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP500320 ( Yarrowia lipolytica), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP389372 (Gibberella zeae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_749509 (Aspergillus fumigatus), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_7121 12 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE56421 (Aspergillus oryzae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_567125 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_964547 (Neurospora crassa), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_712 35 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_448179 (Candida glabrata), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453643 (Kluyveromyces lactis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_987024 (Eremothecium gossypii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_500272 ( Yarrowia lipolytica), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_722371 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_456405 (Debaromyces hansenii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE61562 (Aspergillus oryzae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_759702 (Ustilago maydis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAL18079 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_587771 (Schizosaccharomyces pombe), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_681472 (Aspergillus nidulans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_959191 (Neurospora crassa), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_567726 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ90706 (Chaetomium globosum), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_387574 (Gibberella zeae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_748008 (Aspergillus fumigatus), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_361 704 (Magnaporthe grísea), la secuencia de aminoácidos del número de acceso Q061 78, la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_44481 5 (Candida glabrata), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_986687 (Eremothecium gossypii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453005 (Kluyveromyces lactis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_458184 (Debaromyces hansenii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_718656 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_504391 { Yarrowia lipolytica), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_592856 (Schizosaccharomyces pombe), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_762639 (Ustilago maydis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_571297 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE57070 (Aspergillus oryzae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_750776 (Aspergillus fumigatus), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_659349 (Aspergillus nidulans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_389652 (Gibberella zeae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_957634 (Neurospora crassa), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_363364 (Magnaporthe grísea), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_758179 (Ustilago maydis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ85219 (Chaetomium globosum), la secuencia de aminoácidos del número de acceso CAA85352 (Saccharomyces cereviseae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_448893 (Candida glabrata), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453357 (Kluyveromyces lactis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_983562 (Eremothecium gossypii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_462577 (Debaromyces hansenii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_889008 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_500338 ( Yarrowia lipolytica), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_746744 (Aspergillus fumigatus), la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE64333 {Aspergillus oryzae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_965789 (Neurospora crassa), la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ93453 (Chaetomium globosum), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_682385 (Aspergillus nidulans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso AAN74808 (Gibberella moniliformis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso Q9UTK3, la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_361075 (Magnaporthe grísea), la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAL18922 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_568039 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_760597 (Ustilago maydis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_01 1524, la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 444815 (Candida glabrata), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_986687 (Eremothecium gossypii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453005 (Kluyveromyces lactis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_458184 (Debaromyces hansenii), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 718656 (Candida albicans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_504391 ( Yarrowia lipolytica), la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_592856 (Schizosaccharomyces pombe), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_762639 (Ustilago maydis), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_571297 (Cryptococcus neoformans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE57070 (Aspergillus oryzae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_750776 (Aspergillus fumigatus), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_659349 (Aspergillus nidulans), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_389652 ( Gibberella zeae), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 957634 (Neurospora crassa), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_363364 (Magnaporthe grísea), la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_758179 (Ustilago maydis) o la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ852 9 (Chaetomium globosum). En otra modalidad, la invención se refiere a los genes quiméricos como se describen en la presente, células vegetales que comprenden estos genes quiméricos, y plantas que consisten esencialmente de células vegetales que comprenden estos genes quiméricos, y semillas de dichas plantas. Estas plantas y células vegetales pueden caracterizarse porque tienen un menor nivel de especies de oxígeno reactivas bajo condiciones de estrés, que una planta similar que no comprende dicho gen quimérico. En otra modalidad, la invención se refiere al uso de los genes quiméricos descritos para incrementar la resistencia al estrés de una planta, o para disminuir el nivel de especies de oxígeno reactivas en una planta o una célula vegetal bajo condiciones de estrés.

La invención provee además el uso de una de las secuencias de ADN mencionadas anteriormente, que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenín dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotinamida adenín dinucleótido sintetasa, que se originan de hongos o levaduras, para incrementar la resistencia de una planta al estrés, o para disminuir el nivel de especies de oxígeno reactivas o mantener el nivel de NADH en una planta o una célula vegetal bajo condiciones de estrés.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención se basa en el hallazgo de que secuencias de ADN que codifican para enzimas funcionales en plantas de la vía de síntesis silvestre de NAD en levaduras, pudieron usarse para obtener plantas transgénicas que eran más resistentes al estrés, en particular estrés abíótico, que plantas que no comprenden estas secuencias de ADN. Las plantas transgénicas exhibieron también un nivel significativamente reducido de especies de oxígeno reactivas ("ROS"), y mantuvieron un alto nivel de NADH, cuando se pusieron bajo condiciones de estrés, en comparación con plantas control.

De esta manera, en una modalidad de la invención, se provee un método para obtener una planta con resistencia incrementada al estrés, cuyo método comprende los pasos de: - introducir un gen quimérico resistente al estrés como se describe en la presente, en células de una planta para obtener células que comprendan el gen quimérico resistente al estrés; - regenerar estas células que comprenden el gen quimérico resistente al estrés, para obtener una población de células que comprendan el gen quimérico resistente al estrés; y - seleccionar una planta de la población de estas plantas que exhiba resistencia incrementada al estrés y/o nivel disminuido de ROS bajo condiciones de estrés y/o mantenga un alto nivel de NADH, cuando se compara con una planta no transgénica similar. El gen quimérico resistente al estrés, comprende de esta manera un promotor expresable en plantas enlazado operablemente a una región de ADN que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenín dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotinamida adenín dinucleótido sintetasa originada de hongos o levaduras, y una región del extremo 3' implicada en la terminación de la transcripción y poliadenilación. Como se usa en la presente, "una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenín dinucleótido", es una enzima que cuando se introduce en plantas, enlazada a elementos de control adecuados tales como promotor expresable en plantas y región de terminador, puede ser transcrita y traducida para dar una enzima de la vía de síntesis silvestre de NAD funcional en células vegetales. Incluidas son las enzimas (y genes codificantes) de la vía de síntesis silvestre de NAD, que se obtienen de una levadura u hongo diferente de Saccharomyces cereviseae. Las últimas proteínas son muy convenientes para los métodos de conformidad con la invención, puesto que es menos probable que las mismas sean sujetas a la regulación de la retroalimentación enzimática, etc., a la cual enzimas similares derivadas de plantas pueden estar sujetas. Enzimas implicadas en la vía de síntesis silvestre de NAD, comprenden las siguientes: - Nicotinamidasa (EC 3.5.1 .19), que cataliza la hidrólisis del grupo amida de nicotinamida, liberando de esta manera nicotinato y NH3. La enzima se conoce también como nicotinamida desaminasa, nicotinamida amidasa, YNDasa o nicotinamida amidohidrolasa - Nicotinato fosforribosiltransferasa (EC 2.4.2.1 1 ), conocida también como niacina ribonucleotidasa, ácido nicotínico mononucleótido glucohidrolasa; ácido nicotínico mononucleótido pirofosforilasa; o ácido nicotínico fosforribosiltransferasa, que cataliza la siguiente reacción: Nicotinato-D-ribonucleótido + difosfato = nicotinato + 1 -difosfato de 5-fosfo-a- D-ribosa Nicotinato-nucleótido adenililtransferasa (EC 2.7.7.18), conocida también como desamido-NAD+ pirofosforilasa; nicotinato mononucleótido adenililtransferasa; desaminonicotinamida adenín dinucleótido pirofosforilasa; o NaMT-ATasa; ácido nicotínico mononucleótido adenililtransferasa, que cataliza la siguiente reacción: ATP+nicotinato ribonucleótido = difosfato + desamido-NAD+ - NAD-sintasa (EC 6.3.1 .5), conocida también como NAD sintetasa; NAD+sintasa; nicotinamida adenín dinucleótido sintetasa; o difosfopiridín nucleótido sintetasa, que cataliza la siguiente reacción: Desamido-NAD++ATP+NH3 = AMP+ difosfato + NAD+ En una modalidad de la invención, las regiones codificantes que codifican para las diferentes enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD, comprenden una secuencia de nucleotidos que codifica para proteínas con las secuencias de aminoácidos como se exponen más adelante. Secuencias de nucleotidos adecuadas que codifican para una nicotinamidasa similar a PNC1 de Saccharomyces cereviseae, pero originada de hongos o levaduras, incluyen una secuencia de nucleotidos que codifica para una nicotinamidasa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_444840 (Candida glabrata) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_456073 (Kluyveromyces lactis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_986013 (Eremothecium gossypii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_888958 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP500320 ( Yarrowia lipolytica) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP389372 {Gibberella zeaé) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_749509 (Aspergillus fumigatus) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_7121 12 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE56421 (Aspergillus oryzaé) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_567125 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_964547 (Neurospora crassa) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_7 2135 (Candida albicans). Secuencias de nucleotidos adecuadas que codifican para una NAD(+) sintetasa similar a Qns1 de Saccharomyces cereviseae, pero originada de hongos, incluyen una secuencia de nucleotidos que codifica para NAD(+) sintetasa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_4481 79 (Candida glabrata) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453643 (Kluyveromyces lactis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_987024 (Eremothecium gossypii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_500272 ( Yarrowia lipolytica) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_722371 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_456405 (Debaromyces hansenii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE61 562 (Aspergillus oryzae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_759702 (Ustilago maydis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAL18079 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_587771 (Schizosaccharomyces pombe) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_681472 {Aspergillus nidulans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_959191 (Neurospora crassa) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_567726 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ90706 (Chaetomium globosum) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_387574 (Gibberella zeae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_748008 (Aspergillus fumigatus) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_361704 {Magnaporthe grísea). Secuencias de nucleótidos adecuadas que codifican para una ácido nicotínico mononucleótido adenililtransferasa similar a NMA1 de Saccharomyces cereviseae, pero originada de hongos, incluyen una secuencia de nucleótidos que codifica para una ácido mononucleótido adenililtransferasa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: la secuencia de aminoácidos del número de acceso Q06178 la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_444815 (Candida glabrata) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP 986687 (Eremothecium gossypii) la secuencia minoácidos del número de acceso XP 453005 (Kluyveromyces lactis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 458184 (Debaromyces hansenii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_71 8656 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_504391 ( Yarrowia lipolytica) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_592856 (Schizosaccharomyces pombe) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_762639 (Ustilago maydis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_571297 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE57070 (Aspergillus oryzae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_750776 (Aspergillus fumigatus) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_659349 (Aspergillus nidulans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_389652 ( Gibberella zeae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_957634 (Neurospora crassa) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_363364 {Magnaporthe grísea) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_758179 ( Ustilago maydis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ85219 ( Chaetomium globosum) . Secuencias de nucleótidos adecuadas que codifican para una nicotinato fosforribosiltransferasa similar a NPT1 de Saccharomyces cereviseae, pero originada de hongos o levaduras, incluyen una secuencia de nucleótidos que codifica para una nicotinato fosforribosiltransferasa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: la secuencia de aminoácidos del número de acceso CAA85352 (Saccharomyces cereviseae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_448893 (Candida glabrata) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453357 (Kluyveromyces lactis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_983562 (Eremothecium gossypii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 462577 {Debaromyces hansenii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 889008 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP 500338 ( Yarrowia lipolytica) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_746744 (Aspergillus fumigatus) la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE64333 (Aspergillus oryzae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_965789 (Neurospora crassa) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ93453 (Chaetomium globosum) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_682385 (Aspergillus nidulans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso AAN74808 (Gibberella moniliformis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso Q9UTK3 la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_361075 (Magnaporthe grísea) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAL1 8922 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_568039 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_760597 (Ustilago maydis). Secuencias de nucleótidos adecuadas que codifican para una ácido nicotínico mononucleótido adenililtransferasa similar a NMA2 de Saccharomyces cereviseae, pero originada de hongos o levaduras, incluyen una secuencia de nucleótidos que codifica para una ácido mononucleótido adenililtransferasa que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_01 1524 la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_444815 (Candida glabrata) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_986687 (Eremothecium gossypii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_453005 (Kluyveromyces lactis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_458184 (Debaromyces hansenii) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_718656 (Candida albicans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_504391 ( Yarrowia lipolytica) la secuencia de aminoácidos del número de acceso NP_592856 (Schizosaccharomyces pombe) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_762639 ( Ustilago maydis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_571297 (Cryptococcus neoformans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso BAE57070 (Aspergillus oryzae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_750776 (Aspergillus fumigatus) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_659349 (Aspergillus nidulans) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_389652 ( Gibberella zeae) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_957634 (Neurospora crassa) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_363364 (Magnaporthe grísea) la secuencia de aminoácidos del número de acceso XP_7581 79 ( Ustilago maydis) la secuencia de aminoácidos del número de acceso EAQ85219 (Chaetomium globosum).

Todas las secuencias de aminoácidos referidas por sus números de acceso, se incorporan en la presente como referencia. Sin embargo, será claro que variantes de estas secuencias, incluyendo inserciones, deleciones y sustituciones de las mismas, pueden usarse también para el mismo efecto. Las variantes de las secuencias descritas tendrán una identidad de secuencia que es de preferencia de por lo menos aproximadamente 80%, u 85% o 90% o 95% con secuencias identificadas de enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD. De preferencia, estas variantes serán proteínas funcionales con la misma actividad enzimática que las enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD. Para el propósito de esta invención, la "identidad de secuencia" de dos secuencias de nucleótidos o de aminoácidos relacionadas, expresada como un porcentaje, se refiere al número de posiciones en las dos secuencias alineadas óptimamente que tienen residuos idénticos (x 100), dividido entre el número de posiciones comparadas. Un espacio, es decir, una posición en una alineación en donde un residuo está presente en una secuencia pero no en la otra, es considerada como una posición con residuos no idénticos. La alineación de las dos secuencias se realiza usando el algoritmo de Needleman y Wunsch (Needleman y Wunsch 1970). La alineación de secuencias asistida por computadora anterior, puede realizarse convenientemente usando un programa de software estándar tal como GAP, que forma parte del paquete Wisconsin versión 10.1 (Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin, USA), usando la matriz de puntuación predeterminada con una penalización por creación de espacios de 50 y una penalización por extensión de espacios de 3. Una secuencia de nucleótidos homologa de otros hongos o levaduras puede identificarse y aislarse también por hibridación bajo condiciones severas, usando como sondas secuencias de nucleótidos identificadas que codifiquen para enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD. El término "condiciones de hibridación severa", como se usa en la presente, significa que la hibridación ocurrirá generalmente si existe por lo menos 95%, y de preferencia por lo menos 97% de identidad de secuencia entre la sonda y la secuencia objetivo. Ejemplos de condiciones de hibridación severa, son incubación durante la noche en una solución que comprenda formamida a 50%, 5 x SSC (NaCI 150 mM, citrato trisódico 15 mM), fosfato de sodio 50 mM (pH 7.6), 5x solución de Denhardt, sulfato de dextrán a 10% y 20 pg/ml de ADN portador desnaturalizado sometido a esfuerzo cortante, tal como ADN de esperma de salmón, seguida de lavado del soporte de hibridación en 0.1 x SSC a aproximadamente 65°C, de preferencia dos veces por aproximadamente 10 minutos. Otras condiciones de hibridación y lavado son bien conocidas, y se ejemplifican en Sambrook et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edición, Coid Spring Harbor, NY (1989), en particular el capítulo 1 1 . Los métodos de la invención pueden usarse para obtener plantas tolerantes a diferentes tipos de condiciones que inducen estrés, en particular condiciones de estrés abióticas que incluyen subemergencia, altas intensidades de luz, altos niveles de radiación UV, niveles incrementados de peróxido de hidrogeno, condiciones de sequía, altas o bajas temperaturas y condiciones incrementadas de salinidad. Los métodos de la invención pueden usarse también para reducir el nivel de ROS en las células de plantas que crecen bajo condiciones adversas, en particular condiciones de estrés abióticas que incluyen subemergencia, altas intensidades de luz, altos niveles de radiación UV, niveles incrementados de peróxido de hidrógeno, condiciones de sequía, altas o bajas temperaturas, condiciones incrementadas de salinidad, etc. El nivel de ROS o el nivel de NADH pueden determinarse usando métodos conocidos en la técnica, incluyendo aquellos descritos en el ejemplo 3. Mediante el uso de los métodos descritos en la presente, pueden obtenerse plantas en donde el nivel de ROS sea igual a o menor que en plantas control bajo condiciones sin estrés tales como, pero no limitadas a, bajas intensidades de luz. En estas plantas, bajo condiciones sin estrés, el nivel de ROS puede variar de 50% a 100% del nivel de plantas control bajo bajas intensidades de luz, más particularmente de aproximadamente 60% a aproximadamente 85%. El nivel de ROS en estas plantas bajo condiciones de estrés es aproximadamente 50% a 80% del nivel de ROS en plantas control bajo condiciones de estrés, correspondiendo a aproximadamente a 60% a 80% del nivel de ROS en plantas control bajo condiciones sin estrés. Asimismo, el nivel de NADH en estas plantas es igual a o mayor que en plantas control bajo condiciones sin estrés tales como, pero no limitadas a, bajas intensidades de luz. En estas plantas, bajo condiciones sin estrés, el nivel de NADH puede variar de 100% a 160% del nivel de NADH en plantas control bajo bajas intensidades de luz, más particularmente de aproximadamente 120% a aproximadamente 140%. El nivel de NADH en estas plantas bajo condiciones de estrés es aproximadamente 200 a 300% del nivel de NADH en plantas control bajo condiciones de estrés, correspondiendo a aproximadamente 100% a 160% del nivel de ROS en plantas control bajo condiciones sin estrés. No se considera que los métodos para obtener plantas transgénicas sean críticos para la presente invención, y puede usarse cualquier método de transformación y regeneración adecuado para una especie vegetal en particular. Dichos métodos son bien conocidos en la técnica, e incluyen transformación mediada por Agrobacterium, suministro por cañón de partículas, microinyección, electroporación de células intactas, transformación de protoplastos mediada por polietilenglicol, electroporación de protoplastos, transformación mediada por liposomas, transformación mediada por filamentos de silicio, etc. Las células transformadas obtenidas de esta manera pueden regenerarse entonces en plantas fértiles maduras. La planta transformada obtenida puede usarse en un esquema de mejoramiento genético convencional para producir más plantas transformadas con las mismas características, o para introducir el gen quimérico de conformidad con la invención en otras variedades de la misma especie vegetal o especies vegetales relacionadas, o en plantas híbridas. Las semillas obtenidas de las plantas transformadas contienen los genes quiméricos de la invención como una inserción genómica estable, y son abarcados también por la invención. Será claro que los diferentes genes quiméricos resistentes al estrés, descritos en la presente, con regiones de ADN que codifican para diferentes enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD, pueden combinarse dentro de una planta o célula vegetal, para mejorar adicionalmente la tolerancia de las plantas al estrés que comprenden los genes quiméricos. De esta manera, en una modalidad de la invención, se proveen plantas y células vegetales que comprenden por lo menos dos genes quiméricos resistentes al estrés, cada uno comprendiendo una región codificante diferente. Las líneas de plantas y células vegetales transgénicas de conformidad con la invención, pueden comprender además genes quiméricos que reducirán la expresión de genes endógenos de PARP y/o PARG, como se describe en los documentos WO 00/04173 y PCT/EP2004/003995. Estos otros genes quiméricos pueden introducirse, por ejemplo, cruzando las líneas de plantas transgénicas de la presente invención con plantas transgénicas que contengan genes quiméricos que reduzcan la expresión de los genes de PARP y/o PARG. Las líneas de plantas o células vegetales transgénicas pueden obtenerse también introduciendo o transformando los genes quiméricos de la invención en células de plantas transgénicas que comprendan los genes quiméricos que reduzcan la expresión de los genes de PARP o PARG, o viceversa. Para el propósito de la invención, el promotor es un promotor expresable en plantas. Como se usa en la presente, el término "promotor expresable en plantas" significa una secuencia de ADN que es capaz de controlar (iniciar) la transcripción en una célula vegetal. Esto incluye cualquier promotor originado de plantas, pero también cualquier promotor no originado de plantas, que sea capaz de dirigir la transcripción en una célula vegetal, es decir, ciertos promotores originados de virus o bacterias, tales como 35S del CaMV (Harpster et al., 1988 Mol. Gen. Genet. 212, 182-190), el promotor No. 4 o No. 7 del virus subterráneo del trébol (WO9606932), o promotores de genes de ADNT, pero también promotores específicos de tejidos o específicos de órganos que incluyen, pero no están limitados a, promotores específicos de la semilla (véase, por ejemplo, el documento WO89/03887), promotores específicos de primordios de órganos (An et al., 1996, The Plant Cell 8, 15-30), promotores específicos del tallo (Keller et al., 1988, EMBO J. 7, 3625-3633), promotores específicos de la hoja (Hudspeth et al., 1989, Plant Mol Biol 12, 579-589), promotores específicos del mesófilo (tales como los promotores de Rubisco inducibles por la luz), promotores específicos de la raíz (Keller et al., 1989, Genes Devel. 3, 1639-1646), promotores específicos del tubérculo (Keíl et al., 1989, EMBO J. 8, 1323-1330), promotores específicos del tejido vascular (Peleman et al., 1989, Gene 84, 359-369), promotores selectivos de estambres (WO 89/10396, WO 92/13956), promotores específicos de la zona de dehiscencia (WO 97/13865), y similares. Los genes quiméricos de las invenciones pueden estar equipados también con una señal de localización nuclear ("NLS") funcional en plantas, enlazada operablemente a la región de ADN que codifica para una enzima de la vía de síntesis silvestre de NAD, tal como NLS de SV40. Habiendo leído este documento, el experto en la técnica comprenderá inmediatamente que pueden obtenerse efectos similares con respecto a resistencia incrementada al estrés cada vez que se obtengan variantes naturales de plantas, en donde los genes endógenos que codifican para las enzimas de la vía silvestre de NAD son más activos o expresados a un mayor nivel. Dichas plantas variantes pueden obtenerse sometiendo una población de plantas a mutagénesís tal como, pero no limitada a, mutagénesis de EMS, seguida de una identificación para una actividad incrementada de cualquiera de las enzimas de la vía de síntesis silvestre de NAD, o una combinación de las mismas. Quedará también inmediatamente claro que una población de diferentes variedades o cultivares puede identificarse para tolerancia incrementada a las condiciones de estrés mencionadas anteriormente, en condiciones de estrés abióticas seleccionadas generales o particulares, seguida de una correlación de la tolerancia incrementada a condiciones de estrés con la presencia de un alelo particular de cualquiera de los genes endógenos que codifican para una enzima de la vía de síntesis silvestre de NAD. Dichos alelos pueden introducirse entonces en una planta de interés por cruzamiento, si las especies son sexualmente compatibles, o pueden identificarse usando técnicas convencionales como se describe en la presente (incluyendo hibridación o amplificación por PCR), y pueden introducirse usando tecnología de ADN recombinante. La introducción de alelos particularmente deseados usando técnicas de mejoramiento genético, puede ir seguida usando marcadores moleculares específicos para los alelos de interés. Se cree que los métodos y medios descritos en la presente son adecuados para todas las plantas y células vegetales, plantas y células vegetales dicotiledóneas y monocotiledóneas incluyendo, pero no limitadas a, algodón, plantas de Brassica, colza oleaginosa, trigo, maíz, cebada, girasol, arroz, avena, caña de azúcar, soya, vegetales (incluyendo achicoria, lechuga, tomate), tabaco, papa, remolacha azucarera, papaya, pina, mango, Arabidopsis thaliana, pero también plantas usadas en horticultura, floricultura o silvicultura. Como se usa en la presente, se interpretará que el término "que comprende" especifica la presencia de las características, enteros, pasos o componentes establecidos referidos a, pero no excluye, la presencia o adición de una o más características, enteros, pasos o componentes, o grupos de los mismos. De esta manera, por ejemplo, un ácido nucleico o proteína que comprenda una secuencia de nucleotidos o aminoácidos, puede comprender más nucleotidos o aminoácidos que los realmente citados, es decir, incluidos en un ácido nucleico o proteína más grande. Un gen quimérico que comprenda una región de ADN que sea funcionalmente o estructuralmente definida, puede comprender regiones de ADN adicionales, etc. Los siguientes ejemplos no limitativos describen la construcción de genes quiméricos que incrementan la resistencia al estrés en plantas y células vegetales, y el uso de dichos genes. A menos que se indique de otra manera en los ejemplos, todas las técnicas de ADN recombinante se llevan a cabo de acuerdo con protocolos estándar, como se describe en Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, y en los volúmenes 1 y 2 de Ausubel et al. ( 1994) Current Protocols ¡n Molecular Biology, Current Protocols, USA. Materiales y métodos estándar para trabajo molecular en plantas se describen en Plant Molecular Biology LabFax (1993) por R. D. D. Croy, publicado conjuntamente por BIOS Scientific Publications Ltd (Reino Unido) y Blackwell Scientific Publications, Reino Unido. Otras referencias para técnicas estándar de biología molecular incluyen Sambrook y Russell (2001 ) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, tercera edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, volúmenes I y II de Brown (1998) Molecular Biology LabFax, segunda edición, Academic Press (Reino Unido). Materiales y métodos estándar para reacciones en cadena de polimerasa pueden encontrarse en Dieffenbach y Dveksler (1995) PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, y en McPherson et al. (2000) PCR - Basics: From Background to Bench, primera edición, Springer Verlag, Alemania. A lo largo de la especificación, se hace referencia a las siguientes entradas en el listado de secuencias: SEQ ID No. 1 : XP_444840 (Candida glabrata) SEQ ID No. 2: XP__456073 (Kluyveromyces lactis) SEQ ID No. 3: NP_98601 3 (Eremothecium gossypii) SEQ ID No. 4: XP_888958 (Candida albicans) SEQ ID No. 5: XP500320 ( Yarrowia lipolytica) SEQ ID No. 6: XP389372 (Gibberella zeae) SEQ ID No. 7: XP_749509 (Aspergillus fumigatus) SEQ ID No. 8: XP_7121 12 (Candida albicans) SEQ ID No. 9: BAE56421 (Aspergillus oryzae) SEQ ID No. 10: XP_567125 (Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 1 1 : XP_964547 (Neurospora crassa) SEQ ID No. 12: XP_712135 (Candida albicans) SEQ ID No. 13: XP_448179 (Candida glabrata) SEQ ID No. 14: XP_453643 (Kluyveromyces lactis) SEQ ID No. 15: NP_987024 (Eremothecium gossypii) SEQ ID No. 16: XP_500272 ( Yarrowia lipolytica) SEQ ID No. 17: XP_722371 (Candida albicans) SEQ ID No. 18: XP_456405 (Debaromyces hansenii) SEQ ID No. 19: BAE6 562 (Aspergillus oryzae) SEQ ID No. 20: XP_759702 { Ustilago maydis) SEQ ID No. 21 : EAL18079 { Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 22: NP_587771 {Schizosaccharomyces pombe) SEQ ID No. 23: XP_681472 {Aspergillus nidulans) SEQ ID No. 24: XP_959191 {Neurospora crassa) SEQ ID No. 25: XP_567726 { Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 26: EAQ90706 {Chaetomium globosum) SEQ ID No. 27: XP_387574 {Gibberella zeae) SEQ ID No. 28: XP_748008 {Aspergillus fumigatus) SEQ ID No. 29: XP_361 704 {Magnaporthe grísea) SEQ ID No. 30: Q06178 SEQ ID No. 31 : XP_44481 5 {Candida glabrata) SEQ ID No. 32: NP_986687 {Eremothecium gossypii) SEQ ID No. 33: XP_453005 {Kluyveromyces lactis) SEQ ID No. 34: XP_458184 {Debaromyces hansenii) SEQ ID No. 35: XP_718656 {Candida albicans) SEQ ID No. 36: XP_504391 { Yarrowia lipolytica) SEQ ID No. 37: NP_592856 {Schizosaccharomyces pombe) SEQ ID No. 38: XP_762639 {Ustilago maydis) SEQ ID No. 39: XP_571297 {Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 40: BAE57070 {Aspergillus oryzae) SEQ ID No. 41 : XP_750776 {Aspergillus fumigatus) SEQ ID No. 42: XP_659349 {Aspergillus nidulans) SEQ ID No. 43: XP_389652 {Gibberella zeae) SEQ ID No. 44: XP_957634 (Neurospora crassa) SEQ ID No. 45: XP_363364 {Magnaporthe grísea) SEQ ID No. 46: XP_758179 {Ustilago maydis) SEQ ID No. 47: EAQ85219 {Chaetomium globosum) SEQ ID No. 48: CAA85352 {Saccharomyces cereviseae) SEQ ID No. 49: XP_448893 {Candida glabrata) SEQ ID No. 50: XP_453357 {Kluyveromyces lactis) SEQ ID No. 51 : NP_983562 {Eremothecium gossypii) SEQ ID No. 52: XP_462577 {Debaromyces hansenii) SEQ ID No. 53: XP_889008 {Candida albicans) SEQ ID No. 54: XP_500338 ( Yarrowia lipolytica) SEQ ID No. 55: XP_746744 {Aspergillus fumigatus) SEQ ID No. 56: BAE64333 {Aspergillus oryzae) SEQ ID No. 57: XP_965789 {Neurospora crassa) SEQ ID No. 58: EAQ93453 {Chaetomium globosum) SEQ ID No. 59: XP_682385 {Aspergillus nidulans) SEQ ID No. 60: AAN74808 {Gibberella moniliformis) SEQ ID No. 61 : Q9UTK3 SEQ ID No. 62: XPJ361075 {Magnaporthe grísea) SEQ ID No. 63: EAL18922 {Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 64: XP_568039 {Cryptococcus neoformans) SEQ ID No. 65: XP_760597 {Ustilago maydis) SEQ ID No. 66: ??_0 1524. Todas las secuencias de aminoácidos referidas por sus números de acceso, se incorporan en la presente como referencia.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Ensamble de genes quiméricos resistentes al estrés, y su introducción en plantas Para incrementar la resistencia al estrés en plantas, se construye un gen quimérico usando técnicas convencionales que comprenden los siguientes fragmentos de ADN en orden: - Una región de promotor del virus del mosaico de la coliflor (35S del CaMV); - un fragmento de ADN de aproximadamente 60 pb que corresponde a Cab22L guía no traducida; - un fragmento de ADN como se mencionó en otra parte en la presente, que codifica para una enzima de la vía de síntesis silvestre de NAD originada de hongos o levaduras, diferente de PNC1 , NMA1 , NMA2 o NPT1 de Saccharomyces cereviseae; - un fragmento del extremo no traducido 3' del transcrito de 35S del CaMV (35S 3').

Este gen quimérico se introduce en un vector de ADNT, entre las secuencias de borde izquierda y derecha del ADNT, junto con un gen marcador seleccionare. Los vectores de ADNT se introducen en cepas de Agrobacterium que comprenden un plásmido Ti auxiliar, usando métodos convencionales. Los genes quiméricos se introducen en plantas usando un método de transformación convencional. Las plantas transgénicas exhiben una mayor resistencia al estrés que sus plantas contraparte sin transgenes.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1 .- Un método para obtener una planta con resistencia incrementada al estrés, que comprende: a. introducir un gen quimérico en una célula de una planta para obtener células transgénicas, dicho gen quimérico comprendiendo los siguientes fragmentos de ADN enlazados operablemente: i. un promotor expresable en plantas; ii. una región de ADN que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenin dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotinamida adenin dinucleótido sintetasa; iii. una región del extremo 3' implicada en la terminación de la transcripción y poliadenilacion; b. regenerar dichas células transgénicas para obtener una población de plantas transgénicas; y seleccionar una planta de dicha población de plantas transgénicas que exhiba resistencia incrementada al estrés, o seleccionar una planta que exhiba un nivel reducido de especies de oxígeno reactivas o mantenga un alto nivel de NADH bajo condiciones de estrés, en comparación con una planta no transgénica similar, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos codificada por la región de ADN comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID Nos. 1 a 29, 31 a 47 o 49 a 66, o una secuencia de aminoácidos que tenga por lo menos 90% de identidad de secuencia con dichas secuencias de aminoácidos de cualquiera de SEQ ID Nos. 1 a 29, 31 a 47 o 49 a 66.

2. - Un gen quimérico como se describe en la reivindicación 1 .

3. - Una célula vegetal que comprende un gen quimérico como se describe en la reivindicación 3.

4. - Una planta que comprende un gen quimérico como se describe en la reivindicación 2.

5. - La planta de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque tiene adicionalmente un menor nivel de especies de oxígeno reactivas bajo condiciones de estrés, que una planta similar que no comprende dicho gen quimérico.

6. - Una semilla de una planta de la reivindicación 4 o 5, que comprende un gen quimérico de conformidad con la reivindicación 2.

7. - El uso de un gen quimérico de la reivindicación 2, para incrementar la resistencia de una planta al estrés.

8. - El uso de un gen quimérico de la reivindicación 2, para disminuir el nivel de especies de oxígeno reactivas en una planta o una célula vegetal bajo condiciones de estrés, o para mantener el nivel de NAD en una planta o célula vegetal bajo condiciones de estrés.

9.- El uso de una secuencia de ADN que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenín dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotinamida adenín dinucleótido sintetasa, para incrementar la resistencia de una planta al estrés, en donde dicha enzima funcional en la planta se deriva de un hongo o levadura diferente de Saccharomyces cereviseae.

10.- El uso de una secuencia de ADN que codifica para una enzima funcional en plantas de la vía de síntesis silvestre de nicotinamida adenín dinucleótido seleccionada de nicotinamidasa, nicotinato fosforribosiltransferasa, ácido nicotínico mononucleótido adenil transferasa o nicotinamida adenín dinucleótido sintetasa, para disminuir el nivel de especies de oxígeno reactivas en una planta o una célula vegetal bajo condiciones de estrés, o para mantener el nivel de NAD en una planta o célula vegetal bajo condiciones de estrés, en donde dicha enzima funcional en plantas se deriva de un hongo o levadura diferente de Saccharomyces cereviseae.